BURKINA FASO Unité-Progrès-Justice
Soutenu par WERME Karidia
Université Catholique de l’Afrique de l’Ouest Unité Universitaire à Bobo-Dioulasso
UCAO/UUB
CERBA/LABIOGENE
THEME : Diagnostic Moléculaire de Helicobacter pylori par PCR au Centre Médical Saint Camille et au CERBA/LABIOGENE
(OUAGADOUGOU).
MASTER EN BIOLOGIE APPLIQUEE
OPTION: Bactériologie Virologie
Président du jury :
Membres :
Directeur du Mémoire: Pr Jacques SIMPORE
Décembre 2012
i
EDICACE
A mes parents bien aimés, ce travail est le votre.
ii
REMERCIEMENTS…
Ce travail a été réalisé au Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro ANNIGONI
(CERBA/LABIOGENE) et au laboratoire biomédical du Centre Médical Saint Camille.
Nous exprimons nos profondes gratitudes :
A notre Directeur de mémoire, le Professeur Jacques SIMPORE, Professeur Titulaire
de Biologie Moléculaire et de Génétique moléculaire à l’Université de Ouagadougou,
Directeur du Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA/LABIOGENE),
Directeur du Laboratoire Biomédical Saint Camille et Recteur de l’Université Saint Thomas
d’Aquin (USTA) pour m’avoir acceptée dans son laboratoire. Il a encadré avec bienveillance
ce mémoire de Master, financé entièrement sa réalisation et donné les moyens nécessaires
pour mener à bien cette étude. Vos qualités sociales ainsi que votre rigueur dans le travail sont
des leçons pour nous. Merci encore pour le support financier de cette recherche. Puisse ce
travail de recherche être à la hauteur de votre attente.
A l’ensemble du personnel de l’Université Catholique de l’Afrique de l’Ouest
(UCAO) et plus particulièrement au vice président, Abbé Novat KPODA et au directeur de
l’Unité de Formation et de Recherche en Science et Technologie (UFR/ST), Dr SALOU
Hamidou pour ces années formidables passées au sein de l’université.
A tous mes Professeurs qui nous ont enseignés durant ces années du Master : merci
chers professeurs.
Aux personnels du service de gastroentérologie du Centre Médical Saint Camille de
Ouagadougou:
Dr OUEDRAOGO Issiaka médecin Gastroentérologue, frère Camille LAGWARE et
aux deux Filles de salle (Adèle DANGOURGA et Blandine OUEDRAOGO) pour l’obtention
des prélèvements qui ont permis de réaliser ces travaux. Merci infiniment.
Aux patients qui ont accepté de participer à cette étude, que le Tout-Puissant vous
bénisse et qu’il vous accorde une meilleure santé.
Au Dr BISSEYE Cyrille. Pour sa patience à nous former aux techniques de la PCR
pour lesquelles nous ne présentions pas de dispositions particulières. Pour le temps qu’il a
iii
consacré à rendre ce travail de qualité ainsi que de sa disponibilité constante. Profonde
reconnaissance.
A la Conférence Épiscopale Italienne (CEI), pour leur soutien financier dans la
réalisation de nos travaux de recherches.
Un merci particulier au « Programme d’Appui et de développement des Centres
d’Excellence Régionaux (PACER) » de l’UEMOA qui nous a soutenu au dernier moment
pour que nous puissions terminer ce mémoire de Master.
Aux chercheurs du CERBA/LABIOGENE :
Aux Docteurs OUERMI Diane Djénèba, DJIGMA W Florencia et SAGNA Tani pour
leurs précieuses contributions à ce travail et pour le temps qu’ils ont consacré pour ce
mémoire. Merci infiniment.
Aux Doctorants du Laboratoire du Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro
Annigoni (CERBA) pour leur franche collaboration et soutien.
A tous les étudiants de DEA /MASTER du Centre de Recherche Biomoléculaire,
CERBA pour le partage, le soutien mutuel et la fraternité qu’ils entretiennent.
A tous les techniciens et personnels du laboratoire du Centre Médical Saint Camille
pour leur franche collaboration. Puisse le Seigneur vous récompense au centuple.
iv
TABLE DES MATIERES
REMERCIEMENTS… .............................................................................................................. ii
LISTE DES ACRONYMES .................................................................................................... vii
LISTE DES TABLEAUX ....................................................................................................... viii
LISTE DES FIGURES .............................................................................................................. ix
RESUME ................................................................................................................................... xi
ABSTRACT .............................................................................................................................. xi
INTRODUCTION ...................................................................................................................... 1
CHAPITRE I: GENERALITES ................................................................................................. 3
I: L’appareil digestif ............................................................................................................... 3
I. 1-Généralités sur l’appareil digestif ................................................................................ 3
I.2-L’estomac ......................................................................................................................... 4
I.2.1-Anatomie descriptive de l’estomac ............................................................................ 4
I.2.2-Histologie de l’estomac ............................................................................................. 5
I.2.3-Rôles de l’estomac ..................................................................................................... 6
I.2.4-Physiologie de l’estomac ........................................................................................... 7
I.3-Mécanisme de contrôle de la sécrétion gastrique ............................................................. 9
I.3.1-Stimulation nerveuse ................................................................................................. 9
I.3.2-Stimulation hormonale .............................................................................................. 9
I.4-Mécanisme de protection de la muqueuse gastrique ...................................................... 10
II: Helicobacter pylori .............................................................................................................. 12
II.1-Définition ...................................................................................................................... 12
v
II.2-Historique ...................................................................................................................... 13
II.3-Epidémiologie de l’infection à H. pylori ....................................................................... 15
II.3.1-Habitat de H. pylori ................................................................................................ 15
II.3.2-Transmission de l’infection .................................................................................... 16
II.3.3-Prévalence de l’infection ........................................................................................ 17
II.4.-Morphologie ................................................................................................................. 19
II.5-Croissance et caractéristiques biochimiques ................................................................. 21
II.6-Caractéristiques génotypiques ....................................................................................... 21
II.7-Clinique et Pathogenèse de l’infection .......................................................................... 22
II.7.2-Cancer gastrique ..................................................................................................... 25
II.7.3-Lymphome gastrique du MALT .................................................................................... 27
II.7.4-Autres pathologies associées à une infection à H. pylori ....................................... 28
II.8-Traitement de l’infection ............................................................................................... 28
II.9-Prévention ...................................................................................................................... 29
III- Diagnostic d’une infection à H. pylori ............................................................................... 29
III.1-Diagnostic par des méthodes de prélèvements invasifs ............................................... 30
III.1.1-Examen anatomopathologique (histologie) .......................................................... 30
III.1.2-Test rapide à l’Uréase ........................................................................................... 30
III.1.3-Culture bactérienne ............................................................................................... 31
III.1.4-Biologie moléculaire ............................................................................................. 31
III.2-Diagnostic par des méthodes de prélèvements non-invasifs. ....................................... 32
III.2.1-Sérologie ............................................................................................................... 32
III.2.2-Test respiratoire à l’urée marquée ......................................................................... 32
III.2.3-Recherche d’antigène dans les selles .................................................................... 33
CHAPITRE II:METHODOLOGIES ....................................................................................... 34
II.1-Cadre de l’étude ............................................................................................................ 34
vi
II.1.1-Centre Médical Saint Camille ................................................................................ 34
II.1.2-Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA/LABIOGENE) . 35
II.2-Déroulement de l’étude ................................................................................................. 36
II.2.1-Période et type d’étude ........................................................................................... 36
II.2.2-Collecte des données et des échantillons ................................................................ 36
II.2.3-Mode de recrutement .............................................................................................. 36
II.3-Considération éthique .................................................................................................... 36
II.4-Matériel ......................................................................................................................... 37
II.4.1-Appareil de fibroscopie .......................................................................................... 37
II.5-Méthodes pour les techniques utilisées ......................................................................... 39
II.5.1-Technique de Diagnostic Rapide ............................................................................ 39
II.5.1.1-Procédure du test rapide ¨Acon¨ .......................................................................... 39
II.5.1.2-Technique Immunocomb II (mini chaine ELISA) .............................................. 40
II.5.1.3-Sensibilité et Spécificité des tests ........................................................................ 41
II.5.2-Technique d’extraction d’ADN .............................................................................. 43
II.5.3-PCR (Polymerase Chain Reaction) pour la détection de H. pylori ........................ 43
II.5.4-Analyses des données ............................................................................................. 44
CHAPITRE III: RESULTATS ET DISCUSSION .................................................................. 45
III.1-Résultats ....................................................................................................................... 45
III.2-Discussion ........................................................................................................................ 52
