ARN VIHARN VIH

0 1 2 3 4 5 6 7 8Semaines

p24p24AgAg IgMIgM

IgG

22ème Géné 1988 (P. recombinantes ) Géné 1988 (P. recombinantes )

33ème Géné 1989 Géné 1989

Fenêtre sérologiqueFenêtre sérologique

11ère Géné 1985 (viral lysat) Géné 1985 (viral lysat)

44ème Géné ou Géné ou T. combiné 1997T. combiné 1997

Sensitivité des différentes générations tests de dépistage

99,5 à 99,6 % moins bonne que les tests de détection d’anticorps

- Gürtler et al., J. Virol. Methods. 1998Gürtler et al., J. Virol. Methods. 1998

- Weber et al., J. Clin. Microbiol. 1998Weber et al., J. Clin. Microbiol. 1998

- Ly et al., J. Clin. Microbiol. 2000Ly et al., J. Clin. Microbiol. 2000

Problème de Spécificité des premiers tests combinés

Les tests combinés apparus entre 1997 et 2000 présentent un seuil Les tests combinés apparus entre 1997 et 2000 présentent un seuil de détection élevé par rapport au test d’antigène p24de détection élevé par rapport au test d’antigène p24

- Laperche et al., Transfus Clin Biol. 2000Laperche et al., Transfus Clin Biol. 2000

- Ly et al., Ly et al., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20012001

- Weber, B. 2003. AIDSWeber, B. 2003. AIDS

Problème de Sensitivité des premiers tests combinés

Sensitivité de la détection d’Ag p24Sensitivité de la détection d’Ag p24

L. de détectionTests combinés VIH (pg d'Ag VIH/ml)

Vidas HIV Duo 1998 65Enzygnost HIV Integral 1998 110

Virognostika HIV Uniform II Ag/Ab 1998 150

Genscreen Ag/Ab Plus 2000 140

Trousses d'Ag p24 < 20

Genetic System HIV-1 Ag 8Innotest HIV Ag mAb 9.3

HIV p24 Core 14.2

Coulter HIV p24 Ag 15.7

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

VIDAS HIV DUO / 3VIDAS HIV DUO / 3rdrd Gen EIA Gen EIA pos/pos pos/pos pos/negpos/neg neg/pos neg/pos 453 160 42453 160 42

Western blot positifWestern blot positif 449 449 0 0 0 0

p24Ag positif p24Ag positif 17 17

Suivi Western blot positifSuivi Western blot positif 4/4 17/17 4/4 17/17 0 0

29 002 négatifs17/470 (3.6%) VIH infection détectée par VIDAS HIV DUO17/470 (3.6%) VIH infection détectée par VIDAS HIV DUO

Spécificité VIDAS Duo : 99.51% ;

Spécificité 33èmeèmeGen EIAGen EIA : 99.85%

Ly et al, Journal of Clinical Microbiology, 2000 “ Contribution of combined detection assays of p24 antigen and anti-human immunodeficiency virus (HIV) antibodies in diagnosis of primary HIV infection by routine testing. ”

• 5 laboratoires• 29 657 échantillons 3ème génération et VIDAS HIV DUO

Séroprévalence élevée Population : 1.6%Séroprévalence élevée Population : 1.6%

Abbott Ab assayAb assayAb assay Microplate

2001 Combo assay Microplate2002 Combo assay2004 Combo assay Microplate

Bayer (2005) Ab assaybioMérieux Ab assay Microplate

Combo assay Microplate2004 Combo assay2004 Combo assay

Bio-Rad Ab assayAb assay Microplate

2005 Combo assay MicroplateBiotest Ab assay MicroplateDade Ab assay MicroplateBehring 2006 Combo assay MicroplateOrtho Ab assay MicroplateRoche 2004 Combo assayAdaltis 2006 Combo assay Microplate

Centaur EHIV Automate

Genscreen HIV Ag/Ab UltraBiotest anti-HIV Tetra ELISA

Vidas HIV DUO Quick AutomateVidas HIV DUO Ultra Automate

Vironostika HIV Uniform II plus O 3.3Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

