REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIREMINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LARECHERCHE SCIENTIFIQUEUNIVERSITE EL HADJ LAKHDAR BATNAMEMOIREPrsent la Facult des SciencesDpartement de BiologiePour lobtention du Diplme deMAGISTEREn Biochimie Appliquepar :YAKHLEF GhaniaTHEMEETUDE DE LACTIVITE BIOLOGIQUE DES EXTRAITSDE FEUILLES DE Thymus vulgaris L. ET Laurus nobilis L.Devant le Jury :Mr YAHIA MouloudMr LAROUI SalahMme HAMBABA LeilaMr ZALLAGUI AmarM.C. lUniversit de BatnaM.C. lUniversit de BatnaM.C. lUniversit de BatnaM.C. lUniversit dOum El-BouaghiPrsidentRapporteurExaminatriceExaminateurAnne Universitaire : 2009-2010Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comRemerciementAvant toute chose, jeremercie Dieu, le tout puissant, pour mavoirdonne la force etla patience.Jexprime dabord mes profonds remerciements et ma vive connaissance Mr LAROUISalah, Matre de confrences la facult de mdecine, Universit de Batna pour avoirencadr et dirig ce travail avec une grande rigueur scientifique, sa disponibilit, sesconseils et la confiance quil maccord mont permet de raliser ce travail.Jadresse mes sincres remerciements MrYAHIA Mouloud, Matre de confrences l'Universit de Batnadavoir acceptde prsider le jury.Jexprime mes vifs remerciements Mme ROUABAH-HAMBABA LEILA, Matredeconfrences lUniversit de Batna pour sa prcieuse aide et ses conseils, et pourlhonneur quelle nous a fait en acceptantdexaminer ce mmoire.Je tiens galement adresser mes vifs remerciements MrZALLAGUI Amar, Matrede confrences lUniversit dOum El-Bouaghi pour lhonneur quil nous a fait enacceptant de faire partie de jury.Je tiens exprimer galement ma profonde reconnaissance Mr ABDEDDAIMMohamed Matre assistant-charg de cours l'universit de Batna pour sa contribution la ralisation de ce travail etses prcieuxconseils quil trouve icimes sincresremerciementsA Mr ABERKANEMohamad Chrif, Matre de Confrences l'universit de Batna, etMr AYACHI AmmarMatre assistant l'universit de Batna Qui m'ont accueilli ausein du leurs Laboratoires : Laboratoire dechimie et phytochimie Laboratoire de microbiologie et immunologieet qui ont mis ma disposition les condition matrielles ncessaires pour la ralisationde ce travail tout au long la priode de recherche quils ici mon respect etreconnaissance.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comListe des abrviationsAAR : Activit antioxydante relativeANOVA : Analyse de varianceAPR : Pouvoir antiradicalaireATCC : American type culture collectionBHT : Butylated hydroxytoluenBAW : n-Butanol/Acide actique/eauBCB : -carotene bleaching testCCM : Chromatographie sur couche minceDMSO : DimthylsulfoxydeDPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazylEAq : Extrait aqueuxEDCM : Extrait dichloromthaniqueEEP : Extrait ther de ptroleEMeOH : Extrait mthanoliqueHPLC: Chromatographie liquide haute performanceIC50: Concentration inhibitrice 50%Rf : Rapport frontalROS : Reactive oxygen speciesTEAC : Trolox Equivalent Antioxidant CapacityTr : Temps de rtentionUV : Ultratvioletg EqACmg : Microgramme dquivalent acide gallique par milligramme dextraitg EqQmg d'ext : Microgramme dquivalent querctine par milligramme dextrait.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comEdited by Foxit ReaderCopyright(C) by Foxit Software Company,2005-2008For Evaluation Only.Liste des figuresFig. 01: Aspect morphologique de Thymus vulgaris.......................................................................2Fig. 02 : Aspect morphologique de Laurus nobilis....................................10Fig. 03 : Structure de base des flavonodes...................................................................................17Fig. 04 : Structure de base des flavones.........................................................................................18Fig. 05 : Structure de base des flavonols.......................................................................................18Fig. 06 : Structure de base des flavanones....................................................................................19Fig. 07 : Structure de base des flavanols.......................................................................................19Fig. 08 : Structure de base des chalcones......................................................................................20Fig. 09 : Structure de base des anthocyanidines............................................................................20Fig. 10: Ltape cl de la formation des flavonodes....................................................................20Fig. 11: Voie de biosynthse des flavonodes...............................................................................21Fig. 12: Pigeage des ROS (R

) par les flavonodes......................................................................23Fig. 13: Flavonodes et leurs sites proposs pour la chlation des ions mtalliques.....................24Fig. 14: Comparaison entre deux pentahydroxyphnols...................................................24Fig. 15: Valeurs de TEAC montrant limportance du groupement catchol au niveau du cycle Bpour lactivit antioxydante des flavonols.....................................................................................25Fig. 16: Elments essentiels pour l'activit anti-oxydante des flavonodes..................................25Fig.17:Inhibitiondelalipoxygnasesetdelacyclo-oxygnasessouslactiondediffrentsflavonodes............27Fig. 18: Origine des diffrentes espces ractives de loxygne impliqus en biologie...............28Fig. 19: les systmes de dfense contre les radicaux libres...........................................................31Fig. 20: Aspect morphologique des micro-organismes tudis....................................................34Fig. 21: Schma de macration par leau distille.........................................................................36Fig. 22: Schma dextraction par les solvants organiques............................................................37Fig. 23: Forme libre et rduite du DPPH......................................................................................46Fig. 24: Teneur en humidit des feuilles sches des deux plantes mdicinales.............................48Fig. 25: Chromatogrammes rsultant de lanalyse des extraits bruts apolaires.........54Fig. 26: Chromatogrammes rsultant de lanalyse des extraits Bruts MeOH...............................54Fig. 27: Chromatogrammes dHPLC des extraits de Thymus vulgaris........................................57Fig. 28: Chromatogrammes dHPLC des extraits de Laurus nobilis....................................58Fig. 29: Droite dtalonnage des flavonodes................................................................................59Fig. 30: Droite dtalonnage des polyphnols...................................60Fig. 31: Activit de la nystatine sur la levure C. albicans.............................................................61Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comFig. 32: Effet inhibiteur dose dpendant de nos extraits..............................................................62Fig.33:Exemplesdeleffetdesextraitsdefeuillesde Thymusvulgaris surlacroissancemicrobienne...................................................................................................................................66Fig.34:Exemplesdeleffetdesextraitsdefeuillesde Laurusnobilis surlacroissancemicrobienne...................................................................................................................................66Fig. 35: Cintique de linhibition du blanchissement de la -carotne par 250 g/ml des extraitsdes feuilles de Thymus vulgaris.....70Fig. 36: Cintique de linhibition du blanchissement de la -carotne par 250 g/ml des extraitsdes feuilles de Laurus nobilis....70Fig. 37: Courbe de corrlation entre lactivit antioxydante des extraits polaires et leur teneur enflavonodes.72Fig.38:RsultatsdutestantioxydantdesextraitsapolairessurCCMaprsrvlationauDPPH.73Fig.39:RsultatsdutestantioxydantdesextraitspolairessurCCMaprsrvlationauDPPH.....75Fig. 40: Courbe de corrlation entrelactivit anti-radicalaire des extraits polaires et leur teneuren polyphnols...76Fig. 41: Activit antioxydante des diffrents extraits de Laurus nobilis...77Fig. 42: Activit antioxydante des diffrents extraits de Thymus vulgaris....77Fig. 43: Activit antioxydante des diffrents Standards....77Fig. 44 : Chromatogrammes des diffrents standards utiliss dans lHPLC (Annexes)Fig. 45 : Influence du solvant DMSO sur la croissance des microorganismes (Annexes)Fig.46 :Piedcoulisseautomatiqueutilisdanslesmesuresdesdiamtresdeszonesdinhibitions (Annexes)Fig. 47 : CMI de lEEP de Thymus vulgaris sur la souche S. aureus. (Annexes)Fig. 48 : Activit d'inhibition de dcoloration de la -carotne (Annexes)Fig. 49 : Activit anti-radicalaire (APR) des extraits bruts (Annexes)Fig. 50 : Activit anti-radicalaire (APR) des diffrents tmoins (Annexes)Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comListe des tableauxTableau 01 : Classification botanique de Thymus vulgaris.............................2Tableau 02 : Le contenu de polyphnols dans linfusion aqueuse du Thymus vulgaris..................3Tableau 03 : Les flavonoides trouvs dans les feuilles de Thymus vulgaris L............................4Tableau 04: Classification botanique de Laurus nobilis................................................................9Tableau05:Aspects,couleursetrendementsdesextraitsdesfeuillesde ThymusvulgarisetLaurus nobilis...................................................49Tableau 06: Les composs que pourraient contenir les diffrents extraits prpars.....................50Tableau 07: Rsultats des ractions de caractrisation des flavonodes dans nos extraits....50Tableau 08: Rsultats de la sparation par CCM des extraits apolaires.......................................52Tableau 09: Rsultats de la sparation par CCM des extraits polaires..........................................53Tableau 10: Temps de rtention des diffrents tmoins obtenus par la sparation avec HPLC....55Tableau 11: Rsultats de lHPLC des diffrents extraits...55Tableau 12: Teneurs en polyphnols totaux et en flavonodes dans les extraits...57Tableau 13: Antibiogramme des germes tudis en prsence des diffrents Antibiotiques..61Tableau 14 Activit antimicrobienne des extraits bruts des plantes de ltude.............................64Tableau 15 : Concentrations minimales inhibitrices des diffrents extraits..68Tableau 16: Le pouvoir anti-radicalaire des extraits bruts et du control positif .......................71Tableau 17: IC50 et puissance anti-radicalaire (APR) des extraits bruts et des standards............75Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comSOMMAIREINTRODUCTIONPREMIERE PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUEI. LA PLANTE Thymus vulgaris L. ........................................................................................ 