Syndromes lymphoprolifératifs et LNH de bas grade de malignité · 2014-06-17 · 5 Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs Un diagnostic multidisciplinaire … –Clinique

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Syndromes lymphoprolifératifs

et LNH de bas grade de malignité

DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE DES SYNDROMES LYMPHOPROLIFERATIFS

CHRONIQUES

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Les syndromeslymphoprolifératifs chroniques

Néoplasies B matures

Néoplasies T matures

Syndromes lymphoprolifératifs des immunodéprimés :

- déficits immunitaires primitifs

- lymphomes et VIH

- sd lymphoprolifératifs post-transplantation (PTLD)

- ...

Classification OMS deshémopathies lymphoïdes matures (1999)

Hémopathies lymphoïdes B•Leucémie lymphoïde chronique/ lymphome lymphocytique

•Leucémie prolymphocytaire B

•Lymphome lymphoplasmocytaire

•Lymphome splénique à ly villeux

•Leucémie à tricholeucocytes

•Lymphome de la zone marginale

nodal ou extranodal

•Lymphome du MALT

•Lymphome folliculaire

•Lymphome du manteau

•Lymphome B diffus à grandes cellules

• … Diebold J. Hématologie

Hémopathies lymphoïdes T•Leucémie prolymphocytaire T

•Leucémie à LGL (grands lymphocytes granuleux)

•Syndrome de Sezary

•Leucémie/lymphome T de l’adulte

•Lymphome T angioimmunoblastique

•Lymphome anaplasique à grandes cellules

• …

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Classifications histologiques

• Architecture du ganglion

• Origine de la cellule tumorale (cytologie+ marqueurs)

• Analyse cytogénétique ( t 11-14, t 14-18, t8-14)

• Analyse moléculaire (Bcl2, Bcl1, C myc…)

Représentation schématiqued’un follicule secondaire

Modifié d’après P. Felman & O. Gentilhomme. Atlas de cytopathologie ganglionnaire. Eds Arnette. 1997

Sinus périphérique

Zone corticale profonde

ZONE MARGINALElymphocytes B

mémoires

ZONE DUMANTEAU

petites cellules Bnaïves

CENTREGERMINATIF Zone sombre

Prolifération

Zone claire basaleSélection (apoptose)

Zone claire apicaleSurvie =>

C mémoire ou plasmocytes

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Centre germinatif

Zone du manteau

Zone interfolliculaire

Ganglion lymphatique

Correspondance entre les cellules lymphoïdes B humaines et leur contrepartie lymphomateuse

Lymphomedu manteau

LLC-B

LAL

Myélome multiple

?

Lymphome B monocytoïdeLymphome du MALTSLVLLLC-BLeucémie à tricholeucocytes ?Leucémie prolymphocytaire ?

Lymphome folliculaireLymphome de BurkittLymphome diffus à grandes cellules

Plasmo-cyte

MUTATIONS SOMATIQUES DES REGIONS VARIABLES DES IgHSANS MUTATION DES REGIONS VARIABLES DES IgH

Progé-niteur

B

CelluleB naïve

CelluleB CD5+

Cellule B mémoire

ZONE DUMANTEAU

CENTREGERMINATIF

Mutations somatiques

Commutation de classe

Prolifération

SélectionPlasmocyte

Cellule B du CG

Cellule B

du CG

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Diagnostic des syndromes lymphoprolifératifs

Un diagnostic multidisciplinaire …

– Clinique

– Radiologique

– Anatomo-pathologique

– Biologique

• Hématologie : cytologie, immunologie, cytogénétique, moléculaire

• Biochimie

–…

Les différents examens biologiquesdans le diagnostic des SLPC

1- Morphologie : - Cytologie :

-sanguine : leucémies / lymphomes leucémisés

Hyperlymphocytose > 4 000 ly/mm3 et/ou lymphocytes pathologiques

- médullaire (ponctions, empreintes de BOM)

Infiltration lymphoïde > 30% et/ou lymphocytes pathologiques

-ganglionnaire (ponctions, empreintes de biopsie)Valeur d’orientation des cytoponctions ganglionnaires, à confirmer histologiquement +++

- liquide de ponctions …

- Histologie : indispensable au diagnostic de lymphome

- ganglionnaire

- médullaire : lymphomes médullaires, bilan d’extension

- autres tissus : digestifs, cutanés, ORL, …

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Leucémie lymphoïde chronique (LLC)

Frottis sanguin

MGG

Leucémie prolymphocytaire B

(Site Tribvn)

Frottis sanguin

MGG

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Leucémie à tricholeucocytes

DU Oncologie, avril 2005

Morphologie :

(Site Tribvn)

Frottis sanguin

MGG

Lymphome folliculaire

(Site Tribvn)

Frottis sanguin

MGG

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Proliférations clonales T

Classification morphologique :

Syndrome de Sézary Lymphome T de l’adulte (HTLV1)

Leucémie prolymphocytaire TLeucémie à LGL

(Site Tribvn)

2- Immunophénotypage lymphocytaire :Permet la mise en évidence d’antigènes cellulaires (membranaires, intra-cytoplasmiques ou nucléaires). Antigènes clusterisés en « CD »

- Cytométrie de flux :Marquage des cellules par des anticorps monoclonaux fluorescents.