Conclusion et Perspectives ....................................................................................................... 54
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ................................................................................. 55
vii
LISTE DES ACRONYMES
ADN : Acide Désoxyribonucléique ARN : Acide Ribo Nucléique BCIP : 5 Bromo-4 Chloro-3 Indolyl Phosphate BET : Bromure d’Ethidium CagA : Cytotoxin Associated Gene A CERBA : Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni CLO : Campylobacter Like Organisme CMSC : Centre Médical Saint Camile DO : Densité Optique EDTA : Ethylène Diamine Tétra Acétique ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay IL : Interleukine IPP : Inhibiteur de la Pompe à Proton LABIOGENE : Laboratoire de Biologie Moléculaire et de Génétique Moléculaire NBT : Nitro Blue Tetrazolium NHPH : Non – H .pylori Helicobacter OMS : Organisation Mondiale de la Santé PBS : Phosphate Buffered Saline PCR : Polymerase Chain Reaction PED : Pays en Développement PTI : Purpura Thrombocytopénique Idiopathique TDR : Technique de Diagnostic Rapide TBE : Tris Borate EDTA TE : Tris EDTA UCAO : Université Catholique d’Afrique de l’Ouest UFR/ST : Unité de Formation et de Recherche en Science et Technologie UUB : Unité Universitaire à Bobo Dioulasso UV : Ultra Violet VacA : Vacuolating Cytotoxin Agent A
viii
LISTE DES TABLEAUX Tableau I: Mélange Réactionnel de la PCR. ............................................................................ 44
Tableau II: Programme d’amplification de la PCR .................................................................. 44
Tableau III: Statuts sociodémographiques des patients ........................................................... 46
Tableau IV: Répartition des pathologies gastriques dans les différents groupes sociodémographiques. .............................................................................................................. 47
Tableau V: Répartition des pathologies gastriques en fonction des différents tests utilisés. ... 50
Tableau VI: Comparaison des résultats de la PCR et de l’Immunocomb. ............................... 50
Tableau VII: Comparaison des résultats de la PCR et Acon. .................................................. 51
ix
LISTE DES FIGURES
Figure 1: Organes du tube digestif et organes annexes (Marieb, 1999) ..................................... 4
Figure 2: Musculature de l'estomac (Marieb, 1999). ................................................................. 6
Figure 3: Habitat de H. Pylori .................................................................................................. 16
Figure 4: Répartition géographique de la prévalence de l’infection à H. Pylori ..................... 17
Figure 5: H. pylori en microscopie électronique ...................................................................... 20
Figure 6: Examen microscopique d’une culture après coloration de Gram. H. pylori apparait
sous diverses formes: bacillaire, incurvé, en U en C ou en O. ................................................. 20
Figure 7: Ulcère gastrique pré pylorique (A), Multiple ulcère bulbaires (B) .......................... 23
Figure 8: Implication de H. pylori dans la genèse de la gastrite et de la maladie ulcéreuse
peptique. ................................................................................................................................... 24
Figure 9: Adénocarcinome gastrique visualisé par endoscopie ............................................... 25
Figure10: Représentation schématique de la physio- pathogénie de l'infection à H. pylori dans
le cancer gastrique et l'ulcère duodénal. ................................................................................... 26
Figure11:Lymphome gastrique du MALT, chez une patiente de 46 ans, visualisé par
endoscopie et histologie (Suzuki et al., 2009). ........................................................................ 27
Figure12: Visualisation de H. pylori sur coupe histologique ................................................... 30
Figure 13: Culture de H. pylori obtenue après trois jours d'incubation sur boite au sang. ...... 31
Figure 14: Principe du test respiratoire à l'urée marquée au 13C .............................................. 33
Figure15: Thermocycleur 9700 (Applied Biosystems) ............................................................ 37
x
Figure16: Système d’électrophorèse ........................................................................................ 37
Figure17: Système photo gel doc ............................................................................................. 38
Figure18: Centrifugeuse réfrigérée .......................................................................................... 38
Figure 19: Photo de test rapide (Acon) .................................................................................... 39
Figure 20: Photo du test ELISA (Immunocomb) ..................................................................... 41
Figure 21: Electrophorèse sur gel d’agarose à 2% d’échantillons positifs et négatifs de H.
pylori. ....................................................................................................................................... 49
xi
RESUME Helicobacter pylori est une bactérie répandue dans tous les pays et dans tous les
continents. A l’échelle mondiale, sa prévalence est supérieure à 50%. Cette bactérie constitue
un problème de santé publique notamment dans les pays en développement. L’infection
entraine une gastrite pouvant évoluer vers des formes sévères d’ulcération et de
transformation maligne.
Cette étude avait pour objectif de diagnostiquer H. pylori par des techniques
sérologique et moléculaire. Une étude prospective a été conduite de mars à juin 2012 sur 70
patients en consultation dans le service de gastroentérologie au Centre Médical Saint Camille.
Le diagnostic de H. pylori a été réalisé par le test ELISA Immunocomb (ORGENICS Ltd,
Yavne, Israël) et le test de détection rapide Acon (Acon Laboratories, INC, USA). La
sérologie des patients a été confirmée par PCR sur des biopsies gastriques en utilisant le kit H.
pylori 520 (Sacace Biotechnologie, Italie).
Les malades étaient majoritairement des Adultes dont l’âge était supérieur à 40 ans
(44,28%) et les femmes représentaient 57,1%. La majorité des patients provenaient de la zone
urbaine (75,7%) et était issue du groupe ethnique mossi (65,7%).
La totalité des 70 échantillons ont été analysés par la PCR. Les prévalences de H. pylori
identifiées chez les patients étaient de : 27,14% par la sérologie Acon ; 88,57% par la
sérologie Immunocomb et 91,43% par PCR. La performance de la PCR a été comparée à celle
de la technique Immunocomb et Acon. Les résultats ont montré une sensibilité et une
spécificité respectivement de 92,2% et 50% pour la technique Immunocomb et une sensibilité
et spécificité de 28,1% et 83,3% pour la technique Acon.
Le taux de l’infection de H. pylori était d’une part similaire chez les patients ayant une
biopsie normale et d’autre part chez ceux présentant une pathologie gastrique. Il a été trouvé
que les pathologies gastroduodénales étaient plus fréquentes chez les patients de plus de 45
ans comparativement à ceux de la tranche d’âge de 16 à 25 ans. Le diagnostic de H. pylori par
PCR est plus sensible et plus spécifique que les tests sérologiques (Immunocomb et Acon).
Ainsi pour une efficacité de dépistage, cette technique moléculaire devrait être introduite,
malgré son coût plus élevé, dans le diagnostic de routine de cette bactérie pathogène qui
induit des pathologies gastriques telles que les gastrites, les ulcères et les cancers gastriques.
Mots clés : Helicobacter pylori, Prévalence, PCR, Immunocomb, Acon.
xii
ABSTRACT
Helicobacter pylori is a bacterium common in all countries and in all continents. Globally, the
prevalence is greater than 50%. This bacterium is a public health problem especially in
developing countries. The infection causes gastritis which may progress to severe ulceration
and malignant transformation.
This study aimed to diagnose H. pylori through serological and molecular techniques.
A prospective study was conducted from March to June 2012 on 70 patients in consultation in
the division of gastroenterology at Saint Camille Medical Center. The diagnosis of H. pylori
was performed by the ELISA Immunocomb test (Orgenics Ltd, Yavne, Israel) and the Acon
rapid detection test (Acon Laboratories, Inc., USA).The serology of the patients was
confirmed by PCR in gastric biopsies by using the H. pylori 520 kit (Sacace Biotechnology,
Italy).
The patients were mostly adults whose age was over 40 (44.28%) and females
accounted for 57.1%. The majority of the patients was from urban areas (75.7%) and from the
Mossi ethnic group (65, 7%).
All the 70 samples were analyzed by PCR. The prevalence of H. pylori identified on patients
was: 27.14% through the Acon serology, 88.57% through Immunocomb serology and 91.43%
through PCR. The performance of the PCR was compared with that of the Immunocomb and
Acon technique. The results showed a sensitivity and specificity were respectively 92.2% and
50% for the Immunocomb technique and a sensitivity and specificity of 28.1% and 83.3% for
the Acon technique.
The rate of infection of H. pylori was similar proportion in patients with normal
biopsy and also in those with gastric pathology. It was found that gastroduodenal diseases
were more frequent in patients aged over 45 as compared to those of the age group of 16 to
25. The diagnosis of H. pylori by PCR is more sensitive and specific than the serological tests
(Immunocomb and Acon). Thus, for an efficient screening, this molecular technique should
be introduced, despite its higher cost in the routine diagnosis of that pathogenic bacterium
which induces gastric diseases such as gastritis, ulcers and gastric cancers.
Keywords : Helicobacter pylori, Prevalence, PCR, Immunocomb, Acon.
1
INTRODUCTION
Jusqu’au début des années 80, une éventuelle implication bactérienne dans les
pathologies gastriques n’avait jamais été envisagée. Seul le rôle de l’hyperacidité gastrique
liée au stress et à d’autres facteurs environnementaux et génétiques était pris en considération,
avec comme conséquence la prescription d’antiacide à de très nombreux patients durant des
générations, sans jamais parvenir à éviter les rechutes. La récente découverte (1983) de
l’implication de Helicobacter pylori dans l’étiologie des pathologies gastriques par Barry
James Marshall et John Robin Warren (Marshall et Warren, 1984) a révolutionné le monde
de la gastro-entérologie avec en prime l’attribution, en 2005 du prix Nobel de médecine et de
physiologie à ces imminents chercheurs Australiens.
Enoncé du problème
H. pylori est l’un des agents pathogènes humains dont la prévalence mondiale est la
plus élevée. A l’échelle mondiale, sa prévalence est supérieure à 50% (The Eurogast Study
Group, 1993; Brown, 2000). Particulièrement dans les pays en développement, des personnes
peuvent être aux prises avec une infection chronique à l’âge adulte. Le taux de prévalence de
H. pylori varie selon les pays et les continents: 30% en France; 70% en Asie du Sud-est; 30%
en Amérique; 78% en Algérie; 69% en Côte d’Ivoire (Fauchere, 1994); 81.3% (Ilboudo et al.,
1997) et 96.1% (Cataldo et al., 2004) au Burkina Faso. Il est aujourd’hui clairement établi que
toute colonisation de la muqueuse de l’estomac par H. pylori entraine une gastrite pouvant
évoluer vers des formes plus sévères d’ulcération ou de transformation maligne. H. pylori est
la seule espèce bactérienne reconnue par l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) comme
étant cancérigène pour l’homme (www.Pasteur.fr/ip/.../fr. /). L’infection est généralement
acquise dans l’enfance et perdure pendant des dizaines d’années.
