Maeva DUFIES

Equipe Gilles PAGES

Les vaisseaux lymphatiques ; une arme redoutable de

dissémination métastatique en réponse aux anti-angiogéniques

Les vaisseaux lymphatiques ; une arme redoutable de

dissémination métastatique en réponse aux anti-angiogéniques

IntroductionIntroduction

Tumoral

Normal

Majorité de Carcinomes Rénaux à cellules claires (RCC)

Survie à 5 (grade IV) : 10 - 20%

80% des RCC sont mutés pour le gène von Hippel Lindau (vhl) induisant une surexpression de VEGFA

Traitement de référence en première ligne : ITK anti VEGFR (sunitinib)

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib inhibe VEGFR, CSFR, Kit, RetLe sunitinib inhibe VEGFR, CSFR, Kit, Ret

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinib

Diminution de l’angiogenèse

Mort des cellules RCCDiminution des

métastases

Le sunitinib bloque le développement des métastasesLe sunitinib bloque le développement des métastases

Diminution de l’angiogenèse

Mort des cellules RCCDiminution des

métastases

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibDes progressions/résistances apparaissentDes progressions/résistances apparaissent

ProgressionRésistance

Diminution de l’angiogenèse

Mort des cellules RCCDiminution des

métastases

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinib

ProgressionRésistance

METASTASES

Des progressions/résistances apparaissentDes progressions/résistances apparaissent

- VEGFA – Angiogenèse – Vaisseaux sanguins

- VEGFC – Lymphangiogenèse – Vaisseaux Lymphatiques

Etude de l’effet du sunitinib sur l’expression du VEGFC

par les cellules tumorales

2 voies de dissémination métastatique:2 voies de dissémination métastatique:

Résultats in vitroRésultats in vitro

Le sunitinib induit l’expression de VEGFC Le sunitinib induit l’expression de VEGFC Lignée cellulaire de RCC

0100200300400500600700800900

ARN

mdu

VEG

FC (%

) CTsuni **

***

**

R4 R10 786 498

ARNm du VEGFC (qPCR)

0100200300400500600700800900

ARN

mdu

VEG

FC (%

) CTsuni **

***

**

R4 R10 786 4980

500100015002000250030003500

VEG

FC (%

)

CTsuni***

***

******

R4 R10 786 498

Le sunitinib induit l’expression de VEGFC Le sunitinib induit l’expression de VEGFC Lignée cellulaire de RCC

ARNm du VEGFC (qPCR) VEGFC sécrété (ELISA)

0

100

200

300

400

500

ARN

mdu

VEG

FC (%

) CTsuni

**

**

TF M CC0

500

1000

1500

2000

2500

VEG

FC (%

)

CTsuni

*

*

**

TF M CC

Le sunitinib induit l’expression de VEGFC Le sunitinib induit l’expression de VEGFC

ARNm du VEGFC (qPCR)

Lignée cellulaire de RCC

Cellules primaires de RCC

VEGFC sécrété (ELISA)

ARNm du VEGFC (qPCR) VEGFC sécrété (ELISA)

0100200300400500600700800900

ARN

mdu

VEG

FC (%

) CTsuni **

***

**

R4 R10 786 4980

500100015002000250030003500

VEG

FC (%

)

CTsuni***

***

******

R4 R10 786 498

- Augmentation de la transcription?

- Augmentation de la stabilité de l’ARNm?

Augmentation de l’ARNm du VEGFCAugmentation de l’ARNm du VEGFC

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinib

gène du vegfc786 498

Activ

ité lu

cifé

rase

(%) CT

suni *** ***

100

0

200

300

400

TF CC

Activ

ité lu

cifé

rase

(%) CT

suni**

***

100

0

200

300

Cellules primaires de RCC

Lignée cellulaire de RCC

luciferase

Promoteur du VEGFC

Le sunitinib augmente la transcription de VEGFC Le sunitinib augmente la transcription de VEGFC

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la transcription de VEGFC Le sunitinib augmente la transcription de VEGFC

VEGFC

786 498

Activ

ité lu

cifé

rase

(%) CT

suni *** ***

100

0

200

300

400

TF CC

Activ

ité lu

cifé

rase

(%) CT

suni**

***

100

0

200

300

Cellules primaires de RCC

Lignée cellulaire de RCC

luciferase

Promoteur du VEGFC

gène du vegfc

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.4

sunitinib 26.5

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6ARN

mdu

VEG

FC (%

)

