Herm Prof. Dr. Vald. Henriquesan seinem 70. Geburtstag gewidmet.

La composition des hemooyanines et de I'hemerythrinedu siponcle1

par

Jean Roche.

(Laboratoire de Chimie biologique de la Faculte de Medecine et de PharmacieMarseille, Franee.)

I. Hemocyanines et hem6rythrlnes.Depuis le travail de Leon Fredericq (1878) attribuant aun chromo­

proteide cuivrique Ie transport de l'oxygene dans le sang du Poulpe,la biochimie des hemooyanines a fait l'objet de nombreuses recherches,mais elle comporte encore bien des obseurites.

L'on rencontre ces pigments respiratoires dans l'hemolymphe deMollusques, de Crustacea, d'Arachnides. Lerapport de Ia quantited'oxygene trsnsporte ala teneur en cuivre des solutions d'hemoeyanine,a savoir Cu/O, est identique dans tous les cas etudies (Redfield,Coolidge et Montgomery, Begemann, Guillemet); mais la eourbede dissociation des oxyhemoeyanines, leurs proprietes physicochimiques,ne sont pas identiques. Des differences notables ont ete noteea a retegard entre les pigments des animaux d'espeees diverses, aussi la notiondeleur specificite s'est-elle imposee, La constitution des hemocyaninesdemeure mal connue. Il est certain qu'elles ne contiennent pas: degroupement prosthetique porphyrique; mais on y trouve un noyaucuprifere commun (hsmoeuprine), combine aune proteine dont la naturediffere suivant l'origine zoologique du pigment [Po Dubouloz etJ. Roche (1)]. La base chimique de la specificite de ces corps serait alorsla meme pour eux et pour les hemoglobines.

n existe dans la nature des ohromoproteides respiratoires ferriques,les hemerythrines, dont l'analogie de proprietes avec les hemocyaninesa depuis longtemps frappe les observateurs. Ces pigments que l'onrencontre surtout dans les hematies des Sipunculiens, n'ont eMobtenus que tout reeemment al'etat cristallise [Florkin (2), Roche (3)].

1 Der Redaktion am 6. Januar 1934 zugegangen.

88 JEAN ROCHE:

TIs sont constitues par une proteine eombinee a un noyau ferrique nonporphyrique (hemoferrine) dont le spectre ultra-violet presente aveccelui de l'hemoeuprine une grande analogie (1). Les hemerythrines deSipunculus nudus et de Phaseoloeoma elongatum, les seules sur lesquelleson possede actuellement quelques donnees, ne semblent pas identiqueset 1'0n doit probablement etendre a ces pigments (2) la notion de spe­cificite bien etablie dans le cas des hemoeyanines.

, - Cette similitude dans leur constitution et dans leurs proprietes quepresentent les hemocyanines et les. hemerythrines d'une part, l'indi­vidualite de chacun des pigments de l'unet de l'autre type suivant sonorigine zoologique d'autre part, doivent reposer sur des particularitesde structure dont on doit trouver la marque dans leur composition, tantelementaire qu'en acides amines.

Le but de ce travail est d'etudier la composition elementaire dediverses hemocyanines pures et celIe de l'hemerythrine du Siponcle.!

H. Recherches anterleares.Elles sont peu nombreuses et, a l'exception du travail d'Hernler

et Philippi(4), elles n'ont porte que sur le pigment d'une seule espece,Si ron ecarte les resultats de Griffiths (5) obtenus sur une preparationdont la purete est douteuse, ceux des divers auteurs peuvent etre resumesdans le tableau suivant:

Tableau 1.Doonees anterieures a ce travail sur la composition des Mmocyanines.

Origine Etat Ic% IH% IN% r s% ICu%

~pu8 vuliJaris (6) cristallise 53·6 7·3 16·09 0'86 0·38idem (7) - - - 16·09 - -

Limulus polyphemus (8) amorphe 48-9 7·1 16·18 1·56 0·28idem (9) amorphe - - 17·3 - 0·17

Helix pomatia (10) . eriatallise - - - - 0·25idem (ll). cristallise - - - - 0·25idem (4) cristallise 53·0 6·9 15·15 0·76 0·24

'IJ'Ulgaris (4) amorphe 53·4 6·9 15·9 1·04 0·25Loligo pealei (4) . amorphe 52·7 6·8 15·75 1·19 0·26BusyCO'//, canalyculatum (4) amorphe 53·5 6·6 15·9 1·23 0·24Limulus polyphemus (4) . amorphe 53·4 6·9 16·9 1·10 0·17Homarus americanus (4) amorphe 53·0 6·8 16·78 0·90 0·18

o

Sauf les valeurs de Henze pour le euivre et celles d'Aisberg etClark pour l'ensemble des elements, les donnees des divers auteurs sur.l'hemoeyanine d'une memeellpece animals sont assez.eoncordantes.

