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ACNBH
ODPC N
1495
DECLARATION D’INTERET DANS LE CADRE DE MISSIONS DE FORMATION
REALISEES POUR L’ACNBH
XXème Journée du COL.BVH Les infections urinaires
Paris 19 juin 2015
Aucun conflit d’Intérêt
Pré analytique Critique
Processus Analytique Complexe
Ensemencement manuel– ensemenceur
Cytologie microscope -automatisée
Examen microscopique coloration manuelle - colorateur
Lecture des milieux de culture (24h, 48h)
Dénombrement bactérien
Identification : galerie- automate milieu liquide-SM
Antibiogramme: milieu liquide-milieu solide
Post analytique Compétence d’un biologiste qualifié
Résultat validé,
interprété communiqué
Patient
Processus ECBU
SH INF 50
ECBU=BA1+BA2+BA3+BA5+BA6
Domaine Biologie Médicale Sous domaine Microbiologie Famille Bactériologie BACTH
Examen de biologie Médicale (EBM)
et NABM
Code 5201: ECBU
Code 0219: Cytologie urinaire
Code 0214 : Identification d’une bactérie
Code 0269: Antibiogramme d’une bactérie
Accréditation Microbiologie 1 Les référentiels et les outils
La norme ISO EN 15189, les SH REF 02, 04, 08 (opposables)
SH GTA 04, SH GT 06
SH FORM 43
SH INF 50
Publications - documents fournisseurs
Matière première
Respect des conditions préanalytiques
(Prescription, recueil, délai d’ acheminement , conservation,
critères d’acceptation, renseignements
Cliniques) Enregistrement
Conservation des souches
Matériel
Raccordement métrologique
Vérifications / Validations Réactifs et consommables,
PSM, microscope, automates, colorateur
Connexions automates-SIL Gestion du SIL
Méthode
Respect des Instructions Inoculum standardisé
Durée d’incubation Dénombrement
Identification Interface J0/J1/J2 CIQ/EEQ
Réalisation et interprétation des d’antibiogrammes
Echantillon primaire Rapport d’analyse
Satisfaction du client Milieu
Consignes de sécurité, Environnement de travail
(température d’ambiance
Stockage des réactifs)
Main d’œuvre
Qualification, Formation Habilitation
Réhabilitation Evaluation
Maintien des compétences Communication- Conseil
2 ANALYSE DES RISQUES EN MICROBIOLOGIE
Préanalytique Analytique Post analytique
Indice de criticité (Ic) A chaque risque identifié: attribution d’un indice de criticité Ic permettant de prioriser les actions à réaliser en fonction de la valeur Ic.
Fréquence (F) = 1 < 1 an, 2 2x/an, 3 >3/an
Gravité (G)= 1 (sans incidence), 2 (incidence probable), ou 3 (incidence certaine)
Détectabilité (D)= 1 (facilement détectable), 2 (détection possible), ou 3 (indétectable)
Ic= F x G x D
3) Phase Pré analytique: CRITIQUE 1)Prescriptions
Identito-vigilance, grossesse en cours, TT ATB ou ATF
Signes cliniques d’infection urinaire: fièvre, frissons, douleurs fosses lombaires
Notion d’hospitalisation récente, vie en institution, anomalie fonctionnelle ou anatomique (sonde de Bricker, ID,..)
Patient ambulatoire: grille de questions pertinentes, confiées au patient
Mode de recueil: miction de 1er jet, milieu de jet, SAD, sondage, dispositif collecteur (poche collecteur, collecteur pénien, urétérostomie, KT sus pubien à demeure)
Urgence
Phase Pré analytique 2)Prélèvements
Méthode et dispositif adapté à l’âge et au patient
Désinfection adaptée
Tube de prélèvement(s) avec ou sans conservateur/ niveau remplissage
manuel de prélèvement, fiches d’instructions préleveurs, fiches d’informations aux patients, bon de prescription
Traçabilité des RC obtenus
Phase Pré analytique: 3)Conservation -Transport au laboratoire
Respecter les délais et températures de conservation avant analyse
Heure de prélèvement
2 h Température ambiante (15-25°C) et 24h entre 2-8°C (SC)
48 h sur conservateur (AB) ?
