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(c) Copyri ght P.Y. Guillaume 2004
M erci à I sabell e D arinot et V éronique Serventon pour l eur aide.
L'utilisation des photos et documents ne peut s'effectuer que dans un cadre pédagogique et non lucratif.
- Mili eu Chapman
Le milieu de Chapman est un milieu sélectif, surtout utilisé en microbiologie médicale, permettant la croissance des germeshalophiles. Parmi ces germes figurent au premier rang les bactéries du genre Staphylococcus, mais aussi les Micrococcus, les
Enterococcus, les Bacillus, et de rares bactéries à Gram négatif.
Aspect du milieu avant
utilisation
Mode
d’ensemencement
Sélectivité /
composition
Caractères
recherchés
Résultats
L'ensemencementdoit être massif, enstries serrées ou parinondation
Ce milieu contientun inhibiteur :fortesconcentrations enchlorure de sodium
(75 g.L-1), ce qui
permet un isolementsélectif deStaphylococcus tolérant les fortesconcentrations enNaCl
On peut étudier lafermentation dumannitol par virageau jaune del’indicateur coloré,le rouge de phénol,autour des colonies.
Les colonies mannitol + sontentourées d’une auréole jaune.
Ne pas confondre la pigmentationdes colonies et le virage del’indicateur coloré.
Ainsi des colonies pigmentées enaunes et mannitol + : forte
suspicion de S. aureus Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Milieu Hektoen
La gélose Hektoen est un milieu d'isolement des Salmonelles et des Shigelles, bien que de nombreuses bactéries à Gramnégatif puissent se développer sur ce milieu. L'identification d'entérobactéries pathogènes repose sur la non utilisation des glucidesprésents dans le milieu.
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
L'ensemencement sefait par lestechniqueshabituelles.
Deux indicateurssont présents dans lemilieu :
- le bleu debromothymol(indicateur de pH)
- la fuschine acide(qui se colore enprésenced'aldéhyde.
trois types deglucides : lasalicine (qui est unhétéroside), lesaccharose et lelactose.
La production
d'H2S à partir de
thiosulfate
Colonies saumon : Escherichia,
Levinea, Citrobacter diversus,
Klebsiella, Enterobacter, Serratia,
Yersinia
Colonies saumon à centre noir :Citrobacter freundii, Proteu
vulgaris,
Colonies bleu-vert à centre noir :Suspicion de Salmonella,différencier de Proteus mirabilis
Colonies bleu-vert ou vertes :Suspicion de Shigella ou deSalmonella
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose SS
Gélose Salmonella-Shigella.
Milieu sélectif permetta nt l’isolement d'en térobactéries pathogèn es.
Il est très utilisé pour la recherche de Salmonella dan s les selles et les denr ées alimentaires peu pou r les Shigella car trop
sélectif.
Aspect du milieu avantutilisation
Mode d’ensemencement Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement par la méthodedes cadrans.
Incuber 18 à 24 h à 37°C.
Le milieu contient 3inhibiteurs :
- sels biliaires,
- vert brillant
- forte concentration
en citrate de sodium.
Ceux-ci empêchent lapousse de toutes
bactéries Gram+, et
rendent difficile lacroissance des
bactéries Gram-
autres queSalmonella etShigella.
Le milieu contientdu lactose pouvantêtre fermenté.
Le milieu contientdu thiosulfatepouvant donner du
H2S.
colonies rouges : lactose+
colonies incolores :lactose –
colonies à centre noir :H2S +
Aspect du milieu après utilisation
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- Milieu EMB
Milieu Eosine Bleu d e Méthylène.
Milieu d 'isolement d es bacilles Gram -.
Il est très u tilisé pou r l’isolement d es coliformes.
- Mili eu Mac Conkey
Milieu sélectif pour l'isolement des bacilles Gram- Salmonella et Shigella ainsi que des bactéries coliformes dans les eaux, les produits
alimentaires, les produits pharmaceutiques et biologiques .
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Isolement par laméthode des cadrans.
Ce milieu contientdeux colorants,l’éosine et le bleude méthylène quiinhibent la majeurepartie de la flore
Gram+ (sauf
Streptocoques D).Bien que lesEntérobactéries
lactose - puissents’y développer, laculture desEntérobactérieslactose + y estfavorisée.