1 J'ai du me bomer, faute de material, al'etude de cette seuleMmerythrine.

LA COMPOSITION DES HEMOCYANINES ET DE L'HEMERYTHRINE ETC. 89

Comme l'ont justement fait remarquer Hemler et Philippi, lespigments sanguins des Mollusques etudies presentent tous une teneuren cuivre identique (0- 25%), tandis que ceux de la Limule et du Homardne contiennent que 0·17-0'18% Cu.

II ex iste.a ma connaissanceune seule analyse elementaire d'hemery­thrine, faite par Griffiths sur le chromoproteide respiratoire du 8iponcle.En voici les resultats:

C%=46'7 H%=6'9 N%=17'2 8%=0·58 Fe%=0·51

Mais le mode de preparation employe par Griffiths ne permet pasde considerer comme pur Ie produit dont il a etudie la composition, etl'on ne possede actuellement aucune donnee quantitative certaine surles hemerythrines,

Ill. Recherches personelles.. Elles ont porte sur vingt-trois preparations d'hemoeyanines provenant

de neuf especes animales (Helix pomatia et aspersa, Octopus vulgaris,Eledone moschata, Sepia officinalis, Carcinus moenas, Maia squinado,Dromia vulgaris, Limulus polyphemus) et sur quatre preparations dupigment d'hemerythrine de Sipunculus nudus. On examinera sueeessive­ment Ie mode de preparation du pigment, les methodes de dosage et lesresultats obtenus.

A.Preparation des chromoproteides et methodes de dosag~.

1. Hemocyanines. Elles ant toutes ete preparees par dialyse pro­Iongee a 00 des sangs qui les contiennent. L'on sait depuis les recherchesde Dhere (12) qu'en dialysant Ie sang d'Helix pomatia l'on assiste audepot d'hemoeyanine eristallisee au bout d'une periods allant de quelquessemaines a deux mois. Ce mode operatoire a ete adopte par de nombreuxexperimentateurs, mais,s'il permet de preparer facilement des quantitesimportantes de pigment dans Ie cas des Helix, il se montre plus irregulieravec Ie sang des autres animaux, Bien que toutes Ies hemoeyaninesscient des globulines, precipitant a leur point isoeleetrique, bien desauteurs admettent que certaines d'entre elles ne precipitent (ou necristallisent) pas par dialyse. Or si cette operation est prolongee pendantun temps assez long, la proteine se rapproche de l'etat isoeleetrique, elledoit alors se deposer a l'etat amorphe ou eristallise suivant la rapiditeavec laquelle I'elimination des ions diffusibles a ete realisee. C'est Iaee que j'ai observe dans la plupart des cas, meme avec des pigments qui;comme celui du. sang de Limule, sont reputes non precipitables par dialyse:mais il faut souvent au mains deux mois de sejour a 0° pour atteindrece resultat, .. . . . .

90 JEAN ROCHE:

L'ensemble des manipulations en vue de l'isolement d'une hemo­cyanine pure comporte une serie de temps dont Ie detail doit etremaintenant expose.

L'hemolymphe des mollusques marins (Octopus vulgaris, Eledonemoschaia, Sepia officinalis) a ete recueillie par ponction vasculaire a laStation de Biologie marine de Tamaris sur Mer (Var, France) pendantIe printemps et l'ete de 1932 et en Aout 1933; celIe des Helix a ete recolteepar saigneetotale d'animaux en hibernation; celIe des Crustacea(Oarcinusmoenas, Dromia vulgaris, Maia squinado) parponction des articulations.Sauf pour l'hemocyanine de ces deux demieres especes, l'analyse a portesur Ie produit du melange de sangs provenant de nombreux animaux.Le sang de Limulus polyphemus m'a ete fourni par Ie Marine BiologicalLaboratory de Woods Hole (Mass.) a qui fen exprime ici mes remercie­ments.

