BIOCHIMIE, 1976, 58, 1235-1245.

Nature extraitcs

et fractionnement des protdines par l'dthanol, l'isopropanol et le

a des titres diff6rents,

de l'Orge n-propanol

M i c h e l LAUm~nE, L o u i s CHARBONNIER et J a c q u e s M o s s ~ ~ .

Laboratoire d'dtude des Prot~ines, I.N.R.A., route de St-Cgr, 78000 Versailles.

(6-7-1976).

Summary. - - Barley a lcoholsoluble prote in ext rac t ib i l i t ies by aqueous ethanol , isopro- panol and n-prolaanol were measured at room tempe,rature. The quan t i t i e s extracted by each alcohol s t rongly depend on the concent ra t ion of the alcohol. The most efficient concent ra t ion for th, e three alcohols were by increasing o r d e r : 45 per cent ethanol , 40 per cent ivopropanol, 35 per cent (w/w) n-propanol .

Hordein p repa ra t ions extr.acted by these three alcoholic solut ions and by 75 per cent (w/w) e thanol were compared by means of the flour n i t rogen percentage they conta in and by electrophoresis , aminn-ac id an,alysis and S.epbadex G 100 gel f i l t rat ion.

The p repa ra t ions studied do not differ ma,rkedly in the i r amino-acid composi t ion or e lectrophoret ie pa t t e rn which shows a t least 17 different bands. On the o ther hand, S epl~adex G 100 gel filtra.tion separates two main groups of proteins. The first one is present a.t tl~e same level in all p repa ra t ions studied and consists of e lec t rophore t ica l ly typical hordeins (already described hordeins) . The o ther group represents a f rac t ion of th, e prep.arati.on, th,e more a b u n d a n t as the solvent is more effective. This second group is excluded on S.ephadex G 100 chromatogr:aphy and does not give well defined bands by s tarch gel el.ectrophoresis. Consequent ly i t is re la ted to some glutelins. Nevertheless i ts amino-a.cid composi t ion i.s very close to the mean horde in composit ion. Elect rophoret ic compar ison wi th glutel ins extracted by acetic acid and wi th hordeins , all reduced and alkylated, discloses a great s imi l i tude between th is fract ion, the glutel ins and some hord~in fas t components ~t, [5 and ~.

I N T R O D U C T I O N .

Les h o r d ~ i n e s on t 6t6 d 6 f i n i e s p a r O s b o r n e e n 189'5 [11 e o m m e les p r o t 6 i n e s de FOrge sp6c i f i - q u e m e n t s o l u b l e s d a n s l ' 6 t h a n o l 70-80 p. c e n t ( v / v ) (*) h t e m p 6 r a t u r e a m b i a n t e . Depu i s , ]a d6fi- n i t ] o n n ' a p a s f o n d a m e n t a l e m e n t chang& m a t s l e u r h6 t6 rog6n6 i t6 , j o i n t e g la m u l t i p l i c i t 6 des m o d e s d ' e x t r a c t i o n e x i s t a n t p o u r ces p r o l a m i n e s p e u t e n t r a l n e r des d i f f 6 r e n c e s d a n s l e u r c o m p o s i t i o n .

D e u x p r i n c i p a u x p r o c 6 d 6 s d ' e x t r a c t i o n de la f a r i n e s o n t g 6 n 6 r a l e m e n t u t i l i s6s : l ' e x t r a c t i o n s6- q u e n @ e des p r o t 6 i n e s s a l i n o s o l u b l e s p u t s des p ro - l a m i n e s et l ' e x t r a c t i o n d i r e c t e p a r u n e s o l u t i o n h y d r o a l c o o l i q u e , a v e e d a n s c h a q u e cas u n e p r6 - c i p i t a t i o n 6 v e n t u e l l e des h o r d 6 i n e s .

