Madeclno et Maladies Infectleuses. t 9 7 2 - 2 - t 0 - 351-35" /

L'immunolluorescence quanlilalive dans le

parasiloses Probl mes pratiques actuels *

par J. BENEX **

diaonoslic des

Une r~action d ' immuno f luore sc e nc e p a r e m e n t quali lat ive ne saurait , d elle seule, assurer un ~l~ment de haute oaleur en mali~re de diagnost ic parasilolo- gique. II est ndcessaire de considdrer le caract~re quanl i la t i f de la r~ctction, ce qui entralne alors un cer lain hombre de di[[icull~s. Nous avons tentd d 'appor ter quelques" prdcis ions perme t tan t de normal i ser les t echn iques et de s landardiser les rdsultats. Nous l imi terons cette ~tude aux cas de trois he lmin th iases : lc~ disto- matose, la bi lharziose, l 'hydat idose, el de lrois protozooses : ' l 'amibiase , la toxo- piasmose, la l e i shmaniose ; ces e x am e ns ~tant les plus demand~s en mati~re de diagnost ic s~rologique parasi taire.

Depuis l ' a d a p t a t i o n de la t echn ique d ' immunof luo - r e scence (I.F.) au d i agnos t i c s6rologique des affec- t ions pa r a s i t a i r e s , d ' exce l l en t s r6sul ta ts ont 6t6 ob- tenus et cette m~thode est l a rgemen t ut i l is6e dans la quas i to ta l i t6 des he lmin th i a se s et des pru to- zooses (1).

Lcs moda l i t6s t echn iques en sent m a i n t e n a n t b ien 6tabl ies et l 'usage d ' un c e n t r e - c o l o r a n t de con t ra s t e p re sque tou jours pr6conis6 .

Ains i d6tinie, l ' i m m u n o f l u o r e s c e n c e qua l i t a t ive ne pose pas de gros probl~mes . I1 n 'en est pas de m6me pou r l ' imnmnof luo re scence quan t i t a t ive o5 i n t e r v i e n n e n t ce r ta incs diff icul t6s de lccturc , d ' in - t e rp r6 t a t i on et de moda l i t6s t echniques .

Avant d ' e n v i s a g e r un ce r ta in hombre de ces cas p a r t i c u l i e r s auxque ls l ' u t i l i s a t eu r se heur te en p r a t i q u e courantc , il semble n6cessa i re de p r 6 c i s e r quelques po in t s d e n t l ' obse rva t ion dol t pe rme t t r e la n o r m a l i s a t i o n des t echn iques ct, p a r lh, la con- f ron ta t ion va lab le des r6sul ta ts ob tcnus p a r d i f f , - ren t s l abora to i r e s .

Nous ne r a p p e l l e r o n s pas les t echn iques souvent d~jh tr~s b ien d~cr i tes , mats in s i s t e rons seu lement sur ce r t a ines p r6cau t ions ut i les h la bonne expres - s ion des r6sultats .

CONDITIONS EXPERIMENTALES P o u r le mat6r ie l opt ique , il y a n6cessit6 de

c o r r e s p o n d a n c e en t re les spec t r e s d ' a b s o r p t i o n et d '~miss ion , et d ' u t i l i s a t i on de filtre d ' e x c i t a t i o n de la m~me sensibil i tY.

Les s6rums t6moins do ivcn t 6tre conserv6s avec un soin pa r t i cu l i e r . A 37~ un s~rum p e r d les 3/4 de son t i t re en une semaine ; "~ 4~ 90 % en sept

* Manuscrit rcqu lc 29 avril 1972. ** Service de Parasitologie, Insti tut Pasteur, 25, rue du

Dr-Roux, F-75, Paris (159.

s ema ines ; h - - 20~ le t i t re in i t i a l peut se c o n s e r v e r deux m o i s ; h - - 195"C, p e n d a n t p lus i eu r s ann6es. La l y o p h i l i s a t i o n fai t p e r d r c i m m 6 d i a t e m e n t une h deux d i lu t ions , mats la conse rva t ion est ensui te ind6finie. Pou r la toxop lasmose , Niel conse i l le de c o n s e r v e r le s6rum inac t iv6 h - - 20oC, apr~s di lu- t ion au 1/2 dans le glyc6rol .

La lec ture des r~sul tats dol t 6tre fai te p a r une m6me p e r s o n n e et la p r o g r e s s i o n des d i lu t ions d e 1/3 p a r a i t la mei l l eure . Nous r a p p e l l e r o n s les he rmes conse i l l6cs p a r I'O.M.S. = + + + b r i l l ance ext reme, objet lumineux , r6sul ta t ( + + + ) p o s i t i f ; + + obje t tr~s marque , sans b r i l l ance vra ie , r6sul- tat ( + et ___) dou teux ; obje t vcr t j aune sans aucune b r i l l a n c e et obje t ve r t rouge ou rouge, r6sul ta t (0) n6gatif.