DRB (h)

CTsuni

**

Lignée cellulaire de RCC

Cellules primaires de RCC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.1

sunitinib 16.7

ARE

ARNm du VEGFC

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.4

sunitinib 26.5

Lignée cellulaire de RCC

Cellules primaires de RCC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.1

sunitinib 16.7

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

ARE

ARNm du VEGFC

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6ARN

mdu

VEG

FC (%

)

DRB (h)

CTsuni

**

ARE

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinib

ARNm du VEGFC

Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

VEGFC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.4

sunitinib 26.5

Lignée cellulaire de RCC

Cellules primaires de RCC

Traitement T1/2 (h)

CT 4.1

sunitinib 16.7

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

HuRPP

ERK p38

Forme active

0

20

40

60

80

100

0 2 4 6ARN

mdu

VEG

FC (%

)

DRB (h)

CTsuni

**

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

suni (h) 0 1 2 4 6

p-p38

HSP60

p38

p38 ERK

ARE

ARNm du VEGFC

VEGFCHuR

PP

ERK p38

Forme active

p-ERK

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

suni (h) 0 1 2 4 6

p-p38

HSP60

p38

p38 ERK

ARE

ARNm du VEGFC

VEGFCHuR

PP

ERK p38

Forme active

p-ERK

ERK

p38

PD 184352

SB 203580

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

suni (h) 0 1 2 4 6

p-p38

HSP60

p38

p38 ERK

ARE

ARNm du VEGFC

VEGFCHuR

PP

ERK p38

Forme activeERK

p38

PD 184352

SB 203580

HSP60

p-ERK

p-p38CT PD SB CT PD SB

CT sunitinib

0

1

2

3

4

5

6

CT PD SB

AR

Nm

du V

EGFC

CTsuni

***

p-ERK

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibLe sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

ARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

p38

VEGFCHuR

PP

ERK p38

Forme active

p-ERK

suni (h) 0 1 2 4 6

p-p38

HSP60

p38

HuR

HuRPP

Forme active

ARE

ARNm du VEGFC

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

p38

HuRPP

Forme active

Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC

HA-CT Myc-HuR0

500

1000

1500

ARN

m d

u VE

GFC

(%)

CHIP

ARE

ARNm du VEGFC

HuRHuRPP P P

HuRPP

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinibARE

ARNm du VEGFC

TTP HuR

HuR

HuR

TTP

TTP

Stabilisation de l’ARNm

Dégradation de l’ARNm

p38

HuRPP

Forme active

Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC Le sunitinib augmente la stabilité de l’ARNm du VEGFC AR

Nm

du V

EGFC

CTsuni

**

0

100

200

400

siCT siHuR

ARE

ARNm du VEGFC

HuRHuRPP P P

HuRPP

Stabilisation de l’ARNm du VEGFc

ARE

VEGFR

KitRet CSFR

sunitinib

ARNm du VEGFC

gène du vegfc

VEGFC

p38

HuRPP

Forme active

Le sunitinib induit la sécrétion du VEGFC par les RCCLe sunitinib induit la sécrétion du VEGFC par les RCC

HuRHuRPP P P

HuRPP

Stabilisation de l’ARNm du VEGFc

Résultats in vivoRésultats in vivo

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Traitement par sunitinib

15 jours

Métastases / survie

p=0.0257

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Traitement par sunitinib

15 jours

Métastases / survie

p=0.0257 p=0.0242

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Traitement par sunitinib

15 jours

Prox1 : vaisseaux lymphatiques

Métastases / survie

0

20

40

60

80

CT suni

Tum

eura

vec

vais

seau

xly

mph

atiq

ues

(%)

*

CT

suni

IHC LYVE1 (vaisseaux lymphatiques)

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Traitement par sunitinib

15 jours

Métastases / survie

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

Le sunitinib augmente l’expression de VEGFC et la lymphangiogenèse chez la souris

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Surv

ie(%

)