<> A qui toute correspondanee dolt ~tre adress6e. C) Tableau de correspondances approx imat ives entre

les t i t res alcooliques exprim6s en volumes h 20°C et en poids :

E thanol v / v 50 70 75 80 85 p / p 43 63 68 74 80

l sopropanol 60 % v / v ---- 54 % p / p n -Propano l 50 % v / v = 45 % p / p

Le p r e m i e r p r o c 6 d 6 6 ta i t p r 6 c o n i s 6 p a r O s b o r n e [11. Les h o r d 6 i n e s s o n t p e u s o l u b l e s d a n s les so lu- t i o n s s a l ines . L ' 6 1 i m i n a t i o n p r 6 a l a b l e des p r o - t 6 i n e s s a l i n o s o l u b l e s p e r m e t d o n e d ' o b t e n i r des e x t r a i t s a l c o o l i q u e s r i c h e s en h o r d 6 i n e s qu ' i l est p o s s i b l e de p u r i f i e r so i t p a r a d d i t i o n d ' a l c o o l a b s o l u ou de sel so i t p a r d i l u t i o n d a n s l ' eau .

La p l u p a r t des a u t e u r s on t r e p r i s ce s c h 6 r n a en le m o d i f i a n t p a r f o i s p r o f o n d 6 m e n t . A i n s i B i s h o p [21' p o u r e s t i m e r les p r o p o r t i o n s de c h a q u e c l a s se de p r o t ~ i n e s de FOrge p r 6 f 6 r e l ' 6 t h a n o l c h a u d (80°C) p o u r s o n e f f icac i t6 p l u s g r a n d e . De m 6 m e B i s e r t e et S c r i b a n [3], d a n s le b u t d ' a n a l y s e r ]es h o r d 6 i n e s , e x t r a i e n t p a r 6 b u l l i t i o n h r e f l u x p u i s p r 6 c i p i t e n t p a r 616vat]on d u deg r6 a l c o o l i q u e de la s o l u t i o n j u s q u ' h 85 p. c e n t ( v / v ) et r e f r o i d i s s e - m e n t ~ - - 1 0 ° C . A p a r t i r de la p r 6 p a r a t i o n ob te - nue , i ls m e t t e n t en 6 v i d e n c e 5 c o m p o s a n t s p a r 6 1 e c t r o p h o r 6 s e s e l o n T i s e l i u s d a n s l ' a c i d e ac6t i - que.

P o l l o c k et al. [41 on t 6 tud i6 ] ' i n f l u e n c e de ]a t e m p 6 r a t u r e s u r l ' e x t r a c t i o n des h o r d 6 i n e s . Ces a u t e u r s on t m o n t r 6 l ' e x i s t e n c e d ' u n e f r a c t i o n

85

1236 M. Laur i~re et coll.

qu'i ts ont nomm6e hord6al ine insoluble dons l '6thanol ~ 70 p. cent (v/v) h temp6rature am- biante mats soluble dons le m6me solvant bouil- lant h reflux et dons l 'acide ac6tique.

Folkes et Yemm [5, 61, affn d '6tudier le m6ta- bolisme prot6ique, extraient globalement les pro- t6ines restant apr~s ~l iminat ion des prot6ines sali- nosolubles, par une solut ion contenant de la soude 0,05 N e t de l '6thanol h 50 p. cent (v/v) h 0-5°C. De l 'extrai t obtenu, ils s6parent d 'abord des glut6- l ines qu' i ls nommen t hord6nines , puts les hor- d~ines, qui ainsi pr6par6es pr6sentent un taux d'azote amid6 ~lev6 (23,0 p. cent de l 'azote total) et semblent de ce fait b ien purifi6es. Ces auteurs r emarquen t que le r6sidu non extrait pr6sente une composi t ion en acides amin6s proche de celle des prot6ines salinosolubles.

