Chevaliez Hcv Virus Et Marqueurs

VIRUS DE L’HEPATITE C& Marqueurs

Stéphane Chevaliez

Centre National de RéférenceDes Hépatites B, C et delta

Laboratoire de Virologie & INSERM U955Hôpital Henri MondorUniversité Paris XII

Créteil

VIRUS DE LVIRUS DE L’’HEPATITE CHEPATITE C& Marqueurs& Marqueurs

StStééphane Chevaliezphane Chevaliez

Centre National de RCentre National de RééfféérencerenceDes HDes Héépatites B, C et deltapatites B, C et delta

Laboratoire de Virologie & INSERM U955Laboratoire de Virologie & INSERM U955HHôpital Henri Mondorôpital Henri MondorUniversitUniversitéé Paris XIIParis XII

CrCrééteilteil

Virus de l’Hépatite CI. Aspects VirologiquesVirus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite C

I. Aspects VirologiquesI. Aspects Virologiques

Virus de l’Hépatite CVirus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite C

•• Famille : Famille : FlaviviridaeFlaviviridae

•• Genre : Genre : HepacivirusHepacivirus

Phylogénie de la région codant la protéine NS5B

Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Adapted from Simmonds et al., 1999; 2001.

•• Famille : Famille : FlaviviridaeFlaviviridae

•• Genre : Genre : HepacivirusHepacivirus

•• HHôte naturel : Hommeôte naturel : Homme

•• Tropisme : HTropisme : H éépatocytepatocyte

Virus de l’Hépatite CVirus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite CVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Organisation StructuraleOrganisation StructuraleOrganisation StructuraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Organisation GénomiqueOrganisation GOrganisation GéénomiquenomiqueVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463.

Protéines structurales Protéines non structurales

Fonction des Protéines du VHCFonction des ProtFonction des Protééines du VHCines du VHCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Protéines VHC Fonction

Capside Nucléocapside

F/ARF ?

E1 Enveloppe, domaine de fusion

E2 Enveloppe, liaison au récepteur

P7/NS1 Canal ionique Ca-dépendant

NS2 Autoprotéase NS2-3

NS3 Sérine protéase

NTPase/hélicase

NS4A Cofacteur de NS3

NS4B Inducteur de la formation du "membranous web"

NS5A Indispensable à la réplication, transactivateur?

NS5B ARN polymérase ARN-dépendante

Protéine de CapsideProtProtééine de Capsideine de CapsideVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

– Composant essentiel de la particule virale

(nucléocapside)

– Form é de deux domaines D1 et D2

– Interaction avec le m étabolisme lipidique

. Inhibition de la MTP et de la sécrétion des VLDL

. Interaction via le domaine D2 avec les gouttelettes lipidiques

– Rôle dans la pathogenèse

. Déterminant majeur des lésions hépatiques (stéatose, …)

Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.

VHC génotype 1b

xyz

xy

z

Piodi et al., Hepatology 2008, 48(1): 16-27.

Protéine NS3ProtProtééine NS3ine NS3Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

– Deux régions

. Sérine protéase (région N-terminale)

. NTPase/hélicase (région C-terminale)

– Modulateur de la réponse interféron via les TLR3

Inhibition de la Production d’IFN par NS3Inhibition de la Production dInhibition de la Production d’’IFN IFN par NS3par NS3


Protéine NS3ProtProtééine NS3ine NS3Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

– Deux régions

. Sérine protéase (région N-terminale)

. NTPase/hélicase (région C-terminale)

– Modulateur de la réponse interféron via les TLR3

– Cibles de molécules antivirales

. Telaprevir (VX-950, Vertex)

. Boceprevir (SCH503034, Merck)

. R7227 (ITMN191, Roche/Intermune)

OPM Database, University of Michigan, College of Pharmacy.

Site actifSite actif((His57, Asp 81, Ser139)

Telaprevir (VX-950)

Boceprevir (SCH 503034)

R7227 (ITMN 191)

-5

-4

-3

-2

-1

0

1

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Days on treatment

Log

HC

V R

NA

red

uctio

n fr

om b

asel

ine

Baseline

Placebo (n=6)

Telaprevir 450mg q8h(n=10)

Telaprevir 1250mg q12h (n=10)

Telaprevir 750mg q8h(n=8)

-4,41

-0,21

-2,21

-2,37

Reesink et al., Gastroenterology 2006, 131: 997-1002.

Activité Antivirale du TVRActivitActivitéé Antivirale du TVRAntivirale du TVRVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Lesburg et al., Nat struct Biol 1999, 6: 937-943; Bressanelli et al., Proc Natl Acad Sci USA 1999, 96: 13034-13039; Ago et al., Srructure Fold Des 1999, 7: 1417-1426.

Protéine NS5B: RdRpProtProtééine NS5B: RdRpine NS5B: RdRpVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Réplication

– Modèle du poliovirus. Virus à ARN monocaténaire de polarité positive

De Clercq., Nature Review Drug Discovery, 2007; 6: 1001-18

Réplication ViraleRRééplication Viraleplication ViraleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Analogues Nucléos(t)idiques– R7128 (Pharmasset)– IDX184 (Idenix Pharmaceuticals)

• Analogues non nucléosidiques– Filibuvir (Pfizer)– ANA598 (Anadys Pharmaceuticals)– GS 9190 (Gilead)– ABT-333 (Abbott)

Anti-polymérasesAntiAnti--polympolyméérasesrasesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Copyright © 2006 Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey, USA

Cibles des Molécules AntiviralesCibles des MolCibles des Moléécules Antiviralescules AntiviralesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Site A (Thumb/fingertips)(JTK-109)

Mutants: 495, 496, 499

Site B (Thumb)HCV-371

Mutants: 419, 423, 482

Site C (Palm)(A-837093)

Mutants: 411, 414, 448

Site Actif(R7128)

Mutants: 282

Site D (Palm)(HCV796)

Mutants: 316

AA

BBCC

DD

EE

Site E (Finger, hypothetical )GS-9190

Mutants: 445,448,452

0

1

2

3

4

5

6

7

-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70

Days

HC

V R

NA

(Lo

g IU

/mL)

TMA + + + + - - - - - - - - + +

LOQ (20 IU/mL)

MK-0608 at 1mg.kg -1 orally

- 4,6 - 4,1

wt S282R/T/I wt S282

Activité Antivirale du MK-0608ActivitActivitéé Antivirale du MKAntivirale du MK--06080608Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

Cycle ViralCycle ViralCycle Viral

Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463



Moradpour et al., Nature Reviews Microbiology, 2007; 5: 453-463


Modèle d’Entrée ViraleModModèèle dle d’’EntrEntréée Viralee Virale






Maturation de la PolyprotéineMaturation de la PolyprotMaturation de la Polyprotééineine



Structure des Protéines NSStructure des PStructure des Protrotééines NSines NS







"Membranous Web""Membranous Web""Membranous Web"

Huh7 naïves

Huh7 infectées(réplicon)

Gosert et al., J Virol 2003, 77(9): 5487-5492.




