Séparation et caractérisation chimique de quelques ...theses.univ-oran1.dz/document/TH3347.pdf · Espèce : viscosa Inula viscosa (L) est une plante annuelle, herbacée, visqueuse

UNIVERSITED’ORAN

FACULTE DES SCIENCES

DEPARTEMENT DE CHIMIE

LABORATOIRE DE SYNTHESEORGANIQUE APPLIQUEE

MEMOIRE

Présenté par

Melle Boumaza djamila

Pour l’obtention du diplôme de Magister en Chimie

Spécialité : Chimie Organique

Séparation et caractérisation chimique de quelques biomolécules

actives de deux plantes médicinales : Inula viscosa, Rosmarinus

officinalis de la région d’Oran

Soutenue le 17/02/2011 devant la commission d’examen

Mme A. DERDOUR Professeur Université d’Oran Es-Senia Présidente

Mr O. YEBDRI Professeur Université d’Oran Es-Senia Examinateur

Mr A. MAROUF Professeur Université d’Oran Es-Senia Examinateur

Mr B. MEDDAH Professeur Université de Mascara Rapporteur

Mme N. KAMBOUCHE Maitre de conférences Université Es-Senia Co-rapporteur

Dédicace

Je dédie ce modeste travail à La mémoire de mes parents Que le bon dieu leur accorde sa miséricorde

A mes frères et mes sœurs, Qu’ils trouvent ici Toute ma Gratitude pour leur Soutien

Tout au long de mes Études.

A mes beaux frères et belles sœurs

A mes neveux et mes nièces Que Dieu les bénisse

A tous mes collègues et Mes amies.

A tous ceux que J’aime

Remerciements

Je remercie tout d’abord le bon DIEU qui m’a donné Le courage et la volonté d’achever ce travail.

Mes sincères remerciements vont à mon cher professeur A. Derdour directrice du laboratoire de synthèse organique appliquée, pour la confiance qu’il a voulu m’accorder pour réaliser ce modeste travail, pour ses précieux conseils, sa grande disponibilité pour l’aboutissement de ce travail et d’avoir accepté d’assurer la présidence du jury de mon mémoire de magistère. Je tiens à exprimer ma très grande considération et ma vive reconnaissance à Mr B.Meddah, professeur à la faculté des sciences, université Istambouli-Mascara, pour sa patience et sa disponibilité. Je remercie Mme N.Kambouche, maitre de conférences à l’Université d’Es-Senia d’avoir assuré le Co-encadrement et pour sa contribution et son aide concernant la réalisation de mon mémoire de magistère. Qu’elle trouve ici mes sentiments de gratitude et de déférence. Je remercie Mr O. Yebdri, professeur à l’université d’Oran, d’avoir accepté de faire partie du jury de mémoire. J’exprime mes profonds remerciements à Mr A. Maarouf Professeur à la faculté des sciences, département de Biologie, Université d’Oran, pour nous avoir donnés l’’occasion d’accéder à l’’espace de la recherche scientifique et d’avoir accepté de juger ce modeste travail. Mes sentiments de reconnaissance et mes remerciements vont également à l’encontre de toute personne qui a participé de prés ou de loin directement ou indirectement à la réalisation de ce travail.

Je remercie mes collègues et mes amies pour les sympathiques moments qu’on a passés ensemble.

Table des Matières

Liste des abréviations

Lexique

Introduction 1

Chapitre I: Étude antérieure et rappels bibliographiques

I-I- Étude de deux plantes 2

I-I-1- Inula Viscosa 2

I-I-1-a-Description botanique et habitat 2

I-I-1-b-Description du genre Inula 3

I-I-1-c- Description de la famille des Asteraceas 3

I-I-1-d-Appellation 4

I-I-1-e-Utilisation traditionnelle et propriétés pharmaceutiques 4

I-I-1-f-Quelques travaux réalisés sur la plante INULA VISCOSA

et son genre INULA

5

I-I-2- Rosmarinus Officinalis 12

I-I-2-a-Description botanique et habitat 12

I-I-2-b- Description du genre Rosmarinus 12

I-I-2-c- Description de la famille des Lamiacées 12

I-I-2-d-Appellation 13

I-I-2-e-Utilisation traditionnelle et propriétés pharmaceutiques 13

I-I-2-f-Quelques molécules isolées du Rosmarinus Officinalis 14

I-II-Rappel sur quelques métabolites secondaires et leur action sur l’organisme 19

I-II-1-Les huiles essentielles 19

I-II-2-Les composés phénoliques 19

I-II-2-a-Les flavonoïdes 19

I-II-2-b-Les coumarines 23

I-II-2-c-Les tanins 23

I-II-2-d- Les quinones 24

I-II-2-e-Les saponines 24

I-II-3-Les alcaloïdes 25

I-II-4-Les terpenoïdes 25

I-II-4-a-Les monoterpènes 26

I-II-4-b-Les sesquiterpènes 26

I-II-4-c-Les diterpènes 27

I-II-4-d-Les triterpènes 28

I-II-4-e-Les stèroïdes 28

I-II-4-f-Les stéroles 28

Chapitre II : Matériel et méthodes

II-I-Matériels 29

II-I-1- Matériel végétal 29

II-I- 2-Équipements 29

II-I-3-Les réactifs 31

II-I-4- Les souches bactériennes 32

II-II-Méthodes 33

II-II- 1-Les huiles essentielles 33

II-II-1-a-Extraction 33

II-II-1-b-Analyse 34

II-II-1-b-1-Identification et composition chimique 34

II-II-1-b-2-Propriétés physico-chimiques 35

Propriétés physiques 35

a-Densité 35

b-Indice de réfraction 35

c-Pouvoir rotatoire 36

Propriétés chimiques 36

a-Indice d’acide 36

b-Indice d’ester 37

c-Indice d’iode 38

II-II-1-c-Activité antimicrobienne 38

II-II-2-Étude phytochimique de l’Inula viscosa 39

Chapitre III: Résultats et discussion 44

Conclusion et perspectives

Annexes

55

56

Liste des abréviations

CG/MS : Chromatographie en phase gazeuse couplée au spectromètre de masse

DPPH: 2,2-diphényl-1-pycrylhydrazyl

IC50 : concentration de la substance espèce active qui correspond à une inhibition de 50% de

la cible

CCM: Chromatographie sur couche mince

FID: Flam Ionisation Detector

PKC: Protéine kinase C

ED50 : c’est la dose efficace à 50% en pharmacologie

ABTS : 2,2’-azino-bis (3-éthylbenthiazoline-6-sulphonique)

Ia : Indice d’acide

Ie : Indice d’ester

IK : Indice de Kováts

CMI : Concentration minimale inhibitrice

Glossaire

Aisselle : intérieur de l'angle formé par la feuille et la tige.

Akène : fruit sec à une seule graine et qui se n’ouvre pas à maturité, ex : la noisette.

Amibiase : L'amibiase est une infection parasitaire due à un protozoaire

Androcée : Les étamines d'une fleur.

Anthère : Partie de l'étamine qui renferme le pollen.

Antifongique: se dit des médicaments qui détruisent les champignons parasites du corps.

Antilytique : qui combat les calculs.

Antimycosique: se dit des médicaments qui détruisent les champignons parasites du corps.

Antipyrétique : synonyme de fébrifuge.

Antispasmodique : qui sert contre les spasmes.

Biocide : produit qui détruit les micro-organismes.

Bractée : petite feuille qui recouvre la fleur avant son développement et qui est située à la

base du pédoncule floral.

Corolle : Ensemble des pétales d'une fleur.

Cuticule : en botanique, membrane qui protège les jeunes pousses et les feuilles des plantes.

Cytochrome : protéine indispensable à la production d'énergie par les cellules.

Diurétique : qui augmente la sécrétion de l’urine.

Entamoeba histolytica : amibe qui vit dans le gros intestin chez l'homme, où elle s'intègre à

la flore résidente.

Fongicide: se dit des substances qui détruisent les champignons.

Hypoglycémie : diminution de la quantité de glucose contenu dans le sang.

Involucre : réunion de bractées formant autour d'une fleur, ou de fleurs réunies, ou à la base

d'une ombelle, une enveloppe générale.

Kinase : Enzyme essentiellement musculaire intervenant dans la mise en réserve d'énergie par

phosphorylation de la créatine.

Moisissure : nom de petits champignons qui se développent sur les substances qui s’altèrent.

Phanérogame: embranchement du règne végétal comprenant toutes les plantes que se

reproduisent par des fleurs et des graines.

Protozoaire : nom générique donné aux organismes unicellulaires eucaryotes.

Pubescente : se dit des plantes garnies de poils très fins et courts.

Rudérale : qui pousse dans les décombre.

Spore : cellule reproductrice non sexuée des champignons, de quelques autres végétaux et de

certains protozoaires.

Tomenteuse : Se dit en parlant des organes (tige, feuille, etc.) dont la surface offre un

assemblage de poils longs, mous, analogues au coton, au duvet.

Vermifuge : se dit d'un remède qui a la propriété d'expulser les vers intestinaux.

Verticille : Ensemble des parties de la fleur ou des organes foliacés disposés, au nombre de

deux au moins, autour d'un axe commun et sur un même plan horizontal.

Introduction

1

Introduction

Pendant longtemps, les remèdes naturels et surtout les plantes médicinales furent le

principal, voire l’unique recours de la médecine.

La phytothérapie est la science qui étudie le traitement par les plantes. Malgré l’industrie

pharmaceutique, les plantes ne furent jamais abandonnées. Pour mieux expliquer d’où

provient l’effet thérapeutique, il faut procéder à une étude phytochimique. C’est une pratique

basée sur les avancées scientifiques qui recherchent et identifient les extraits actifs des plantes

et qui sont moins agressifs pour l’organisme. On estime que 10 à 20% des hospitalisations

sont dues aux effets secondaires des médicaments chimiques1 2

. Cette pratique conduit au

phytomédicament.

Dans le cadre de ce travail et le cadre de la valorisation de plantes médicinales locales, notre

choix s’est porté sur deux plantes, très répandues dans la région d’Oran: Inule visqueuse et

Rosmarinus officinalis. Elles sont également très utilisées comme plantes médicinales. Pour

expliquer l’action de ces plantes sur l’organisme, une étude phytochimique, suivie par des

analyses chromatographiques des extraits des deux plantes, a été effectuée. Pour celà, nous

nous sommes fixés les objectifs suivants :

1) Extraction des l'huiles essentielles de la plante I. viscosa (feuilles) et de Rosmarinus

officinalis (partie aérienne) de la région d’Oran par l’hydrodistillation ainsi que la

détermination de leurs propriétés physico-chimiques et de leurs compositions chimiques par

CG /MS.

2) Mise en évidence de l’activité biologique des huiles essentielles séparées vis-à-vis des

souches bactériennes et fongiques.

3) Recherche des fractions actives : flavonoïdes, sesquiterpènes, saponines isolés de la plante

inule visqueuse.

1 . J.Verdrager. Ces médicaments qui nous viennent des plantes. Ed. S.A. Maloine. p.12-15, 1978

2 . M.Fernandez. De Quelques plantes dites médicinales et de leurs fonctions, Ed. Aenigma, p.09, 2003.

Études antérieures et rappels bibliographiques

2

Depuis l’antiquité les deux plantes ont été largement utilisées dans la médecine

traditionnelle et sous plusieurs formes, des recherches phytochimiques et biologiques ont été

réalisées.

I-I- Étude des deux plantes

I-I-1- Inula Viscosa

I-I-1-a-Description botanique et habitat

Règne : Plantae

Embranchement : Magnoliophyta

Classe : Magnoliopsida

Ordre : Asterales

Famille : Astéracées(composées)

Genre : inula

Espèce : viscosa

Inula viscosa (L) est une plante annuelle, herbacée, visqueuse et glanduleuse, à odeur

forte qui appartient à la famille des Astéracées (Composées). Elle peut atteindre 50 cm à 1 m

de hauteur et présente des capitules à fleurs jaunes très nombreuses au sommet de la tige.

Les feuilles sont entières ou dentées, aiguës, sinuées, les caulinaires amplexicaules,

plus largement lancéolées, les capitules assez gros en longues grappes pyramidales3. C’est une

plante largement répandue dans le nord de l’Algérie et dans tout le pourtour méditerranéen.

On la trouve dans les rocailles, les garrigues, les terrains argileux un peu humides et sur les

bords des routes4.

Son histoire thérapeutique est très diversifiée et connue depuis longtemps dans les

médications traditionnelles5.

L’Inule visqueuse est une plante toute glanduleuse-visqueuse, elle est réputée être un

"insecticide végétal" qui combat la Mouche de l'Olivier.

3 .P.Quezel, S.Santa, Nouvelle flore de L’Algérie et des régions désertiques méridionales. Editions du Centre

National de la recherche scientifique.Tome II, 1963. 4.S.Benayache, F.Benayach,H.Dendougui et M.Jay.Plantes médicinales et phytothérapie. Tome xxv.N°4.170-

176, 1991. 5.C.Susplugas, G.Balansard et J.Julien. J. Herba Hung. Vol 19.19-33,1980.


3

I-I-1-b-Description du genre Inula

Plante annuelle à tige entièrement herbacée, de 20-70 cm. Feuilles entières ou peu

denticulées ; les inférieures linéaires-oblongues, obtuses, longuement atténuées à la base ; les

caulinaires supérieures linéaires sessiles et aigues, non amplexicaules. Plante pubescente-

glanduleuse, visqueuse, à odeur fétide. Bractées externes de l’involucre herbacées, les

intérieures scarieuses au bord. Capitules petits, pédonculés, terminaux et latéraux, groupés en

panicule pyramidale lâche.

Fleurs jaunes, celles de la circonférence souvent violacées, ne dépassant pas

l’involucre, elle pousse dans les lieux pierreux et incultes surtout dans le Tell6.

D’autres espèces : inula bifrons, inula britanica, inula conyza, inula ensifolia, inula

graveolens, inula helenium, inula helvetica, inula hirta, inula montana, inula salicina,

inula spiraeifolia.