Access HIV1/2 New ; DXi AutomateGenscreen HIV1/2 Version 2

IMX HIV1/2 plus AutomateAxsym HIV1/2 gO Automate

Axsym HIV1/2 Combo AutomateArchitect HIV 1/2 Combo Automate

Murex HIV ComboMurex HIV 1.2.O

Detect HIV v.4Modular HIV combi or Elecsys Automate

Enzygnost anti-HIV1/2 plusEnzygnost HIV Integral IIVitros anti HIV1/2 Automate

20 tests de dépistage ELISA disponibles en Europe 200820 tests de dépistage ELISA disponibles en Europe 2008

Ly et al.Ly et al. J. Virol. Methods 2007J. Virol. Methods 2007

Could the new HIV combined p24 antigen and antibody (Ag/Ab) Could the new HIV combined p24 antigen and antibody (Ag/Ab) assays replace p24 antigen specific assays ?assays replace p24 antigen specific assays ?

1998 Microplaque Behring1998 Microplaque bioMérieux2000 Microplaque Bio-Rad 2001 Microplaque Abbott2002 Abbott2001 Roche2004 Roche2004 bioMérieux2004 bioMérieux2004 Abbott2005 Microplaque Bio-Rad

Vidas HIV DUO Ultra AutomateARCHITECT HIV 1/2 Combo AutomateGenscreen HIV Ag/Ab Ultra

Axsym HIV1/2 Combo AutomateCobas Core HIV combi AutomateModular HIV combi AutomateVidas HIV DUO Quick Automate

Enzygnost HIV IntegralVironostika HIV Uniform II Ag/AbGenscreen HIV Ag/Ab PlusMurex HIV Combo

1996 Microplate Ortho1998 Microplate Bio-Rad

HIV1/2 Ortho Capture ELISAGenscreen HIV1/2 Version 2

Année C.E. Initiale Répétable Initiale Répétable

ARCHITECT HIV Combo 2004 1 0 99.9 100

Genscreen Plus HIV Ag/Ab 2000 1 1 99.9 99.9

Genscreen Ag/Ab HIV Ultra 2005 3 2 99.7 99.8

AxSYM HIV Ag/Ab Combo 2002 2 2 99.8 99.8

Modular HIV Combi 2003 4 3 99.6 99.7

Enzygnost HIV Integral 1997 4 3 99.6 99.7

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab 1997 28 4 97.21 99.6

Murex HIV Ag/Ab Combo 2000 5 4 99.5 99.6

VIDAS HIV DUO Ultra 2005 12 5 98.8 99.5

VIDAS HIV DUO 1998 13 5 98.7 99.5

Cobas HIV Combi 2001 7 6 99.3 99.4

Ortho HIV1/HIV2 Ab Capture 1995 0 0 100 100

Genscreen HIV1/2 version 2 1995 19 6 98.1 99.4

Nombre de faux positifs Spécificité (% )

Tests combis ou 4ème gééeration 

3ème génération

SpécificitéSpécificité1 005 échantillons négatives en VIH provenant de 4 laboratoires privés français

Sensitivité analytique: Limite de détection d’Ag VIH-1 Sensitivité analytique: Limite de détection d’Ag VIH-1

Limite deDisponible détection (pg VIH/ml)

1998 160

1998 150

2000 140

2001 29

2002 21

2001 29

2004 126.5

2004 18

2004 13

2004 11.5

2005 13

Tests Ag p24 < 20Genetic System HIV-1 Ag 8

Innotest HIV Ag mAb 9.3HIV p24 Core 14.2

Coulter HIV p24 Ag 15.7

Tests combinéEnzygnost HIV IntegralVironostika HIV Uniform II Ag/AbGenscreen HIV Ag/Ab Plus

Architect HIV 1/2 Combo

Genscreen HIV Ag/Ab Ultra

Murex HIV ComboAxsym HIV1/2 Combo Cobas Core HIV combi Modular HIV combi or Elecsys