Le milieu contientun critère dedifférenciation, lelactose
colonies violettes : semi-bombéesde 2 à 3mm de diamètre avec éclatmétallique, centre sombre : E. col
très bombées muqueuses dediamètre 5 mm centra gris marronsans reflet Klebsiella
colonies grisâtres :- 1 à 2 mm de diamètretransparentes, grises ambrées :
Salmonella, Shigella.
- 2 mm de diamètre, grisâtres avecune pellicule autour de la colonie :Proteus morganii
punctiformes et grisâtres : Enterococcus.
Aspect du milieu aprèsutilisation
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement par laméthode descadrans.
Incuber 18 à 24 hà 37 °C.
Ce milieucontientdeux
inhibiteursde la flore
Gram+ :
- les selsbiliaires
- le cristalviolet
le lactose
dont
l’utilisationest révélée
par
l’indicateur
coloré du
milieu, le
rouge
neutre.
coloniesrouges entouréesd’un hâlo
opaque de lamême couleurdu à laprécipitation dessels biliaires:
lactose+
colonies jaunesou incolores :
lactose-
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- Milieu CLED
Le milieu CLED (Cystine Lactose Electrolyte Déficient) est un milieu non sélectif , très utilisé dans l'étude des bactériescontenues dans l'urine. Etant un milieu non sélectif de nombreuses bactéries, tant Gram + que Gram -, pourront se développer.
L’absence d’électrolytes (pas de NaCl) limite le phénomène d’envahissement par les Proteus.
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
La lectures'effectue après 18à 24 heuresd'incubation à 37°C.
Lactose lactose +apparaissentaunes
lactose – apparaissentbleues vertes
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- Milieu BCP
C’est un milieu utilisé pour la détection et l’isolement des entérobacteriacées dans l’eau, les produits alimentaires, l’urine etles selles
Ce milieu facilite la différenciation des colonies par le caractère lactose. Il inhibe l’envahissement de la surface de la boitepar des nappes de Proteus car il ne contient pas d'électrolytes.
C’est un milieu non sélectif qui est utilisé pour l’isolement de nombreuses espèces n’appartenant pas aux entérobactéries.
C’est un milieu contenant une base nutritive ordinaire permettant la pousse des bactéries non exigeantes.
Il contient un critère de différenciation : la fermentation du lactose révélée par le virage en milieu acide de l ’indicateur coloré de pH, lebromocrésol pourpre.
Il est déficient en électrolytes : absence d'ions minéraux.
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement
18 à 24 h à 37°C
- Non
selectif
- Dépourvuenélectrolyte
-Bromocrésolpourpre
- Espèces
n’appartenantpas auxentérobactéries
- Fermentationdu lactose
Colonies
bleues :bactérieslactose –
Coloniesaunes :
bactérieslactose +
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- Milieu Bair d Parker
Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus
Ce milieu contient une base nutritive riche.
Il contient des accélérateurs de la croissance : le pyruvate de sodium et le glycocolle
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement
18 à 24 h à 37°C
Il contient 2inhibiteurs :
le chlorurede lithium
le telluritedepotassium.
Contient 3critères dedifférenciation :
réduction dutellurite
protéolyse desprotéines duaune d'œuf
hydrolyse parune lécithinasedes lécithinesdu jaune d'œuf
− en tellurenoir
− halo clairautour de la
colonie
− liseré blancopaqueautour de lacolonie
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- Milieu BEA
Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Le milieu présentéen boite de Pétriest destiné à unisolement.
Le milieu présentéen tube est àbeurrer avec uneculture pure car ilentre dans lagaleried’identificationdes coques gram +de culture facile.
C’
est unmilieusélectif desstreptocoquespeuexigeants.
Il contient 2inhibiteurs :
- la bile debœuf
- l’azide de
sodium
l’
esculinerévélée parle citrate deferammoniacal
Pousse depetites colonies
sur le milieu :StreptocoquesD
Coloniesentourées d'unhalo noir :esculine +
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- Gélose au sang
C’est un milieu d’isolement enrichi sur lequel les Streptocoques se développent bien. Il permet, la lecture du caractèrehémolytique.
C’est un milieu riche d’autant plus par la présence de sang.
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Caractèresrecherchés Résultats
Isolement
18 à 24 h à 37°C
Hémolyse Hémolyse β : zone claired’hémolyse totale dediamètre 3-4 mmentourant les colonies.
Hémolyse α : zone floueet granuleuse, verdâtre de1 à 2 mm de diamètre
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- Milieu Slanet z
Milieu de dénombrement des entérocoques en microbiologie alimentaire. Son emploi est surtout réservé aux eaux, aprèsfiltration.