Apr~s avo i r r appe l6 les p r6cau t ions va lab les pou r route a p p r 6 c i a t i o n op t ique en I .F. app l iqu6e h la pa ras i to log ie , nous a l lons e x a m i n e r quelques cas p a r m i les d i a g n o s t i c s c l i n iques les p lus d e m a n d 6 s ell le p rob l~me de la mise en 6v idence des a n t i c o r p s est p r i m o r d i a l . Nous e x a m i n e r o n s : t ro is he lmin- th iases : la d i s tomatose , la b i lha rz iose , l ' hyda t i - d o s e ; t ro i s p ro tozooses : l ' amib iase , la toxop las - mose, la l e i shmaniose .

Dans ces affect ions, l ' a p p o r t de l ' I .F , est in t6res- sant, soit que le d i agnos t i c en es t d i f f ic i le ou im- poss ib le m a c r o s c o p i q u e m e n t (hyda t idose , toxoplas - mose), soi t que la p r e p a r a t i o n des antigb.nes so lubles pose des p rob l~mes p a r t i c u l i e r s (b i lharz iose , ami- biase, l e i shmaniose ) .

DISTOMATOSE Le mat6r ie l den t on d i s p o s e r a sera , soi t des

adu l tes (coupes h cong61ation d i r e c t e ou apr~s in- c lus ion dans un t issu) , soi t des ceufs, soi t des m i r a c i - d iums.

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L e s c e u f s :

I ls p r6senten t toujours une auto-f luorescence non sp6cif ique, done inut i l i sable .

L e s m i r a e i d i u m s :

IIs ont une r6act iv i t6 incons tan te . Les images ob- tenues sont souvent trbs belles ; la f luorescence s '6ta- b l i t "fila l imi te de la cu t icu le ct les c i ls sont forte- ment f luorescents . Le contenu in te rne de la iarve est no rmale lnen t non f luorescent .

Les diff icult6s v iennen t de ce que : une f luorescence in t e rne pcut a p p a r a i t r e . Elle

n 'es t pas sp6cif ique. Elle s ignale une souf f rance que lconque du m i r a c i d i u m avant son u t i l i sa t ion qui pe rme t la di f fus ion e t l a f ixation non sp6cif ique du f luo rochrome ;

si le m i r a c i d i u m est p a r t rop alt6r6, ta fluo- r e scence ne se p r o d u i t p lus avec du s~rum posi t i f . II est n6cessa i re d ' a v o i r des s t ruc tu res in tac tes aux si6ges des si tes an t ig6niques sp6cif iques p o u r ob ten i r une bonne f luorescence ;

- - i l a 6t6 s ignal6 quelques fausses r6ac t ions po- s i t ives avec des s6rums t6moins n6gatifs, mats eeci pus au-delfi de la d i lu t ion 1/2.

En cons6quence, il est de r/~gle d ' a p p r 6 c i e r la f luorescence du m i r a c i d i u m en num6ran t le pour- centage de ceux ayan t une forte f luorescence fi la p6r iph6r ie . Pou r d o n n e r un r f su l t a t posi t i f , il est n6cessa i re d ' a v o i r au moths 50 % d ' i n d i v i d u s fluo- rescen ts et le seuil de pos i t iv i t6 du s6rum doi t 6tre p r i s au 1/4. Les taux lnax inmm sonl du 1/64 ~.

L e s c o u p e s d ' a d u l t e s :

Elles r ep r6sen ten t le me i l l eu r mat6r ie l . Les sec- t ions peuven t 6Ire r6atis6es selon t ro is lnoduli t6s t echniques :

coupe d ' une seule douve ; emp i l emen t de 2 ou 3 donves adul tes ; coupe d ' u n e douve inc luse duns till at t ire t issu : musc le de cobaye (1), eoeur de sour is (6).

Dans de relies coupes, il cst i n d i s p e n s a b l e de d i f f6 renc ie r les f luorescences sp6cif iques et non sp6cif lques. La f luorescence sp6cif ique sc loca l i se :

dans la douve : 'fi la cut icule , aux cel lules des caeca et des canaux excr6 teurs ; it l ' ex t6 r i eu r du pa ras i t e , duns le cas off la douve adul te est coup6e inc luse duns un frag- ment h6pat ique .