Vidas HIV DUO Quick Vidas HIV DUO Ultra

(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)(panel d’Ag VIH SFTS : LAI sous-type B)

Panel BBI PRA 801Panel BBI PRA 801

- - pgpg VIH/mlVIH/ml (panel de référence française SFTS ou Afssaps)(panel de référence française SFTS ou Afssaps)

- - pg pg p24/mlp24/ml (DuPont)(DuPont)

- - mIUmIU/ml /ml (W.H.O: Worth Health Organization)(W.H.O: Worth Health Organization)

x 3,6x 3,6

Standard SFTS DuPont W.H.OTests Combinés pg VIH/ml pg p24/ml mIU /ml VIDAS HIV DUO Ultra 11.5 3.4 42.6 VIDAS HIV DUO Quick 13 4.1 53.9

Genscreen HIV Ag/Ab Ultra 13 4 51.2 Architect HIV 1/2 Combo 18 5.4 67.7

Modular HIV combi or Elecsys 126.5 32.1 373.2

Limite détection d'Ag HIV avec BBI PRA 801 panel

Sensitivité cliniqueSensitivité clinique

23 VIH-1 Seroconversion Panels23 VIH-1 Seroconversion Panels

9 panels BBI :• 923, 932, 941, 944, 952, 953, 954, 957, 958,

11 panels de NABI :• SV-0251, 261, 281, 321, 331, 371, 401, 404, 4888,

37748, 122399,

3 panels de BCP :• 9013, 9016, 6243

Ag p24 Ag p24

IgMIgM

IgG

Test d’anticorpsou 3ème génération

Test combinéou 4ème génération

11 22 33

0 1 2 3 4 5 6 7 8Semaines

Importance du choix des panels de séroconversionImportance du choix des panels de séroconversion

dans l’évaluation des tests Combinésdans l’évaluation des tests Combinés

Retard par jours en moyenne vis à vis de PCR

10.25

10

9.37

8.78

8.29

8.09

7.76

6.78

6.17

5.78

5.5

5.17

5.13

5

4.04

2 4 6 8 10 12

5 – 6 jours

0

PCRPCR

< 2000

2004

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

Enzygnost HIV Integral

Genscreen HIV 1/2 v2

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

VIDAS HIV DUO

Modular HIV Combi

Murex HIV Ag/Ab Combo

Cobas Core HIV Combi

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

Genscreen HIV Ultra

ARCHITECT HIV Combo

Coulter HIV-1 Ag

VIDAS Ultro Quick

VIDAS DUO Ultra

Format MicroplaqueDaysDaysClassic Method: Maximum delay methodClassic Method: Maximum delay method

Detect HIV v.4

2004-

2005

< 20 pg/ml

2001-

2002

< 30 pg/ml

6.81

6.6

6.25

6.15

5.17

4.73

4.05

4.09

3.86

3.48

3.35

3.04

2.83

2.74

2.35

0 1 2 3 4 5 6 7 8

PCRPCR

JourJour

3.5 – 4.5 3.5 – 4.5 jours jours

Paul Erhlich Institut (PEI) calculation method (negative + 1 day)

20042004--

20052005

20012001--

20022002

< 2000< 2000

20042004

Ortho HIV-1/HIV-2 Ab Capture

Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

Enzygnost HIV Integral

Genscreen HIV 1/2 v2

Genscreen Plus HIV Ag/Ab Combo

VIDAS HIV DUO

Modular HIV Combi

Murex HIV Ag/Ab Combo

Cobas Core HIV Combi

AxSYM HIV Ag/Ab Combo

Genscreen HIV Ultra

ARCHITECT HIV Combo

Coulter HIV-1 Ag

VIDAS Ultro Quick

VIDAS DUO Ultra

Microplate format

Retard par jours en moyenne vis à vis de PCR

Jour PCR p24 Genscreen Ortho Genscreen Genscreen Architect AxSYM Muerx Vidas Vidas Vidas Modular Cobas

BCP Prism Vs,2 Capture Ultra Plus Combo Combo Combo Ultra Quick Duo Combo Combo9 017 s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co s/co