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement
Filtration
Il contient uninhibiteur desgram -, quisélectionne lesStreptocoques :l’azide desodium.
le TTC quilors de saréductiondonne unecolorationdesbactériesen rouge.
LesEntérocoquesdonnent descolonies detaille moyenne,roses ourouges.
Les Bacillus
peuventpousser etdonner lemême aspectde colonies,
mais de tailleplusimportante.
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- Milieu Cétr imide
La gélose au cétrimide est un milieu sélectif , qui permet l'isolement des Pseudomonas et notamment de P.aeruginosa. Ce milieugélosé est relativement pauvre, et contient un antiseptique: le cétrimide (bromure de N-cétyl-N, N, N-triméthylammonium). Cemilieu, proche du milieu King A, favorise aussi la production de pigments par P.aeruginosa.
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Ensemencer lasurface du milieu aumoyen de l'anse.
Incuber durant 24heures à 37°C, voiremême de préférenceà 42°C (l'incubationà 42°C permet unisolement spécifiquede P.aeruginosa).
Sur ce milieu de trèsnombreuses bactériessont inhibées de par laprésence del'antiseptiquecétrimide(bromure deN-cétyl-N, N, N-triméthylammonium).,ainsi que par laprésence del'antibiotique acidenalidixique (inhibiteurde nombreuses
bactéries à Gramnégatif).
-pyoverdine
-pyocyanine
Milieu bleu : pyocyanine
Milieu jaune- vert : pyoverdine
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose Sabouraud
La gélose de Sabouraud constitue un milieu classique pour la culture, l'isolement et l'identification des levures et des moisissuressaprophytes ou pathogènes.
Elle est recommandée essentiellement pour l'isolement des moisissures dans les prélèvements peu chargés en bactéries, les contrôlesde stérilité des produits pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, la culture des moisissures en vue de réaliser leur identification.
Dans le cas de prélèvements fortement contaminés, il est préférable d'utiliser la gélose Sabouraud + chloramphénicol .
Aspect du milieu avantutilisation
Mode d’ensemencement Sélectivité / composition
- Transférer l'échantillon à analyser sur le milieu.
- Etaler l'inoculum en surface à l'aide d'un étaleur en verrestérile.
- Incuber à 20 - 25°C de 3 à 5 jours.
L'ajout de triphényltétrazolium àraison de 100 mg par litre en faitun milieu de différenciationpour les Candida.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose Sabouraud plus chloramphénicol
Aspect du milieu avantutilisation Mode d’ensemencement Sélectivité / composition Caractères recherchés
- Transférer l'échantillon à analysersur le milieu.
- Etaler l'inoculum en surface à l'aided'un étaleur en verre stérile.
- Incuber à 20-25°C de 3 à 5 jours.
Chloramphénicol Recherche des champignons
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose CI N
Milieu d'isolement sélectif des Streptocoques D (entérocoques et non entérocoques).
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement. 2 inhibiteurs permetde sélectionner laculture desstreptocoques dugroupe D.:
- la bile de bœuf
- l’azide desodium
l’
esculine révéléepar le citrate de ferammoniacal
Pousse de petites colonies sur lemilieu : Streptocoques D
Colonies entourées d'un halo noir :esculine +
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose au lait
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Faire une striecentrale à la surfacedu milieu.
Incuber 24H à7jours à latempérature désirée.
l ’hydrolyse de lacaséine
L’hydrolyse de la caséine se traduit parl’apparition d’une zone claire autour dela culture.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose à l’amidon
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Ensemencer par unestrie à la surface dumilieu.
Incuber un à huitours à la
température désirée.
l’hydrolyse del’amidon.
Hydrolyse mise en évidence par l’ajoutd’une solution iodée :
- une coloration bleu-rouge due àl’amidon, montre qu’il n’a pas étéhydrolysé
- la disparition de cette colorationmontre son hydrolyse.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose à l’oeuf
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Faire une strie à lasurface du milieu,ou éventuellement
des touches.
Incuber pendant 24h ou plus à 37°C.
La lécithinase l'action de la lécithinase libère de lacholine soluble et un diglycéride peusoluble qui précipite dans le milieu
provoquant un hâlo autour de la culture
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose Dr igalski
Milieu sélectif permettant l’isolement des bactéries Gram - non exigeantes. Il est utilisé pour l’isolement des
germes urinaires et pour la coproculture
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement par laméthode descadrans.