Niveau de remplissage (AB)
Prestation Conseil
Maitrise et Evaluation des récipients
4) Phase analytique Cytologie urinaire M/A
Examen microscopique après coloration Gram
Ensemencement M/A sur gélose chromogène, BCP, GS, durée incubation-Dénombrement bactérien
Identification bactérienne
Antibiogramme D/A
Dossier de Vérification des méthodes (Portée A)
Dossier de Vérification de Méthode
DEFINIR CES OBJECTIFS Cytologie automatisée (MA):
Vérifier les données fournisseurs, standardisation , résultats plus reproductible qu’une technique manuelle
Absence de différence d’interprétation de l’ECBU entre les méthodes utilisées (surtout autour du seuil décisionnel 10 GB/µL)
Concordance clinique (méthodes avec des seuils ≠) Cytologie microscope (MM)
Variation cliniquement non significative des résultats inter opérateur
Evaluation des discordances inter opérateurs autour de la valeur seuil décisionnelle
Sous-processus
Cytologie Modalités de vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Cytologie automatisée:
Hématies et
Leucocytes
Quantitatif
Répétabilité E Essai sur site
Fidélité intermédiaire E CIQ fournisseur / commercialisé
Variabilité inter-opérateurs Non Adapté
Justesse Non adapté sauf si (CIQ externalisé)
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes E A évaluer autour du seuil ou à
calculer CIQ+EEQ
Etendue de mesure B Qualification (données fournisseurs)
Comparaison de méthodes E
Méthode précédente /miroir/ Back up
+ analyse des discordances et
interprétation avec la culture
Interférences E Essai sur site
Contamination E Essai sur site
Robustesse et fiabilité des
réactifs Non pertinent portée A
Intervalle de référence B Valeurs seuils automate
SH FORM 43
Sous-processus
Cytologie Modalités de vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Cytologie
automatisée: Cylindres,
cellules,
cristaux, ,
bactéries
Qualitatif
Répétabilité Non pertinent (sauf qualification de
l’automate)
Fidélité intermédiaire Pas de CIQ
Variabilité inter-opérateurs Non Adapté
Justesse Non adapté
Exactitude Pas d’ EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes Analyse de la Maitrise des risques
Etendue de mesure B Qualification (données
fournisseurs)
Comparaison de méthodes E Méthode précédente /miroir/ Back
up + analyse des discordances
Interférences E Essais sur site
Contamination E Essais sur site
Robustesse et fiabilité des
réactifs Non pertinent
Intervalle de référence B Valeurs seuils automate
SH FORM 43
Sous-processus
Cytologie Modalités de
vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Cytologie
Microscope
Répétabilité
Fidélité intermédiaire
Variabilité inter-
opérateurs E
Essai sur échantillons, CIQ
commercialisé
Justesse Non adapté
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes E Evaluation Inter opérateur autour de la
valeur seuil
Etendue de mesure Non pertinent portée A
Comparaison de
méthodes E
Méthode précédente /miroir/ Back up +
analyse des discordances et
interprétation avec la culture et SC
Interférences Non adapté
Contamination X Instruction -Habilitation Personnel
Robustesse et fiabilité des
réactifs Non pertinent portée A
Intervalle de référence Non pertinent
QUAMIC:
Qualitatif
n
échantillons
Opérateur 1
GB/µl POS >10 NEG <10 Total
Opérateur 2 POS > 10 a b n1.
NEG < 10 c d n2.
Total n.1 n.2 n
Qualitatif: Comparaison 2 opérateurs
Sous-processus
Cytologie Modalités de
vérification : Eléments à vérifier (argumentation)
Cytologie
Microscope
Répétabilité E GR et GB
Fidélité intermédiaire
Variabilité inter-opérateurs E Echantillons, CIQ commercialisé
Justesse Non adapté
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes E Evaluation Inter opérateur autour
de la valeur seuil
Etendue de mesure Non pertinent portée A
Comparaison de méthodes E
Méthode précédente /miroir/ Back
up + analyse des discordances et
interprétation avec la culture et SC
Interférences Non adapté
Contamination +/- Habilitation Personnel
Robustesse et fiabilité des
réactifs Non pertinent portée A
Intervalle de référence Non pertinent
CH
Valenciennes
Quantitatif: GR/GB
Quantitatif : Variabilité Inter-opérateurs
SHGTA04
Comparaison de la variabilité inter opérateurs (CV) et celui d’un référent (CV de la répétabilité) Un rapport proche de 1= bonne concordance entre les opérateurs (robustesse)
Analyse de la variance appliquée aux résultats obtenus par n opérateurs (test Anova)
40 échantillons sélectionnés GB situés entre 8 et 15 éléments/µl -Comparaison technique 1 et 2 -Comparaison opérateur 1 et 2
Technique Manuelle
GB<10/µl GB≥10/µl Echantillons
Méthode
automatisée
GB<10/µl
20 7 27
GB≥10/µl
5 12 17
Echantillons
25 19 44
Discordance inter techniques = 27% Discordance Interopérateurs = 26%
Zone d’incertitude (zone grise) entre 8 et 10 GB/µL
Détermination d’une zone d’incertitude autour de la valeur seuil 10 GB/µL CHV
Dossier de Vérification de Méthode
DEFINIR CES OBJECTIFS Ensemencement et culture
Utilisation des milieux de culture : adaptés au patient, cytologie (gélose chromogène, BCP, GS),
Respects des durées et atmosphère d’incubation Obtention de colonies bien différenciées Variation non significative du dénombrement inter opérateur
(log)
Identification et Antibiogramme Inoculum mono microbien et standardiser Absence de discordances dans l’Interprétation des ATBg
(S,I,R)
Sous-processus Modalités de vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Ensemencement
et culture
Méthode
manuelle
Qualitatif
Répétabilité
Fidélité intermédiaire
Variabilité inter-opérateurs XXX Essai sur site (dénombrement
Log)
Justesse Non adapté
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B
Doc fournisseurs, bibliographie,
REMIC
Incertitudes Analyse de la Maitrise des risques
Etendue de mesure Non pertinent
Comparaison de méthodes E si ensemenceur
Interférences Non adapté
Contamination X Habilitation Personnel PSM
Robustesse et fiabilité des
réactifs Non pertinent portée A
Intervalle de référence B Seuils cliniques REMIC
Sous-processus Modalités de vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Identification (Automate,
galeries, SM..)