2
Justification de l’étude
Au Burkina Faso, très peu d’études ont été faites sur l’infection à H. pylori en utilisant
la technique de la PCR. Ce microorganisme pathogène demeure encore mal connu dans le
pays. Ainsi, le diagnostic de H. pylori se fait essentiellement par la sérologie ou d’autres
techniques non moléculaires. Ces techniques présentent des limites telles que faible sensibilité
et spécificité. Elles ne permettent pas aussi de distinguer les infections guéries des infections
actives. Le diagnostic peut se faire également par des techniques moléculaires. La PCR est
donc une technique de choix pour confirmer le diagnostic sérologique de H. pylori chez les
patients.
Objectifs de la recherche
Objectif principal
L’objectif principal de cette étude est le diagnostic moléculaire de H. pylori par PCR,
chez les patients en consultation au service de gastro-entérologie du Centre Médical Saint
Camille de Ouagadougou.
Objectifs spécifiques
1 - Déterminer le taux de prévalence de l’infection à H. pylori effectué par des tests
sérologiques au Centre Médical Saint Camille chez les patients en consultation de
gastro-entérologie ;
2 - Confirmer par PCR les tests sérologiques effectués ;
3 - Evaluer la sensibilité et la spécificité des deux tests sérologiques utilisés pour
dépister H. pylori: Immunocomb et Acon.
3
CHAPITRE I: GENERALITES
I: L’appareil digestif
I .1-Généralités sur l’appareil digestif
L’appareil digestif est composé de l'ensemble des organes qui assurent la digestion des
aliments.
Le tube digestif est un long tube où circulent les aliments en cours de digestion. Il
comprend la bouche, le pharynx, l'œsophage, l'estomac et l'intestin divisé en intestin grêle,
côlon et rectum (figure 1).
Les glandes digestives sont des glandes situées dans la paroi ou à proximité du tube digestif et
qui produisent un suc digestif:
� Les glandes salivaires produisent la salive ;
� La paroi de l’estomac produit du suc gastrique ;
� Le pancréas produit du suc pancréatique ;
� Le foie produit la bile ;
� La paroi de l’intestin produit du suc intestinal.
4
Figure 1: Organes du tube digestif et organes annexes (Marieb, 1999)
I.2-L’estomac
I.2.1-Anatomie descriptive de l’estomac
L’estomac est la portion du tube digestif en forme de poche, situé entre l’œsophage et
le duodénum. Chez l’être humain, l’organe est en forme de J majuscule. A l’âge adulte il fait
environ 15 cm de haut, contient 0,5 litre à vide, et peut contenir jusqu’à 4 litres. L’estomac est
en rapport anatomique avec le foie (à droite), la rate (à gauche), le pancréas (en arrière), le
diaphragme (en haut) et les intestins (en bas) (Sherwood, 2006 ; Marieb, 1999). Il présente
une ouverture en haut, le cardia qui permet la jonction avec l'œsophage.
Le fundus de l'estomac ou grosse tubérosité est mince et moins épais que les autres
parties. Il a une principale fonction sécrétrice et comporte des glandes gastriques sur un quart
de son épaisseur. L’antre , ne sécrète ni enzymes ni acide chlorhydrique, mais reçoit ces
produits avec les aliments, continuant la décomposition commencée plus haut. Sa musculature
est beaucoup plus importante, ce qui fait que son action est beaucoup plus mécanique que
sécrétoire. (Samsong, 1980).
5
La partie inférieure, pylore, comprend le muscle sphincter pylorique, qui permet la
sortie cadencée du chyme gastrique dans le duodénum. Tout comme le cardia, un sphincter
qui empêche le reflux du contenu duodénal vers l’estomac.
I.2.2-Histologie de l’estomac
Comme toutes les parties du tube digestif, l’estomac a quatre tuniques qui sont
constituées de l’extérieur vers l’intérieur par:
- La séreuse qui est formée de péritoine; elle recouvre la quasi-totalité de la surface de
l’estomac et est constituée de trois couches musculaires (longitudinale, oblique et
circulaire). (Marieb, 1999).
- La musculeuse, faite de fibres longitudinales, circulaires et obliques. La contraction
simultanée de ces muscles intervient dans la digestion mécanique des aliments.
- La sous muqueuse faite de tissu conjonctif riche en vaisseaux.
Pour commander le travail de ses muscles, l'estomac comme toutes les autres parties du
tube digestif possède son système nerveux pariétal propre : le plexus nerveux intrinsèque
constitué principalement du plexus myentérique et du plexus sous-muqueux situés tous dans
la sous-muqueuse. Ce pace maker contient autant de neurones que la moelle épinière et donne
au tube digestif la possibilité de régler dans une large mesure son propre fonctionnement
(Sherwood, 2006).
- La muqueuse contenant de nombreuses glandes. La muqueuse gastrique tapisse la
totalité de la cavité de l’estomac. Elle est constituée par un épithélium de recouvrement
dont la surface est parsemée de nombreuses cryptes glandulaires (Marieb, 1999).
Le revêtement épithélial de la muqueuse de l’estomac est un épithélium simple
entièrement constitué de cellules qui produisent un mucus protecteur. Ce revêtement lisse est
parsemé de millions de cryptes de l’estomac. Celles-ci plongent jusqu’aux glandes gastriques
qui secrètent le suc gastrique. Les cellules qui tapissent la paroi de l’estomac sont
généralement semblables à celles de la muqueuse, mais les cellules qui forment les glandes
gastriques varient selon les régions de l’estomac (figure 2).
6
Figure 2: Musculature de l'estomac (Marieb, 1999).
I.2.3-Rôles de l’estomac
Il joue plusieurs rôles :
Stérilise le bol alimentaire : il détruit les microbes et empêche la prolifération de ceux-ci à
l’intérieur de l’estomac.
Commence la digestion des protéines alimentaires: Floculation des protéines, les protéines
perdent une partie de leurs caractéristiques, destruction de la structure quaternaire, tertiaire
voire secondaire. Les protéines sont alors sous forme d’un filament ce qui favorise, l’activité
des enzymes peptidiques (Sherwood, 2006).
Active les enzymes protéolytiques : Il provoque notamment l’activation des fragments
protéolytiques, il transforme le pepsinogène inactif en pepsine active.
Ralentis le vidange gastrique: Il déclenche le fonctionnement pylorique. En effet c’est
lorsque le suc gastrique devient très acide à la fin de la digestion gastrique que le pylore
commence son fonctionnement (Sherwood, 2006).
7
Facilite la dégradation des lipides (émulsion) : Le Chlorure d’Hydrogène (HCl) contribue à
la fragmentation des lipides, diminuant ainsi leur taille. De plus, l’estomac secréterait une
lipase qui commence la digestion des lipides (Marieb, 1999).
Stimule la sécrétion pancréatique: en effet, c’est lorsque l’estomac atteint une certaine
acidité que la sécrétion pancréatique est déclenchée (Sherwood, 2006).
I.2.4-Physiologie de l’estomac
I.2.4.1-Dégradation et mobilité:
L'estomac poursuit le travail de dégradation des aliments commencé par la cavité
buccale, à la fois physiquement, grâce à sa couche de muscle lisse oblique, mais aussi
chimiquement. La pepsine est l'enzyme protéolytique la plus importante élaborée dans
l'estomac. Elle procède à la digestion des protéines.
Le relâchement du muscle lisse qui permet la dilatation de l'estomac, est assuré par
deux phénomènes: le relâchement réflexe du muscle et la déglutition coordonnée par le bulbe
rachidien.
Le péristaltisme brassant et dégradant physiquement les aliments n'est pas le même
dans tout l'estomac. En effet, celui-ci est de plus en plus ample et fort, de la grosse tubérosité
à l'anse pylorique. La fréquence des contractions est d'environ 3 minutes, grâce à des cellules
surnommées cellules "pace maker", se dépolarisant de façon spontanée à ce rythme.
En général, l'estomac est totalement vidangé en moins de 4 heures après un repas, mais
la vitesse d'évacuation est plus liée au contenu du duodénum qu'au contenu de l'estomac lui-
même. Les lipides provoquent un ralentissement de la vidange, une couche huileuse
recouvrant le chyme étant digérée plus lentement par les enzymes intestinales. Aussi, un repas
très riche en graisses peut nécessiter plus de 6 heures avant vidange complète.
I.2.4.2 - Le facteur intrinsèque:
Bien que l'estomac joue un rôle central dans la progression de la digestion du bol
alimentaire, il ne possède qu'une fonction essentielle au maintien de la vie. C'est la sécrétion
du facteur intrinsèque. En effet, ce facteur est indispensable à l'absorption intestinale de la
vitamine B12, nécessaire à l'érythropoïèse. Son déficit cause l'anémie pernicieuse.
8
I.2.4.3 - Régulation de la sécrétion gastrique:
Les stimuli provoquant ou inhibant la sécrétion gastrique agissent en trois points, au
niveau de l'encéphale, de l'estomac lui-même et au niveau intestinal.
La phase céphalique: c'est une phase de sécrétion des sucs gastriques se mettant en
branle avant que le bol alimentaire ne parvienne à l'estomac. Elle est déclenchée par la vue,
l’odorat ou même l'idée de la nourriture. Les informations parviennent à l'hypothalamus, qui
stimule alors les noyaux des nerfs vagues du bulbe rachidien, envoyant des influx moteurs
vers les glandes gastriques. Il s'agit d'un réflexe conditionné, se mettant en place par le désir
de la nourriture.