Cer ta ines cel lules du p a r e n e l t y m e h6pa t ique pr6.- sentent une f luorescence sp6cif ique due 'h leur iln- p r6gna t ion p a r les p r o d u i t s du m6tabol i sme du Yers. Les cel lules p h a g o c y t a i r e s et les 6os inophi les sont par t icul i /~rement touch6s.

A l ' ex t r6me, un f ragment de t issu h6pa t ique d6- pou rvu de pa ra s i t e s p o u r r a p r6sen te r une f luores- cence sp6cif ique ( an t i co rps anti-Fasciola hepal ica) tout le long du t ra je t suivi pa r le pa ra s i t e au cours de son c h e m i n e m e n t p o u r a t t e ind re son p o i n t de f ixat ion.

A ins i donc , l ' immunof luo re scence p e r m e t de met- Ire en 6v idence ' f i l a lois les ant ig~nes cu t i cu la i r e s et les an t igbnes m6tabol iques .

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P a r contre , une auto-f luorescence non sp6cif ique existe dans les g landes v i te l l ines et les cel lules de la spcrmatogen/~se. Cer ta ins agr6gals ce lh l la i res dis- s6min6s peuven t p r6sen te r une ce r t a ine f luorescence non sp6cif ique rdsul tant tie la f x a t i o n du fluoro- c l l rome sur ties s t ruc tu res altdr6es.

C o n s e q u e n c e p r a t i q u e :

Afin ( l ' ob tcn i r ties l '~sultals stirs et co lnpa ra t i f s et de f ae i l i l e r la lec ture h des obse rva teu r s d ivers , il nous p a r a i t souha i t ab l e - - pour le diagnost ic pra- t ique eouranl - - d '6 l ab l i r celui ei un iquemen t sur let [ luorescence de la cut icule de doaves adultes. Dans ce cas, de nolnbreuses obse rva t ions di f f ic i les se ront 61imin6es.

BILHARZIOSE

La diff icul t6 tie la p r 6 p a r a t i o n des ant ig6nes (il taut 22.000 adul tes pou r 1 g de p o u d r e s~che) f l i t de I ' I .F. une ln6thode de choix . Ici encore , on peut d i s p o s e r d ' un mat6r ie l var i6 : ceufs, m i r a c i d i u m s , ce rca i res , adul tes , coupes de foie d ' an i lna l paras i t6 , coupes d ' h6pa to -pa nc r6a s de lnolhlsques infest6s. Les r6snl tats obtenus ne p o u r r o n t donc 6ll'e com- p a r e s que ~'ils sont ~tabl is su r du mat6r ie l iden- tique.

L e s o e u f s :

Ici enco re p r~c i sons tout de suite l ' ex i s t ence d ' une au to- f luorescence spontan~e tie la coque ties ceufs qui r e nde n t eeux-e i inu t i l i sab les .

L e s m i r a c i d i u m s :

Leur c o m p o r t e m e n t est i dcn l ique h eelui des mi i ' ac id iu lns de douves e t l e s r emarques fai tes au sujet de c rux -e l t rouvent , 1,t aussi , leur a pp l i c a t i on .

L e s e e r c a i r e s :

Elles sont un exce l len t lna!6ricl , peul-6tre le mei l - leur, mats qui p r6sen te d ' in ipoi ' t :mtes diff icul t6s tech- n iques pou r la f ixat ion. La f ragi l i t6 de l 'un ion de la queue it la t6te fai t que, t rop souvent , on fai l une l ec tu re su r des pa ra s i t e s sans queue. D 'au t re par t , il est tr6s diff ic i le d ' a v o i r des ee r ca i r e s il sa d i spos i t i on d ' une far, on con t inue pou r des d iagnos- t ics immuno log iques quo t id iens . Enfin la t e chn ique en tubes est p lus longue et sur tout p lus d61icate q u e l a t echn ique u t i l i san t des coupes h is to logiques .

Avec des s6rums tr6s posi t i fs , tout le co rps de la c e r c a i r e peut 6tre t luorescent , la i imi te c u t i c u l a i r e n ' a p p a r a i t pas comme dans le eas du m i r a e i d i u m . Les p r o d u i t s de secr6 t ion de ia ce r ca i r e p r6sen ten t 6galement une f luorescence sp6eif ique, sor te de halo, p r e n a n t na i s sance h l ' ex t r6mi t6 an l6 r i eu re et pou- r a n t s ' 6 tendre le long du co rps dn paras i t e .