Virus de l’Hépatite CII. Modèles d’EtudeVirus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite CII. ModII. Modèèles dles d’’EtudeEtude

Souris transgéniquesSouris SCID/uPA

Modèles AnimauxModModèèles Animauxles AnimauxVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Modèles CellulairesModModèèles Cellulairesles CellulairesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Pseudoparticules rétrovirales (HCVpp)

• Réplicons g énomiques et subg énomiques

• Système productif (HCVcc)

Modèles AcellulairesModModèèles Acellulairesles AcellulairesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Modèles enzymatiques- Protéase NS3/4A- ARN polymérase ARN-dépendante (NS5B)- Cyclophyline B

Mesure de l’Activité Enzymatique de RDRpMesure de lMesure de l’’ActivitActivitéé Enzymatique Enzymatique de de RDRpRDRp


-- SimpleSimple-- SensibleSensible-- ReproductibleReproductible-- MiniaturisMiniaturis éé en microplaques 96 puitsen microplaques 96 puits

RdRpRdRp

Matrice ARN simpleMatrice ARN simple--brin homopolymbrin homopolyméériquerique

ARN doubleARN double--brinbrinRdRpRdRp

Agent intercalantAgent intercalant

PAS DE FLUORESCENCEPAS DE FLUORESCENCE

FLUORESCENCEFLUORESCENCEAgent intercalantAgent intercalant

A. Ahmed-Belkacen, 2007.

Virus de l’Hépatite CIII. Variabilité Génétique

Virus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite CIII. VariabilitIII. Variabilitéé GGéénnéétiquetique

Dynamiques Virales du VIH, VHB et VHCDynamiques Virales du VIH, VHB et Dynamiques Virales du VIH, VHB et VHCVHC


HIV HBV HCV

Daily virion production 10 10 1012 - 1013 1012

Half-life of free virions (hr) 1 4 (<1) 2-3

Half-life of intracellular virions

Days Months Hours

Mutation rate Very high High Very high

Viral reservoir Integrated cDNA cccDNA No

Soriano et al., J Antimicrob Chemother 2008, 62: 1-4, Murray et al., Hepatology 2006, 44: 1117-1121; Dandri et al., Hepatology 2008, 48(4):1079-86.

• Erreurs au cours de la réplication– Fréquentes

. 10-4-10-4 mutations par nucléotide copié au cours de la réplication du VHC

– Spontanées– Au hasard

• Absence d’activité exonucléasique 3’ ⇒⇒⇒⇒5’("proofreading ")– Accumulation de mutations

• A l’origine de : – La diversification des types et des sous-types– La distribution en quasi-espèces

ARN Polymérase ARN-dépendanteARN PolymARN Polyméérase ARNrase ARN--ddéépendantependanteVirus de l’Hépatite C et Marqueurs


Diversification des GénotypesDiversification des GDiversification des Géénotypesnotypes

Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

7

Central Africa


Répartition GéographiqueRRéépartition Gpartition Gééographiqueographique

1a,

Adapted from Fang J., et al. J. Clin Liver Dis., 1997.


Génotypes en FranceGGéénotypes en Francenotypes en France

9,5%

G1 G3G2 G4 G5

1a

1b

1

60%19%

9,5%

2%

1a

1b

1

60%


Intérêts de le Détermination des GénotypesIntIntéérêts de le Drêts de le Déétermination des termination des GGéénotypesnotypes

• Détermination systématique du génotype

– Facteur prédictif de la réponse au traitement

– Conditionne

. La dose de ribavirine

. La durée du traitement (24 vs 48-72 semaines)

Weiner et al., Virology 1991; 180:842-848; Martell et al., J Virol 1992;66:3225-36.


Distribution en Quasi-espèceDistribution en QuasiDistribution en Quasi--espespèècece

• Dérive g énétique– Accumulation de mutations ponctuelles

• Glissement g énétique– Suite à la modification brutale de l’environnement

réplicatif


Mécanismes d’Evolution de la Quasi-espèceMMéécanismes dcanismes d’’Evolution de la Evolution de la QuasiQuasi--espespèècece

• Joue un rôle dans le maintien de l’infection chronique

• Joue un rôle dans l’é chec des traitements antiviraux

• Joue un rôle dans la s évérité de la maladie

Farci P, 2000; Science, 288: 339-344; Lavillette D, 2005; Journal of Virology, 79(10): 6023-6034; Farci P, 2002; PNAS, 99: 3081-3086; Chambers TJ et al., 2005; 79: 3071-3083; Sullivan et al., JID 2007, 196: 239-248.


Distribution en Quasi-espèceDistribution en QuasiDistribution en Quasi--espespèècece

Virus de l’Hépatite CIV. Exemples d’Application de la Variabilité Génétique

Virus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite CIV. Exemples dIV. Exemples d’’Application Application de la Variabilitde la Variabilitéé GGéénnéétiquetique

• Diversification et diffusion du VHC

• Transmission du VHC

• Mécanismes de persistance et d’infection du VHC

• Compartimentation tissulaire du VHC

• Mécanisme d’échec thérapeutique et de

résistance

Impacts de la Variabilité Génétique du VHCImpacts de la VariabilitImpacts de la Variabilitéé GGéénnéétique tique du VHCdu VHC







résistance



7

Central Africa

Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

Diversification des GénotypesDiversification des GDiversification des GéénotypesnotypesVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Génotype & Mode de TransmissionGGéénotype & Mode de Transmissionnotype & Mode de Transmission

52% 54%

63%

0%

20%

40%

60%

80%

100%

UDVI Transfusion Autres

3

1b

1a

Autres

Pawlotsky et al., J Infect Dis, 1995; 171(6): 1607-10.


27%

39%

36%

0%

20%

40%

60%

80%

100%

UDVI Transfusion Autres

4

3

2

1b

1a

1nt

Payan et al., J Viral Hepat 2005;12: 405-13.

