Milieux et tests courants

Milieux et tests courants

GELOSE VIANDE-FOIE (VF)

COMPOSITION : (pour 1L)

Base Viande-Foie 30,0g

Glucose 2,0g

Agar 2,0g

USAGE :

Milieu conditionné en tubes longs et fins, régénéré avant utilisation : il se crée

un gradient de concentration en oxygène entre la surface et le fond du tube

Détermination du TYPE RESPIRATOIRE des micro-organismes.

LECTURE :

Observation Culture

dans la

zone

aérobie

Culture

dans la

zone

anaérobie

Culture

dans les

zones

aérobie

et

anaérobie

Culture dans la

zone

microaérophile

Culture

dans les

zones

aérobie et

anaérobie

et

production

de gaz

Interprétation Culture

seulement

en

présence

d’O2

Culture

en

absence

d’O2

Culture

en

présence

et en

absence

d’O2

Culture en

présence d’une

pression en O2

réduite

Culture en

présence

et en

absence

d’O2 et

production

de gaz

Conclusion Aérobie

strict

(AS)

Anaérobie

Strict

(AnS)

Aérobie-

anaérobie

facultatif

(AAF)

Microaérophile Aérobie-

anaérobie

facultatif

avec

production

de gaz

Milieux et tests courants

GELOSE VIANDE-FOIE NITRATEE (VFN)

Observation Interprétation Conclusion

VF VFN

La souche testée est

aérobie stricte et cultive

en anaérobiose en

présence de nitrates. On

observe un dégagement

d’azote.

Nitrate réductase +

Stade azote

VF VFN

La souche testée est

aérobie stricte et ne

cultive pas en

anaérobiose en présence

de nitrates.

Nitrate réductase -

Milieux et tests courants

EAU PEPTONEE ORDINAIRE (EPO)

Ce milieu est un milieu liquide qui permet la croissance des germes ne

présentant pas d’exigences nutritives particulières. Il peut être utilisé pour la

recherche de la production d’indole.

COMPOSITION : (pour 1L)

Peptones (exemptes d’indole) 10,0g

Chlorure de sodium 5,0g

LECTURE :

Après ajout du réactif de Kovacs

Observation Interprétation Conclusion

Anneau rouge

Présence d’indole

dans le milieu

Absence d’indole

dans le milieu

Anneau jaune

Indole +

Indole -

Milieux et tests courants

EAU PEPTONEE AU ROUGE DE PHENOL (EPO.RP)

COMPOSITION : (pour 1L)

Peptones (exemptes d’indole) 10,0g

Chlorure de sodium 5,0g

Rouge de phénol 1 mL

LECTURE :

Observation Interprétation Conclusion

Tube rouge sans gaz

sous la cloche

La bactérie n’a pas

fermentée le glucide

Absence de production

de gaz

Glucide –

Gaz –

Tube jaune sans gaz

sous la cloche

La bactérie a fermentée

le glucide

Absence de production

de gaz

Glucide +

Gaz –

Tube jaune avec gaz

sous la cloche

La bactérie a fermentée

le glucide

Production de gaz

Glucide +

Gaz +

Milieux et tests courants

GELOSE COLUMBIA AU SANG DE MOUTON

COMPOSITION : (pour 1L)

Peptones 23,0g

Chlorure de sodium 5,0g

Amidon 1,0g

Agar 10,0g

LECTURE :

Observation Interprétation Conclusion

Colonie entourée d’un

halo d’éclaircissement

total à bord net

La bactérie à dégradée,

entièrement, de

l’hémoglobine

Hémolyse β

Colonie entourée d’un

halo d’éclaircissement

partiel verdâtre à bord

flou

La bactérie à dégradée,

partiellement, de

l’hémoglobine

Hémolyse α

Couleur rouge inchangé

autour des colonies

La bactérie n’a pas

dégradée de

l’hémoglobine

Hémolyse γ

Milieux et tests courants

RECHERCHE DE LA NITRATE REDUCTASE

REACTIFS :

Réactif de Griess :

Nit 1 : Solution d’acide sulfanilique

Nit 2 : Solution d’alphanaphtylamine

Poudre de zinc

LECTURE :

Mode opératoire Observation Interprétation Conclusion

Etape 1 :

Ajout du réactif

de Griess

Coloration

rouge

Présence de

nitrites

NR+

Stade NO2-

Coloration

jaune

Absence de

nitrites

Procéder à

l’étape 2

Etape 2 :