Contient deuxinhibiteurs de la
flore Gram+ :
- le désoxycholatede sodium
- le cristal violet
Fermentation dulactose
Les colonies de bactéries lactose + sontaunes.
Celles de bactéries lactose – sontbleues.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose TSN
Milieu de dénombrement des anaérobies sulfito-réducteurs (spores de Clostridium sulfito-réducteurs et Clostridium perfringens) dansles produits alimentaires.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Isolement
L’incubation se faiten anaérobiose.
La températured’incubationpermet desélectionner lesdiférents typesbactérien.
Réduction par lefer du sulfite desodium
- les anaérobies sulfito-réducteurs : à 37°C
- Clostridium perfringens à 46°C
Colonies rouges : coloniessulfito réductrices
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- Gélose TCBS
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Ensemencer à partirde la selle. Incuber24 heures à 37°C.
La forteconcentration enbile et en citrate,
associée à un pHélevé (pH = 8,6)permet l'éliminationde nombreusesbactéries
Recherche etl'isolement desvibrions pathogènes
présents dans lesprélèvements polymicrobiens
- Colonies jaunes (Vibrionssaccharose +)
- Colonies vertes (Vibrionssaccharose -)
- Petites colonies jaunes
- Petites colonies vertes
Colonies à centre noir : colonies
H2S +.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose à l’ADN
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Percer la gélose detrous.
Inoculer avecquelques gouttes d'unbouillon creur-cervelle ensemencéauparavant et bouilli10 minutes.
Incuber 4 heures à 37oC.
la DNase thermorésistante deStaphylococcus
halo rose signant la DNase autourdes trous percés sur le fond bleu dela gélose
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose lact osée au désoxycholat e 0. 1%
Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire (analyse des eaux et des aliments).
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
- Isolement 2 inhibiteurs desbactéries Gram+ à
faible concentration :
- le désoxycholate (selsbiliaires)
- le citrate de sodium.
le lactose Colonies rouges : bactéries lactose+
,coliformes
Colonies incolores : bactéries lactose-
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Milieu Muller Hint on
Aspect du milieu avantutilisation
Aspect dumilieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
selon le cas :
- isolement
- ensemencementen nappe avecinoculum
L’amidonneutralise les
inhibiteursapportés parla gélose
Sensibilité auantibiotiques et
au composé O129
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- Gélose nut r it ive ordinair e
Aspect du milieu avant utilisation Mode
d’ensemencement Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Ensemencement parisolement.
Ces milieuxpermettent laculture des
bactéries peuexigeantes
- Certaines colonies peuventavoir des couleurscaractéristique.
Aspect du milieu après utilisation
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- Milieu Todd Hewit
Ce milieu glucosé tamponné convient bien à la culture des bactéries exigeantes supportant mal les variations de pH, il est bienadapté à la culture des Streptocoques.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Ensemencementpar isolement.
système tampon(phosphates,bicarbonates)permet d’empêcherque l’acide formépar le métabolismedu glucosen’exerce une actionnuisible sur lesbactéries
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- Milieu TTC t ergitol
Milieu de recherche et de dénombrement des coliformes. Il est surtout utilisé pour la colimétrie des eaux par la méthode de filtration.
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Filtration le Tergitol 7permettant desélectionner lescoliformes et inhibeaussil’envahissement parProteus
- le TTC qui montrele pouvoir réducteurdes bactéries
- le lactose dontl’utilisation estrévélée par le viragedu bleu debromothymol
- colonie rose-rouge : réduction duTTC
- colonie jaune : absence deréduction du TTC
- halo bleu-vert : lactose –
- halo jaune : lactose +
E. coli et Enterobacter aerogenes
donnent des colonies jaunes
Les autres coliformes donnent des
colonies rouges.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose au sang cuit
C’est un milieu d’isolement enrichi préconisé pour l’étude des Neisseria notamment le méningocoque. Il est aussi utilisé pourla culture de Haemophilus influenza.
Aspect du milieu avantutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
- Isolement L’amidon de maïsneutralise lessubstances toxiqueslibérées par lescultures.
Aspect du milieu aprèsutilisation
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- Gélose Mossel
Milieu utilisé en alimentaire pour l’isolement de Bacillus cereus.
Aspect du milieu avantutilisation
Mode d’ensemencement Sélectivité / composition Caractèresrecherchés
Résultats
Etaler une goutte de produit àéudier et au rateau, avec desbilles ou par inodation
Assuré par la polymyxinequi inhibe ou retarde lacroissance d’autre espèces.
