c i -

l; .

Contr ibut ion B l ' é t u d e de l 'Onchocercose au CAIGG?QUN:

E q u e t e séro-épidémiologique dans l a Région de TOUSORO.

D

z

André YEBAKIMA

-0. R. S .T .O .M. Entomologie' mgdiczle e t v é t é r i n a i r e

/

J a n v i e r 1977 .

b

. .

- . . . . :.

Je remercie:

, - Tout le P e r s o n n e l dus L ,abora to i r e d 'En tomolog ie m é d i c a l e e t

. v é t é r i n a i r e d e 1' O .A .S .T .O.M.-Dondy.

- Monsieur J. MOUCHET q u i m'a p r o p o s é ce s t a g e en m i l i e u h o s p i t a l i e r .

i - Monsieur ILe P r o f e s s e u r M. GENTILINI q u i .m'a a c c u e i l l i avec beauè6up ' 5

d e b i e n v e i l l a n c e d a n s s o n S e r v i c e . c

- M e s s i e u r s . D. RICHARD-LENOBLE, i4. LOISY, B. CARfJE q u i m 'ont a p p o r t é

a i d e e t c o n s e i l s pe ìmanents . ,_

I i -

. .

u Plan d'Etude: ____ -- . . . I

I- INTRODUCTION: - . .

II-, PIATERIEL d'Etude: .

III- NETHODES - d'Etude: .

A- Le Diagnostic des filarioses

'a . B- Etude Parasi tologique C- Etude Sérologique

CI. Introduction . C 2 . Les techniques appliquées h llenqugte de TOUBORO .

- L'Immunofluorescence indirecte(l.F.1.) - L'Immunodiffusion(1.D.) i

- L'Analyse immunoélectrophorétique(A.1.E.) - L'Electrosynér&se(E.S.)

IV- RESULTATS: - A- Pzrasito.logie

B-

. .

- .- - I.F.I. <

- I.D. - A.I.E. *

7 E.S. - Comparaison et Association des techniques

v- CONCLUSIOM:

Sérologie . .

- Parasitologie s. ' - Sérologie et diagnostic

-- Sérologie et enquête épiddmiologique I * - Remarques générales

VI- BIBLIOGRAPHIE: *

8

. . (k

-1-

I- INTR~GUCTION:

' C - _ r

Parmi les nombreuses endémies tropicales,les filarioses pathogènes pour 1 'homme(onchocercose,loase,banoroftose,dracunculose). occupent une place importante par leurs conséquences socio-économi- ques; on estime B 15Omillions le nombre de sujets. atteints de fîla- rioses dans le monde.

- L'onchocercose humaine,deuxikme cause nondiale de cécit6,est répan- due en Amérique latine,au Yemen .et surt0u.t en' Afrique tropicale et' 6quatoriale.Elle touche 25 B 30 riillions de personnes dans le monde, dont environ 99pour cent en Afrique. Mais on dispose encore d'enque- tes assez fragmentaires sinon inexistantes,dans certaines régions (surtout en Afrique équatoriale) pour établir un. taux d'enddmicité re'el.de cette affection.

,

.

2

Dans le cadre des accords O . C . E . A . C . - O . R . S . T . O . M . - C . H . U . . .

Pitié(Laboratoire de Parasitologie et Médecine tropicale),une étude des filarioses a ét6 entamée dans le foyer inter-Etats d'onchocer-, cose du bassin Vina-Pendé-L~gone~intéressant È j la fois le Cameroun,

La région d e TOUBORO(7~46'N;15~211S) est située dans. le département de la BENOUE(Nord Cameroun). Tous les villages prospectés so'nt situés

aux environs des principaux cours d'eau,ce qui favorise le contact .

homEP-vecteur et l'infestation onchocerquience-voir carte-; il s'agit ici. essentiellement d'une onchocercose de savane,caractdrisée par ses atteintes ocülaires plus fréquentes et'plus graves que dans' l'onchocercose de forit.

. .

'

A .

- -t . "?* .

la République'centrafricaine et le Tchad. . I c

- .

Le but des enqugtes menées dans cette région était d'apprécier la prévalence et le retentissement. socio-économique de l'endémie;

8

c

\

- . I II- MATERIEL d'Etude: . .

, . , Sur le terrain,les études entomologiques et parasitologiques'

'ont été .faites par les chercheurs de'l'O;R.S.T.O;H, (BRENGUES et LMiIZANA),les études cliniques par les médecins de 1 ' 0 , C . E . A . C . ;

Pour les études nutritionnelles et sérologiques,il a ét6 procédé 8' des ponctions de sang veineux s u r des sujets tirés au,sort chez les 3/10 des faailles examinées; la répartition selon les villages est la suivante:

Villages

I- PENDJAMA

2- TAPI

3- MBAKANA

4- BAYLARA 5- KOUMAN

6- MBIKOU%~

7- HANKAO

8- MBODO

9- BEDARA

I O - BOGDORO

II- BIDERE

12- MBUAINDE

Nombre de familles examinées

r

2 3 2

4 . 3 *

I I 4 2 '

3 I 1 .

i

Nombre de sujets. . . examinés

I 7. I5 8 2 1

I7 7 I4 20' .

. i.

. .T . '..$

J '20 21

I O

I O '

3 - 23 13- LAOUNDJOUNGUE

Total.. . . . . . . 30 203

Ainsi,204 sérums furent prélevés,acconpagnés(sauf pour un seul s6rum)d'une fiche portant les renseignements suivants: origine,sexe, âge,résultats parasitõlogiques,signes cliniques,état général; ces . - k u

sérums ont'été adressés au Service du Pr. GENTILINI, . -

L'étude que nous avons entreprise se propose de comparer'la iituation parasitologique des sujets pr&levés ,& l'étude sérologique par 4 techniques:

- 1'immunoÏluorescence indirecte. - l'inmunodiffusion. - 1 ' ~ I Y se immun0 Qlec t ropho rétique.

b

- l'électrosynér&se,cette dernibce technique. étant appliquée .pour la première fois B une enqugte séro- .épiddmiologique sur les filarioses. -

. .

- O.R.S.T.O.M. : Office de la Recherche Scientifique et Technique Outre Mer,

- O.C.E.A.C. ; Organisation de .les Endémies en Afrique Centrale.

- c

.

. . .

H.U. : Cent re Ho spi tal i er

I .

1

Coordinakion pour la

Jniversi taire.

lutte contre

t

Q

.- 4- * I

I

III- METIiODES d'ETUDE: t . . .

A- Le Diagnostic des. Filarioses: - . Pour le clinicien et l'épidémiologiste,.deux types d'arguments

interviennent dans le diagnostic des filarioses: - les arguments directs: ce sont les examens

classiques de goutte épaisse,frottis sanguin,leucocbncentration, biopsie cutanée exsangue qui conduisent B l'observation et l'identi- fication des microfilaires dans le sang ou dans le derme; mais cette observation des microfilaires est parfois défaillante(absence de microfilarémie ou autre cause). La découverte d'une filaire adulte(reptation sous la conjonctive oculaire dans le cas de Loa-loa,présence dans un kyste dans le cas d'0nchocerca volvulus),deuxi$me argument de certitude,n'est pas tou- jours possible.

c - les arguments indirects: grâce à l'essor consi- dérable de l'immunologie au cours des dernières décennies,le diagnos- tic immunologique de nombreuses parasitoses est entré dans la prati- que. La réaction immunologique en affirmant la présence d'anticorps témoins de l'infestation filarienne est d'un apport non négligeable,

5

tant en zones d'endémies qu'en dehors de celles-ci. - ¿

B- Etude Parasitologique: A partir des renseignements accompagnant chaque sérum,nous avons . -

établi la situation parasitologique des 203 sujets pr6levks.Pour ce fait nous avons retenu deux indices:

-l'indice microfilarien qui est I .....................

le nombre de porteurs de microfilaires par rapport au-nombre total des sujets examinés,multiplié par 100; cet indice est l'un des moyens les plus simples pou; apprécier l'importance d'une endémie filarien- ne dans une région donnée.