La phase gastrique: elle est la plus complexe. Une fois le bol alimentaire dans
l'estomac, des mécanismes nerveux et hormonaux mettent en action cette phase gastrique
durant laquelle environ 2/3 des sucs seront libérés.
La distension de l'estomac causée par la présence de nourriture active des mécanorécepteurs,
conduisant à la libération d'acétylcholine, stimulant alors la libération du suc.
Les protéines partiellement digérées activent les cellules sécrétrices de gastrine, stimulant à
son tour la libération de suc et d'enzymes. Une rétro-inhibition de la sécrétion de gastrine se
fait dès lors que l'estomac a atteint un certain seuil d'acidité.
La régulation des cellules sécrétrices du Chlorure d’hydrogène (HCl) est dépendante de trois
substances chimiques: l'acétylcholine et la gastrine, mais aussi de l'histamine.
Ainsi, dans certaines formes d'ulcères liées à l'hyperacidité, les antihistaminiques se révèlent
être efficaces.
La phase intestinale se passe en deux étapes:
La phase excitatrice: lorsque des aliments partiellement digérés parviennent au
duodénum, les cellules de la muqueuse intestinale libèrent une substance similaire à la
gastrine, nommée gastrine entérique, stimulant de façon brève la sécrétion gastrique.
La phase inhibitrice: il s'agit d'un réflexe d'inhibition entérogastrique, déclenché par
la distension mécanique de l'intestin par le chyme:
•Elle exerce une inhibition des nerfs vagues du bulbe rachidien;
9
•Inhibe les réflexes locaux;
•Active les neurofibres sympathiques resserrant le muscle pylorique et stoppant ainsi
la libération de chyme.
I.3-Mécanisme de contrôle de la sécrétion gastrique
La mise en jeu de la sécrétion est déclenchée par un double mécanisme: la stimulation
nerveuse et la stimulation hormonale.
I.3.1- Stimulation nerveuse
Elle emprunte la voie des nerfs pneumogastriques qui transmettent les excitations
sensorielles et psychiques (sécrétion déclenchée par le goût, l’odeur, la vue d’un aliment). La
stimulation nerveuse entraîne une réponse sécrétoire riche en acide chlorhydrique; c’est
d’ailleurs la raison pour laquelle on peut ressentir les douleurs abdominales si, après on ne
mange pas quelque chose (Lacombe, 2007). Par ailleurs le contrôle de la sécrétion acide des
cellules pariétales est principalement assuré par le nerf vague (Keith et Arthur, 2006). Le nerf
vague ou nerf pneumogastrique ou encore nerf cardio-pneumo-entérique ou également nerf
parasympathique est la Xe paire des nerfs crâniens. La stimulation du nerf pneumogastrique X
entraîne une sécrétion riche en pepsine et en Chlorure d’hydrogène (HCl). Son action s'exerce
par 3 mécanismes:
� Action directe sur les cellules principales (plus importante que celle de la
gastrine);
� Stimule les cellules à gastrine;
� Sensibilise les cellules pariétales à l'action de la gastrine.
I.3.2- Stimulation hormonale
Elle est assurée par plusieurs hormones: l’acétylcholine, l’histamine, la gastrine qui est
l’hormone principale. Sa sécrétion est déclenchée et influencée par des facteurs locaux. Le
contact des aliments, distension de l’antre, nature des aliments (alcool, viande). La présence
d’aliment entraine à partir de la muqueuse de l’antre pylorique la libération d’une hormone, la
gastrine, dans le sang veineux gastrique. Repassant dans le sang artériel, la gastrine stimule
les cellules bordantes du corps de l’estomac. La période de latence entre l’introduction de
nourriture dans l’estomac et la sécrétion gastrique sous cette influence hormonale est de
l’ordre de 30-60 minutes. La réponse dure environ deux heures (Samsong, 1980). Cette
hormone entraine une sécrétion gastrique très acide mais pauvre en pepsine. L’action
10
physiologique principale de la gastrine est la stimulation de l’acide et du facteur intrinsèque
(Samsong, 1980).
L’histamine, l’acétylcholine et la gastrine sont de puissants stimulants de la sécrétion
du suc gastrique ; elles agissent sur leurs récepteurs situés à la surface des cellules bordantes
entrainant la sécrétion d’un volume élevé du suc gastrique très acide avec une faible
concentration en pepsine (Samsong, 1980).
Les facteurs stimulant la sécrétion gastrique sont:
� La distension mécanique de l'antre;
� L'alcalisation de l’antre;
� Les aliments riches en protéines tels que le lait, la viande;
� Le nerf pneumogastrique;
Elle est inhibée par plusieurs facteurs:
� L'acidification du contenu gastrique (rétrocontrôle négatif pH dépendant);
� L’introduction du HCl dans la grêle;
� Certaines hormones telles que la sécrétine, le glucagon, et la somatostatine.
Cette dernière inhibe l’hormone somatotrope, connue comme étant capable de stimuler la
libération de la gastrine (Samsong, 1980).
A l’état physiologique normal, les mécanismes nerveux et hormonaux agissent en association
(Lacombe, 2007).
I.4-Mécanisme de protection de la muqueuse gastrique
La concentration d’acide chlorhydrique dans l’estomac est un million de fois supérieure à
celle du plasma (Samsong, 1980;Marieb, 1999). Comment l’estomac peut-il contenir un acide
fort et une enzyme protéolytique sans en être lui-même victime. D’où le rôle protecteur de la
couche de mucus qui s’effectue de plusieurs manières :
• La membrane liminale des cellules de la muqueuse est imperméable aux ions H+ qui
ne peuvent donc pas entrer dans les cellules et les endommager.
11
• Les faces latérales des cellules sont réunies près de la lumière gastrique par des
jonctions étanches de sorte que l’acide ne peut traverser la muqueuse et gagner la sous
muqueuse par diffusion entre les cellules.
• Les cellules de la muqueuse se renouvellent entièrement tous les trois jours. Elles sont
donc immédiatement remplacées avant d’être exposées longtemps aux conditions
agressives de l’estomac.
• La face interne du mucus est riche en ions bicarbonates, avec un pH d’environ 7. Cette
valeur du pH élevée constitue une barrière chimique aux sécrétions acide de l’estomac.
• L’ensemble de ces dispositifs qui permettent à l’estomac d’être plein d’acide sans être
lésé porte le nom de barrière muqueuse gastrique (Samsong, 1980).
Le mucus assure une barrière physique et chimique contre les sécrétions acide et peptique
de l’estomac. En outre, un autre système de cyto-protection est constitué par:
o Les prostaglandines, jouent un rôle capital. En plus de stimuler la synthèse du mucus
protecteur, ces hormones bloquent la production de l’acide gastrique.
o Le réseau capillaire qui produit les ions bicarbonates, assurant une barrière chimique
en neutralisant l’acidité du suc gastrique (Marieb, 1999).
12
II: Helicobacter pylori
II.1-Définition
H. pylori est une bactérie de forme hélicoïdale découverte dans une zone de l’estomac
proche du pylore, d’où son nom Helicobacter pylori. Elle est classée dans le règne des
bacteria, la division Proteobacteria, la classe epsilonproteobacteria, l’ordre des
campylobacterales, la famille Helicobacteraceae, le genre Helicobacter et l’espèce
Helicobacter pylori (Garrity et al., 2005).
Autres espèces du genre Helicobacter
A ce jour, on dénombre une quarantaine de Helicobacter autres que H. pylori (NHPH
= Non-H. pylori Helicobacter). Certaines espèces ont un tropisme gastrique; la majorité est
cependant constituée d’espèces entéro-hépatiques.
Espèces gastriques
Des NHPH avec une morphologie spiralée ont été détectés chez de très rares patients
(< 0,5%) ayant subi une endoscopie (Holck et al., 1997; Solnick et al.,1993).Initialement tous
regroupés sous le vocable H. heilmanii, le séquençage à permis de caractériser 5 principales
espèces que l’on retrouve aussi au niveau de l’estomac des animaux (Haesebrouck et
al.,2009):
H. suis, espèce la plus fréquente chez l’homme, isolée pour la première fois par une
équipe vétérinaire belge à partir de l’estomac d’un porc (Baele et al., 2008).
H. felis, retrouvé chez les chats et les chiens. L’homme serait un hôte occasionnel.
H. bizzozeronii, cultivé pour la première fois en 1996 (Andersen et al., 1996) et
identifié comme tel, quelques années plus tard (Jalava et al., 2001).
H. salomonis, isolé également de l’estomac des chiens et Candidatus Helicobacter
heilmanii, nom proposé par l’équipe du Professeur Ducatelle (Belgique), en cours de
reconnaissance (Smet et al., 2011).
Espèces entéro-hépatiques
Elles sont retrouvées dans le tractus intestinal et le foie des mammifères et des
oiseaux. Elles peuvent occasionner des inflammations ou des affections malignes chez des
individus présentant un déficit immunitaire.
13
Les principales espèces retrouvées chez l’homme sont:
H. canadensis, H. canis, H. cinaedi, H. fennelliae, H. pullorum, H. rappini et H.
winghamensis. (Jay et al., 2001, Laharie et al., 2009).
II.2-Historique
La présence de micro-organismes spiralés au niveau de la muqueuse gastrique
humaine n’a été prise au sérieux qu’à la fin des années 70, suite aux travaux du pathologiste
Australien John Robin Warren qui décrit la présence abondante de bactéries spiralées dans le
mucus recouvrant la muqueuse gastrique de patients présentant une gastrite.