Waldschmidt-Lei tz et al. [7, 8] r ep renan t la technique d 'Osborne et Clapp [9] pr6f6rent extraire d i rectement la far ine d61ipid6e par l '6tha- nol 75 p. cent (v/v) puts pr6cipi ter les hord~ines en por tant le degr6 alcoolique h 85 p. cent (v/v) et la temp@ature h - - 1 5 ° C . Les pr6para t ions obte- nues pr6sentent h l '61ectrophor6se selon Tiselius en mil ieu ac6tique (pH 2,4) les 5 composants d6j~ d6crits [3] qu'i ls nomment par ordre d6croissant de mobili t6 a, g, ,/, ~ et ~. Par cette technique, ils mont ren t que l ' ext ract ion directe fourn i t des hor- d6ines plus r iches en compos6s lents 5 et ~, qui con t i ennen t beaucoup plus d 'acide glutamique (ou de glutamine) et de pro l ine que les autres compo- sants a, $, v.

Dons routes ces 6tudes, c'est l '6 thanol .70-75 p. cent (v/v) qui a 6t6 choisi comme agent d'ex- t rac t ion des hord6ines. Seuls certains auteurs uti- l isent d 'autres alcools tels que l ' i sopropanol 60 p. cent (v/v) : Lontie et Voets [10] ou le n-pro- panol 50 p. cent : SchSn [11]. Klemme-Berger et al. [12] ajoutent m6me du dod6cyl sulfate de sodiunl au n -propanol pour extraire plus compl6- tement les hord6ines restant apr6s extract ion par l '~thanol 75 p. cent.

Lontie et Voets [101 apr6s extract ion compl6te des hord6ines par l ' i sopropanol h 60 p. cent (v/v) et h 60°C extraient ~ nouveau la far ine par de l ' i sopropanol addi t ionn6 d ' un r6ducteur et obtien- nent une fract ion ayant encore une composi t ion de prolamine. Le r6.sidu non extrait poss~de a!ors la m6me composi t ion que l ' ho rd6n ine de Folkes et Yemm [5, 6]. n e s t remarquable que Waldschmidt - Leitz et al. [13, 14] en ut i l i sant un protocole assez semblable pensent extraire des glut61ines avec l ' i sopropanol en pr6sence d 'un r6ducteur. Ce der- nier point souligne l ' impr6cis ion de la fronti6re

qui existe entre les p ro lamines et les glut61ines des c6r6ales.

En 5972, Landry et al. [15] mon t ren t que la na ture de l 'alcool influe sur Ia quanti t6 de prola- mines extraite ~ temp6rature ambiante. Leurs sol- r an t s se classent ainsi par ordre d'efficacit6 crois- sante : ~thanol 60 p. cent, i sopropanol 5.5 p. cent, n -propanol 50 p. cent (p/p) , acide ac6tique 1 p. cent (p/p). L 'analyse des extraits obtenus par les solvants cit6s, seuls et en pr6sence d 'un r~duc- teur leur permet d'6mettre l 'hypoth6se que les prot6ines de l 'Orge peuvent 6tre divis6es en deux grandes c lasses : les prot6ines sal inosolubles et les prot6ines alcoolosolubles, les glut~lines 6rant formbes de repr6sentants des deux classes.

Mis h part ces t ravaux [15] et ceux de DilI et al. [16, 17] qui sont anciens comme la p lupar t des 6tudes r6alis6es sur les hord6ines et qui por tent sur la solubilit6, des pr6parat ions de pro lamines du Bib et du Mais dans le m6thanol , l '6thanol, le n -propanol et le n-butanol , aucune 6tude syst6ma- tique n 'a 616 r6alis6e pour mesurer l ' inf luence du ti tre d 'un alcool sur l 'extract ibi l i t6 des prot6ines alcoolosolubles de l'Ovge.

Nous avons donc estim6 pour chacun des alcools suivants, 6thanol, isopropanol , n-propanol , en fonct ion de leur titre, le pourcentage d'azote solubilis6 par une seule extract ion directe. Nous avons d6termin6 le t i tre op t imum pour chacun de ces alcools et compar6 les mat6riels extraits, dans chaque cas, par 61ectrophor6se en gel d 'amidon, f i l t ra t ion sur gel de S6phadex G 100, et analyse de la composi t ion en acides amin6s. Nous nous som- mes plus par t icul i6renlent int6ress6s ~ une frac- t ion exclue par le S6phadex G 100 que nous avons compar6e h des glut61ines extraites par l 'acide ac6tique.