Croissance ouabsence
croissance decoloniemannitol –
lécthinase +
Si il y a croissance alorsprésence de la souche Bacillus cereus : colonie
- roses rouges(mannitol -)
- halo blanchâtre aucentre de la colonie(lécithinase +) Aspect du milieu après
utilisation
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- Milieu Hajna- Kligler
Le milieu de Hajna-Kligler est un milieu complexe, qui permet la recherche de plusieurs caractères biochimiques. Il est très utilisédans l'identification des Enterobacteriaceae.
Aspect dumilieuavant
utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation Mode d’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Ensemencer abondamment lasurface par stries serrées ou parinondation, puis le culot par simplepiqûre, à l'aide de la même pipetteboutonnée. Il est important de nepas oublier de dévisserpartiellement la capsule afin depermettre les échanges gazeux.
Mettre à l'étuve 24h à 37°C.
Utilisation duglucose
Utilisation dulactose
Production H2S
Production de gaz
Recherche de la
LDC
a) Bactérie de tyfermentatif du glucoselactose + : culot jaunepente jaune.
b) Bactérie de tyfermentatif du glucoselactose - : culot jaunepente rouge.
c) Bactérie de type oxydadu glucose ou glucose -
lactose - : culot rougepente rouge.
d) Bactérie de type oxydadu glucose et lactose +culot rouge et pente jauCes bactéries sont aérobistrictes : le culot ne doit pprésenter de culture et sedonc rouge. La pente peprésenter une culture et seaune si l'acidification
suffisante et rouge danscas contraire. Le milieu
Kligler n'est généralemepas utilisé pour de tellbactéries, qui sont souvelactose -, et des expérienccomplémentaires sont faitpour préciser le résultat.
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- Milieu Lysine Fer
Ce milieu peut être utilisé en routine mais il est généralement utilisé pour l’identification des souche de Salmonella.
Aspect dumilieuavant
utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Mode d’ensemencement Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Pratiquer l’ensemencementla pente ave des stries et leculot par piqure centrale
La lysinedésaminase (LDA)
La lysinedécarboxylase(LDC)
La production
d’H2S
Pente violette, culot jaune :
bactérie LDA -, LDA -, H2S –
Pente violette, culot violet :
bactérie LDA – LDC +, H2S - ,
K. pneumoniae, K. oxytoca,
Enterobacter (sauf cloacae),
Serratia, E. coli, S. typhi.
Pente violette, culot jaune :
bactéries LDA -, LDC – H2S –
ou + Escherichia, Shigella, E.
cloacae, K. rhinoscleromatis,
Citrobacter, S. parathyphi A,
Yersinia, Levinea, E. coli (biotypeLDC -)
Pente violette, culot violet avecnoircissement : bactérie LDA –
LDC +, H2S + , Salmonella H 2S
+ y compris S. arizonae,
Edwardsiella
Pente rouge vineux, culot jaune :
bactéries LDA +, LDC – H2S –
ou + Proteus Providencia
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- Milieu cit r at e de Simmons
Ce milieu est un exemple de milieu synthétique, c'est à dire de milieu dont la composition, qui est complexe, est connueexactement tant qualitativement que quantitativement
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
La pente estensemencée par unestrie longitudinale,réalisée à l'anse, àpartir d'unesuspension de laculture solide en eaudistillée stérile.
Il est important dene pas apporter desubstrats carbonés.Ainsil'ensemencement à
partir d'une souchepure fournie enbouillon nutritif ouen eau peptonée estimpossible.
Ne pasvisser le bouchon àfond, afin depermettre leséchanges gazeux (enparticulierélimination dudioxyde de carbone).
Mettre àl'étuve 24 heures à37°C.
Utilisation ducitrate commeseule source decarbone
- Virage de l'indicateur de pH aubleu : il y a eu alcalinisation dumilieu et la souche est citrate deSimmons +.
- Pas de virage de l'indicateur depH : il n'y a pas eu alcalinisationet le milieu ne présente pas deculture. La souche est citrate deSimmons -.
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- Milieu phénylalanine
Milieu utilisé pour la recherche de la phénylalanine désaminase. Le phénylpyruvate donne une teinte verte en présence de ferIII.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
La pente parépuissement
La PDA :phénylalaninedésaminase
Pente verte après ajout deperchlorure de fer : PDA +
Pente inchangée après ajout deperchlorure de fer : PDA -
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- Milieu Clark et Lubs
Ce milieu permet l’étude de la voie de fermentation du glucose.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Ensemencerlargement.