L e s a d u l t e s :

La mei l l eu re t echn ique nous p a r a i t 6Ire celle qui u t i l i se les coupes h cong61ation de foie d ' a n i m a l e x p 6 r i m e n t a t e m e n t infest6. Dans ce cas, i l ne taut pas oub l i e r que par fo i s les adul tes peuven t a c q u 6 r i r de nouvel, les p ropr i6 t6s an t ig6niques au con tac t de

leurs h6tes. Pa ra s i t e et hdte sont i n t imemen t lids et peuvent l a i s se r a p p a r a l t r e ce r t a ines communau tds de mot i fs an t igdniques . On observe une f luorescence plus marqude au n iveau de la cu t icu le ; la rdact iv i t6 est i den t ique chez les mfiles et les femel les mats l 'u t6rus et son contenu, ceufs et g ranu les v i te l l ins , s o n t l e sidge, dans cet organe, de f luorescences non spdcif iques. Ndantnoins il peut ex i s te r une fluores- cence spdeif lque du m i r a c i d i u m h l ' i n td r i eu r de l'ceuf. En gdndral , il n 'y a pas de f luorescence du t':ssu hdpa t ique vois in , ni des va isseaux in t ra -hdpa- t iqnes, excep t ion fai te de ce r t a ins g ranu lomes in- f l ammato i res qui peuven t rdag i r pos i t ivement , blais, dans ce cas, il est poss ib le que ce phdnom~ne soit lid h une f ixat ion non spdcif ique du f luo rochrome grhce h la s t ruc tu re dense des fo rma t ions g ranu lo- mateuses .

R d a c t i o n s c r o i s d e s :

On peu t ob t en i r des rdsul la ts pos i l i f s avec des sdrums de sujets infestds p a r Schistosoma haemato- bium en u t i l i san t des coupes tie Schistosomct mansoni, mats les t aux ddtectds sont p lus fa ibles . Schislosoma japonicum ne donne pas de rdac t ion croisde.

C o u p e s d ' h ~ p a t o - p a n c r d a s de m o l l u s q u e s i n f e s t s :

De tel les p r d p a r a t i o n s sont u t i l i sab les et ont m~me l ' avan tage de ne pas ndcess i te r des coupes fai tes sous congdla t ion . Les sporocys te s et s ch i s tosomules prd- sentent une for te rdac t ion t luorescente spdci t ique. Ici , on ne note j ama i s de d i f fus ion dans les t issus ad jacen t s de l ' hdpa to -pancrdas . Ce matdr ie l est ex- cel lent pou r un d i a g n o s t i c p a r I .F. II 6r i te d ' a v o i r un cyc le h en t re ten i r .

H Y D A T I D O S E - K Y S T E H Y D A T I Q U E

Pour ce d iagnos t i c , le matdr ie l u t i l i sab le se com- pose de f r agmen t s de m e m b r a n e p ro l igd re et des scolex.

L 'u t i l i s a t ion de coupes fa i tes ~ p a r t i r de la mem- b rane p ro l igd re est p r a t i q u e m e n t a b a n d o n n d e main- tenant , c a r les rdsul ta ts obtenus ont dtd souvent dd- cevants , ceci t enan t sur tout aux diff icul lds de la rda l i sa t ion technique . Les coupes de m e m b r a n e g e r m i n a t i v e sen t en effet d ' une rda l i sa t ion ddl ica te ca r la m e m b r a n e est trds f ragi le e t r saute ~ lors de l ' exdcu t ion des coupes.

Aclue l lement , les deux t echn iques les p lns cou- r an te s u t i l i sen t les scolex, soi t d i r e c t e m e n t avec une f ixation en tubes ou sur lames, soi t aprds inc lus ion dans un t issu neut re (muscle de cobaye p a r exemple) ou un gel a p p r o p r i d ( r teck ~). Les deux pre- midres t echn iques ont pou r p r i n c i p a l e diff icul td l ' adhds ion sur l a m e s ; la t ro i s idme exige au prda- lable h l ' imnmnof luo re scence une m a n i p u l a t i o n lon- gue et ddl ica te .

Daus tous les cas, les scolex do iven t 6Ire lixds << v ivan t s ~. Si ceux-ci sen t ddgdndrds au moment de l ' u t i l i sa t ion , la f luorescence ne peu t avo i r l ieu. Seuls les mdtascolex , invaginds ou ddvaginds, p r en - nent la f luorescence . Les o r thosco lex , fo rmes non 6volut ives, ne do iven t pas 6tre p r i s en cons idd ra t i ou .

La d i f fus ion du f luo rochrome et des a n t i c o r p s est r endue imposs ib l e p a r la p rdsence d ' une p a r o i dpais- sic qui fa i t office de barriO.re

Ndanmoins , dans les mdtasco lex et les o r thoseo lex , une f luorescence non spdeif ique est tou jours v i s ib le au n iveau des c roche ts . I I n e faut dune pas en t en i r compte . Pal" eontre , il n 'y a j ama i s de f luorescence au niveau des ventouses , mdme avec des sd rnms for tement posi t i fs .

