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Communications affichées

immunoglobulines de souris par traitement du sérum dans un tubeHBT® (Heterophilic Blocking Tube). Trois techniques immunomé-triques non isotopiques mettent en évidence de la Tg (valeurscomprises entre 438 et 780 �g/L), alors que la technique IRMA,considérée comme la technique de référence, rend un résultat infé-rieur au seuil de détection.Expertise.— Nous avons contacté le fabricant du kit de dosage IRMAqui a accepté de réaliser une expertise du sérum. La technique Cis-Bio Thyroglobuline® IRMA met en jeu quatre anticorps monoclonauxde capture et un seul anticorps de révélation. En utilisant un autreanticorps de révélation, la société CisBio a montré la présence deTg à un taux élevé, en accord avec les techniques non isotopiques.Conclusion.— L’expertise a permis de conclure à la mise endéfaut de la technique IRMA pour le dosage de la Tg de cepatient qui sera donc suivi au laboratoire par une techniqueimmunométrique non isotopique. La non-reconnaissance de laTg par l’anticorps de révélation du kit est probable. Cet inci-dent a fait l’objet d’une déclaration à l’AFSSAPS de la part dufabricant.

doi:10.1016/j.immbio.2011.03.037

Mise au point du dosage de la témocilline par HPLCpour l’étude de la stabilité de poches de perfusionsC. Rolin , J.D. Hecq , D. Vanbeckbergen , L. GalantiCliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, avenue Therasse,5530 Yvoir, Belgique

Introduction.— La préparation à l’avance des solutions injectablespar une unité centralisée permet d’améliorer la délivrance de cesinjectables. Cela requiert l’étude de la stabilité du principe actifnécessitant une collaboration entre le laboratoire et la pharma-cie pour la mise au point du dosage de ce principe actif. Le butde notre étude est de mettre au point le dosage de la témocil-line, antibiotique utilisé principalement dans le traitement dessepticémies.Méthodes.— Le système de chromatographie liquide à haute pres-sion (Alliance, model 2690, Waters Association) se compose d’unereverse colonne C18 (Grom-Sil 80 ODS-7pH, 4 �m 150 mm × 4 mm),d’une phase mobile constitué de 15 % d’acétonitrile et 85 %d’acétate d’ammonium à pH = 4 avec de l’acide acétique. Ladétection est réalisée par un détecteur DAD (model 996, WatersAssociation) à 235 nm, le débit est fixé à 1,0 ml/min et la tem-pérature de la colonne à 30 ◦C. Le volume d’échantillon testé estde 10 �l. La stabilité de la témocilline (20 mg/ml) a été étudiéedans 10 poches injectables (5 dans le NaCl 0,9 % et 5 dans le glucose5 %), conservées à 4 ◦C, sur une période de 30 jours. Les solutionsde témocilline sont considérées comme stables si l’intervalle deconfiance inférieure à 95 % de la droite commune de régressionestimée reste supérieur à 90 % du produit initial selon les recom-mandations de la FDA.Résultats.— Le coefficient de variation pour la reproducti-bilité intra-essai (n = 10) est de 3,96 % (0,25 mg/ml), 3,03 %(0,50 mg/ml) et 1,75 % (1,00 mg/ml) et de 3,18 % (0,125 mg/ml),1,89 % (0,50 mg/ml) et 2,34 % (1,00 mg/ml) pour la reproductibilitéinter-essai (n = 16). L’analyse de la régression linéaire de l’aire sousle pic montre un coefficient r2 > 0,999 pour des concentrations de0,125 à 1,50 mg/ml. Afin de confirmer la stabilité dans le temps de latémocilline en perfusion, il est nécessaire d’exclure l’interférenceéventuelle de produits de dégradation. Nous avons ainsi préparéles solutions initiales (pH 7,01) et des solutions acides (pH 2,68)en ajoutant HCL 12 M et alcalines (pH 12,33) en ajoutant NaOH5 M. Chaque solution a été dégradée en chauffant à 100 ◦C pendant

60 min. L’analyse des pics chromatographiques de chacune des solu-tions (initiale, alcaline ou acide avec ou sans chauffage) montre uneséparation des produits de dégradation de la molécule native, per-mettant de confirmer l’absence d’interférence de ces produits surla concentration de la molécule analysée.