Ajout de poudre

de zinc

Coloration

rouge

NO3- réduit en

NO2-

NR –

Coloration

jaune

NO3- réduit en

NO2- puis N2

NR+

Stade N2

Milieux et tests courants

TEST IMVIC

I : Indole

M : rouge de Méthyle

V : Vosges-Proskauer (VP)

« I : Inositol»

C : Citrate

LECTURE :

Indole RM VP Citrate

Escherichia

coli + + - -

Citrobacter

freudii - + - +

Enterobacter

aerogenes - - + +

Enterobacter

cloacae - - + +

Klebsiella

pneumoniae - - + +

Klebsiella

oxytoca + - + +

Milieux et tests courants

GELOSE LACTOSEE AU BROMOCRESOL POURPRE (BCP)

COMPOSITION : (pour 1L)

Peptones 5,0g

Extrait de viande 5,0g

Lactose 10,0g

Bromocrésol pourpre 0,025g

Agar 11,0g

LECTURE :

Réalisation d’une lecture macroscopique

Milieu jaune (Lact +)

Milieu violet (Lact –)

Milieux et tests courants

HUGH ET LEIFSON

ROLE :

Détermination du type respiratoire

Etude du mode de dégradation du glucose

COMPOSITION :

Peptones

Extrait de viande

Chlorure de sodium

Glucose 1%

Bleu de bromothymol (BBT)

LECTURE :

Observation Milieu jaune dans

la zone aérobie

seulement

Milieu jaune dans

les zones aérobie

et anaérobie

Milieu resté vert ou

devenu bleu dans la

zone aérobie

Interprétation Le glucose est

dégradé en

présence d’O2 avec une faible

production d’acide

Le glucose est

dégradé en

présence ou en absence d’O2 avec

une forte

production d’acide

La bactérie cultive

sans dégrader le

glucose ou la bactérie cultive en

dégradant les

peptones en présence d’O2 avec

alcalinisation du

milieu

Conclusion Glucose dégradé par voie oxydative

Glucose dégradé par fermentation

Glucose non dégradé

Milieux et tests courants

CTA

ROLE :

Etude de la voie d’attaque des glucides

Eventuellement, étude du type respiratoire et de la mobilité

COMPOSITION :

Tryptone

L-Cystine

Rouge de phénol

Chlorure de sodium

Sulfite de sodium

Agar

LECTURE :

Observation Milieu jaune

dans la zone

aérobie seulement

Milieu jaune

dans les zones

aérobie et anaérobie

Milieu jaune

dans la zone

anaérobie

Milieu

entièrement

rouge

Interprétation Acidification

seulement en

surface

Acidification

dans tout le

tube

Milieu neutre

en surface et

acide en profondeur

Alcalinisation

en surface

Conclusion Oxydation du

glucide

Respiration

probablement AS

Fermentation

du glucide

Respiration

AAF

Fermentation

du glucide

Respiration

AnS

Inerte vis-à-vis

du glucide mais utilisation des

peptones

Milieux et tests courants

TEST OXYDASE

ROLE :

Orientation des bactéries Gram –

PRECAUTIONS :

Ne pas prélever les colonies avec une oese métallique : risque de faux

positif Ne pas prélever de colonie fortement colorée en bleu

Prélever de préférence les colonies sur GN

LECTURE :

Observation Interprétation Conclusion

Le dépôt se colore en

bleu-violet

Le réactif a été oxydé La bactérie possède une

oxydase : Oxydase +

Le dépôt reste incolore Le réactif n’est pas

oxydé

La bactérie ne possède pas

d’oxydase : Oxydase –

Milieux et tests courants

TEST CATALASE

ROLE :

Orientation des bactéries Gram +

PRECAUTIONS :

Utiliser un ustensile de prélèvement neutre avec l’eau oxygénée pour

éviter un faux positif

Ne jamais prélever une colonie sur un milieu contenant du sang car

l’hémoglobine a une activité peroxydasique

LECTURE :

Observation Interprétation Conclusion

Dégagement gazeux H2O2 est décomposé La bactérie possède une

catalase : Catalase +

Absence de dégagement

gazeux

H2O2 n’est pas

décomposé

La bactérie ne possède pas

de catalase : Catalase –

Milieux et tests courants