-la densité microfilarienne(ou - -__---_-__---------------- moyenne de Wil1iams)qui est la moyenne géométrique calculée sur 1' 'ensemble des sujets positifs et négatifs.

Nous avons ensuite étudié la-variation de ces indices en fonction de différents garambtres: village,$ge,sexe,etc.....

b

* .

- .

et Ac

P. H"7ey)

. .

-3- . .I

i , I 5

C- Etude Sérologique: I

a/- généralités:

La réponse immunitaire se définit classique comme étant un moyen .

de défense de l'organisme contre une infection quelconque. Le principe de toute réäction immunologique est la combinaison(sp6cifique ou non) de l'antigène et de l'anticorps,combinaison ré@ .par l'étrait rapport existant entre le site antigén'ique et le site correspondant de l'anii-

......................

corps. , On appelle antigène -------- &e substance qui,introduite dans l'organisme provoque la formation d'anticorps donnant avec elle une réaction spécifique ou non; un antigene peut également provoquer une réaction d'immunité cellulaire,mais sans anticorps décelables.

.

- On appelle anticorps --- ------ une substance dont la synthèse par l'organis-

me est provoquée par l'introduction d'un antigène. Lorsque des anti- corps sont décelables dans le sQrum,ils sont circulants.

' schéma de la réaction antigène-anticorps . '. .

. - .

b

. .

antighne et son site antigénique

ant i co rp s réaction immunologique

c

b/- Les différentes techniques utilisées .en sérologie des filarioses:

. - Les tests cutanés. . . - L e test de rosette.

!>

- La fixatian du complément. - L'hémagglutination. - L'inhibition de- la migrztio'n des leucocytes. - L'imm.unofluorescence. - Lt immunodiffusion. - L'immunoélectrophorhse. - L'électrosynérèse.

. . -

c/- Le problème des antigènes: sources et préparation. 'ìl

=i sources:

~ ~~~ ~~~~~

-6- . -.

$i 3. x-les antigènes homologues: A l'exception

d'0nchocerca volvul.us qu'on peut extraire des. nodules onchocercpiens., il est actuellement difficile' de se procurer des antigènes en quanti- té suffisante B partir de filaires ou nicrofilaires humaines. Compte tenu des communautés antigéniques existant . I entre leS.différents Nématodes(B1CUET et coll.,I964; CAPRON et coll.,I968; NIEL et coll., I972a et b;),on'a recours B des antigènes de substitution ou an,tigè- nes hétérologues.

x-les antigènes hétérologues: ce matériel peut '

etre récolté à partir::,::: . .

-des filaires dont le cycle e'st réalisable au labo- . ratoire; la p l u s anciennement . . utilisée est la filaire du chien Dirofilaria immitis(travaux de SAWADA et coll.,I962,196~).'A signaler également: Litomosoides carinii, filaire du rongeur Sigmodon ou rat coton; Dipetalonema viteae,filaire du hamster doré;

. . .

-de's filaires parasites des Bovidés: Setaria labiato-. papillosa;

-des helminthes responsables de parasitoses cosmopo- . . lites tels que Taenia solium,T.saginata,Ascaris.

De ce fait,les essais de reproduction au laboratoire du .cycle de cer- z . >, '

.? ' i

taines filaires de l'homme devraient encouragés et multipliés: ASH(L.R) ,1573: Brugia pahangi et B.malayi,sur mérion(I4eriones

unpuiculatus) ; HARBUT(C.L.),I973:B.pahangi et B.malayi sur hamster. ORIHEL et NOORE,I975: Loa-loa- sur Papio anubis et Erythrocebus

patas.

f, = préparation:

En pratique,selon les critsres d'utilisation on distingue les antig& ‘.ries solubles et les antigènes figurés.

- - * x-les antigènes solubles: -matériel parasitaire fraichement recolté ou lyophi-

lisd. -

-extraction(broyage,centrifugation,dialyse)dans des 'solutions salines ou tamponnées,constamment B de basses tempérafures,

-l'extrait est lyophilisé dans des conditioqs - _opti- -. males et stocké B l'abri de llhumiditd.

-délipiaation de l'extrait en le privant des consti- tuants non spécifiques ,responsables de nombreuses' réactions croisées.

% -

. ..

-standardisation: dosage- d'azote(6valuation pondéra-. le du taux d'azote par milligramme d'antigène.-aspect quantictatif-.

analyse immun0 élec tropho rétique de l'extrait pour Bliminer les lots défectueux.

. . x-les antigènes figurés ou corpusculaires: ce sont essentgellement des coupes d'une Qpaisseur de 5microns . ' réalisées B partir d'une filaire ou d!un fragment de celle-ci congelée B -mac. Ces coupes sont ensuite 'déposées sur des lames porte-objets '!

adaptées et constitueront le support antigénique de l a réaction im- munologique. B

-y

. ._

. .

C2. I i L IMMUNOFLUORESCENCE: a/- Principe et applications: L ' Immunofluorescence a été découverte par COONS en. I942,mais déjà en 1934 MARACK signalait que certains colorants pouvaient etre coupl'és à des anticorps sans que les propriétés de ces derniergs soient modifiées.

. . . Son principe consiste à révéler la présence d'antigènes dans une.+2;:-+i structure cellulaire ou tissulaire par ap'plication d'un antiserum spécifique 'préalablement rendu fluorescent par fixation d'un fluoro-

*

. chrome(substance qui,soumise à une source lumineuse émet une lumière de long ur 'd'onde supérieure-530 nm-à 'celle qui l'avait excitée -490 nm-); .Les deux produits les plus utilisés sont l'isothiocganate de fluore'sceine qui .donile une fluorescence verte et 1 isothiocyanate de rhodainine qui'donne une fluorescence orange. La.lecture se fait i

au microscope à U.V.; un premier filtre(excitateur)arrGte 1e.s rayons :visibies; un deuxikme,situé entre l'objectif et l'oculaire arrete

P

. .s - .?

les U.V.et laisse passer la lumière fluorescente. ..%

. i . Les premières applications de cette technique dans le diagnostic des ; . . . . . . filarioses ont ét6 faites avec des antigènes corpusculaires:

SCHILLER, 1962; LUCASSE, 1962; L U C A S S E et HOEPPLI, 1963;

MANTOVANI et SULZER, 1966;

d'antigènes filariens solubles: DUXEURRY et S'ADUN,I967. Mais toutes ces opérations sont de réalisati*on délicate et longue. et exigent un abondan> matériel parasitaire.

-microfilaires entières: CHOWDHURY et

-fragments de microfilaires ultrasonnés.:

. -disques d'acétate de cellulose impTégn6s . 2

.L.