La m e m b r a n e anhis te prdsente , elle aussi , quel- quefois une f luorescence non spdcif ique, due "h sa compos i t ion . On sai t qu 'e l le in te rv ien t d 'ms la nu t r i - t ion du p a r a s i t e et doit , tie ce fair, e o n t e n i r d e s eons t i tuan t s de l 'hSte, non spdcif iqnes du pa ras i t e , qui peuven t d o n n e r l ieu il des phdnomdnes d ' i m m u - nof luorescence non pa ras i t a i r e s .

E n rdsum(~ :

Pour la t echn ique d ' i m m u n o f l u o r e s c e n c e app l iqude au d i agnos t i c du kys te hyda l ique , il faut u t i l i se r des scolex vivants , avo i r r ecours ~l une bonne f ixat ion ( formol /x 10 %) c a r une mauva i se f ixation e n t r a i n e des rdsul ta ts non-spdc i f iques . Ne ten i r compte que des mdtasco lex /t l ' exc lus ion des ventouses et des c roche ts , ne c ons idd re r une rdponse comme pos i t ive que si e l le i n t e rv i en t ~ une d i lu t ion du sdrum > 1/10 ~ Dans ces cond i t ions , une dch inococcose hdpa t ique ou v i scdra le donne, en gdndral , une rd- ponse pos i t ive en I.F., une dch inococcose pu lmo- na i re ou osseuse, une rdponse fa ib le ou nulle.

L E I S H M A N I O S E

L ' immunof luo re sc e nc e ne peut , en fait, 6tre ut i l i - sde que p o u r le d i agnos t i c de l e i shman iose viscd- ra le (Kala-Azar) ; e lm est i nu t i l i s ab le dans le cas de Bouton d 'Or ien t . Elle est ndanmoins poss ib le dans le d i agnos t i c des fo rmes cntandes il u l cd ra t ions mul- t ip les d 'A mdr ique dans lesquel les les taux t rouvds sent dlevds.

Le matd r i e l an t igdn ique peu t 6tre fourn i p a r : des a p p o s i t i o n s d ' o rganes paras i tds , des l e i shman ie s ma in tenues sur cu l tu res ce l lu la i res , des coupes '~ congdla t ion d ' o r g a n e s paras i tds , des formes lepto- nmnas fixdes d i r e c t e m e n t su r lames.

Cer ta ins au t eu r s ont dcr i t que les t echn iques ut i l i - sant les formes l e p tomona s d o n u e n t des t i t res supd- r i eu rs h eel les u t i l i san t des formes l e i shman iennes . Notre p r o p r e e xpd r i e nc e n 'a pas conf i rm6 ce fait . Au eon t r a i r e , les fo rmes l e p tomona s ne nous ont pas pa ru f x e r c o r r e c t e m e n t le f luorochrome. Aucune f luorescence v ra ie n 'a 6t6 rdvdlde p a r les t echn iques c lass iques . Nous avons, p o u r no t re par t , a t t r ibud eet 6tat de choses au fai t que les fo rmes l ep tomonas 6tant les fo rmes dvolut ives chez l ' Inseete , possd- da ien t peu de si tes an t igdn iques spdci f iques des ant i - c o r p s formds chez le Vertdbr6 con t re les fo rmes l e i shman iennes .

Les au t res an t igdnes figurds d o n n e n t en gdndra l des rdsul ta ts supe rposab le s . Une p lus g r a n d e fact- l i t6 de rda l i sa t ion t echn ique fera e ho i s i r l ' une ou l ' au t re .

353

Duns t o u s l e s cas, I ' I .F. ne peu t pus r e n d r e compte d ' un 6tat d ' immun i t6 ca r les a n t i c o r p s d i s p a r a i s s e n t tr~s r a p i d e m e n t apr~s gu~rison.

Le seul i nconv6n ien t de cel te m6thode est l ' ex is- fence de r~ae t ions crois~es avec ce r t a ines affect ions

T rypanosomes . Ceci pose un prob l~me pou r le d i agnos t i c d i f f6rent ie l de l e i shman ioses h u lcera - t ions mul t ip les qui ont les m~mes zones d ' end~mie que Trypanosoma cruzi.

TOXOPLASMOSE

Seul l ' i so lement du pa ras i t e apr/~s inoctf la t ion h la Sour is p e r m e t d ' a f f i rmer une toxoplasmose . Mats cee i n 'es t pus tou jours poss ib le e t l a mise en 6vi- dence des a n t i c o r p s se ra souvent le seul 616ment capab le de d 6 t e r m i n e r un d iagnos t i c . Le me i l l eu r exemple en est le cas de la femme ence in te off l '6volu t ion de la courbe des an t i co rps demeure l 'un i - que r6f6rence.

