ROYAUME DU MAROC MINISTˆRE DE LA SANT‰ as .‰tape 3 : maturation I du biofilm ‰tape 4 : maturation

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    Prsente parDr Badia DOUHRI

    MD, PhDSSPSE, DRSTT

    Biofilm et infections nosocomiales

    ROYAUME DU MAROC

    MINISTRE DE LA SANT

    DIRECTION RGIONALE TANGER-TTOUAN

    quipe de Biotechnologies et Microbiologie Appliques,

    Facult des Sciences de Ttouan.

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    Page 2

    PLAN

    Introduction

    Biofilm ? mode de formation

    Exprimentation

    Matriel et mthodes

    Rsultats

    Conclusion

    Phytothrapie

    Rsistance aux Antibiotiques

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    Page 3Powerpoint Templates

    Introduction

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    Page 4

    Introduction

    Utilisation abusive et injustifie dantibiothrapie

    Adaptation de la bactrie (rsistante)

    Antibiotiques inefficaces

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    Page 5

    Diminution de la

    permabilit

    BIOFILM

    Introduction

    Rsistances bactriennes

    Naturelles

    Patrimoine gntique

    Acquises

    Mutation chromosomique

    Acquisition d'un (ou de plusieurs)

    gne

    Modification de la cible

    Production d'enzymes

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    Page 6Powerpoint Templates

    Biofilm ?

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    Page 7

    65% des infections bactriennes chez lHomme sont lies des biofilms,

    50 60 % des infections nosocomiales y sont associes.

    Bactries qui se dveloppent en communaut sur une surface (sessiles) = Biofilm

    Dfinition

    Figure 1: Biofilm: plaque dentaire,

    calcification sonde urinaire ou drain de

    redon..

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    Page 8

    tape 1 : attachement initial

    tape 2 : attachement irrversible

    tape 3 : maturation I du biofilm

    tape 4 : maturation II

    tape 5 : rosion et dispersion/

    dtachement autogne

    Figure 2:

    Formation et dveloppement du biofilm

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    Page 9

    Figure 3: Principales tapes de formation du biofilm

    de Staphylococcus epidermidis sur un implant

    transcutan (von Eiff et al., 2002).

    1. Les bactries adhrent la surface de limplant par

    des interactions non spcifiques (forces de Van der

    Waals, interactions hydrophobes, adhsines prsentes

    la surface des cellules).

    2. Ladhsion des bactries seffectue par

    reconnaissance spcifique de certains constituants du

    film de plasma form sur la surface du cathter

    (Heilmann et al., 2003).

    3. Les bactries se multiplient, produisent une matrice

    dexopolymres pour former des communauts sessiles

    persistantes.

    Staphylococcus aureus Pasteurella multocida Corynebacterium renale

    Formation et dveloppement du biofilm

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    Page 10

    Figure 7: Rduction du nombre de S. epidermidis 1457 (biofilm) aprs de 24 h de traitement

    avec Farnsol (300g/ml) (microscopie lectronique balayage)

    Contrle positif Aprs 24 h d'exposition lATB

    F. Gomes, B. Leite, P. Teixeira and R. Oliveira, 2014. Strategies to control Staphylococcus epidermidis biofilms, Czech J. Food, Vol. 32,

    No. 2: 137144 Sci.

    Bibliographie: recherches

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    Page 11

    Rsistance bactrienne

    S. aureusS. Aureus

    pnicillino-rsistant

    Pnicilline

    S. Aureus

    mticillino-rsistant

    (MRSA)

    Mticilline

    1950 1970

    Vancomycine

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    Page 12

    Stratgie pour la mdecine traditionnelle (20022005)

    visant

    garantir l'innocuit et lefficacit de la phytothrapie,

    promouvoir son utilisation rationnelle

    fournir des critres de recherche pour son valuation

    Selon les statistiques de lOMS en 2002, 80% de la population mondiale a

    recours la mdecine traditionnelle en matire de la sant primaire.