Une premiere dialyse d'environ huit [ours, faite en renouvellantI'eau exterieure aux sacs deux fois par jour permet l'elimination de laplus grande partie des sels et Ie depot de proteines (globulines ou proteinesdenaturees mal determinees) qui accompagnent Ie ehromoproteide dansI'hemolymphe, Divers ouvrages traitant de la composition du sang etde l'hemolymphe chez Ies invertebres dont j'ai prepare Ie pigment respi­ratoire, eonsiderent I'hemocyanine comme la seule proteins que l'on, yreneontre, J'ai presque toujours obtenu, au bout d'une huitaine dejours de dialyse, un depot blancha.tre plus ou moins abondant de proteinene contenant que des traces de cuivre. Cette substance n'est done pasde l'hemoeyanine. Dans l'hemolymphe des Crustaces, elle entralneavec elle Ie carotinoide orange (tetronerythrine) qui y est contenu parfoisen abondanee. Ce premier depot d'impuretes, proteiques et autres, unefois accompli, on transvase Ie contenu des sacs dans de nouvelles mem­branes de collodion et on continue la dialyse. n arrive parfois qu'uneIegere precipitation ait lieu au bout de quelques [ours, c'est qu'alorsles impuretes n'avaient pas ete completement eliminees dans la premiereoperation; il convient alors de transvaser encore une fois dans un nouveausac de collodion. On ne doit eonsiderer la solution commecontenantde l'hemocyanine pure que si elle demeure absolument Iimpide pendanthuit [ours au moins. Au bout de trois a dix semainesle depotdu pigmentse produit, a l'etat cristallise dans Ie cas des Helix, en cristauxplus oumoins melanges ada Ia matiere amorphe, dans celui des autres animaux,

Dans un petit nombre de cas, je n'ai pas attendu que la precipitationflit lieu spontanement, mais je l'ai amereee en amenant Ie pigment auvoisinage du PH isoelectrique par addition d'HCl N/20 ajoute goutte agoutte et en agitant. En continuant la dialyse pendant quelquessemaines,il est alors possible d'obtenir un depot abondant d'hemocyanine.

LA COMPOSITION DES HEMOCYANINES ET DE L'HEMERYTHRINE ETC. 91

Le contenu des sacs a dialyse est centrifuge lorsque la precipitationest assez importante-: le culot est lave trois foisa l'aeetone pure afind'en eliminer l'eau, seeM a I'etuve a 370 pendant 3 a 4 jours et conserveen tube seelle. Les hemoeyanines ainsi preparees se presentent sousforme de poudres dont la coloration est assez variable suivant les especeset meme suivant les eehantillona de pigment des memes animaux. Cellesdes Helix sont en general d'un gris bleute ou verdstre assez pale, cellesdes PouIpes d'un gris fortement bleute, celles des Crustaeee d'un grisvert, celIe des Eledones d'un beau vert. Avant les analyses, les prepa­rations ont ete desseehees a 1050 [usqu'a poids constant, operation quin'en n'a pas sensiblement modifie la couleur.

II. Hemerythrine de Siponcle. Deux preparations (A et B) ont eteobtenues a l' etat cristallise a partir de deux lots de 120 Siponcles, provenantde la Baie de Tamaris-sur-Mer, dont le liquide coelomique a ete traite de lafaeon suivante (3): Apres elimination du plasma et lavage a I'eau demer des hematies, I'hemerythrine a eta extraite par lavage a l'eau saleea 0·9%. La solution est dialysee afin de permettre Ie depot d'une globu­line, qui s'opere en quelques jours. Des que l'hemerythrine commenceaussi It preeipiter, on centrifuge et on dialyse le liquide clair surnageant.De l'hemerythrine se depose a l'etat cristallise au bout d'un temps plus oumoins long. La fraction du pigment demeuree en solution au bout devingt It vingt cinq jours a ete precipitee par l'acetone, secheependant troisjours It l'etuve It 37°, puis, au moment de l'emploi pour les analyses,It 105° [usqu'a poids constant. Deux preparations (C et D) ont eteobtenues par ee moyen, je les designerai sons le nom d'hemerythrineamorphe,

Les methodes de dosage mises en oeuvre sont, pour Ie carbone,l'hydrogene'' et Ie soufre, celles de Pregl, pour l'azote Ie micro Kjel­dahl, pour Ie euivre celIe de Guillemet (12), pour Ie fer par celles dePregl (a l'etat de Fe20S) et de Lachs-Friedenthal. Dans le cas dece dernier element la methode de Pregl a ete appliquee It toutes lespreparations, celIe de Lachs-Friedenthal aux substances A et D;Les resultats obtenus presentent une concordance satisfaisante, maisen raison de la plus grande precision de la premiere seuls ceux obtenusgrace a elle serontmentionnes plus bas.