Sur le p l an p ra t i que de I ' I .F. au l abora to i re , les d ive r ses souches ont une va leur an t ig6nique compa- rable , mats les r6sul ta ts peuven t 6tre diff6rents se- Ion que les toxop lasmes p rov i ennen t d ' une asc i te de sour i s ou sont ma in t enus sur cu l tures ce l lu la i res .

Les plus uti l is6s sont na tu re l l ement les toxop lasmes p r o v e n a n t de l 'ascile de s'ouris, ca r l ' en t re t i en de la souehe est beaucoup p lus faci le . On peut m6me con- se rve r de tels toxop lasmes lyophi l i s6s et r6hydra t6s au m o m e n t de l 'u t i l i sa t ion . Un autre avantage de cet te t echn ique cst la faci l i t6 de ]a r~col te des orga- nismes.

Les diff icult6s se r e n c o n t r e n t au n iveau de mar- quage p a r le f luo rochrome qui est souvent i r r6gu l i e r el, en tous cas, toujours p lus fa ib le que celui ob- tcnu sur des toxop lasmes ma in t enus eu cul tures ce l lu la i res . D 'au t re par t , ce marquage a t te in t le co rps des toxoplasmes , ce qui n ' i n t e rv i en t j ama i s duns des toxop lasmes sur cel lules. Cette de rn i6 re diff icul t6 est ap l an i e en u i i l i san t le bleu Evans comme cont re - co lorant . Ce d e r n i e r masque la f luorescence du co rps du t oxop la sme et f a m i n e la lec ture fi l ' examen de la p6r iph6r ie .

L 'u t i l i s a t ion de toxop lasmes ma in t enus en cullures cellulaires a pou r p r i n c i p a u x avanlages : la r6gu- la r i l6 de la p r o d u c t i o n , la r i chesse tou jours impor - tante de la r6eolte, la p lus g r ande vi tal i t6 des loxo- p lasmes. La diff icult6 ma jeure est l ' en t re t i en d 'une tel le souche qui d e m a n d e des t e chn i c i ens en t ra in6s et du mat6r ie l sp6cial is6. Duns le cas de l ' u t i l i s a t ion de toxop lasmes ma in t enus sur cu l lu res ce l lu la i res , la l ec tu re de la f luorescence se fai l un iquemen t su r le m a r q u a g e p6r iph6r ique , le marque cy top l a smique 6tant p resque tou jours nul.

I1 nous faut s igna le r un ph6nom6ne d6cr i t r6cem- m e n t e t qui, apr6s avo i r pos6 quelques probl~mes, est ma in t euan t expl iqu6. I1 s ' ag i t de la seule co/ora- t ion de l ' ex t r6mit6 an t6 r i eu re du toxop lasme (au m a x i m u m le t ie rs du corps) . C'est le T.A.P. (Toxo- Ant6r io r -Po la r ) . Le po in t de co lo ra t i on c o r r e s p o n d h une s t ruc ture r6 t icu la i re . La r6ac t ion semble asso- ei6e h la p r6senee d ' immunog lobu l ine s , mats ne pa-

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ra i t pus c o r r e s p o n d r e 'h une in fec t ion pr6cise . Pa- r adoxa lemen t , ce f ac leu r est p lus fac i l ement m i s en 6v idence avec des s6rums ne con tenan t pas d ' an t i - c o r p s an t i - toxop lasmes . On le t rouve chez les adul - tes, j ama i s chez les enfants tie mo ins de deux ans. Il peut 6tre p r6sen t duns des s6rums huma ins nor- m a u x ; il est r6s is tan t ~l la cha leur . I! i n t e rv i en t toutefois h des d i lu t ions in f6r ieures aux d i lu t ions l imi tes de pos i t iv i t6s admises duns la toxoplasmose .

Pou r un d iagnos t i c pos i t i f de la toxoplasmose , il faut donc s 'en ten i r ix une d i lu t ion tie 1/150" jus- qu"h 1/36.450 ~

AMIBIASE

Le d iaguos t i c immuno log ique tie l ' amib i a se p a r la t echn ique de f luorescence peut se fa i re selon la t echn ique c lass ique avec a d jonc t i on de bleu Evans.

Le mat6r ie l an t ig6nique est const i tu6 p a r : des amibes ma in t enues en cul ture , des 6 ta lements de selles, des coupes h cong61alion de foie ou d ' i n t e s t i n d ' a n i m a u x paras i t6s .