I-I-1-c- Description de la famille des Asteraceas

C’est, avec 20 000 espèces, la famille la plus importante des phanérogames. C’est

aussi, beaucoup, la plus perfectionnée, c’est pourquoi son étude termine le plus souvent celle

du règne végétal. C’est une famille répandue dans le monde entier, mais principalement dans

les régions tempérées.

Qu’on la considère comme la famille la plus évoluée du règne végétal ou seulement

comme une famille très perfectionnée, les Astéraceas sont, de toute façon, une des plus belles

réussites de l’évolution. Un fait le prouve sans conteste : le grand nombre de ses espèces.

Les Astéraceas sont caractérisées par :

-l’inflorescence en capitule ;

-les fleurs, très particulières, à anthères soudées (d’où le nom de Synanthérées également

donné à la famille) ;

-le fruit, un akène généralement surmonté d’un Pappus7.

6 .P.Quezel, S.Santa. Nouvelle flore d’Algérie et des régions désertiques méridionales. Tome II. p.940, 1963.

7.J.L. Guignard. Abrégé de Botanique. 5

éme édition. Editeur.Masson, Paris. P.227-229, 1983.


4

I-I-1-d-Appellation

Nom arabe: el tibek, el tayoun, el rassen el dabik, et chez nous elle s’appelle megremen,

safsak, mersit, hfina. Chez les kabyles c’est afjded, niret, tlirine. Elle n’était pas reconnue

par les anciens herboristes.

Nom français : inule visqueuse, aunée visqueuse

Nom anglais : Rock Flea - bane8.

Au Maroc elle s’appelle Trehla9.

En Espagne on la trouve sous plusieurs noms populaires comme : Jolivarda, joliverda,

xolivarda, olivarda. Les parties utilisées sont les feuilles, les fleurs et les racines.

I-I-1-e-Utilisation traditionnelle et propriétés pharmaceutiques

Inula viscosa (L.) Aiton (=Dittrichia viscosa (L.) Greuter), Asteraceae, est une plante

herbacée vivace topique utilisée dans la médecine traditionnelle comme anti-gale, anti-

inflammatoire10

, elle est connue pour ses propriétés antiseptiques et son efficacité contre les

inflammations de la peau11

, antilytique rénal, diurétique, Antihypertensive12

. L’inule

visqueuse est un désinfectant, un cicatrisant, et un déodorant de premier ordre. Elle est

également employée contre les affections pulmonaires et les maux de tête13

.

Chez l’inula helenium (elecampane, en anglais), l’alantolactone et son isomère, constituants

majeurs de l’huile essentielle, ont des propriétés antibactériennes notamment contre

mycobacterium tuberculosis, anti-protozoaires contre Entamoeba histolytica, qui cause des

amibiases et antifongiques contre des pathogènes opportunistes comme certains

dermatophytes14

.

Les feuilles de l’inule visqueuse secrètent un mélange de résines tout en long de la

durée de vie des feuilles. Ces exsudats se composent de plusieurs flavonoïdes aglycones,

ainsi que de nombreux terpenoïdes. Ils montrent une forte activité allélopathique ainsi que

contre l’effet inhibiteur des micro-organismes phytopathogénes15

.

8 .A. Halimi. Les plantes médicinales en Algérie. P .158-159, 1997.

9 . N-A.Zeggwagh, M-L. Ouahidi, A. Lemhadri et M. Eddouks.J. Ethno.Vol.108. 223–227, 2006.

10. O.Danino, H.E. Gottlieb, S.Grossman et M.Bergman. Food Research Inter,2009.

11. V.Hernandez, M.Recio, S.Manez, R.Giner et J.Rios. Sci.dir.Vol.81(6). 480-488, 2007.

12 . J.L.Fresquet, C.Aguiirre, M.J.Baguena, M.L.Lopez et J.A.Tronchoni. Médicaments et Aliments : L’approche

Ethnopharmacologique. 207-214, 1993. 13

. A. Djerroumi et M. Nacef. 100 plantes medicinal d’Algérie .Edd Palais du livre. P. 83, 2004. 14

. Z.Mohammedi. Etude du pouvoir antimicrobien et antioxidant des huiles essentielles et flavonoïdes de

quelques plantes de la région de Tlemcen, Université de Tlemcen. Faculté des sciences. Département de

Biologie. Laboratoire produits Naturels, 2006. 15

. S. Stavrianakou, G. Liakopoulos et G. Karabourniotis. Environmental and Experimental Botany. Vol.56.

293–300, 2006.

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%235109%232007%23999189993%23664815%23FLA%23&_cdi=5109&_pubType=J&view=c&_auth=y&_acct=C000068470&_version=1&_urlVersion=0&_userid=7536328&md5=541635de73420190d9e09d300f93c6e5


5

L’inule visqueuse possède une activité biologique (antimicrobienne et antifongique).

Elle a été utilisée couramment pour prolonger la durée de conservation de nourriture et dans

la médecine traditionnelle16

.

Les parties aériennes de la plante sont employées comme décoction dans le traitement

du diabète, de l'hypertension et des maladies rénales, dans le secteur méditerranéen. Elle a été

employée dans la médecine traditionnelle pour ses activités antipyrétiques, antiseptiques anti-

inflammatoires17

.

-Emploi

Cataplasme :

La plante écrasée est appliquée directement sur la plaie.

Contre les maux de tête et les affections pulmonaires : chauffer la plante dans un

couscoussier, l’asperger d’huile d’olive et l’appliquer, enroulée dans un linge, sur

les parties à traiter (tête, poitrine).

Contre les odeurs des pieds, étaler quelques feuilles à l’intérieur des chaussures

avant de les mettre.

Mastication des feuilles : Analgésique dentaire.

I-I-1-f-Quelques travaux réalisés sur la plante INULA VISCOSA et son genre INULA

Quelques molécules isolées de l’Inula Viscosa

-Les huiles essentielles

La composition chimique de l’huile essentielle obtenue a partir des parties aériennes

fleuries d’Inula Viscosa, a été analysée par chromatographie CG/MS. Parmi les 53

constituants identifiés qui représentent 60% de l’huile, les sesquiterpénes alcooliques

fokienol(38.8%) et (E)-nerolidol(7.1%) sont les principaux composants18

.

16

.K.Adam, A.Sivropoulou, T.Kokkini Lanaras et M. Arsenakis. J. Agric. Food Chem..Vol.46. 1739-1745,

1998 17

. N-A.Zeggwagh, M-L. Ouahidi, A. Lemhadri et M. Eddouks.J. Ethno.Vol.108. 223–227, 2006. 18

.A.Camacho, A.Fernández, C.Fernández, J.Altarejos et R.Laurent. J.Rivista Italiana Eppos. Vol.29. 3-8,

2000.


6

-Les terpenoïdes

Une étude phytochimique a été faite sur la racine et les parties aériennes d’Inula

Viscosa Espagnole. Cette dernière a permis l’isolement de quelques nouveaux

sesquiterpénoïdes tels que : 9-isobutyroxynerolidol (1), 9-isovaleroyloxynerolidol (2),

9(2-méthylbutyroxy) nerolidol (3), 1l -méthoxy-3, 7, 11-triméthyldodeca-1,6,9-trien-3-

ol (4) et 2,5- peroxyeudesma-3,11( 13)-dien- 12-oique acide(5) 19

.

R

OH

OH

OR

O

O COOH

1 R=OCOCHMe2 4 5

2 R=OCOCH2CHMe2

3 R=OCOCHMeCH2Me

L’Inula Viscosa d’origine Jordanienne a fait l’objet d’isolement de quatre nouveaux

sesquiterpènes tels que : acide 11(13)-eudesmen-12-oique, acide 3-hydroxyilicique

(6), acide 3-hydroxy-epilicic(7), acide 2-hydroxyilicique(8) et acide 9-hydroxy-2-

oxoisocostique(9) en plus des quatorze autres connus tels que : 3,3’-di-O-

méthylquercetine, 3-O- acétylpadmatine, 3-O-méthylquercetine, hispiduline, nepetine,

2-desacétoxyxanthinine, inuviscolide, acide 2-oxoisocostique, acide ilicique, acide

viscique, -sitosterol,-sitosteryl glucoside, 4’-triméthoxy-5, 3’-dihydroxyflavone, et

11,13-dihydroinuviscolide20

.

COOH

R

R1

R2

R3 R4

H

1

2

3

4

5

67

8

9

10

11

12

13

COOH

O

RO H

6 R=R2=H; R1=R3=OH; R4=CH3 9 R=H

6a R=R2=H; R1=OAc; R3=OH; R4=CH3 9a R =Ac

7 R=R1=H; R2=R4=OH; R3=CH3

7a R=R1=H; R2=OAc; R4=OH; R3=CH3

8 R1=R2=H; R=R3=OH; R4=CH3

8a R1=R2=H; R=OAc; R3=OH; R4=CH3

19.P.Torres et F.Pera. J.Nat.Prod. Vol. 55.1074-1079,1992. 20

.M.H.Abu Zarga, E.M.Hamed, S.S.Sabri, W.Voelter et K.Zeller. J. Nat. Prod. Vol.61.798-800,1998.


7

- Les composés phénoliques

Plusieurs composés polyphénoliques ont été isolés et identifiés à partir d’un extrait

méthanolique des feuilles d’Inula Viscosa. Ainsi l’acide 1,3-dicaffeoylquinique

présente une activité antioxydante dans des différentes cellules pathologiques21

.

HO

HO

O

O

O

O

HO2C

OH

OH

OH

OH

1

2

3

4

5

6

7

2'

1'3'

4'5'

6'

7'

8'

9'

1''2''

3''

4''

5"6"

7"

8"

9"

Acide caféique Acide quinique Acide caféique

Structure chimique de l’acide 1,3-dicaffeoylquinique

En 2007 d’autres chercheurs espagnols ont pu isoler et caractériser trois flavonones a

partir des parties aériennes de Dittrichia Viscosa d’origine Espagnole: sakuranetine

(10), 7-O-méthylaromadendrine (10a) et 3-acètyl-7-O-méthylaromadendrine (10b),

une activité anti-inflammatoire sur différents enzymes comme elastase,

myeloperoxidase (MPO) et protéine kinase C (PKC)) a été montrée, le 7-O-

méthylaromadendrine (ED50 = 8 mg/kg) et le sakuranetine (ED50 = 18 mg/kg)ont

présenté une meilleure activité 22

.

O

OH

OH O

H3CO

R

10 R=H

10a R=OH

10b R=OCOCH3

21

.O.Danino, H.E. Gottlieb, S.Grossman et M.Bergman. Food Research Inter,2009. 22

.V.Hernandez, M.Recio, S.Manez, R.Giner et J.Rios. Sci.dir.Vol.81(6). 480-488, 2007.



8

Activités biologiques de la plante INULA VISCOSA

L’huile essentielle de la partie fleurie d’Inula Viscosa de la région de Tlemcen possède

un pouvoir antifongique puissant contre cinq moisissures étudiées. Cette efficacité se

traduit par la présence de concentrations fortes des sesquiterpènes et plus

particulièrement les carboxyeudesmadienes contenus dans les feuilles de cette plante.

Cette caractéristique peut être exploitée dans l’industrie agro-alimentaire afin

d’augmenter la durée de vie d’un grand nombre de produits alimentaires en particulier

les corps gras, dans l’industrie pharmaceutique et thérapeutiques pour prévenir et

traiter diverses maladies humaines (maladies cancérigènes)23

.

Une étude a été faite sur Dittrichhia Viscosa d’origine Marocaine; une activité

antibactérienne des différents extraits des feuilles et des fleurs vis-à-vis de trois

souches bactériennes d'Escherichia coli, Staphylococcus aureus et Staphylococcus

epidermidis a été confirmé. Les résultats montrent que les activités antibactériennes

sont en relation avec l'origine de l'extrait (feuille ou fleur), la nature du solvant et la

souche testée. En effet, les extraits au méthanol sont les plus actifs, suivis par ceux à

l’éthanol, puis ceux à l’acétone. La souche Escherichia coli a montré la plus grande

sensibilité aux différents extraits, suivie par les deux staphylocoques24

.

Une étude a été faite dans la Flore Espagnole sur l’activité biocide de l’extrait

méthanolique de l’Inula Viscosa contre l’attaque des insectes. Ainsi la plante

contient beaucoup de métabolites secondaires qui jouent un rôle principal dans la

défense contre l'attaque d'insectes, de croissance des insectes et un rôle fongicide.

Le tritriacontane a été isolé et caractérisé comme composé principal dans la plante.

Cet hydrocarbure a été rapporté comme un composant important des extraits

cuticuleux de lipides de quelques espèces d’insectes25

.

Les extraits d'éther de pétrole (EP) et méthanolique de neuf espèces des plantes

Libanaises sauvages ont été examinés in vitro pour leur activité antimycosique

contre huit mycètes phytopathogéniques. L'efficacité des extraits d’EP contre tous

les microbes pathogènes examinés était plus haute que celle des extraits

méthanoliques. L'Inula Viscosa était fortement éfficace (> 88%) dans des essais de

germination de spore contre cinq mycètes parmi les six examinés. Cette étude a

23

.N.Benhammou, F. Atik Bekkara. Contribution à l’étude du pouvoir antifongique de l’huile essentielle d’Inula

Viscosa. 24

.F. Bssaibis, N. Gmira et M. Meziane. Rev. Microbiol. Ind. San et Environn. Vol.3, N°1. 44-55,2009. 25

.P.Cunat, E.Primo, I.Sanz, M.D.Garcera, M .C. March, W. S. Bowers et R.Martinez-Pardo. J. Agric. Food

Chem.Vol 38.N°2. 497-500, 1990.


9

montrée que l’Inula Viscosa possédait une meilleure activité antimycosique in

vitro26

.