1I.1. Gnralits............................................................................................................... .1I.2. Origine et distribution de la plante .................................................................................. 1I.3. Placede la plante dans la systmatique .......................................................................... 2I.4. Description botanique de la plante .................................................................................. 2 I.5. Composition chimique .................................................................................................... 3I.6. Utilisations des feuilles de Thymus vulgaris .................................................................... 4I.7. Proprits pharmacologiques et recherche en cours......................................................... 5II. LA PLANTE Laurus nobilis L. .......................................................................................... 9II.1. Gnralits................................................................................................................... 9II.2. Origine et distribution de la plante ................................................................................. 9II.3. Place dans la systmatique ............................................................................................ 9II.4. Description botanique de la plante ............................................................................... 10II.5. Composition chimique ................................................................................................ 10II.6. Utilisations des feuilles de Laurus nobilis.................................................................... 11II.7. Proprits pharmacologiques et recherche en cours ..................................................... 11III. LES FLAVONOIDES .................................................................................................... 16III.1. Vue densemble sur les polyphnols........................................................................... 16III.2. Gnralits sur les flavonodes ................................................................................... 16III. 3. Structure chimique et classification ........................................................................... 17III.4. Biosynthse des flavonodes ...................................................................................... 20III.5. Localisation et distrubution des flavonodes ............................................................... 21III.6. Biodisponibilit des flavonodes....................................................................................22III.7. Activits biologiques des flavonodes... ..................................... ..22IV. RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIEES........29IV.1. Activit antioxydante.....29IV.2. Activit antimicrobienne........32DEUXIEME PARTIE : ETUDE EXPERIMENTALEI. MATERIEL ET METHODES........................................................................................... 35I.1. Matriel vgtal ............................................................................................................ 35I.2. Dtermination de la teneur en eau ................................................................................. 35Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comI.3. Prparation des extraits ................................................................................................. 36I.4. Dtermination du rendement ......................................................................................... 37I.5. Etude phytochimique des extraits ................................................................................. 37 I.5.1. Analyse qualitative .................................................................................................. 37I.5.1.1. Essais de caractrisation en tube ......................................................................... 38 I.5.1.2. Essais de caractrisation par CCM ...................................................................... 38 I.5.1.3. Essais de caractrisation par HPLC ..................................................................... 39 I.5.2. Analyse quantitative ................................................................................................ 40 I.5.2.1. Dosage des polyphnols totaux ........................................................................... 40 I.5.2.2.Dosage des flavonodes ........................................................................................ 41I.6. Tests des effets biologiques .......................................................................................... 42 I.6.1. Tests de l'activit antimicrobienne ........................................................................... 42 I.6.1.1.Mthode de diffusion partir dun disque solide ................................................ 43 I.6.1.2.Mthode des microdilutions en milieu solide ...................................................... 44 I.6.2. Tests d'activit antioxydante .................................................................................... 44 I.6.2.1. Mthode de blanchissement de la -carotne ....................................................... 44I.6.2.2. Mthode de rductiondu radical libre DPPH ..................................................... 45II. RESULTAS ET DISCUSSION........................................................................................ 48II.1.Le taux d'humidit ...................................................................................................... 48II.2. L'extraction ................................................................................................................. 48II.3. Rsultats de l'etude phytochimique .................................................................. 50 II.3.1..Rsultats de l'analyse qualitative ............................................................................. 50 II.3.2. Rsultats de l'analyse quantitative ........................................................................... 58II.4. Rsultats des tests des effets biologiques ................................................................. 61 II.4.1. Rsultats du test du pouvoir antimicrobien ...................................................... 61 II.4.2. Rsultats du test du pouvoir antioxydant ......................................................... 69CONCLUSION ET PERSPECTIVESREFERENCES BIBLIOGRAPHIQUESANNEXESClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comIntroductionClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comI N T R O D U C T I O NLutilisationdesplantesaromatiquesparlhommeestunepratiqueantique(Majindaetal.,2001).Denosjourslamajoritdeshabitantsduglobeterrestreutilisentdetrsnombreusesplantes,comptetenudeleurspropritsaromatiques,commesourcedassaisonnementoucommeremdeenmdecinetraditionnelle.Cependant,cetteutilisationnesebasesuraucuncritre scientifique, elle tient compte simplement des observations au cours des sicles.Actuellement,plusieursquestionssontsoulevesconcernantlascuritdesproduitschimiquessynthtiquesutilissenmdecineoudanslindustriealimentaire.Eneffet,laperoxydationdeslipidesproduitesaucoursdesprocessusdefabricationetdestockagedesaliments souslaction des radicaux libres deloxygne (ROS) conduit la perte de la qualit etdelascuritdesaliments.Lesantioxydantsdesynthsegnralementutilissenindustriealimentairepourretarderloxydationdeslipidessesontavrsresponsablesdeffetsindsirables.Deplus,lusageexcessifdagentsantibactrienschimiquesdanslamdicationhumaineainsiquedansllevageanimalconduitlapparitiondesouchesbactriennesrsistantes (Mau et al., 2004).Lesextraitsbrutsdesplantescommencentavoirbeaucoupdintrtcommesourcepotentielledemolculesnaturellesbioactives.Ilsfontlobjetdtudepourleurventuelleutilisationcommealternativepourletraitementdesmaladiesinfectieusesetpourlaprotectiondes aliments contre loxydation.Cetravailvisetudierlactivitantimicrobienneetantioxydantedes extraitsbrutsde deuxplantes aromatiques, Thymus vulgaris L. et Laurus nobilis L., qui appartiennent respectivement lafamilledeslamiacesetdeslauraces.Ellessontparmilesfamillesdeplanteslesplusutilises comme source mondiale dpices et dextraits qualit mdicale intressante.Laslectiondecesplantessestfondesurlescritressuivants:sontparmiles pluspopulairesplantesaromatiquesutilisesdanslemondeentier,leurutilisationfrquenteparnospopulationsdansledomaineculinaireetcelui delamdecinetraditionnelle,cotdufaitqueleurshuilesessentiellessontutilisesdanslesindustriesalimentaires,pharmaceutiqueetcosmtique,leurefficacitdansletraitement symptomatiquedetroublesdelappareildigestifsuprieur reconnuetraditionnellement,ellesreprsententrcemmentunsujetderecherchescientifique intressant.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comNotre travail sera rparti en deux parties :- unepartierelativeltudebibliographiquedesdeux plantes,desflavonodesetdesactivits recherches.- Uneautrepartierserveltudeexprimentalesubdiviseen deux chapitres :lunPrsentelesmthodesetlestechniquesutilisespourlaralisationdecetravailetlautre consacr la prsentation et la discussion des rsultats obtenus.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comEtude BibliographiqueClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris1I. LA PLANTE Thymus vulgaris L.I. 1 GENERALITESLegenre Thymus estundes220genreslesplusdiversifisdelafamilledeslabies,avecpourcentre dediversitlapartie occidentale dubassin mditerranen (Morales, 2002). Commebeaucoupdelabiesellessontconnuespourleurshuilesessentiellesaromatiques.Lespcelaplusconnueestsansconteste Thymusvulgaris L. localementconnu zaatar. Enfranaisetanglaisparexemple,onemploiefrquemmentlenomdugenre(thymetthymerespectivement) pour dsigner lespce Thymus vulgaris (Amiot, 2005).Le nom Thymusdrive du mot grec thymos qui signifie parfumer cause de lodeuragrablequelaplantedgage(Pariente,2001).Lespce Thymusvulgaris estunlmentcaractristiquedelafloremditerranenne,connusurtoutpoursesqualitsaromatiques,elleaaussi de trs nombreuses proprits mdicinales (Iserin, 2001).Ilexisteunevariationdelaproductiondescomposssecondaireschezcertainesespcesvgtalesquelonappellepolymorphismechimique.Cettevariationpeuttrequantitativeouqualitative.Un grandnombredespcespossdentdesindividusdontlescomposssecondairesvarientquantitativementdunindividuunautre.Parcontre,lesexemplesdevariationqualitative, c'est--dire lexistence de chmotypes au sens strict dont les individus peuvent porterdesmolculesdenaturechimiquediffrenteslesundesautres,sontmoinsfrquents.Cestnotamment le cas de Thymus vulgaris qui exprime six formes de chmotypes diffrents, chaquechmotype est nomm suivant le composant principal de son huile essentielle (exemples : thymol(T), carvacrol (C),). (Amiot, 2005).I.2. ORIGINE ET DISTRIBUTION DE LA PLANTEThymusvulgarisL. estindignedelEuropedusud,onlerencontredepuislamoitiorientaledelapninsuleibriquejusquausud-estdelItalie,enpassantparlafaademditerranennefranaise(zcanetChalchat,2004;Amiot,2005).Ilestmaintenantcultivpartout dans le monde comme th, pice et plante mdicinale (Kitajima et al., 2004).Le Thymus vulgaris se prsente toujours dans un tat sauvage en plaines et collines, commela lavande,le romarin,la sauge etbeaucoup dautres plantes sauvages (Kaloustian etal.,2003).Cette plante spontane pousse abondamment dans les lieux arides, caillouteux etensoleills desbords de la mer la montagne (Poletti, 1988).