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République Algérienne Démocratique et populaire
Ministère de l’enseignement Supérieur et de
La Recherche Scientifique
Université L’arbi ben Mhidi Oum El bouaghi
Faculté des sciences exactes et sciences de la nature et de la vie
Département des sciences de la nature et de la vie
N° d’Ordre :………..
Série :…………
Master en Biologie
Option : Biochimie des Molécules bioactives et leurs applications
Thème
Présenté par :
Ghouar meroua Sabeg Khawla
Devant les membres du jury :
Président: Malki Samira MCBUniversité Oum el bouaghi
Rapporteur : Boudjouref Mourad MAA Université Oum el bouaghi
Examinatrice : Mazoz Wissem MABUniversité Oum el bouaghi
Année universitaire 2017-2018
Étude des activités biologiques de la plante
Artemisia campestris
Dédicace
Je dédie ce modeste travail à mes très chers particulières parents Ma belle mère, Mon tendre père qui ont sacrifié les plus belles années de leur vie pourme voir un jour réussir et pour leur soutient morale et l’encouragement durant toute ma vie et au moment particulier du projet
A mes biens aimes grands-mères et grand-père.
Je dédie à tout ma famille en particuliers mes sœurs et.mes frère.
A mes chers amies: Rania hassini ; manel yahiawi ; kanza yahiawi et aicha maazar .
Mes dédicaces vont aussi à ma famille sabeg et la famille hamdani.
-Khawla-
Dédicace
Je dédie ce mémoire
A mes parent ma mère Souad et mon père Salem
Pour leur patience, leur amour, leur soutien et leurs encouragements.
Mes grands-mères ; que dieu les garde pour nous
Zahra et elbadja
A ma deuxième mère khdoudja
Mon seul frères Akram
Mes sœurs : Khaoula ,Rayene, Roya ,Amira cherghi
Mes petits : maria et Mohammed
Atouts mes amies
A tous qui sont dans mon cœurs mais j’ne suis écrirai pas.
Et touts mes enseignants, qui m’ont suivit de mes premières années
À l’école jusqu’ici.
-Meroua-
Liste des tableaux
Tableau 1: systématique de la plante Artemisia campestris……………………………………4
Tableau 2:La couleur, l’aspect et le rendement d’extraction de la partie aérienne
d’Artemisia campestris. …………………………………………………………………......12
Tableau 3 : Criblage phytochimique d’Artemisia campestris………………………………...13
Tableau 4 :Teneurs en polyphénols totaux dans les extraits d’Artemesia campestris………..15
Tableau 5 :Teneurs en flavonoïdes dans les extraits d’Artemesia campestris……………… 16
Tableau 6 :Les valeurs des CI50 des extraits d’Artemisia campestris et de l’antioxydant
standard (BHA)……………………………………………………………………………… 19
Tableau7 : Diamètre des zones d’inhibition de la croissance bactérienne de l’extrait
d’A.campestris d’Oum El Bouaghi………………………………………………………….. 22
Tableau 8 : Diamètre des zones d’inhibition de la croissance bactérienne de l’extrait
d’A.campestrisdeBoussaâda…………………………………………………………………. 22
Listes des figures
Figure 1 : Artemisia campestris L……………………………………………………………..3
Figure 2:Courbe d'étalonnage de l'acide gallique………………………………………….…14
Figure 3 :Teneurs en polyphénols des extraits d’Artemisia campestris……………………...15
Figure 4 :Courbe d'étalonnage de la quercétine ……………………………………………..16
figure 5: Teneurs en flavonoïdes des extraits d’Artemisia campestris………………………17
figure 6:Activité anti-radicalaire de l’anti-oxydants standard (BHA) vis-à-vis du radical
DPPH………………………………………………………………………………………....18
Figure 7:Activité anti-radicalaire des extraits vis-à-vis du radical DPPH de région
Oum El Bouaghi. ………………………………………………………………………….…18
Figure 8: Activité anti-radicalaire des extraits vis-à-vis du radical DPPH de région
Boussaâda……………………………………………………………………………………..19
Figure 9 :Activité anti-radicalairede BHA et des extraitsd’Artemisia campestris………...….20
Figure10: Comparaison de la capacité antioxydante totale des extraits……………………...21
Liste des abréviations
AAR : activité anti- radicalaire
BHA: Butylated hydroxyanisole
CI50: Concentration inhibitrice à 50%
DMSO: Diméthyl sulfoxyde.
DPPH: 2, 2- diphenyl-1- picrylhydrazyl.
MH: Mueller Hinton agar.
h : heure.
Mg: Magnésium.
min: minutes.
nm : nanomètre
s : second.
ME :poids en gramme de l’extrait sec.
MV : poids en gramme de la poudre végétale utilisée.
R :rendement par rapport au poids de la matière végétale utilisée.
Abs : absorbance.