La partie aérienne de la plante a fait l’objet d’une autre recherche qui a pu évaluer

l'activité hypoglycémique et hypolipidémique d'extrait aqueux d’Inula viscosa chez

le glucose de sang, plasma le cholestérol et les taux de triglycérides chez les rats

normaux et diabétiques. L’étude conclue que l'extrait aqueux d’Inula Viscosa, à une

dose de 20 mg/kg possédait une activité hypoglycémique chez les rats normaux et

diabétiques. Cependant, aucune activité hypolipidémique n’a été observée. Des

administrations par voie orale simples et répétées ont été employées dans cette

étude27

.

Une autre étude a été faite sur l'exsudat epicuticulaire de feuille de Dittrichia

Viscosa rudéral méditerranéen qui est hydrosoluble et facilement écoulé au sol par la

pluie. En conséquence, le sol enrichi avec ce matériel est inhibiteur pour la

germination de graine de la Laitue, alors que la germination du Maritima de

Malcolmia (des espèces se trouvent avec le Dittrichia Viscosa dans le même habitat)

est considérablement retardée28

Quelques molécules isolées du genre Inula


En 2005 quatre collaborateurs Tunisiens ont séparé environ 85 composants de l’huile

essentielle extraite a partir d’Inula Graveolens tunisienne(parties aériennes) et ils ont

trouvé comme composants majoritaires dans les différents organes étudiés29

:

Tige et feuilles(%) Fleurs(%) Racine

cadinol 9 .2 11.3

Borneol 21 .4 19.3

Acetate de bornyl 33 .4 39.6 5.3

Camphene 5.5

Carvone 5

p-mentha-1(7),2-dien-8-ol 5.3

β-selinene 11.5

26

.Y. Abou-Jawdah, H.Sobh et A. Salameh. J. Agric. Food Chem.Vol 50. N°11. 3208-3213, 2002. 27

.N-A.Zeggwagh, M-L. Ouahidi, A. Lemhadri et M. Eddouks.J. Ethno.Vol.108. 223–227, 2006. 28

.E.Levizou, P.Karageorgou, G-K.Psaras et Y.Manetas. J. Flora.Vol. 197. 152–157, 2002. 29

.S.Dohi, M.Terasaki et M.Makino. J. Agric. Food Chem. Vol. 57.4313-4318, 2009.


10

Une autre étude a été faite sur des huiles essentielles commerciales extraites a partir

de dix plantes. Neuf composants ont été identifiés dans l’huile essentielle de l’Inula

Graveolens d’origine Française et les principaux ont été des monoterpènes

bicycliques comme l’acétate de bornyle(54%), bornéol(20%) et camphéne(4.9%).

Cette étude est la première qui a révélé l’activité inhibitrice des composants

majoritaires de cette huile essentielle ; elle est de valeur (IC50=0.27), elle a été

mesurée par une méthode de dosage de microplaque.30

- Les flavonoïdes

Trois flavonoïdes acylés de glucosides : patuletine 7-O-(6’’-isobutyryl) glucoside

(11), patuletine 7-O-[6’’-(2-méthylbutyryl)]glucoside (12) et patuletin 7-O-(6’’-

isovaleryl) glucoside (13) ont été isolés à partir de l’extrait d’Inula Britanica

d’origine Coréenne par fractionnement, ainsi que d’autre flavonoïdes connus tels

que : kaempférol 3- glucoside (14), l'isorhamnetine 3- glucoside (15), hispiduline 7-

glucoside (16), patulitrine (17), nepitrine (18), kaempférol (19), axillarine (20),

patuletine (21), et lutéoline (22). Les huit flavonoïdes (11-13) et (17-22) ont montré

une activité antioxydante profonde dans les essais DPPH et les essais d’analyse de

réduction de cytochrome –C utilisant le systéme de culture des cellules HL-6031

.

OO

H3CO OH

OH

OH

HO

O

OR

HO

HO OH

O

OR4

R3 R1

OH

R2

HO O 11 R=COCH(CH3)2 14 R1=OGle, R2=H, R3=H, R4=OH

12 R=COCH(CH3)CH2CH3 15 R1 =OGle, R2=OCH3, R3=H, R4=OH

13 R=COCH2CH(CH3)2 16 R1=H, R2=H, R3=OCH3, R4=OGle

17 R1=OH, R2=OH, R3=OCH3, R4=OGle

18 R1=H, R2=OH, R3=OCH3, R4=OGle

19 R1=OH, R2=H, R3=H, R4=OH

20 R1=OCH3, R2=OH, R3=OCH3, R4=OH

21 R1=OH, R2=OH, R3=OCH3, R4=OH

22 R1 =H, R2=OH, R3=H, R4=OH

30

.F. Harzallah-Skhiri, I .Cheraif, H. Ben Jannet et M. Hammami. Pak.J. Biol. Sci,8(2): 249-254,2005. 31

.E. J.Park, Y.Kim et J.Kim. J. Nat. Prod. Vol. 63.N°1.34-36, 2000.


11

L’extraction de l’Inula Cappa d’origine Indienne a conduit à trois nouveaux

flavonoïdes avec un modèle peu commun de substitution de l'anneau B, à savoir

(2R,3R)S-méthoxy-3,5,7,2’-tétrahydroxyflavone(23), (2S)5,7,2’,5’

tétrahydroxyflavanone (24) et 7.5’-diméthoxy-3,5,2’-trihydroxyflavone(25). Les

structures ont été établies par corrélation chimique, études spectroscopiques et

dégradation32

.

O

OOR2

OMe

R4O

R3O

OR1

O

OOR1

OR4

R3O

R2O

O

OOR2

OMe

R4O

R3O

OR1

23 R1=R2=R3=R4=H 24 R1=R2=R3=R4=H 25 R1=R2= R4=H; R3=Me

- Les terpenoïdes

Deux nouvelles sesquiterpènes (26), (26a) et monoterpène dimère (27), appelés

macrophyllol A(1) et B(2) ont été isolés à partir de l’écorce de l’Inula Macrophylla33

O

O

O

O

CH3

H

H3C

CH3

OR

O

O

O

O

CH3

H

CH3

OHCH3

26 R=H 27

26a R=Ac

Activités biologiques du genre INULA

Des extraits de 121 plantes médicinales ornementales ont été examinés pour l’activité

insecticide et l’activité régulatrice du développement de mauvaise herbe. Tous ces

extraits ont exercé des activités inhibitrices de croissance et une toxicité modérée ou

aigue basse. En outre, les extraits de l’Inula Helinium ont un effet antiappétente et un

effet répulsif très fort, une fois appliqué à la nourriture (grains épluchés de tournesol).

Il est évident que l’extrait contienne plusieurs constituants actifs34

.

32

.N.C. Baruah, R. P.Sharma, G. Thyagarajan, W.Herz et S.V.Govindan. J.Phytochemistry. Vol. 18. 2003-2006,

1979. 33

.B. Su, Y. Takaishi, M. Tori, S. Takaoka, G. Honda, M. Itoh, Y. Takeda, O. K. Kodzhimatov et O.

Ashurmetov. J. Org. Lett. Vol. 2. N°4. 493-496, 2000. 34

.M. Alexenizer et A. Dorn. J. Pest. Sci. Vol. 80.205–215, 2007.


12

I-I-2-Rosmarinus Officinalis

I-I-2-a-Description botanique et habitat

Règne : Plantae.

Embranchement : Spermatophyta.

Sous embranchement : Angiospermae.

Classe : Dicotyledones.

Ordre : Lamiales.

Famille : Lamiaceae.

Genre : Rosmarinus

Espèce : Officinalis

Rosmarinus officinalis est un arbrisseau touffu toujours vert de 0.5 à 1.5 m de hauteur,

de la famille de Lamiaceas. Ses tiges ligneuses sont pourvues de feuilles persistantes, sessiles,

coriaces, étroites à bords enroulés, d’un vert sombre brillant à la face supérieure, blanchâtres

tomenteuses et mates à la face inférieure. Les fleurs d’un bleu pale, d’environ 1 cm, sont

réunies en petites grappes serrées à l’aisselle des feuilles. Le romarin est un ornement des

collines, des coteaux et des basses montagnes, surtout calcaires. Originaire des régions

Méditerranéennes, on le trouve dans tout le sol Algérien35

.

I-I-2-b- Description du genre Rosmarinus

Arbustes ou sous arbrisseaux ligneux très odorants. Feuilles linéaires à marge

révolutée, gaufrées, verdâtres, en dessus, plus ou moins hispides blanchâtres en dessous.

Calice en cloche, bilabié. Corolle bleu pale ou blanchâtre à deux lèvres, la supérieure entière

ou à peine marginée pas plus longue que l’inférieure, cette dernière très lobée43

.

I-I-2-c- Description de la famille des Lamiacées

C’est l’une des grandes familles de Dicotylédones Gamopétales, herbes ou arbustes ;

aromatiques, poilues, glanduleuses, comprennent 6500-7000 espèces, cosmopolite, mais en

concentration importante dans les régions méditerranéennes, ne se rencontrent guère que dans

les régions présahariennes et dans l’étage supérieur du Hoggar, sauf les trois espèces

Marrubim desrti, Salvia aegyptiaca et Teucrium polium.

Ce sont des plantes singularisées à maints caractères, et en particulier : une tige

quadrangulaire à renforcement angulaire de collenchyme ; des feuilles simples, opposées

35

. .P.Quezel, S.Santa. Nouvelle flore d’Algérie et des régions désertiques méridionales. Tome II. p.940, 1963.


13

décussées, parfois verticillées et composées; des fleurs en glomérules à l’aisselle des feuilles ;

des fleurs bisexuées, à corolle à deux lèvres plus ou moins nettes ; androcée didyname ; ovaire

à deux loges, chacune étant bi ovulée ; fruits tetrakènes formé par quatre nucules, parfois

drupe, graine avec un embryon droit, peu ou pas d’albumen. Cette famille possédant un

efficace appareil sécréteur ; de nombreux espèces de lamiacées sont utilisées dans le monde

comme des aromes et parfums. C’est les plus souvent des poils sécréteurs à tête uni ou

pluricellulaire, l’essence élaborée s’accumulant à l’extérieur de la paroi squelettique et sous la

cuticule soulevée36

.

I-I-2-d-Appellation

Nom arabe: Iazir, Klil, Hassalhan, yazir.

Nom français: Romarin, rose marine, encensier, romarin des troubadours, herbes aux

couronnes, etc.

Nom anglais : Common Rosemary37

.

Principaux constituants

• Huile essentielle, dont bornéol, camphène, camphre, cinéol

• Flavonoïdes (apigénine, diosmine)

• Tanins

• Acide rosmarinique

• Diterpènes

• Rosmaricine

I-I-2-e-Utilisation traditionnelle et propriétés pharmaceutiques

Plante très connue, le romarin est originaire du bassin méditerranéen. Depuis

l'Antiquité, il est employé pour améliorer et stimuler la mémoire.

Encore aujourd'hui, en Grèce, les étudiants en font brûler dans leurs chambres en

période d'examens. Le romarin est en effet considéré comme une plante tonique, revigorante,

stimulante : autant de vertus que reflète sa saveur aromatique bien particulière. Il agit sur le

système nerveux central comme stimulant. Pour usage externe, comme cicatrisant. L’infusion

des feuilles ont plusieurs actions physiologiques : stimulant générale, cholagogue,

36

. P. Ozenda. Flore du Sahara CNRS. Ed. Paris. France, 1958 37

. E. Perrot et P. Paris. Les plantes médicinales. Presses universitaires de France, 1971


14

antiseptique, diurétique, emménagogue. Le romarin stimule la circulation cérébrale,

améliorant concentration et mémoire. Il soulage également céphalées et migraines. Il favorise

la pousse des cheveux en stimulant l'irrigation du cuir chevelu38

.

En Tunisie, les feuilles de R.Officinalis sont utilisées comme antispasmodiques pour

les voies digestives et comme vermifuges. Les feuilles séchées, moulues et mélangées avec de

l'huile d'olive sont mises sur la circoncision récente blessure39

. Les feuilles de la plante sont

utilisées généralement comme épices et comme source de composés antioxydants utilisés dans

la conservation de nourriture. La décoction de romarin des feuilles peut être utilisée topique

contre l’eczéma et d’autres maladies cutanées40

I-I-2-f-Quelques molécules isolées du Rosmarinus Officinalis


Une analyse chromatographique montre que l’huile essentielle extraite à partir de R.

Officinalis d’origine Chinoise, contient 19 composants. Le 1,8-cineole (27.23%), -

pinène (19.43%), camphor (14.26%), camphéne (11.52%) et -pinène (6.71%)

représentent les constituants majoritaires. Une étude comparative sur l’activité

antioxidante entre l’huile essentielle, 1,8-cinéole, -pinène et -pinène a été faite;

l’huile essentielle a présenté une excellente activité antioxydante en utilisant le

DPPH41

.

L’huile essentielle extraite par hydrodistillation à partir le R. Officinalis d’Iran a été

caractérisée par CG et CG/MS. Le R. Officinalis contient -pinène (14.9%), 1,8-

cineole (7.43%) et linalool (14.9%), comme constituants majoritaires. Cette huile

essentielle montre une activité antimicrobienne contre E. coli et S. aureus. Cette

essence est considérée comme un agent puissant pour la conservation alimentaire42

.

La composition chimique d'huile essentielle de R.Officinalis de Sardaigne (Italie)

obtenue par hydrodistillation a été étudiée utilisant CG-FID et MS. Les rendements

sont étendus entre 1.75 et 0.48% (v/w, volume/poids sec). Un total de trente

composants a été identifié. Les principaux constituants de cette huile sont -pinène,

bornéol, (-) camphène, camphre, verbenone, et bornyle-acétate. Les essais

38

. P. Iserin, M. Masson, J-P. Restellini. Encyclopedia of Médicinal Plants (2nd Edition). P.128 ,2001. 39

. N. Okamura, H. Haraguchi, K. Hashimoto, A. Yagi. J. Phytochem. Vol 37, Issue.5.1463-1466,1994. 40

. G. Altinier, S. Sosa, R.P. Aquino, T. Mencherini, R. D. Loggia et A. Tubaro. J.Agric. Food Chem. Vol.55.