Génotype & Mode de TransmissionGGéénotype & Mode de Transmissionnotype & Mode de TransmissionVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

GGéénotype 3a notype 3a Chez les UDVIChez les UDVI

0.1 substitution per site

JK049TrKj

NE125NE048

HCV-3a

HCV-3fHCV-3c

HCV-3bHCV-3k

Australie

USA, Côte Ouest

Argentine

Brézil

France

USA, Côte Est

75

72

83

79

100

92

60

62

81

63

98

98

99

62

52

7195

56

Morice et al., J Med Virol 2006;78:1296-1303.







résistance



• Mise en évidence d’une séroconversion VHC lors du dépistage et du suivi des patients hémodialysés en juillet 2005, à l’hôpital Henri Mondor

• L’ensemble des patients hémodialysés ont ététestés (anticorps anti-VHC et ARN viral)– Mise en évidence d’un 2nd cas au cours de la même période

• Analyses génétique et phylogénique

• Recherche du VHC dans l’environnement– Supports et surfaces inertes

Transmission Nosocomiale "Mondorienne"Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"


� Identification de deux cas de séroconversion en 2004 au sein de l’unitéd’hémodialyse de l’hôpital Henri Mondor :

– Patient "1" infecté par un génotype 3a

– Patient "2" infecté par un génotype 1

Transmission Nosocomiale "Mondorienne"Transmission Nosocomiale Transmission Nosocomiale "Mondorienne""Mondorienne"


1h_FrSSD981h_98CM1521

1h_98CM13571f_FR21i_FR16

1i_QC771iQC181

1m_GUI171m_GUI11

1m_GUI241d_HC1N161d_BA107

1d_FR17Patient 81b_HCJ4

Patient 7Patient 6

Patient 5Patient 4

1b_HCP011b_HCVBK

1c_HCG91c_SR0311c_Khaja1

1l_M5186N1l_98CM14271l_98CM1457

1e_M4541N1e_CAM1078

1e_QC1721g_1382

1g_21521g_EG024

1a_HCV11a_HCVH

1a_HCJ11j_QC2

1j_QC891k_QC68

1k_QC82Patient 3Patient 2*Patient 2**

2a_HCJ65a_SA13

6a_EUHK2Patient 1

3a_NLZ14a_ED43

0.05

Genotype 4

Genotype 3

Genotype 6Genotype 5

Genotype 2

Genotype 1

100

100

100

Patients VHC chroniqueSéroconversion VHC

Girou et al., Clin Infect Disease 2008, 47(5): 627-633.

G1

Analyse PhylogéniqueAnalyse Analyse PhylogPhylogééniquenique

Région NS5B (329 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot


6a_332b_JFH1Patient 1 (7/04)

5a_SA131b_HVR3812

Patient 3 (7/05)Patient 3 (9/05)Patient 2 (7/04)Patient 2 (9/04)Patient 3 (7/04)

Patient 3 (01/05)

1a_HCT27X52a_Q2B

3a_CB1a_HCT18X5

Patient 61b_AWV2C33

Patient 8Patient 4

Patient 74a_ED43

0.2

100



Analyse PhylogéniqueAnalyse PhylogAnalyse Phylogééniquenique

Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot


6a_332b_JFH1Patient 1 (7/04)

5a_SA131b_HVR3812

S5 (7/05)Patient 3 (7/05)Patient 3 (9/05)Patient 2 (7/04)Patient 2 (9/04)Patient 3 (7/04)S4 (6/05)S3 (6/05)S2 (6/05)Patient 3 (01/05)S1 (6/05)

1a_HCT27X52a_Q2B

3a_CB1a_HCT18X5

Patient 61b_AWV2C33

Patient 8Patient 4

Patient 74a_ED43

0.2

100

Surfaces inertes



Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot

Analyse PhylogéniqueAnalyse PhylogAnalyse PhylogééniqueniqueVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Screening de 64 patients hémodialysés à l’hôpital Hubert Kutuku Maga, Cotonou, B énin (Afrique)– Détection anticorps anti-VHC– Détection ARN VHC (limite détection <50UI/mL)

• Etude génétique et phylogénique de deux régions distinctes du génome viral– NS5B– Core-E1

Transmission Nosocomiale au BéninTransmission Nosocomiale au Transmission Nosocomiale au BBééninnin



5aSA132aHCJ6

Patient 496aEUHK2 3aNLZ1

Patient 624aED43

1hFrSSD981h98CM1357

1h98CM15211cHCG91cSR0311cKhaja1

1aHCV11aHCVH

1aHCJ11jQC2

1jQC891kQC68

1kQC821eM4541N

1eCAM10781eQC172

1g13821g2152

1gEG0241lM5186N1l98CM14271l98CM1457

1fFR2Patient 59

Patient 46Patient 54Patient 2

Patient 28Patient 64Patient 16Patient 36


Patient 71bHCJ41bHCVBK

1bHCP01Patient 401iFR16

1iQC771iQC181Patient 48Patient 60Patient 52

Patient 261dFR17

1dHC1N161dBA1071mGUI171mGUI111mGUI24

0.05

59

99

96

34100

72

100

98

43

Région NS5B (286 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningBootstraping : 1000 replicatesNJPlot

Génotype 2

Génotype 4

Génotype 3

Génotype 1

Génotype 6

Génotype 2

Génotype 5

Génotype 1, sous-type b

Génotype 3, sous-type a

Génotype 1, sous-type i

Génotype 1, sous-type ?

100


Transmissions NosocomialesTransmissions NosocomialesTransmissions Nosocomiales

Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningNJPlot

2aQ2B

3aCB

2bJFH1

1aHCT18X5

6a33

4aED43

1aHCT27X5


Patient 17Patient 2

Patient 28Patient 64


5aSA13

Patient 59


Patient 601bAWV2C33

1bHVR3812

0.2



MAXIMUM DE VRAISEMBLANCEMAXIMUM DE VRAISEMBLANCE

Assignation Provisoire dAssignation Provisoire d’’un Nouveau un Nouveau SousSous--type : type : Etude de la rEtude de la réégion NS5Bgion NS5B

Patient 16



1f_L38350

1e_AY894555

1g_AF271822

1g_AF271820

1d_L39302

1d_L39299

1b_M58335

1b_D90208

1i_AY434119

1h_AY434131

1j_AY434158

1j_AY434128

1k_AY434122

1k_AY434112

1a_M67463

1a_M62321

1c_D14853

1c_AY051292

0.05

PARCIMONIEPARCIMONIE

Patient 16Patient 18Patient 17Patient 7Patient 8


1f_L38350

1h_AY434131

1i_AY434119

1d_L39302

1d_L39299

1b_M58335

1b_D90208

1e_AY894555

1g_AF271822

1g_AF271820

1j_AY434158

1j_AY434128

1k_AY434122

1k_AY434112

1a_M67463

1a_M62321

1c_D14853

1c_AY051292


MAXIMUM DE VRAISEMBLANCEMAXIMUM DE VRAISEMBLANCE

Assignation Provisoire dAssignation Provisoire d’’un Nouveau un Nouveau SousSous--type : type : Etude de la rEtude de la réégion Coregion Core--E1E1

