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GASTROENTEROL CLIN BIOL, 2009, 33 A127

CO.60 Profil d’expression des microARNs dans unmodèle murin de carcinogenèse pancréa-tique

M Chalret du Rieu (1), J Torrisani (1), J Selves (1), T AlSaati (1), M Dufresne (1), N Carrère (1), L Buscail (1), PCordelier (1)(1) Toulouse.

Introduction : Le cancer du pancréas reste un véritable pro-blème de santé publique en partie à cause de l’absence demarqueurs moléculaires précoces. Les microARNs sont desARN non codant de petite taille dont la fonction est deréguler l’expression génique au niveau transcriptionnel etpost-transcriptionnel. Le profil d’expression des microARNspermet de distinguer les tissus cancéreux, dont l’adéno-carcinome pancréatique, des tissus sains et adjacents nontumoraux. Cependant, leur expression au cours de la carcino-génèse n’est pas connue à ce jour. Aussi, nous avons étudiéle profil d’expression de microARNs connus pour être impli-qués dans la prolifération des cellules tumorales dans unmodèle murin de carcinogénèse pancréatique.

Matériels et Méthodes : Les souris utilisées dans cetteétude expriment dès le stade embryonnaire une copie dugène KRAS activé dans le pancréas. Les tissus ont étéobtenus par capture laser avec contrôle anatomopathologiquesystématique. Après purification des ARN totaux, l’expres-sion des microARNs candidats a été étudiée par RTPCRquantitative en temps réel, et quantifiée en fonction l’expres-sion des gènes U6, 5S et actine.

Résultats : Nous avons obtenu après microdissection un totalde 30 prélèvements comprenant 12 structures pancréatiquesnormales (6 canaux, 3 acini, 3 îlots de Langerhans), 6 lésionsPanIN1A (dont 2 issues de foyers de métaplasie acino-cana-laire ou MAC), 7 lésions PanIN1B (dont 3 issues de foyersde MAC), 3 lésions PanIN2, et 1 lésion PanIn3. Nous avonspurifié l’ARN dans 100 % des cas. Nous avons mesuré sanséchec d’amplification l’expression de let-7a1 (inhibiteur deKRAS et de la prolifération cellulaire), miR-21 (anti-apopto-tique), miR221 et miR-222 (pro-angiogénique), miR-29c(régulation de l’épigénome). Nos résultats démontrent quel’expression de miR-21 est augmentée de 14 fois dès le stadePanIN1A jusqu’au stade PanIN2 par rapport aux canaux pan-créatiques normaux. Au contraire, l’expression de miR-222est diminuée de 2,5 fois. Enfin, l’expression de let-7a1, miR-29c et miR-221 reste inchangée. MiR-21 est retrouvé élevédans des lignées cellulaires dérivées de cancer pancréatiquehumain (n = 4) par rapport à une lignée ductale normale, etdans des adénocarcinomes pancréatiques humains par rapportau tissu adjacent (n = 5).

Conclusion : Cette étude est à notre connaissance la pre-mière décrivant l’expression des microARNs dans deslésions pré-cancéreuses pancréatiques microdisséquées.Ainsi, nous avons mis en évidence la surexpression dumicroARN antiapoptotique miR-21 dès le stade PanIN1A.Cette surexpression a été retrouvée dans des échantillonshumains d’adénocarcinome pancréatiques (lignées cellu-laires, tissus). En conclusion, miR-21 se présente comme unmarqueur moléculaire précoce potentiel de la carcinogénèsepancréatique.

Remerciements, financements, autres : Ce projet est financépar l’Association de la Recherche contre le Cancer.

CO.61 Cancer du pancréas familial (CaPaFa) :prévalence des mutations des gènesCDKN2A, CDK4 et BRCA2 et résultats préli-minaires du dépistage par imagerie dessujets apparentés

P Hammel (1), N Soufir (2), P Lévy (1), C Colas (2), FCoulet (2), A Guého (2), A Riffaut (2), F Maire (1), VRebours (1), O Hentic-Dhomé (1), A Aubert (1), FSoubrier (2), B Grandchamp (2), D Vidaud (1), PRuszniewski (1)(1) Clichy-sur-Seine ; (2) Paris.

But : Environ 5 % des cancers du pancréas (CaPa) sontfamiliaux (CaPaFa). Deux principaux gènes de prédisposi-tion ont été identifiés : CDKN2A, impliqué également dans lemélanome familial, et BRCA2 principalement dans la prédis-position héréditaire au cancer du sein. La gravité de cettetumeur justifie un dépistage précoce chez les sujets à hautrisque.

Buts de l’étude : évaluer prospectivement a) la prévalencedes anomalies de CDKN2A, CDK4 et BRCA2 dans une sériefrançaise de familles CaPaFa (≥ 2 sujets atteints de CaPaapparentés au 1er ou 2ème degré) ; b) l’intérêt du dépistage parl’imagerie (TDM, IRM +/– échoendoscopie) chez les appa-rentés non atteints.

Patients et Méthodes : 24 familles atteintes de CaPa (21familles avec 2 CaPa, 3 familles avec 3 CaPa) ont eu uneconsultation d’oncogénétique dédiée. Un prélèvement géné-tique (après recueil d’un consentement éclairé) était réalisédans les 14 familles pour lesquelles un cas index était encorevivant. Les 4 exons du gène CDKN2A (1α,1β, 2 et 3) etl’exon 2 du gène CDK4 ont été séquencés dans 13 cas. Deplus, une recherche de délétion de CDKN2A a été réaliséepar MLPA dans 12 cas. Une recherche de mutation et degrand réarrangement du gène BRCA2 a été réalisée dans10 cas. Pour les 10 familles dont les membres CaPa étaientdécédés, seul un dépistage par imagerie (scanographie,IRM +/– échoendoscopie) était proposé.

Résultats : Des anomalies génétiques ont été trouvées chezdeux proposants sur 14 : 1) un variant non-synonyme deCDKN2A c.430 C > T, p.R144C (famille avec 2 pts CaPa).Ce variant, situé dans le 4ème domaine ankyrine de la pro-téine, était absent de 200 ADN contrôles et prédit affecter lafonction de la protéine (programmes Sift et Polyphen).L’analyse de ségrégation est en cours ; 2) une mutation nonsens de BRCA2 c.373G > T (p.Glu49X) (famille avec 2 CaPa+ 1 apparentée 1er degré avec cancer du sein), qui avait déjàété décrite au préalable dans une famille prédisposée aucancer du sein. Il n’y avait aucun cas de délétion CDKN2Ani de mutation CDK4. Parmi les 9 apparentés de 6 famillesayant déjà eu un dépistage par imagerie, 4 avaient lésionskystiques des canaux 2aires ; deux ont été opérés et avaientune TIPMP en dysplasie de bas grade.

Conclusion : 1) des anomalies des gènes CDKN2A ouBRCA2 ont été trouvées dans 20 % des familles, soulignantl’importance de la consultation d’oncogénétique dans lesrares cas de CaPaFa ; 2) des lésions précancéreuses de typeTIPMP peuvent être dépistées chez les apparentés.

Remerciements, financements, autres : Remerciements auClub Français du Pancréas.