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris2I.3. PLACE DANS LA SYSTEMATIQUECe classementse rfre la classification botanique antrieure (Morales, 2002)synthtisedans le tableau 1.Tableau 1 : Classification botanique de Thymus vulgarisRgne PlantesSous rgne Plantes vasculairesembranchement SpermaphytesSous embranchement AngiospermesClasse DicotyldonesSous classe DialyptalesOrdre LabialesFamille LamiacesGenre ThymusEspce Thymus vulgaris L.I.4. DESCRIPTION BOTANIQUE DE LA PLANTEThymus vulgaris L.est un arbuste aromatique tiges ramifies, pouvantatteindre 40 cm dehauteur.Ilpossdedepetitesfeuillesrecourbessurlesbordsdecouleurvertfoncs,etquisontrecouvertesdepoilsetdeglandes(appelstrichomes).Lestrichomescontiennentlhuileessentiellemajoritairementcomposedemonoterpnes.SespetitesfleurszygomorphessontFleurPlanteentireFruitFeuilleFig. 1 : Aspects morphologiques de Thymus vulgaris L.(Iserin, 2001)Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris3regroupes en glomrules et leur couleur varie du blanc au violet en passant par le rose. Thymusvulgaris estdailleurscaractrisparunpolymorphismefloralquiataumoinsaussitudique son polymorphisme chimique (Bruneton, 1999 ; Morales, 2002) (Fig. 1).I.5. COMPOSITION CHIMIQUEDenombreusestudesontrvlquelespartiesariennesde Thymusvulgaris sonttrsrichesenplusieursconstituantsdontlateneurvarieselonlavariabilitdesconditionsgographiques,climatiques,deschage,destockageetdesmthodesdtudes(extractionetdtection).Lhybridationfaciledelespcemneunegrandevariabilitintraspcifique,quiaffectelhomognitdurendementdextraitetsacomposition en produitschimique(Balladinet Headley, 1999 ; Amiot, 2005).La teneuren huile essentielle de la plante varie de 5 25 ml/Kg etsa composition fluctueselonlechmotypeconsidr(Bruneton,1999) ;lhuileessentiellede Thymusvulgaris atanalyse en utilisant la chromatographie en phase gazeuse (CPG) couple une spectromtrie demasse(SM),30compossonttidentifisetcaractriss,lesplusabondantsontrespectivement :thymol (44,4-58,1%), p-cymene(9,1-18,5%),-terpinne(6,9-18,0%),carvacrol (2,4-4,2%),linalol (4,06,2%).Lacaractristiquedhuileessentiellede Thymusvulgaristaitsateneurleveduthymol(GuillnetManzanos,1998 ;BalladinetHeadley,1999 ; Hudaib et al., 2002 ; Bouhdid et al., 2006).Lecontenuphnoliquetotal,flavonoides,catchine,etanthocyaninedanslinfusionaqueusesprparedu thymus vulgaris atdterminpardesmthodesspectrophotomtriques(Kuliic et al., 2006). Le tableau 2, ci-dessous rsume les rsultats.Tableau 2 : Teneur en polyphnols (en g EAG/mg dextrait) dans linfusion aqueuse duThymus vulgaris (Kuliic et al., 2006)Plante Phnols totauxFlavonodesNon- flavonodesCatchines AnthocyaninesThymusvulgaris33.3 25.0 8. 3 1.2 6.7La mthodologie habituelle pour tudier les drivs flavonoidiques dans les plantes impliquelesextractionssuccessivesemployantplusdunsolvant,plusieurstapesdefractionnementetdiffrentestechniquesdechromatographiepourextraire,sparer,isoler,pureretidentifierlescompossdintrt.Le tableau3numrelesflavonoidestrouvesdanslesfeuilles Thymusvulgaris L., par plusieurs auteurs, en utilisant la mthodologie ci-dessus mentionn.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris4DenombreusestudesontconfirmquelesespcesquiappartienneslafamilledesLamiaceaesontunebonnesourcedaciderosmarinique,lidentificationdescomposspolyphnoliquesdanslinfusionaqueusede Thymusvulgaris paranalyseHPLCamontruneprsencedominantedaciderosmarinique(17,45 mg/g= 1,7 % de la masse sche de Thymusvulgaris) et un autre compos significatif est leriocitrin(1,96 mg/g ) (Kulii et al., 2006).Dautrescomposantsonttdtectsseulemententraces,lacidecafique(0,02mg/g)etlacide p-hydroxybenzoique. La composition en vitamines a t dtermine et rvle la prsencede la vitamine E (-tocophrol) (4,4 mg/Kg) (Guilln et Manzanos, 1998 ;Kuliic et al., 2006).Tableau 3 : Les flavonoides trouvs par plusieurs auteurs dans les feuillesde Thymus vulgaris L.Flavonodes Rfrences- Cirsilineol (5,4-dihydroxy-6,7,3-trimethoxyflavone)- Thymonine (5,6,4 - trihydroxy-7,8,3-trimethoxyflavone)- Eriodictyol (5,7,3,4-tetrahydroxyflavone)- Sideritoflavone (5,3,4-trihydroxy- 6,7,8- trimethoxyflavone)- 5-Desmethylnobiletine (5-hydroxy-6,7,8,3,4-pentamethoxyflavone)- Apignine (5,7,4-trihydroxyflavone)- Lutoline (5,7,3,4-tetrahydroxyflavone)- Xanthomicrol (5,4-dihydroxy-6,7,8-trimethoxyflavone)- 5-Desmethylsinensetine (5-hydroxy-6,7,3,4-tetramethoxyflavone) - Quercetine (3,5,7,3,4-pentahydrxyflavone)Adzet et al., 1988Morimitsu et al., 1995Morimitsu et al., 1995Adzet et al., 1988Morimitsu et al., 1995Adzet et al., 1988Guilln et Manzanos, 1998Adzet et al., 1988Guilln et Manzanos, 1998Adzet et al., 1988Kuliic et al., 2006Adzet et al., 1988Kuliic et al., 2006Guilln et Manzanos, 1998Guilln et Manzanos, 1998Morimitsu et al., 1995Kuliic et al., 2006I.6. UTILISATION DES FEUILLES DE Thymus vulgarisThymusvulgaris estunedespluspopulairesplantesaromatiquesutilisesdanslemondeentier, ces applications sont trs vastes et touchent le domaine alimentaire et celui de la mdecinetraditionnelle(Adwan etal., 2006).De plussonhuileessentielleestutilisedanslesindustriesalimentaire, pharmaceutique et cosmtique (Jordn et al., 2006).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris5Lpice Thymus vulgaris estintensivement cultiv en Europe et aux Etats-Unis pourlusageculinairedanslassaisonnementdespoissons,volailles,despotagesetdeslgumes(zcanetChalchat, 2004).La feuille et la sommit fleurie de Thymus vulgaris sont traditionnellement utilises parvoieoraledansletraitementsymptomatiquedetroublesdigestifstelsque :ballonnementpigastrique,lenteurladigestion,ructation,flatulenceainsiquedansletraitementsymptomatiquedelatoux etdelabronchite(Bruneton,1999).Safeuilleestnumredanslapharmacopedefinesherbesallemandeetbritanniqueatemployeentantquebranchospasmolytique,expectorantetantibactrien.Onditquelatisanedesfeuillede Thymusvulgaris favorise le repos et le sommeil (Kitajima et al., 2004).En usage local, elles sont traditionnellement utilises en cas de nez bouch, de rhume, pour letraitementdespetitesplaiesaprslavageabondant,poursoulagerlespiqresdinsectesetlesdouleursrhumatismales,enbaindebouchepourlhyginebuccale(Poletti,1988 ;Brunton,1999) ainsi comme additif de bain prpar par dcoction qui stimule lcoulement de sang vers lasurface du corps humain, soulageant de ce fait la dpression nerveuse (zcan et Chalchat, 2004).Lhuileessentielledecetteplanteentredanslesformulationsdediversesspcialits :pommadesantiseptiquesetcicatrisantes,siropspourtraitementdesaffectionsdesvoiesrespiratoires, prparation pour inhalation (Bruneton, 1999).I.7. PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES ET RECHERCHE EN COURSLes proprits pharmacologiques de la plante Thymus vulgaris et de ses diffrents extraits, enparticulierlhuileessentielleetlextraitaqueux,onttaitbientudi.Enplusdeleursnombreusesutilisationstraditionnelles,laplanteetsesextraitsonttrouvdenombreusesapplicationsindustrielles(principalementcommeadditifsalimentaires)etmdicinales(Hudaibet al, 2002).Lesrecherchesactuellesralisessurleseffetsdesextraitsdecetteplantesurdiffrentssystmes in vitro et in vivo ont ressorti plusieurseffets de grandeimportance pour la mdecine,la pharmacie et lindustrie moderne, parmi les quelles on cite les plus importants :a) Effets antioxydantsThymus vulgaris L.se situait parmi les fines herbes sches contenant les plus grandes capacitsantioxydantes. Diffrents composs du thym lui permettent de possder un tel statut, comme lesphnols(thymoletcarvacrol),lesflavonoides,laciderosmarinique,lacidecafiqueetlaClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris6vitamineE(Kulii etal.,2006 ;GuillnetManzanos,1998).Cesconstituantsinhibentlaperoxydationlipidiqueinduite invitroauniveaudesmitochondriesetdesmicrosomes.Ilsinhibent galement partiellement la production de lanion superoxyde (Bruneton, 1999).Des recherches menes dans les annes 1990 en cosse ont tabli les vertus potentielles de laplante et de son huile essentielle, en prvention du vieillissement. Des tudes rcentes indiquentque Thymusvulgaris estunpuissantantioxydantetassuredesdoseslevesdacidesgrasessentiels dans le cerveau (Iserin, 2001).Lhuile essentielle de Thymusvulgaris attestepoursonactivitantioxydantepardeuxmthodesdiffrentes :latechniquededcolorationdelacarotneetletestduDPPH(Diphenylpicrylhydrazyl).Lesrsultatsobtenusmontrentquelhuilede Thymusvulgaristmoigne dune grande activit antioxydante in vitro (Bouhdid et al. 2006).Acotdelhuile,quiatlargementtudiepoursespropritsantioxydantes,lextraitaqueuxdesfeuillesde Thymusvulgaris aprsentuneactivitantioxydanteimportante,etlescaractristiques antioxydantes observes ntaient pas entirement lies la teneur en phnols delhuileessentielle dansnimporte quellemthode analytique,maisvraisemblablementfortementdpendantesdelaciderosmarinique,composphnoliqueprincipaldanslextraitaqueuxdeThymus vulgaris (Thuille et al., 2003).b) Effets antimicrobiensLhuileessentielledethym,richeenphnols,estdouedepropritsantibactriennesfacilement mises en vidence in vitro (Bruneton, 1999). Lhuile essentielle de trois plantes dontThymusvulgarisatteste,parBouhdidetsescollaborateurs(2006),pourleuractivitantibactrienne,lhuile de Thymus vulgaris tmoigne dune activit antibactrienne intressantesurlesbactriesgrampositivescommesurlesbactriesgramngatives.Eneffet, L-monocytognes, souche hautement pathogne, prsente une sensibilit leve cette huile.DesrsultatssimilairesonttobtenusparEttayebietsescollaborateurs(2000),quiontmontr que lactivit de lhuile du thym a t plus efficace contre les bactries gram positive (S.aureus,S.pyognesetS. pneumoniae)que contre lesgram ngative (E.coli etautre).Dautrepartcesmmesauteursonttrouvquecettegrandeactivitdelhuileessentiellede Thymusvulgaris est relie au thymol qui est majoritaire de cette huile.Lactivitantibactriennede11huilesessentiellesdeplantesaromatiquescontrelasouchebactrienne Bacillus