MATERIEL ET METHOD,S.

La vari6t6 INRA 513 utilis6e est une Orge nue. Son choix a 6t6 dict6 par l 'absence autour du grain de glumes et de glumelles adh~rentes, r iches en polyph6nols. Ces substances sont susceptibles de se lier aux prot6ines lors de l ' ext ract ion et de mo- differ leurs propri6t6s phys icochimiques [4].

La farine est obtenue par broyage dons un mou- l in Retsch (grille de 0,2,5 ram). Elle pr~sente une teneur en eau de 12 p. cent et un taux d'azote de 1,94 p. cent par rappor t ~ la mati6re s6che.

EXTRACTION DES PROLAMINI~S.

90 g dc far ine sont d 'abord d61ipid6s par agita- t ion magn~tique dans 800 ml de butanol satur6

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 1D.

Les pro td ines a lcoolosolubles de l 'Orge. 1237

d 'eau pendan t 1 h h 18°C puis centrifug6s 20 mn h 1 000 g dans une centr i fugeuse MSE. La far ine d61ipid6e est aussit6t extrai te par 800 ml de la solut ion alcool ique 6tudi6e, par agitat ion Inagn6- t ique h temp6rature ambiante pendant 2 h. L'ex- t rai t a lcool ique est alors h nouveau centrifug6 h 6 000 g, dans une centr i fngeuse Sorvall mod61e RCB pendant 1 h puis dilu6 3 fois par une solut ion saline h 1,5 p. cent de NaC1 (ou port6 h 80 p. cent (*) en 6thanol) pour pr6c ip i te r les hord6ines et laiss6 48 h h 3°C. Le pr6cipit6 est ensuite r6cu- p6r6 par centr i fugat ion h 6 000 g e t sfich6 sous press ion r6duite, pes6 puis broy6.

Les quantit6s d 'azote extrai tes h chaque 6tape : d61ipidation, extract ion, pr6cipi ta t ion, sont d6ter- min6es par la m6thode de Kjeldhal. Le d6tail de la pr6para t ion des pr6cipit6s d 'hord6ines 6tudi6s est r6sum6 dans le tableau I.

EXTRACTION DES GLUTI~LINES.

La m6thode adopt6e est celle de Jones [18] mo- difi6e. La far ine non d61ipid6e est d 'abord extrai te 2 fois h 0°C par une solution de NaC1 0,5 M puis par l 'eau 2 fois. Le r6sidu obtenu est alors extrai t 2 fois par une solut ion d 'ac ide ac6tique 1 p. cent. On obtient deux extraits successifs (AcOH 1 et AcOH 2).

Le volume du solvant est chaque fois de 250 ml pour 25 g de farine. Chaque extrai t ac6tique est port6 h 45 p. cent en 6thanol, centrifug6 h 6 000 g pour °51iminer le pr6eipit6 qui appara i t puis neu- tralis6 h pH 7,0. Les glut61ines s6dimentent 24 h h 3°C puis sont r6cup6r6es par cent r i fugat ion 6 000 g, s6.ch6es et broy6es.

~II~T'HODES D'ANALYSE.

Eleclrophor~se en gel d'amidon : les condi t ions sont celles pr6conis6es par Landry et al. ~19] : tampon lactate d ' a lumin ium 0,0015 M/ac ide lacti- que 0,028 N, pH 3.3, ur6e 3 M ; tension de migra- tion 14 V/cm.

Rdduction et alkylation : les prot6ines sont r6- duites par le 2-Inercapto6thanol et alkyl6es par l ' ac ry lon i t r i l e selon les condi t ions op6ratoires de Huebner [20], seul le t ampon p h o s p h a t e pH 8 a 6t6 remplac6 par un tampon tris-HC1, de m6nle pH et m6me force ionique. Les prot6ines sont ensuite dialys6es contre l ' ac ide ac6tique 0,2,5 M et lyophi- lis6es.