1 1 pos 0.98 0.18 0.24 0.10 0.21 0.71 0.41 0.46 1(Ag) 0.92 0.27 0.08 0.32 4 pos 0.36 0.38 0.34 0.10 0.31 0.18 0.43 0.32 0.36 0.68 0.16 0.10 0.223 8 pos 0.29 1.03 0.43 0.20 0.55 0.08 0.71 0.4 0.36 0.52 0.08 0.10 0.234 11 pos 0.30 1.78 1.42 0.40 0.87 0.08 0.62 0.45 0.36 0.68 0.12 0.10 0.25 15 pos 0.25 4.89 3.52 1.10 1.29 0.11 0.72 0.61 0.40 0.68 0.08 0.14 0.476 18 pos 0.31 7.77 4.95 6.00 1.66 0.16 0.68 0.42 0.56 0.76 0.20 0.56 0.497 22 pos 0.54 19.66 10.41 > 11,9 4.64 0.53 1.45 0.63 0.72 0.88 0.80 2.71 0.488 25 pos

0.89 17,37 7.11 > 11,9 13.25

1,21 2.09 1.01 1,08(Ag1,84(Ab)

1,92 4,08

10,77 0.58

9 29 pos 1.91 18,15 9.59 > 11,9 18.88

2,22 3.06 1.24

1,68(Ag)3,68(Ab)

3,16 10,16

41,46 1.11

10 33 pos 2.14 21,5 12.87 > 11,9 19.23

3,86 nt nt

1,28(Ag)5,96(Ab)

4,64 25,78

93,74 1.27

11 36 pos 1.54 22.46 14.32 > 11,9 > 4.48 4.08 1.86 6.88 4.65 33.12 123.8 1.56

Organon Enzygnost

Ag/Ab Integrals/co s/co

0,39 0,10

0,46 0,10

0,38 0,10

0,45 0,10

0,54 0,10

0,56 0,10

0,68 0,20

0,76 0,45

1,01 2,391,26 3,70

1,69 5,86

Sensibilité de la détection des anticorps: Panel BCP 9017

Ratio (s/co)Ratio (s/co) == > 1 : Positif - > 1 : Positif - < 0,9 : Négatif< 0,9 : Négatif

Importance de la qualité des anticorps Importance de la qualité des anticorps monoclonaux utilisés dans les trousses pour la monoclonaux utilisés dans les trousses pour la

détection d’Ag p24. détection d’Ag p24.

Tersmette et al., Tersmette et al., VirologyVirology, 1989, 1989 “Detection and subtyping of HIV-1 isolates with “Detection and subtyping of HIV-1 isolates with

a panel of characterized monoclonal antibodies to HIV p24 gag”a panel of characterized monoclonal antibodies to HIV p24 gag” : : problème de problème de détection d’Ag p24 avec les anticorps monoclonaux sur certaines détection d’Ag p24 avec les anticorps monoclonaux sur certaines souches virales.souches virales.

Maniez et al, Spectra biologie, 1997Maniez et al, Spectra biologie, 1997 « Évaluation des trousses de dépistage de « Évaluation des trousses de dépistage de

l’Ag p24 du VIH »:l’Ag p24 du VIH »: 7 trousses d’Ag p24 avec 7 trousses d’Ag p24 avec problème de sensibilité vis-problème de sensibilité vis-à-vis de certaines souches VIH-1.à-vis de certaines souches VIH-1.

31 surnageants de culture de sous-types VIH-1: 1 A; 8 CRF01_AE (circulating recombinant ); 7 B; 5 C;3 D; 3 F; 1 G; 1 O; et 2 CRF02_AG

Chaque surnagent ayant 4 concentrations différentes titrées avec la trousse Innotest HIV Antigen (Innogenetics):

4 - 24 pg VIH /ml

10 - 75

22 - 150

61 - 356

Diversité du VIHDiversité du VIHConséquences pour la détection d’Ag p24Conséquences pour la détection d’Ag p24