-méthode directe: cette méthode nécessite - -

la conjugaison de chaque sérum Btudi6,donc opération longue et- délicate; Par ailleurs,cette m6thode n'e.st pas utilisable pour la recherche d'anticorps sériques.

Positive.

-méthode d’inhibitibn: le conjugué fluores- cent e s t préparé B partir d’un immunsérun spécifique de 1’an.tigkne considéré; Le sérum étudié ne joue plus le r61e de trait d’union

.- .

entre l’antigène et le composé fluorescent; si le sérum est positif, il inhibe la fixation du conjugué.

,

-méthode indirecte: le sérum et l’antigène sont mis en contact l’un et l’autre; sì le sérum est positif,cIest, 5 .

à-dire contient des anticorps “sp6cifiques11,1e complexe antigèn6- anticorps se forme; ce-complexe est ensuite mis en dvidence gr%ce au con jhgué f l u 0 re scent ant i-glo bu1 ine s .

a ---

A %

schémas in Ambroise-Thomas 19bY.

1 . -10- e i i l $ . '

1 - L

i I - I I f

Cette dernière méthode,plus sensible et plus pratique que les deux autres est actuellement la..pius employée; elle' a été améliorée 'par COUDERT et coll. ,1968;APiBROISE-THOKAS, 1969;MJLLER, 1970;GENTILINI et coll.,I972. Ces auteurs ont dévéloppé-la méthode en utilisant.des antigènes corpusculaires constitu& par les 'coupes( 5microns d 1 Qpais- seUr)à la congélation des filaires adultes. COUDERT et coll. ,1968,retrouvent en immunofluorescence indirecte contre les antigènes Dipetalonema viteae et Dirofilaria imrnitis,

;

. - 2 i

B t L une positivite de 95,Ph sur 63 sérums de filariens confirmés; ils, 1' observent que la réaction positive est caractérisée par une fluores-;

cence verte,typique de l'espace sous-cutilaire,avec moins d'inten- sité en bordure de la cavité générale; dans la réaction négative,la coupe a une coloration rouge,due aux U.V.sur le bleu d'Evans. GENTILINI e t coll. ,I972(a) ,étudient contre les antigènes D.viteae et Setaria labiatopapillosa,356 sérums de. sujets atteints de Dracun- culose confirmée et retrouvent une positivite de 9% avec l'antigène D.viteae et 97$ avec l'antigène S.labiatopapillosa. PINON et GENTI~INI,I972,suggèrent l'utilisation d'une solution de Teepol B 1% B la phase de lavage; cela améliore les résultats obtenus aYec l'antigène D.viteae et élimine les réactions croisées. Suite aux travaux de nombreux auteers,l'antigène D.viteae est le $lus utilisé dans la pratique courante: COUDERT et c o l l . , 1968; ANEROISE- THOWAS,-I969; S.TERilENO,I970; AkBROISE-THOMAS, 1972; GENTILINI et coll. I972(a et b) ; SUTER-KOP et coll., 1972; TEN-EYCK, 1973; DIESFELD et coll. , 1973. b/- Mode opératoire:

c

-fixation des coupes préparées depuis plus de 24h dans une- solution de Wolkman,B -2OYc; les lames sont plongées pendant 30 secondes puis lavées dans deux bains successifs de tampon pH7,2 pen- dant Smn et séchées.

-sur les coupes- disposées à l'intérieur de cercles gravés,<époser , -

une grosse goutte de différentes dilutions(raison 2)des sérums B Btudier( 1/100,1/200,I/400,. . . . . . .).

-laisser 30m à l'étuve(37nc). -laver les lames dans la solution de Teepol B I$opendant 5mn,

puis dans un bain de tampon pH7;2 pendant 5mn.

-

D

-égoutter soigneusement les lames en évitant un séchage complet; -répartir ur,e grosse goutte de conjugué en qsociant directe-

ment l e bleu &'Evans en solution au H/I0000; laisser agir 3cknn puis laver pendant IOmn dans &I bain de tampon pH7,Z.

-recouvrir.-chaque pnéparation-d'un6 Aamelle montée directement . a... en tampon,puis examiner au microscope(objectif x 40)..

c

i

-12- 3

. . C2.2: LIIMNUNODIFFUSION:

. . , I

. . a/- Principe et applications: .

Cette technique dérive ,de l'immunodiffusion en tubes décrite'par J.OUDIN(Institut Pasteur Paris,1949).. Le mérite d'O'UCHTERLONY( 1.947) est d'avoir adapt6,les plaques de verre h l'immunodiffusion sur gel. L'antigène et l'anticorps,déposés dans. des puits différents diffusen l'un vers l'autre et précipitent.à l'équivalence; Si la concentratioi d'anticorps est relativement.plus importante que celle de l'antigène et si l e s coefficients de diffusion dans le gel- sont égaux,les bandes de précipité se forment plus près. du puits d'antig&ne,alors que ltin- verse est observé en cas d'excès d'antigène.

Dans sa revue sur le diagnostic immunologique des fi¡arioses',KAGAN (1963) ne cite pas de travaux utilisant cet.te technique; il signale juste aes réactions de précipitat5on en milieu liquide,auxquelles>i.l reproche le manque de sensibilité; cependant 'en 1961, il signalait- d4jk 1'intkrGt de la diffusion en gklose'dans l'analyse des antigènes parasitaires. EIGUET et' coll., 1964,appliquent 1"immunodiffusion au diagnostic de l'onchocercose avec l'antigène homologue.A-lpartir des travaux de ;;' .1 'Ecole Lilloise( CAPRON et BIGUET I962 et 1968) plusieurs auteur2 von révéler l'intérgt des tes'ts de précipitation en gélose dans le ,diagno tic immunologique des helminthiases; NIEL et coll.,I972(a),testent les antigènes Ascaris suum,Onchocerca volvulus et Dipetalonema viteae en immunodiffusion; sur I08 Sérums d'onchocerquiens,les réponses .positives sont de 96,3$. avec l'antigène ~.vo~vulus'et 95,3$ avec.ltantigène A.SUW. Ces auteurs c0nstaten.t que malgré la richesse'des réactions. croisées entre 0.vÖlvul'us et A.suum,les images de fusion identifiant d e s fractions communes sont rares. L'immunodiffusion donrìe une' image assez caractéristique de .

l'onchocercose,maislpas pour la loase et 12 wuchereriose. - In NIEL et c o l l . ,I972(a),BIGUET et coll.Tg64, CAPRON et coll.I968,, trouvent des taux de positivite de 823,7$ et 96% avec l'antigène ascaridien; BRWiPT et coll. ,1972, trouvent 88,5$.

. -

' .

. .

.

.'

-

' NIEL et coll. ,I972(b), testent l'antigène Setaria labkatopapillosa (filaire des Bovidés,d'obtention facile); Les auteurs concluent que Setaria 1abiztopaDillosa n'oÎfre pas les memes avantages Constants

et décisifs qu'A.suum et D.viteae. 624

. . ,..~-- - -

I .

5 $ e -

La fréquence

-13-

et.la qualité des réponses aux extraits d'A.suum confrontées iì 'celles des antigénes 0.volvulus.et i).viteae justifient leur eiploi p l u s fégulier dans les tests de-précipitation.

b/- Mode opératoire: -antigene: - Ascaris(1iquide m6sentérique): 5mg/0,03ml d'eau

-&rum: non lyophilisé -agarose: gOmg/IOml sur des lames de verre de IO,5cm x 5,2cm;

bidistillée. . r:

t -.

b -creuser les puits *

-double remplissage continu des puits-sérums,avec pré-diffusion

-24h à la temperature ambiante,sous atmosphère humide;

-un bain de citrate B Yb; au minimum 2h.