Incuber 24 h à t°Coptimale.
* test VP :
- ajouter 10 gouttesd’alpha naphtol etle même volume desoude concentrée(ou de potasse).
- incliner le tubepour permettre unebonne oxygénation.
- attendre quelquesmin à 1 heure.
* test RM :
- ajouter 2 à 3gouttes de rouge deméthyl,
- la lecture est
immédiate.
soit de nombreuxacides par la voiedes fermentationsacides mixtes quisont mis enévidence par letest RM (au rougede méthyl),
soit d’acétoïneproduit parfermentationbutanedioliquequi est mise enévidence par le
test VP (Voges-Proskauer)
Test VP :
- rouge : VP+
- jaune : VP-
Test RM
- rouge : RM+
- jaune : RM-
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- Milieu viande- f oie
L'étude du type respiratoire d'une bactérie (c'est à dire ses rapports avec l'O2) nécessite un milieu de culture riche contenant un
gradient de pression partielle en di-oxygène.
Le principal milieu utilisé à cette fin est la gélose viande-foie (gélose VF).
- Tube Yvan Hall
Aspect du milieuavant utilisation Aspect du milieu
après utilisation Moded’ensemencement Sélectivité /
composition Caractèresrecherchés Résultats
- régénérée lagélose VF parébullition au bain-marie bouillantpendant environ 30minutes.
- ensemencerlorsque le milieuest encore liquide,vers 45°C.
L'ensemencementse fait à la pipettePasteur scellée (ouboutonnée) etchargée. Onintroduit la pipettePasteur au fond dutube et on remonteen spirale.
Ne pas visser lebouchon à fond,sinon on empêchela formation dugradient de O2.
- refroidir à l’eaucourante,
- on place ensuitele tube à l'étuve (à37°C) pendant 24heures.
Type aérobie strict : cultureseulement en présence de dioxygène.
Type aéro-anaérobie : cultureen présence et en absence de dixoygène. La technique utilisée ne
ermet pas de différencier entre
les bactéries aéro-anaérobie
acultatives et les bactéries
anaérobies aéro-tolérantes. On
conclut type aéro-anaérobie.
Type anaérobie strict : cultureuniquement en l'absence de dioxygène.
Type micro-aérophile : cultureseulement dans une zone depression faible en di-oxygène.
Aspect du milieu avant utilisation Aspect du milieu après utilisation
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- Milieu Hugh et Leif son
De l'étude du métabolisme énergétique il découle que un glucide peut être catabolisé par voie respiratoire ou par voiefermentative. Le milieu de Hugh et Leifson permet de distinguer entre les deux processus.
La dégradation d'un glucide s'accompagne généralement d'une acidification du milieu :
- lors des respirations le glucide est oxydé en CO2
, par le dioxygène (ou un autre oxydant minéral);
- Lors des fermentations le glucide est oxydé en acides, alcools, qui sont libérés dans le milieu qu'ils acidifient sensiblement. Toutesles voies fermentaires ne sont cependant pas également acidifiantes.
Aspect dumilieu avant
utilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
- Régénérer lemilieu au bain-marie bouillant.Ramener à 45-50°C.
- Ajouteraseptiquement leglucide étudié (icile glucose) pourobtenir uneconcentrationfinale de 1%.
- Agiter(l'agitation doitêtre douce pouréviter l'entréed'air) et laisser le
milieu se solidifier(en le passant sousl'eau froide parexemple).
- Ensemencer parpiqûre centrale.
- Ne pas revisser àfond le bouchon.
- Mettre à l'étuve.
Le milieu deHugh et Leifsoncontient unindicateur de pH,le bleu de
bromothymol ,qui prend unecouleur jaune enmilieu acide.
Ce milieupermet dedéterminer lavoie d'attaquedes glucides,
comme parexemple leglucose.
Mobilité
- les bactéries fermentatives
- les bactéries oxydatives (quioxydent le glucide parrespiration aérobie)
- les bactéries inactives ouinertes
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- Mannit ol- mobilité
Ce milieu permet l’étude de la dégradation du mannitol qui est un produit de dégradation du mannose.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Ensemencer parpiqûre centrale àl’aide d’un fil droit.
Incuber 24 h à T° optimale.
R : ce milieu estutilisableuniquement pourles bactériesfermentatives.