En réalité, l’histoire remonte à un siècle plus tôt. En 1893, Giulio Bizzozero, jeune
chercheur italien, avait observé des images en forme de « bactéries spiralées » au niveau du
tractus gastro-intestinal des chiens (Bizzozero, 1893). Malheureusement ses résultats ont été
considérés comme une simple curiosité microbiologique. Trois ans plus tard, Salomon
confirma cette observation au niveau de la muqueuse stomacale de chats et de chiens et
poussa plus loin les observations en démontrant que ces bactéries spiralées pouvaient être
transmises à des souris (phénomène actuellement utilisé dans le développement de la
vaccination contre Helicobacter) (Salomon, 1896). Ce fut suivi en 1899 par une observation
semblable au niveau du liquide de lavage gastrique humain par un polonais Walery Jaworski
(Jaworski, 1899). Ce dernier aurait donc été le premier à suggérer une relation possible entre
une bactérie spiralée (qu’il dénomma ”Vibrio rugula”) et les pathologies gastriques.
Malheureusement, ses observations, publiées en langue polonaise dans un livre de pathologie
infectieuse, ne furent clairement mises en lumière qu’un siècle plus tard (Kristner, 1994;
Konturek et al., 1996). La première observation de bactéries spiralées au niveau même de la
muqueuse gastrique humaine remonte à 1906 et est attribuée à Krienitz (Krienitz, 1906); elle
fut confirmée par d’autres chercheurs dans les années 40. Doenges a décrit la présence de
spirochètes dans environ 40% d’estomacs humains en post-mortem (Doenges, 1938). En plus
de la confirmation de l’observation post-mortem qui pourrait être reliée à une contamination,
l’équipe de Freedberg a démontré la présence de ces bactéries dans de prélèvements
chirurgicaux frais, faisant ainsi penser à de réels agents pathogènes (Freedberg, 1940).
Malheureusement, ces études, menées principalement en Europe, n'étaient pas
soutenues par la communauté scientifique américaine. Elles tombèrent en désuétude suite à la
publication de l’imminent chercheur américain Palmer qui stipulait, en 1954, qu’il n’avait pu
14
mettre en évidence aucune trace de bactérie dans des prélèvements de biopsies gastriques de
1180 personnes (Palmer, 1954).
A ce stade, les progrès de la recherche dans la genèse de la pathologie gastroduodénale
se sont limités à la thèse d’hypersécrétion acide par l’estomac pour garder sa lumière stérile;
l'acidité provoquerait alors des lésions des muqueuses, conformément à la citation de Schwarz
en 1910: « pas d'acide, pas d'ulcère » (Schwarz, 1910).
L’activité uréasique au niveau de l’estomac a été décrite pour la première fois en 1924
(Luck et Seth, 1924). En 1950, deux irlandais démontrent que chez les patients présentant un
ulcère gastroduodénal, l’uréase neutralise l’acidité gastrique via la production d’ammoniac
(Fitzgerald et Murphy 1950). Malgré le fait qu’on ait noté la disparition de cette activité
enzymatique avec un traitement antibiotique, le lien entre l’activité uréase et des bactéries n’a
pu être mis en évidence qu’en 1984 (Langenberg et al., 1984).
Le facteur limitant de la recherche restait l’impossibilité de cultiver la bactérie spiralée
observée dans la muqueuse gastrique. C’est ainsi qu’en 1975, ayant également observé des
bactéries au niveau de l’épithélium gastrique, Steer a essayé de les isoler et s’est
malheureusement retrouvé avec une culture pure de Pseudomonas aeruginosa, un
contaminant probable (Steer, 1975).
En 1979, la bactérie fut redécouverte par deux chercheurs australiens Barry Marshall
et Robin Warren de l’hôpital « Royal de Perth ». La publication de leur recherche fut d’abord
refusée en 1983 par la société Australienne de Gastroentérologie, mais ensuite acceptée lors
du deuxième (2ème) congrès international sur les infections à Campylobacter (2nd International
Microbiology Workshop on Campylobacter infections) organisé à Bruxelles, la même année.
Le 14 avril 1982, par un heureux hasard (fin du weekend prolongé de Pâques qui dura 5 jours
en Australie), ces mêmes chercheurs parvinrent enfin, après de nombreuses tentatives avortées
pour cause d’incubation trop courte, à cultiver la bactérie spiralée à partir d'une biopsie
gastrique d'un patient souffrant d’ulcère duodénal. Ils la baptisèrent initialement
Campylobacter-like organisme (CLO) car ils pensaient que c’était une nouvelle espèce du
genre Campylobacter (Marshall et Warren, Lancet 1983). La bactérie fut ensuite appelée
Campylobacter pyloridis (Marshall et al., 1984) sur base de la suggestion de Skirrow
(Skirrow, 1983). Pour des raisons de grammaire latine, elle fut ensuite dénommée
Campylobacter pylori (Marshall and Goodwin, 1987) puis Helicobacter pyloridis, et enfin
Helicobacter pylori vu les caractéristiques morphologiques, structurelles et génétiques
15
spécifiques à ce nouveau genre (Goodwin et al., 1989; Marshall et Goodwin, 1989). Derrière
le fabuleux travail de Marshall et Warren, se cachent également de précieux collaborateurs,
notamment, Amstrong et Wee (première (1ère) image en microscopie électronique de H. pylori
en juin 1982) et les membres du laboratoire de microbiologie de Goodwin (Pearmann,
Kosaras, Royce et Annear) pour leur coup de pouce indispensable à l’isolation et au maintien
des cultures (Goodwin, 1993).
Marshall et Warren ont continué leurs travaux en démontrant une forte association
entre la présence de H. pylori et l'inflammation gastrique des patients souffrant de gastrite et
de maladie ulcéreuse peptique (Marshall et Warren, 1984).
Malgré ces travaux, la communauté scientifique (et particulièrement les américains),
réfutait ces observations. Marshall procéda alors à une auto ingestion d’une solution
concentrée de bactérie pour prouver les effets sur son propre estomac et la disparition des
symptômes par administration d’un traitement incluant un antibiotique et des sels de Bismuth,
remplissant ainsi les postulats de Koch pour la description d’un nouvel agent infectieux
(Marshall et al.,1985). Dans la foulée, leurs observations furent confirmées durant cette même
période par d’autres études (Rollason et al., 1984; Steer, 1984).
C’est ainsi que les antibiotiques firent leur apparition dans le domaine de la pathologie
gastroduodénale, découverte couronnée en décembre 2005 par l’attribution du Prix Nobel de
Médecine et de Physiologie à Marshall et Warren pour leurs travaux sur H. pylori.
II.3-Epidémiologie de l’infection à H. pylori
II.3.1-Habitat de H. pylori
Le réservoir naturel de H. pylori est l'estomac humain. C’est le microorganisme le plus
fréquemment retrouvé dans la muqueuse gastrique humaine en association avec les cellules
épithéliales. Il vit préférentiellement au niveau de l’antre gastrique (figure 3).
16
Figure 3: Habitat de H. Pylori (http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/2005/press.html)
II.3.2-Transmission de l’infection
Le mode de transmission de H. pylori est l'un des domaines les plus controversés dans
l'étude de cet agent pathogène. L’homme est le principal réservoir de H. pylori. L’estomac
humain est son principal habitat, néanmoins la bactérie a été retrouvée au niveau du
duodénum, de l’œsophage, du rectum, des selles, de la salive et de la plaque dentaire. A ce
jour, contrairement à l’estomac humain, l’isolation de H. pylori à partir des selles (Haggerty
et al., 2003 ; Kelly et al., 1994 ; Thomas et al., 1992), du vomissement (Parsonnet et al.,
1999) ou de l’eau contaminée (Lu et al., 2002) a pu être effectuée dans de très rares cas. Par
conséquent le mécanisme par lequel elle colonise l'estomac humain reste assez méconnu. La
plus forte prévalence étant observée dans les communautés (familles ou institutions) de
personnes ayant des contacts rapprochés souligne avant tout l’importance de la transmission
directe de personne à personne. Les sources les plus probables de transmission directe de
l’infection sont la voie oro-orale, la voie Gastro-orale et la contamination féco-orale. La
maman est considérée comme la figure clé de transmission à la descendance (Kivi et al.,
2006; Vale et al., 2010).
L’homme pourrait aussi s’infecter indirectement via l’alimentation, les eaux non
traitées, les animaux; cependant, il n'est pas encore prouvé que ce soient des véhicules
naturels ou primaires de la transmission (Malaty et al., 2007; Vale et al., 2010).
17
II.3.3-Prévalence de l’infection
H. pylori est l’un des agents infectieux les plus fréquents. A l’échelle mondiale sa
prévalence est supérieure à 50% (The EUROGAST Study Group, 1993; Brown, 2000). Elle
dépend du taux d’acquisition, de la clairance de l’infection et de la durée entre les 2 étapes
précédentes. Aussi la prévalence de l’infection varie d’un pays à l’autre et même au sein d’un
même pays, en fonction de plusieurs facteurs, entre autres, l’âge, le statut socio-économique,
les appartenances ethniques et les relations interfamiliales (Brown, 2000 ; Goh, 1997 ; Mataty
et al., 1992 ; Malaty et al., 1999; Mitchell et al., 1992; Miendje Deyi et al., 2011;
Rothenbacher et al., 1998…).
Influence du pays
Comme l’illustre la figure ci-dessous, la prévalence de l’infection est plus élevée dans
les pays en développement (Mégraud et al., 1989 ; Graham et al., 1991 ; Mandeville, 2009 ;
Perez-Perez et al., 2004, Vale et al., 2010). (Figure 4). Etre né dans un pays en
développement constitue donc un facteur de risque d’infection (Kivi et al., 2006).