. de Iheure 3Omn vis-à-vis de.l'antigène ascaridien.

-24h à +40

, -un lavage dans le tampon p!l 8,2 pendant 72h; changer 2 fois le tampon. -5 déminéralisations -coloration( 5mn) à 1'Amidoschwartz k 1% .- ., _ . -décoloration( IOmn) - i -

. . -lecture après séchage des lames.

8

. .

. . S

c2.3: L'ANALYSE IMMUNOELECTROPHORETIQUE: ,

a/- Principe et applications: L'Analyse immunoélectrophorktique ou immunoélectrophorèse est une applicatior de l'immunÖdiffusion,mise au associe une électrophorèse en gélose en présence dtant,jsérum spécifique; Le principe de la technique consiste 6 introduire l'antigène dans un puits 'creusé dans la plaque de gélose et

. . .'de séparer les molécules d'antigène selon leur mobilité électrophorétique'.

point par GRABAR et WILLIAKS.en 1954; Elle une précipitation immunologique

- appliquer un champ électrique afin.

Puis le champ électrique est cqupé et on introduit le sérum dan& une rigole parallèle au champ de migration. Antigène et anticorps diffusent alors l'un vers l'autre et donnent des précïpités analogues .?i ceux décrits dans la technique d'OUCHTERU)NY,avec les mêmes règles d'interprétation.

Cette technique a suivi une évolution paralldie & celle de l'immunodiffusion; son intérêt en immunologie parasitaire est révélé dès I960 par BIGUET et coll. ; En I962,ces mêmes auteurs identifient 3 fractiss spécifiques d'o, volvulus; En 1964,ils Ctfidient en immunodiffusion et en immunoélectropho- rèse IO7 sérums d'onchocerquiens contre les antigènes O.volvulus,D.viteae, Dirfilaria imcitis,A.suum, Schistosoma nansoni; en immunoélectrophprèse les autQUrs trouvent une positivite de 71,9$. CAPRON et coll. ,1968,trouvent face 5 l'antigène D.viteae des taux de posí- tivité de 87%. dans l'onchocercose,82,I4% dang la wuchereriose,65,51$ dans

la loase. . .

.

1

.

1 '

>. . - ,? '

?,

NIEL et coll.,I972(b),observent face aux antigGnes S.labiatopapillosa, D.viteae,A.suum qu'en immunoélectrophorSse,les onchocercoses déterminent un aspect très caractéristique; les arcs se localisent dacs les zones moyen- ne et cathodique du diagramme; PETITHORY et coll.,I973,trouvent un taux de 87,I7% face B l'antigène A.suum;

.I

D'une manière générale,dans l'onchocercose,les taux de positivité sont élevés aussi bien svec 1'ant.igène homologue que les antigènes, hété- rologues(Ascaris,D.viteae)

- L'immunoélectrophorèse est actuellement la seule technique qui p-erfiette :

un diagnostic spécifique de la. filaire en cause; En effet,CAPHON,G3NTILINI et VERNES(I968) ont'montré l'existance d'arcs spécifiques par leur forme e t

leur localisation au sein de 1'6lectrophorCgamne; Sur cette base on:peut

distinguer les filarioses entre elles(onchocercose,loase,wuchereriose) et Ses autres helminthiases; En effet,l'antigène A.suum cguramment utilisé ne précipite pas dans l'ascaridiosc, et rarement dans la bilharziose et la

.---_ . . - . _. . . .

- -.. 'v _. . --.-._ - _ . - _ "

. .

-15- *

. . _. . . ¿

5 1

e . I

. strongyloidose; L'immunoélectrophorèse -donne ggalkment un arc spécifique du syndrome de Larva migrans viscerale. l'Réaliser un diagnostic spécifique en utilisant un antbgène'hétérologue. est,en première analyse,quelque. peu paradoxal. Le fait trouve son exPli=..-.:S - cation dans-la nature des communautés antigèniques unissant les Filaroidea. Les parentés. structurales,toujours très importanteS.dans ce groupe compor- -

tent néanmoins des fractions unissant-spécifiquement-telle filaire à te$le autre. On peut donc $tre amené 2 d&finir,en fonction d'un antigène de-réfé- rence choisi ,1' existence d 'un système pr écipitant-spécif ique-de 1 'une' ou l'autre filaire incrimin~e"(CAPRON,GENTILINI;VERNES,I968).

b/-' Mode opératoire: -antigène: Ascaris(1iquide m6sentCrique):2mg/O,OIml de Bromophéno.1; -sérum: 0,81111 lyophilis6,repris dans 0,2ml d>'eau bidistillée; -agarose: 2@0mg/2Omi par lame. -dépot d'antigène -migration(22V,2@mA/lame), jusqu'à ce que la bande de migration de

l'antigène arrive en fin de rigole-sérum. r

' >.& .

-dépot des sérums -24h 2 la température ambiante,sous atmosphère humide; -24h à + 4 O ;

. .* . z .-

-un bain(minimum 2h)de citrat'e, A 5%; -un lavage dans le-tampon pH 8,2 pendant 72h; changer ? fois le tampon. -3 déminéralisations -coloration(5mn) . . .

-décoloration(lOmn) -lecture après séchage des lames.

'P

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ....... -. -2 . . . . . . . . . . . . . . . ... . I .

-., , . , . . - . ; . , . . . ~ .. , . . - : - .:. ~ . - I . _

. : , 7

. _ - . - . i . ._ . -; i .

, _ . . - , . . . - -

C.2.4: L'ELECTROSYNERESE: , .

.. a/- P r inc ipe e t app l i ca t ions :

L 'Electrosyndrèse u t ' i l i s e ' l e champ Q l e c t r i q u e qu i , au cours d 'une

électrophorkse provoque la ' migrat ion -des gamma-globulines en d i r e c t i o n '

de l a cathode e t le.dc5placement de l ' a n t i g è n e en s e n s c o n t r a i r e ;

Antigène e t a n t i c o r p s sont déposks dans deux l i g n e s de t r o u s , p a r a l l è l e s Le courant e s t app1iqué;perpendiculairement aux l i g n e s de t rous ; P a r une d i s p o s i t i o n appropriée on f a i t converger an t igènes e t an t icorps+

e t les zones de p r é c i o i t a t i o n appa ra i s sen t sous'forme d ' a r c s . L a r é v é l a t i o n de .la s p é c i f i c i t é peut Zt re confirmée p a r l ' i d e n t i t é de

-

. l ' a r c du sérum t e s t é avec l ' a r c du sérum de . r é fé rence .

. .

Dernière née des méthodes d ' ana lyse immunologiques des helmin- tniases,l'électrosynérèse a é t é d é c r i t e p a r BUSSARD en 1959; Les

I x appé la t ions v a r i e n t selon l e s au teu r s : l1Immunodiffusion" ou "Co-électro-

synérèse ? ( GEI\ITILINI), "High vol tage immuno-electro-osmpphoresis" - (PRINCE, I970) , "Counter-immunoelec . . t rophores i s" (GOCKE, 197i>), I'Counter-

c u r r e n t electrophoresis"(KAGAN, 19-74)

Ce t t e technique e s t i a t i l i s ée dans l a d é t e c t i o n d e s a n t i c o r p s préc ip i - -, i

t a n t & e s an t igènes migrant peu ou p a s dans l e s g e l s d 'agarose,dans

l a d é t e c t i o n ou l a recherche de l ' a n t i g è n e A u s t r a l i a ( P r . SAWADA,

Japon),dans l e d i agnos t i c de l'amibiase au Mexique(SEPIlLV2DA e t c o l l .