1718-1723, 2007. 41

. W. Wang, N. Wu, Y.G. Zu et Y.J. Fu. J. Food Chem. Vol.108. 1019–1022, 2008. 42

. L. Gachkar, D. Yadegari, M. Bagher Rezaei, M.Taghizadeh, S.Alipoor Astaneh et I. Rasooli.

J.Food.Chem.Vol.102.898–904,2007.


15

antimicrobiens et antifongiques ont montré une activité faible de R.Officinalis de

Sardaigne. D'autre part, on a observé un effet inductif sur la croissance fongique,

particulièrement vers Fusarium graminearum43

.

Le potentiel productif donne deux écotypes différents de R.officinalis (Cevoli et

Lunigiana) cultivés dans le secteur littoral près de Pise (Toscane, Italie nordiques).

Les différences dans le rendement et la composition d'huiles essentielles des feuilles,

des fleurs et des tiges obtenues à partir de différentes positions des plantes, ont été

employés pour caractériser les deux écotypes. La plante d'écotype de Cevoli a produit

le rendement le plus élevé de la matière sèche (221 g/plante) par rapport à l'écotype de

Lunigiana (72 g/plante). Il y avait des différences significatives dans la production de

matière sèche de différents organes des deux écotypes. Les teneurs en huile essentielle

des écotypes de Cevoli et de Lunigiana étaient semblables. En revanche, les teneurs en

huile des différents organes de la plante ont montré des différences marquées. La pièce

apicale de la plante et des feuilles a donné les plus élevés rendements d'huile

essentielle. La différence principale entre les huiles des deux écotypes a consisté en

1.8% contenu de cinéole (6.6 et 37.9% dans Cevoli et Lunigiana, respectivement).

L'écotype de Cevoli a été déterminé pour être le plus approprié à l'extraction de l'huile

essentielle parce qu'il a été caractérisé par une prépondérance de fleurs et de feuilles

dans la partie apicale. L'écotype de Cevoli pourrait être classé comme chemotype de

-pinène, tandis que Lunigiana est un chemotype de 1.8 cinéole44

.

-Les terpenoïdes

Le seco-Hinokiol (28), un nouveau diterpénoïde d'abietane, a été isolé à partir des

feuilles du R.Officinalis. Sa structure a été élucidée sur la base de l'analyse

spectroscopique étendue. C’est le quatrième rapport d'un seco-abietane ayant été

isolé. En outre, le carnosate méthylique (31) a été synthétisé de l'acide carnosique

(30)45

.

43

A. Angioni, A. Barra, E. Cereti, D. Barile, J. D. Coisson, M. Arlorio, S. Dessi,V. Coroneo et P. Cabras. J.

Agric. Food Chem. Vol. 52. 3530-3535, 2004. 44

.G. Flamini, P. L. Cioni, I. Morelli, M. Macchia et L. Ceccarini. J. Agric. Food Chem. Vol. 50. 3512-3517,

2002. 45

.C. L. Cantrell, S. L. Richheimer, G. M. Nicholas, B. K. Schmidt, et D. T. Bailey. J. Nat. Prod. Vol. 68. 98-

100, 2005.


16

ROOC

OH

H

12

194

5

6

7

8

9

10

1113

14

15

16

17

18

12

20

3

OH

H

HO

R

28 R=H 30 R=COOH

29 R=CH3 31 R=COOMe

Des études phytochimiques sur les parties aériennes de R. Officinalis ont mené à

l'isolement d'un nouveau diterpène, l'acide 12 méthoxy-cis-carnosique. Les

composants majoritaires ont été évalués pour leur activité de modification

antibactérienne et de résistance. L'acide de Carnosique (32) a empêché le flux de

bromure d'éthidium d'une contrainte résistante de « multidrogue » de Staphylococcus

aureus avec un IC50 de 50 μM46

.

HO

HO

HOOC

32

-Les flavonoïdes

Trois flavonoïdes glucuronides : lutéolin 3′-O-β-D-glucuronide (33), lutéolin 3′-O-(4″-

O-acétyl)-β-D-glucuronide (34) et luteolin 3′-O-(3″-O-acétyl)-β-D-glucuronide (35)

ont été isolées a partir de 50% d’extrait aqueux méthanolique de R.Officinalis47

O

O O

OH

HO

OH O

O

OH

HO

OH

OH

O

O O

OH

HO

OH O

O

OH

H3COC

OH

OH

33 34

46

.M. Oluwatuyi, G.W. Kaatz et S. Gibbons.J. Phytochem. Vol 65, Issue. 24.3249-3254, 2004. 47

.N. Okamura, H. Haraguchi, K. Hashimoto, A. Yagi. J. Phytochem. Vol 37, Issue.5.1463-1466,1994.

http://www.sciencedirect.com/science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%235275%232004%23999349975%23530128%23FLA%23&_cdi=5275&_pubType=J&view=c&_auth=y&_acct=C000068470&_version=1&_urlVersion=0&_userid=5818351&md5=aa8fac084577fa9a485b4653a397f815


17

O

O O

OH

HO

OH O

O

OH

COCH3

HO OH

35

La distribution de six composés avec trois squelettes polyphénoliques différents ont été

étudiés dans le R. Officinalis: diterpènes phénoliques (acide carnosique (36), carnosol(37)

et acide 12-O-methylcarnosique (38), dérivés de cafféoyl (acide rosmarinique(39)), et

flavones (genkwanin(40) et isoscutellarein 7-O-glucoside(41)), chaqu’un montre un

comportement caractéristique et une distribution pendant le cycle végétatif. L'acide

rosmarinique a montré les concentrations les plus élevées de tous les polyphénols et dans

tous les organes. La distribution de cet acide dans les feuilles, les fleurs, et les tiges

suggèrent que dans les premières phases de croissance de fleur, les niveaux sont dus à la

biosynthèse in situ, et aux dernières étapes, la contribution des phénomènes de transport a

été augmentée. L'activité antioxydante de six extraits, avec une composition

polyphénolique différente a été évaluée dans les systèmes aqueux et lipidique. Les

résultats montrent que les extraits du R.Officinalis représentent une excellente activité

antioxydante dans les deux systèmes48

.

OH

CHHO

HOOC

H3C CH3

CH3

CH3

OH

CHHO

C

H3C CH3

CH3

CH3

O

O

OCH3

CHHO

HOOC

H3C CH3

CH3

CH3

36 37 38

O

O

HO

OH

COOH

OH

OH

O

OH O

OH

H3CO

O

OH O

OH

OH

GLU-O

39 40 41

48

.M.J. Del Bano, J.Lorente, J.Castillo, O.Benavente-Garcia, J.A. Del Rio, A.O.Karl-Werner Quirin et D.

Gerard. J.Agric.Food Chem.Vol. 51. 4247-4253, 2003.


18

Activité biologique de la plante

L’huile essentielle du R. Officinalis de la Serbie a été analysée au moyen de CG /MS

et analysées pour leurs activités antimicrobienne et antioxydante. L'activité

antimicrobienne a été examinée contre treize contraintes bactériennes et six mycètes, y

compris Candida albicans et cinq dermatomycètes. L'activité antibactérienne la plus

importante de l’huile essentielle a été exprimée sur Escherichia coli, Salmonella typhi,

S.enteritidis, et Shigella sonei. Un taux significatif d'activité antifongique de l’huile

essentielle, a été également montré. L'activité antioxydante a été évaluée comme

capacité de balayage de radical libre (RSC), ainsi que l'effet sur le lipide peroxydation

(LP). Le RSC a été évalué en mesurant l'activité de balayage d'huile essentielle sur le

DPPH et les radicaux hydroxyles. Des effets sur le LP ont été évalués après les

activités de l’huile essentielle dans les systèmes d'induction Fe2+

/ascorbate et

Fe2+

/H2O2. L’huile essentielle étudiée a réduit la formation de radicaux de DPPH

(IC50) 3.82 μg/mL d'une façon dépendante de la dose. L'inhibition forte du LP dans les

deux systèmes d'induction était particulièrement observée pour cette huile

essentielle49

.

Activités antioxydantes de trois composés purs : acide carnosiqu, acide rosmarinique

et sesamol, dans deux extraits de plante : l'extrait de R.Officinalis et l'huile essentielle

de Blackseed, ont été examinés en appliquant les analyses de DPPH et d'ABTS+

radical-balayage et l’essai de sulfocyanate ferrique. Chacune des trois méthodes a

montré que l'extrait de R.Officinalis a eu une activité antioxydante plus élevée que

l'huile essentielle de Blackseed. L'ordre de l'activité antioxydante des composés purs a

montré des variations dans différents essais. Ceci a été attribué aux facteurs

structuraux de différents composés. Le contenu phénolique de l'extrait de R.Officinalis

et l’huile essentielle de Blackseed a été également déterminé. L'extrait de R.Officinalis

s'est avéré avoir un contenu phénolique plus élevé que l'huile essentielle de Blackseed.

Ce fait a été utilisé en expliquant l'activité antioxydante plus élevée de l'extrait de

R.Officinalis50

.

49

.B. Bozin, N. M.Dukoc, I. Samojlik et E. Jovin. J. Agric. Food Chem.Vol.55. 7879-7885,2007. 50

. N. Erkan, G. Ayranci, E. Ayranci. J. Food Chem. Vol. 110. 76–82, 2008.


19

I-II-Rappel sur quelques métabolites secondaires et leur action sur

l’organisme

I-II-1-Les huiles essentielles

Ce sont des mélanges huileux généralement odorants et volatils obtenus soit par

entrainement à la vapeur d’eau de végétaux ou de parties de ceux –ci, soit par expression du

péricarpe frais de certains citrus.

Leur volatilité les oppose aux huiles fixes qui sont constituées de lipides. Ces huiles

essentielles sont liquides, très nombreuses et leur composition varie beaucoup.

On distingue trois qualités d’essences :

les essences hydrocarbonées qui contiennent pour la plupart une dizaine

d’hydrocarbures représentant 90-95% de l’huile totale

les essences oxygénées

les essences sulfurées

Les huiles essentielles sont volatiles et odoriférantes. Ces caractéristiques joueraient

un rôle dans la communication chimique. Elles peuvent également constituer un moyen de

défense vis-à-vis des prédateurs donc elles ont des diverses propriétés thérapeutiques.

Les applications des huiles essentielles dans la vie courante touchent divers domaines

en particulier, la cosmétologie, parfumerie et l’industrie agro-alimentaire.51

51

.G. Mapola. Variations individuelle et saisonnière de la teneur et de la composition des huiles essentielles de

E. Citriodora acclimaté à Pointe- Noire (Congo Brazzaville), Université de Marien Ngouabi. Domaine :

Sciences exactes, Naturelles et de l’Ingénieur. Spécialité: Chimie et Technologie Alimentaires, 2003.


20

I-II-2-Les composés phénoliques

I-II-2-a-Les flavonoïdes

Les composés flavoniques sont des pigments exclusivement végétaux très répandus.

Ce sont des composés C15 qui ont tous la structure C6-C3-C652

.

Chimiquement, ils sont construits à partir d’un hétérocycle de type flavane (deux noyaux

benzéniques A et B, encadrant un hétérocycle oxygéné). Le noyau B est plus ou moins

hydroxylé et méthylé. Ils forment des hétérosides de glucose, galactose, xylose ou rhamnose

(fixés en général sur les carbones 3 et 5)53

.

O

A

B1

2

3

45

6

7

81'

2'

3'

4'

5'

6'

Squelette de base des flavonoïdes

Les flavonoïdes sont présents dans des organismes très divers. On les trouve par

exemple dans les végétaux, où ils interviennent dans la symbiose entre les fabacées et les

bactéries du groupe rhizobium. Elles sont connues pour leurs diverses propriétés biologiques

telles que antioxydante, anti-inflammatoire, antithrombique, antibactérienne,

antihépatotoxique, antitumorale, antihypertensive, antivirale et antiallergique. 54

Il y a plusieurs classes des flavonoïdes, qui différent par leurs structures chimiques :

52

.W.Vermerris et R.Nicholson. phenolic compound biochemistry.Ed Springer. 6-15, 2006. 53

.D. Robert et J-C. Roland. Biologie végétale.Ed Doin. PP 210-214, 1989. 54

. C .M. Andersson, A. Hallberg et T. Hogberg. Advences in Drug Research 28. 65-180, 1996.


21

flavonoïdes définitions structures

flavanols

Sont également connus comme

dihydroflavonols et se produisent souvent en

association avec des tanins dans les bois de

cœur. O

A

1

2

3

45

6

78 1'

2'

3'

5'

6'

O

OH

OH

HO

OH

OH

B

4'

flavones

L'hétérocycle de flavones contient un groupe

cétone, et une liaison insaturée carbone-carbone O

A

B1

2

34

5

6

7

81'

2'

3'

4'

5'

6'

O

flavanones

L'hétérocycle de flavanones contient également

un groupe cétone, mais il n'y a pas liaison

insaturée carbone-carbone. Le A-et B-noyau

pouvant être substitués analogue à la flavones,

comme dans naringénine

O

A

B1

2

34

5

6

7

8 1'

2'

3'

4'

5'

6'

OH

OH O

HO

leucoanthocyanidines

Leucoanthocyanidins sont également dénommé

flavan-3 ,4-cis-diols. Ils sont synthétisés à partir

flavanonols via une réduction de la fraction

cétone sur C4

O

A

B1

2

34

5

6

78 1'

2'

3'4'

5'

6'

OH

OH

HO

HO

OH


22

anthocyanidines

(De anthos, fleur, et cyanos, bleu) sont des

pigments dont les couleurs se situent dans le

bleu-violet et le rouge. L'hétérocycle de

l’anthocyanidine est un cation pyrillium. Ils ne

sont généralement pas trouvé comme aglycones

libre, à l’exception des composés, produits

colorés largement répandus suivant :

pélargonidine (rouge-orange (1)), cyanidine

(rouge(2)), péonidine (rose-rouge (3)),

delphinidine (bleu- violet (4)), pétunidine (bleu-

violet (5)), et malvidine (violet (6)). Ces

composés sont présents dans les vacuoles des

tissus végétaux colorés comme des feuilles ou

des pétales de fleurs. La couleur du pigment

dépend du pH, les ions métalliques présents, et

le degré d’hydroxylation et de méthylation du

cycle B.