Figure 4: Répartition géographique de la prévalence de l’infection à H. Pylori (www.helicobacter.com/h_epidemiology.html)
18
Influence de l’âge
Les différences géographiques dans la prévalence de l’infection à H. pylori ont été
attribuées aux fortes variations du taux d'acquisition de la bactérie pendant les premières
années de la vie. Dans les pays en développement, l’acquisition a généralement lieu très tôt
dans l’enfance, et dans certains pays la prévalence maximale (80 à > 90%) peut-être atteinte
avant l’âge de 5 ans (Frenck et al., 2003; Mitchell et al., 1992). Dans les pays développés,
seule une minorité d'enfants est infectée pendant l'enfance, mais la prévalence de l'infection
augmente avec l'âge; elle est de l’ordre de 20% à 20 ans et de 60 % à 60 ans (Delport et al.,
2007; Malaty, 2007 ; Rothenbacher et al., 2003).
Influence du statut social
Le niveau d’études des parents, le lieu de résidence, le revenu des parents semblent
affecter la prévalence de l’infection chez les enfants. Cet impact est souvent renforcé par les
conditions d’hygiène. Bref, la prévalence de l’infection est nettement plus élevée dans les
populations défavorisées (Brown, 2000 ; Delport et al., 2007 ; Malaty et al., 1996 ;
Mandeville et al., 2009).
Influence du cadre de vie
La prévalence de l’infection est plus élevée dans des familles lorsqu’ un parent ou un
des enfants est déjà infecté, les membres de la famille sont en contact avec des personnes
vivantes dans la zones à haute prévalence et aussi dans des familles nombreuses (Kivi et al.,
2006; Koch et al., 2005; Rothenbacher et al., 1998).
D’une façon générale, le risque d’infection est accru lorsque plusieurs personnes sont
en contact étroit.
Influence de la profession
Le travail de groupe est également un facteur de risque d’acquisition de l’infection (De
Schryver et al., 2001; Delport et al., 2007; Hildebrand et al., 2000; Mastromarino et al., 2005;
Trianfallidis et al., 2002). De nombreuses études ont révélé des proportions de personnes
infectées beaucoup plus élevées chez certains professionnels de santé: le personnel de gastro-
entérologie, notamment ceux effectuant les endoscopies (De Schryver et al., 2001;
Hildebrand et al., 2000; Lin et al., 1994; Mitchell et al., 1989; Velasco Elizalde et al., 2007),
les infirmières, particulièrement en unité de soins intensifs (De Schryver et al., 2001;
19
Mastromarino et al., 2005; Triantafillidis et al., 2002), les ambulanciers (Birkenfeld et al.,
2004), les chirurgiens (Upile et al., 2009) et les personnes travaillant dans des centres pour
handicapés (Angtuaco et al., 2002 ; Böhmer et al., 1997; de Schryver et al., 2008).
Influence du sexe
L’influence du sexe sur la prévalence de l’infection est controversée. Néanmoins il
ressort d’une méta-analyse que la prévalence serait plus élevée chez les adultes de sexe
masculin (de Martel et al., 2006).
Influence des facteurs héréditaires
L’influence des facteurs génétiques sur l'acquisition de l’'infection à H. pylori a été
mise en évidence par une étude originale de Malaty et ses collègues effectuée sur les jumeaux
suédois monozygotes et dizygotes. Le taux de concordance de l’infection à H. pylori était plus
élevé dans les paires de jumeaux monozygotes (81%) que dans les paires de jumeaux
dizygotes (63%), qu’ils soient élevés séparément ou non (Malaty et al., 1994).
Influence de l’ethnie
L’acquisition et la disparition de l’infection par H. pylori varie en fonction des ethnies.
Dans une étude comparant des enfants blancs et noirs vivant dans un même pays et ayant un
statut socio-économique équivalent, Malaty et ses collègues ont observé un taux d’acquisition
4 fois plus élevé dans la communauté noire. Par ailleurs, lors des 12 années de suivi, une
clairance sans traitement de l’infection a été observée chez 4% des noirs et 50% chez les
blancs (Malaty et al., 1999).
II.4.-Morphologie
Helicobacter pylori est un bacille à Gram négatif spiralé non sporulé. Il mesure 0,5 à
1µm de largeur sur 2,5 à 5 µm de longueur (Goodwin et al., 1989). Il est très mobile grâce à
la présence de 4 à 7 flagelles (figure 5), gainés en ciliature lophotriche, qui lui permettent de
se mouvoir dans le suc gastrique (Hazell et al., 1986). La forme hélicoïdale (d'où le nom «
Helicobacter ») lui permet de s’encrer dans la paroi stomacale par des mouvements
hydrodynamiques.
20
Figure 5: H. pylori en microscopie électronique (Photo du prof.Yutaka Tsutsumi, université de Fujita, Japon).
Après l’isolement de la bactérie par la culture in vitro, la morphologie peut varier entre
une forme bacillaire, en U, en C ou en O (figure 6). De plus lorsque les cultures sont vieilles,
apparaissent des formes coccoïdes non viables. La bactérie peut, en effet, devenir coccoïdes si
elle pousse sur un milieu pauvre ou dans d’autres conditions défavorables (Kuster et al., 1997;
van der Hulst et al., 1996; Vandenbroucke-Grauls et al., 1999).
Figure 6: Examen microscopique d’une culture après coloration de Gram. H. pylori apparait sous diverses formes: bacillaire, incurvé, en U en C ou en O.
(Photo de VY. Miendje, CHU-Brugmann)
21
II.5-Croissance et caractéristiques biochimiques
H. pylori est une bactérie micro-aérophile avec un optimum de croissance à 37°C. En
effet, elle est sensible à l’oxygène au taux de l’air et requiert pour vivre une atmosphère
appauvrie en oxygène. Elle requiert une concentration en O2 de 3 à 6% (optimum de l’ordre
de 5%) et une concentration en CO2 de 6 à 10%. (Goodwin et al., 1989).
Elle possède une catalase (Hazell et al., 1991), une oxydase (Maier et al., 1996) et un
super oxyde dismutase (Pecsi et Pickett., 1994). La bactérie synthétise également un gamma
glutamyl transférase, une leucine aminopeptidase et une phosphatase alcaline (Mégraud et al.,
1985). Son activité enzymatique la plus caractéristique est son uréase qui lui permet de
résister à l’acidité gastrique, en créant un environnement alcalin par l’hydrolyse de l’urée
(Marshall et al., 1990 ; Mégraud et al., 1985). L’uréase est une métallo-enzyme secrétée en
quantité abondante par toutes les souches ; elle représente 6 à 10% des protéines synthétisées
par H. pylori (Mobley et al., 1988). Les mutants non uréolytiques sont incapables de coloniser
la muqueuse gastrique (Tsuda et al., 1994).
II.6-Caractéristiques génotypiques
Le génome complet (souche H. pylori 26695) a été séquencé pour la première fois en
1997 chez un patient anglais présentant une gastrite chronique (Tomb et al., 1997). A notre
connaissance, quelques autres souches ont été complètement séquencées notamment la J99
chez un patient américain souffrant d’ulcère duodénal (Alm et al., 1999) ; la HPAG1, isolée
chez une patiente suédoise présentant une atrophie gastrique chronique (Oh et al., 2006) ; La
G27 chez un patient italien (Baltrus et al., 2009) ; la Shi470, chez une femme péruvienne
présentant une atrophie glandulaire modérée (Kersulyte et al., 2010); la P12 a été isolée d’un
ulcère duodénal (Fisher et al., 2010), la B38 issue d’un cas de lymphome du MALT en France
(Thiberge et al., 2010) et la souche HP908 isolée chez un patient africain souffrant d’ulcère
duodénal récidivant (Devi et al., 2010).
Il en ressort que H. pylori est composé d'un seul chromosome circulaire dont le
nombre de paires de bases varie entre 1 549 666 et 1 667 867. Le corps du génome contient
environ 1200 gènes. Le contenu en G+C (Guanine + Cytosine) de toutes ces souches est en
moyenne de 39%. Néanmoins les génomes séquencés présentent des régions ayant des
contenus en % G+C différents. L’une de ces régions correspond à l’îlot de pathogénicité
dénommé « cag » dont le contenu en G+C est de 35% (Censini et al., 1996). La souche B38
22
est dépourvue de cet îlot (Thiberge et al., 2010) (macro diversité). Contrairement au
monomorphisme phénotypique observé, H. pylori est l'une des bactéries pathogènes montrant
d’importantes variations génétiques entre les souches et ce particulièrement au niveau de
gènes spécifiques (micro diversité) (Dong et al., 2009; Gressmann et al., 2005; Salama et al.,
2000; Suerbaum et al., 2007). La séquence génomique des différentes souches de H. pylori
varie en fonction des régions géographiques (Falush et al., 2003; Linz et al., 2007).
II.7-Clinique et Pathogenèse de l’infection
Chez toutes les personnes infectées, la colonisation de la muqueuse de l’estomac par
H. pylori entraîne une inflammation de la muqueuse gastrique dénommée gastrite. Le plus
souvent, elle est asymptomatique (> 70% de cas) et persiste aussi longtemps que la bactérie
est présente dans la muqueuse, c'est-à-dire des années, voire toute une vie (Falonne et al.,
1999) sous forme de gastrite chronique. Elle est caractérisée par l’existence d’un infiltrat
mono et poly nucléé dans la muqueuse gastrique et d’une diminution de la hauteur des
glandes gastriques. Dans 10 à 20% de cas, la gastrite chronique évoluera vers des formes
aiguës avec notamment des pathologies gastroduodénales telles que l’ulcère gastroduodénal
(Marshall et al., 1984), le cancer gastrique (Correa et al., 1990) ou le lymphome du MALT
(Mucosa-Associated Lymphoid Tissue) à faible degré de malignité (Wotherspoon et al.,
1991).