SOMMAIRE Liste des tableaux
Liste des figures
Liste des abréviations
Partie théorique
La plante Artemisia campestris
1-Introduction ………………………………………………………………………………..1
1-1.Généralité ………………………………………………………………………………...2
1-2.Nom vernaculaires ……………………………………………………………………..…2
1-3.Description botanique ……………………………………………………………………2
1-4.Systématique de la plante ………………………………………………………………3
1-5.Origine Et Distribution ……………………………………………………………..……3
1-6. Composition chimique …………………………………………………………………..4
1-7. L’utilisation traditionnelle d’Artemisia campestris ……………………………………..4
1-8. Activités biologiques d’Artemisia campestris ……………………………………………4
1..Les métabolites secondaires ………………………………………………………….…….6
1.1Les polyphenoles ………………………………………………………………….……..6
1.2.Les flavonoïdes ……………………………………………………………………….…6
Partie expérimentale
Matériels et méthodes
1-Matériel végétal ……………………………………………………………………………7
2. Méthodes d’analyse …………………………………………………………………….…7
2.1. Extraction par les solvants ………………………………………………………….…..7
2.2.Détermination du rendement …………………………………………………………..…..7
3.Etude phytochimique des extraits ……………………………………………………….…7
3.1. Analyses qualitatives ………………………………………………………………….…8
3.1.1. Détection des phénols …………………………………………………………………..8
3.1.2. Détection des flavonoïdes……………………………………………………...………..8
3.1.3. Détection des tanins ……………………………………………………………..……..8
3.1.4. Détection des saponines…………………………………………………………………8
3.2. Analyses quantitative ……………………………………………………………………..8
3.2.1. Dosage des polyphenols totaux …………………………………………………………8
3.2.2. Dosage de flavonoïde……………………………………………………………………9
4. Tests des activités biologiques …………………………………………………………….10
4.1. Activité antioxydant ………………………………………………………………….....10
4.1.1. Test de DPPH…………………………………………………………………………..10
4.1.2.Test de capacité antioxydante totale (TAC)…………………………………………….10
4.2. Activité antibactérienne ………………………………………………………………....11
Résultats et discussion
1.1.Rendement des extractions ……………………………………………………………….12
1.2. Analyse chimique qualitative ……………………………………………………………12
1.3. Analyse quantitative ……………………………………………………………………..14
1.3.1. Dosage des polyphénols totaux ………………………………………………………14
1.3.2.Dosage des flavonoïdes …………………………………………………………..……15
Activité antioxydante des extraits d’Artemisia campestris ………………………………..…17
1.Effet antiradicalaire …………………………………………….………………….………17
2.Activité antioxydante totale ..........................................................................................…...20
L’activité antimicrobienne…………………………………………………………………....21
toctulcnoc …………………………………………………………………………………..23
Références bibliographiques …………………………………………………………………24
Résumé………………………………………………………………………………………..30
1
Introduction :
Une étude réalisée par l'Organisation mondiale de la santé a révélé qu'environ 80% de la
population mondiale utilisent des médicaments non conventionnels, en particulier les plantes
dans leurs soins de santé primaires (Chan, 2003).
Les plantes médicinales restent encore le premier réservoir de nouveaux médicaments,
Elles sont considérées comme source de matière première essentielle pour la découverte de
nouvelles molécules nécessaires à la mise au point de futurs médicaments (Maurice, 1997).
L’étude de la chimie des plantes est toujours d’une brûlante actualité malgré son ancienneté.
Cela tient principalement au fait que le règne végétal représente une source importante d’une
immense variété de molécules bioactives. Cette matière végétale contient un grand nombre de
molécules qui ont des intérêts multiples mis à profit dans l’industrie alimentaire, en
cosmétologie et en pharmacie. Parmi ces composés on retrouve, les coumarines, les
alcaloïdes, les acides phénoliques, les tannins, les terpènes et les flavonoïdes (Bahorun et al.,
1996).
Le but de cette étude est d’évaluer l’activité antioxydante et antimicrobienne des extraits
organiques de la partie aérienne d’Artmesisa campestris,connue en Algérie sous le nom de
Dgouft, cette plante est utilisée en médecine traditionnelle algérienne pour traiter les maladies
digestives, cutanées et respiratoires.
2
1-1.Généralité
Le genre Artemisia estest considéré l'un des genres les plus grands et les plus largement
distribués de la famille des Astracées (Compositae). C'est un genre hétérogène, composé de
plus de 500 espèces diverses réparties principalement dans les zones tempérées d'Europe,
d'Asie et d'Amérique du Nord. Ces espèces sont pérennes, herbes bisannuelles et annuelles ou
petits arbustes (Watson et al., 2002; Mehrdad et al., 2007)
Dans la flore de l'Algérie ,ce genre est représenté par 11 espèces spontanées parmi lesquelles
se trouve Artemisia campestris communément appelées "dgouft". Quezel et Santa (1963).
1-2.Nom vernaculaires
Taguq, tguft, degoufet, tadjuq, tedjok, alala, hellala, tamemmayt, um nefsa (Benchelah et al.,
2004; Boudjelal et al., 2013; Boulanouar et al., 2013; Djidel et al., 2009; Ferchichi et al.,
2006; Gast, 1989; Hammiche and Maiza, 2006)
1-3.Description botanique
A.campastrisL est une sous-arbrisseau vivace, que mon atteindre 30-150cm de hauteur, avec
des tiges ramifiées et ascendantes qui d'une forme panicale, il est généralement brunâtre -
rouge et glabre, et acquiert une forme lignifiée dans la partie inférieure et un en haut
(Chalchat et al., 2003, Quezel et Santa, 1962).
Les feuilles sont vertes, sereines lorsqu'elles sont jeunes, souvent glabres à maturité, les
feuilles basales sont 2-3 pinnatisect, pétiolées ou même auriculées, les parties supérieures sont
les plus simples (Chalchat et al 2003, Quezel et Santa, 1962).
La plante a une inflorescence composée: le capitulum, ovoïde et hétérogame, contenant 8 à 12
fleurs, organisé sur un réceptacle convexe et glabre, et entouré de bractées glabres
involucrales organisées en plusieurs rangs. Les fleurs du rayon sont femelles, pistillées et
fertiles, tandis que les les fleurs en disque sont stériles et fonctionnellement mâles avec des
ovaires avortés réduits (Chalchat et al .,2003, Gillet et Magne, 1863, Ouyahya, 1990, Quezel
etSanta,1962).
Les fleurs mâles sont tubulaires, jaunâtres, dépourvues de calice, de pétales fuselés et
d'étamines 5fusées, avec la présence de sacs sécrétoires sur les lobes de la corolle des fleurs
du disque (Minami et al 2010). Le fruit est un akène ovoïde dépourvu de pappus (Kreitschitz
et Vallés , 2007).
3
Figure 1 :Artemisia campestris L.(Chema,2006)
1-4.Systématique de la plante
Selon Caratini (1971), la plante Artemisia campestris est classée dans:
Règne Plantae
Sous règne Tracheobionta
Embranchement Spermatophyta
Sous embranchement Magnoliophyta
Classe Magnoliopsida
Sous classe Asteridae
Ordre Asterales
Famille Asteraceae
Sous famille Asteroideae
Tribu Anthemideae
Sous Tribu Artemisiinae
Genre Artemisia
Espèce Artemisia campestris L.