Qualitatif
Répétabilité Non pertinent (sauf qualification)
Fidélité intermédiaire E CIQ Souches ATCC
Variabilité inter-opérateurs Non pertinent
Justesse Non adapté
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes Analyse de la Maitrise des risques
Etendue de mesure Non adapté
Comparaison de méthodes E Autre méthode /Back up
Interférences Non adapté
Contamination xx Pureté de la culture
Robustesse et fiabilité des
réactifs E
Essai sur site (milieux, âge des
cultures)
Intervalle de référence
Non adapté
Sous-processus Modalités de vérification :
Eléments à vérifier (argumentation)
Antibiogramme
Méthode
Diffusion
Répétabilité Non pertinent
Fidélité intermédiaire E CIQ souches ATCC
Variabilité inter-opérateurs E Essai sur site
Justesse Non adapté
Exactitude E Résultat EEQ
Sensibilité et spécificité
analytique B Bibliographie
Incertitudes Maitrise des risques: Inoculum,
harmonisation des Interprétations
Etendue de mesure Non adapté en diffusion
Comparaison de méthodes E Technique automate ou CMI/
interprétation des discordances et
CAT
Interférences Non adapté
Contamination X Pureté de la culture
Robustesse et fiabilité des
réactifs E Essai sur site (âge des cultures)
Intervalle de référence B CASFM EUCAST de l’année
5) Phase post analytique
Vérification des données saisies en mode manuel Validation biologique de tous les résultats avant diffusion (partiels et
complets)
Interprétation des résultats en fonction: Terrain, âge, Signes cliniques Non-conformité pré analytique (délai d’acheminement) Leucocyturie /bactériurie/microorganismes (« zone grise») Antibiogramme CASFM- EUCAST 2014 : amox-clav cystite Cc =32 mg/l,
BMR Harmonisation des interprétations par les biologistes habilités
Prestation Conseil Maîtrise de la diffusion des CR: Papier- Serveur-Fax-Tel
Contrôle de coloration (Gram) lames préparées ou commercialisées G+/G-/
Cytologie urinaire Automatisée (fournisseurs, CIQ externalisé): encadrer les séries/ période
probatoire/av et ap maintenance (aiguille/calibration) Microscope :CIQ, comparaison inter opérateur Comparaison MA/MM sur échantillon avec des critères de concordance cliniques
Ensemenceur CIQ fournisseur ou CIQ externe (à 10
3 UFC/ml )
Milieux de culture Certificat de conformité des lots/fiches de stress
Identification et antibiogramme Souches ATCC ou de référence (E coli, S Saprophyticus a minima)
Préconisation fournisseur, adapter à l’ensemble des méthodes Intégrer test d’orientation CIQ du système d‘ajustement de l’inoculum Souches phénotypes sauvages et résistants, BLSE+
CAT en cas de CIQ Non Conforme/ ré analysé/ Etude d’impact/ courrier clinicien etc ..
6) Contrôles Internes de qualité
7) Evaluation Externe de la Qualité
Choisir un OCIL adapté aux techniques utilisées (groupe des pairs) Un EEQ peut contrôler plusieurs méthodes partageant le même point critique
Un EEQ peut partager plusieurs points critiques
AGLAE ASSOCIATION BIOLOGIE PRATICIENNE ASQUALAB BIOLOGIE PROSPECTIVE CTCB COLBVH EUROCELL ONERBA PROTOCOLES NATIONAUX
Utiliser les EEQ dans le suivi et le maintien des compétences
CAT en cas d’anomalie des résultats des EEQ (Formaliser et tracer les mesures prises en cas de résultats discordants).
CONCLUSION Identifier et maîtriser les risques à chaque étape du
processus
DV: Définir des objectifs simples, pertinents et utiles
Méthode automatisée: maitrise de l’automate, en connaitre ces limites et définir des CAT adaptées.
Méthode manuelle: variabilité inter opérateur
Prioriser l’interprétation et le conseil clinique en fonction des résultats analytiques ET des conditions Préanalytiques
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