Quelle procédure diagnostiquepour quelle leishmaniose ?
Pierre MartyParasitologie-Mycologie
Centre Hospitalier Universitaire de NiceFaculté de Médecine de Nice
Université de Nice - Sophia Antipolis et Inserm U 895
Société de Pathologie Exotique Paris, 19 novembre 2008
Leishmaniose tégumentaireou
Leishmaniose viscérale
Leishmanioses tégumentaires
L. major, Tunisie L. aethiopica, Ethiopie
Leishmanioses tégumentaires
L. infantumLigurie, Italie
L. majorKairouan, Tunisie
Leishmanioses tégumentaires
L. infantumrégion de Nice
Leishmaniose cutanéeDiagnostic
méthodes classiquesBiopsie
ouAspiration
Examen microscopique-Histopathologie (sur coupes)
-Lames colorées au May-Grünwald Giemsa(apposition, grattage ou frottis d’aspiration)
Culture sur milieu Nicolle-Novy-McNeal ou deSchneider pour identification (zymodème)
Biopsie cutanée: nombreuses formes amastigotesMGG x 400
Biopsie cutanée: nombreuses formes amastigotesMGG x 1000
Biopsie cutanée: nombreuses formes promastigotes
Culture sur NNN en 5 jours
Leishmaniose cutanéeDiagnostic
méthodes moderneDiagnostic moléculaire
PCR sur biopsie, grattage ou aspirationéchantillon, frais, fixé ou congelé
Plus sensibleIdentification plus rapide mais plus coûteux
SérodiagnosticWestern blot +++
Diagnostic moléculaire de laleishmaniose cutanée (1)
-Méthodes PCR
-Particulièrement utiles pour les faiblescharges parasitaires
-Spécificité de 100%
-Sensibilité améliorée de 20 à 70% parrapport aux techniques parasitologiquesconventionnelles
Reithinger and Dujardin, J. Clin. Microbiol., 2007, 45:21-25
Diagnostic moléculaire de laleishmaniose cutanée (2)
-Comparaison microscopie, culture etPCR sur 155 lésions suspectes enIran
-Spécificité de 100% des 3 techniques
-Sensibilité de 79,3% de la microscopie-Sensibilité de 86,2 % de la culture-Sensibilité de 98,8% de la PCR
Shahbazi et al, Parasitol. Res., 2008, 103:1159-62
AAAAAA BBBBBBBB CCT
21 kDa
14 kDa
18 kDa
31 kDa
23 kDa
34 kDa
A: lésions évolutives
B: lésions guéries
C: pas de leishmaniose
T: leishmanioseviscérale (L. infantum)
Western blot et leishmaniose cutanée
Le Fichoux et al, Poster, WorldLeish 2, 2001, Hersonissos, Greece
Leishmanioses tégumentairesProcédure diagnostique
Lésion suspecte
Prise desang
Western blot
Wbnégatif
Wbpositif
Microscopie
Prélèvement cutanéSTOP
Culture
Négative → PCR Positive = pas de PCR
Leishmanioses viscérales
Leishmanioses viscéralesClinique:
Fièvre, Pâleur, Splénomégalie
Signes biologiques d’orientation:
Tricytopénie
Syndrome inflammatoire(VS accélérée, hyperprotidémie, hypergammaglobulinémie polyclonale)
SEROLOGIE: forte présomption
ImmunoFluorescenceIndirecte = test de référencefaux négatifs chez les patients très immunodéprimésfaux positifs dans les pathologies auto-immunes(combiné avec WB +++)
Leishmanioses viscérales
DIAGNOSTIC DE CERTITUDE
VISUALISATION DES FORMES AMASTIGOTES
- prélèvement de moelle osseuse: gold standard- ponction splénique chez les anglo-saxons- intérêt du sang périphérique chez les immunodéprimés(après concentration du sang)
TUBE CITRATE POUR REALISER FROTTIS ETCULTURE AU LABORATOIRE
Leishmanioses viscéralesDIAGNOSTIC DE CERTITUDE
SANG PERIPHERIQUE +++
-Leucocytocentrifugation-Culture
-PCR diagnostic (possible sur sérum)-PCR quantitative suivi thérapeutique
Leishmanioses viscéralesProcédure diagnostique
Clinique évocatrice
Prise desang
Tube secsérologie
Tube Citrate de Na
Leucocytocentrifugation (LCC)
+Culture
Tube EDTAPCR
Si sérologiepositive et
LCC négative
Merci de votre attention !