1-5.Origine Et Distribution
L’espèceArtemisia est distribuée dans l’hémisphère nord, en particulier sur la cote
méditerranéenne de l’Europe, sud-ouest de l’Asie et de l’Afrique (Ferchichi. L et al .,2006),
certaines en Afrique du Sud et dans l’Ouest de l’Amérique du Sud (Many. 2008). Dans le
nord-ouest de l’Italie, cette espèce utilisée dans des boissons alcoolisées en parfumerie et
dans une gamme d’applications alimentaires.( Mucciarelli. M et al .,1995).
4
1-6. Composition chimique
Différentes classes de métabolites secondaires ont été mis en évidence dans la partie aérienne
d’Artemisa campestris. Ces métabolites secondaires sont consignés dans le tableau 1.
Métabolites secondaires Molécule identifiée Référence
Polyphénols Flavonoïdes (flavones, , flavanone)
Polyphénols
Tanins
Amelia. P et al 1989
Ghlissi et al 2016
Huiles essentielles Monoterpènes, sesquiterpènes Belhattab et al 2011
Coumarines Hydroxycoumarines, esculetin Masotti. V et al. 2012
Alcaloïdes ND
Saponines
1-7. L’utilisation traditionnelle
Artemisa campestris est largement utilisée en médecine traditionnelle grâce à ses propriétés
bactéricides, antifongiques, antiinflammatoires, antihelminthiques, antivenins et analgésiques
(carvalho et al, 2011 ; Ghlissi et al, 2016).
La partie aérienne est utilisée dans le traitement de brûlures, de la diarrhée, les morsures de
serpent, les piqures de scorpions, l’eczéma, la gastroentérite, la dysenterie, le rhumatisme,elle
estégalement utilisée pour traiter les infections urinaires, la fièvre la toux et les problèmes
menstruels (Ben Sassi et al .,2007 ; Dob et al.,2005).
Les fleurs d'Artemisia campestris ont été utilisées comme agent hypoglycémique, dépurative,
antilithiasique, ainsi que pour le traitement de l'obésité et pour diminuer le taux de cholestérol.
(Sijelmassi A., 1993, Le Floc’h,1983).
1-8. Activités biologiques
En plus de leurs utilisations traditionnelles, Artemisia campestris possède de nombreuses
propriétés biologiques,parmi lesquelles on cite les plus importantes :
5
Effets antimicrobiens
L'extrait de feuilles méthanoliques d'A. campestris a exercé une activité antibactérienne
uniquement contre Gram positif sans aucun effet antagoniste contre les espèces bactériennes à
Gram négatif. Les concentrations minimales inhibitrices contre Bacillus subtilis,
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Salmonella typhi
étaient respectivement de 12,5, 12,5, 250, 500 et 250 μg / ml (Bnouham M et al .,2002).
L'activité antibactérienne de l'huile essentielle d'Artemisia compestris L. a été testée contre
Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas
aeruginosa ATCC, Pseudomonas aeruginosa 27853, Salmonella typhimurium,
Staphylococcus aureus ATCC 43300 et Staphylococcus aureus. La meilleure activité
antibactérienne a été observée obtenus avecPseudomonas aeruginosa ATCC 27853 et
Escherichia coli avec des zones d'inhibition de 23 mm et 20 mmrespectivement(Djidel S and
Khennouf S.,2014).
Effets Antioxydants
L'huile essentielle d'Artemisia campestris et les extraits éthanol-eau, hexane et eau d'A.
Campestris récoltés dans le sud de la Tunisie ont été étudiés pour leur activité antioxydante
par l’utilisation de différentes méthodes (DPPH, ABTS et bêta-carotène) ils ont trouvé que
extraits d'éthanol et aqueux ont montré une activité antioxydante élevée (Akrout A et al.,
2011).
6
1.Les métabolites secondaires
Les métabolites secondaires sont des molécules organiques complexes synthétisées et
accumulées en petites quantités par les plantes autotrophes, ils sont divisés principalement en
trois grandes familles: Les polyphénols, les terpènes, les alcaloïdes (Lutge et al., 2002 ;
Abderrazak et Joël., 2007).
1.1.Les polyphénols
Les polyphénols sont des composés caractérisés la présence d’au moins un noyau benzénique
auquel est directement lié au moins un groupe hydroxyle, libre ou engagé dans une autre
fonction telle que l’éther, l’ester ou un hétéroside(Bruneton, 2009).
Les composés phénoliques possèdent une structure qui varie depuis les molécules simples
comme les acides phénoliques simples vers les molécules les plus hautement polymérisées
tels que les tanins condensés .(Urquiaga et Leighton, 2000).
1.2.Les flavonoïdes
Les flavonoïdes lato sensu sont des pigments quasiment universels des végétaux. Presque
toujours hydrosolubles, ils sont responsables de la coloration des fleurs, des fruits et parfois
des feuilles.tel est le cas des flavonoïdes jaunes (chalcones ,aurones ,flavonols jaunes),des
anthocyanosides rouges, bleus ou violets .quand ils ne sont pas directement visibles ,ils
contribuent à la coloration par leur rôle de Co-pigment :tel est le cas des flavones et des
flavonols incolores Co-pigmentant et protégeant les anthocyanosides çf(Pharmacognosie) .
7
1. Matériel végétal
La récolte de la plante A campestris a été effectuée au mois de Novembre dans deux régions :
Boussaâda et Oum el-bouaghi.
La partie aérienne de la plante est nettoyée ensuite séchée à l’ombre, à l’abri de l’humidité et
à une température ambiante puis conservées dans des sacs en papier jusqu’à l’utilisation.
2. Méthodes d’analyse
2.1. Extraction par les solvants
La méthode d’extraction que nous avons adoptée est la macération successive en utilisant
deux solvants organiques ; il s’agit d’éther de pétrole et chloroforme.