cereus INRA L2104, microbe pathogne dvelopp en bouillon de carotte Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris716 C, a t tudie. Une inhibition totale de la croissance des spores bactriennes a t observepour lagent antimicrobien Thymus vulgaris (Valero et Salmern, 2003).En outre, lextrait organique entier de Thymus vulgaris est avr tre actif contre diffrentessouchesbactriennes,alorsquelextraitaqueuxindiquaitlameilleureactivit contreHelicobacter pylori (H. pylori) avec une concentration minimale inhibitrice (CMI) de 3,5 mg/ml(Tabak et al., 1996 ; Iserin, 2001). Lactivit amliore de lextrait alcoolique du thym comparelaqueuxpeuttreexpliqueparlaprsenceduthymol,unphnolalkyliquequicauselaperforation des membranes bactriennes et le flux rapide des composants cytosoliques (Thuille etal., 2003).Demme,lextraitactoniquede Thymusvulgaris amontruneactivitinhibitriceuneconcentration de 0.5 mg/ml contre la Mycobacterium tuberculosis (Lall et Meyer, 1999).Lextraithydrosol(extraitaqueuxsanshuileessentielle)de Thymusvulgarisa t examinpour ses effets inhibiteurs contre quatre bactries pathognes (Escherichia coli, E. coli O157:H7,StaphylococcusaureusetYersiniaenterocolitica).Bassurlesrsultatsdecettetude,leshydrosols de thym ont sembl empcher la croissance des quatre microbes pathognes examins.Les hydrosols de thym concentration de 50 75ml/100ml taientcompltementprohibitif surla croissance bactrienne dans la culture de bouillon. Les rsultats de cette tude ont confirm lapossibilit d'employer des hydrosols de thym dans la conservation des aliments etdes boissons.Ceshydrosolspeuventtreutilissdansdiffrentesconcentrationspourstockeretprotgerlesproduits alimentaires contre les microbes pathognes (Sadi, 2003).En plus de lactivit antibactrienne, des tudes (ralises in vitro et in vitro) ont prouv quel'huileessentielle(surtoutlethymol)de Thymusvulgarispossdedespropritsantifongiquescontre un certain nombre de myctes. Reddy et ses collgues (1998), dans leur tude, ont montrlepotentielantifongiquelevdelhuilevolatilede Thymus vulgaris comme agents protecteursdesfruitsdefraise(Fragariaananassa)contreladtrioration causeparlesmyctes Botrytiscinereaet Rhizopusstolonijer.UnetudesimilaireraliseparGiordanietsescollaborateurs(2008),quiontexaminleshuilesessentiellesdequelquesplantesaromatiquesdont Thymusvulgaris pourleurseffetsantifongiques contreuneespcedelevure Candidaalbicansparladtermination de leurs CMI (3.71 g/ml).c) Effet spasmolytique :Lactivitspasmolytiquede Thymusvulgaris estleplussouventattribueauxphnolsdelhuileessentielle.Beeretsescollaborateurs(2007)dansleurtudeontmontrqueleffetClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : LA PLANTE Thymus vulgaris8spasmolytique du thymol est enregistr la concentration de10-6 M. A la concentration de 10-4 Mlethymolinhibe100%lactivitcontractilespontanedesmuscleslissesdelestomacducobaye et 10-5 M rduit les effets de lactyle choline 35%. Ils supposent que le thymol a uneffet analgsique par son action sur les rcepteurs 2 adrnergique des cellules de nerf.Parailleurs,LemlietVanDenBrouke(Bruneton,1999)ontmontrquesilesphnolsdelhuile essentielle de Thymus vulgarissopposent effectivement aux contractions provoques surlesmuscleslissesducobayeparlhistamine,lactylecholineoudautresractifs,leurconcentrationdanslesprparationsaqueusesdeladrogueestinsuffisantepourjustifierleuractivit.Cesauteursontmontrquelactivitspasmolytiquedecesprparationsestlielaprsence des polymthoxyflavones.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis9II. LA PLANTE Laurus nobilis L.II.1. GENERALITESLaurusnobilis L.,membre delafamilledeslauracesquirenferme32genresetenviron2000-2500 espces (Barla et al., 2007). Laurus, nom latin, dorigine celte qui veut dire toujoursvert allusion au feuillage persistant de la plante (Pariente, 2001).Les feuilles sont largement appliques et connues comme assaisonnement et herbe mdicinaledepuislespriodesantiquegrecetromain(Demiretal.,2004).Il estintressantdenoterquecetteherbequitaitpendantlongtempsemployedanslanourriturecommecondimentetenmdecinetraditionnellea,enfait,despropritsquipeuventsuggrerdenouvelleapplication(Ferreira et al., 2006).II.2. ORIGINE ET DISTRIBUTION DE LA PLANTE Originairedubassinmditerranen, Laurusnobilis poussedansleslieuxhumidesetombrags, mais galement dans les jardins, o elle est cultive comme condiment (Iserin,2001).Actuellement, la plante est largement cultive dans beaucoup de pays comme plante ornementaleetpourlaproduction commerciale tels quela Turquie,lAlgrie,laFrance,laGrce,le Maroc,lAmrique centrale et les Etats-Unis Mridionaux (Demir et al., 2004; Barla et al., 2007).II.3. PLACE DANS LA SYSTEMATIQUECeclassementserfrelaclassificationbotaniqueantrieure(Quezeletsanta,1962) synthtise dans le tableau 4. Tableau 4 : Classification botanique de Laurus nobilis L.Rgne PlantesSous rgne Plantes vasculairesembranchement SpermaphytesSous embranchement AngiospermesClasse DicotyldonesSous classe DialyptalesOrdre LauralesFamille LauracesGenre LaurusEspce Laurus nobilis L.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis10II.4. DESCRIPTION BOTANIQUE DE LA PLANTELaurusnobilis, Arbuste ou arbre aromatique de 2 10m de haut tige droite grise dans sapartiebasseetverteenhaut.Sesfeuillessontalterns,coriaces,lgrementondulessurlesbords,longuesde16cmsur8cmdelarge,persistantesvertfoncetglacssurleurfacesuprieureetpluspale en dessous.Lesfleurssontdioques(petitesfleursmlesetfemellessurdespiedsspars),jaunes,groupespar45enpetitesombelles.Lefruitestunepetitebaieovode de 2cm de longueursur 1cm de largeur, noirverniss maturit (Iserin, 2001 ; Demir etal., 2004 ; Beloued 2005).II.5. COMPOSITION CHIMIQUEDe nombreuses tudes ont t ralises pour la dtermination de la composition chimique desfeuillesdeLaurusnobilisetplusieursontprouvlarichessedesesfeuillesensubstancesactives.Parhydrodistillationlesfeuillesfournissentenviron10-30ml/Kg(1-3%)dhuileessentielle (Bruneton 1999,Demir etal.,2004)dont les constituants majoritaires inclut : cinol, etpinne, sabinne, linalol, eugnol, terpinol, plus dautres esters et terpenoides, mais dontles proportions varient selon lorigine gographique (Iserin 2001 ; Sayyah et al.,2002 ; Demir etal., 2004).Lesfeuillesde Laurusnobiliscontiennentaussidesflavonodespolaires(drivesglycosylesdequerctine,kaempferoletdecatchine)etapolaires(quatredrivsacylsdekaempferol)(Fiorinietal.,1998 ;KivaketMert,2002),sesquiterpneslactones,alcalodesFleurFruitFeuilleRameauFig. 2 : Aspect morphologique de Laurus nobilisBeloued (2005).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis11disoquinoline (Kivak et Mert, 2002 ; Simi et al., 2003 ), en plus Demo et al. (1998) et Gmez-Coronado et al. (2004) ontmontr la richesse de ses feuilles en vitamine E.II.6. UTILISATION DES FEUILLES DE Laurus nobilisLesfeuillesde Laurusnobilissontparmilesassaisonnementslesplusconnusdanstouslespays,ellessontgnralementutilisescommepicevalableenculinaire(enpotages,ragots,sauce,)etaromatisantenindustriealimentaire.Cetteplanteaaussidesapplicationsimportantesenmdecinetraditionnelleetreprsentercemmentunsujetderecherchescientifiqueintressant(Sinietal.,2003),lelaurierestprincipalementutilis,parvoieorale,dansletraitementsymptomatiquedestroublesdelappareildigestifsuprieurtelsqueleballonnement pigastrique, lenteur de la digestion,ructations et flatulence (Iserin, 2001).Lextraitaqueuxestutilisdanslamdecinetraditionnelleturqueentantquanti-hmorrodal, antirhumatismal, diurtique etcomme un antidote dans des morsures de serpentetpour le traitement du mal destomac (Kivak et Mert, 2002).Dans lamdecine traditionnelle iranienne, les feuilles de cette plante ont t employes pourtraiter lpilepsie et le parkinsonisme (Aqili Khorasani, 1992).Lhuile essentielle obtenue desfeuillesde cette plante a t employe pourle soulagementdhmorrodes et des douleurs rhumatismales (Sayyah etal.,2002).En outre, lhuile essentielleestemployeparlindustriecosmtiqueenparfumerieetdanslafabricationdessavons.Ellecompte parmi les meilleurs moyens dloigner les insectes gnants (Demir et al., 2004 ; Beloued,2005). II.7. PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES ET RECHERCHE EN COURSa) Effets antioxydantsLactivit antioxydante des extraits mthanolique (bruts et dgraisss) des feuilles, dcorce etdes fruits de Laurus nobilis ont t tudis au niveau de la peroxydation de lipide (LP) dans lesliposomes,induiteparlesystmeFe+2/ascorbateetmesurspectrophotomtriquement533nm.Lesrsultatsontmontrquetouslesextraitsderecherchepossdaientuneactivitantioxydante.LextraitdgraissdesfeuillesmontreuneinhibitionplusleveduLPquelextraitbrutetque touslesautresextraitsetlemaximumdesonactivit(68,4%)atatteintavec une plus petite quantit (2,0 mg) (Simi et al., 2003).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis12Ferreiraetal.(2006)onttudilactivitantioxydantedetroisextraits(huileessentielle,extrait thanolique et dcoction) de dix espces de plantes mdicinales dont Laurus nobilis, cetteespce a montr des valeurs leves pour lactivit antioxydante pour chacun des trois extraits etelleestplushautepourlesextraitspolaires.Danslelaurier,lisoquercitrinetlesglycosidesflavonol peuvent expliquer lactivit exhibe.Dans une autre tude, Demo et al. (1998) ont dmontr la prsence des tocophrols (vitamineE),principalementla -tocophrol,danslesfeuillesde Laurus nobilisobtenuedanslafractionapolaireparextractionhexane.Danscettetudeonrapportequelecontenutocophroleststrictement corrl avec lactivit antioxydante de lextrait hexane des feuilles.Ces rsultats prliminaires ont confirm que lutilisation traditionnelle des feuilles de Laurusnobilis danslindustrie alimentaire estrelienon seulement lodeur et larome plaisant,maisprobablementaussi adespossibilitsprservativesdessubstancesprsentesdanslesfeuillesetdautres pices de cette plante.b) Effets fumignes et insecticideRcemment,ilyaunintrtcroissantpourlutilisationprobabledesextraitsdeplantescomme solution de rechange aux insecticides synthtiques.Treize huiles essentielles dont ceux de Laurus nobilis ont t examines sous leursformes devapeurcontreuneespcedinsectesattaquantlesproduitsstocks, Acanthoscelidesobtectus(brucheduharicot).Lesrsultatsontindiqusquelhuileessentielledesfeuillesde Laurusnobilisauneactionrpulsive,rduitlafcondit,diminuelacouvaisondufs,augmentelamortalitlarvairedenouveau-netinfluencedfavorablementlapparitiondeprogniture(Papachristos et Stamopoulos, 2002).Une tude similaire a t ralise par Erler etses collaborateurs (2006), o lhuile essentielleextraitepartirdufeuillagefraisde Laurusnobilisatexaminepoursonactivitrpulsivecontrelesfemellesadultesduneespcedemoustique(Culex pipiens),cette huile a montr undegrderpulsionintressantcontrecesparasitesvecteursdeplusieursmaladiescommelamalaria, fivre jaune, dengue, encphaliteetc.Demme,lactivitfumigne decertainscomposs qui se