Embed Size (px)
Citation preview
titre
Techniquesde
numérationde
suspensions bactérienne.Numération sur milieu solide
ensemencement dans la masse.
Numération sur milieu solideensemencement en surface.
Numération sur milieu liquideDétermination du NPP.
Etablissement de la courbe de croissance.
principe ens masseNumération sur milieu solide
ensemencement dans la masse.
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7
Au fait, comment on détermine la gamme
de dilution?
On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que
0,1 UA correspond à 1.109 bact.mL-1
La concentration cible doit être voisine de 300 bact.mL-1
On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.
t = 30 mn
technique masse 1
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que
0,1 UA correspond à 1.109 bact.mL-1
La concentration cible doit être comprise entre 30 et 300 bact.mL-1
On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.
Technique d’ensemencement.
2 variantes:
On verse l’inoculum dans9 mL de gélose en surfusion.
On mélange et on verse dans une boîte de Pétri.
10-5 10-6 10-7
t = 30 mn
technique masse 2
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
Technique d’ensemencement.
2 variantes:
On verse l’inoculum dans la boîte de Pétri.
On verse la gélose en surfusion et on mélange doucement.
10-5 10-6 10-7
Comment choisir entre les deux ?
t = 30 mn
calculs masse 30 mn
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
Calculs.
1500 203 24
trop 250 19
On compte les colonies.
On analyse les résultats.
On calcule la moyenne.
n = [(203 + 250)/10 + 24]/3= 23,1 bact.mL-1
N30mn = n / D = 23,1 . 107 bact.mL-1
10-5 10-6 10-7
t = 30 mn
calculs masse 150 mn
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
Calculs.
trop 554 55
trop 552 56
On compte les colonies.
On analyse les résultats.
On calcule la moyenne.
n = [(554 + 552)/10 + (55 + 56)]/4= 55,4 bact.mL-1
N150mn= n / D = 277 . 107 bact.mL-1
10-5 10-6 10-7
t = 150 mn
RETOUR
Je suis désolée de te le dire, mais la dilution a été mal
choisie !
Numération sur milieu solideensemencement en surface.
principe ens surf
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
Au fait, comment on détermine la gamme
de dilution?
On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que
0,1 UA correspond à 1.109 bact.mL-1
La concentration cible doit être comprise entre 300 et 3000 bact.mL-1
On prépare en plus les deux dilutions qui encadrent la cible.
t = 60 mn
technique surf
Numération sur milieu solideensemencement en surface.
10-6 10-7 10-8
Technique d’ensemencement.
On dépose l’inoculum sur la gélose d’une boîte de Pétri.
On étale au râteau.
t = 60 mn
calculs surf 60 mn
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
Calculs.
374 41 5
369 38 5
On compte les colonies.
On analyse les résultats.
On calcule la moyenne.
n = [(374 + 369)/10 + (41 + 38)]/4= 38,3 bact.mL-1
N150mn= n / D = 38,3 . 107 bact.mL-1
t = 60 mn
10-6 10-7 10-8
calculs surf 120 mn
Numération sur milieu solideensemencement dans la masse.
Calculs.
689 72 7
645 76 8
On compte les colonies.
On analyse les résultats.
On calcule la moyenne.
n = (72+ 76)/2= 74 bact.mL-1
N150mn= n / D = 148 . 107 bact.mL-1
t = 120 mn
10-6 10-7 10-8
RETOUR
principe NPP
On évalue la concentration initiale grâce à la valeur d’absorbance lue, sachant que
0,1 UA correspond à 1.109 bact.mL-1
La concentration cibledoit être voisine de 1 bact.mL-1
On prépare en plus les 4 dilutions qui encadrent la cible.
t = 90 mn
Numération sur milieu liquideDétermination du NPP.
10-1 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-1010-2 10-9 10-11
Au fait, comment on détermine la gamme
de dilution?
Technique d’ensemencement.
technique NPPt = 90 mn
Numération sur milieu liquideDétermination du NPP.
10-7 10-8 10-1010-9 10-11
+ + + + + + - + - + - - - - -
Calculs
calculs NPPt = 90 mn
Numération sur milieu liquideDétermination du NPP.
+ + + + + + - + - + - - - - - 3 3 1 1 0
Mac Grady : NPP = 7Mac Grady : NPP = 0,7
N90mn= n / D = 7 . 108 bact.mL-1
N90mn= n / D = 0,7 . 109 bact.mL-1
On note le code.
On consulte Mc Grady.
On calcule la concentration.
RETOUR
courbe croiss
Etablissement de la courbe de croissance.
D t Abs0 0,108
15 0,14930 0,20745 0,286
60 0,396
75 0,548
90 0,759
2 105 0,525
2 120 0,727
5 135 0,4025 150 0,557
10 165 0,38510 180 0,53320 195 0,369
t Abs0 0,108
15 0,14930 0,20745 0,286
60 0,396
75 0,548
90 0,759
105 1,050
120 1,454
135 2,010150 2,785165 3,850180 5,330195 7,380
t Abs C0 0,108
15 0,14930 0,207 2,3.108
45 0,286
60 0,396 3,8.108
75 0,548
90 0,759 7,0.108
105 1,050
120 1,454 14,8.108
135 2,010150 2,785 148.108
165 3,850180 5,330195 7,380
Pour établir le graphe, on établit les absorbance théorique avant dilution.
On reporte les valeurs calculées.
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 2000.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
7.0
8.0
0E+00
1E+09
2E+09
3E+09
4E+09
5E+09
6E+09
7E+09
8E+09
9E+09
1E+10
f(x) = 114153833.300384 exp( 0.021067107182989 x )
f(x) = 0.108 exp( 0.0216608493924983 x )
t (en mn)
Abs théo N.ml-1
On compare les deux courbes.
Les deux courbes sont superposables(a = 0,021).
k = 1,142.108 / 0,108 = 1,057.109 bact.UA
RETOUR