La quantité de solvant doit être appropriée à la quantité de matière végétale à extraire. Dans
notre cas la macération est faite avec 50 g de la plante dans 200ml d’éther de pétrolependant
24 heures. Après filtration sur la bande à gaze et ensuite sur un papier filtre,puis une
deuxième macération a été réalisée.
Le marc est ensuite macérépar 150ml de chloroforme pendant 24 heuresavec un maximum
d’agitation.Après filtration sur un papier filtre, le filtrat est récupéré entièrement. L’opération
est répétée une seconde fois sur le marc. Les filtrats sont recombinés puis évaporés à sec à
l’aide d’un évaporateur rotatif “BÜCHI” à une température de 40 - 50 °C. L’extrait sec est
conservé au réfrigérateur.
Cette extraction a permet d’obtenir un extrait organique brut: l’extrait de chloroformique ,qui
est récupérés dans des flacons en verre puis conservés à 4° C jusqu’à utilisation.
2.2. Détermination du rendement
Le rendement représente la quantité des composés ou substances pouvant être extraites par un
solvant typique dans des conditions spécifiques (Diallo.,2005).
R(%)=ME/MV x100
2.3. Etude phytochimique
Dans le but de caractériser les extraits d’Artemesia campestris,des analyses qualitatives et
quantitatives ont été effectuées.
8
2.3.1. Analyses qualitatives
Les analyses qualitatives permettent de mettre en évidence la présence de quelque groupes
chimiques (alcaloïdes, flavonoïdes, tanins, saponosides) dans les extraits (Akrout,2005).
2.3.1.1. Détection des phénols
Un volume de 0.5 ml d’extrait est introduitdans un tube à essai à lequel est ajouté 3 ou 4
gouttes de Fecl3 à (5%). L'apparition de la coloration, bleu noire indique la présence des
phénols (Martinez, 2003).
2.3.1.2. Détection des flavonoïdes
La réaction effectuée à partir de 5 ml d'extrait placé dans un tube puis 1ml de l’acide
chlorhydrique(HCL) et 0.5gde magnésium (Mg) sont ajoutés. L'apparition de la coloration
rose, orange ou rouge indique la présence des flavonoïdes (Malec et Pomilio, 2003).
2.3.1.3. Détection des tanins
La réaction effectuée à partir de 1 ml d'extrait placé dans un tube dans lequel est ajouté un
volume de 1ml de l’eau distillée puis quelques gouttes de FeCl3 (1%).L'apparition d'une
coloration vert ou bleu vertindique la présence des tanins (Karumi et al., 2004).
2.3.1.4. Détection des saponosides
Pour les saponines, 10 ml d’extrait est introduit dans un tube à essai,puis le tube est agité
fortement pendant 15 secondes puis laissés au repos pendant 15 min. Une hauteur de mousse
persistante, supérieure à 1 cm indique la présence de saponosides. (Banga et al., 2011).
2..3.2. Analyses quantitative
2.3.2.1. Dosage des polyphenols totaux
La teneur en phénols totaux dansl’extrait de la plante a été déterminée par la méthode de
Singleton (1965) utilisant le réactif de Folin–Ciocalteu.
La méthode fait appel à un mélange d’acide phosphotungstique (H3PW12O40) et acide
phosphomolybdique (H3PMO12O40) qui est réduit lors de l’oxydation des phénolsen un
mélange d’oxydes bleus de tungstène et de molybdène (Mo8O23) (Ribereau-Gayon et al .,
1976).
9
2.3.2.1.1 Mode opératoire
Un volume de 200µlde la solution d’extraits avec des concentrations bien déterminéessont
ajoutés ajoutés à 1 ml de réactif de Folin-Ciolcalteu (10%). après 4 min d’incubation, un
volume de 800µl de carbonates de sodium (Na2Co37.5%) sont additionnés .le mélange est
laissé réagir pendant 2 heures à température ambianteet à l’abri de la lumière,puis la lecture
est faite à 765 nm.
L’acide gallique est utilisé comme standard (0-200 ug/ml)pour établir la courbe d’étalonnage.
Toutes les opérations sont réalisées en duplicata. La teneur en polyphénols totaux est calculée
à partir de l’équation de régression de la gamme d’étalonnage ;elle est exprimée en
microgramme d’équivalent d’acide gallique par milligramme d’extrait (µg
EAG /mg d’extrait).
2.3.2.2. Dosage des flavonoïdes
La détermination de la teneur en flavonoïdes est effectuée en suivant la méthode de chlorure
d’aluminium (CHANG et al., 2002).
2.3.2.2.1 Mode opératoire
1 ml d’extrait d’A.campestris est introduit dans un tube à essai, 1 ml de solution méthanolique
de chlorure d’aluminium (AlCl3 à 2 %)est ajouté. Après 15 min d’incubation, à température
ambianteet à l’abri de la lumière, les absorbances sont mesurées par le spectrophotomètre à
430nm. Toutes les manipulations sont répétées 2 fois. La même opération est effectuée pour
la quercétine à différentes concentrations.
La teneur en flavonoïdes est calculée à partir de l’équation de régression de la gamme
d’étalonnage en utilisant la quercétine comme standard. Les résultats sont exprimés en
microgramme d’équivalent de quercétine par milligramme d’extrait (µg EQ /mg d’extrait).
10
4. Tests des activités biologiques
4.1. Activité antioxydante
4.1.1. Test de DPPH
4.1.1.1. Principe
L’activité antiradicalaire des différents extraitsest évaluée par le test au 2,2-diphényl-2-
picryl-hydrazyle (DPPH),elle est réalisée par la méthode décrite par (Blois.1958).
Le radical DPPH (diphénylpicryl-hydrayl) caractérisé par une couleur violette foncée en un
composé jaune (diphénylpicryl-hydrazine) est réduit par les antioxydants en un composé
jaune (diphénylpicryl-hydrazine) dont l'intensité dela couleur est inversement proportionnelle
à la capacité des antioxydants présents dans le milieu à donner des protons .