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onclusion.— La témocilline peut facilement être dosée par HPLC deanière fiable, permettant la validation de préparation centraliséee perfusions.

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esure de la vitesse de sédimentation en cas deyélome actif : sensibilité du Ves-Matic® et duoller® par rapport à la méthode de Westergren. Rolin , H. Mekouar , X. Hernandez , Y. Cornet , F. Mullier , B.hatelain

Cliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, Avenue Therasse,530 Yvoir, Belgique

ntroduction.— La vitesse de sédimentation (VS) est influencée para présence d’immunoglobulines à forte dose. L’évaluation de laensibilité de la méthode de mesure de la VS, dans le cas des myé-omes, est d’un grand intérêt aussi bien pour le laboratoire que poure clinicien. Le but de cette étude est de comparer la VS obtenuear deux automates, basés sur la mesure optique, par rapport à laéthode de référence chez des patients atteints de myélome actif.éthodes.— Le Roller® 20 de chez ALIFAX-Italie et VES-MATIC®

00 de chez DIESSE-Italie ont été évalués pour la mesure de laS. La méthode de Westergren a été utilisée conformément auxecommandations du « Clinical and Laboratory Standards Institute »CLSI). La VS de 48 échantillons de patients atteints de myélomectif a été mesurée sur les deux automates ainsi que par la méthodee référence. L’analyse statistique des résultats est effectuée entilisant MedCalc®.ésultats.— La régression de Passing et Bablock met en évidence uneorrélation acceptable entre le VES-Matic et la méthode de Wes-ergren (y = -1,9022 + 0,7439 x ; r = 0,76) ; la distribution de Blant etltman montre une distribution homogène des biais. Concernant leoller® 20, la corrélation avec la méthode de Westergren n’est pasatisfaisante (y = 0,3333 + 0,3333x ; r = 0,60), le biais moyen observést de 96 %. Une courbe ROC a été établie afin d’évaluer la sensibi-ité au myélome de chacune des méthodes de mesure. L’étude de’aire sous la courbe (AUC) met en évidence une absence de diffé-ence statistiquement significative entre le VES-Matic et la méthodee Westergren, contrairement à la différence entre l’AUC du Roller®

t celle du Westergren, qui n’est pas statistiquement significative.onclusion.— Une bonne corrélation clinique est retrouvée entre

e VES-Matic et la méthode de Westergren. Le Roller® 20 rend desésultats de VS différents de ceux obtenus avec la méthode deéférence. Une bonne connaissance des limitations des automatestilisés reste indispensable avant chaque changement de techniquet ce dans le but d’assurer une bonne qualité des résultats rendus.

oi:10.1016/j.immbio.2011.03.039

nfluence du nombre de patients sélectionnés poura vérification des valeurs de référence desaramètres de chimie courante. Rolin , L. Galanti

Cliniques universitaires UCL Mont-Godinne, 1, avenue Therasse,530 Yvoir, Belgique

ntroduction.— Les laboratoires adhèrent de plus en plus à desormes de qualité, principalement la norme ISO 15189, lesquellesequièrent la vérification régulière des valeurs de référence. Lesaleurs de référence sont en générales proposées par le fabricante l’automate. La vérification des valeurs de référence proposéesécessitent l’analyse des résultats obtenus chez un certain nombre

e sujets normaux, difficile à obtenir. Selon le guide de validationes méthodes en biologie médicale (Cofrac, juin 2004), une popula-ion minimum de 100 patients est requise, dans laquelle les valeursberrantes sont éliminées. Le but de notre étude est d’évaluer