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jean-paul-nguessan
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I-PRINCIPAUX CARACTRESBACTRIOLOGIQUES
ANTIBIOGRAMME DE STAPHYLOCOCCUS AUREUSPr KOUASSI M BENGUE A
E.D. coloration de Gram
Cocci Gram positif Aro anarobie facultatif, non exigeant Catalase +, oxydase , , , Coagulase, dgradation du mannitol, novobiocine. Milieux slectifs: Chapman, Baird Parker
Culture sur milieu solide
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OBJECTIFSA la fin de cet expos, l apprenant sera capable de raliser et d interpreter les rsultats d un antibiogramme de S.aureus
I-POUVOIR PATHOGNE PRLVEMENTSInfections communautaires et nosocomiales Infections cutanomuqueuses (folliculite, furonculose, anthrax) f l h ) Septicmies Intoxications alimentaires Infections urinaires2
Pus divers Hmoculture Prlvements nasaux Prlvements cutans Urines LCR Aliments
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DEROULEMENTI-GENERALITES II-TECHNIQUES DE L ANTIBIOGRAMME III-INTERPRETATIONS
I-HISTORIQUE DES RESISTANCES194: apparition des premires souches de S.aureus rsistantes la pnicilline 196: apparition des souches rsistantes la mthicilline 199 : Souches de sensibilit intermdiaire la vancomycine SARM et rsistances associes aux aminosides, macrolides, fluoroquinolones. 200 :Plus rcemment caractrisation de souches de SARM, virulentes, responsables dinfections communautaires.
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II-ANTIBIOTIQUES TESTERBtalactamines:Pnicilline G Oxacilline 5g
II-PHNOTYPESMcanismePhnotype sauvage Pnicillinase (rare) Modification de PLP2a gne mecA (cible)BORSA Pase hyperproduite Souches borderline 7 MODSA Modif. PLP (non 2a) Absence de Pase
DE RSISTANCE AUX
BTALACTAMINESPnicilline G Pnicilline A Carbox/ Urido ATB + inhibiteur de Pnicilline M btalactamase Cphalosporines Carbapnmes
Aminosides:Kanamycine Amikacine Gentamicine
Macrolides LincosaminesStreptogramines (MLS)
Autres: Ofloxacine Acide fusidique Chloramphnicol Ttracyclines/Minocyclines Cotrimoxazole Fosfomycine
S R R
S S R
S S R
S S R
Erythromycine au milieu pour Lincomycine Pristinamycine
dtecter R inductible au MLSb)
(
Cefoxitine: pour rechercher la rsistance loxacilline Novobiocine: diagnostic Compos vibriostatique O129: diagnostic
Glycopeptides (Vancomycine 30g) Rifampicine 5g
R
R
R
S
S
S
r
S
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II-TEST DE SENSIBILIT AUXANTIBIOTIQUES(TECHNIQUESTANDARDISE
NORMES NCCLS)
ATTENTION:PLP = enzymes de synthse constituants paroi,4 PLP chez S.aureus, si meti R ajout PLP2a faible affinit pour B lactamines Meti-R par modification PLP2a peut tre homogne ou hterogne ( sous-population dans zone inhibition) Meti-R8
Antibiogramme ppt ditMilieu: Mueller Hinton 30c ou hypersal (2-4%) 37c Inoculum: 0,5 Mc Farland ( dilution 1/10 du d 05 MC) Disques dantibiotiques (cf liste) Incubation : 24h 48h si croissance faible (oxacilline) Interprtation: valeurs critiques Contrle de qualit: S.aureus ATCC 25923
Tests complmentaires Screening test loxacilline Recherche de la PLP2a Dtermination de la CMI Recherche de la pnicillinase: en cas de problme dinterprtation lATBgramme Recherche de la rsistance aux glycopeptides.
rpond pour toutes les b-lactamines11
ATTENTIONDetection avec un disque de Peni G:
STAPHYLOCOQUESET BTALACTAMINES
-Absence de Pnicillinase si diamtre>30mm , et la bordure de la zone d inhibition est floue (zone fantme) -Presence de Pnicillinase si bordure nette avec colonies de grande taille en bordure ,quelque soit diamtre d inhibition (squater)
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RECHERCHE DE LA MTHICILLINO-RSISTANCETechnique Test la cefoxitine (30g) Screening test MRSA-Antibiogramme -MH -0,5 Mc Farland -MH 4% NaCl -Oxacilline 6g/ml -0 5 Mc Farland 0,5 -Ensemencement / spot -Agglutination
Contrle de qualitS.aureus ATCC 25923
ObservationNormes NCCLS: : R si 19mm CASFM R si 25mm Culture= rsistant
S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43300 S.aureus S aureus ATCC 43866 (Tmoins) Contrle selon Kit
II-STAPHYLOCOQUESET MACROLIDES
Recherche de la PLP2a CMI loxacilline Recherche du gne mec A
Technique rapide, recommande en cas de diagnostic durgence et ou dinfection grave. (tmoin) Technique de rfrence Obligatoire pour la confirmation des SCN MetiR. Trs sensible, rapide. Pas 13 toujours une expression phnotypique 16
-MH 2% NaCl -0,5 Mc Farland PCR
S.aureus ATCC 29213
Selon technique
RECHERCHE DES MRSASCREENING TEST
PHNOTYPES DE RSISTANCE AUXMcanisme Phnotype sauvage Phnotype Sensible ErythroAzithromycine
MACROLIDESSA (SB) S S S S R S (R) R S Pristina S S S S ? ? S/R S17
Linco Clinda S S R R s/R S S/I/R S S S R s S S S/I/R S
S R R S S S S R
Souche tester
Modification MLSb inductible de la cible MLSb constitutiveS.aureus ATCC 43866
S.aureus ATCC 29213
Tmoin S.aureus ATCC 43300Screening test
Inactivation enzymatique
L LSa Sa
Efflux14
LSa E
RECHERCHE DES MRSA RECHERCHE DE LA PLP2A
S.AUREUS MLSB INDUCTIBLE
Antagonisme (E-linco)
Souche MRSA +
Souche MRSA -
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S.AUREUS MLSB CONSTITUTIVE
RGLES GNRALES DINTERPRTATION LANTIBIOGRAMMEANTIBIOTIQUES Btalactamines: Pnicilline G (rare) Oxacilline OBSERVATIONS
DE
Rponse valable pour: pnicilline A, carboxy et urido-pnicilline Rsistance croise toutes les btalactamines Rponse valable pour lazithromycine Rponse valable pour la lincomycine * Rponse valable pour les synergistines Rsistance dexpression faible in vitro, tenir compte du diamtre de la kanamycine Rsistance croise tous les aminosides utiliss en thrapeutique Tout diamtre