Neanmoins les dosages parla methode de Lachs-Friedenthalconstituent un contrele utile en raison de la plus grande specificite dela reaction sur laquelle elle est basee,

1 Dans Ie cas des esnga de Poulpe, d'Eledone, fau obtenu une veritable.prise en masse» du contenu des membranes au bout de 2 mois de dialyse.

- II Lea dosages de carbone et d'hydrogene ont tous eM faiiSpa.r Ie Dr.H.Weil(Miinchen).

92 JEAN ROCHE:

B. Resultats experimentaux.

TIs ont eta reunis dans les tableaux II et III.

Tableau II.Composition elementaire des hemoeyanines.

Provenance il Etat C% H%IN%I S% Cu%II

( HeUx pomatia . . j cristallise 51·93 6·95 15·16 0·713 0·253. idem . . I idem 51·87 6·71 15·12 0·749 0·242

idemI

idem 52·04 6·48 15·40 0·675 0·245idem idem 52·28 6·78 15·21 - 0·260

Helix aepersa idem 52·55 6·81 15·21 0·7ll 0·244'" idem idem 53·73 6·75 15·08 0·749 0·242~

6< OctopUS 'IJ'Ulgaris idem 52·85 6·49 16·15 - 0·258.E idem idem 54·71 6·94 15·99 1·042 0·242

~idem amorphe 53·76 7·00 16·09 1·077 0·262idem idem 52·85 6·86 16·13 1·089 0·252

Sepia officinalis cristallise 51·58 6·82 15·78 1·110 0·272idem idem 51·75 7·42 15·76 - 0·250idem· amorphe 53·74 6·55 15·90 0·966 0·248

Eledone moschata , cristallise 50·51 6·98 15·76 1·160 0·244idem idem 52·56 6·85 15'S7 1·100 0·2508r-- oristalliae 52·41 6·59 16·70 - 0·168

~ idem . part. crist. 53·65 6·59 16·96 0·963 0·174. idem . amorphe . 53·39 6·68 16·83 0·940 0·182Maia squinado. . idem 52·86 6·56 16·82 - 0·182Dromia vulgaris . idem 52·39 7·07 16·05 1·021 0·170·

'mulus polyphemus part. orist, 52·50 6·86 17·05 1·142 0·173u

Tableau III.Composition elementaire de l'hemerythrine de Siponele.

Preparation Etat I C% HOfa NOfa I SOfa I Fe%

A. cristallise 53·05 6·54 16·75 1·58 0·99B. idem 53·10 6·53 16·90 1·76 0·99C. • I amorphe 53·72 6·56 16·70 1·79 1·02D. • i idem 53,49 6·55 16·79 1·86 1·04

IV. Discussion des resultats.

A. Composition moyenne des hemocyanmes et de l'hem6rythrine'de Siponcle.

Les valeurs moyennes des donnees obtenuessoit par Hernler etPhihppi , soit ~u eours dece travail ont etc reunies dans le tableausuivant: '

LA COMPOSITION DES HEMOCYANINES ET DE L'HEMERYTHRINE ETC. 93

Tribleau IV.Composition moyenne des Mmocyanines et de l'Mmerythrine du Siponcle.