PARCIMONIEPARCIMONIE

Patient 7Patient 64


Patient 17Patient 8

1h_AY434132

1h_AY257087

1d_L38377

1i_AY434120

1i_L48495

1b_M58335

1b_L38372

1b_D90208

1f_L38371

1l_AY257091

1l_AY257083

1c_AY051292

1c_D14853

1g_AF271797

1g_AF271798

1e_AY894553

1e_L38361

1k_AY434123

1k_AY434113

1j_AY434129

1j_AY434106

1a_M67463

1a_M62321

0.02 Patient 64Patient 46Patient 18Patient 16Patient 17Patient 7Patient 8

1d_L38377

1i_AY434120

1i_L48495

1b_D90208

1b_L38372

1b_M58335

1l_AY257091

1l_AY257083

1c_AY051292

1c_D14853

1g_AF271797

1g_AF271798

1e_AY894553

1e_L38361

1k_AY434123

1k_AY434113

1j_AY434129

1j_AY434106

1a_M67463

1a_M62321

1f_L38371

1h_AY434132

1h_AY257087


• Epidémie à VHC au sein d’une unité d’hémodialyse en Grèce (" Papageorgiou General HospitalPapageorgiou General Hospital" , Thessaloniki), Thessaloniki)

• 17 patients hémodialysés contaminés en quelques mois

• Analyses génétique et phylogénique

• Etude de la réponse neutralisante– Système HCVpp

Lavillette et al., J Virol 2005;79:6023-34

Transmission Nosocomiale en GrèceTransmission Nosocomiale en GrTransmission Nosocomiale en GrèèceceVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

0,1 substitution per site

HCV-1HCV-H

SR052HC-G9

SR037HC-J4

HCV-BKBE90

Pt-11Pt-10Pt-9Pt-5Pt-12Pt-13Pt-15

Pt-16Pt-2Pt-4

Pt-3Pt-1Pt-17Pt-7Pt-6Pt-8

1b

HCV-1

1a

1c

Souche B

Souche A



Région HVR1 (81 nt)CLUSTALXDNADist (PHYLIP 3.5)Matrice de distance: Kimura 2-parameter (Ts/Tv=2)Neighbor-JoiningNJPlot


Patient-10 (souche B)

ARN VHC(UI/mL)

Semaines

% neutralisationinfection

Huh7

ARN VHC

Réponse Neutralisante

ALAT

Contrôle Neutralisation1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

• Absence de réponse neutralisante et absence de contrôle de l’infection


Réponse Neutralisante - Groupe 1RRééponse Neutralisante ponse Neutralisante -- Groupe 1Groupe 1Virus de l’Hépatite C et Marqueurs

• Réponse neutralisante forte et spécifique• Réponse neutralisante inversement proportionnelle

à la cinétique de la charge virale

Patient-1 (souche A)

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

20

40

60

80

100

120

140

160

180

200

1,E+01

1,E+02

1,E+03

1,E+04

1,E+05

1,E+06

1,E+07

1,E+08

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

% neutralisationinfection

Huh7

Réponse Neutralisante - Groupe 2RRééponse Neutralisante ponse Neutralisante -- Groupe 2Groupe 2

ARN VHC(UI/mL)

Semaines

ARN VHC

Réponse Neutralisante

ALAT

Contrôle Neutralisation








résistance



Hépatite Aiguë

Hépatite Chronique50 - 80%

Cirrhose 20 - 30%

Décompensation6 - 10%

HCC4-5% par an

Mortalité

20 -

30 a

ns

StéatoseFibrose

Histoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire NaturelleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Hépatite Aiguë


Cirrhose 20 - 30%


HCC4-5% par an

Mortalité

20 -

30 a

ns

StéatoseFibrose

Histoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire NaturelleVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Histoire NaturelleHistoire NaturelleHistoire Naturelle

Hépatite Aiguë


Cirrhose 20 - 30%


HCC4 - 5% par an

Mortalité

10 -

30 a

ns


Persistance ViralePersistance Virale

• Persistance virale– Echec de la réponse immune, pourtant

présente et adaptée, à éliminer le virus ou les cellules qui l’abritent

• Interface complexe


Processus MultiProcessus Multi--éétapetape

Hépatite Aiguë

Infection Chronique


1. Mise en place de l’infection aiguë

2. Etablissement de la persistance virale

3. Maintient de l’infection au cours du temps


Hépatite Aiguë

Infection Chronique


1. Mise en place de l’infection aiguë

2. Etablissement de la persistance virale ?

3. Maintient de l’infection au cours du temps

Processus MultiProcessus Multi--éétapetapeVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

Adapted from Ferrari C, Gasroenterology 2007; 132(2): 801-805

Persistance du VHCPersistance du VHCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs






résistance



Roque-Afonso et al., J Virol 2005;79:6349-57)

Compartimentation Plasma-PBMCCompartimentation PlasmaCompartimentation Plasma--PBMCPBMCVirus de l’Hépatite C et Marqueurs

RRéégiongion 55’’NC NC (Pt(Pt--3)3)

RRéégion E1gion E1 --E2 E2 (Pt(Pt--3)3)






résistance



• Résistance naturelle du VHC àl’interféron

• Résistance du VHC à la th érapie par l’interféron

• Résistance du VHC aux inhibiteurs spécifiques (DAA)

Résistance du VHCRRéésistance du VHCsistance du VHC


HEPATITE C : Stratégie Diagnostique & Suivi

Virologique

HEPATITE C : StratHEPATITE C : Stratéégie gie Diagnostique & Suivi Diagnostique & Suivi

VirologiqueVirologique

Virus de l’Hépatite CI. Cinétique des Marqueurs

Virologiques

Virus de lVirus de l’’HHéépatite Cpatite CI. CinI. Cinéétique des Marqueurs tique des Marqueurs

VirologiquesVirologiques

Marqueurs VirologiquesMarqueurs VirologiquesMarqueurs VirologiquesStratégie diagnostique & suivi virologique

Marqueurs indirects

Anticorps anti-VHC totaux

Marqueurs directs

Ag de capside

ARN VHC

Génotype VHC

Cinétique des MarqueursCinCinéétique des Marqueurstique des Marqueurs

ARN VHC

Symptômes +/-

Temps après contage (mois)

Titr

e

Anti-VHC

ALAT

Normal

0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48

Infection Aiguë

Stratégie diagnostique & suivi virologique

Cinétique des MarqueursCinCinéétique des Marqueurstique des Marqueurs

ARN VHC

Symptômes +/-

Temps après contage (mois)

Titr

e

Anti-VHC

ALAT

0 1 2 3 4 5 6 12 24 36 48

Infection Chronique

Normal


Virus de l’Hépatite CII. Tests VirologiquesVirus de l’Hépatite CII. Tests Virologiques

Tests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MolTests Virologiques Molééculairesculaires

Tests quantitatifsSeuil de détection ≥≥≥≥ qualitatifs

Quelle quantité est présente ?

Tests qualitatifsTrès sensibles

(≤≤≤≤ 50 IU/mL)

Est-ce que le VHC est présent ?

Détermination du Génotype

Quel type de VHC est présent ?


Tests Virologiques MoléculairesTests Virologiques MolTests Virologiques Molééculairesculaires

Est-ce que le VHC est présent et en quelle quantité ?

Détermination du Génotype

Quel type de VHC est présent ?