produisentnaturellementdansleshuilesessentielles desplantesaromatiquesdontcinol,eugnol etlinalol,composs principalesClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis13de lhuile essentielle de Laurus nobilis, a t valuer contre trois espces dinsectes parasites desproduits entreposs (Sitophilus oryzae, Rhyzopertha dominica et Tribolium castaneum).Lactivitinsecticideachangaveclespcedinsecte,lecomposetletempsdexposition.Les rsultats ont prouv que ces composs peuvent convenir comme fumigne en raison de leurvolatilit leve, efficacit et leur sret (non toxique aux humais) (Rozman et al., 2007).c) Effet anticonvulsiveLhuileessentielledesfeuillesde Laurusnobilis atvaluepourlactivitanticonvulsivecontredessaisiesexprimentales,lhuileaprotgdessouriscontredesconvulsionstoniques,induitesparlectrochocmaximaletparticulirementparpentylnettrazol.Auxdosesdanticonvulsivant,lhuileessentielleaproduitlasdationetrelchementducur.Lescomposants responsables de cet effet peuvent trele cinol, eugnol etle mthyle eugnol maisdautrestudessontexigesavantquetoutesconclusionspuissenttretires(Sayyahetal.,2002).d) Effet cytotoxiqueLesextraits n-hexane,thanoletaqueuxdesfeuillesde Laurusnobilisontttestspourleurspropritscytotoxiquesenutilisantlessaibiologiquedecrevettedesaumure(Artemiasalina).Seullextrait n-hexaneexhibuneactivitcytotoxiquecontrelacrevettedesaumuremmesionlavraitmoinsactivequelumbelliferoneetlacolchicine.Danslecriblagephytochimiquetouslesextraitsontdonndesrsultatspositifspourlessesquiterpnes,lesextraits thanol et aqueux pour les alcalodes mais seulement lextrait n-hexane tait positif pourlesflavonodesetlavitamineE.Enconclusion,lesglycosidesflavonolpourraienttredesprincipes actifs responsables de lactivit cytotoxique observe (Kivak et Mert, 2002).Dautrestudesontralislisolementetlidentificationdescompossdesfeuillesetdesfruitsde Laurusnobilissupposstrecytotoxique.Ilsontisolssixsesquiterpneslactoneconnueetunnouveausesquiterpnelelauroxepine,cessubstancesactivessesontavresfortementcytotoxiquescontrelalignecellulaireovariennecancreuseA2780.(Fangetal.2005 ; Barla et al., 2007).e) Effet gastroprotectifUneseuletudeatralisecesujetparGrbzetautre(2002)ocinqplantesaromatiquesdont Laurusnobilis,sontemployestraditionnellementenTurquiepourtraiterleClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis14mal destomac. Ils ont t choisis pour dterminer leur pouvoir anti-ulcrogne. Une dcoction etun extrait mthanol ont t prpars partir des fruits de Laurier pour dterminer leurs effets surunmodledulcregastriqueinduitparlthanolchezdesrats.Lesexpriencespharmacologiquesetlestechniqueshistopathologiquesontclairementmontrquecesextraitsdonns oralement ont significativement protg lestomac contre ce modle dulcre. Cette tudedoit tre continue pour l'isolement des constituants actifs et pour rvler leur mode d'activit.f) Effet inhibiteur dabsorption dalcoolLextraitmthanoliquedesfeuilles de Laurus nobilisaefficacementempchllvation dutaux dthanol dans le sang chez un rat charg dthanol. Sept sesquiterpnes actifs ont t isolsen tant quinhibiteurs dabsorption dalcool. La partie active dans ces sesquiterpnes sestavrlapartie -mthylne--butyrolactonequitaitessentiellepourmontrerlasuppressiondelabsorptiondthanol.Enoutre,leretarddevidergastriquetprsumimpliqupartiellementdansleureffetinhibiteur(Matsudaetal.1999 ;Yoshikawaetal.,2000).Cessesquiterpnes ont non seulement un effet prventif efficace pour la toxicit aigu dalcool maispeuvent galement aider des patients viter labus dalcool (Yoshikawa et al., 2000).g) Effet curatif de blessuresLeffet curatif de blessures de lhuile de feuille de Laurus nobilis a t examin par Khalil etses collaborateurs (2007). Une blessure en pleine paisseur a t faite dans le secteur dorsal dessouris Musmusculus.Lesblessuresontttraitesquatrefoisaveclaprparationdhuilependantdeuxjourssuccessifs.Cetteoprationestrptependantplusieursjoursavec12hdintervalle.Aprs16jours,lesblessuresonttvisuellementobserves,photographiquementdocumentetlesecteurdeblessureatmesur.Aprsle16imejour,lesanimauxonttsacrifis et lhistologie du secteur de blessure est examine. Lhuile de Laurus nobilis a montreune bonne activit curative de blessures.h) Effet inhibiteur denzymeFerreira et ses collaborateurs (2006) ont tudi leffet de lhuile essentielle, lextrait thanol etladcoctiondesfeuillesde Laurusnobilissurlactivitdelactylcholinestrase(AChE),enzymequicatalyselhydrolysedelactylcholinedonnantlacholineetlactyle.Lafractionthanol amontr unevaleur leve dinhibition dAChE de 64% (1g/ml), donc la plante Laurusnobilis peut aider trait ou soulager des patients souffrantde lamaladie dAlzheimer,puisquelesdroguesapprouvespourlathrapiedecettemaladieagissentencontrecarrantledficitdactylcholine.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LA PLANTE Laurus nobilis15i) Effet antimicrobienDes huiles essentielles de plusieurs plantes ont t values pour leur potentiel dans le controldumycteaflatoxinognique Aspergillus parasiticusCFR223etdelaproduction daflatoxine.Lhuile des feuilles delaurier a stimule in vitro la croissance desmycliums dumyctemaisarduit la concentration de son aflatoxine de 55.21% (Atanda et al. 2007).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES16III. LES FLAVONODESIII.1. VUE DENSEMBLE SUR LES POLYPHENOLSLespolyphnolssontdesphytomicronutrimentssynthtissparlesvgtauxetquiappartiennentleurmtabolismesecondaire.Ilsparticipentla dfensedesplantescontreslesagressions environnementales (Gee et Johnson, 2001).Les polyphnols,qui formentuneimmensefamille deplusde 8000composs naturels,sontdivissenplusieurscatgories :lesflavonodes quireprsententplusdelamoitidespolyphnols;lestaninsquisontdesproduitsdelapolymrisationdesflavonodes ;lesacidesphnoliques,lescoumarines,leslignanesetdautresclassesexistentennombresconsidrables(Dacosta, 2003).De nombreuses tudes sonten faveur dun impactpositif deleur consommation surla sant.En effet, les polyphnols pourraient permettre de prvenir de nombreuses pathologies comme lecancer(Brownetal.,1998) ,lesmaladiesdgnrativesetcardio-vasculaires(Pagangaetal.,1999).Unencouragementlaconsommationdalimentsdoriginevgtalerichentenpolyphnols constitue dsormais une des principales recommandations en sant publique. Parmilesantioxydantsvgtaux,lespolyphnolsapparaissentparmilesplusefficacesquantleurseffets protecteurs dans lorganisme (Gee et Johnson, 2001).Llmentstructuralfondamentalquicaractriselescompossphnoliquesestlaprsencedaumoins unnoyaubenznique auquelestdirectementliaumoins un groupementhydroxyleainsiquedesgroupesfonctionnels(ester,mthyleester,glycoside)(Bruneton,1999).Lescomposs phnoliques sont commodmentclasss selon le nombre datomes de carbone dans lesquelette de base (Dacosta, 2003).Notreintrtestessentiellementfocalissurlesflavonodes,substancesquenousavonspuidentifier dans tous nos extraits bruts et qui en particulier savrent des composants phnoliquessur possdant une action biologique trs diversifie.III.2. GENERALITES SUR LES FLAVONODES :Letermeflavonodeprovenantdulatin"flavus",signifiant"jaune",dsigneunetrslargegammedecompossnaturelsappartenantlafamilledespolyphnols.Ilssontconsidrscommedespigmentsquasiuniverselsdesvgtaux.Cegroupecomprendcommesonnomlindiquedescompossjaunesmaisaussidautrescouleursouincolores.Structuralement,lesClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES17flavonodes se rpartissent en plusieurs classes de molcules. En effet plus de 6500 structures ontt identifies (Bruneton, 1999 ; Harborne et Williams, 2000).III.3. STRUCTURE CHIMIQUE ET CLASSIFICATION :Leurstructuredebaseestcelledundiphnylpropane15atomedecarbone(C6-C3-C6)constitu de deux noyaux aromatiques (ou anneaux),que dsignentles lettres A et B,relis parun htrocycle oxygn, que dsigne la lettre C (Harborne et Williams, 2000) commele montrela figure 3.Fig. 3 : Structure de base des flavonodes.On remarqueraquafinde distinguerles positionssurlanneauA etcellessurlanneauB,lanomenclaturenormaliseapposecesdernireslesymbole ' (prime).LhtrocycleCestattach au noyau B par une liaison carbone-carbone. Defaon gnrale, les flavonodes peuventtre hydroxyls en position 3, 5, 7, 3, 4, 5et/ou 6. Un ou plusieurs de ces groupes hydroxylessont frquemment mthyls, actyls, ou sulfats (Bruneton, 1999).Ils existent soit ltat libre (dans ce cas ils sont dits aglycones ou gnines), soit sous formede C- ou O- glycosides, ce qui tend les rendre hydrosolubles (ils sont alors lis des sucres telsqueleglucose,lerhamnose,larabinose,leplussouventauxpositions3et7).Ilspeuventenoutre tre des monomres ou des oligomres (Dacosta, 2003).Les flavonodes se diffrencient par le degr doxydation de lhtrocycle C et par les modesdhydroxylationdesanneauxAetB.Danstouteslesclassesdeflavonodesmentionnesci-dessous, la biosynthse justifie la prsence frquente dau moins trois hydroxyles phnoliques enC-5, C-7 et C-4 de la gnine ; cependant,lun dentre eux peut tre absent. Six grandes classesdeflavonodespeuventtrementionnes.Lesflavonesetlesflavonolssontlescompossflavonodiqueslesplusrpandus,alorsquelesflavanones,lesflavanols,leschalconesetlesanthocyanidinessontconsidrscommedesflavonodesminoritairesenraisondeleurdistributionnaturellerestreinte(Bruneton,1999 ; HarborneetWilliams,2000 ; Havsteen,2002 ;Dacosta, 2003) :Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES181. les flavones :Lenoyauflavonedrivdunoyauflavanedebase(dontlastructureestconstituededeuxnoyaux aromatiques(noyauxA etB)etdunhtrocycleoxygn(cycleC)parlafixation laposition 4 dun atome doxygne reli au carbone par une double liaison. Lesprincipauxflavonessontlapignineetlalutoline.Ellesontdanslamajoritdescaslaforme de glycosides.Fig. 4 : Structure de base des flavones.2. les flavonols :Les flavonols se distinguent des flavones par la prsence dun groupement OH enposition C-3.En plusde ce radicalOH,lesdiversesmolculesde flavonolsen comprennentdeux,trois,quatre ou cinq autres. Les flavonols sont beaucoup plus abondants dans le rgne vgtal que lesflavones et leurs concentrations sont plus leves. Les principaux sontla querctine, kaempfrolet myrictine.Fig. 5 : Structure de base des flavonols.3. les flavanones :Cesmolculessontcaractrisesparlabsencededoubleliaisonen2,3etparlaprsencedun centre dasymtrie. Elles existent sous formelibre ou sous formes glycosyles. Sous formeClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES19libre, les carbones en position 5 et 7 sur le cycle A peuvent tre hydroxyles ou mthoxyles. LecycleBpeutaussitresubstituenposition3,4,5et6.Laprincipaleflavanoneest :Lanaringnine.Fig. 6 : Structure de base des flavanones.4. Les flavanols :Ils se distinguentdes flavanones parlabsence la position 4 dun atome doxygne reli aucarbone par une double liaison la plus rencontr estla catchine.Fig. 7 : Structure de base des flavanols.5. les chalcones :Leschalconesetpardfautlesdihydrochalconessontuniquesauseindelafamilledesflavonodes.Dpourvusdu cycle C central,lesdeux cyclesA etB sontrelisparune chanetricarbone ctonique , insature (sature dansle cas des dihydrochalcones). Les cycles A etBsontquivalentsauxcyclesAetBdesautresflavonodesmaisleursnumrotationssontinverses. Les plus abondants sont : butine et phlortine.