1971) ,dans l e . d i agnos t i c de l 'dchinococcose en Argentine,en Uruguay

D

e t au. CHILI(TOR~SS e t coll., 1373) . . -- .- -

_ _ _ - . .... ~ . - .

. I

i

i

GENTIB1NI;liIEL et P I N O K ( 1972) ont apgliqué l'électrosynérkse au ' F

diagnostic de la' bilharziose et l'hydatidose,avec &&s antigènes Schistosoma mansoni et liquide hgdatique; Ces auteurs constatent que:

. .

. -1'6lectrosynérkse. eat une technique très

-la qualité des résultats dépend en'partie 'de sensible aux conditions de conservation du sérum;

la tension appliquée aux bornes; '

- -la consommation d'antigène est très faible par

rapport aux techniques de précipitation en agarose; -la reproduc tibili t 6 est sat isfaisante; * -

' . . .

b/- IJiatériel: .

-sérum: non concentré -antigènes testés: Ascaris(extrait

organes génitaux) ; cet. antigène est sous lisé juste avant l'emploi;

-équipement : . ' .

générateur micropipettes

. bandes' Cellogel cuves pour migration agitateur de Kline boites hermétiques

tota1,lïquide mgsentérique, forme lyophilisée et solubi-

c / - Mode o26ratoire: -ant'igène: 60 microgrammes repris dans 30 microlitres d'eau bidistillée.

. -cuves de migration: 125 ml de tampon de migration (le mene qu'en inmuno6lectrophorèse)dans chaque compartiment de la cuve.

. -bandes: après 3Omn d'imprégnation dans le tampon de migration, elles sont essorées entre deux épaisseurs de papier filtre en pressant rapidement de la main. La bande ne doit plus avoir de tampon B sa surface et ne doit pas blanchir B l'air. Chaque bande est marquke(numkro,lieu de dépôt de l'mtigène et du sérum). -

, A ' "p" c 4 !¿a qh. D *

I I \ , I I

l I I I I

I ,n3 .

I * <

10 um >

1

r

L , .

,, , Áprès 1'essorage;les bandes sont immédiatement placées sur le portoir . . I de la cuve de migration;

Position des bandes:: x portoir dans-le sen? de la largeur face 'au manipulateur .

x bandes coins coupés en haut a droite. x tendre les bandes et placer'les pinces de cha- .

x placer le portoir dans la cuve en respectant

-dépot de l'antigène: au point repéré de.la bande,ceté &le

que daté du 3ortoir pour les maintenir.

les polarités. k - .

négatif; à la hauteur de la position repérée;

(30 microlitres en deux prises de IS);..la' pointe de la pipette est- tenue verticalemeni et on lui fait suivre (tout en expu1sant:la solu- tion d'antig6ne)la r'kgle sur la largeur de la bande; on s'applique pour obtenir un trait fin et régulier. .Recouvrir la cuve: prémigration de IO mn .sous 75V; arret du générateur pour le dépot des Sérums.

x.placer,perpendiculairement B la bande,la regle

x à l'aide d'une pipette,déposer Ifantigène

. . . .

-dépôt des sérums: face au depot de l'antigène,à 1,5cm-2cm.f . .

.. du point regéré,c8té p6le positif,en forme de goutte(I5 micrqlitres); ,

' . . . nous avons pu.ainsi déposer trois sérums par bande.

-migration: 2heures sous IOOV; -lavage des b'andes:

I

x premier: dans une solution de.Teepo1 à 1% .

x deuxième: dans le tampon de lavage(30 nn);pour un meilleur lavage,on découpe les bandeS.pour ne garder que -l'es.sen-> t&el(sans oublier de reporter le 'coin coupé en haut à droite et le numéro correspondant).

.

-coloration(wn) -décoloration( 3 baing successifs de décolorant) -conservatioh temporaire dans de l'eau distillée. -lecture sous une lampe en évitant la dessication des bandes.

-

h.B. Les tampons de migration et lavage,le colorant et le d6colorant sont lea n h e s qu'en Imaucoélectrophorèse.

F

5 I2

8 7

4 4

IO II

IO 7

1 1 6 6 8

IO I0

6 I4

IO Iï

5 5

4 6

I3 IO

92 III

T

8 .

II

7

I3

IO

6

-I I

I7

20

I5

7

7

17

149

IV .- RESULTATS.:

A- PARASITOLOGIE: I

----------

Sur, l e s 203 su jeks prrSlevés,I49 s o n t p o r t e u r s de m i c r o f i l a i r e s , s o i t un ind ice m i c r o f i l a r i e n de 73,405;

Selon l e s e x e , i l y a : 67 p o r t e u r s de m i c r o f i l a i r e s s u r 92 hommes,soi.

82 p o r t e u r s de m i c r o f i l a i r e s sur III femmes,so:

un ind ice de 72,82$.

un ind ice m i c r o f i l a r i e n de 73,877i. Donc l e s 3/4 de l a populat ion p ré l evée son t p o r t e u r s de microf i la i rc l e s femmes 6 t & t légèrement p l u s infestée 's que l e s hommes; l a d i f f é -

rence d ' i n f e s t a t i o n n ' e s t cependant pas s i g n i f i c a t i v e e n t r e l e s deu]

sexes.

Tableau I: Répar t i t i on d e s s u j e t s , v a r i a t i o n de l ' i n d i c e mïcrof i - l a r i e n e t d e l a d e n s i t é m i c r o f i l a r i e n n e se lon l e s v i l l a g e s .

T=to t a l ; M=hommes ; F=f emmes;

i nd ice m f . Vi l lages . : densi ' té . .mf s examinés1 av C

M - 2

6 -

sujc

T

m f s a n s m f

F T M F

6 9 3 6

5 4 2 2 ,

3 I . , O I

5 8 2 6

-

r

-

1.7 I I8 ,76 .

79) 46.

IO2,12' - 2

4

8 - 3

21

.I7

7

4

6 5

I

5

9

6

8

-

-

-

-

I I 6 , 8 6 6 70, ti6 78 Y 57% 7

8

100,004;; 9 20

2 1

I O

I O

- I O 8 71,4377 ~

I05 I4

3 II

2

7

67

-

-

I 2

23

20 3

13

T o t a l . . .

. . -20-

De ce tabl.eau,il' ressort que: - l'indice microfilarien varie forte-

, ment d'un village B l'autre(47F.à Pendjama,IO@ B B6dara);il en'est de meme pour la densité microfilarienne. - .

- l'évolution de la densité microfila- rienne n'est.pas toujours parallèle B celle de l'indice microfilarien exemples:. Pendjama: indice microfilarien( 4.7%) plus élevé que la den- sité microfilarienne(I8,76).

s i t é microfilarienne(125,52). P A I N et coll.,I974,expliquent cette dissociation du fait de l'inéga- lité dans la distribution des vecteurs:"un vecteur peu abondant mais uniformément réparti pourrait agir plus fortement sur le pourcentage d'infestation que sur la densit6.microfilarienne; au contraire la présence d'un vecteur abondant mais localisé et affectant plus forte- ment une partie de la population du village(dans ce village m h e ou à distance sur les lieux de travail) pourrait provoquer une augmenta- tion de la densité microfilarienne chez les sujets parasités sans élevation. parallèle du pourcentage d'infestation."

