La Cytogénétique de l’autre côté de la méditerranée

Expérience du Département de Génétique Médicale de l’INH (1992-2014)

Présenté par : A. NATIQ

ATC/ACLF LYON 2014

Fondé en 1932

DGM en 1991

Responsable qualité

Secrétariat

Formation et Recherche

Projets de recherche

Bases de données

Enseignement

Stages

Coopérations

Département de Génétique MédicaleInstitut National d’Hygiène

Professeur Abdelaziz SEFIANI

Génétique Clinique

Conseil génétique

Dysmorphologie

Oncogénétique

Laboratoire

GénétiqueMoléculaire

Diagnostic moléculaire

Epidémiologie moléculaire

Anténatale

Postnatale

CytogénétiqueMoléculaire

Caryotype constitutionnel

Caryotype hématologique

Cytogénétique Constitutionnelle

Techniques de cytogénétique maitrisées

• Caryotype standard et en haute résolution• Techniques de marquage :

Bandes C, NORS…

GTGRHG

Bilan cytogénétique constitutionnelle

8234 caryotypes réalisés

Bilan : 1992-2010

27%

Bilan 2010-2014

2662 caryotypes réalisés

0

100200

300400

500600

700

800

No

mre

de t

ests

2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013

Années

Nombre d'analyses de cytogénétique - 2007-2013

> 30%

Augmentation du taux de détection des aberrations chromosomiques de 31% VS 27%

Indications de caryotypes bien posés

Mise en place de la FISH

1ère FISH réalisée au DGM en 2002

Appareil à PCR = Hybrite

Tampon de dénaturation et hybridation maison

Photomicroscope , film couleur Ektachrome 400 ASA

HISTOIRE DE LA FISH AU DGM (1) Technique à la provençale

Recherche de la del 22q11???

HISTOIRE DE LA FISH AU DGM (2)

2007 : acquisition d’un Cytovision avec un module FISH d’acquisition et d’analyse d’image

2010 : technique de routine

BILAN 2010-2014

194 FISH réalisées

130

34

30

postnatalDPNOncohématologique

La pêche est bonne !!!

Caractériser une anomalie chromosomique dépistée sur le caryotype:® définir le nombre de chromosomes impliqués dans un réarrangement® préciser l’origine d’un marqueur chromosomique surnuméraire

Rechercher un syndrome microdélétionnel connu après orientation clinique

Rechercher une mosaïque® syndrome de Turner ® Trisomie 21

Pour quelles indications?

A- FISH en Diagnostic Constitutionnel Post-natal

26 Diagnostic positif / 28 suspicions (90%)

46,XY.ish del(7)(q11.23q11.23)(ELN-)

SYNDROMES MICRODELETIONELS

Williams Beuren Syndrome (del 7q11.23)

• 7 cas diagnostiqués /25 suspicions

46,XY.del(22)(q11.2q11.2)(TUPLE1-)

SYNDROMES MICRODELETIONELS

Syndrome del 22q11.2

• 4 cas diagnostiqués / 10 suspicions

46,XX.ish del(15)(q11.2q11.2)(SNRPN-)

MICRODELETION SYNDROMES

Prader Willi Syndrome ( Paternal del 15q11-q13)

• 1 cas diagnostiqué / 5 suspicions• Microdeletion = 70%

46,XX.ish del(15)(q11.2q11.2)(UBE3A-)

Angelman syndrome (Maternal del15q11-q13)

SYNDROMES MICRODELETIONELS

Depuis janvier 2014 mise en place de la Methyl PCR pour le diagnostic du syndrome de PW et AS.

46,XY.ish del 17p13.3

17p13.3

17qter

SYNDROMES MICRODELETIONELS

Miller Dieker Syndrome (17p13.3)

47,XY,+mar.ish idic(15)(D15Z1 ++, D15S10 ++, PML-) de novo

CEP (D15Z1)

D15S10/PML

Identification de l’origine d’un marqueur surnuméraire SMC (1)

Identification de l’origine d’un marqueur surnuméraire SMC (2)

Crises tonico-cloniques, Déficience intellectuelleRetard de langage, Ataxie, rires immotivés.