Tests Qualitatifs - Quantitatifs


Intérêts de la Détection -Quantification de l’ARN VHCIntIntéérrêts de la Dêts de la Déétection tection --Quantification de lQuantification de l’’ARN VHCARN VHC

• Evaluation de la réplication virale chez des patients anticorps anti-VHC positifs

• Evaluation de la réponse virologique au cours du traitement standard

– Interféron pégylé alpha-2a ou -2b– Ribavirine


0 4 8 12Semaines

Diminution ≥≥≥≥ 2 Log

Limite de détection(10-15 UI/mL)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

AR

N V

HC

(Lo

g10

UI/m

L)

Peg-IFN-RBV


Cinétiques & Réponses au Traitement

0 4 8 12Semaines

Limite de détection(10-15 UI/mL)

0

1

2

3

4

5

6

7

8

AR

N V

HC

(Lo

g10

UI/m

L)

RVRRV lente

RVP

Diminution ≥≥≥≥ 2 Log

Peg-IFN-RBV

2

Cinétiques & Réponses au Traitement


Techniques DisponiblesTechniques DisponiblesTechniques Disponibles

b-DNA PCRBranched DNA Polymerase chain reaction

Amplification du signal Amplification de la cible

Quantitative Quantitative


Principe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des Techniques





bDNA : Forces & FaiblessesbDNA : Forces & FaiblessesbDNA : Forces & Faiblesses

• Forces– Quantification indépendante du génotype– Tolérance de polymorphismes nucléotidiques– Faible volume de prise d’essai– Large intervalle de quantification linéaire

. ≥ 6,90 Log10 UI/mL

• Faiblesses– Faible sensibilité

. LLOD: 2,80 Log10 UI/mL

– Faux positifs dans les faibles valeurs – Méthode semi-automatisée (Siemens system 440 analyzer)– 12 contrôles par run


Principe des TechniquesPrincipe des TechniquesPrincipe des Techniques





Avantages Techniques de la PCR en Temps Réel

– Diminution du risque de contamination

– Amélioration de la sensibilité

– Augmentation de l’intervalle de quantification lin éaire

– Précision et reproductibilité

– Augmentation de d ébit à travers l’automatisation

– Diminution des co ûts


10 102 103 104 105 106 107 108

Cobas AmplicorHCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNAAssay

Versant HCV RNA3.0 (bDNA)

Intervalles de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

10 102 103 104 105 106 107 108

Cobas AmplicorHCV Monitor v2.0

SuperQuant

LCx HCV RNAAssay

Versant HCV RNA3.0 (bDNA)

TaqMan 48 HCVTaqMan 48 HCV(Roche)(Roche)

HCV Quant ASRHCV Quant ASR(Abbott)(Abbott)

Versant HCV RNAVersant HCV RNA1.0 (kPCR, Siemens)*1.0 (kPCR, Siemens)*

*en développement

Intervalles de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

– Diminution du risque de contamination

– Amélioration de la sensibilité

– Augmentation de l’intervalle de quantification lin éaire

– Précision et reproductibilité

– Augmentation du d ébit à travers l’automatisation

– Diminution des co ûts

Avantages Techniques de la PCR en Temps Réel


• Remplace les techniques qualitatives de détection de l’ARN VHC

• Quantifie l’ensemble des charges virales observées en pratique clinique– Faibles charges virales au cours du traitement

• Surveille efficacement les cin étiques virales (évaluation précoce des réponses virologiques au traitement)

Avantages Cliniques de la PCR en Temps Réel


Chevaliez et al., 2007; Hepatology, 46(1): 22-31.

Quantification de l’ARN VHC(CTM, Roche)Quantification de l’ARN VHC(CTM, Roche)

HC

V R

NA

leve

l in

CA

P/C

TM

48 (

Log

10IU

/mL)

HCV RNA level in Versant HCV 3.0 Assay bDNA(Log 10 UI/mL)

Genotype 1 (n=29)

Genotype 2 (n=27)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=30)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=2)

r = 0.889; p < 0.0001

8

7

6

5

4

3876543


Genotype 1 (n=29)

Genotype 2 (n=27)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=30)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=2)

-1.5

1.0

-1.0

1.5

0.0

0.5

-0.5

15%15%30%30%

Diff

eren

ce b

etw

een

HC

V R

NA

leve

ls m

easu

red

in

CA

P/C

TM

and

in b

DN

A (

in L

og10

UI/m

L)CAP-CTM48 (Roche) versus bDNA 3.0 (Siemens)

Différences de QuantificationDifférences de QuantificationStratégie diagnostique & suivi virologique

Absence de Détection de l’ARN Viral de Patients Infectés par un VHC de Génotype 4Absence de Détection de l’ARN Viral de Patients Infectés par un VHC de Génotype 4

80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180

|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.........|

F_7157 (4a): TAGCCATGGCGTTAGTATGAGTGTTGTGCAGCCTCCAGGACCCCCCCTCCCGGGAGAGCCATAGTGGTCTGCGGAACCGGTGAGTACACCGGAATCGCCGG

Patient 1 (4h): ...........................A.....................................A...................T...............

Patient 2 (4l): ...........................A.....................................A...................T...............

190 200 210 220 230 240 250 260 270

.........|.........|......-...|.........| .........|.........|.........|.........| .........|........

F_7157 (4a): GATGACCGGGTCCTTTCTTGGATTAA-CCCGCTCAATGCCCGGAAATTTGGGCGTGCCCCCGCAAGACTGCTAGCCGAGTAGTGTTGGGTCGCGAAAGGCC

Patient 1 (4h): ......................A.T.A..........................................................................

Patient 2 (4l): .......................C..-.......................................................C.......T..........

280 290 300 310 320 330 340

|.........|.........|.........|.........|.........|.........|.

F_7157 (4a): TTGTGGTACTGCCTGATAGGGTGCTTGCGAGTGCCCCGGGAGGTCTCGTAGACCGTGCACC

Patient 1 (4h): .............................................................

Patient 2 (4l): .............................................................

Chevaliez et al., 2008; Hepatology, 49(4): 1397-1398.

(Log10IU/mL) CAP/CTM96 m2000SP/m2000RT Versant 3.0

Patient 1 (4h) <1.08 5.4 5.0

Patient 2 (4l) <1.08 6.0 5.7


Quantification de Transcrits d’ARN Sauvages ou Mutés en Position 145 et/ou 165 Quantification de Transcrits d’ARN Sauvages ou Mutés en Position 145 et/ou 165

Chevaliez et al., Hepatology, 2009, 50(5): 1681.