O

OH

HO

OH

OH

1

O

OH

HO

OH

OH

2

OH

O

OH

HO

OH

OH

3

OCH3

O

OH

HO

OH

OH

4

OH

OH

O

OH

HO

OH

OH

5

OCH3

OH

O

OH

HO

OH

OH

6

OCH3

OCH3

PH 4

PH 7 bleu

roug

e

OH OH OH

OH

OH

OH

OH OHOH

OCH3 OCH3

OH

OCH3

OCH3

Pelargonidine Cyanidine Delphinidine

Peonidine Petunidine malvidine

Mauve

Bleu

Rouge

Hydroxylation

Méthylation

Fig (A) Variation de la couleur en fonction de l'hydroxylation et de métylation du noyau B

Fig (B) Variation de couleur vacuolaire en fonction du PH


23

I-II-2-b-Les coumarines

Les coumarines ont également le squelette de C6-C3, mais elles possèdent un

hétéroatome l’oxygène en tant qu'élément du C3-unit. Il y a de nombreuses coumarines,

beaucoup jouent un rôle dans la maladie et la résistance de parasite52

. Elles présentent un

intérêt physiologique, inhibant de la croissance des graines en germination. Les coumarines,

en présence d’UV, se lient aux bases pyrimidiques de l’ADN55

. Les coumarines du mélilot

(Melilotus officinalis) et du marronnier d’Inde (Aesculus hippocastanum) contribuent à

fluidifier le sang alors que les furanocoumarines comme le bergaptène, contenu dans le céleri

(Apium graveolens), soignent les affections cutanées et que la khelline de la khella (Ammi

visnaga) est un puissant vasodilatateur coronarien54 55

.

O OHO

O

O

O

HO

H3CO

OH

OH

OH

OH

H

HO

O

O

HO

HO

OH

OH

O

O

Umbelliferone 4-methylumbelliferyl Bergenin

β-D-glucuronide

Quelques exemples de coumarines

I-II-2-c-Les tanins

Sont des polyphénols polaires complexes, d’origine végétale existant dans presque

chaque partie de la plante : écorce, bois, feuilles, fruits et racines. Ceux-ci donnent un goût

amer à l’écorce ou aux feuilles et les rendent impropres à la consommation pour les insectes

ou le bétail, d’où leur emploi pour «tanner» les peaux.

Ils permettent de stopper les hémorragies et de lutter contre les infections. Les plantes

riches en tannins sont utilisées pour rendre les tissus souples, comme dans le cas des veines

variqueuses, pour drainer les sécrétions excessives, comme dans la diarrhée, et pour réparer

les tissus endommagés par un eczéma ou une brûlure. Les écorces de chêne (Quercus robur)

et d’acacia (Acacia catechu) sont riches en tannins56

57

.

55

.J.J. Guilhou, O.Dereure, L.Marzin. Efficacy of Daflon 500 mg in venous leg ulcer healing: a double-blind,

randomized, controlled versus placebo trial in 107 patients. Angiology. V. 48. PP.77-85, 1997 56

.P. Iserin. Larousse Encyclopédie des plantes médicinales, Edd. Larousse. P.10-17 & P.132, 2001 57

.J.Bruneton, Pharmacognosie, Phytochimie – Plantes médicinales – Techniques et documentations.

3ème Edition. Lavoisier. P.3, 111, 159, 197, 205, 336, 385, 623. 1999


24

Il est difficile de les séparer dans un extrait végétal, parce que de nombreux isomères

avec une base moléculaire tés semblable coexistent. Ils sont devisés en trois groupes, tanins

hydrolysables (42), complexes (43) et condensés (44)58 52

O

O

HO

O

OH

HO

OH

OH

HO

O

OH

HO

OHO

O

O

O

HO

HO

OH

OH

OO

O

O

OO

OH

HO

HO

HOOH

OH

HO

HO

HO

HO

HO

OH

O

O

OH

OH

HO

HOOH

OH

OH

OH

OH

HO

42 43 44

I-II-2-d- Les quinones

Ce sont des pigments jaunes à rouge violets que l’on rencontre dans les règnes animal

et végétal. Leurs hétérosides sont solubles dans l’eau et les solutions hydro-alcooliques. Elles

absorbent dans le domaine UV.

Ces substances sont souvent très réactives ; elles peuvent colorer la peau par la suite de

combinaisons avec les groupes amines(NH2) libres des protéines ; certaines, en particulier les

hydroquinones, sont utilisées comme teintures pour fibres textiles (formation de laques). 55

I-II-2-e-Les saponines

Principaux constituants de nombreuses plantes médicinales, les saponines doivent leur

nom au fait que, comme le savon, elles produisent de la mousse quand on les plonge dans

l’eau. Les saponines existent sous deux formes, les stéroïdes et les triterpénoїdes. La structure

chimique des stéroïdes est similaire à celle de nombreuses hormones humaines (oestrogène,

cortisone), et de nombreuses plantes qui en contiennent ont un effet sur l’activité hormonale.

L’igname sauvage (Dioscorea villosa) contient des saponines stéroïdes à partir

desquels on synthétisa la pilule contraceptive. Les saponines triterpénoїdes, contenues dans la

réglisse (Glycyrrhiza glabra) et la primevère (Primula veris), ont une activité hormonale

moindre. Elles sont souvent expectorantes et facilitent l’absorption des aliments 51 52

.

58

. A.Sebaa.Étude phytochimique et biologique d’Ammodaucus leucotrichus. Thèse de magister. Département

de chimie. Faculté des sciences. Université d’Oran. Es-Senia, 2008.


25

I-II-3-Les alcaloïdes

Les alcaloïdes sont des substances cycliques azotées (et de ce fait, ils ont une réaction

plus ou moins alcaline, d’où leur nom). Plusieurs milliers ont été identifiés et leur inventaire

est loin d’être terminé. C’est un groupe chimiquement très hétérogène qui renferme des

noyaux variés. Leur synthèse est spécifique. Ils ont des propriétés pharmacodynamiques très

puissantes et variées. Ce sont pour la plupart des poisons végétaux très actifs comme la

strichnine.

Des travaux ultérieurs ont confirmé que la vacuole constitue un lieu de stockage pour

une grande variété d’alcaloïdes, une même vacuole pouvant renfermer plusieurs types

moléculaires dans certaines espèces.51

CH3

N

N

N

O

H2N

O

H

HO

O

HOH

N

Nicotine Strichnine Morphine

Quelques exemples d’alcaloïdes

I-II-4-Les terpenoïdes

Les terpenoïdes forment une classe de substances naturelles organiques dont

beaucoup sont rencontrées quotidiennement et dont les noms traduisent souvent un caractère

familier.

Elles comprennent le menthol, à l’origine de l’odeur des crayons de bois, l’acide

abiétique, constituant important de la résine des pins, les gommes naturelles et la gutta-

percha utilisée pour les enveloppes des balles de golf, la bétuline, pigment blanc de l’écorce

de bouleaux, le -carotène, pigment orange des carottes et de nombreuses baies, le

caoutchouc.

Très variés tant structuralement que du point de vue de leurs activités biologiques, les

composés de ce groupe, constitués uniquement des éléments ; carbone, hydrogène et


26

oxygène, comportent des huiles essentielles, des résines, des stéroïdes et des polymères

comme le caoutchouc.59

60

61

Leur chaine carbonée est constituée d’unités isopréne à cinq atomes de carbone,

assemblés d’abord en une chaine insaturée qui est ensuite modifiée par oxydation, réduction

ou élimination de carbone.

H2C

CH3

CH2

unité isoprène

H2C

CH3

isoprène activé

O P P

I-II-4-a-Les monoterpènes

Ils constituent la majeure partie des huiles essentielles qui sont présentes en quantité

appréciable chez environ 2000 espèces de 60 familles végétales. Ils comportent 10 atomes de

carbone, et sont issus des couplages de deux unités isopréniques. Leur squelette peut être

acyclique, mono, bi, et tricyclique.62

myrcéne p-menthane pinane

I-II-4-b-Les sesquiterpènes

Le squelette de base de ces composés est constitué de 15 atomes de carbone. Depuis

l’isolement du farnésol (en 1913), le sesquiterpène très répandu dans le monde végétal

(parfum), le nombre de molécules sesquiterpèniques n’a cessé de croitre : les composés

59

.D.J. Faulkner. Nat. Prod. Rep. P.1-49, 2001 60

.M.E. Hay, P.D. Steinberg. The chemical ecology of plant-herbivore interactions in marine versus terrestrial

communities. In: J. Rosenthal & M.Berrenbaum. Vol II. P.371-413, 1992 61

.M.A. Ragan et K.W. Glombitza. J.Pro.Phycol.Res. Vol.4. P.130-241, 1986 62

. O.Boumaza. Recherche et détermination structurale des métabolites secondaires de genista tricuspidata

(Fabaceae), et Haloxylon scoparium (Chenopodiaceae). Thèse de Doctorat. Université Mentouri. Constantine,

2006


27

actuellement décrits se rattachent à plus de 100 squelettes différents63

. On trouve les

sesquiterpènes acycliques, monocyclique et bicyclique.

CH3

le farnésol

COOH

O

CH3H3C

CH3

OH

l'ac.S(+)-abscissique

CH3

H3C CH3

CH3

l'cadinéne

Leur propriété pharmacologique est attribuée aux huiles essentielles qu’ils composent.

De nombreuses lactones sesquiterpènes sont antibactériennes (gram+) et antifongiques,

certaines structures sont antiparasitaires, d’autres sont molluscicides. Certains inconvénients

existent à cause de leur pouvoir alkylant, d’où découle une cytotoxicité, c’est l’exemple de la

picrotoxinine isolée d’un poison de pêche d’Inde, la tutine et l’henanchine qui contaminent

parfois les miels. 64

65

I-II-4-c-Les diterpènes

Les diterpènes forment un vaste ensemble de composés en C20, ils sont présents chez

certains insectes et chez divers organismes marins, ils sont surtout répandus chez les végétaux

supérieurs, on les classe en fonction de leur diversité structurale.61 66

67

La structure peut être acyclique et cyclique.

HO2C

O OGlc

capsianoside

H

OH

Manool

Les diterpènes ne sont pas pour autant dépourvus de potentialités thérapeutiques ; on

peut citer les propriétés antihypertensives de la forskoline du Plectranthus barbatus et les

63

.J.Bruneton. Pharmacognosie, phytochimie, plantes médicinales. 3éme

édition. Éditeur: technique et

documentation, Paris. P. 472-670, 1999 64

.N.J. White. New. Eng. J. Med. Vol 355. P.800-805, 1996 65

.H.J. Woerdenbag, N. Pras, N.G. Chan, B.T. Bang, R. Bos, W. Van Uden, N.V. Boi et C.B. Lutig. Planta Med.

Vol.60. P.272-275, 1994 66

.J.R. Hanson. Prog. Chem. Org. Nat. Prod. Vol.29.P.395, 1971 67

.R.A. Hill. The chemistry of Natural Products, 2nd

edition (ed. R.H. Thomson). P.124, 1993


28

propriétés anti-retrovirale de la prostratine d’Homalanthus nutans. On peut citer également,

l’interet des quinones diterpènique dans le traitement de diverses affections myocardiques, les

propriétés anti-inflammatoire et analgésiques de structures isolées d’organismes marins, et

également les amides diterpèniques cytoxiques de Ryania speciosa .65

A coté de ces propriétés thérapeutiques s’ajoutent d’autres vertus notamment anti-

oxydantes attribuées surtout aux diterpènes phénoliques (rosmanol) à partir du Rosmarinus

officinalis.68

I-II-4-d-Les triterpènes

Les triterpènes sont des composés en C30, issus de la condensation de six molécules

d’isoprène60

, ils forment un groupe important de produits naturels69

. Ces composés et leurs

dérivés sont intégralement biosynthétisés par tous les êtres vivants avec deux exceptions : les

bactéries qui ne les utilisent pas et les insectes qui les empruntent aux plantes souvent de

façon spécifique puis les transforment.70

I-II-4-e-Les stèroïdes

La structure de leur aglycone en C27 dérive uniquement de celle du stérane, il ya pas de

différence fondamentale entre les triterpènes et les stéroïdes, ces derniers pouvant être

considérer comme des triterpènes tétracycliques qui ont perdu au minimum trois méthyles61

.

Ce n’est qu’en 1936 que le terme générique « stéroïdes » est donné à tous les corps chimiques

qui possèdent un noyau (gonane) identique ou très proche de celui des stérols, alors que la

dénomination « stérol » réservée aux seuls hydroxy-3 stéroïdes porteurs d’une longue chaine

en C-17 comme le cholestérol.60

L’intérêt thérapeutique et l’emploi industriel des triterpènes et des stéroïdes en font un

groupe de métabolites secondaires de première importance: par exemple l’intérêt des

sapogénines spirostaniques du sitostérol ou du stigmastérol demeure indispensable pour

couvrir les besoins de l’industrie pharmaceutique en médicaments stéroïdiques (contraceptifs,

anabolisants, anti-inflamatoires).71

68

.L.G. Valdés. J. Psychoactive Drugs.Vol.26. P.277-283, 1994 69

.G. Ourisson et P. Crabbé. Les triterpènes tétracyclyques Paris. Edd.Hermann. P. 194, 1961 70

.H.H. Ress et T.W. Googwin. J.Biochem Soc. Trans. Vol.2. P.1027-1066, 1974 71

.J. Goad. Phytostérols, in «Methods in plant biochemistry, 7, Terpenoids». Editeurs. B.V. Charlwood et D.V.