Les p r i n c i p a l e s diff icult6s sont : duns le cas des amibes en cullure : la f ixat ion

et l ' a d h 6 r e n c e sur la lame. Afin d ' a u g m e n t e r ce l te dern i6re , on peu t d6pose r su r la lame un trbs mince film d ' a lbumine . Mats il faut que ce lu i -c i soi t d ' une 6pa i sseur min ima le . Techn iquemen t , on d6- pose une mic ro -gou t t e d ' a l b u m i n e sur la lame et imm6d ia t e me n t une gout te de cu l tu re d ' amibes . On mdlange r a p i d e m e n t et on ~tale la goutte.

Une aut re p r6cau t ion t echn ique est d ' 6v i t e r la r6- t r ac t ion ou l ' 6c la tement des t rophozo i t e s lo ts du s6chage. Pou r ce fa i re , on u t i l i se une solut ion de lavage : s a c e h a r o s e ou t ampon ace ta te qui p ro t ege la p a r o i et 6vile ces ph6nom6nes .

da~s le cas des ~taIemenls de selles parasil~es : la p r6sence de n o m b r e u x 616ments au lo- f luorescen ts r end la lec ture diff ici le . Ces 6 ta lements sont le p lus souvent 6pats et les amibes peu nombreuses . Cctle t echn ique ne nous pa ra i t done pus h conse i l le r .

L o c a l i s a t i o n de la f l u o r e s c e n c e :

Dans le cas de r~ac t ions tr~s pos i t ives , la fluo- r e scence est globule. Si la r6ac t ion est p lus fa ible- ment posi t ive , la f luorescence se loca l i se h la p6r i - ph6r ie de l ' amibe .

Lor squ 'on ut i l i se des cu l tu res mix tes en p r e s e n c e de flore associ6e, la p r6sence de cet te de rn i6 re ne g6ne en aucun cas la f luorescence sp6cif ique des amibes . Selon les s6rums util is6s, la /]ore sera fluo- rescen te ou non. La lec ture doi t se l im i l e r aux amibes el les-m6mes. Les g ra ius d ' a m i d o n souvent p r6sen ls dans les mi l i eux de cu l tu re ne pre~!nent, eux, j ama i s la f luorescence. IIs peuvent , de ce fai l , que lquefois ma sque r la t luorescence du co,-ps de l ' amibe si ce l le-c i en est gorg6c.

Afin de pa l l i e r cette diff icul t6 de lec ture po , lva~t e n t r a i n e r des causes d ' e r r e u r duns l ' a p p r 6 c i a t i o n de la posi t iv i t6 , nous p r6f6rons c ons id6 re r seulernent l ' in tens i t6 de la f luorescence p6 r iph6r ique .

Les a u l r e s c o m p o s a n l s du m i l i e u de c u l t u r e "a'in- f luent en r i ch s u r la t h m r e s c e n c e , pas p lus q u e ]'fige de la souche . Au c o n t r a i r e , on a u r a in t~r~t il u t i l i - ser une cu l tu re , non p o i n t fi son t a u x m a x i m u m de r e p r o d u c t i o n (5 jours ) , m a t s l ( !g~rement avan t ce m o m e n t (3-4 j ou r s ) al in d ' o b t e n i r une p r 6 p a r a t i o n r i c h c en a m i b e s m a t s de f lare r e l a t i v e m e n t r6du i te . Une cu l t u r e p lus a n c i e n n e , p a r la p r e s e n c e d ' u n e f lare I ra 1) a b o n d a n l e , r e n d m a i n s f ac i l e la l ec tu re .

D a n s de te l les c o n d i t i o n s , le seu i l de sp~c i f i c i t6 du st~rum c o r r e s p o n d /a la d i l u t i o n 1 /25 ~

D a n s le cas d ' a m i b i a s e a n c i e n n e , la r ~ a c t i o n est n~ga t ive . E l l e p e u t l '~ t re ~ g a l e m e n t (ou tr~s f:~ible- m e n t p o s i t i v e ) d a n s le cas tie d y s e n t e r i e a m i b i e n n e a igu&

Les t aux d ' a n t i c o r p s i m p o r t a n t s ne son t m i s c n 6 v i d e n c e que d a n s le cas d ' abc~s a m i b i e n du fo i e ou d ' a m o e b o m e coeca l .