    OMS

    Phytothrapie

    400 000 espces vgtales recenses dans le monde,

    20 000 espces sont cites dans la pharmacope internationale,

    5000 sont utilises en industrie pharmaceutique

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    Page 13Powerpoint Templates

    Exprimentation:

    Matriel et mthodes

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    Page 14

    plante sche (40C) 24 48 h

    Schage

    Hydrodistillation par appareil

    type Clevenger

    Matriel et mthodes

    Extraction des Huiles essentielles

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    Page 15

    Technique de diffusion en puits

    Matriel et mthodes

    Dtermination de lactivit antibactrienne des huiles essentielles:

    Aromatogramme

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    Page 16

    LB inocul par la

    bactrie

    Dilutions

    de lHE

    Contrle ngatif

    Incubation + Rsazurine

    Matriel et mthodes

    CMI

    CMB

    Dtermination de leffet bactriostatique et bactricide

    Dtermination de la CMI mthode de microdilution

    (milieu liquide)

    et CMB (milieu solide)

    Rapport=CMI/CMB

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    Page 17

    Slection des HE

    Souches bactriennes

    Matriel et mthodes

    S. aureus MBLA

    S. aureus ATCC 25923

    S. aureus CECT 976

    Composition chimique

    Effet antibactrien

    Choix de 3 HE

    Origanum elongatum

    Thymus capitatus

    Origanum grosii

    Antibiotique: Vancomycine

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    Page 18

    Huile essentielle Composs majoritaires Pourcentages (%)

    Origanum elongatum Thymol-Terpinne

    Carvacrol

    35,51

    26,72

    6,52

    Origanum grosii Carvacrolp-Cymne

    Thymol

    39,51

    16,32

    9,95

    Thymus capitatus Carvacrolp-Cymne

    Thymol

    70,92

    6,34

    0,38

    Rsultats

    Etude phytochimique

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    Page 19

    Dtermination des concentrations minimales inhibitrices et bactricides

    Matriel et mthodes

    Culture bactrienne

    dans TSB

    100 lHE allant de 4 %

    0,0625 % ou

    ATB 16 0,125 g/ml

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    Absorbance 570 nm

    talement sur milieu TSA

    Incubation 37 C pendant 24 h

    Dtermination de la CMB

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    Page 20

    Quantification de la formation du biofilm bactrien

    Matriel et mthodes

    Culture bactrienne

    dans TSBG

    100 l

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    125 l du

    cristal violet 0,1 %

    Absorbance 492 nm

    Lavage

    H2O

    Le milieu a t remplac par du TSBG frais tout

    les 8 10 h durant ces 24 h dincubation

    Lavage par PBS

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    Page 21

    Dtermination de la concentration minimale inhibitrice du biofilm (CIB) et de la

    concentration minimale dradication du biofilm (CEB)

    Matriel et mthodes

    Culture bactrienne

    dans TSB

    HE allant de 4 % 0,0625 % ou

    ATB 16 0,125 g/ml

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    Absorbance 570 nm

    Etalement sur TSA

    Raclage par un ensemenceur

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    Dtermination

    de la CEB

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    Page 22

    Effet sur la formation du biofilm

    Matriel et mthodes

    Culture bactrienne

    dans TSBG

    HE allant de CMI

    CMI/16

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    Absorbance 570 nm

    Lavage par PBS

    125 l du

    cristal violet 0,1 %

    Lavage

    H2O

    Le pourcentage relatif de la formation du biofilm

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    Page 23

    Effet sur le biofilm form

    Matriel et mthodes

    Culture bactrienne

    dans TSBG

    (microplaques)

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    HE allant de 8 CMI

    CMI/4

    Incubation 37 C

    pendant 24 h

    Absorbance 570 nm

    Lavage par PBS

    125 l du

    cristal violet 0,1 %

    Lavage

    H2O

    Le pourcentage dradication du biofilmMesure