Banthorpe, Acadimie press. Londres. P.369-434, 1991


29

I-II-4-f-Les stéroles

Les stérols, très répandus dans le monde vivant, se rencontrent aussi bien chez les

bactéries, les champignons, les plantes supérieures, les protozoaires, les métazoaires que chez

les algues.

De point de vue structural, ils se caractérisent par la présence en position 3, en

générale de stéréochimie du noyau cyclopenténophénanthrénique, d’un hydroxyle libre,

éthérifié (glycosides) ou stérifié (stérides : sans intérêt pharmacologique connu), de deux

méthyles en position 10 et d'une chaine carbonée en 17

Matériel Et Méthodes

30

Cette partie est consacrée à l’étude phytochimique et l’extraction des huiles

essentielles de deux plantes médicinales afin de les tester sur des souches bactériennes telles

que : Enterococcus faecalis, Bacillus spizizenil, Salmonella heindelberg, Staphylococcus

auréus, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter

cloacae, et Pseudomonasa aeruginosa et une levure telle que : Condida albicans.

II-I-Matériel

II-I-1-Matériel végétal

Les feuilles d’Inula viscosa et les parties aériennes de rosmarinus officinalis ont été

cueillies durant toute l’année 2009 et en Janvier, Février, Mars, Avril 2010. Les deux plantes

ont été identifiées à partir de la littérature.

Les feuilles d’inula viscosa ont été séchées dans une étuve, à température de 45°C.

Après séchage, les feuilles ont été broyées pour obtenir une poudre fine qui a servi pour la

préparation des extraits.

II-I-2-Équipements

Chromatographie phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG/SM)

CG. L'analyse des huiles essentielles a été effectuée à l'aide d'un chromatographe Varian CP-

3380, muni d'un détecteur à ionisation de flamme équipé d'une colonne capillaire en silice

fondue de 30 m × 0.25 mm, de type DB1. La programmation de température va de 50 à

200 °C, avec un gradient de 5 °C/min. Les températures d'injection et de détection sont

respectivement de 220 et 250 °C. Le gaz vecteur est l'azote, avec un débit de 0.8 ml/min. Les

indices de rétention des constituants sont calculés par comparaison des temps de rétention

avec ceux d'une série d'alcanes et le pourcentage de chaque constituant dans l'huile est

déterminé par l'intégrateur électronique.

CG/SM. Le couplage a été effectué sur un appareil Hewlett-Packard de type 5970, équipé

d'une colonne capillaire en silice fondue de 30 m × 0.25 mm de type DB1 (30 m × 0.25 mm),

opérant sous pression d'hélium avec un débit de 0.6 ml/min, et muni d'un détecteur sélectif

quadripolaire, dans lequel le potentiel d'ionisation est fixé à 70 eV. La programmation de

température va de 70 à 200 °C, avec un gradient de 10 °C/min. Les températures d'injection et

de détection sont respectivement de 180 et 210 °C.


31

La combinaison de ces deux techniques d’analyse CPG/SM permet de séparer les composants

de l’échantillon et d’identifier chaque composant, donc de faire une analyse complète aussi

bien qualitative que quantitative du produit à analyser.

Chromatographie sur couche mince(CCM)

La chromatographie sur couche mince est une technique qualitative de séparation des

constituants d’un mélange de produits.

10 mg de chaque extrait ont été dissous dans 1 ml de solvant approprié. Les extraits

apolaires ont été dissous dans leur solvant d’origine. Les extraits polaires ont été repris avec 1

ml du mélange méthanol/eau (1:1). Nous avons déposé 3 μl de chaque extrait à l’aide d’une

micropipette sur les plaques préparées de silice 60GF254, d’épaisseur 0.25 mm. Les plaques

ont été séchées et observées à la lampe UV à 254 et 366 nm, ensuite révélées par différents

révélateurs.

Les systèmes de migration utilisés sont regroupés dans le tableau suivant

Métabolites secondaires Système de migration

(Eluant)

Proportion

Les huiles essentielles Éther/éther de pétrole 2 :5

Les flavonoïdes CHCl3/MeOH 3 :1

Les coumarines Toluène / AcOEt 2 :1

II-I-3-Les réactifs

Réactif de Valser - Meyer

Iodure de potassium …………..25 g

Chlorure mercurique ………….6.77 g

Eau distillée …………………...250 cc

Réactif de Dragendorff

Nitrate de Bismuth …………....20.80 g

Iode …………………………...38.10 g

Iodure de sodium anhydre …….200 g

Eau distillée …………………...600 cc


32

Agiter pendant 30 mn

Réactif de Bouchard

Iode……………………………2 g

Iodure de potassium…………...2 g

Eau distillée…………………...100 ml

Réactif de Neu

2-aminoéthyl borinate…………1.50 g

Polyéthyléne glycol……………2.50 g

Méthanol……………………….50 ml

Ethanol…………………………50 ml

Vanilline

Vanilline……………………….1g

Méthanol……………………….50ml

II-I-4-Les souches bactériennes

L’activité antimicrobienne de deux huiles essentielles, extraites à partir des deux

plantes étudiées, a été réalisée au niveau du laboratoire de microbiologie de l’université

Istambouli, Mascara vis-à-vis de neufs souches bactériennes Gram+

et Gram- (Enterococcus

faecalis, Bacillus spizizenil, Salmonella heindelberg, Staphylococcus auréus, Klebsiella

pneumoniae, pseudomonas eruginosae, Escherichia coli, pseudomonas eruginosae et

Enterobacter cloacae) et une levure (Candida albicans). Ces souches utilisées sont largement

rencontrées dans diverses pathologies, chez l'homme.

II-II-Méthodes

II-II- 1-Les huiles essentielles

II-II-1-a-Extraction

Les huiles essentielles de chaque plante ont été extraites par un système

d’hydrodistillation. Il s’agit d’une distillation continue en circuit fermé pendant un temps

suffisant pour entraîner la totalité de l’huile essentielle, contenue dans la drogue. L’huile

volatile est entraînée par la vapeur d’eau.


33

Le mélange obtenu pour chaque plante est soumis à une extraction liquide-liquide.

Cette opération a été reprise trois fois au total. Les phases organiques sont réunies et séchées

sur du sulfate de sodium anhydre (Na2SO4), puis filtrées.

L’évaporation à sec nous a permis d’obtenir un mélange de produits volatils très

condensé qui va servir à l’analyse et la caractérisation. L’huile essentielle obtenue est

conservée au réfrigérateur à 4°C.

La détection des huiles essentielles se fait par la méthode chromatographique en

utilisant la vanilline comme révélateur.

La teneur en huile essentielle en pourcentage est donnée par la formule (1)

H.E(%)= (m /m0) x100……….. (1)

Avec :

m= masse, en gramme, de l’huile essentielle

m0= masse, en gramme, du matériel végétal de départ

Figure 01 : dispositif d’hydrodistillation


34

II-II-1-b-Analyses

Deux types d’analyse ont été réalisés

Les premiers servent à identifier les différents constituants d’une huile essentielle, afin

de connaitre la composition chimique, la nature et la proportion des divers

constituants.

La deuxième série d’analyses a pour objet de déterminer les caractéristiques physico-

chimiques des huiles essentielles (densité, indice d’acide, indice d’ester, pouvoir

rotatoire, etc).

Ces caractéristiques sont propres à chaque essence et peuvent décrire l’huile

essentielle. Elles permettent d’obtenir les critères de qualité nécessaire à la commercialisation.

II-II-1-b-1-Identification et composition chimique

L'identification des constituants de deux échantillons a été faite sur la base de la

comparaison de leurs indices de rétention et spectres de masse avec ceux des composés de

référence72

73

74

de la littérature, en utilisant la CG /SM.

II-II-1-b-2-Propriétés physico-chimiques

Propriétés physiques

a-Densité

La densité relative à 20°C d’une huile essentielle est le rapport de la masse d’un

certain volume d’huile essentielle à 20°C (m), à la masse d’un même volume d’eau distillée à

20°C (m’).

Mode opératoire

On détermine la masse relative au pycnomètre vide (m0), au pycnomètre+ eau distillée

(m1) et au pycnomètre + échantillon (m2) à l’aide d’une balance précise.

La température de mesure est 20°C. Elle est donnée par la formule (2)

72

. W .Jennings, T.Shibamoto . Qualitative Analysis of Flavor and Fragance Volatiles by Capillary Gas

Chromatography. Academic Press. New York, 1980. 73

. RP.Adams. Identification of Essential Oil by Gas Chromatography/ Quadrupole Mass Spectrometry.

Allured, Carol Stream, 2001. 74

L. Gachkar, D. Yadegari, M. Bagher Rezaei, M.Taghizadeh, S.Alipoor Astaneh et I. Rasooli.

J.Food.Chem.Vol.102.898–904,2007.


35

d20

=

=

–

– ………. (2)

b-Indice de réfraction

L’indice de réfraction d’une substance est le rapport entre le sinus de l’angle

d’incidence et le sinus de l’angle de réfraction d’un rayon lumineux monochromatique (raie D

du sodium) qui traverse la substance à une température constante de 20°C.

Mode opératoire

On détermine l’indice de réfraction nD20

par la lecture directe sur un réfractomètre

d’Abbe classique.

Après nettoyage des surfaces du prisme et étalonnage de l’appareil, on dépose à l’aide

d’une pipette 2 gouttes d’huile essentielle au milieu du prisme.

On observe dans l’oculaire 2 plages, une sombre et une claire séparée par une bande

plus au moins irisée ; l’intersection du réticule sur la ligne de séparation est amenée par le

bouton de droite, puis les irisations sont supprimées. La valeur est indiquée par l’échelle de

lecture.

c-Pouvoir rotatoire

C’est la propriété de certaines substances de faire tourner le plan de polarisation de la

lumière.

Mode opératoire

On a utilisé un polarimètre avec une lampe à sodium (raie jaune de longueur d’onde

589nm) et une cellule de longueur 1 dm, remplie d’huile essentielle dans l’éthanol à raison de

0,2g dans 100ml. L’angle de rotation est lu directement sur l’appareil.

La valeur de D20

est calculée à l’aide de la relation de Biot (3):

D20

.......... (3)

Avec : valeur lue sur l’appareil en millidegré.

L : épaisseur du film en dm.

C : concentration de l’huile essentielle exprimée en g/ml.


36

Propriétés chimiques

a-Indice d’acide

L’indice d’acide(Ia) est le nombre de milligrammes d’hydroxyde de potassium

nécessaire à la neutralisation des acides libres contenus dans 1 g d’huile essentielle.

Mode opératoire

On introduit 2 g de l’huile essentielle dans un ballon de 100 ml. On ajoute 5 ml de la

solution éthanolique de potasse neutralisé et 5 gouttes au maximum d’indicateur, soit la

solution de phénol phtaléine. On titrer le liquide avec la solution d’hydroxyde de potassium

contenue dans la burette. Poursuivre l’addition jusqu’à obtention du virage de la solution

persistant pendant 30 sec. On note le volume de solution d’hydroxyde de potassium utilisé.

Mettre en réserve le ballon et son contenu pour la détermination de l’indice d’ester.

Préparation de la solution éthanolique de potasse

On dissout 3g de potasse dans 5ml d’eau et on complète à 100ml avec de l’alcool

exempt d’aldéhyde. On laisse la solution se décanter.

Préparation de l’alcool exempt d’aldéhyde

On mélange 1200ml d’éthanol avec une solution de 2g de nitrate d’argent AgNO3 dans

5ml d’eau. On ajoute une solution refroidie de 5g de potasse dans 10ml d’eau. On agite et on

laisse décanter pendant quelques jours. Au moment de l’emploi, on filtre et on distille.

L’indice d’acide est calculé par l’expression (4)

Ia= 5.61 V/m………. (4)

Avec V : volume versé de la solution éthanolique (en ml).

m : masse en gramme de l’huile essentielle.

b-indice d’ester

L’indice d’ester (Ie) exprime le nombre de milligrammes de potasse (KOH) nécessaire

pour neutraliser les acides libérés, par l’hydrolyse, en milieu basique des esters contenus dans

1g d’huile essentielle.


37

Mode opératoire

Cette détermination est effectuée sur la solution provenant de la détermination de l’indice

d’acide. On ajoute 25 ml de la solution d’hydroxyde de potassium ainsi que des fragments de

pierre ponce dans le ballon provenant de la détermination de l’indice d’acide. On adapte le

réfrigérant à reflux au ballon, et on le place ensuite sur le manteau chauffant. On maintient le

ballon sur le manteau chauffant pendant une heure en position. On laisse refroidir le ballon et

démonter le tube. On ajoute 20 ml d’eau, puis cinq gouttes de solution de phénol phtaléine.

On titre l’excès d’hydroxyde de potassium avec la solution d’acide chlorhydrique. Un essai à

blanc est effectué au même temps. L’indice d’ester est calculé à partir de la relation (5).

e

(V0- V1). Ia ………. (5)

Avec V0 : volume de la solution HCl versée pour l’essai à blanc.

V1 : volume de la solution HCl versée pour calculer l’indice d’acide.

m : masse en gramme de l’huile essentielle utilisée.

Ia : indice d’acide déjà calculé.

c-indice d’iode

L’indice d’iode (Ii) est le nombre qui exprime en grammes la quantité d’iode

susceptible d’être fixée par 100g de substance. Sa mesure permet d’évaluer le nombre de

doubles liaisons présentes.

Mode opératoire

On solubilise dans un erlen1g d’huile essentielle dans 20ml de tétrachlorure de

carbone (CCl4), puis on ajoute à l’aide d’une burette 25ml d’une solution d’iode normale,

20ml de solution d’iodure de potassium (KI) à 5% et 20ml d’eau distillée.

On titre l’excès d’iode de la solution formée par une solution de thiosulfate de sodium

Na2S2O3 0.1 N en présence d’empois d’amidon. On effectue en même temps un essai à blanc.

L’indice d’iode est calculé à partir de la relation (6).