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES20Fig. 8 : Structure de base des chalcones.6. Les anthocyanidines :Les anthocyanidines ne possdent pas de groupe OH la position 4 et ont une double liaisonentre les positions 3 et 4. Les plus importants sont : plargonidine, cyanidine et ponidine.Fig. 9 : Structure de base des anthocyanidines.III.4. BIOSYNTHESE DES FLAVONOIDES :Touslesflavonoidesontuneoriginebiosynthtiquecommuneet,decefait,possdentlemme lment structural de base, savoir lenchanement phnyl-2 chromane.Ltapecldelaformationdesflavonoidesestlacondensation,catalyseparlachalconesynthase, dune unit phnyle propanode (4-coumaroyl-CoA) avec trois units malonyl-CoA, lastructuredebaseenC-15sousformedunechalconesoit4,2,4,6-tetrahydroxychalcone(Bruneton, 1999) Fig. 10.Fig. 10 : Ltape cl de la formation des flavonodes (Bruneton, 1999).Cettechalconeestlintermdiairecaractristiquedelasynthsedesdiversflavonodes.Elleesten quilibreaveclesflavonodes. Cetquilibre tantcontrl par uneenzyme lachalconeisomrase ,cettedernireinduitunefermeturestrospcifiqueducycleconduisantuneflavanone.Il estleprcurseurdetouteslesclassesdeflavonoidescommelemontrela Fig.11(Remesy et al., 1996).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES21Fig. 11 : Voie de biosynthse des flavonodes (Remesy et al., 1996) III.5. LOCALISATION ET DISTRIBUTION DES FLAVONOIDES :Les flavonodes sontlargement rencontrs dans le rgne vgtal. On signale environ 2% de laproportion du carbone photosynthtique global incorpor dans la biosynthse flavonique. Ils sontcependantrareschezlesvgtauxinfrieurs.Deplus,leurlocalisationauseindelaplanteestClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES22caractristique. En effet, les flavonodes sont omniprsents dans les organes ariens jeunes o ilssont localiss dans les tissus superficiels (Remesy et al., 1996).Au niveau cellulaire, on a observ que les flavonodes, sous forme dhtrosides, sont dissousdanslesucvacuolaireoulocalissdansleschloroplastesetlesmembranesdesvgtaux.Lorsquelesflavonodessontprsentsdanslacuticulefoliaire,ilsagitpresquetoujoursdegnineslibresdontlalipophilieestaccrueparlamthylationpartielleoutotaledesgroupeshydroxyles (Brunton, 1993).En dfinitive,lesflavonodes possdentunelargerpartition danslemondevgtal.Ils sontlargementabondants dansleslgumesfeuilles (salade,choux, pinards,etc.),ainsi que danslestgumentsexternesdesfruits.Onlestrouveprincipalementdanslesagrumes :citrons,orange,pamplemousses etdans unemoindre mesure : abricots, cerises,mres, raisins,papayes, tomateset sarrasin. On en trouve galement en quantit importante dans nombreuses plantes mdicinalesettrsspcifiquementdanslesherbesaromatiquescommelethym,lepersil,leromarinetlecleri (Bronner et Beecher, 1995 ; Remesy et al, 1996).III.6. BIODISPONIBILITE DES FLAVONOIDESLeseffetssantdesflavonodesnedpendentpasseulementdeleursniveauxdeconsommation mais aussi de leur biodisponibilit. Peu dtudes systmatiques ont t menes surla pharmacocintique des flavonodes chez lhomme. Toutefois, daprs des expriences menessur des flavonodes provenant de lalimentation, il apparat que seuls les flavonodes sous forme degnines (ou aglycones) sont susceptiblesdtre absorbs. Lhydrolyse des liaisons htrosidiques (reliantlagninelachanesucre)nintervientquedansleclonolesmicro-organismesdgradentsimultanment les flavonodes dorigine alimentaire. Le foie est largement impliqu dans le mtabolismedes flavonodes absorbs (Hollman et Katan, 1998 ; Walle, 2004). Unemeilleureconnaissancedelabiodisponibilitdesflavonodesestindispensablepourexpliquer leurs effets protecteurs sur la sant.III.7. ACTIVITES BIOLOGIQUES DES FLAVONOIDESDenosjours,lespropritsthrapeutiquesdesflavonodessontlargementtudiesdansledomaine mdical o on leur reconnat des activits biologiques et pharmaceutiques.a. Effets antioxydantsLes flavonodes sont reconnus pour leurs nombreuses activits biologiques,ces activits sontattribues en partie aux proprits anti-oxydantes de ces composs naturels. Les flavonodes sontClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES23susceptiblesderagiraveclaplupartdesespcesractivesoxygnes(Fuhrmanetal.,1995).Lactionantioxydantedecesphytonutrimentsnesexercepasseulementparlinhibitionetladsactivationdesradicauxlibres,ellesemanifesteaussiparlaneutralisationdenzymesoxydantes et par la chlation des traces dions mtalliques responsables de la production de ROS(Halliwell, 1994 ; Cotelle, 2001).A cause de leurs faibles potentiels redox, les flavonodes (Fl-OH) sont thermodynamiquementcapablesderduirelesradicauxlibresoxydants(R

),commelesuperoxyde,leperoxyle,lalkoxyle et lhydroxyle, par transfert dhydrogne et le radical flavonoxy (FL-O) qui en rsultepeutragiravecunautreradicalpourformerunestructurequinonestable(Jovanovicetal.,1998) :Fig. 12 : Pigeage des ROS (R

) par les flavonodes.Dautrestudesontmontrquelesflavonodessontdesbonsinhibiteursdenzymesresponsables de la production des radicaux libres commela xanthine oxydase qui est une sourcebiologiqueimportanteduradicalsuperoxyde(Hansakietal.,1994 ;Cosetal.,1998).Lesflavonodessontaussiconsidrscommedebonschlateursdionsmtalliques(Brownetal.,1998 ; Dacosta, 2003), comme les ions du fer (Fe2+) et du cuivre (Cu+) qui sont essentiels pourcertainesfonctionsphysiologiques,maisilssontaussiresponsablesdelaproduction duradicalhydroxyle par la rduction du peroxyde d hydrogneselon la raction suivante: La querctine est la plus active des flavonodes tudis. La Fig. 13 rsume les sites essentielspour la chlation des ions mtalliques : (a) un noyau catchol sur le cycle B, (b) les groupes 3-hydroxyle et4-oxo du cycle C,et(c) les groupes 4-oxo et5-hydroxyle entre les cycles A etC(Van Acker et al., 1996).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES24Fig. 13 : Flavonodes et leurs sites proposs pour la chlationdes ions mtalliques (Men+) (D aprs Van Acker et al., 1996)Plusieurstravaux dcriventlesrelationsstructures-activitsdesflavonodes(Rice-Evansetal.,1996;VanAckeretal.,1996 ;HarborneetWilliams2000 ;woodmanetal.2005).Cestravaux permettent de connatre les activits anti-oxydantes de ces molcules en fonction de leurscaractristiques structurales. En fait, leur activit antiradicalaire ncessite:a- Les molcules possdant une double liaison entre les carbones C2 et C3 et un groupementcarbonyleenC4sontlesflavonodesdontlesactivitsanti-oxydantessontlesplusmarques, ainsi lactivit de la querctine (un flavonol) est deux fois plus leve que cellede la catchine (un flavan-3-ol). Ceci est d au fait que la querctine possde une doubleliaisonC2-C3etunefonction4-oxo(VanAckeretal.,1996 ;HarborneetWilliams2000).Figure 14 : Comparaison entre deux pentahydroxyphnols (Harborne et Williams 2000).b- La structure ortho-diphnolique du cycle B (=les groupements hydroxyles en position C3-C4)ainsiquunnombreimportantdersidushydroxylesaugmenteraientlepotentielantioxydantdesflavonodespossdantunhtrocyclesatur(Fuhrmanetal.,1995 ;woodmanetal.2005).Rice-Evansetsescollaborateurs(1996)ontdveloppuntestbassurlacapacitdunantioxydantpigerleradicalcationchromophore,lactivitdes flavonodes est compare avec celle du Trolox (une forme soluble de l-tocophrol),et exprime en TEAC (Trolox Equivalent Antioxidant Capacity). Il est noter que plus laClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES25valeurdeTEACestlevepluslamolculeestactive.Lesrsultatsdecettetudeontmontr que lamorine avec deux groupements hydroxyles en mta etle kaempfrol avecunseulgroupementhydroxylesontmoinsactifsquelaquerctine(deuxgroupementshydroxyle en ortho) (Fig. 15).Fig. 15 : Valeurs de TEAC montrant limportance du groupement catchol auniveau du cycle B pour lactivit antioxydante des flavonols (Rice-Evans, 1996).c- Lesflavonodesinactiventetstabilisentlesradicauxlibresgrceleurgroupementhydroxyle(C3-OH)fortementractif.Rice-Evansetsescollaborateurs(1996)ontdmontrlimportancecedernier.Eneffet,Laglycosylationdugroupe3-OHdelaquerctine (cas de la rutine) ou sa suppression (cas de la lutoline) diminue lactivit anti-oxydante.Enanalysanttouscesrsultatsconcernantlacapacitdesflavonodespigerlesradicauxlibresonpeutconclurequelaquerctinesatisfaittouscescritres,elledrivedumotifflavonol, sa structure particulire lui confre les caractristiques les plus souvent mises en avantdanslactivitdunflavonode.Elleestlecomposleplusactifdelafamilledesflavonodes(Rice-Evans et al., 1996).Fig. 16 : Elments essentiels pour l'activit anti-oxydante des flavonodes (Rice-Evans et al., 1996).b. Effets antimicrobiensLespropritsantimicrobiennesdesflavonodesvis--visdediffrentsmicro-organismespathognesontt mises en vidence(Jassim et Naji,2003 ; Taguri etal.,2004 ; Takahashi etClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES26al.,2004 ;YadavaetTiwari,2005).Lesextraitsdeplantesetbeaucoupd'autresprparationsphytochimiquesrichesenflavonodesonttrapportspossderuneactivitantimicrobienne(Tereschuk etal.,1997 ; Essawi etSrour, 2000). Beaucoupde groupes de recherche ontfranchiune tape plus loin, ils ont isol et identifi la structure des flavonodes qui possdent l'activitantimicrobienneouontmesur l'activit desflavonodesdisponiblesdanslecommerce(Sakar1992 ; Kono et al., 1994 ; Verma et al. 1997 ; Hamilton-Miller et Shah, 2000).Les proprits antibactriennes de propolis onttattribues sateneur leve en flavonodes(GrangeetDavey,1990).Satoetsescollaborateurs(1995),ontdmontrleffetbactricidedediffrentes flavanones sur un staphylococcus aureus. Une tude plus rcente a montr le pouvoirantibactriendunflavonodeglycosidecontredessouchesdebactriesgram(+) etgram(-)(Harikrishna et al., 2004),Enraisondelacapacitrpanduedesflavonodesd'inhiblagerminationdessporespathognes des plantes, on leur apropos pour l'usage contre les microbes fongiques pathognesdel'homme(HarborneetWilliams,2000).Deuxnouveauxflavonodes,unflavoneetunflavanone, respectivement isols des fruits de Terminaliabellerica et de l'arbusteEysenhardtiatexana onttmontrcommepossderl'activitcontrelemicrobepathogneopportunisteCandidaalbicans (Valsarajetal.,1997 ;Wachter1999).Deuxautresflavonesisolsdelaplante Artemisia giraldi ont tait rapports exhib une activit contre lespce Aspergillus flavus,uneespcedemyctequicauselamaladieenvahissantechezlespatientsimmunosuppressifs(Zheng,1996).Galangin,unflavonol gnralementtrouv dansdeschantillonsde propolisatmontravoirl'activitinhibitricecontre Aspergillustamarii, A.flavus, Cladosporiumsphaerospermum, Penicillium digitatum et Penicillium italicum (Afolayan et Meyer, 1997).Des travaux ont mis en vidence un impact des flavonodes sur le rtrovirus HIV responsabledu syndrome dimmunodficience acquise (SIDA).Rcemment, des chercheurs ontmontr queles flavonodes pouvaient avoir une action plus slective en interagissant avec une glycoprotinedesurface duvirus HIV,empchantainsilaliaison duvirus lacellulehte(Mahmoodetal.,1993).Le mcanisme des effets antimicrobiens des flavonodes est sans doute trs complexe. Parmiles hypothses avances, on va citer :- Inhibition de la synthse d'acide nuclique (Hilliard, 1995),- Inhibition des fonctions de la membrane cytoplasmique (Tsuchiya et Iinuma, 2000),- Squestration de substrat ncessaire la croissance microbienne,- Inhibition du mtabolisme nergtique microbien (Haraguchi et al., 1998).