HCV 5’NC sequence

Measured HCV RNA levels (Log10 IU/mL)

Real-time PCR assays bDNA assay

CTM m2000 Versant 3.0

Wild-type (G145 and A165)

5.73±0.13 6.05±0.10 6.43±0.01

Single mutant (G145 A and A165)

4.02±0.13 6.00±0.11 6.69±0.02

Single mutant (G145 and A165T)

4.28±0.35 5.88±0.20 6.30±0.02

Double mutant (G145 Aand A165 T)

<1.08* 5.95±0.25 6.60±0.18

*Target not detected


Chevaliez et al., J Clin Microbiol, 2009,47(6):1726-32.

Quantification de l’ARN VHC(m2000, Abbott)Quantification de l’ARN VHC(m2000, Abbott)

r = 0.972; p < 0.0001

8

7

6

5

4

3876543

HC

V R

NA

leve

l in

m20

00S

P/m

2000

RT

(Log

10IU

/mL)

HCV RNA level in Versant HCV 3.0 Assay bDNA(Log 10 UI/mL)

Genotype 1 (n=55)

Genotype 2 (n=21)

Genotype 3 (n=29)

Genotype 4 (n=24)

Genotype 5 (n=9)

Genotype 6 (n=3)


David Sherman., Molecular Symposium, September 2007 (source: Siemens Medical Solutions Diagnostics).

132 clinical samples

Quantification de l’ARN VHC(kPCR, Siemens)Quantification de l’ARN VHC(kPCR, Siemens)


Génotypes du VHCGGéénotypes du VHCnotypes du VHC

Simmonds et al. Hepatology 2005; Murphy et al., AASLD, Hepatology, 2007.

7

Central Africa


Intérêts de la Détermination du GénotypeIntIntéérrêts de la Dêts de la Déétermination du termination du GGéénotypenotype

• Détermination systématique du génotype

– Facteur prédictif de la réponse au traitement

– Conditionne

. La dose de ribavirine

. La durée du traitement (24 vs 48 semaines)


Détermination du GénotypeDDéétermination du Gtermination du Géénotypenotype

• Détermination moléculaire du g énotype VHC (génotypage)

• Détermination sérologique du g énotype VHC (“sérotypage”)


Détermination du GénotypeDDéétermination du Gtermination du Géénotypenotype

• Détermination moléculaire du g énotype VHC (génotypage)

• Détermination sérologique du g énotype VHC (“sérotypage”)


– Complete genome (new subtype identification)

– NS5B coding region (the reference region)

– Envelope E1 coding region (the second reference region)

– 5’-untranslated region, 5’UTR (the most frequently used in practice)


Régions Virales CibléesRRéégions Virales Ciblgions Virales Ciblééeses

Méthodes Moléculaires de GénotypageMMééthodes Molthodes Molééculaires de Gculaires de Géénotypagenotypage

• Séquençage direct des produits d’amplification 1

• Hybridation inverse des produits d’amplification su r support solide : Line Probe Assay (INNO -LiPA HCV, Innogenetics)

• PCR en temps réel à l’aide de primers et/ou sondes génotype spécifiques

• Autres m éthodes :– Restriction fragment length polymorphism analysis (RFLP)– Single-strand conformation polymorphism analysis (SSCP)– Spectrométrie de masse MALDI-TOF après miniséquençage

Arens et al., J Clin Virol, 2001; 22:11-29; Davidson et al., J Gen Virol 1995; 76: 1197-204; Lareu et al., 1997; Le Pogam et al., 1998; J Clin Microbiol; 36: 1461-3; Ilina et al., J Clin Miocrobiol, 2005; 43(6): 2810-15.


Analyse Après Séquençage Direct

• The reference method

• Direct sequence analysis of NS5B or, eventually , E1 is used for accurate genotype and subtype determination

• Direct sequence analysis of the 5’UTR can be used in clinical practice.


TRUGENE® HCV 5’NC Genotyping (Siemens)

• One-step RT-PCR generating a 244-bp fragment

• PCR products are sequenced in both senses

• Forward and reverse sequences are aligned with prototype reference strain sequences from the GeneLibrarian database

• The HCV genotype is determined by sequence homology

Young et al., J Clin Microbil, 1993; 31: 882-86; Roos et al., J Cli Microbiol, 2000; 38(10): 3581-84; Germer et al., J Clin Microbiol, 2003; 41(10): 4855-577


• Pros– Reference method for HCV genotype and subtype

determination– Can be used, with the appropriate target region, for

. Identification of new subtypes

. Molecular epidemiology studies

– Assays are available for use in clinical practice

• Cons– Mixed genotype infections are not detected– Labor intensive and time-consuming– Costly

Analyse Après S équen çage DirectStratégie diagnostique & suivi virologique

• Line probe assay

• Based on reverse hybridization of PCR products onto genotype-specific probes

• Two generations of assays– 1st-generation assay: probes in the 5’UTR – 2nd-generation assay: probes in the 5’UTR and

core region

Hybridation InverseStratégie diagnostique & suivi virologique

Versant® HCV Genotype 2.0 Assay (INNO-LiPA)VersantVersant®® HCV Genotype 2.0 Assay HCV Genotype 2.0 Assay (INNO(INNO--LiPA)LiPA)


• Pros– Easy to use and potential semi-automation (Auto-

LiPA)– Cheaper – Mixed genotype infections can be detected

• Cons– Should not be used for identification of new

subtypes or molecular epidemiology studies because of possible mis-subtyping


Hybridation Inverse

Intérêts de la Détermination du Sous-Type ?IntIntéérrêts de la Dêts de la Déétermination du termination du SousSous--Type ?Type ?

• DAA drugs may have different antiviral efficacies on different HCV genotype 1 subtypes in vitro and in vivo

• DAA drugs administration may be associated with different resistance profiles with different HCV genotype 1 subtypes in vitro and in vivo


Activité Antivirale Sous-Type Dépendant

• BILB 1941, an NNI inhibitor of HCV RNA-dependent RNA polymerase, showed better antiviral efficacy in HCV subtype 1b than in subtype 1a

– In vitro, EC50s: 84 nM in subtype 1a vs 153 nM in subtype 1b

– In vivo, over 5 days of administration in HCV-infected patients

Erhardt et al., Antivir Ther 2009, 14: 23-32.


Profil de Résistance Sous-Type Dépendant

• HCV genotype 1 subtype-specific resistance to telaprevir – In vitro, R155K substitutions are selected only in genotype

1a replicons– In vivo, amino acid substitutions at positions 36 and 155 are

selected only in patients infected with subtype 1a

• HCV genotype 1 subtype-specific fitness of variants resistant to HCV-796– In patients infected with subtype 1b, the C316Y substitution

is found alone in fit resistant variants– In patients infected with subtype 1a, the C316Y substitution

requires additional substitutions to gain full fitness

Kieffer et al., hepatology 2007, 46: 631-639; Sarrazin et al., Gastroenterology 2007, 132: 1767-1777;; Delano et al., 1st International Workshop on HepC Resistance and New Compounds 2006; McCown et al., Antimicrob Agents Chemother 2009.