Espeoe " C% IH% IN% I S% ICu ou Fe%

A. Hemocyaninea.{Helix pomatia! 53·04 6·9 15·15 0·76

IHelix pomatia 2 53·14 6· 78 15·14 O·73Helix aepereo»: . 52·03 6·79 15·22 0·71

M 11

~OCtOpu8 vulgari8!. 53· 4 6· 95 15· 9 1· 04

q~e~s. Octo,pus vulg~:i82. 53·76 6·82 16·08 1·06Lol'/{Jo peale~ .... , 52·75 6·8 15·75 1·19IBusylXYll, canalyculatum 1 53· 5 6· 65 15· 9 1· 23

lEledone moschata 2 • •• 51·53 6·91 15·81 1·13Sepia officiruilis 2 • •• 52·35 6·93 15·81 1"04

loarcinus moenas 2 •• 53·15 6·62 16·83 0·95

Cru- Homarus americanus 1 53·05 6·85 16·78 0·90stares Maia squinado 2 • " 52· 86 6· 56 16· 82

Dromia vulgari82 • •• 52·39 7·07 16·05 1·02

Arach- {Limulus polypMmus l 53·40 6·9 16·9 1·10nide Limulu8 polyphemu8 2 52·50 6·86 17·05 1·14

B. H emerythrine.Sipunculus Nudus 1 •••••••• 1/53.341 6·54 116.781 1·74 1

1 Valeurs moyennes d'Hernler et Philippi (4).2 Valeurs moyennes csleulees a partir du tableau II.

0·245 Cu0·250 Cu0·243 Cu0·25 Cu0·253 Cu0·26 Cu0·245 cu0·247 Cu0·256 Cu

0·173 Cu0·187 Cu0·182 cu0·170 Cu

0·173Cu0·173 cu

1·01 Fe

B. Composition et specificite.Les diverses preparationsprovenant d'animaux de meme espeee

ont une composition tres voisine. Mais comme elles ont eM obtenuesa partir de nombreux animaux dans la plupart des cas, leur analysene nous permet pas de decider quel est l'ordre de grandeur des differencesindividuelles de composition.

Dans le cas particulier de l'hemerythrine de Siponcle, la preparationA. se distingue par une teneur en soufre inferieure ~ celIe des trois autres.Des ecarts du meme ordreont ete anterieurement observes dans d'autresproteines, les serumglobulines par exemple [Z. Aszodi (13)], aussi n'ya-t-il pas lieu d'incriminer une impurete, mais plus probablement depetites variations de la teneur en acides amines sulfures des preparationspour expliquer ce fait.

L'examen des tableaux II et IV permet de constater l'existencede differences importantes dans la teneur en azote et en soufre des diverseshemocyanines, Dans l'ensemble, celles des Mollusques ont une teneuren azote moindre que celles des Crustacea; neanmoins celIe des Helixpour les premiers et celIede Dromia. pour Ies seconds sont partieulierementpauvres en azote. Quant ala teneur en soufre, elle est voisine de 1%(a ± 10% pres) sauf chez l'Helix oil elle oscille autour de 0·75%; elle

94 JEAN ROCHE:

est notablement moins fixe que celIe en les autres elements. Ces obser­vations indiquent que la partie proteique de la molecule n'a pas la memecomposition dans ces divers pigments. Des dosages d'acides aminessont actuellement en cours pour preciser les modalites de cette difference.

La teneur en cuivre des hemocyanines de Mollusques oseille autourde 0·25% dans tous les cas etudies d'espeees marines (Octopus vulgaris,Eledone moschata, Sepia officinalis) ou terrestres (Helix pomatia etaspersa).Elle atteint 0·18-0·17% chez les Crustaces (Careinus moenas, Maiasquinado, Dromia vulgaris) et chez la limule. Or, l'hemoeuprine paraitetre identique (1) dans les divers hemooyanines, aussi la diversite dansla richesse en cuivre peut-elle tenir it des differences soit dans la com­position de la partie proteique de la molecule, soit dans les quantitesde proteines combinees it l'unite de poids d'hemocuprine. La premierede cea hypotheses parait la plus vraisemblable.

Ces observations apportent une base chimique it la notion de laspecificite des Mmocyanines, qui reposait jusqu'ici sur l'existence d'unediversite dans leurs spectres (Dh ere, VIes, Quagliariello, Redfield),dans la dissociation de leurs combinaisons oxygenees (Redfield, Ste d­man et Stedman), dans leurs points isoeleetriques (Quagliariello,Stedman et Stedman, Roche, Tiselius, Pedersen).

c. Composition ~lementaire comparee des chromoproteides respiratoires.L'on possede actuellement des donnees sur la composition des quatre

ehromoproteides respiratoires eristallises. CelIe des Mmoglobines aetedetermines par de tres nombreux auteurs et parmi les valeurs existantdans la litterature l'on peut eonsiderer celles determinees par Abder­halden (C%, H%, N%, Fe%) et Timar (SOlo) sur l'Mmoglobine duCheval comme les plus exactes. La composition de la chlorocruorinecristallisee de Spirographis Spalanzanii a ete recemment etudiee parFox et Roche (15). CelIe des hemocyanines et d'une hemerythrinea ete exposee dans Ie tableau N. J'ai reuni ci-dessous (tableau V) lesvaleurs moyennes de la composition des quatre chromoproteides respi­ratoires, d'apres divers auteurs.