Analyse des caractéristiques individuelles de chaque cellule d’une suspension cellulaire, lors de son passage à travers un faisceau LASER

=> Information sur la taille, la structure et la fluorescence de la cellule, proportionnelle à l’expression de l’antigène testé


SangMoelleparfois ganglion

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Immunophénotypage :

Population monotypique lambda de faible intensité CD5/CD23+, FMC7-, CD79b faible

Lambda PE

Ka

ppa

FIT

C

CD

19 P

erC

P C

y 5.

5

CD

19 P

erC

P C

y 5.

5

CD

19 P

erC

P C

y 5.

5

CD

19 P

erC

P C

y 5.

5

CD

19 P

erC

P C

y 5.

5

CD5 APC

FMC7 FITC

CD23 PE

CD79b PE CD38 PE

Mean de fluorescence = 103

(M. Legarff)



Immunophénotypage : indispensable au diagnosticprolifération CD19+, CD5+, CD23+, CD79b– ou de faible intensité, Ig Kappa ou Ig Lambda de surface de faible intensité (restriction monotypique)

Score de Matutes (1994) :

Prolifération B (CD19+),

clonale :

- scores 4 et 5 = LLC

- scores 0, 1 et 2 ≠ LLC

- score 3 : LLC atypiques ?

Autres marqueurs :

- CD10- - CD38+/-

- CD25- - ZAP-70 +/-

0 1

CD5 + -

CD23 + -

FMC7 - +

CD79b/CD22 - ou faible FORT

IgS faible FORT

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Immunophénotypage des hémopathies lymphoïdes chroniques B

Marqueurs LLC LPL HCL HCL-V SLVL MCL FL MZL

Intensité des Ig de surface

faible forte forte forte moyenne forte moyenne/forte

moyenne/forte

CD19 + + + + + + + +

CD22 - + + + + + + +

CD23 + - - - +/- - +/- -

FMC7 - + + + + + + +

CD5 + +/- - - +/- + - -

CD10 - +/- - - - - +/- -

CD25 +/- - + - - - +/- +/-

CD11c +/- - + + + - +/- +/-

CD103 - - + + - - - -

CD79b - + + + + + + +

+ = positif dans la majorité des cas ; +/- = positif dans la minorité des cas ; - = négatif dans la majorité des cas

LLC : Leucémie lymphoïde chronique LPL : Leucémie prolymphocytaire

HCL : Leucémie à tricholeucocytes HCL-V : Forme variante de HCL

SLVL : Lymphome splénique à lymphocytes villeux MCL : Lymphome du manteau

FL : Lymphome folliculaire MZL : Lymphome de la zone marginale

Proliférations clonales T

Classification immunologique :

Proliférations de cellules T matures CD3+ TCR+

Marqueurs communs : CD3, CD2, CD5

Autres marqueurs : CD4, CD8, CD25, CD56


LGL-T LGL-NK LP ATL Sézary

CD3/TCR + - + + +

CD2 + + + + +

CD5 + - + + +

CD4 - - + + +

CD8 + - - - -

CD25 - - - + -

CD56 - + - -

LGL : Large granular lymphocyte, NK : Natural Killer, LP : Leucémie prolymphocytaire,

ATL : Adult T Leukemia/Lymphoma

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2- Immunophénotypage lymphocytaire :- Techniques immuno-histochimiques :Sur coupes de tissu

Réalisées par les anatomo-pathologistes


CD20 CD3

(Photos : F. Charlotte)

CD20

Bcl-2

CD3

Ganglion lymphatique

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Petits lymphocytes ( )

prolymphocytes ( )

Lymphome lymphocytique

CD20+

CD5+

CD23+

CD10-

Immunophénotype

Expression de Bcl-2

Hyperplasie folliculaire LNH folliculaire

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3- Cytogénétique :- Conventionnelle : caryotype

analyse tout le génome

Ex. t(14;18)

- Moléculaire : FISH « Fluorescent In-Situ Hybridization »

ne détecte que les anomalies recherchées


http://www.infobiogen.fr/services/chromcancer/Anomalies/t1418ID2006.html

BCL2, 18q21, green

14q32.3, red,

4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »

•Détection moléculaire d’une population lymphoïde clonale :

=> Réarrangement des gènes des chaînes lourdes des Immunoglobulines et du TCR gamma


VH

Gènes IgH réarrangés

RECOMBINAISON D-J

RECOMBINAISON V-D-J

1 2 3 4 5 n 1 2 3 4 n

123456

Configuration germinale des gènes IgH

JH

Leukemia (2003) 17,2257−2317.

!!! défaut possible d’informativité si hypermutations somatiques +++

=> toujours analyser un pvt tumoral

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4- Biologie moléculaire : PCR « Polymerase Chain Reaction »

•Détection de réarrangements génomiques :

Ex. : IgH-Bcl2 équivalent de la t(14;18)

IgH-Bcl1 équivalent de la t(11;14)

Tous ne sont pas analysables par PCR :

ex. réarrangements de c-Myc

•Détection de l’hyperexpression de la cycline D1 :

PCR quantitative sur cDNA (après rétro-transcription de l’ARN)

Prélèvements analysables :

sang, moelle, ganglions, tissus, liquide de ponction, ...


Programme

• Leucémie lymphoïde chronique

• Autres syndromes lymphoprolifératifs chroniques

• Cas Cliniques

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