Importance de la Région Virale pour la Détermination du Sous-typeImportance de la RImportance de la Réégion Virale gion Virale pour la Dpour la Déétermination du Soustermination du Sous--typetype

Chevaliez et al., PLoS One 2009, 4(12): e820.

1st Generation of Line Probe Assay

(LiPA 1.0)

2nd Generation of Line Probe Assay

(LiPA 2.0)

RealTime HCV Genotype II

Sequence Analysis of the 5’NCR

GT 1a(n=237)

GT 1b(n=263)

77.6%(n=184)

90.5%(n=238)

70.5%(n=167)

91.3%(n=240)

97.5%(n=231)

96.2%(n=253)

93.2%(n=220)

88.6%(n=233)


Intérêts des "Nouveaux" Tests Sérologiques ?IntIntéérrêts des "Nouveaux" êts des "Nouveaux" Tests Tests SSéérologiques ?rologiques ?

• Détection - quantification de l’antigène de capside (AgC)

• Test de détection des antigènes et des anticorps (combo)


Antigène de Capside : Marqueur Indirect de la Réplication Virale

Bouvier-Alias et al., Hepatology 2002, 36(1): 211-218.

r = 0.92; p < 0.0001


Intérêts de la Détection-Quantification de l’Ag de Capside• Diagnostic de l’infection virale C

– Marqueur sérologique précoce. Réduction de la fenêtre sérologique à environ 20 jours. Génotype-indépendant

– Facile à mettre en œuvre, rapide, bon marché (ELISA automatisée)

– Trousse commerciale

• Décision de traiter et Monitoring de l’efficacité du traitement – Marqueur indirect de la réplication virale

. 1 pg d’Ag C ≈ 8 000 UI/mL ARN

– Alternative aux méthodes moléculaires de quantification de l’ARN– Seuil de quantification équivalent à 20 000 UI/mL d’ARN

Bouvier-Alias et al., Hepatology 2002, 36(1): 211-218; Mehdi et al., Clin Biochem. 2008, 41(18):1493.


Détection Simultanée Ag/Ac (Test Combo)• Diagnostic de l’infection virale C

– Réduction de la fenêtre sérologique (~20 jours). ~60 jours avec les dernières générations de trousses anticorps. ~40 jours ave les trousses Combo

– Alternative aux méthodes de DGV– Facile à mettre en œuvre, rapide (ELISA automatisé)– Trousses commerciales

– Pas aussi sensible que les méthodes qualitative de détection de l’ARN et de détection de l’Ag de capside

Laperche et al. J Clin Micribiol 2005, 43(8): 3877-3883; Alzahrani AJ., J Med Virol 2008, 80(4): 603-6.


Virus de l’Hépatite CIII. Diagnostic Virologique

Virus de l’Hépatite CIII. Diagnostic Virologique

Diagnostic de l’Infection AiguëDiagnostic de lDiagnostic de l’’Infection AiguInfection Aiguëë

Ac anti-VHC

-

-

+

+

ARN VHC*

-

+

-

+

* Technique sensible seuil de détection ≤ 10-15 UI/mL

Diagnostic

Absence d’infection aiguë

Infection aiguë C

Probablement pas d’infection aiguë

Difficile de conclure


• Facteurs supplémentaires à prendre en compte chez des populations à risque

– Niveaux de charges virales

– Variation de la charge virale 4 et 10 semaines après la suspicion de l’hépatite aiguë

– Activité sérique des transaminases

McGovern et al., CID 2009, 49: 1051-1060.


Diagnostic de l’Infection AiguëDiagnostic de lDiagnostic de l’’Infection AiguInfection Aiguëë

Algorithme pour le Diagnostic de l’Hépatite Aiguë*

*population à risque (IDVU)

Suspicion d’hépatite aiguë

SéroconversionARN VHC

< 5Log10 UI/mLFluctuations ARN>1 Log10 UI/mL

Fluctuations ARN<1 Log10 UI/mL

ouARN VHC

> 5 Log10 UI/mL

Hépatite aiguëProbabilité

élevée

ALAT> 7xLSN ALAT> 7xLSN

Probabilitémodérée

Probabilitéfaible

McGovern et al., CID 2009, 49: 1051-1060.


Diagnostic de l’Infection ChroniqueDiagnostic de lDiagnostic de l’’Infection ChroniqueInfection Chronique

– Détection des anticorps anti-VHC totaux par ELISA

– Recherche d ’ARN du VHC par un test sensible*

– Détection d ’ARN du VHC* si le test ELISA est n égatif chez des patients h émodialysés ou immunod éprim és

* Technique sensible seuil de détection ≤ 10-15 UI/mL


Virus de l’Hépatite CIII. Prise en Charge Thérapeutique

Virus de l’Hépatite CIII. Prise en Charge Thérapeutique

Intérêts des Tests Virologiques en ThérapeutiqueIntIntéérrêts des Tests Virologiques en êts des Tests Virologiques en ThThéérapeutiquerapeutique

Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20.

– Décision de traiter

– Optimisation du sch éma thérapeutique

– Etude de la réponse virologique au traitement


Classification des PatientsClassification des PatientsClassification des Patients

Type1

Types2, 3

Types4, 5, 6

Génotypes VHC

Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20


Indications Actuelles du TraitementIndications Actuelles du TraitementIndications Actuelles du Traitement

• Patients infectés par un VHC de génotype 1– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)– Durée : 48 semaines

• Patients infectés par un VHC de génotype 2/3– Interferon pégylé plus ribavirine (800 mg/j)– Durée : 24 semaines

• Patients infectés par une VHC de génotype 4, 5 et 6– Interferon pégylé plus ribavirine (1000 - 1400 mg/j)– Durée : 48 semaines


Consensus conference: treatment of hepatitis C; 2002, Gastroenterol Clin Biol, 26(2): B303-20

Génotype VHC

VHC-1 (4,5,6)Quantification ARN

VHC-2,3

Bithérapie24 semaines

Ribavirine 800 mg

Bithérapie48 semaines

Ribavirine 1000-1400 mg

Quantification ARN à S12

Diminution < 2 Log Diminution ≥ 2 Log ARN VHC +

Arrêt traitementpoursuite avec

IFN pégylé pour ralentir la

progression de la maladie

hépatique

Poursuite jusqu’àS24

Si ARN VHC -Poursuite jusqu’à

S48

diminution ≥ 2 Log ARN VHC -

Poursuite jusqu’àS48

Optimisation du Traitement en Fonction de la Réponse VirologiqueOptimisation du Traitement en Optimisation du Traitement en Fonction de la RFonction de la Rééponse Virologiqueponse Virologique

• Outils virologiques sensibles– Sensibilité : 10-15 UI/mL– Evaluation de la réponse au traitement

• Répondeurs virologiques rapides– Raccourcissement de la durée de traitement

• Répondeurs virologiques précoces partiels– Allongement de la durée de traitement


Raccourcissement de la Durée de Traitement

Réponses aux Semaines 4 et 12 : Facteur Pronostique de la RVS

RVR à S4 Absence de RVP à S24

Martinot-Peignoux et al., Ant Therapy 2009, 14: 501-511.