Ii=

………. (6)


38

Avec m : masse en gramme d’huile essentielle.

V1 : volume en ml de thiosulfate mesuré pour calculer l’indice d’iode.

V0 : volume en ml de thiosulfate mesuré pour l’essai à blanc.

II-II-1-c-Activité antimicrobienne

Nous avons testé l’effet antimicrobien de deux huiles essentielles (Inula viscosa et

Rosmarinus Officinalis) sur la croissance de neufs souches bactériennes et une souche

fongique.

Deux méthodes de diffusion de la substance antimicrobienne ont été réalisées ; la

méthode des puits et la méthode des disques (méthode d’antibioaromatogramme).

La méthode des puits

Cette méthode repose sur la diffusion de la substance inhibitrice dans des puits creusés

dans une gélose contenant dans sa masse une souche indicatrice (souche bactérienne ou

fongique).

Un volume de 200l d’une culture de 48h de la souche indicatrice est mélangé avec

7ml de gélose molle (0.6 % d’agar) en surfusion à 45°C, et coulés dans une boite de Pétri.

Après solidification, des puits de 5mm de diamètre sont creusés dans la gélose à l’aide d’une

cloche de Durham stérile. Les boites sont ensuite séchées, à température ambiante, pendant

10min avant que les puits soient remplis de la substance inhibitrice. Les boites sont incubées

pendant 24 à 72h à 28°C.

La méthode d’antibioaromatogramme

Un volume de 0.2ml de la suspension bactérienne ou fongique de 48h d’incubation

est étalé à la surface de la gélose, puis on dépose stérilement les disques de papier filtre

(0.cmà la surface. Après incubation à 28°C pour les champignons et 37°C pour les

bactéries citées pendant 24h, des zones d’inhibition peuvent être observées autour des

disques.


39

Lecture des résultats

L’activité antimicrobienne se manifeste par l’apparition d’un halo d’inhibition de la

croissance microbienne autour du puits contenant la substance inhibitrice testée et autour des

disques imprégnés de la substance inhibitrice. Le résultat de cette activité est exprimé par le

diamètre de la zone d’inhibition. Il existe un seuil de 15 mm ; si le diamètre de l’halo est

inférieur à 15 mm, la souche est considérée comme résistante au-delà la souche est considérée

comme sensible

II-II-2-Étude phytochimique de l’Inula viscosa

Ces réactions faciles à réaliser, rapides, permettent la mise en évidence de certaines

classes de substances chimiques (alcaloïdes, flavonoïdes, coumarines, saponosides...) en

faisant apparaître soit une coloration, soit une précipitation, dont l'intensité permet en outre

d'avoir une idée sur la concentration en principes actifs. Elles sont adaptées pour des

constituants présents en quantité importante et servant de marqueur ou de traceur.

Recherche des flavonoïdes

Recherche qualitative

3g de matériel végétal sec et broyé est extrait avec 50 ml de MeOH 80 %. Après

agitation (30 min) et sonication (30 min), l’extrait est filtré et soumis à une CCM, le solvant

de migration étant CHCl3 /MeOH. La révélation se fait à 365 nm après pulvérisation avec le

réactif de Neu.

Remarque

En CCM, la poudre contenait une grande quantité de chlorophylle ce qui rend

difficile la lecture des plaques et la présence des taches colorées.

Elimination de chlorophylle

Cette opération est réalisée par une simple macération de la poudre végétale dans

50ml d’hexane pendant 24 heures. L’hexane est évaporé et la poudre récupérée.

On refait le test, utilisant le nouvel extrait.


40

Figure 02 : CCM de la détection des flavonoïdes

Réaction à la cyanidine

Elle a pour but de mettre en évidence la présence de flavonoïdes présents dans

l’infusé.

Principe :

En solution alcoolique et en présence d’hydrogène naissant, par action de l’acide

chlorhydrique sur du magnésium, les flavonoïdes donnent une coloration rouge-orangée

allant au violet.

Mode opératoire

A 5mL de l’infusé, on ajoute 5ml d’alcool chlorhydrique (éthanol-eau, distillée-acide

chlorhydrique concentré en parties égales en volume), 1ml d’alcool iso-amylique puis

quelques copeaux de magnésium. L’apparition d’une coloration:

-rose-orangée indique la présence de flavones ;

-rose-violacée indique la présence de flavanones ;


41

-rouge indique la présence de flavonols, flavanonols. Cette réaction indique la

présence d’un flavonoïde libre (génine).

Recherche des anthocyanes

L’addition de l’acide chlorhydrique concentré à l’extrait dilué à 10 % donne une

coloration rouge en présence des anthocyanes.

Recherche des leucoanthocyanes

L’infusé est traité par un volume égal d’alcool chlorhydrique : éthanol- HCl (50 :50).

Après quelques minutes au bain-marie bouillant, l’apparition d’une coloration rouge indique

la présence des leucoanthocyanes .

Recherche des coumarines :

Test de détection :

2 g de matériel végétal en poudre sont mélangés à 10 ml de CHCl3. Après un

chauffage de quelques minutes et une filtration, l’extrait chloroformique est soumis à une

CCM, le solvant étant le mélange toluène / AcOEt. La visualisation du chromatogramme,

après migration, se fait à 365 nm, en absence et en présence de NH3.

Test de confirmation

1 g de poudre végétale est placé dans un tube, en présence de quelques gouttes d’eau.

Les tubes sont recouverts avec du papier imbibé de NaOH dilué et sont portés à ébullition.

Toute fluorescence jaune témoigne de la présence de coumarines après examen sous UV.

Recherche des Tanins

Introduire 5ml d’infusé dans un tube à essai. Ajouter 1ml de FeCl3 à 1 %. En présence

de tanins, il se développe une coloration verdâtre ou bleu- noirâtre. La présence de tanins

catéchiques est caractérisée par addition, à 5ml d’infusé, d’un ml d’acide chlorhydrique

concentré. Porter à l’ébulition pendant 10minutes. Il apparaît un précipité rouge soluble

dans l’alcool isoamylique. La différenciation des tanins catéchiques et galliques est obtenue

par la réaction de Stiasny. A 30ml d’infusé à 5 %, ajouter 15 ml de réactif de Stiasny (10 ml

de formol à 40 % + 5 ml d’acide chlorhydrique concentré), puis chauffer au bain marie


42

pendant 15 à 30 minutes. L’obtention de précipité montre la présence de tanins catéchiques.

Filtrer et saturer 10ml de filtrat avec l’acétate de sodium pulvérisé.

Ajouter 1ml d’une solution de FeCl3 à 1 %. Le développement d’une teinte-noire

indique la présence de tanins galliques non précipités par le réactif de Stiasny.

Les tanins peuvent être également précipités par addition de gélatine à 1% à l’infusé.

Recherche des quinones

Un gramme de matériel végétal sec est broyé et placé dans un tube avec 15 à 30 ml

d’éther de pétrole. Après agitation et un repos de 24 h, l’extrait est filtré et concentré au

rotavapor.

La présence de quinones libres est confirmée par l’ajout de quelques gouttes de NaOH

1/10, lorsque la phase aqueuse vire au jaune, rouge ou violet.

Recherche des saponosides :

La présence des saponosides est confirmée par le calcul de l’indice de mousse.

Faire un décocté à 1 %, filtrer et ajuster à 100ml après refroidissement. Dans une série

de10 tubes à essai numérotés de 1 à 10, répartir successivement 1, 2 …..10 ml de décocté.

Ajuster le volume de chaque tube à 10ml avec de l´eau distillée.

Agiter chaque tube dans le sens de la longueur pendant 15 secondes à raison de deux

(2) agitations par seconde. Laisser reposer 15mn et mesurer la hauteur de la mousse de

chacun des tubes. Le tube dont la hauteur est de 1cm indique la valeur de l´indice de mousse,

l’indice de mousse est déduit de la relation (7).

Indice de mousse=

………. (7)


43

Recherche des alcaloïdes :

Pour la recherche des alcaloïdes, on doit recourir à quelques réactions de

précipitation :

A 2g de matériel végétal en poudre, on ajoute 100 ml de méthanol à 50%. On filtre et

on repartit dans des tubes à essai et on ajoute dans chaque tube un millilitre de chacun de

réactifs suivants :

Réactif de Bouchardat (iodo – ioduré) : précipité brun

Réactif de Valsner Mayer (mercuri –iodure de potassium) : précipité blanc jaunâtre

Réactif de Drangendroff (iodobismuthite de potassium) : précipité orangé à rouge

Recherche des terpènes et stérols :

4 g de la plante pulvérisée sont extraits par 20 ml de méthanol pendant 15 min. Après

filtration et évaporation, 1 mg de l’extrait alcoolique est solubilisé dans quelques gouttes

d’acide acétique additionné de 3ml du mélange (anhydride acétique – acide sulfurique

concentré 50/1). Une coloration verte apparaît, en cas de présence de ces composés.

Résultats Et Discussion

44

III-1-Les huiles essentielles

III-1-1-Rendement et composition chimique

a-Rendement : Les calculs des rendements des huiles essentielles de deux plantes et en deux

états : un état sec et un état frais sont rapportés dans le tableau suivant

Tableau 1 : rendements des huiles essentielles des deux plantes sèche et fraiche.

Il est très nécessaire de savoir d’où provient la rentabilité d’une huile essentielle. Ceci

ne peut se faire que par une analyse chromatographique très détaillée de leurs différents

constituants.

b-Composition chimique et analyse chromatographique par CG/MS des huiles essentielles

de deux plantes:

L’identification des produits a été faite en comparant leurs indices de rétention et

spectres de masse avec ceux des composés de référence de la littérature emmagasinés dans la

base de données de l’appareil. En effet, 98.88% de la composition chimique de l’huile

essentielle d’Inula Viscosa et 90,20% celle de Rosmarinus Officinalis ont été déterminées.

Inula viscosa :

Les analyses chromatographiques des huiles essentielles de la plante I. viscosa par

CG/MS ont permis d’identifier 33 composés. Elles montrent la présence de deux produits

majoritaires : acétate de bornyl (39,81%), Bornéol (25,60%). A côté de ces constituants, on

note la présence -Selinène (3,52 %), -Cadinol (3,56%), -Cypérone (4,2%). Ces résultats

concordent aux ceux trouvés dans la littérature75 76

voir tableau 2

75.M.Blanc, C.Muselli, P.Bradesi et J.Casanova. J.Flavour and Flagrance. Vol. 19.314-319, 2004. 76.B. Morongiu, A.Piras, F.Pani, S.Porcedda et M.Ballero. J. Flavour and Flagrance. Vol. 18.505-509, 2003.

Plantes

Inula Viscosa Rosmarinus Officinalis

fraiche sèche fraiche sèche

Rendement(%) 0,24 0,32 5,60 8,13


45

Tableau 2 : composition chimique de l’HE de l’Inula viscosa

N° Pic Composés Pourcentage IK

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

- thujene

- pinène

camphene

pinène

-3- carène

Myrcène

phellandrène

terpinène

p- cymène

Terpinolène

Tridecane

Camphor

Linalool

Bornyl acétate

Terpinen-4-ol

Hexadecane

-Terpinéol

Bornéol

Bisabolène

Selinène

Carvone

Pepiritone

Cadinène

Eicosane

Cadinol

Murolol

Thymol

Carvacrol

-Cadinol

-Cyperone

Pentacosane

Heptacosane

Octacosane

0,05

t

0,18

1,23

t

0,94

1.60

0,92

0,41

0,18

0,60

1,41

2.30

39,81

0,19

0,64

4,20

25.6

3,24

3,52

0.9

0.2

0.1

t

3.56

0.6

0.3

0.7

0.5

4.2

0.2

0.5

0.7

935

939

944

172

1010

1030

1002

1011

1015

1078

1302

1118

1081

1281

1152

1592

1171

1143

1488

1483

1216

1226

1508

2000

1628

1638

1264

1273

1640

1724

2490

2710

2805


46

o

o

H

OH

O

Acétate de bornyl Bornéol -Cyperone

H H

HO

-Selinène -Cadinol

Spectre CG /SM de l’huile essentielle de la plante Inula viscosa

Rosmarinus Officinalis :

Quatorze constituants ont été identifiés dans l'extrait au dichlorométhane. L’huile est

constituée principalement d’ Eucalyptol (25%) qui est le constituant majeur dans le concentré

suivi de 1H-Indène, 1-éthylidèneoctahydro-, trans- (18%), de Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one,

1,7,7-trimethyl-, (1R)- (15%) qui est de même ordre avec le 2(10)-Pinen-3-one, ( -, de

Bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one, 4,6,6-triméthyl-, (1S)-(6,9%) et de 2-Cyclohexen-1-ol, 2-

méthyl-5-(1-méthylethenyl)-, cis- (5,6%) voir tableau 3


47

Tableau 3 : composition chimique de l’HE de Rosmarinus officinalis

O

H H

Eucalyptol 1H-Indene, 1-éthylideneoctahydro-, trans-

O

Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-triméthyl-, (1R)- 2(10)-Pinen-3-one, ( -

N° Pic Composés Pourcentage

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

Eucalyptol

Linalool

Campholenal

Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1R)-

2(10)-Pinen-3-one, ( -

Bornéol

3-Cyclohexen-1-ol, 4-méthyl-1-(1-méthyléthyl)-

3-Cyclohexene-1-méthanol, 4-triméthyl-

3-Cyclohexene-1-méthanol, 4-triméthyl-

1H-Indene, 1-ethylideneoctahydro-, trans-

Bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one, 4,6,6-triméthyl-, (1S)-

2-Cyclohexen-1-ol, 2-méthyl-5-(1-méthyléthenyl)-, cis-

Ethanol, 2-(3,3-diméthylcyclohexylidene)-, (Z)-

exo-Bornyl acetate

25

t

0,28

15,02

15,02

0,56

0,9

0,28

1,12

18,7

6,9

5,6

0,56

0,28


48

O

H

OH

Bicyclo[3.1.1]hept-3-en-2-one, 2-Cyclohexen-1-ol,

4,6,6-triméthyl-, (1S)- 2-méthyl-5-(1-méthyléthenyl)-, cis-

Spectre CG /SM de l’huile essentielle de la plante Rosmarinus Officinalis

Les résultats ont montré que les huiles extraites à partir des organes de la plante sèche

ont donné de meilleurs rendements par à rapport à celles extraites à partir de la plante fraîche.