RESUME L ' i m m u n o t l u o r e s c e n c e q u a n t i t a t i v e a p p a r a i t c o m m e n 6 c e s s a i r e fi la b o n n e a p p r 6 c i a t i o n des r~su l t a t s en m a t i 6 r e de d i a g n o s t i c s ~ r o l o g i q u e p a r a s i t a i r e . Cet exanaen n~cess i t e un c e r t a i n h o m b r e de p r e c a u t i o n s :

- - dans le c h o i x du m a t 6 r i e l : c o u p e s d ' a d u l t e s p o u r la d i s l o m a t o s e , f a i r s p a r a s i t 6 s p o u r la b i l h a r z i o s e , m ~ t a s c o l e x p o u r l ' h y d a t i d o s e , o r g a n i s m e s m a i n t e n u s en c u l t u r e s c e l l u l a i r e s p o u r la l e i s h m a n i o s e et la t o x o p l a s m o s e , ou en m i l i e u sp~c i f i que p o u r les a m i b e s ;

I d a n s les s i tes de la f l u o r e s c e n c e ; p o u r c h a q u e p a r a s i t e consid6r(~, q u e l q u e s - u n s s e u l e m e n t son t sp6c i f iques ;

- - d a n s les t a u x l i m i t e s des d i l u t i o n s des s6rums , v a r i a b l e s a v e c c h a q u e p a r a s i t o s e ;

- - d a n s le m o d e de f i x a t i o n c h o i s i ( f o r m a l h 10 % po t t r les s co l ex ) ;

- - d a n s l ' i n t e r p r 6 l a t i o n des r6su l la t s se lon le t ab l eau c l i n i q u e .

SUMMARY Quanl i ta t ive immuno[ luorescence seems necessary to apprec ia te cor rec t l y the results regarding parasi t ic serological diagaosis. Some precaul ions mus t be observed :

- - in the choice o[ maler iol : adults sec t ions Jar dis tomiasis ~, paras i ted l ioer Jar bi lharziosis , me tasco lex [or hydal idos is , organisms kep t in cell cul tures [or le i shmanias is and toxoplasmosis or in spec i f i c m e d i u m [or Amoebae ;

- - in the f luorescence sites : only a f e w are speci[ ic jar each s tud ied parasite ;

- - in the l imi t r~des o[ sera di lut ions, w h i c h vary w i lh each parasile ;

- - in the chosen me thod o[ [ ixa t ion ( [ormol 10 % ,for the s co l ex ) ; - - in in lerpre l ing the results' by cons ider ing the c l in ical observat ions.

B I B L I O G R A P H I E

1. AMBROISE-THOMAS P. - - Etude sdro- immunologiquc de dix parnsitoses par les techniques d ' immunof luo- reseence. ThOse Sciences Lyon, 1969.

2. BRAY R.S. eL LAINSON R. - - The immunology and serology of lc ishmaniasis . I-The fluorescent antil)ody staining technic. "rr,tns. Roy. Sac., Trap. Med. Hgg., 1965, 59, 535.

3. FRAGA de AZVEDO J. ct COELHO-ROMBERT P. - - L 'applicat ion de l ' imlnunofluoresccnce au diagnostic de la faseiolose h6patique. Am~. Porasit. Hum. Camp., 1965, ~0, 529-541.

4. GIGASSE P.L., VAN MEIRVENNE N. ct JANSSENS P.O. - - Quant i ta t ive fluorescent anl ibody technics in human and exper imental schistosomiasis. Atlu. Soc. Belg. Mdd. Trop., 1967, ]~7, 143-156.

5. KAGAN I.G., SULZER A.J. et CARVER K. - - All ~va- lnat ion of the fluorescent ant ibody test for the dia- gnosis of schistosomiasis. Amer J. Epidemiol., 1965, 81, 63-70.

6. NIEL G. - - A p r o p o s d'un lest d ' immunofluorescence qnan t i t a t i f appliqu6 an diagnost ic sdrologique de la toxoplasmose. J. Paretsit., 1970, 56, 453-454.

7 . P A U L U Z Z I S . - Indagini sierologiehe sulla idat i - dosi nmana medianle la reazione di immunofluores- cenza. Ann. Med. Per:., 1964-1965, 56, 469-482.

8. POTHIER M.A. - - Le sdrodiagnostic de la bi lharziose par une nouvelle technique d ' immunofluoreseence sur coupes il congdlation de Schistosonm monsoni. Th~se M6deciue, Lyon, 1967.

9. QUILICI S., DUNAN S. et RANQUE J. - - L ' immu- nofluoresccnce dans les le ishmanioses (comparaison aver la r6action de fixation du eompldment) . M~d. Trop., 1968, 28, 1, 37.

THROPE E. I An immunology to chemical study wi th Fasciola hepatica. P~trasitologu, 1965, 55, 209- 214.

~VOODHEAD B.G. ct RIDLEY D.S. - - S6rologie des maladies parasi taires . Conservation de s6rums nor- malis6s. Publ. O.M.S., 1971, 8 p.

10.

11.

357