0102030405060708090

100110120130140150160170180190200210220230240250260270280290300

A r chit ect A xsym M ur ex V idas U lt r a V idas M odular C obas G en scr een

U lt r a

G en scr een

A AG B1 B2 B3 B4 B5 B6 B7 C1 C2 C3 C4 C5 D1 D2 D3 AE1 AE2 AE3

AE4 AE5 AE6 AE7 AE8 G F1 F2 F3 O

ArcitectArcitect AxSymAxSym MurexMurex Vidas UltraVidas Ultra ModularModular CobasCobas Genscreen Genscreen UltraUltra

Vidas DuoVidas Duo Genscreen Genscreen PlusPlus

6,6-41,26,6-41,2 15,2-11015,2-110 12-72,712-72,7 6,3-83,56,3-83,5 29,2-45629,2-456 86,9-280,786,9-280,7 29,7-234,529,7-234,542,3-> 50042,3-> 5007,3-180,77,3-180,7

18,0 23 29 11,5 65 126,5 29 13 140,0

Limite de détection de l’Ag VIH avec 31 panels d’AgLimite de détection de l’Ag VIH avec 31 panels d’Ag

SFTS

Sensibilité de détection des anticorps anti-VIH-1/2 chez les patients infectés dans différentes régions du monde (n=669)(n=669)

553 échantillons VIH-1-M :

113 sous-type A: Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

75 sous-type B: Brésil, Cameroun,Thaïlande, Afrique du Sud, Grande Bretagne, France

71 sous-type C: Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

40 sous-type D: Cameroun, Afrique du Sud, Uganda, Grande Bretagne, France

11 sous-type F: Argentine, Brésil, Cameroun, France

9 sous-type G: Cameroun, Ghana,

83 CRF01-AE: Thaïlande

92 CRF01-AG: Cameroun, Grande Bretagne

59 Mosaïques : Argentine, Brésil ,Cameroun, Ghana, Uganda, Grande Bretagne, France

6 échantillons VIH-1-O (France, USA, Espagne, Cameroun: ESP2, 08692A, ABB009/96, ABB141/98, Ess, Rue)

110 échantillons VIH-2 (Afrique de l’Ouest)

HIV-1 M n Architect Axsym Murex VIDAS VIDAS Modular Cobas Genscreen Genscreen Vironostika Enzygnost Genscreen O rtho Ab

(Sous-type) 669 Combo Combo Combo Ultra Duo Combi Combi Ultra Plus Ag/Ab integral version 2 Capture

A 113 113 113 113 113 113 113 113 113 113 113 113 113 113

B 75 75 75 75 75 75 75 75 75 74 75 75 75 75

C 71 71 71 71 71 71 71 71 71 71 71 70 71 71

D 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40

F 11 11 11 11 11 10 11 11 11 11 11 11 11 11

G 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

CRF01-AE 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83 83

CRF01-AG 92 92 92 92 92 92 92 92 92 92 92 92 92 92

Mosaic 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59

HIV-1 O 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 5 6

HIV-2 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110 110

Résultats des 669 VIH échantillons positives Tests combinés Tests d'anticorps

VIDAS DUO VIDAS DUO 1 VIH-1 sous-type F, 1 VIH-1 sous-type F,

Genscreen v.2Genscreen v.2 1 VIH-1 groupe O, 1 VIH-1 groupe O,

EnzygnostEnzygnost 1 VIH-1 sous-type C 1 VIH-1 sous-type C

Genscreen PlusGenscreen Plus 1 VIH-1 sous-type B 1 VIH-1 sous-type BÉchantillons pré-séroconversionsÉchantillons pré-séroconversions

Nouveaux tests Combinés apparus après 2000Nouveaux tests Combinés apparus après 2000

Spécificité:Spécificité: nette amélioration trouvée dans certains tests nette amélioration trouvée dans certains tests

Sensibilité de détection d’Ag:Sensibilité de détection d’Ag: nette amélioration. nette amélioration.