Tamisage molOculaire : la f i l tration sur gel de S6phadex G 100 est effectu6e selon le mode op6ra-

(*) Dans la suite de cet exposd les concentrations en aleool sont exprimdes en poids par poids. Cette expression des rdsultats a 6t6 prdf6r6e en raison du i'ait qu'elle ne varie pas en fonetion de la tempdrature.

toire d6crit par Charbonnie r [21] pour les glia- dines du B16. 400 nlg de pr6cipit6 sont d6pos6s sur une colonne de 5.0 X 125 cm, 6quilibr6e par un tampon ur6e 2 M, acide ac6tique 0,25 M chlorure de sodium 0,05 M pH 3,1 ; le m5me tampon sert pour l'61ution dont le d6bit est de 16 ml /h .

L 'es t imat ion des propor t ions de chaque fract ion obtenue est r6alis6.e par pes6e du mater ie l r6cu- p6r6 apr6s dialyse contre l ' ac ide ac6tique h 0,25 p. cent et lyophi l isa t ion.

Analyse des acides aminds. La technique em- ploy6e est celle de Moore el al. [22]. L 'appare i l uti- lis6 est de la marque Phoenix prec is ion instru- ment, modble K 8 000 C modifiS. Les composi t ions en acides amin6s r6sultent de l 'analyse de 3 types d 'hydro lyses : 2 hydrolyses de 24 et 48 h par HC1 6 N h 105°C et d 'une hydro lyse dans les m6mes condi t ions apr6s attaque per for ln ique de l '6chan- t i l lon [ ~ ] .

RESULTATS ET DISCUSSION.

ETUDE DE L'EXTRACTIBILITE DES PROTEINES AL- COOLOSOLUBLES DE L'ORGE.

Nous avons estim6 pour chacun des alcools sui- vants : 6thanol, i sopropanol , n-propanol , le pour-

~40-

Z 30 " g

2O- /

1D"

#/ . - \ \ o

2 / '-" '

YJ/ t:,}

,'o 2o 3'o :o ,'o oo /o .'o Titres alcooliques en %(P/P)

FIG. 1. - - Courbes d'extraction des protdines alcoolo- solubtes de la ratine d'orge, par l'dthanol, l'isopropa- nol el le n@ropanol.

Pourcentages de l'azote extrait en fonction de la nature et du titre des alcools exprixn6s en pour cent poids par poids.

- - dthanol : (A) - - isopropanol : (0) - - n-propauol : (m).

La fl6che repr~sente le titre utilisd par Osborne [11 pour extraire les hord6ines par l'6thanol.

BIOCH1MIE, 1976, 58, n ° 10.

1238 M. Lauri~re et coll.

cen tage d ' azo te de la f a r i n e ex t ra i t , en f o n c t i o n du t i t re , apr6s une seule e x t r a c t i o n d i r ec t e de la fa- f i n e d61ipid6.e au pr6a lab le . L ' e x t r a c t i o n d i r e c t e a ~t6 cho i s i e p o u r 6v i te r nne 6ven tue l l e i n so lub i l i s a - t i on de c e r t a i n e s f r a c t i o n s p r o t 6 i q u e s lors de l ' ex- t r a c t i o n des p r o t 6 i n e s sa l inoso lub les .

Les cou rbes d ' e x t r a c t i o n ob tenues (fig. 1) mort- t r e n t q u ' e n p lus de la na tu re , le t i t r e de l ' a l coo l joue un r61e i m p o r t a n t darts les quan t i t6s d ' azo te ex t ra i tes . Ces cou rbes p r 6 s e n t e n t c h a c u n e un m a x i m u m qui p e r m e t de d 6 t e r i n i n e r la v a l e u r opt i - m a l e du t i t r e d ' u n a lcoo l p o u r l ' e x t r a c t i o n des p r o t 6 i n e s a lcoo loso lub les . Ces va l eu r s son t p a r o r d r e d 'e f f icac i t6 c ro i s s an t e : 6 thano l : 45 p. c e n t ; i s o p r o p a n o l : 40 p. cen t ; n - p r o p a n o l : 35 p. cent . E l les d i f f6 ren t s e n s i b l e m e n t de ce l les u t i l i s6es

sont e s s e n t i e l l e m e n t la p r 6 s e n c e h un t a u x 61ev6 de ce r t a in s ac ides amin6s et su r tou t la t e n e u r en azote amid~, ce qu i les c o n d u i t peut -~t re h e x t r a i r e p r 6 f 6 r e n t i e l l e m e n t c e r t a i n e s f r a c t i o n s des b o r - d6ines .