Mannitol
Mobilité
Nitrate réductase
- Caractère mannitol
- milieu jaune : Mannitol +
- milieu rouge : Mannitol –
- La mobilité : Les bactériestrès mobiles peuvent se déplacerdans la gélose molle : étude de lamobilité.
- Nitrate réductase :
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- Tubes Falkow
Animation Flash
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieu aprèsutilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Pour les bactériesGram – AAF àmétabolisme
fermentatif (Enterobacteriaceaeet Vibrionaceae) :la lecture s'effectueaprès 4 jours à 37 ou30 ou 22°C.
Pour les bactériesGram – AS àmétabolismeoxydatif (Pseudomonas,
Flavobacterium, Xanthomonas,
Alcaligenes, Moraxella, Acinetobacter) : lalecture s'effectueaprès 24 à 48 h à 30°C.
- LDC : lysinedécarboxylase
- ADC : argininedécarboxylase
- ODC : ornithinedécarboxylase…
… selon l’acideaminé ajouté aumilieu
Virage au jaune (acide)décarboxylase –
Virage au violet (basique)décarboxylase +
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- Tubes Möller
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Pour les bactériesGram – AAF àmétabolisme
fermentatif (Enterobacteriaceaeet Vibrionaceae) :la lecture s'effectueaprès 4 jours à 37 ou30 ou 22°C.
Pour les bactériesGram – AS àmétabolismeoxydatif (Pseudomonas,
Flavobacterium, Xanthomonas,
Alcaligenes, Moraxella, Acinetobacter) : lalecture s'effectueaprès 24 à 48 h joursà 30 °C.
- LDC : lysinedécarboxylase
- ADC : argininedécarboxylase
- ODC : ornithinedécarboxylase…
… selon l’acideaminé ajouté aumilieu
Virage au jaune (acide)décarboxylase –
Virage au violet (basique)décarboxylase +
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- Mili eu PCB
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
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- Mili eu King A et King B
Les milieux de King (milieu King A et milieu King B permettent de différencier entre elles les différences espèces du genrePseudomonas, par la mise en évidence de la production de pigments spécifiques.
L'élaboration des pigments est influencée par la composition du milieu, ce qui justifie l'utilisation de deux milieux différents : King Aet King B.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
- A partir d'uneculture sur gélose(faire unesuspension en eaudistillée) ou dansun bouillon,ensemencer lemilieu en faisantune strie à lasurface de la géloseavec l'anse (ou en
déposant unegoutte desuspension).
- L'incubation estréalisée enaérobiose.
la production depyocanine, duespécifiquement àPseudomonas
aeruginosa, estfavorisée par laprésence d'ionsinorganiques. Larecherche de laproduction depyocyanine est
effectuée surmilieu King A.
la production depyoverdine, estfavorisée par uneteneur élevée enphosphate. Larecherche de laproduction depyoverdine esteffectuée surmilieu King B.
- couleur bleue sur le milieuKing A (présence depyocyanine)
- couleur jaune-vert fluorescentsur le milieu King B (présencede pyoverdine) sous UV.
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- Bouillon cœur- cervelle
Milieu de mise en évidence de la respiration sur nitrates, par recherche de la nitrate réductase (NR).
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Introduire quelquesgouttes de cultureliquide à la pipettePasteur, ou uneoese de culturesolide, dans lebouillon
Homogénéiser.
Incuber 24 heures à37°C.
Test nitrate-réductase Voir NR
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- Gélose PCA
La gélose glucosée à l'extrait de levure appelée par les Anglo-Saxons "Plate Count Agar" est utilisée en bactériologie alimentaire pourle dénombrement des bactéries aérobies dans le lait, les viandes, les produits à base de viande, les autres produits alimentaires, ainsique pour l'analyse des produits pharmaceutiques, des produits cosmétiques et de leurs matières premières.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
- Faire fondre lemilieu (s'il estpréparé à l'avance).
- Refroidir etmaintenir à 48°C.
- Transférer 1 mldu produit àanalyser et de sesdilutions décimalessuccessives dansdes boîtes de Pétri
stériles.
- Couler 10 à 15 mlde milieu.
- Homogénéiserparfaitement.
- Laisser solidifiersur une surfacefroide.
- Couler 4 ml de
gélose blanchestérile
- Laisser solidifierà nouveau.