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES27c. effets anti-inflammatoiresSouslactiondelacyclooxygnaseetlalipooxygnase,lacidearachidonique(acidegrasC20 :4)semtaboliserespectivementenprostaglandines+thromboxaneetenleucotrines,molcules fortement impliques dans le processus inflammatoires. In vitro, plusieurs flavonodessontcapablesdemodifierlemtabolismedelacidearachidoniqueplaquettaire(Middleton,1998 ; Pelzer et al., 1998 ; Yeon, 2001). Ils ont mme report que les effets de la querctine et lamyrictine sont dose-dpendants. A de fortes concentrations, ils inhibentla cyclooxygnase et lalipooxygnase.Cependantdefaiblesconcentrations,seulelalipooxygnaseestaffecte.Enoutre,dautresflavonodestelsquelalutoline,lamorine,lapignineetlachrysineagissentprincipalementsurlactivitdelacyclooxygnase(Laughton,1991 ;Read,1995 ;SnchezdeMedina et al., 2002).Fig. 17 : Inhibition de la lipoxygnases et de la cyclo-oxygnasessous laction de diffrents flavonodes.d. Effets protecteurs vasculairesLesflavonodesagissentsurlesvaisseauxsanguinspourlemaintiendunepermabilitvasculairenormale(Youdim,2002). Deuxflavonoides,lhespridineetlhesprtine(connussousletermecitroflavonoides)exercentdespropritsvasorelaxantes(Oralloetal.,2004). Dautresflavonoides,laquerctineetlasilybine,sontresponsablesduneaugmentationdelarsistancedescapilaires.Cetteactivitseraitenrapportavecleseffetsdecertainsflavonoidessurlesplaquettes, les leucocytes et sur les enzymes intervenant dans la coagulation sanguine (Stoclet etal., 2004).e. effets antiallergiquesClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE :LES FLAVONODES28Lesflavonodessontgalementconnuspourleurseffetsantiallergiques.Ceseffetssontattribus leurinfluencesurla production delhistamine.En effet,lesflavonodesinhibentlesenzymes,tellesquelAMPcycliquephosphodiesteraseetATPaseCa++-dpendante,responsablesdelalibrationdelhistaminepartirdesmastocytesetdesbasophiles.Parexemple, lATPase Ca++-dpendante dgrade lATP produisant ainsi de lnergie afin de faciliterlabsorptionducalciumparlesmembranescellulaires,cequifavoriselalibrationdelhistamine stocke dans les vsicules (Yamamura et al., 1998). En outre, la querctine exerce un puissant effet inhibiteur, de la libration dhistamine partirdesmastocytes,suprieurceluiducromoglycatedesodiumutiliscommemdicamentenempchantlalibrationdelhistamineetdautressubstancesendognesquicausentlasthme(Formica etRegelson,1995).f. Autres effets biologiquesLesflavonodessontcapablesdemodulerlefonctionnementdusystmeimmunitaire,maisleuractionestcomplexeetdemeureencoremallucid.Adosesleves,lesflavonesetflavonolssontdepuissantsinhibiteursdelaprolifrationdeslymphocytesBetT,mais,concentrationsplusfaibles,ilspourraientagircommeimmunostimulantschezlessujetsimmunodprims (Namgoong et al., 1994 ; Middleton, 1998).Lesflavonodes peuventprvenirlediabteouaumoislerduire en inhibantlenzyme aldoserductase.Unetudercentemontreque lamyrictinepossdeuneffethypoglycmiantchezdesanimaux diabtiques (Ong et Khoo, 2000).Lesflavonodes ontt galementtudiespourleurspropritsanti-tumorales(Birtetal.,2001).Parmilesflavonodesnaturels anticancreux,lacatchine tmoignedune activit remarquable (Bracke,1991).Lesflavonodessontcapablesdeprotgerlamuqueusegastriquecontrediversagentsulcrognes.Lanaringineetlaquerctineexercentgalementuneactivitanti-ulcrognemiseen vidence chez le rat dont lulcre gastrique a t induit par lthanol (Martin et al., 1994).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES29IV. RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIEESIV.1. ACTIVIT ANTIOXYDANTESIV.1.1. IntroductionIl existe de nos jours un intrt croissant vis--vis de la biologie des radicaux libres. Ce nestpas seulementd leur rle dans des phnomnes aigus tels que le traumatisme oulischmie,maisaussileurimplicationdansdenombreusespathologieschroniquesassociesauvieillissementtelsquelecancer,lesmaladiescardiovasculairesetinflammatoiresetladgnrescence du systme immunitaire (Guinebert, 2005).IV.1.2. Quest-ce quun radical libre ?Lesradicauxlibressontdesatomesoudesmolculesportantunlectronnonappari.Cettepropritrendceslmentstrsractifsdufaitdelatendancedecetlectronser-apparier,dstabilisantainsidautresmolcules.Lesmolculesainsitransformesdeviennentleurtourdautresradicauxlibresetinitient ainsi uneractionen chane. Cesttypiquementcequi sepasselors de la peroxydation lipidique (Dacosta, 2003 ; Vansant, 2004).Parmi toutes les espces radicalaires susceptibles de se former dans les cellules, il convient dedistinguerunensemblerestreintdecompossradicalairesquijouentunrleparticulierenphysiologieetquenousappelleronsradicauxlibresprimaires,quidriventdirectementdeloxygne.Lesautresradicauxlibres,ditsradicauxsecondaires[Radicalperoxyle(ROO),Radicalalkoxyle(RO)],seformentparractiondecesradicauxprimairessurlescompossbiochimiques de la cellule (Novelli, 1997).L'ensemble des radicaux libres primaires est souvent appel espces ractives de l'oxygne(ROS).Cetteappellationnestpasrestrictive.Elleinclutlesradicauxlibresdeloxygneproprementdit[radicalsuperoxyde(O2),radicalhydroxyl(OH),monoxydedazote(NO)],maisaussicertainsdrivsoxygnsractifsnonradicalairesdontlatoxicitestimportante[l'oxygnesingulet(1O2),peroxydedhydrogne(H2O2),peroxynitrite(ONOO )](Dacosta,2003 ; Favier,2003).La fig. 18 rsumeloriginedesdiffrentes espcesractives deloxygneimpliqus en biologie.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES30Fig. 18 : Origine des diffrentes espces ractives de loxygneimpliques en biologie (Favier, 2003).IV.1.3. Les antioxydantsLesantioxydantssontdessubstancescapablesdeneutraliserouderduirelesdommagescauss par les radicaux libres dans lorganisme et permettent de maintenir au niveau de la celluledes concentrations non cytotoxiques de ROS (Vansant, 2004).Notreorganismeragitdoncdefaonconstantecetteproductionpermanentederadicauxlibres et on distingue au niveau des cellules deux lignes de dfense ingalement puissantes pourdtoxifier la cellule (Favier, 2003).a- Les antioxydants primaires :Lacelluleestpourvuedenzymesantioxydantesquisontdessystmesdedfensetrsefficacespuisquelesenzymesontlapropritdepouvoirraliseruntravaildefaonpermanente. Cette ligne de dfense (Fig. 19) estconstitue de superoxyde dismutase (SOD),decatalase et de peroxydase (glutathion et ascorbate) (Lehucher-Michel, 2001).Cesenzymesantioxydantespermettentlliminationdesradicauxlibresprimaires,selonlesractions suivantes :Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES31H2O2 + O22 O2.- + 2 H+2 H2O22 H2O + O2H2O2 + 2 GSH 2 H2O + GSSGglutathione peroxydasecatalasesuperoxyde dismutaseDecefaitellesprviennentlaformationderadicauxlibresorganiquespartirdeslipidesmembranaires notammentetcontribuentdonc la protection des membranes de la peroxydationlipidique (Dacosta, 2003).b- Les antioxydants secondaires :Cesontdesmolculesexognes.Contrairementauxenzymesantioxydantes,unemolculedantioxydantpigeunseulradicallibre.Pourpouvoirfonctionnernouveau,cettemolculedantioxydant doit donc tre rgnre par dautres systmes (Dacosta, 2003).Fig. 19 : les systmes de dfense contre les radicaux libres.Plusieurssubstancespeuventagirentantqu'antioxydants invivoonttaitproposs.Ellesincluent :lavitamineE,l'acideascorbique,la-carotne,lesflavonodes,lescompossphnoliques,etc. Elles peuvent stabiliser les membranes en diminuant leur permabilit et ellesont galement une capacit de lier les acides gras libres (Kohen et Nyska, 2002). IV.1.4. Balance Oxydants /Antioxydants et stress oxydantLesROSontdesrlesphysiologiquestrsimportantsen agissant,faiblesconcentrations,surlargulationdesrponsesbiologiques,latransductiondusignaletautresvoiesdesignalisation (Favier, 2003).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES32Danslensembledenostissussains,lesdfensesantioxydantessontcapablesdefairefaceetdtruirelesradicauxproduitsenexcs.Onditquelabalance Oxydants/Antioxydants estenquilibre.Maisdanscertainessituations,enraisondunesurproductionradicalaire(tabac,alcool,pollution, )oudunediminutiondescapacitsantioxydantes(insuffisancedapportsdesmicronutrimentsantioxydants,inactivationenzymatiques)undsquilibreentreproductionderadicaux libreset systme de dfense est lorigine dun tat redox altr dela cellule appel stressoxydatif (Sohal, 2002).Le stressoxydantest responsabledudommagecellulaireliauvieillissement,auxmaladiescardio-vasculaires,aucanceretlaplupartdesmaladiesdgnratives.Pourenrayerlestressoxydant,ilfautdoncaiderlacelluleetlorganismeparlapportdantioxydantssecondaires(vitamine C, E, carotnodes, polyphnols.) (Kohen et Nyska, 2002).IV.2. ACTIVIT ANTIMICROBIENNEIV.2.1. IntroductionDslanaissancel'hommesetrouveencontactavecdesmicro-organismesquivontprogressivementcolonisersonrevtementcutano-muqueux.Pourrsistercesmicro-organismesdenombreuxmoyenssontmisenjeu.Onpeutschmatiquementendistinguer3groupes:lesbarriresanatomiques,lesmcanismesdersistancenaturelle(ouinns)etl'immunit acquise (Kaufmann, 1997).IV.2.2. Les principales substances antimicrobiennesa- Les antibiotiquesLes antibiotiques, au sens strict, sont des produits labors par des micro-organismes, mais oninclutgnralementparmieuxlesdrivssemi-synthtiquesetlesproduitsentirementsynthtiques. La thrapeutique des infections bactriennes se base principalement sur lusage desantibiotiques qui inhibent slectivement certaines voies mtaboliques des bactries, sans exercerhabituellement d'effets toxiques pour les organismes suprieurs. Cette proprit les distingue desantiseptiques (Bergogne-Berezin et Dellamonica, 1995).. La prescription grande chelle et parfois inapproprie de ces agents a entran la slectionde souchesmulti-rsistantes dolimportance dorienterles recherches vers de nouvelles voiesetsurtoutverslesvgtauxquionttoujoursconstituunesourcedinspirationdenouveauxmdicaments (Billing et Sherman, 1998).