(n=62)

(n=221)(n=125)

(n=228) (n=62)

(n=221)(n=125)

(n=228)


AlbIFN 1200µg/2s + RBV 1000-1200 mg/j (n=78)AlbIFN 900µg/2s + RBV 1000-1200 mg/j (n=96)PegIFN alpha-2a 180µg/s + RBV 1000-1200 mg/j (n=98)

AlbIFN 1200µg/4s + RBV 1000-1200 mg/j (n=96)

Neumannet al., J Hepatol 2009, 51: 21-28.

RRééponses aux Semaines 2 et 4 : ponses aux Semaines 2 et 4 : Facteur Pronostique de la RVSFacteur Pronostique de la RVS


Réduction de l’ARN du VHC à J2 : Facteur Pronostique de la RVS

ΔΔΔΔ(to-t2) Log ARN VHC

N°°°° de patients

RVS Pas de RVS VPP (%) VPN (%)

Cutoff à 2,5 88 54

>2,5 29 4

≤2,5 38 48

Cutoff à 0,8 67 95

>0,8 66 32

≤0,8 1 20

Durante-Mangoni et al., Clin Infect Dis 2009, 49: 498-506.


Importance de la RVRImportance de la RVRImportance de la RVR

• Analyse rétrospective de patients infectés par un VHC de génotype 1 traités pendant 48 semaines par pegIFN alfa-2a + RBV (N = 453)

ARN VHC PositifÀ S24

4 12 24Semaine ARN négatif

91

66

45

2

Ferenci P, et al. J Hepatol. 2005;43:425-433.

20

40

60

80

100

RV

S (

%)

0


Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : GTraitement Court : Géénotype 1notype 1

• Patients par un VHC de g énotype 1

– ARN VHC < 600,000 IU/ml

– PegIFN-α2b + ribavirine

– 24 semaines de traitement

– Comparaison des données obtenus avec les résultats de l’étude pivot (Mann et al., Lancet 2001)

Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.


Traitement Court : Génotype 1Traitement Court : GTraitement Court : Géénotype 1notype 1

Zeuzem et al., J Hepatol 2006;44:97-103.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Week 4 Week 12 Week 24

24 weeks24 weeks

48 weeks48 weeks(Mann et al., (Mann et al., 2001)2001)

Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml)Time to first negative HCV RNA (< 50 IU/ml)

% S

VR

% S

VR


Jensen et al., Hepatology 2006;43:954-960

Traitement court : Génotype 1Traitement court : GTraitement court : Géénotype 1notype 1

0

20

40

60

80

100

% d

e R

VS

% d

e R

VS

PegPeg--IFN alpha 2a 180 IFN alpha 2a 180 µµg/semaine + RBV 800 ou 1000g/semaine + RBV 800 ou 1000--1200 mg/j1200 mg/j

ARN VHC > 50 UI/mL à S4

2424--DFDF

2424--DSDS

4848--DFDF

4848--DSDS

73%

89% 88% 91%

ARN VHC < 50 UI/mL à S4

44%

23%35%

16%


Shiffman et al., EASL 2006.

Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : GEtude ACCELERATE : Géénotypes 2/3notypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Génotype 2 Génotype 3

16 semaines24 semaines%

RV

S%

RV

S

p=<0.0001p=<0.0001 p=0.1565p=0.1565

65%

82%

65%71%

Rapid virological responseRapid virological responseHCV RNA < 50 IU/ml at week 4HCV RNA < 50 IU/ml at week 4

No rapid virological responseNo rapid virological responseHCV RNA HCV RNA ≥≥≥≥≥≥≥≥ 50 IU/ml at week 450 IU/ml at week 4

Etude ACCELERATE : Génotypes 2/3Etude ACCELERATE : GEtude ACCELERATE : Géénotypes 2/3notypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

Shiffman et al., EASL 2006.

0102030405060708090

100

16 semaines24 semaines

0102030405060708090

100

82%90%

27%

49%

SVR rate SVR rate

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

14 weeks14 weeks

24 weeks24 weeks

% S

usta

ined

viro

logi

cal r

espo

nse

% S

usta

ined

viro

logi

cal r

espo

nse

Dalgard et al., Hepatology 2008;47:35-42

RVR (HCV RNA < 50 IU/ml at week 4)

93%84%

Genotype 2 Genotype 3

92%97%

Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : GTraitement court : Géénotypes 2/3notypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

PegIFN-αααα2b

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

12 weeks12 weeks

24 weeks24 weeks

% S

usta

ined

viro

logi

cal r

espo

nse

% S

usta

ined

viro

logi

cal r

espo

nse

Lagging et al., Hepatology 2008;47:1837-45.

71%71%

91%91%

RVR

62%62%

41%41%

120120 111111 6868 7171

No RVR

PegIFN-αααα2a

Traitement court : Génotypes 2/3Traitement court : GTraitement court : Géénotypes 2/3notypes 2/3Stratégie diagnostique & suivi virologique

NN

• Durée de traitement de 6 mois chez tous les patients avec une RVR ind épendamment du génotype

• Raccourcissement de la durée de traitement à 12 ou 16 semaines chez les patients infectés par une g énotype 2/3 avec un ARN ind étectable à S1 ou S2 (?)

RésuméRRéésumsumééStratégie diagnostique & suivi virologique

Allongement de la Durée de Traitement

Traitement Long : Génotypes 2/3Traitement Long : GTraitement Long : Géénotypes 2/3notypes 2/3

• Older age

• Male gender

• High BMI

• Fibrosis ≥≥≥≥ F3


Génotype 1 : Traitement LongGGéénotype 1 : Traitement Longnotype 1 : Traitement Long

010

20

30

40

50

60

70

80

90

100

48 weeks(n=230)

72 weeks(n=225)

53% 54%% S

VR

Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97


0

20

40

60

80

100

% d

e R

VP

NSNS NSNS

NSNS

P<0.05P<0.05

S 4 S 12 S 4 S 12

ARN VHC < 50 UI/mlARN VHC < 50 UI/ml ARN VHC ARN VHC ≥≥≥≥≥≥≥≥ 50 UI/ml50 UI/ml

Berg et al., Gastroenterology 2006;130:1086-97

48 semaines

72 semaines

Génotype 1 : Traitement LongGGéénotype 1 : Traitement Longnotype 1 : Traitement LongStratégie diagnostique & suivi virologique

RésuméRRéésumsumééStratégie diagnostique & suivi virologique

• Allongement de la durée de traitement à72 semaines am éliore la RVS :

– Chez les patients avec une RVP partielle

– Chez les non-répondeurs à un premier traitement par une bi-thétrapie standard qui sont retraités

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