Technique Karyolite BoBs : bilan d’un an d’utilisation en routine pour le diagnostic prénatal direct
Capucine Hyon Service de Génétique et d’Embryologie Médicales
Pr. JP Siffroi
Mémoire pour l’obtention du Diplôme d’Étude Spécialisé Complémentaire
de Cytogénétique Humaine
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales
Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales
Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies
Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA
Introduction
1970
1980
1990
2000
2010
1960
A. & J. Boué : culture de LA => début du diagnostic prénatal
Y. Dumez : 1ers prélèvements de villosités choriales
Klinger et al. : FISH sur noyau interphasique => diagnostic des principales aneuploïdies
Développement méthodes de diagnostic rapide des aneuploïdies : - qPCR - QMPSF - MLPA
Diagnostic rapide aneuploïdies et syndromes microdélétionnels ou grands remaniements
Objectif
Évaluer l’apport du kit Karyolite BoBs en anténatal pour le diagnostic rapide des aneuploïdies et des remaniements chromosomiques de grande taille pendant un an au laboratoire de cytogénétique de l’hôpital Armand Trousseau.
Technique BoBs
BoBs : BACs on Beads
Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN
Technique BoBs
BoBs : BACs on Beads
Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN
BACs fixés sur billes de polystyrène
Technique BoBs
BoBs : BACs on Beads
Technique quantitative reposant sur le principe de dissociation et réassociation spécifique de l’ADN
BACs fixés sur billes de polystyrène
Coloration des billes avec 2 fluorochromes
=> Distinction de 100 billes différentes
Kit Karyolite
Étude des régions télomériques et péricentromériques des 23 pairs
1 bille = 1 région = 3 BACs ≠
=> 1 région = 1 à 15 Mb
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
P
TF
TM
Principe de la technique
Principe de la technique
Principe de la technique
Résultats
Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes
LA 737 531 180 0
BT 210 177 23 8
SF 39 0 0 0
Tissus 11 11 0 0
Total 997 719 203 8
Nombre de prélèvements
Résultats
Type de prélèvement Prélèvements BoBs FISH directes BT directes
LA 737 531 180 0
BT 210 177 23 8
SF 39 0 0 0
Tissus 11 11 0 0
Total 997 719 203 8
Nombre de prélèvements
Résultats
Indications FISH directe
Indication BoBs FISH
Demande de FISH spécifique associée : 4p, 5p, 22q
+
Grossesse gémellaire +
LA>25 SA
Arrivée Lundi - Mardi - Jeudi +
Arrivée Mercredi - Vendredi +
Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41
4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1
Convenance personnelle 1
Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32
Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2
BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1
Total 203
Indications FISH directe
Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41
4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1
Convenance personnelle 1
Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32
Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2
BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1
Total 203
Indications FISH directe
Résultats Indications FISH FISH spécifique associée 41
4p 16 4p + 5p 2 TBX1 20 SNRPN 1 Hernie diaphragmatique (8p, 12p, 15q) 1 FISH spécifique 1
Convenance personnelle 1
Autre 161 LA > 25SA 105 LA < 25SA 32
Jours fériés 13 ? 17 Jumeaux 2
BT 23 Jours fériés 10 ? 9 Forte suspicion clinique ou terme 3 Jumeau 1
Total 203
Indications FISH directe
Résultats Résultats BoBs
Normaux 639
Echec 6
Contamination maternelle 1
Aneuploïdies autosomiques 57
Anomalies des gonosomes 5
Anomalies des autosomes 5
Ségrégation 3:1 t(11;22) 1
Ségrégation 3:1 t(5;12) 1
Duplication 4qter 1
Délétion 22qter 1
Trisomie 18qter 1
Faux positifs 1
Duplication 22qter, XXY
Faux négatifs 4
XXX 1
Triploïdie XXX 2
Triploïdie XXY 1
Faux positif et faux négatif 1
Délétion 8p, Duplication 8q
Total 719
Dont trisomie 21, 18, 13 et 16
Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y
BoBs
Résultats Résultats BoBs
Normaux 639
Echec 6
Contamination maternelle 1
Aneuploïdies autosomiques 57
Anomalies des gonosomes 5
Anomalies des autosomes 5
Ségrégation 3:1 t(11;22) 1
Ségrégation 3:1 t(5;12) 1
Duplication 4qter 1
Délétion 22qter 1
Trisomie 18qter 1
Faux positifs 1
Duplication 22qter, XXY
Faux négatifs 4
XXX 1
Triploïdie XXX 2
Triploïdie XXY 1
Faux positif et faux négatif 1
Délétion 8p, Duplication 8q
Total 719
Dont trisomie 21, 18, 13 et 16
Dont monosomie X, Sd Klinefelter et Double Y
BoBs
Profils obtenus
Trisomie 21
Profils obtenus
Trisomie 13
Profils obtenus
Trisomie 18
Profils obtenus
Anomalies des gonosomes
Anomalies de structure
del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39
Anomalies de structure
del(22)(qter)dn Indication : MSM T2 à 1/39
Anomalies de structure
+der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
Anomalies de structure
+der(22)t(11;22)mat Indication : dépistage combinée 1er T à 1/38
Anomalies de structure
+der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T
Anomalies de structure
+der(12)t(5;12)mat Indication : profil particulier au 3ème T
Anomalies de structure
dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T
Anomalies de structure
dup(18qter) Indication : SAE au 3ème T
Der(12)t(12;18)(p13.3;q12.2)
Anomalies de structures
dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
Anomalies de structures
dup(4qter) Indication : dépistage combinée 1er T à 1/70
Faux positif
Faux positif
Faux positif
Faux négatifs
Trisomie X Triploïdie
Faux négatifs
Trisomie X Triploïdie
Faux positif + faux négatif
Faux positif + faux négatif
Discussion
Technique BoBs permet diagnostic rapide pour tous les prélèvements
Taux d’échec <1%
Détection de toutes les aneuploïdies (y compris T16)
Détection d’anomalies de structure
Principalement sur dépistage 1er ou 2ème T
Diagnostic d’une anomalie non visible au caryotype
Avantages
Discussion
Pas de technique en urgence
FISH directe si MAP
Difficultés d’interprétation de certains profils
Faux positifs alors que les critères de qualité sont acceptables
Nouvelles limites du laboratoire
Pas de détection des polyploïdies
Billes 22q proximale ne couvre pas la région DGS
Coût : x3 par rapport à la FISH directe
Limites
Remerciements
Service de Génétique et d’Embryologie Médicales
Sylvie Giaccuzo Sylvie Lucchini Patricia Diourne Catherine Jacquet Dr. Nicole Joyé Pr. Jean-Pierre Siffroi
Perkin Elmer
Jennifer Perez Alix Joseph
Cliniciens
Maternité de l’hôpital Trousseau Maternité de l’hôpital Tenon Maternité de la Pitié Salpêtrière Maternité des Bluets Maternité de Villeneuve Saint Georges Maternité du Centre Hospitalier Sud-Francilien