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES33b-Les huiles essentiellesProduitescommemtabolitessecondairesparlesplantesaromatiques,leshuilesessentiellessont toujours utilises comme substances aromatisantes etparfumantes en parfumerie,industriesalimentaireetcosmtiqueetcommeagentsantimicrobiensenmdecinepopulaire,enaromathrapieetenindustriealimentaire(Baudoux,2000).Diffrentestudesrcentesontconfirm, invitro,lactivitantimicrobiennede diverseshuilesessentielles(Hilietal.,1997 ;Billing et Sherman, 1998).Lactivitantimicrobiennedeshuilesessentiellesestprincipalementfonctiondeleurcompositionchimique,enparticulierdeleurscompossvolatilsmajeurs. Eneffet,lactivitantimicrobienneremarquabledelhuileessentiellede Thymusvulgarisesten relation avec sateneurleveenthymol(uncomposphnolique)quiestrputavoirunetrsgrandeactionantimicrobienne(Ettayebietal.,2000 ;Ulteeetal.,2000 ;Friedman etal.,2002 ;Chunetal.,2005).IV.2.3. Les bactries tudiesa- Staphylococcus aureusLesstaphylocoquessontdescocciGrampositifquitendentsegrouperenamas.Uneespce, Staphylococcusaureus (staphylocoquedor),tientuneplacetrsimportantedanslesinfections communautaires et nosocomiales (Chambers, 1997).b- Escherichia coliEscherichia coli(bacilleGramngatif),commensaldutubedigestif,estlabactrielaplusfrquemment implique dans les infections urinaires. Elle peut aussi provoquer des diarrhes pardesmcanismestrsdivers,ainsiquediversesinfectionscommunautairesounosocomiales(Nataro et Kaper, 1998).c- Pseudomonas aeruginosaUncertainnombredebacilles Gramngatif del'environnementsecomportentcommedesbactries opportunistes et sont souvent l'origine dinfections nosocomiales. Il s'agitsouvent debactriesrsistantesdenombreuxantibiotiques.Unedesplusredoutablesest Pseudomonasaeruginosa (Philippon, 1995).Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE BIBLIOGRAPHIQUE : RAPPELS SUR LES ACTIVITES ETUDIES34d- Salmonella typhimuriumSalmonella (bacilleGramngatif) estlapremirecausedetoxi-infectionsalimentairescollectivesbactriennedanslemonde,elleestlunedesproccupationsmajeuresdeslaboratoires de contrle de qualit alimentaire. S. Typhimurium estlargementrpanduedanslesdiffrentsrservoirsanimaux(porcs,bovins,volailles)etdanscertainesdenresdestineslhomme(Medjbar, 2008).IV.2.4. La levure Candida albicansLeslevures sonttypiquementunicellulaires,quoique trs souventles cellules restentcollesles unes aux autres aprs la division cellulaire (fig. 20) (Fuerst, 1976).Candida albicans est la seule levure prise dans notre tude. Elle est principalement loriginede la candidose dissmine. Cest un champignon frquemment retrouv au niveau de la boucheetdutractusgastro-intestinaldeplusieurspersonnesnormales.Parmilesconditionsfavorisantune infection candida, notons le diabte, la grossesse, les antibiotiques, les cortico- strodes ettoutemaladiepouvantaffecterltatgnraldunindividu.Lanystatine(Mycostatin)esttrsefficace dans le contrle des infections muco-cutanes (Pieri et Kirkiacharian, 1992).Fig. 20 : Aspect morphologique des micro-organismestudis (Pieri et Kirkiacharian, 1992)(a) : S. aureus ; (b) : E. coli ; (c) : P. aeruginosa ; (d) : C. albicans.abd cClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comMatriel et MthodesClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES35I. MATERIEL ET METHODESI.1. Matriel vgtaleLes feuilles (sches) des deux espces de plantes Thymus vulgaris L. et Laurus nobilis L. onttachetesaumarchlocal deBatna(Rahba),enfvrier2007.LidentificationbotaniquedesdeuxespcesatraliseparDrOUDJEIHB.,laboratoirede botanique,dpartementdagronomie, universit EL-Hadj Lakhdar, Batna.Les feuillesont t nettoyes, laves avec de leau du robinet et sches lombre. Elles ontt ensuite peses, broyes grossirement et rcupres dans des sacs propres.I.2. Dtermination de la teneur en eauLe taux dhumidit, dans nos chantillons (la poudre des feuilles sches de nos plantes), tdtermin par le procd de dessiccation une temprature de 105 C dans une tuve isothermeventile la pression atmosphrique jusqu' lobtention dun poids constant (Linden et Lorient,1994).Considrons :xPoids de lchantillon ;yPoids de lchantillon aprs dshydratation ;I%Taux dhumidit exprim en pourcentage ;I% =x - yx 100;Pour plusieurs mesures, on calcule lhumidit moyenne :I% ( moy. ) = I1% +I2% +. + In% / n ;n Nombre totale dchantillon ;Moy. : Moyenne ;I1% Humidit de lchantillon N 1;In% Humidit de lchantillon N n.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES36I.3. Prparation des extraitsI.3.1. Extraction par les solvants organiques polarit croissanteLextractionesteffectueparpuisementsuccessivedumatrielvgtal,enutilisanttroissolvantspolaritcroissante:therdeptrole(EP),dichloromthane(DCM)etmthanol(MeOH), mthode dcrite par Biallo et al. (2004). La quantit de solvant doit tre approprie laquantit de matirevgtale dont nous disposons (dans notre cas, 2 L de solvantpour 200 g dedrogue).Lextraction esteffectuesousagitationcontinueettempratureambiantedurant24heures.Aprsfiltration,lersiduestensuiteconcentrparvaporationrotativedansunRotavapeur (BCHI) la fig. 22 illustre les tapes suivies dans cette extraction.Fig. 22 : Schma dextraction par les solvants organiques des poudresde feuilles de Thymus vulgaris et Laurus nobilis.I.3.2. Extraction par macration leauLa poudre de feuilles (200 g) de chacune des deux espces slectionnes est mise macrer tempratureambiantedansleaudistille(2L)pendant24heures.AprsdcantationduClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES37mlange,lextraithydriqueestrcuprparfiltrationsurpapierWattman.Lefiltratobtenuestimmdiatementcongel 4 C puislyophilisdans un lyophilisateur. Leslyophilisats onttrcuprsdansdesflaconsenverrehermtiquementfermetconserv4Cjusquleurutilisation o ils sont reconstitu avec de leau distille aux concentrations voulues.Fig. 21 : Schma de macration par leau distille des poudresde feuilles de Thymus vulgaris et Laurus nobilis.La srie dextraction permetdobtenir quatre extraits bruts :un extraitaqueux (Aq) ettroisextraitsorganique :extraittherdeptrole(EP),extraitdichloromthane(DCM)etextraitmthanolique (MeOH). Les extraits secs sont conservs 4Cjusqu utilisation.I.4. Dtermination du rendementLe poids en extraits secs estdtermin parla diffrence entrele poids du ballon plein (aprslimination du solvant par vaporation rotatif) et le poids du ballon vide.I.5. Etude phytochimiquedes extraitsDanslebutdecaractriserlesextraitsprparspartirdesfeuillesde Thymusvulgaris etLaurus nobilis, des analyses qualitatives et quantitatives ont t effectues.I.5.1. Analyses qualitativesCettetudepermetdemettreenvidencelaprsencedequelquesgroupeschimiques(polyphnols, flavonodes) dans nos extraits. Les essais de caractrisation en tube permettent unerecherchegrossiredescomposantschimiques;lesrsultatspeuventtredifficilementinterprtables. La CCM et lHPLC confirme les tests en tube.Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES38I.5.1.1. Essais de caractrisation en tubeLaraisonprincipalepourlechoixdecessubstances (flavonodes)rsidedanslefaitquelamajorit des effets pharmacologiques des plantes leur sont attribus.Mthode :Laprsenceoulabsencedesflavonodesdansunextraitpeuttremiseen videnceparuntest simple et rapide appel " raction de Shinoda"(Lock et al., 2006). Le test consiste ajouter1mldelextrait,quelquesgouttesdHClconcentr(2N)etenviron0,5gdemagnsiummtallique. Laisser agir 3 min et regarder le changement de couleur. La prsence de flavonodesest confirme par la coloration rouge, orange, rose ou rouge violac.I.5.1.2. Essais de caractrisation par chromatographie sur couche mince (CCM)Lanalyse des extraits bruts parchromatographie surcouche mince (CCM,TLC en anglais)nouspermetdansunpremiertempsdavoiruneidesurlesdiffrentesclassesdecomposscontenus dans les extraits tests.Principe :La CCMest une techniqueanalytiquesimple, rapide etpeu coteuse, utilise au cours delasparationetdelidentification desmtabolites.Elle reposeprincipalementsurlesphnomnesdadsorptionetdepartage,olesmolculessparersadsorbentlasurfacedunsupport(phase stationnaire) et seront entraines travers ce dernier par un luant (phase mobile), donc lasparation estfonction des diffrences dadsorption des composants de lchantillon surla phasestationnaireetdesdiffrencesdeleursolubilitdanslaphasemobile(BraithwaiteetSmith,1999).Mthode :Les analyses sont effectues en phase normale, avec des plaques de silice (Silicagel 60 F254,de0,25mmdpaisseur)dposessurfeuilled'aluminium,cequiconstituelaphasestationnaire.Sur les plaques prpares, on a dpos 10 l de chaque extrait (100 mg/ml) et standard (5 mg/ml)etlesplaquessontensuiteintroduitesdansdescuvesconventionnellesenverrepralablementsatureparlaphasemobile,quipeuttregnralementunmlangebinaireouternairedesolvants,selonletypedesparationrecherche.Dansnotrecas,deuxsystmesdesolvantsontt utiliss (Biallo et al., 2004) : Ether de ptrole - Actate dthyle (80 : 20 V/V) pour les extraits apolaire (EP et DCM) ;Click here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES39 n-Butanol - Acide actique - Eau (60 : 15 : 25 V/V/V) pour les extraits MeOH et Aq ;Aprs dveloppement, les plaques CCM sont sches, observes sous lampe UV 254 nm et 366nm, pulvrises par un mlange vanilline sulfurique, puis sches 60C pendant 5 minutes finde rvler les spots issus de la sparation.A254nm,lestchessontencerclesentraitpleinet366nm,ellessontencerclesenpointills,sesontlessubstancesUVactives.Lavanillinesulfurique(ractifdeGodin)estunractif spectre large permet de caractriser des terpenodes, des drivs de type phnylpropanesetdesphnols.Elleestformedunmlange(V/V)dunesolutionthanoliquedacidesulfurique (V/V) et dune solution thanolique de vanilline 1%.Les Rf sont compars ceux des tmoins disponibles facilitant ainsi lidentification de quelquesconstituants des diffrents extraits. La valeur du Rf est dfinie comme suit : : Distance entre lorigine et la tche du produit aprs lution.s : Distance entre lorigine et le font du solvant aprs lution.ChaquesubstanceatidentifieparsafluorescencesousUV,parsonrapportfrontal (Rf)dans un systme de solvant prcis et par sa couleur aprs rvlation avec le ractif de la vanillinesulfurique.I.5.1.3. Essais de caractrisation par chromatographie liquide haute performanceLa technique de sparation la plus apprcie en analyse phytochimique est la chromatographieliquide haute performance (pression), abrge HPLC (CLHP en franais).Principe :Lamthodedesparationquelleutilisefaitappelauxmmeslmentsdebasequeceuxemployspourlachromatographieclassiquesurcolonne,soitunouplusieurssolvantsetunecolonneremplieavecunephasestationnaire,maisavecunappareillageplussophistiqu.Lagrande diffrence par rapport la chromatographie classique rside dans la dure dlution. Cettevitesseestobtenueparlapplicationdunepressionlevegrceunepompequimaintientconstantledbitdelluent,ellesedistinguegalementdelachromatographieclassiqueparlutilisation dun dtecteur dontlemessage estenregistr puis exploit par un dtecteur reli ausystme (Braithwaite et Smith, 1999).Rf =/ sOClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comClick here to buyABBYYPDFTransformer2.0www. ABBYY.comPARTIE EXPERIMENTALE :MATERIEL ET METHODES40Mode opratoire :Lesanalysesonttraliseslaidedunchromatographe HPLC-RP-C18,quipdlments suivants :- unecolonne(dunelongueurde125mm etdund