Kouman: indice microfilarien(58,8$) moins élev6 que la den-

3. +

,

Tableau 2: Variation de l'indice microfilarien et de la densicé .-

microfilarienne en fonction des tranches d'âges. - .

l T,el a lD-Iaprks ce tableau,l'infestation est faible(densit6 microfilariennes , + ~ ) ~ ~ 3 ~ 7 1 ) mais très précoce(indice nicrofilarien=Ig, 35S)chez les jeunes

- 1

enfants de O B 4 ans; A u delà de 20 ans,tous les sujets sont pr&ti- quement atteints(indice microfilarien 100%). La densité microfila- - rienne augaente avec. lt8ge(on note cependant une légère -baisse dans la tranche 30-39 ans); cette progression parait logique car Onchocerca volvulus a une vie très longue(I0 à 15 arLs)chez l'h8te vertébré e t

cela permet une accumulation chez les sujets vivant en zones d'endémie1

r

. I

Nbre de kystes 0 I 2 3-4 5-6 7-8 - -

Nbre de sujets 94 39 28 26 6 7

$/n'ore de sujets i 6 , 3 I9,2 I3,b I2 ,b 3 395

;dp/nbre de porteurs 3598 2597 2399 5 ,5 6,4

Tableau' 3:Valeur de l'infestation 'microfilarienne(n0mbre de micro- .... filaires par snip).

9-10 et plus

3

1 9 5

'2,75 -

. . * !

. .

Tableau 4: Porteurs de kystes. .

Sur les 203 sujets,I09 sont porteurs de .kystes,répartis comme suit:

.

, I.

c '* '

.

- . . Tableau 5: Résumé de la 'situation parasitologique en considérant

. . -. . . '%es 'Nbre de sujets $d'onchocerquiens indice mf densit6 mf I . K .

S I 4 - 97 T L 5 46,4 I9 ,13 26 ,.8

+I 5 .- I06 '99p05 ' 9 8 4 I92 , 87 79,2

TOTAL 20 3 76;4 7394 . I09,84 54 ;'2 b

les tranches d'-%es 0-14 ans(enfants) et -1-15 ans(adu1tes).

I . K . = indice kystique(cf indice microfilarien),. . .

- Sur les 203 sujets,37(soit I8,@'.de la population examin6e)sont p o r -

teurs d'atteintes oculaires; d'une manière générale,ce sont les sujets adultes qui sont atteints,le nombre de lésions oculaires augmentant avec la'densité microfilarienne. - I1 y a 52 sujets porteurs de D.perstans,dont 48 cas associés & o.volvulus,

.. . . I

KNÜTTGEN et BüTTNER( 1969) proposent' de mesurer l e paras$kisniei d'une.! ' . . population par O.volvulus en se basant,non plus sur l'indice microfi- larien globa1,mais sur l'indice A l 50 qui représente le plus jeune. groupe d'âge dans lequel au moins 50% deS.sujets sont porteurs de .microfilaires; dana notre étude,cet ind'ice se situerait dansg la tranche

5-9 ans..

-------------

..

5

IO o

Figure 2: Variation de-l'indice )%dice .mÍcro ilarien 3 c ' ._

' microfilarien en fonction de 1 '.@&e;

' '"t

i'

, .

/--

. .

_ .

. .

I .

c !!

. .

4

-.24-

B- S E R O L O G I E : __- ______ L

BI: Immunofluorescence indirecte: . 1. f. .!.

Etat parasitologique fibre S w i e -

OLCrce 1\J $. N $ ' c -p-'

des sujets

'4% 5 u # -

L .. .

. sujets positifs - (onchocerquiensf

7 - N d sujets négatifs 7

: . .

Sur les - 204 sérums,123 --.T ont rdpon u à des dilutions égales ou supé- .,

rieures à I/200,soit une positivité de 60,29k.(la réaction est consi- dérée cor" 'positive B partir de la dilution I/200). LL'CASSE et coll. ,1962,1963,trouvent une positivité de 84% en. tesiant des sérums d'onchocerquiens face à l'antigène O.volvulus;

.

TEN-EYCK,T973,dans.une enqugte sur l'onchocercose en Ethiopie retrouve (avec l'antigène 0 . v o l v u l u s ~ ~ ~ ~ 0 de réponses positives en 1.F.I.chez les 156 sujets B biopsie positive et 8,4$ de réponses positiv;es .chez les sujets 2. biopsie négative. WERY et coll.,I976,dans une enquete sur l'onchocercose au ZaStre, retrouvent 687: de réponses bien positives(contre 2î$ de réponses fai- blemeni positives) en 1;F.I.chez 303 sujets parasitologiquement

' positifs; ces auteurs *enploient également un antigène homologue

. j

. .? . . . i

_ . .

.

(constitué par une suspension d'oeufs embryonnés+quelques fragments Ge filaires adultes).

Dans notre étude,l'antigene est hét&rologue(D.viteae)et nous retrou- vonS.des positivités de 71% chez les sujets onchocerquiens et 2 5 s .

chez l e s sujets parasitologiquement négatifs.

A'travers la littérature sur l'immunologie des filarioses en I.F.I., les taux de positivités avec l.es antigènes homologues varient selon

ies auteurs et le-.type.de fi1ariose;d'aprks i\iOREAU,I974,ces taux sont - élevés pour WONG et .toll., I969( 100% avec les microfilaires de B-.malagi). OGUNBA, I972( 9 8 avec les microfilaires de Loa-loa) ; taux faibles pour-NGODRUFP et coll. ,I968(0$,..~avec les m.icrofilaires d'O.volvulus), JAYEWARDENE et coll., 1958(23$ avec l e s microfilaires de V.bancrofti.2

Des trois observaLions citées plus hauh et en fonction de nos ;

'

f

, .

' 9

. r é s u l t a t s , h o u s pouvons conclure( t o u t au moins pour l 'onchocercose)

à un t aux de p o s i t i v i t é p l u s grand avec l l a n t i g è n e homologue.' . .

L ' Immunofluorescence i ,ndirecte. e s t une technique rap ide , f a c i l e à exécuter,consommant peu d 'an t igène e t de sérum.Les e r r e u r s s e r a i e n t

de l ' o r d r e d e 10% par défaut e t Pb par excès.

Re nombreuxauteurs o n t essayé de l ' a p p l i q u e r B d e s enquetes séro- épidémiologiques,nais c e t t e technique ne permet qu'un d i a g n o s t i c

de groupe(ce q u i ne f a c i l i t e pas l e problkme en zones t r o p i c a l e s

oh. l e s he lminth iases sont mul t ip les ) ; L a " s p é c i f i t é " e s t également

fonc t ion des s e u i l s e tab l i s par l e s a u t e u r s .

Fig.3: R é p a r t i t i o n d e s taux de réponses .

. .

. .

. .

IO

4'0 d, l a v x . ..

- . . .

b

-26- -

. Fig.4: Relafioni.entre l e taux. d ' a n t i c o r p s f l u o r e s c e n t s e t

a/ l e t a u x . d ' a n t i c o r p s augmente rapidement ju squ ' à l ' âge de 20 ans ,

e t diminue. . . .

b/ il semble y a v o i r r e l a t i o n e n t r e l e s t i t r e s en I.F.I.et l e taux de m i c r b f i l a i r e s j u squ ' à l a va leu r de 50mP/snip.