L’évolution de la gastrite chronique va varier en fonction de la localisation de
l’infection (Correa, 1992 ; Graham, 1989 ; Uemera et al., 2001): une gastrite à prédominance
antrale est caractérisée par une hypersécrétion acide (el Omar et al., 1995). Elle évoluera dès
lors vers un risque accru d’ulcère duodénal (pas de cancer gastrique). Une infection du fundus
entraînera une hyposécrétion acide due à une raréfaction des cellules pariétales; elle évoluera
vers l’ulcère gastrique, puis vers une gastrite atrophique chronique avec risque de cancer
gastrique. Dans ce cas, l’hypergastrinémie réactionnelle jouerait un rôle essentiel dans la
croissance tumorale par son effet trophique (Hansson et al., 1996). Le risque de lymphome
gastrique n’est, quant à lui, pas rattaché à une localisation particulière.
23
II.7.1-Ulcère gastroduodénal
Figure 7 : Ulcère gastrique pré pylorique (A), Multiple ulcère bulbaires (B) (Photo de R. Ntounda, CHU-Saint Pierre)
L’ulcère est défini comme une perte de substance interrompant la paroi au
moins jusqu'à la musculeuse (figure 7). Le lien entre H. pylori et la maladie ulcéreuse
peptique a été clairement établi (Marshall et al., 1984). C’est ainsi qu’on retrouve H.
pylori dans plus de 90% et 70% des cas d’ulcères duodénaux et gastrique,
respectivement, avec une prépondérance masculine.
Symptômes évocateurs: douleur épigastrique, lourdeurs, nausées, ballonnements,
brûlures, crampes nocturnes (début ou milieu de nuit) au niveau de l'hypocondre. Il
n’y a pas de rapport avec la qualité ou la quantité des aliments ingérés, néanmoins, les
douleurs sont souvent calmées par l'alimentation.
Complications : hémorragie, perforation ulcéreuse, sténose pylorique, récidives et
rare évolution vers un cancer gastrique (figure 8).
L’éradication de H. pylori de la muqueuse gastrique chez ces patients diminue
de manière significative le risque de récidives d’ulcères (Ford et al., 2004).
24
Figure 8: Implication de H. pylori dans la genèse de la gastrite et de la maladie ulcéreuse peptique. (http://nobelprize.org/nobel prizes/medicine/laureates/2005/press.html)
25
II.7.2-Cancer gastrique
Figure 9: Adénocarcinome gastrique visualisé par endoscopie (Photo de R Ntounda, CHU- Saint Pierre)
Le cancer gastrique est le plus fréquent des cancers digestifs recensés dans le monde
(Kamangar et al., 2006). Au XIXème siècle, il constituait à lui seul 40 % des cancers chez
l’homme (Osler et Mc Crae, 1900). Son incidence varie en fonction des pays; actuellement
des cas de l’ordre de 10 à 70 sont observés par 100 000 habitants par an. Il est plus fréquent
au Japon, en Chine et en Amérique du Sud (Parsonnet et al., 1997).
Selon leur localisation, on distingue 2 types d’adénocarcinomes gastriques :
� L’adénocarcinome du cardia se développe indépendamment de l’infection par H.
pylori et serait favorisé par le reflux gastro-œsophagien. Son incidence reste stable ou
en légère augmentation.
� L’adénocarcinome de l’estomac distal est lié à la gastrite atrophique induite par H.
pylori (figure 9). Son incidence diminue nettement. Le cancer de type intestinal, de
loin la forme la plus fréquente, est associée à des lésions de métaplasie intestinale sur
la muqueuse adjacente à la tumeur, contrairement au cancer de type diffus (forme plus
rare de cancer gastrique).
26
Figure10: Représentation schématique de la physio- pathogénie de l'infection à H. pylori dans le cancer gastrique et l'ulcère duodénal.
Le mécanisme de passage au cancer gastrique n’est pas bien élucidé. C’est
l’inflammation prolongée et les lésions précancéreuses qui en suivent qui seraient à l’origine
de l’adénocarcinome gastrique observé (figure 10). Des arguments sont en faveur d’un
envahissement des cellules gastriques endommagées par des cellules souches
mésenchymateuses médullaires qui seraient alors à l’origine du processus cancéreux
(Houghton et al., 2004). Le délai d'établissement du cancer est variable; dans la majorité de
cas, il apparaît après une quinzaine d'années et parfois il n’est diagnostiqué que lorsque
l'infection à H. pylori a disparu, suite à une éradication ou à des modifications induites par les
lésions précancéreuses (Kuipers, 1999). L’éradication a un effet favorable sur la survenue du
cancer gastrique (Correa et al., 2000; Nozaki et al., 2003) notamment en l’absence de lésions
précancéreuses initiales (Wong et al., 2004).
Par ailleurs, un supplément d’antioxydants dans l’alimentation aurait un effet
favorable sur la régression des lésions (Correa, 2000). Plusieurs facteurs interviennent dans le
processus de cancérisation.
27
II.7.3-Lymphome gastrique du MALT
Figure11:Lymphome gastrique du MALT, chez une patiente de 46 ans, visualisé par endoscopie et histologie (Suzuki et al., 2009).
(A) Endoscopie réalisée 1 mois après éradication de H. pylori. Lésions nodulaires montrant des spots rouges dans le fond de l’image. (C) Image histologique correspondante, coloration Hématoxyline éosine. Infiltrat de cellules lymphocytaires formant des lésions lympho-épithéliales. (B) Endoscopie réalisée 22 mois après éradication. Régression des lésions. (D) Image histologique correspondante. Nette régression de l’infiltrat de cellules mononuclées.
Le pronostic du lymphome gastrique du MALT à faible degré de malignité (figure 11)
a été sensiblement amélioré depuis la découverte de l’implication de H. pylori en 1991
(Wotherspoon et al., 1991). En effet, une éradication précoce fait régresser le processus
tumoral (Wotherspoon et al., 1993). Elle est sans effet sur les formes à haut degré de
malignité résultant de l’acquisition d’altérations génétiques supplémentaires.
28
II.7.4-Autres pathologies associées à une infection à H. pylori
La prévalence de l’infection à H. pylori est élevée (58%) chez les patients présentant
un purpura Thrombocytopénique idiopathique (PTI). L’éradication de H. pylori entraîne une
amélioration clinique du PTI, suggérant une implication de la bactérie dans la genèse de cette
pathologie dont la physiopathologie n’est pas bien élucidée (Franchini et al., 2007). Une
récente revue, incluant 25 études, a ainsi rapporté des remissions partielles ou complètes de
PTI après éradication de la bactérie (Stasi et al., 2009).
L'anémie ferriprive inexpliquée : Plusieurs facteurs contribueraient à l’installation de
ce type d’anémie. Un pH moins acide n’est pas favorable à l’absorption de fer au niveau
stomacal. Une association a été mise en évidence entre la gastrite fundique (pH élevé) et la
carence en fer (Capurso et al., 2001). H. pylori entre en compétition avec l’organisme pour
l’absorption du fer. L’érosion ou l’ulcération provoquée par l’infection entraîne de pertes de
fer. Enfin, l’infection entraîne une diminution de concentration de vitamine C dans le suc
gastrique, ce qui entraînerait la diminution de l'absorption du fer (Annibale et al., 2003). Ici
aussi, l’éradication de H. pylori procure une nette amélioration clinique, même en l’absence
de toute supplémentation en fer (Choe et al., 1999).
De nombreuses autres pathologies ont été attribuées à H. pylori, sans association
directe de causes à effets : dyspepsie fonctionnelle, troubles cardiovasculaires, pathologies
auto-immunes, migraines, retard de croissance,… (Atherton et Blaser, 2009).
II.8-Traitement de l’infection
Le traitement de H. pylori associe un Inhibiteur de la Pompe à Protons (IPP) comme Caprazole, Oméprazole, Lansoprazole, Rabeprazole (…) à 2 antibiotiques choisis parmi
l’amoxicilline (100mg/kg/j), le métronidazole (20-30mg/kg/j) ou la clarithromycine (15
mg/kg/j). Il a été démontré que le taux d’éradication dépend largement de la sensibilité de la
bactérie aux antibiotiques prescrits. La résistance à la clarithromycine et au métronidazole
représente donc un facteur d’échec thérapeutique plus marqué pour l’un que pour l’autre
(Kalach N et al., 2007; Raymond J et al.,1998). En cas d’échec d’éradication bactérienne, une résistance bactérienne secondaire doit être recherchée. Un échec persistant peut justifier une
enquête familiale (Kalach et al.,1999).
29
Plus récemment, des taux plus élevés d'éradication ont été rapportés avec un traitement
séquentiel, chez l’adulte et chez l’enfant. Ce traitement combine un premier traitement de 5
jours incluant un IPP et l'amoxicilline suivi d’un second traitement incluant un IPP, la
clarithromycine et le métronidazole les 5 jours suivants. Nous avons obtenu chez l’enfant un
taux d’éradication de (84,61 %) vs (80%) pour la triple thérapie standard adaptée d’après les
résultats de l’antibiogramme (Kalach et al., 2008). Ce traitement séquentiel permet d’obtenir
un taux d'éradication de l’infection comparable à celui d’une triple thérapie standard adaptée
aux résultats bactériologiques.
Chez l’adulte, la réinfection est rare, variant de 0,19 % à 2 % par an. Chez l’enfant,
des taux de réinfection variant de 2 % à 12,8 % ont été rapportés (Halitim et al., 2006).
