Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II

11 Juillet 2006

Stéphanie COCHAUD

Curriculum Vitae

2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B

2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie.

Parcours : Biologie Moléculaire et Génétique. Mention B

2003-2004 : Licence Physiologie, Biologie Cellulaire et Moléculaire. Mention B

2001-2003 : DEUG Sciences de la Vie. Mention B

Stages réalisés :

Master 1: Laboratoire des Biomembranes et signalisation (CNRS-UMR 6187)

Pôle Biologie Santé, POITIERS

Master 2 : Laboratoire Interactions et communications cellulaires (CNRS-UMR

6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS

Stages Master 1et Master 2

Sujet de Master 1 : Régulation de l’expression de gènes de facteurs transcriptionnels lors de la différenciation des cellules

de neuroblastomes SH-SY5Y induite par le VIP.

Sujet de Master 2 : Modification de l’expression génique dans la lignée cellulaire tumorale pulmonaire NCI-H157 après réexpression de la sémaphorine SEMA3F

Formation : - Culture cellulaire

- RT-PCR classique et quantitative

- Séquençage

- Immunofluorescence

- Dosage ELISA

- Western blot

Projet de recherche

Fonction anti-métastasique de KAI1/ CD82, une protéine de la famille des tétraspanines

Les tétraspanines

Forment une superfamille de protéines

Impliquées dans de nombreuses fonctions

Levy et Shoham, Physiology (2005).

La tétraspanine KAI1/CD82

Identifiée au cours de l’étude de l’activation des cellules T

Protéine ubiquitaire

Impliquée dans la cancérogénèse

Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82

Intégrine α6β1

KAI1/CD82

Intégrines β1

Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire

MMP9

Jee et al., BBRC (2006)

Baisse de l’adhérence cellulaire

He et al., J. Biol. Chem. (2005)

Src

CAS

FAK

Inhibition de la migration cellulaire

Sridhar et Miranti, Oncogene (2006)

P

P

P

Problématique

Quels sont les mécanismes intervenant dans l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ?

Les objectifs

1. Etudier in vivo l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82.

2. Déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu

Approche in vivo

Réexpression de KAI1/CD82

Cellules parentales : PC3

Clones contrôle

Clones réexprimant KAI1

pCDNA3.1-KAI1

pCDNA3.1-KAI1

(vecteur vide)

Sélection des clones par G418

Expression de KAI1 par Western blot et par FACS

Etude in vivo de la réexpreesion de KAI1

Clones réexprimant KAI1

Clones contrôle

Injection sous cutanée

Etude de la formation des métastases

Etude du volume de la tumeur

Etude de la vascularisation de la tumeur

Souris nude BALB/c

Résultats attendus

- Absence de métastases après réexpression de KAI1/CD82

- Volume tumoral inchangé après réexpression de KAI1/CD82

- Vascularisation tumorale inchangée après réexpression de KAI1/CD82

L’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ne serait pas du :

- à une activité anti-proliférative

- à une activité anti-angiogénique

Mais, en empêchant la migration et l’invasion cellulaire.

Approche in vitro

Etude de la migration cellulaire

KAI1/CD82

Intégrines β1

Src CAS

FAK

Réorganisation de l’actine (migration cellulaire)

? Perte de l’adhérence :(- test d’adhérence)(- test de migration)

P

P

P

DOCK180 CrkCAS

P

Rac-GDPRac-GTP

(Immunofluorescence)

Anticorps P5D2

Anticorps 8A2

(Immunoprécipitation)

(Pull-Down)

?

Résultats attendus

- Perte d’adhérence et perte de la migration cellulaire

- Inhibition de la voie Src/FAK/CAS/Dock 180

- Diminution de l’activité des petites protéines G

- Modifications de la morphologie cellulaire

Mise en évidence de KAI1 dans l’inactivation d’une voie de signalisation impliquée dans la migration cellulaire.

Conclusion

Utilisation de 2 approches (in vivo et in vitro)

Activité anti-métastasique de KAI1

Meilleure compréhension de KAI1

Perspectives :

Quelles sont les parties structurales nécessaires à la fonction de KAI1?

Quels sont les facteurs entraînant la perte d’expression de KAI1?

Merci de votre attention

KAI1/CD82 : un supresseur de métastases

Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82

Liu et Zhang, Cancer Letters (2006)