La microf i larodermie é t a n t fonc t ion de l ' % g e , i l nous p a r a i t logique

que ces deux schémas a i e n t l e meme aspec t généra l .

132: Immunodiffusion,: 1.9~

I E tat 2a ras i to log ique

. d e s s u j e t s

s u j e t s p o s i t i Î s

s u j e t s n é g a t i f s

Nbre

I55

48

1

I

N $ I N l k

S u r l e s 204 sérums,8I on t "répondu",soi t un taux de p o s i t i v i t e .

de 39,70$; Ces r é s u l t a t s sont f a i b l e s pa r r a p p o r t à ceux des a u t e u r s c i t é e s p lus haut . I -

lement une approche s a t i s f a i s a n t e du d i agnos t i c des f i l a r i o s e s . . . Bien que c e t t e t,eChnique s o i t a s s e z l i m i t é e , e l l e o f f r e actÜel-

D

. t

Etat parasi tologique Nbre des sujets -

Sérologie .

. i i - - M

t I 1

I I

1 sujets négatifs

1 sujets positifs I I55 . I 86

7 48 I - I I

I Sur les 204 s&rums,nous trouvons un taux de positivite de-45,59$; cette technique,la seule spécifique dont on dispose actuellement est longue .à exécuter(6 à 7 jours). Les premiers essais de l'immuno- électrophorèse sur acétate de cellulose sont encourageants et on peut espérer disposer d'une méthode plps rapide dans un proche avenir

B4: Electrosynérkse: Tous les sérums ont 6th "passés" contre l'antigène Ascaris-extrait total; avec cet extrait ,nous avons pu llsortirl'un arc spécifique' de '1'onchocercose.en testant des sérums onchocerquiens confirmés; dans n o s résultats cet arc a été le p l u s fréquent. NOUS avons égaienent, obtenu d'autres types d'arcs qui sont soi*.des arcs de groupe,soit: des arcs onchocerquiens qui n'avaient pa3 de correspondance avec nos .sérums de référence.

..

I '

. . . ><

' . . .

-arcs "totaux": I04 sur 204,soit 51% de

-arcs spécifiques: 85 sur. 204,soit 41,87$

, - réponses posit ives; . .

de réponses positives.

8

Dans la littérature,nous n'avons trouvé aucune référence sur 1 ' E . S .

des iilarioses; mgne& pour les autres parasi tosesfles résultats

f "28- V '

. publiés' par'bon nombre d'auteurs restent souvent fragmentaires .8t ne portent que sur de très.faibles échantillon.s(sauf GENTILINI et coll. I 1973).

'

. .

L'électrosynérkse présente de nombreux avantages: rapidité d'exé- cution,faible consommatibn d'antigène et d'anticbrps,équipement peu encombrant; nos résultats nous paraissent satisfaisants,mais il faudrait'continuer les investigations pour mieux pr6ciser la notion de spécificité et les autres paramètres.

.

C "

. . . -

B5: Comparaison et Association des 4 techniques explorées: --

. Tableau 6: Sérologie globale.

Techniques Sérologies(+) en.% Sérologies(-) en $

I.F.I. 60929

I.D.. 39 t 70

A.I.E. 45,59

. E.S. . - 58,33

Cette sérologie gLobale montre que 1'I.F.I. est la meilleure . technique .sur le plan quantitatif,et 1'A.I.E. la meilleure sur le plan qualitatif. . .

%: ' -

Figure 5: Association des techniques deux à deux.

58

L

ir, 55

l ïo, Y? 5436

r

1 rt Z b + € S II f -i,..- - ìFI+ I

c

(" . . . . .

- 9 -29- . . .

Par le calcul des .concordances et des discordances,l'association' . . I.P.1.-A.I.E. est celle qui donne les meilleurs résultats(72$ de sérologies positives);d'oÙ l'intéret d'associer autant que possible plusieurs techniques comme l'ont déjà suggéré GENTILINI et cbll.,

. .

. 1972(c). Compte t-enu des avantages que nous.reconnaissons B l'électrosyné- rBse et du faible écart-type(I,~&I) entre cette technique et l'immu- noélectrophor&se,nous avons 'retenu l'association I.F.1.-E.S.; . .

rableau 7: Sérologie en fonction de l'intensité de l'infestation. N Nbre de mf Nore de sujets Sérologie en 1.3'21. Eérologie cn E.:

+ - + -

N $ N 4'. N ya N s". ,$ T

I5 $ ? S B 39 72,2 I3 24 41 '15 '

54 75; : O

8

: - - ' _

. .. _.

730-

mf.

- i

n;D 1

L'intensité de l'infestation microfilarienne semble influencer la nature des réponses serologiques(positives ou négatives) ,mais pas l'importance de la réaction. En effet,le pourcentage des sérologies positives augmente avec la charge microfilarienne en I.F.I. et passe par un maximum (50-200 mf)en prdcipi'tation(E.S.,I.D.,A.I.E.); alors que la corrélation entre la chzrge microfilarienne et la valeur des titres en I .F . I . ou le nombre d'arcs en précipitation n'est pas Qviden-

. ._ . 3. te; toutefoi's,en I.~;I.,nous avons signalé(fig.4)une évoiution paral- . . i'

lèle entre titres et charge microfilarienn'e jusqu'à la valeur de 50mf/snip.

E - - .. , .

" *I

Tableau 8:Pourcentage des Sérologies positives dans les différentea tranches d'âges chez les sujets positifs,

. .

I 0-4 15-19 2i)-25 30-391 40+ ages( ans)

Nbre total

Sujets positifs .

-

5-9 IG-14

45 21 I4 23.

7 27 I 6 I3

I4 ,3 8.1, 2

( 1 3 )

60 . I . F . 1

$ sérologie C+) ==

E . S .

sujets positifs=sujets onchocerquiens; . ( )=nbre de sérologies positives dans la tranche d'3ges

considérée;

Figure 7: .. . . _ _

- .

. .

.. .

i

-3 5-9 IO-IV 1-9 5-9 IO-ry

L

I.. 1 : -32-

. . . - . .

o . I

Dans les deux cas,le maximum des sérologies positives chez les sujets onchcerquiens est, observé dans la tranche d'&e 10-19 ans.

Le taux d'anticorps semble donc monter rapidement jusqu'k l'âge de vingt ans et diminue ensuite. .

- Sérologie et sujets parasitologiquement négatifs(48 cas) :

. . 1 I I I

Te chni ques I 1.F.I.I I.D. I A.I.E. ' 1 E,.S.. ' I I " I

Nbre de s.ujets I I . I . I I I

I 7 I 10 . I

12 1 , 2 . I 1 f I '

I

I !

I I

. récupérés.

Pourcentage 1 25,OO; f 4,16 I I4,58 .'. 20,83

En considérant les sujets récupérés par l'dlectrosynér&se,le nombre .total d'onchocerquiens passe de"155 B 165,soit 81,20$ de l a popula- '

tion prélevée. . -

i . . ,

,

I

. .

. . .

* .

6 . . _

..

. . I ,

E - - .. ,.