100

50

0

Jours après implantation0 10080604020

p=0.023

VEGFC faible

VEGFC élevé

résection de la tumeur primaire

Implantation orthotopique des cellules de RCC

Traitement par sunitinib

15 jours

Résultats chez les patients atteints de RCC

Résultats chez les patients atteints de RCC

M0

M1

chirurgie

RCC

Métastases

rein poumons

Traitement par sunitinib

Traitement

M0

M1

chirurgie

RCC

Métastases

rein poumons

Traitement par sunitinib

Néoadjuvant

Traitement

M0

M1

chirurgie

RCC

Métastases

rein poumons

Traitement par sunitinib

Néoadjuvant

Traitement

Le sunitinib augmente la lymphangiogenèse chez les patients RCC traité par sunitinib en néoadjuvant

Le sunitinib augmente la lymphangiogenèse chez les patients RCC traité par sunitinib en néoadjuvant

CT suni

0

10

20

30

40

50

60

70

80

CT suni/axi

Tum

eurs

avec

vai

ssea

uxly

mph

atiq

ues

(%)

M1M0

**

IHC Podoplanine (vaisseaux lymphatiques)

Le sunitinib est efficace chez les patients RCCLe sunitinib est efficace chez les patients RCC

0

20

40

60

80

100

120

patie

nts

(%)

sunitinib autres(INF, BVZ…)

Métastases ganglionnaires + nouveaux sites métastatiques

mais induit en effet secondaire une augmentation des métastases ganglionnaires et de

nouveaux sites métastatiques chez 30% des patients

mais induit en effet secondaire une augmentation des métastases ganglionnaires et de

nouveaux sites métastatiques chez 30% des patients

ConclusionConclusion

ARE

sunitinib

ARNm du VEGFC

gène du vegfc

VEGFC

p38

HuRHuRPP P P

HuRPP

Augmentation de la transcription

+Stabilisation de l’ARNm

du VEGFc

Métastases

Lymphangiogenèse

Processus d’échappement au sunitinibProcessus d’échappement au sunitinib

Sunitinib et anti-immune checkpoint ?Sunitinib et anti-immune checkpoint ?

Association ITK + anti-PD1/PDL1 ???

???Test de l’efficacité des combinaisons ITK + anti-immune checkpoint

(Keynote-426, CheckMate214, CLEAR, CheckMate 9ER….)

1) Sunitinib induit la lymphangiogenèse = échappement métastatique

2) Sunitinib induit l’expression de PDL1 par les cellules tumorales = anergie du système immunitaire

Association ITK + anti-PD1/PDL1 ???

1) Sunitinib induit la lymphangiogenèse = favorise l’accès des cellules immunitaires au sein des métastases

2) Anti-PD1/PDL1 = réactivation du système immunitaire = élimination des métastases

???Test de l’efficacité des combinaisons ITK + anti-immune checkpoint

(Keynote-426, CheckMate214, CLEAR, CheckMate 9ER….)

Merci!Merci!Equipe Gilles Pagès

Renaud GrépinSandy Giuliano

Pape NdayeAudrey ClarenJulien ParolaValérie Vial

Marilena Lupu-Plesu

CHU de Nice AnatomopathologieDamien Ambrosetti

Centre Antoine Lacassagne

Département d’OncologieDelphine Borchiellini

Jean-Marc Ferrero

Département StatistiqueMarc Ettaiche

Emmanuel Chamorey

Université de BordeauxLindsey S CooleyAndréas Bikfalvi

CHU de BordeauxAlain Ravaud

Jean-Christophe BernhardBanque UroCCR

Roswell Park Cancer Institute

John M EbosMichalis Mastri

King Faisal Specialist Hospital

and Cancer CenterWalid Moghrabi

Khalid Saad Khabar

Sunitinib Stimulates Expression of VEGFC byTumor Cells and Promotes Lymphangiogenesis

in Clear Cell Renal Cell Carcinomas

M Dufies, S Giuliano, D Ambrosetti, A Claren, P Ndiaye, M Mastri, W Moghrabi, LS Cooley, M Ettaiche, E Chamorey, J Parola, V Vial, M Lupu-Plesu, JC Bernhard, A Ravaud, D Borchiellini, JM

Ferrero, A Bikfalvi, JM Ebos, KS Khabar, R Grepin and G Pages

Cancer Research 2017