II.9-Prévention
L'incidence élevée de cette infection dans la population et les conséquences qu'elle
implique, notamment le risque de développer un cancer de l'estomac, justifient la recherche
soit d'un vaccin contre cette bactérie soit de nouvelles molécules capables de l'éradiquer tels
les gènes comme l'uréase dont les deux sous-unités, UreA et UreB administrées à des souris,
ont permis de protéger 70% d'entre elles contre l'infection.
L'infection à Helicobacter n'est pas une infection à déclaration obligatoire. Elle fait
l'objet actuellement d'une surveillance en France par l'Institut de Vieille Sanitaire (INVS)
(Surveillance nationale des maladies infectieuses, 1998-2000,
http://www.invs.sante.fr/publications/index.html#mi).
III- Diagnostic d’une infection à H. pylori L’infection à Helicobacter pylori peut être mise en évidence par des méthodes de
prélèvements invasifs, c'est-à-dire nécessitant une endoscopie et une biopsie gastrique, ou par
des techniques de prélèvements non invasifs, c’est-à-dire sans endoscopie.
30
III.1-Diagnostic par des méthodes de prélèvements invasifs
III.1.1-Examen anatomopathologique (histologie)
Historiquement, le diagnostic initial d’une infection par H. pylori était effectué par une
analyse histologique (Warren et Marshall, 1983). Cette méthode diagnostic reste l'une des
plus couramment utilisées. La sensibilité augmentant avec le nombre de biopsies, il est
conseillé de prélever 2 biopsies de l’antre et 2 au niveau du fundus (Bayerdorffer, 1989).
Après coloration des coupes de biopsies, H. pylori apparaît sous forme de bactéries incurvées
à la surface de l'épithélium de la muqueuse (figure 12).
Figure12: Visualisation H. pylori sur coupe histologique (Marshall et al, 1985)
Le gros avantage de l’analyse anatomo-pathologique est qu’elle permet conjointement
le dépistage de la gastrite et la recherche de complications, telles qu’atrophie, métaplasie,
lymphome ou cancer.
III.1.2-Test rapide à l’Uréase
Ce test, utilisé pour la première fois en 1995 (McNulty et al., 1995) est basé sur la
puissante activité uréasique produite par H. pylori. Pour réaliser le test, la biopsie gastrique
est placée dans un milieu contenant de l'urée. Suite à la production d'ammonium associée à
l’activité de l’uréase, un changement de pH est mis en évidence par le virage colorimétrique
d'un indicateur de pH.
31
Les gros avantages du test rapide à l’uréase sont sa simplicité, son faible coût et sa
facilité d’exécution. Il s’effectue facilement dans une salle d'endoscopie. Lors d’un premier
dépistage et en dehors de tout traitement, la positivité de ce test peut être suffisante pour
démarrer le traitement (Malfertheiner et al., 2007). C’est ainsi qu’il occupe une place de choix
dans le diagnostic de l’infection à H. pylori dans les pays en développement.
III.1.3-Culture bactérienne
La culture nécessite des conditions particulières de transport de la biopsie et un
broyage. Elle est effectuée sur un milieu enrichi (figure 13) contenant des antibiotiques pour
inhiber les contaminants, maintenu 7 jours à 37°C en atmosphère micro aérobie.
L'identification de H. pylori est basée sur des tests biochimiques (oxydase, catalase, uréase +).
Elle permet l'étude de la sensibilité aux antibiotiques.
Figure 13 Culture de H. pylori obtenue après trois jours d'incubation sur boite au sang. (Photo de B.Marshall)
III.1.4-Biologie moléculaire
Comparée à la culture, l’un des principaux avantages de la Polymerase Chain Reaction
(PCR) est l’absence de contraintes quant aux conditions pré analytiques. En effet, il n’est pas
indispensable que les bactéries soient viables.
Dans un premier temps, des techniques moléculaires de type PCR standard ont été
proposées. Après extraction de l’ADN à partir des biopsies, l’amplification est effectuée en
32
utilisant l’une ou l’autre amorce issue de différents gènes spécifiques de la bactérie : ARNr
16S, ARNr 23S, UreA, CagA, VacA etc. (Megraud et Lehours, 2007). Ces techniques ont une
sensibilité comparable à celle de la culture mais sont plus rapides. En outre, les produits PCR
peuvent être utilisés à des fins de caractérisation moléculaire.
Actuellement les techniques de PCR en temps réel sont largement utilisées dans les
pays industrialisés. Elles permettent une détection et une quantification rapide de la bactérie
grâce à l’adjonction d’une sonde marquée.
Une technique alternative attrayante est l'hybridation in situ sur des séquences du gène
ARNr 16S avec une sonde marquée à la fluorescéine (FISH : Fluorescence In Situ
Hybridization). C’est une méthode qui sans amplification génique, mais couplée à
l’histologie, entraîne un gain de spécificité par rapport à l’histologie classique. L’utilisation
des sondes recouvrant les mutations impliquées dans l’acquisition de la résistance à certains
antibiotiques, permet également de déterminer la sensibilité des souches, notamment aux
macrolides (Rüssmann et al., 2001).
III.2-Diagnostic par des méthodes de prélèvements non-invasifs.
Soulignons d’emblée que ces types de méthodes ne nécessitent pas l’obtention, au préalable
de biopsie pour effectuer le test de dépistage de H. pilori.
III.2.1-Sérologie
C’est une méthode simple et très accessible qui consiste en la recherche des anticorps
anti H. pylori dans le sang. La persistance, parfois prolongée, des anticorps dirigés contre H.
pylori, ne permet pas de distinguer une infection encore active d’une infection
asymptomatique. La sensibilité et la spécificité varient de 80% à 95%, selon les kits
commercialisés (Mégraud et Lehours, 2007). Son principal usage consiste en des études
épidémiologiques.
III.2.2 -Test respiratoire à l’urée marquée
Le test respiratoire fut le tout premier des tests non-invasifs (Graham et al., 1987). Il
consiste à faire absorber au patient de l'urée marquée au 13C puis à rechercher cet isotope dans
le CO2 expiré (figure 14). Si le patient est infecté, l’urée est métabolisée par H. pylori et le 13C
expiré peut être détecté. Ce test, incontestablement le plus sensible (98%), présente l'avantage
de rechercher la présence de la bactérie dans la totalité de l'estomac. Il est recommandé pour
le contrôle d’éradication 4 semaines après l’arrêt d’un traitement (Malfertheiner et al., 2007).
33
Figure 14: Principe du test respiratoire à l'urée marquée au 13C
(http://umvf.univ-nantes.fr/hepato-gastro-enterologie/enseignement/item 290/side/html/1_14_1.html).
III.2.3-Recherche d’antigène dans les selles
Basée sur l’élimination de H. pylori par les selles, cette méthode de diagnostic a été
proposée en 1998 (Makristathis et al., 1998). La recherche d'antigène spécifique de H. pylori
s’effectue sur selles fraîches ou conservées à basse température ou même congelées à –70°C.
Différents kits sont proposés à cet effet; ceux utilisant les anticorps monoclonaux offrent de
meilleurs résultats (Blanco et al., 2008).
En pratique, ce test peut servir au diagnostic primaire de l’infection mais s’avère
surtout utile pour le contrôle de l’efficacité du traitement d'éradication. Assez pratique en
pédiatrie, il pourrait être utilisé comme alternative au test respiratoire pour le contrôle
d’éradication (Malfertheiner et al., 2007).
34
CHAPITRE II : METHODOLOGIES
II.1 – Cadre de l’étude
L’étude a été menée au Centre Médical Saint Camille et au CERBA/LABIOGENE.
II.1.1 – Centre Médical Saint Camille
Le Centre Médical Saint Camille est situé à Ouagadougou dans la commune de
Bogodogo (secteur 14), sur l’avenue Babangida. Ce centre a été crée en 1974 par l’ordre des
religieux camilliens. C’est un centre médical privé qui comporte plusieurs services:
• Un service de consultation générale (Adulte et pédiatrie);
• Un service de néonatologie;
• Un laboratoire d’analyse biomédical ;
• Un service de radiologie (Scanner, Radio numérique, Mammographie…) ;
• Un service de cardiologie;
• Un service de Neurologie (consultation + EEG + EMG);
• Un service optique;
• Un service de Gastro-entérologie;
• Un service de Dermatologie;
• Un service d’ophtalmologie;
• Un service de Kinésithérapie;
• Un service de Gynécologie;
• Un service ORL;
• Un service d’Endocrinologie;
• Un service de Santé Maternelle et Infantile (SMI);
• Un service de Récupération Nutritionnelle
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II.1.2 - Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni
(CERBA/LABIOGENE)
Le CERBA est un centre de recherche comprenant:
• Un laboratoire de biologie et de génétique moléculaires (LABIOGENE) chargé de
l’extraction de matériel nucléaire, de la PCR simple, de la PCR en temps réel, du
séquençage et du génotypage ;
• Un laboratoire de biologie cellulaire chargé des cultures cellulaires et des bio-essais y
afférant notamment les tests de cytotoxicité, les tests anti-protozoaires et les tests
d’immunomodulation;
• Un laboratoire de microbiologie chargé des tests antimicrobiens;
• Un laboratoire d’enzymologie chargé de l’extraction et de la purification des enzymes
et d’activité enzymatique;
• Un laboratoire de phytochimie chargé de l’extraction et de la purification des principes
actifs des plantes;
• Un laboratoire de biochimie clinique pour les analyses de routine;
• Un laboratoire d’hématologie pour les examens de routine;
• Un laboratoire de parasitologie et de bactériologie;
• Un l
Recommended