Le rendement d'extraction obtenu avec la partie aérienne de Rosmarinus Officinalis est

largement supérieur à celui obtenu à partir des feuilles de l’Inula Viscosa. Par contre, le

rendement obtenu avec l’inula Viscosa est relativement faible par rapport a certains trouvés

par des autres auteurs utilisant un autre dispositif « Clevenger » à partir de certains genre

d’Inula. 77

78

et on note que le rendement de l’huile essentielle extraite à partir le Rosmarinus

Officinalis est supérieur à celui trouvé par d’autres auteurs utilisant le même dispositif79

Les deux plantes présentent un rendement en huile essentielle très faible. Il a fallu

plusieurs hydrodistillations pour obtenir une quantité à analyser. Cette faible teneur serait

probablement due à l'âge de la plante, au mode d’extraction, à la période et à l'endroit de

récolte sans négliger la nature même de ces plantes aromatiques.

77

. O.Danino, H.E. Gottlieb, S.Grossman et M.Bergman. J. Food Research Inter, 2009. 78

. V.Hernandez, M.Recio, S.Manez, R.Giner et J.Rios. J. Sci.dir.Vol.81(6). 480-488, 2007. 79

. A. Angioni, A. Barra, E. Cereti, D. Barile, J. D. Coisson, M. Arlorio, S. Dessi,V. Coroneo et P. Cabras. J.

Agric. Food Chem. Vol. 52. 3530-3535, 2004.



49

II-I-2-Propriétés

Les deux plantes sont aromatiques donc contiennent des huiles essentielles. Le

contrôle de l’utilité de ces huiles essentielles dans la pharmacopée et leur conformité aux

normes internationales est indispensable. Il est donc très intéressant de faire ce contrôle et de

vérifier leurs propriétés.

a-Propriétés organoleptiques

Plantes Aspect Couleur Odeur

Inula Viscosa Limpide, claire et

visqueux

Jaune-brune Désagréable, attirant et

persistant

Rosmarinus

Officinalis

liquide limpide, fluide et

mobile

incolore à

jaune

Agréable, attirant et

persistant

Tableau 4 : propriétés organoleptiques des deux huiles essentielles extraites

b-Propriétés physico-chimiques

Les résultats des différentes propriétés physico-chimiques sont regroupés dans le tableau

suivant.

Caractéristiques Physico-chimiques Inula viscosa Rosmarisus officinalis

Densité 0,651 1,001

Indice de réfraction 1,5061 1,4802

Pouvoir rotatoire - 3,5 - 5,4

Indice de l’acide 6,54 33,66

Indice d’ester 24,31 46,83

Indice de saponification 30,85 80,49

Indice d’iode 6,73 2,67

Tableau 5 : Résultats des caractéristiques physico-chimiques de deux huiles essentielles

extraites à partir de deux plantes


50

Huile

essentielle

Densité Indice de

réfraction

Pouvoir

rotatoire

Indice

d’acide

Indice

d’ester

Indice de

saponification

Indice

d’iode

Ruta montana 0,82 1,6329 -7,52 3,64 24,41 28,05 4,23

Lippia

multiflora

(fleur)

0,8790 1,4710

Lippia

multiflora

(feuille)

0,8808 1,4790

Cymbopogon

citratus 0,8713 1,4805

Cymbopogon

nardus 0,8783 1,4710

Cymbopogon

giganteus 0,8753 1,4880

Pimenta

racemosa 0,942 1,5120 - 19,15 7,39 33,75 41,14 21,69

Chromolaena

odorata 0,910 1,5046 -33,50 15,62 21,00 36,62 15,56

Tableau 5: Résultats des caractéristiques physico-chimiques des huiles essentielles extraites à

partir d’autres plantes

I-3-Résultats microbiologique

I-3-1-Inula viscosa

N° Les souches 0.5 01 1.25 1.5 1.75 02 2.25 2.5 2.75 03 3.25 3.5 3.75 04

B1 Entero. faecalis + + + + + + + + + + - - - -

B2 Bacilluss spizizenil + + + + + + + + + + + + + +

B3 Salmonella

heindelberg

+ + + + + + + + + + + - - -

B4 Staphylo. aureus + + + + + + + - - - - - - -

B5 Klebsiella

pneumoniae

+ + + + + + + + + + + + + +

B6 Escherichia coli + + + + + + + + + + + + + +

B7 Pseudomonas

aeruginosa

+ + + + + + + + + + + + + +

B8 Enterobacter cloacae + + + + + + + + + + + + + +

B9 Pseudomonasa

eruginosae

+ + + + + + + - - - - - - -

L1 Condid albicans + + + + + + + + + + + + + +

Tableau 6 : les effets anti-microbiens de l’huile essentielle des feuilles d’Inula viscosa à des

différentes concentrations en utilisant la méthode du contact directe.


51

Plusieurs méthodes ont été réalisées pour les deux extraits sur neufs souches

bactériennes et une levure.

Le test microbiologique a montré que la méthode des puits n’a donné aucun effet

inhibiteur de la croissance bactérienne, tandis que la méthode de l’antibio-aromatogramme a

donné des résultats positifs avec des CMIs importantes contre Pseudomonas aeruginosae (2,5

g/ml), Staphylococcus auréus (2,5 g /ml), Salmonella heindelberg (3,5 g /ml) et

Enterococcus faecalis (3,25 g /ml). Par contre, la levure candida albicans, et les autres

souches bactériennes testées n’ont montré aucune sensibilité aux huiles essentielles des

feuilles d’Inula viscosa.

I-3-2-Rosmarinus Officinalis

N° Les souches 0.5 01 1.25 1.5 1.75 02 2.25 2.5 2.75 03 3.25 3.5 3.75 04

B1 Entero. faecalis + + - - - - - - - - - - - -

B2 Bacilluss spizizenil + + + + + + - - - - - - - -

B3 Salmonella

heindelberg

+ + + + + + + + + + + + - -

B4 Staphylo. aureus + + - - - - - - - - - - - -

B5 Klebsiella

pneumoniae

+ + + + + + + + + + + + + -

B6 Escherichia coli + + + + + + + + + + + + + +

B7 Pseudomonas

aeruginosa

+ + + + + + + + + + + + + +

B8 Enterobacter cloacae + + + + + + + + + + + + + -

B9 Pseudomonasa

eruginosae

+ + + + + + + + - - - - - -

L1 Condid albicans + + + + + + + + + + - - - -

Tableau 7 : résultats de CMI de l’huile essentielle de la partie aérienne de Rosmarinus

Officinalis vis-à-vis de différentes souches bactériennes.

Les résultats de CMI de toutes les souches vis-à-vis des concentrations de l’huile

essentielle de la parties aérienne de Rosmarinus Officinalis utilisé dans cette analyse ont

montré que les souches les plus sensibles est l/ml pour les souches : enterococcus

faecalis et Staphylococcus auréus, une CMI de 120 l/ml pour bacillus spizizentil, 140 l/ml

pour pseudomonas eruginosae (B9) 200 l/ml pour Salmonella heindelberg, Klebsiella

pneumoniae, Escherichia coli, et Enterobacter cloacae ; pour Pseudomonasa eruginosae (B7)

la CMI est de 300 l/ml. La levure Condida albicans a une CMI de 150 l/ml.


52

II-Etude phytochimique sur les feuilles d’inula viscosa

Le screening phytochimique, effectuée sur la plante I. viscosa, ont donné les résultats

reportés dans le Tableau suivant.

Principes actifs Tests effectués Résultats

Les alcaloïdes Dragendorff

Valsner-Mayer

Bouchardat

+ + +

- - -

+

Les coumarines CCM

NaOH +

Les polyphénoles :

Les flavonoides

Les tanins

Les antocyanes

Les leucoantocyanes

Les quinones

CCM

Réaction de cyanidine

FeCl3

HCl(conc)

EtOH-HCl

NaOH

+ + +

+ + +

+ + +

-

-

les terpénes et stérols CH3COOH-H2SO4 (conc) + +

Les saponines Indice de mousse +

Tableau 8 : résultats de screening phytochimique effectué sur les feuilles d’inula viscosa

Les essais phytochimiques, effectués sur les extraits des feuilles sèches d’I. viscosa,

ont révélé la présence de coumarines, de flavonoïdes, de tanins, de terpénes, de stérols et de

saponosides. Les composés les plus abondants dans la plante sont surtout les flavonoides et

les saponosides. Les tests de recherche de dérivés anthracéniques, d’anthocyanes et de

quinones ont été négatifs sur nos échantillons.


53

Conclusion

Les résultats obtenus montrent que les deux plantes qui sont très répondues et qui

poussent d’une manière aléatoire dans la région d’Oran notamment l’Inula viscosa sont

aromatiques donc riches en huiles essentielles et le mode d’extraction joue un rôle très

important dans le rendement dont les principaux constituants de ces huiles essentielles sont en

majorité terpéniques.

Le contrôle de leurs propriétés physico-chimiques pourrait favoriser leurs utilisations

dans les produits cosmétiques.

A des concentrations bien déterminées l’huile essentielle extraite à partir de l’Inula

viscosa a montré une activité antibactérienne contre quelques bactéries testées telles que :

Entero faecalis, Salmonella heindelberg, Staphylo aureus et Pseudomonasa eruginosae et

l’huile essentielle extraite à partir du Rosmarinus Officinalis a montré une activité inhibitrice

contre quelques bactéries telles que : Enterococcus faecalis, Bacillus spizizenil, Salmonella

heindelberg, Staphylococcus auréus, Enterobacter cloacae et une levure testée telle

que : Candida albicans.

Conclusion

54

Conclusion et perspectives

Dans le cadre de la valorisation des plantes médicinales Algériennes nous avons pu

faire une enquête sur l’utilisation traditionnelle et l’effet thérapeutique de deux plantes

médicinales largement répandues dans la région d’Oran « Inule visqueuse et Rosmarinus

Officinalis » en procédant à une recherche bibliographique approfondie sur les deux plantes

de différentes régions, pour qu’on puisse les prendre comme repère et comparer nos résultats

car il est indispensable de définir rigoureusement l’identité et la qualité de la drogue qui sert a

la préparation des médicaments.

L’analyse qualitative et quantitative des différents constituants des huiles essentielles

utilisant la chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectroscopie de masse (CG/MS)

et leurs propriétés physico-chimiques définissent l’identité de l’essence ; ces données

permettront de contrôler la qualité de l’essence afin de l’insérer dans la pharmacopée.

Les résultats de l’activité biologique montrent que les deux huiles essentielles à une

concentration bien précise ont exercé un effet synergique contre les souches bactériennes. Ce

qui nous amène à dire que nos huiles ont une activité antibactérienne sur certaines bactéries

testés. Par contre seule l’huile extraite à partir de Rosmarinus Officinalis possède en plus de

l’activité antibactérienne une activité antifongique contre une levure qui est la Condida

albicans.

De plus, l’étude phytochimique de la poudre végétale de l’Inula viscosa nous a permis

de détecter quelques métabolites secondaires tels que : les coumarines, les flavonoïdes, les

tanins, les terpénes, les stérols et les saponosides dont nous nous proposons ultérieurement de

les isoler et les identifier.

Annexes

55

Spectres CG/MS caractéristiques des différents constituants des deux

huiles essentielles

1.Inula Viscosa

Annexes

56

Annexes

57

Annexes

58

Annexes

59

2.Rosmarinus Officinalis

Annexes

60

Annexes

61

Annexes

62

Entero. faecalis

Figure 03 : Activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’Inula Viscosa par la méthode de

contact direct. Le nombre dans chaque figure signifie une concentration;

1): 2.0, 2): 2.5, 3): 3.5, 4): 4.0 (g/ml)

Pseudomonas aeruginosa

1

2

4

Salmonella heindelberg

4

2

1

3

Staphylo. aureus

2

4

3

1

2

1

4 3

3

Résumé

Le rendement, la composition chimique, les propriétés antibactériennes et

antifongiques des huiles essentielles extraites à partir de deux plantes médicinales de la flore

d’Algérie et qui sont très répandues dans la région d’Oran Inula viscosa et Rosmarinus

Officinalis, ont été étudiés. La teneur moyenne en huile essentielle des feuilles d’Inula

Viscosa et la partie aérienne de Rosmarinus Officinalis sont respectivement 0,32 %, 8,13%

par rapport à la matière sèche des deux plantes. Trente trois composés ont été identifiés par

CG/MS ; l’acétate de bornyle (39,81%) et le Bornéol (25,60 %) constituent les principaux

composés de l’huile essentielle d’IV. Par contre, quatorze composés ont été identifiés à partir

de la partie aérienne de RM par CG/MS dont les composants majoritaires sont : Eucalyptol

(25%), 1H-Indene, 1-ethylideneoctahydro-, trans-(18%) et le Bicyclo[2.2.1]heptan-2-one, 1,7,7-

trimethyl-, (1R)- (15%) qui est en même quantité avec le 2(10)-Pinen-3-one, ( -

Une activité antibactérienne vis-à-vis de dix microorganismes utilisés de deux hui les

essentielles a été enregistrée.

Un screening phytochimique a été également réalisé sur les feuilles d’Inula viscosa.

Mots-clés. Inula Viscosa, Rosmarinus Officinalis, biomolécules actives, huile essentielle,

CG/MS, propriétés physico-chimiques, phytochimie, activité antimicrobienne.

Documents

Séparation et caractérisation chimique de quelques ...theses.univ-oran1.dz/document/TH3347.pdf · Espèce : viscosa Inula viscosa (L) est une plante annuelle, herbacée, visqueuse