Y. I " * y

-33- - .

v- CONCLUSION: I

. . Y

a/ Parasitologie: . . La densité microfilarienne donne une bonne idée de la masse microfi- larienne en circulation,donc du degré global de 1'infestation;mais cet indice,geut atre influencé par la présence d'individus hyper- infestés et obtient alors des valeurs parfois trop élevées,surtout si le nombre 'de sujets examinés est peu important comme c'est le cas dans cette Qtude; Nous pensons Que l'indice microfilarien par fines: tranches d'âges est plus fiable,surtout dans un programme de lutte. Toujours dans cette optiqlJe,nous estimons p l u s logique de considérer, séparement chaque village ,plusieurs facteurs extrinsèques( couvert .

végéta1,climat loca1,proximité d'un cours d'eau)pouvant influencer la distribution du vecteur et l'épidémiologie de 4 A e n d - d . $W.h.&k

T

..

. .

b/ Sérologie et diagnostic: . Pour le clinicien,les tests immunologiques sont souvent précieux dans le diagnostic des affections parasitaires surtout 8. leur stade .

d'invasion,devant une hyperdosinophilie sanguine élevée,dans les , .

localisations visckrales(abc6s amibien du foie),lors d'impassespara- sitaires ou pour suivre l'évolution des anticorps après traitement. La positivi%é des réactions couplées est alors un argument catégorique.

. .

.

Les principales critiques qu'ont peut faire aux différentes métho- des d'investigations immunologiques restent l'actuelle rareté d'anti-

. gènes homologues en quantite suffisante,la d'exécution d e certains t e s t s spécifiques,l'absence seuils de réfé- rences internationales adoptés par tous les laboratoires(en effet,. .

actuellement il ne serait pas surprenant que différents laboratoires analysant un mgme sérum donnent des résultats contradictoires); Grâce aux efforts sui sont faits o n peut espérer un jour arriver à une production suffisante et B une commercialisation des antigènes homologues,ainsi qu'B l'introduction d'unités internationales( tel est déjà le cas de la toxop1asmose)par le biais de l'Organisation Modiale dq la Santé.

'

c / Sérolopie et enquete épidémiologique: L'intéret de la s&rclogie,.en epidémiologie dépend de la rapidité,

-

de la spBp8iCit6,de l'aspect quantitatif et de lawimplicité pratique

deS.techniqueS. C'est dans ce but qu'il est intéressant d'associer '

les techniques quantitatives type immunofluo'rescence indirecte ou *

v

hémagglutination à des techniques de prGcip.itation plus spécifiques

_ .

mais qui souffrent de temps d'exécution trop longs et de lourdeur technique. Les techniques de précipitation pourraient. 6tre améliorées dans la mesure oÙ la gdlose est abandonnée au profit de support solide type-acétate de cellulose qui permet un diagnostic p l u s rapide,

La spéci.ficit-6 des réactions dépend de la qualité des fractions antigdniques utilisées. Iious avons pratiqué nos réactions de préci'pi- tation contre des extraits antigéniques d'Ascaris suum ; cet antigène bien qu'éloigné des Nématodes ,homologues a l'intéret de pouvoir $tre produit en grande quaiitité et de donner en analyse, immunodlectropho- rétique des systèmes préci2itants dont la spécif' 6 en faveur de l'onchocercose est' bien connue. Le travail se poursuit actuellement sur des antigènes homologues(nodu1es onchocerquiens et filaires de K'6dine)et hétérologues plus proches des filaires humaines qu'A.suum (Litomosoides - carinii,Dipetalonema viteae,Dirofilaria immitis et -3-ru -ìa. . . ahan -. . -

poursuivre le travail $ar la mise au point d'une technique d'analyse immunoélectrophorétique sur membrane d'acétate de cellulose et,~coupler les réactions d'imnunofluorescence des rkactions d'hémagglutination.

'

F .'

. .

. __ . .- . - i) ~~Au...po.in~F - a - - - -. . e vue des techniques utilisdes,nous. pen.mns

Par ailleurs,la mise au point récente ci'une technique utiiisant des anti-gammaglobulines marquées par des produits radioactifs .et fixées sur des antigènes stabilisés sur support plastique( techn.ique 'de Durty tubes)devrait permettre de,:doser les antigènes en plus des ant i co rp's ci r culan t s .

Les études sérologiques sur des sujets jeun.es seraient intéressan- tes 8. dévelop2er car c'est de la comparaison des résultats skrolbgi- - ques sur les tranche? d'âges les plus jeunes avant et après une campagne d'éradication qu'on pourra juger de l'efficacité de celle-ci.

Pour l'homme de terrain que nous sommes appelés à ktre,il n'y a pas de doute que l'exarien direct reste aujourd'hui le moyen l e plus rap1ä.e et le plus precis; mais les risques d'erreurs par défaut persistent,malgré he perÎectionnement des différents pïocédés'd'exzmen Le test immunologique en révélant les faibles porteurs(dans la présen- te étude l'electrosynérkse permet de récupérer IO**onchocerquiens

.

t : ! !,,

-35- . ~

.. .

_ .

? i I.Ij .

. sur les 48 gujets. négatifs B l'examen direct)devient 1' inséparable compléme.nt d'étu&, surtqut dans un. cadre. opérationnel: - .

. .

lexamen direct + test immunologique = résultats meilleurs - _

,

d/ Remarques générales: - Nos résultats d'ensemble sont inférieurs B ceux obtenus par

la plupart des auteurs; La nature de l'antigène(hétérologue),li&tat~. des sérums(conditions d'exp6dition;manoeuvres de congélation-décongé- 1ation)et surtout notre inexpérience de ces manipulations longues et délicates ont sans doute influencé nos résultats.

- La présence de D.perstans,seule ou associée B O.volvulus n'a p a s influencé les résultats,tant en précipitation qu'en imnunofluo- rescence; cette observation rejoint l'hypothèse selon .laquelle la filariose à I).perstans est une infection à sérologie faible. Plusieurs auteurs entre autres hIEL et coll.,I972(a),BRmPT et coll.,I972,ont en effet signalé ce phénomène.

I

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v . Comparaison entre parasitologie et sérolceie:

examen parasitologique examen I . F . I . des résuztats soumis . .

memes fractions h discussion

P ' nombre séro. (+) séro . (-) nombre

E22 - I IO 45 45 29 (1)

4.B ' .12 25 12 , 25 ( 2 )

I

I e .

, I '

'positifs en parasito. positifs en I.Y.I. différence

122 33 -

I55

7w 6% 16% . 1

:. positifs .. . .

p6ga t i f s

x- soAt souligngs,les résultats qui vont dans le meme sens.

(1):pourcentage de sérologie ddfaillante,le 'parasite'ayant ét6 bien m i s en Bvidence par l'examen parasitologique; (2):pourcentage de sérologie positive chez les sujets n6gatifs;hypothb- sea de discussion:

- insuffisance de la parasitologie(temp8 de séjour du prélèvement cutané dans le serum physiologique trop court).

- absence de microfilaires(p0nte inhibée,parasite d'un seul sexe,ou parasites rares).

- sérologie faussement positive(due È i la nature hét6rologue de l'antigène).

- NtB. Cette discussion reste valable pour les autres ' techniques sdrolo- giques(l.D.,A.I.E.;E.S.).

Nous n'avons retenu que 1 ' J . F . I . car c'est elle qui donne des résultats proches de ceux obtenus p a r l'examen direct et c'est Bgalement elle qui a souvent éte envisagee dans des enqugtes séro-8pid6miologiques.

Examen total des 203 sujet's