Chacun des quatre pigments respiratoires possede done une com­position particuliere, tenant probablement it la constitution de sa partieproteique plus qu'a son groupement prosthetique , car eelui-ei n'est,probablement dans tous les cas, qu'une fraction quantitativement peuimportante de la molecule. Bien plus, il existe, on l'a vu, des differencesde composition entre les pigments d'un meme type 'chez les diversanimaux: ni les hemoglobines des espeees differentes de Vertebres oud'Invertebres, ni les Mmocyanines des divers Mollusques, des Crustaees,des Arachnides, ne sont identiques.

LA COMPOSITION DES HEMOCYANINES ET DE L 'H:brnRYTHRINE ETC. 95

Tableau V.Composition moyenne des chromoproteides respiratoires.

Chromoproteide II C% IHOjo I N% S% leuouFe% Auteur

Hemoglobine de II ICheval. . . '1154'75 6· 98 17·35 0·57 0·38 Fe A bderha Iden -Timar

Chlorocruorine I

de Spirographe ! 49·2 7· 3 15·4 2·6 1·2 Fe Fox et RocheH' . .1emooyamne I

d'Escargot. . 53·09 6·84 15·15 0·74 0·25 Cu Hernler-Philippi-Hemooyanine de Roche

Crabe. 53·15 6·62 16·83 0·95 0·17 Cu RocheHemerythrine de

Siponcle ... i 53·34 6·54 16·78 1·74 1·01 Fe RocheII

Chez desanimauxvoisins par leurplacedans la classificationzoologiqueouleur moded'existence et possedantdespigmentsrespiratoires differents,la partie proteique de ces corps ne presente-t-elle pas une constitutionsemblable? Entre la chlorocruorine, I'hemoglobuline et l'hemerythrinede divers Annelides polyehetea- par exemple, n'existe-t-il pas qu'unedifference de groupement prosthetique? S'il en etait ainsi, il faudrait,chez les invertebres, completer nos idees sur la specificite des chromo­preteides respiratoires par une notion nouvelle: a cote de la specificitedue a la diversite des proteines dans Ie pigment sanguin des animauxzoologiquement trea eloignes, comme l'Arenieole et le Cheval, ne peut-onpas envisager qu'il en existe une autre, basee sur l'analogie de com­position de la proteine et la diversite du groupement prosthetique chezdes animaux de genre voisin, dans Ie meme ordre, celui Annelides poly­chetes par exemple?

R~sum~.

1. L'hemocyanine d'une meme espece animale presente une com­position eIementaire constante, sauf peut-etre pour Ie soufre.

2. Les Mmocyanines de diverses espeees de Mollusques (Helixpomatia et aspersa, Octopus vulgaris, Eledone moschata, Sepia officinalis)de Crustacea (Carcinus moenas, Maia squinado, Dromia vulgaris) duLimulus polyphemus (Arachnide) ont une composition differente,

Celles de tous les Mollusques etudies ont une teneur en cuivre de0,25%, celIe des Orustaces et de la Limule de 0,17, 0·18%. La teneur

1 L'on rencontre, par exemple de l'hemoglobine dans Ie sang d'Arenicolamarina, de Ill. chlorocruorine dans celui de Spirographis Spallanzanii, de I'Mm­erythrine dans celui de Magelona papiUicornis.

96 JEAN ROCHE: LA COMPOSITION DES HEMOCYANINES ETC.

en azote et en soufre du pigment de chaque classe (Mollusques gastero­podes et cephalopodes, Crustacea) presente une valeur particuliere, Lesoaraeteres physico-chimiques ou physiologiques de ces divers pigmentssont done en rapport avec des differences de constitution de leur partieproteique,

3. La composition des I'hemerythrine du Siponcle a ete determinee,Elle differe considerablement de celIe des hemocyanines et des autresehromoproteides respiratoires.

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