47,XX,+mar

Syndrome d’Angelman par UPD + SMC 15

Identification de l’origine d’un marqueur surnumeraire SMC (3)

Identification d’un SMC der 22 (trisomie partielle du chromosome 22 )

47,XY,+mar.ish der (22) (TUPLE 1+, BCR-)

Tuple 1

22q13

Locus BCR

Syndrome de l’Homme 46,XX SRY+

CEP X

SRY

46,XX,Xp22.3(SRY+)

Caractérisation d’une translocation équilibrée t(5;8)pat

Translocation t(5;8) équilibrée

WCP 5

& réciproque

Sonde périmée en 2002 Que dit l’accréditation ??

Age : 3 ans

retard psychomoteur

Dysmorphie faciale: hypertélorisme, épicanthus, strabisme convergent gauche, philtrum long .

Caractérisation par FISH d’une délétion terminale 10q chez une patiente avec

retard de développement

46,XX,del(10)(q25q26)?

Tel 10q

Tel 10p

46,XX,del10q26.ish(10qterx1)

Recherche de la trisomie 21 sur amniocytes

o Age maternel

o Signes d’appel échographiques, biochimiques ou génétiques

cohorte de 34 femmes enceintes

B- FISH en diagnostic prénatal

Pour quelles indications?

Rassurer 29 couples

amniocytes avec deux spots rouges

du chromosome 21

Résultats rapides: en 24 heures.

Détecter 4 cas de trisomie 21

Cas N° 1: Cas N° 27:

Age: 42 ans Age: 34

Clarté nucale: 5,5 mm Clarté nucale: non faite

Risque estimé par triple test: 1/10 Risque estimé par triple test: 1/200

Cas N° 13: cas N° 31:

Age: 38 ans Age: 41

Mère d’enfant trisomique 21 Clarté nucale: 7,2 mm

t(14;21)mat ( risque de 1/5)

amniocytes avec trois spots

rouges spécifiques du

chromosome 21

® Recherche du gène de fusion bcr/abl:

Index mitotique: très faibleQualité des métaphases: médiocre

® suivi de la Maladie Résiduelle (bcr/abl): évaluation du traitement

®Recherche de chimérisme dans les allogreffes

Pour quelles indications ?

C- CYTOGENETIQUE HEMATO-ONCOLOGIQUE

Bilan en Oncohématologie

34 FISH réalisées

o 24 FISH pour contrôle : évaluation du traitement o 9 FISH pour Diagnostic: recherche de gène de fusion bcr/ablo 1 FISH pour recherche de chimérisme (allogreffe)

nuc ish(BCRx2)(ABLx2)[100]

nuc ish(BCRx3)(ABLx3)(ABL1conBCRx2)[100]

nuc ish(BCRx2)(ABLx2)(ABL1conBCRx1)[100]

Recherche de chimérisme

99% de noyaux XX1% de noyaux XY

- Allogreffe de la moelle osseuse

- Sonde CEPX/CEPY

nuc ish(DXZ1,DYZ3)[2]//(DXZ1X2)[198]

D16

Amniocyte

Blastes

Cellule buccaleNoyau interphasiquechromosomes

RESTE T-IL ENCORE DES CELLULES À HYBRIDER??

spermatozoides blastocystes blastomères

LIMITES

Non disponibilité d’une banque de sondes

Thomas LIEHR Ph.D

Précision de l’origine d’un marqueur chromosomique

Identification d’un marqueur chromosomique der 22

46,XX,22ph++mat

WCP 21

LSI 21

Chromosome analysis on blood cell suspension (slides) sent in April2012.

Indication :Further clarification of a karyotype 46,XX,der(22)

Molecular-cytogenetic report:46,XX,22ph++ mat

Fille de 10 ans, retard mental modéré, retard de langage , pas de dysmorphie faciale.

caryotype: 47,XX,+mar[12]/46,XX[10]

Précision de l’origine d’un marqueur chromosomique

WAGR SYNDROME ????

Délétion interstitielle 20p

Age : 6ansNon consanguinSouffrance néonataleRetard des acquisitions psychomotricesFente palatineLégère dysmorphie faciale

Délétion 20(p11p12) ??

46,XY,del(20)(p12p12)

Fruits de collaboration

22 ans de

liens très

forts avec

l’ATC !

1992-

2014

MERCI