Comment utiliser l’antibiogramme afin de faire un meilleur usage

des antibiotiques?

Olivia Labrecque, DMV, MSc, DES, Dipl. ACVM Julie-Hélène Fairbrother, DMV, MSc, DES, Dipl. ACVM

Marie Archambault, DMV, MSc, PhD, Dipl. ACVM

Conférence AVIA, 15 mai 2018

Introduction

�  L'antibiogramme est la méthode analytique qui permet de définir in vitro la sensibilité d'une souche bactérienne aux divers antibiotiques

Bases théoriques de l'antibiogramme

Un germe est dit résistant quand il est capable de supporter une concentration d'antibiotique notablement plus élevée que celle qu'il est possible d'atteindre dans l’animal

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Méthode utilisée couramment au Québec pour la détermination de la sensibilité bactérienne •  Au diagnostic: méthode

de diffusion sur gélose •  En recherche: méthode de

dilution (en bouillon ou gélose)

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Méthode au laboratoire �  Deux groupes de méthodes:

�  Dilution

�  Diffusion �  Les deux sont aussi sûres, conditions très standardisées

(souche pure, milieu de culture, inoculum, tableau de lecture)

CMI

Méthode de microdilution Sensititre 0,5 McFarland

dans 5 ml d’eau distillée

Mettre 50 ul dans 10 ml de Mueller-Hinton cation-adjusted

Bien mélanger et inoculer 50 ul par puits d’une plaque de Sensititre (ATB lyophilisés)

Lecture après 24h d’incubation

18 à 23 antibiotiques: Ampicilline, Ceftriaxone Ciprofloxacine, Clindamycine Daptomycine, Érythromycine Gatifloxacine, Gentamicine Lévofloxacine, Linézolide Oxacilline, Pénicilline Quinupristine/dalfopristine Rifampicine, Streptomycine Tétracycline, Vancomycine Trimethoprime/sulfa.

=

2 ug/ml

128ug/ml

256ug/ml

Méthode de dilution

Ct+ Ct-

-

-

+

2 4 8 16 32 64 128 256

Ampicilline (ug/ml)

CMI= 128 ug/ml

Méthode de dilution

Concentration Minimale Inhibitrice (CMI)

On expose la souche bactérienne à diverses concentrations de chacun des antibiotiques

On détermine la plus faible concentration capable d'inhiber la croissance de la souche

(concentration minimale inhibitrice ou CMI)

MÉTHODES DE DILUTION �  CMI: Série de dilutions de l’antibiotique ; «Breakpoint»:

qqles dilutions

�  Disponible pour la recherche via le Dr John Fairbrother (labo ECL)

�  Avantages: �  Résultats quantitatifs ou semi-quantitatifs �  Possibilité de lecture automatisée �  Flexibilité dans le choix des plaques (ATB) par espèce

animale

�  Désavantages: �  Couteux: 15 à 25$/plaque sans le temps technique �  Planification requise car commande de matériel nécessaire �  Formation technique avec le sensititre �  Analyse des données/rapports (étudiants cycles supérieurs)

MÉTHODES DE DIFFUSION

�  Largement utilisées (Kirby-Bauer)

�  Pour les bactéries à croissance rapide

�  Résultats qualitatifs: � Sensible

� Limite (Intermédiaire)

� Résistant

*Corrélation directe entre CMI et zone de diffusion

Méthode de diffusion

0,5 McFarland dans 5 ml d’eau distillée

Inoculer une Mueller-Hinton avec sang (Streptococcus spp., Pasteurella spp. et Mannheimia spp.) ou sans sang (autres bactéries), chocolat (APP)

Lecture après 18-24h ou 20-24h d’incubation avec ou sans CO2

Méthode de diffusion

Mueller-Hinton

Culture pure Identification nécessaire

Distributeur à disques d’antibiotiques

Pseudomonas aeruginosa

*Corrélation directe entre CMI et zone de diffusion

‘Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)’

Choix des antibiotiques

� Nombre limité de disques (n=12) par gélose

�  Routine: généralement, un seul représentant de groupe d’antibiotiques apparentés ayant un spectre d’action semblable et des réactions croisées prévisibles et dont l’interprétation des résultats s’applique aux autres

� Utilisation homologuée pour l’espèce animale concernée

�  Demande spéciale sur la requête

�  Recommandation du CLSI (groupes)

Antibiotiques Porc Volaille

Ampicilline R R

Apramycine R (Tiamuline)

Ceftiofur R R

Enrofloxacine R R

Florfénicol R

Gentamicine R R

Néomycine R (Tulathromycine) R

Pénicilline R R

Spectinomycine R R

Tétracycline R R

Triméthoprime-Sulfas R R

Colistine (non-visible) Clindamycine Erythromycine Sulfisoxazole

R (Tilmicosine) R R R

Méthode de diffusion �  Avantages:

�  Résultats qualitatifs faciles à comprendre �  Possibilité de lecture semi-automatisée (Biomic!) �  Excellente flexibilité dans le choix des antibiotiques �  Rapide (labo. plus rapide qu’avant? MALDI-ToF) �  Peu couteux

�  Désavantages: �  Lecture manuelle avec règle (long, biais) �  Pas quantitatif (souche plus ou moins résistante/

sensible?) � Biomic?

Lignes directrices et limites des antibiogrammes

Le ‘Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)’ publie des standards (lignes directrices) pour plusieurs bactéries envers plusieurs antibiotiques mais pas

pour tout!

• Certains antibiogrammes ne peuvent pas être fait car il n’y a aucune ligne directrice…

L’antibiogramme est un test de laboratoire qui essaie de prédire le résultat de l’effet de l’antibiotique

sur la bactérie dans l’animal…

• Cette prédiction n’est pas toujours parfaite et demande votre interprétation…

Questions?

Suite avec Olivia Labrecque et Julie-Hélène Fairbrother