4.1.1.2. Mode opératoire
Un volume de 1ml de la solution méthanolique de DPPH (0.1mM) est mélangé avec 1ml des
solutions d’extraits ou de l’antioxydant standard (BHA) àdifférentes concentrationsle mélange
est vigoureusement agité. Après 30 minutes d’incubation à l’obscurité et à
températureambiante, les absorbances sont mesurées à 517 nm contre le blanc correspondant.
L’activité antiradicalaire est estimée selon l’équation suivante :
% Activité antiradicalaire = (Abs contrôle - Abs échantillon / Abs contrôle) x 100
Activité antioxydante totale (TAC)
La capacité antioxydante totale (TAC) des extraits est évaluée par la méthode de
phosphomolybdène de Prieto et ses collaborateurs (1999). Cette technique est basée sur la
réduction de molybdène Mo (VI) présent sous la forme d’ions molybdate MoO42- à
molybdène Mo (V) MoO2+ en présence de l’extrait pour former un complexe vert de
phosphate/ Mo(V) à pH acide (Prieto et al.,1999).
Mode opératoire
Un volume de 0.2 ml de l’extrait est mélangé avec 3 ml de la solution (0.6 M acide sulfurique,
28 mM phosphate de sodium et 4 mM molybdate d’ammonium),ensuite les tubes sont incubés
pendant 90 min à la température de 95°C. Après refroidissement, l’absorbance des solutions
11
est mesurée à 695 nm contre le blanc correspondant qui est incubé dans les mêmes conditions
que l’échantillon.La même opération est effectuée pour l’acide ascorbique à différentes
concentrations.
La capacité antioxydante totale est exprimée en milligramme équivalents d’acide ascorbique
par gramme de la matière sèche (mg EAA/ g MS). Toutes les manipulations sont répétées 2
fois
4.2. Activité antibactérienne
L’activité antimicrobienne des extraits obtenus de la partie aérienne d’Artemisia campestris a
été réalisée par la méthode de diffusion de disque (Ríos et Recio., 2005)
Le principe de cette méthode est basé sur l’utilisation des disques de papier Whatman de
6mmde diamètre, les disques sont imprégnés de 10µl de différentes concentrations de chaque
extrait dissousdans le diméthylsulfoxide (DMSO). Ensuite les disques sont déposés à la
surface d’un milieu écouvillonné par unesuspension microbienne d’une densité optique de
0,5McFarlend. Le milieu utilisé est le milieu Mueller-Hinton pour les souches bactériennes.
A la fin de la durée d’incubation (18-24h), les diamètres des zones d’inhibition sontmesurés
en millimètre en utilisant un pied à coulisse.
12
1. Résultats et discussion
1.1. Rendement des extractions
La préparation des extraits à partir de la partie aérienne d’A.campestris des régions de
Boussaâda et Oum El Bouaghi a été effectuée par la méthode de macération en utilisant
comme solvant organique le chloroforme.
Exprimé en pourcentage de masse d’extrait par rapport à la masse de la plante fraiche, le
rendement le plus élevé a été observé avec l’extrait chloroformique est 6.4% pour la plante de
région de Boussaâda suivi par un rendement de 3.2 % pour la plante de la région d’Oum El
Bouaghi.
La couleur, l’aspect ainsi que le rendement de l’extrait chloroformique sont représentés dans
le tableau ci-dessous.
Tableau .2 La couleur, l’aspect et le rendement d’extraction de la partie aérienne d’Artemisia
campestris.
Région Aspect Couleur Rendement
Boussaâda visqueux vert 6.4%
Oum El Bouaghi visqueux vert 3.2%
1.2. Analyse chimique qualitative
Les tests phytochimiques consistent à détecter les différentes familles de composés existantes
dans la plante par les réactions qualitatives de caractérisation. Ces réactions sont basées sur
des phénomènes de précipitation ou de coloration par des réactifs spécifiques (Kholkhal et al.,
2013).
Les résultats de criblage phytochimique sont reportés dans le tableau ci-dessous
13
Tableau 3. Criblage phytochimique d’Artemisia campestris
Métabolite
testé
Couleur Résultats
flavonoides rouge ++
Boussaâda
tanins vert ++
saponines Mousse
persistante
+++
phenols Bleu noire ++
Tanins gallique
ou catechique
Bleu noire ++
flavonoides rouge ++
Oum El Bouaghi tanins vert ++
saponines Mousse
persistante
+++
phenols Bleu noire ++
Tanins gallique
ou catechique
Bleu noire ++
++ Positif
+++ Fortement positif.
Les tests phytochimiques réalisés ont montré la présence des phénols, flavonoïdes et les tanins
ainsi que les saponines.
Dans une étude réalisée par Naili et ses collaborateurs (2010), sur les tests phytochimiques
d’Artemisa campestris, ilsont démontré la présence des flavonoïdes, des saponines, ce qui est
comparable à nos résultats, à l’exception des tanins qui sont révélées dans nos extraits et qui
sont absents dans leurs extraits.
14
1.3. Analyse quantitative
L’étude quantitative des extraits bruts d’A.campestris, au moyen des dosages
spectrophotométriques, avait pour objectif la détermination de la teneur des polyphénols
totaux, des flavonoïdes.
La raison principale pour le choix de ces substances réside dans le fait que la majorité des
propriétés antioxydantes et antimicrobiennes des plantes leur sont attribués.
1.3.1. Dosage des polyphénols totaux
La teneur en polyphénols totaux d’extrait chloroformique de la partie aérienne d’A.
campestris a été effectuée par la méthode au réactif de Folin-ciocalteu. C’est l’une des
méthodes les plus anciennes conçue pour déterminer la teneur en polyohénols.
La quantité des polyphénols a été rapportée en microgramme d’équivalents d’acide gallique
par milligramme d’extrait.
Une courbe d’étalonnage (Figure.2.)a été alors effectuée avec l’acide gallique. La courbe
montre une linéarité de l’absorbance en fonction des concentrations.