- Incuber:
Peu être additionnéadditionné de lait
La casèinase On tiendra compte des boîtes dePetri contenant un nombre decolonies compris entre 30 et 300
Les bactéries caséolytiquesforment un halo plus clair autourde chaque colonie (protéolyse dela caséine du lait)
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- Gelose Esculine agar
L'esculine est un hétéroside (molécule composée d'un ose associée à une structure non osidique). L'hydrolyse de l'esculine, catalysée
par une β-glucosidase : l'esculinase, est un des critères usuels utilisé dans l'identification différerentielle au sein de nombreux genresbactériens, notamment les Pseudomonadaceae et les Streptococcaceae.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Piqûre centraledans le culot, etincubée à 37°C.
Recherhce del'esculinase
Milieu présente une fortecoloration noire : hydrolyse del’esculine : esculine +
Le milieu ne présente pas decoloration noire : esculine -
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- Milieu Rappapor t
Milieu sélectif d'enrichissement pour la recherche des Salmonelles.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Mode d’ensemencement Sélectivité / composition
Ensemencer largement.
Incuber 24 h à t°C optimale.
Vert malachite, MgCl2 et pH acide =>rendent le milieu très sélectif permettant unenrichissement en Salmonella à l'exceptionde Salmonella typhi et Salmonella paratyph
A-B et C.
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- Milieu synthét ique avec xylose
Ces milieux permettent l’étude du métabolisme glucidique pour l’identification des différentes espèces de Bacillus.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Ensemencer lapente par desstries serrées àl’öse et le culotpar piqûre centraleau fil droit.
Incuber 1 à 15ours à la
températuredésirée.
Observer tous lesours pendant une
à deux semaines
Il ne contient pasde peptone celapermet d’évitterune possiblealcalinisation dumilieu pardégradation despeptones.
Le métabolismedes glucides qui sefait par la voieoxydative.etfermentative
L’
attaque d’
un glucide setraduit par un virage du BCPdu violet au jaune.
Soit tout le tube ou surtout leculot : espèce fermentative.
Soit de la pente seulement :espèce oxydative.
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- Milieu Hypersalée
Ce sont des milieux où les conditions de vie sont très difficiles par modification de pH, de pression osmotique ou par l ’addition d’unagent inhibiteur.
Ces milieux sont utilisés dans la macro galerie d’identification des Streptococcus du groupe D.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Quelques gouttesde suspension
Incubation : 24 à48 h à 37°C.
Culture en milieuhypersalé
- tube clair : stérile négatif.
- tube trouble : positif.
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- Milieu Hyperbilié
Ce sont des milieux où les conditions de vie sont très difficiles par modification de pH, de pression osmotique ou par l ’addition d’unagent inhibiteur.
Ces milieux sont utilisés dans la macro galerie d’identification des Streptococcus du groupe D.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
Quelques gouttesde suspension
Incubation : 24 à48 h à 37°C.
Culture en milieuhyperbilié
- tube clair : stérile négatif.
- tube trouble : positif.
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- EPO plus sacchar ose
Les bactéries peu exigeantes et aérobies facultatives peuvent utiliser le glucide du milieu par fermentation. Cela se traduit parune grande quantité d’acide produit dans le milieu. La fermentation peut s’accompagner de gaz qui s’accumule dans la cloche.
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
Chasser tout le gazde la cloche enretournantvivement le tubeplusieurs fois.
Ensemencerlargement.
Incuber à t°Coptimale 24 h.
Utilisation duglucide du milieupar fermentation
Milieu jaune sans gaz : glucide+ sans gaz
Milieu jaune avec gaz : glucide+ avec gaz
Milieu rouge : glucide –
Attention aux résultatsfaussement positif et négatisfs.voir plus d’information.
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- Bouillon lact osé au BCP
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés Résultats
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- Bouillon BLBVB
Milieu de dénombrement des coliformes en microbiologie alimentaire (analyse des eaux et des aliments).
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition
Caractèresrecherchés
Résultats
la bile
le vert brillant
sont inhibiteurs desbactéries Gram +
le lactose dont lafermentation estrévélée par laprésence de gaz
Trouble du milieu et gaz sous lacloche alors fermentation lactosealors coliforme.
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- Gélose Lowenst ein- J ensen
C’est un milieu d’enrichissement, sélectif qui permet le développement des mycobactéries
Aspect du milieuavant utilisation
Aspect du milieuaprès utilisation
Moded’ensemencement
Sélectivité / composition Résultats
Un inhibiteur le vertmalachite. Dans des conditions optimales decroissance les mycobactéries semultiplient lentement, et l'on obtient descolonies après au minimum 7 jours, etusqu'à 8 semaines pour Mycobacterium
tuberculosis
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