Presque tous ont un seuil de détection inférieur à 50 pg VIH/ml Presque tous ont un seuil de détection inférieur à 50 pg VIH/ml

Problème de détection d’Ag des différents sous types VIH-1Problème de détection d’Ag des différents sous types VIH-1

Sensibilité de détection d’Ac: Sensibilité de détection d’Ac: peut être moins bonne dans la peut être moins bonne dans la détection des taux très faiblesdétection des taux très faibles

Lyon Ivry-Paris Total %Western blot 3918 4335 8253 100Positif VIH-1 1130 1612 2742 33,2Positif VIH-2 6 60 66 0,8Indeterminé 24 87 111 1,3Négatif 2758 2576 5334 64.63%Ag positif 25 46 71

Biomnis

Biomnis: Paris et Lyon Août 2007-juillet 2008

Conséquence de Recommandation HAS sur 20 tests de dépistage Conséquence de Recommandation HAS sur 20 tests de dépistage ELISAELISA

Abbott Ab assayAb assayAb assay Microplate

2001 Combo assay Microplate2002 Combo assay2004 Combo assay

Bayer (2005) Ab assaybioMérieux Ab assay Microplate

Combo assay Microplate2004 Combo assay2004 Combo assay

Bio-Rad Ab assayAb assay Microplate

2005 Combo assay MicroplateBiotest Ab assay MicroplateDade Ab assay MicroplateBehring 2006 Combo assay MicroplateOrtho Ab assayRoche 2004 Combo assayAdaltis 2006 Combo assay Microplate

Centaur EHIV Automate

Genscreen HIV Ag/Ab UltraBiotest anti-HIV Tetra ELISA

Vidas HIV DUO Quick AutomateVidas HIV DUO Ultra Automate

Vironostika HIV Uniform II plus O 3.3Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab

Access HIV1/2 New ; DXi AutomateGenscreen HIV1/2 Version 2

IMX HIV1/2 plus AutomateAxsym HIV1/2 gO Automate

Axsym HIV1/2 Combo AutomateArchitect HIV 1/2 Combo Automate

Murex HIV ComboMurex HIV 1.2.O

Detect HIV v.4Modular HIV combi or Elecsys Automate

Enzygnost anti-HIV1/2 plusEnzygnost HIV Integral IIVitros anti HIV1/2 Automate

Seuil de détection de l’Ag VIH-1Seuil de détection de l’Ag VIH-1SFTS (souche LAI sous-type Bsouche LAI sous-type B)

Vidas Duo Ultra 11,5 pg VIH/ml

Vidas Duo Quick 13

Genscreen Ultra HIV Ag/Ab 13

Architect HIV ½ Combo 18

Axsym HIV Combo 21

Murex HIV Ag/Ab Combo 29

Detect HIV (v.4) 31 19,5

Modular HIV Combi 126,5

Enzygnost HIV Integral II < 50 ? 23 version 1

Vironostika Uniform II Ag/Ab 150 50 ? version 2006

Existence d’une variabilité du seuil de détection Existence d’une variabilité du seuil de détection d’Ag p24 d’un lot à lot des tests combinés ? d’Ag p24 d’un lot à lot des tests combinés ?

Architect Combo : < 50 pg/mlArchitect Combo : < 50 pg/ml

Rôle de l’Afssaps dans l’application de la recommandation HAS ?

-- Liste officielle des tests combinés

- Contrôle des lots : fabricants ou Afssaps ?

RemerciementsRemerciementsS. Laperche, INTS

S. Gonzalo, Biomnis Lyon

A. Bianchi, Laboratoire Départemental de Bondy

B. Lécolier (CEF)

J. Lupu (Centre Suchet, Paris)

J.Y. Mascart, AJ Morvan (Laboratoire Morvan Mascart, Paimpol)

J.P. Tréguier, JJ Lemoine (Laboratoire Tréguier Lemoine, Lannion)

S. Devare, P. Leroux, C. Brennan, (Abbott Laboratories)

L. Santucci, J.M. Jego, S. Gadelle, (Bio-Rad Laboratories)

O. Paour, (BioMérieux)

T. Vidalenc, B. Studer (Dade Behring)

F. Eberle, (Roche Diagnostics Laboratories)