Figure 2 :Cou:rbe d'étalonnage de l'acide gallique
Y = 0,0082x + 0,2167 R² = 0,9941
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
0 50 100 150 200 250 300 350
Ab
sorb
ance
à 7
65 n
m
Concentration µg/ml
15
Tableau 4. Teneurs en polyphénols totaux dans les extraits d’A.campestris
Extrait Teneur (µg EAG /mg d’extrait)
Boussaâda 161,74 ± 0,04
La valeur représente la moyenne de 2 mesures ± SD
La teneur en polyphénol totaux est 118,63 et 161,74 µg EAG /mg d’extrait pour les d’Oum El
Bouaghi et Boussaâda respectivement.
Figure3 :Teneurs en polyphénols des extraits d’Artemisia campestris.
Megdiche et ses collaborateurs (2015) ont trouvés des résultats presque similaire à l’extrait de
la région de Boussaâda avec un extrait méthanolique. De meme Khettaf et ses collaborateurs
(2016) qui trouvent un résultat similaire à l’extrait de Boussaâda.
Nos résultats est inférieur à ceux trouver par Ghlissi et ses collaborateurs (2016) qui trouvent
une valeur 3 fois supérieure à celle de nos extraits.
1.3.2. Dosage des flavonoïdes
La méthode du trichlorure d’aluminium est utilisée pour quantifier les flavonoïdes dans les
différents extraits. La teneur en flavonoïdes est exprimée en microgramme d'équivalent de
quercétine par milligramme d’extrait (μg EQ/mg ext).La détermination quantitative des
flavonoïdes totaux révèle que l’extrait de Boussaâda est en premier ordre avec une teneur de
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
Boussaâda Oum El Bouaghi
Co
nce
ntr
atio
n e
n µ
g EA
G /
mg
d’e
xtra
it)
Les extraits
16
(40.75±0,02 μg EQ/mgext), suivi par l’extrait de la région d’Oum el bouaghi (36.17±0,02 μg
EQ/mg ext).
Figure4:Courbe d'étalonnage de la quercétine
Le tableau ci-dessous représente les résultats du dosage des flavonoïdes.
Tableau 5: Teneurs en flavonoïdes dans les extraits d’A. campestris
Extrait Teneur (µg EQ /mg d’extrait)
Boussaâda 40.75±0,02
Oum El Bouaghi 36.17±0,02
La valeur représente la moyenne de 2 mesures ± SD
Y = 0,0426x + 0,0791 R² = 0,9969
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0 2 4 6 8 10 12 14
Ab
sorb
ance
430
nm
Concentration µg/ml
17
Figure5: Teneurs en flavonoïdes des extraits d’Artemisia campestris.
Une étude faite par Khettaf et ses collaborateurs (2016) montre que la teneur en flavonoïdes
dans l’extrait méthanolique d’Artemisia campestris est de (29.68 ± 0.32 μg EQ/mg d’extrait)
et pour l’extrait éthanolique est 17.21±0.45 μg EQ/mg d’extrait, ces résultats sont similaires à
nos résultats pour l’extrait méthanolique et très peu pour l’extrait aqueux.
Megdiche et ses collaborateurs (2015) ont trouvé des valeur supérieures de notre résultat avec
des teneurs en flavonoïdes de 175.232, 67.455±2.28, 63.818 ±0.52 EC/g pour les extraits
méthanolique, acétate d’éthyle et aqueux respectivement.
Activité antioxydante des extraits d’Artemisia campestris
1.Effet antiradicalaire
L'activité antioxydant de nos extraits a été évaluée par la méthode du radical 2,2-diphényl-1
picrylhydrazyle (DPPH). Cette méthode est basée sur la réduction d’une solution alcoolique
de DPPH en présence d'un antioxydant qui donne un hydrogène ou un électron
(Bortolomeazzi et al., 2007).
L’évaluation de l'activité antioxydante des extraits d’Artemisia campestris ont été fait en
comparaison avec celle de l’antioxydant standard : BHA
L’activité antioxydante des extraits est exprimée en CI50 Tableau 6. Ce paramètre a été
employé par plusieurs groupes de chercheurs pour présenter leurs résultats, il définit la
concentration de l’extrait exigée pour réduire 50% de DPPH en solution. Les valeurs de
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
Boussaâda Oum El Bouaghi
Co
nce
ntr
atio
n e
n (
µg
EQ /
mg
d’e
xtra
it)
Les extraits
18
l’CI50 sont déterminés graphiquement dont l’abscisse représente la concentration de l’extrait
brut et l’ordonné l’activité antioxydante en pourcentage.
Les résultats obtenus montrent que les extraits aqueux et méthanolique de la partie aérienne
d’Artemisia campestris ont une activité antiradicalaire concentration dépendante. Elle est de
et 95,11 et 150,74 pour la plante des régions d’Oum el bouaghi et Boussaâda respectivement.
Figure6:Activité anti-radicalaire de l’anti-oxydants standard (BHA) vis-à-vis du radical
DPPH.
Figure7:Activité anti-radicalaire des extraits vis-à-vis du radical DPPH de région Oum El
Bouaghi.
0
10
20
30
40
50
60
70
0 20 40 60 80 100 120
Act
ivit
é an
tira
dic
alai
re %
Concentration (μg/ml)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 200 400 600 800 1000 1200
Act
ivit
é an
tira
dic
alai
re (
%)
Concentration (μg/ml)
OEB
19
figure.8 : Activité anti-radicalaire des extraits vis-à-vis du radical DPPH de région
Boussaâda.
Tableau 6 :Les valeurs des CI50 des extraits d’A. campestris et de l’antioxydant
standard (BHA) et des extraits. Les valeurs représentent la moyenne de deux essais ± SD.
Extraits et Standards CI50 (μg/ml)
(Boussaâda) 150,74 ±0,01
(Oum el bouaghi) 95,11 ± 0,05
BHA 23.625 ± 0.15
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 200 400 600 800 1000 1200
Act
ivit
é an
tira
dic
alai
re (
%)
Concentration (μg/ml
Boussaâda
20
Figure9 : Activité anti-radicalaire de BHA et des extraitsd’A. campestris.
Une étude menée par Khettaf et ses collaborateurs (2016) sur la même espèce de plante a
montré des IC50 de 8 et 20 μg/ml pour les extraits aqueux et méthanolique respectivement,
ces valeurs sont nettement inférieures à celles trouvées avec nos extraits.
2.Activité antioxydante totale
L’activité antioxydante des extraits est déterminée par la méthode de phosphomolybdène, elle
est basé sur la réduction de Mo (VI) à Mo (V) par les extrait en conduisant à la formation d'un
complexe phosphate vert / Mo (V) à un pH acide (Trabelsi et al., 2012). La capacité
anioxydante totale a été rapportée en microgramme d’équivalents d’acide ascorbique par
milligramme d’extrait ; elle est de 804,5 et 859,4 µg EAA/ mg d’extrait pour les extraits de
Boussaâda et Oum el bouaghi respectivement.
0
20
40
60
80
100
120
140
160
BHA (Boussaâda) (Oum el bouaghi)
Val
eurs
des
IC50
BHA et extraits
21
Figure10 : Comparaison de la capacité antioxydante totale des extraits
L’activité antimicrobienne :
Les plantes contiennent de nombreux composés doués d’une action antimicrobienne, ces
constituants comprennent les composés phénoliques, les flavonoïdes, les huiles essentielles et
les triterpenoïdes (Rojas et al., 1992), le pouvoir antimicrobien des extraits de plantes est
tributaire de leurs compositions chimiques.
Très peu de recherche se sont intéressées à l’étude de l’activité antimicrobienne d’Artemisia
campestris (Ben Sassi et al., 2007 ; Naili et al., 2010).
L’activité antibacterienne d’extrait chlorophormique d’Artemesia campestris est testée via la
méthode de diffusion sur disque vis-à-vis de trois souches bacteriennes à Gram + :
Staphylococcus aureus et Gram- :Pseudomonas aeroginosa et Escherichia coli.
L’extrait est réagi une positivement au moins sur une des souches microbiennes testées ce
qui confirme que la plante d’Artemisia campestris est douée de propriétés antimicrobiennes.
La souche de Pseudomonas aeruginosa et d’E. Coli sont révèles la plus résistante pour
l’extrait, que les souches de Staphylococcus aureus.
770
780
790
800
810
820
830
840
850
860
870
Boussaada Oum El Bouaghi
Cap
acit
é a
nti
oxy
dan
te t
ota
le
(mg/
g M
S)
Extraits
22
Tableau7 : Diamètre des zones d’inhibition de la croissance bactérienne par l’extrait
d’A.campestris d’Oum El Bouaghi.
Concentration (mg/ml)
Souches 100 200 300 400
S.aureus 5 5 5,5 9
E.coli 7 7 7,5 8,5
P. aeruginosa 7 7 8 8
Tableau 8: Diamètre des zones d’inhibition de la croissance bactérienne par l’extrait
d’A.campestris de Boussaâda.
Concentration (mg/ml)
Souches
100 200 300 400
S.aureus 5 5 5,5 9
E.coli
7 7 7 7,5
P. aeruginosa 7 7 7 7
Ben Sassi et ses collaborateurs (2007), ont étudié l’activité antimicrobienne des extraits de la
partie aérienne de 23 plantes médicinales dont A. campestris, ils ont trouvé que seul l’extrait
d’acétone exerce un effet inhibiteur parmi les trois extraits (acétone, hexane, méthanol).
Naili et al (2010), ont étudié l’activité antibactérienne de l’extrait méthanolique des feuilles
d’A. campestris. Ils ont utilisé plusieurs souches dont Staphylococcus aureus, Escherichia
coli, Pseudomonas aeruginosa, les résultats obtenus dans cette étude ont montré que cet
extrait possède un effet inhibiteur sur toutes les bactéries étudiées.
23
toctulcnoc
l es plantes restent la source prédominante de médicaments pour la majorité de la population
mondiale, en particulier dans les payés en voie de développement. Environ 40 % des
médicaments sont ainsi dérivés de la nature (Newman et Cragg, 2007). La nouvelle démarche
consiste à s'intéresser à la recherche d'un principe actif dans les produits naturels d'origine
végétal, plus particulièrement les métabolites secondaires à savoir les huiles essentielles et les
flavonoïdes, polyphénols, issus de plantes médicinales qui sont utilisées depuis longtemps
pour traiter des maladies et améliorer la santé.
Le travail que nous avons abordé, repose sur l’étude phytochimique de l’extrait et
chloroformiques par macération des parties aériennes de la plant utilisées en médecine
traditionnelle, des familles astéracées, dans deux région Boussaâda et Oum el bouaghi et
repose sur les activités antioxydantes et antimicrobiennes d’extrait brut.
A la lumière des résultats obtenus, nous avons conclu que la partie aérienne du la plante
Artemisia campestris contienne des tanins, flavonoïdes, saponines, polyphénols et les
phénols.
Les résultats de l’analyse quantitative montrent que la teneur de flavonoïde dans l’extrait est
moyenne .
Par ailleurs , l’extrait possèdent une activité antioxydante faible in vitro. ils montrent une
faible inhibition vis-à-vis du radical DPPH et possède .
En outre , l’activité antibactérienne a arboré que l’extrait testé est actif sur tout les souche
bactériennes testésselon la méthode de diffusion disque.
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oxidation in propagation phase. FEBS letters, 1997, vol. 401, no 2-3, p. 230-234.
YI, ZhiBiao, YU, Yan, LIANG, YiZeng, et al.In vitro antioxidant and antimicrobial
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flavonoids. LWT-Food Science and technology, 2008, vol. 41, no 4, p. 597-603.
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Résumé
Artemisia campestris est une plante qui appartient à la famille des Astéracée, cette espèce connue sous
le nom de « Tgouft »est une plante médicinale largement utilisée en médecine traditionnelle.
La teneur en polyphénols totaux a été déterminée en utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu, elle est
161,74 ± 0,04, 118,63 ± 0,36.Les flavonoïdes ont été évalués par la méthode de chlorure d’aluminium
AlCl3, la teneur est de40.75±0,02, 36.17±0,02 pour les extraits de Boussaâda,Oum el bouaghi
respectivement.
L’activité antioxydante a été réalisée en utilisant le tests de DPPH, la capacité antioxydante totale
(TAC) dans l’extraits « chloroformique ».les extrait sont montré faible activité anti-radicalaire vis-à-
vis avec des CI50de 150.74± 0.01 et 95.11 ± 0.05 pour les extraits de Boussaâda ,Oum el bouaghi
respectivement.Ces valeurs restent supérieures par rapport aux standards BHA. Pour le test de capacité
antioxydante les valeurs sont de 859.4et 804.5mg EAA/g d’extrait respectivement.
L’activité antimicrobienne a été déterminée sur trois souches bactériennes (Gram+ et Gram-) selon la
méthode de diffusion de disque. Les résultats révèlent que les extraits possèdent un faible effet
antibactérien.
Mots clés :Artemisia campestris,polyphénols, flavonoïdes, activité antioxydante , activité
antibactérienne .
الملخص:
Artemisia campestris هي عشبت طبيت حنخًي إنً انعائهت اننجًيت حعرف باسى "حاقىفج".
أيا 0,36 ± 118,63 , 0,04 ± 161,74حيذ أعطج اننخائج Folin-Ciocalteuنى ححذيذ يحخىي انفينىلاث باسخعًال
كانج اننخائج نكم ين انًسخخهصين نبىسعادة وأو انبىاقي ) chlorure d’aluminium AlCl3(انفلافىنىيذاث فقذ حى ححذيذها باسخعًال
. 0,02±36.17 ,0,02±40.75عهً انخىاني كًا يهي
نًسخخهض "انكهىروفىرو" حيذ كانج انفعانيت انًضادة نلأكسذة ضعيفت CATو DPPHانًضادة نلأكسذة حذدث باخخبار نشاطيتان
نكم ين يسخخهض او انبىاقي وبىسعادة, حبقً هاحين انقيًخين CI500 150.74 ±0.01 ,95.11±0.05نكهخا انًسخخهصين باننسبت ل
نكهخا انًسخخهصين. 804.5mg EAA/g و859.4 قذرث ب CAT, باننسبت لاخخبار BHAعانيخين يقارنت يع
في انقرص ( عن طريق حقنيت الانخشار (-Gram+ Gramرلاد سلالاث بكخيريت حى ححذيذ اننشاطيت انًضادة نهبكخيريا باسخخذاو
يضادة نهبكخيريا ضعيفت نهًسخخهصين .نشاطيت اننخائج اطهرث
الكلمات المفتاحية :
اننشاطيت انًضاد نلاكسذة , اننشاطيت انًضاد نهبكخيريا . انفلافىنىيذاث, , يخعذد انفينىلاث, Artemisia campestris
Prépqrée par : _ ghouar meroua
_Sabeg khawla
Date de soutenance : 17/06/2018
Théme : Étude des activités biologiques de la plante Artemisia campestris
Résumé
Artemisia campestris est une plante qui appartient à la famille des Astéracée, cette espèce connue sous le nom de « Tgouft »est
une plante médicinale largement utilisée en médecine traditionnelle.
La teneur en polyphénols totaux a été déterminée en utilisant le réactif de Folin-Ciocalteu, elle est 161,74 ± 0,04, 118,63 ±
0,36.Les flavonoïdes ont été évalués par la méthode de chlorure d’aluminium AlCl3, la teneur est de40.75±0,02, 36.17±0,02
pour les extraits de Boussaâda,Oum el bouaghi respectivement.
L’activité antioxydante a été réalisée en utilisant le tests de DPPH, la capacité antioxydante totale (TAC) dans l’extraits
« chloroformique ».les extrait sont montré faible activité anti-radicalaire vis-à-vis avec des CI50de 150.74± 0.01 et 95.11 ± 0.05
pour les extraits de Boussaâda ,Oum el bouaghi respectivement.Ces valeurs restent supérieures par rapport aux standards BHA.
Pour le test de capacité antioxydante les valeurs sont de 859.4et 804.5mg EAA/g d’extrait respectivement.
L’activité antimicrobienne a été déterminée sur trois souches bactériennes (Gram+ et Gram-) selon la méthode de diffusion de
disque. Les résultats révèlent que les extraits possèdent un faible effet antibactérien.
Mots clés : Artemisia campestris,polyphénols, flavonoïdes, activité antioxydante , activité antibactérienne .
الملخص:
Artemisia campestris هي عشبت طبيت حنخًي إنً انعائهت اننجًيت حعرف باسى "حاقىفج".
أيا انفلافىنىيذاث فقذ حى ححذيذها باسخعًال 0,36 ± 118,63 , 0,04 ± 161,74حيذ أعطج اننخائج Folin-Ciocalteuنى ححذيذ يحخىي انفينىلاث باسخعًال
)chlorure d’aluminium AlCl3 ( 0,02±36.17 ,0,02±40.75كانج اننخائج نكم ين انًسخخهصين نبىسعادة وأو انبىاقي عهً انخىاني كًا يهي .
" حيذ كانج انفعانيت انًضادة نلأكسذة ضعيفت نكهخا انًسخخهصين باننسبت ل نًسخخهض "انكهىروفىرو CATو DPPHانًضادة نلأكسذة حذدث باخخبار نشاطيتان
CI500 150.74 ±0.01 ,95.11±0.05 نكم ين يسخخهض او انبىاقي وبىسعادة, حبقً هاحين انقيًخين عانيخين يقارنت يعBHA باننسبت لاخخبار ,CAT قذرث ب
نكهخا انًسخخهصين. 804.5mg EAA/g و859.4
يضادة نشاطيت اننخائج اطهرث في انقرص .( عن طريق حقنيت الانخشار (-Gram+ Gramرلاد سلالاث بكخيريت حى ححذيذ اننشاطيت انًضادة نهبكخيريا باسخخذاو
نهبكخيريا ضعيفت نهًسخخهصين .
الكلمات المفتاحية :
, اننشاطيت انًضاد نهبكخيريا . اننشاطيت انًضاد نلاكسذة انفلافىنىيذاث,, يخعذد انفينىلاث, Artemisia campestris