Les d i f f6 rences cons id6 rab l e s dans les quan t i t6s que nous avons ex t r a i t e s p a r les t ro i s a lcools 6tu- di6s (fig. 1 et tab. I) sou l6ven t p a r c o n s 6 q u e n t la ques t i on de la n a t u r e des ma t6 r i e l s ex t ra i t s dans c h a q u e cas. S 'ag i t - i l des m6mes p r o t 6 i n e s ex t r a i t e s p lus ou m o i n s e f f i cacement , ou b i e n exis te- t - i l des v a r i a t i o n s de c o m p o s i t i o n en t r e les d i f f6ren ts ex- t r a i t s ? Nous avons c h e r c h 6 h r 6 p o n d r e "~ ces ques- t ions en a n a l y s a n t des ex t ra i t s a l coo l iques b ru t s et des p r 6 p a r a t i o n s d ' ho rd6 ine s , p a r p l u s i e n r s t ech- n iques p h y s i c o c h i m i q u e s .

TABLEAU I .

Pourcentages d'Azote retrouv~s ~ chaque ~tape des extractions de la racine d'Orge.

Fractions obtenues

Extrai t butanol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Extrai t alcoolique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , . . . Rfisidu non extrait . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Surnageant de la precipitation . . . . . . . . . . . . . . Pr~cipit~ hord6ines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Nora du pr6cipit6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Alcool d'extraction

Et0H 65 p. cent EtOH ISO PROH 45 p. cent ~,0 p. cent

I Mode de pr6cipitation

~-PROH 35 p. cent

ETOH 80 p. cent NACI I p. cent

1,6 17,7 81,5

2,9 13,9

I

1,6 1,6 17,7 24,1 81,5 74,3

4,0 8,0 10,0 16,1

II II[

1,7 29,5 66,1

9,7 16,8 IV

1,6 39,3 58,8 10,5 29,5

V

Les valeurs sont exprim6es en pour cent de l 'azote total de la farine. Elles r6sultent d'une seule extrac- tion par chaque alcool consid6r6.

dans le m 6 m e l a b o r a t o i r e [15] et cho i s i e s en fonc - t i on des donn6es de la l i t t 6 ra tu re p o u r 6 tud ie r Fin- f luence de la n a t u r e des a lcools .

Des cou rbes s emb lab l e s h ce l le de la f igure 1 son t ob tenues si l ' on dose I ' azo te p r6c ip i t6 p a r une so lu t ion sa l ine , ~ p a r t i r des m6mes ex t ra i t s a lcoo l i - ques. Les quan t i t6s d ' azo te p r6c ip i t6es tors d ' ex- t r a c t i o n s p r 6 p a r a t i v e s son t i n d i q u 6 e s darts lc ta- b l eau I.

I1 est i n t6 re s san t de s o u l i g n e r que la p l u p a r t des au teu r s t r a v a i l l a n t su r les h o r d 6 i n e s u t i l i s en t des t i t res a lco01iques n e t t e m e n t s u p 6 r i e u r s aux t i t r es o p t i m u m s t rouv6s . Les t i t res ut i l is6s p a r Osbo rne [1] p a r e x e m p l e c o r r e s p o n d e n t h 63-6,8 p. cen t en po ids . Les c r i t6 res ut i l is6s p a r les p r e m i e r s au- t eurs [1, 2] p o u r d6f in i r les p r o l a m i n e s et p a r con- s6quen t p o u r c h o i s i r les p roc6d6s d ' e x t r a c t i o n

ELECTROPHORI~SE ET COMPOSITION EN ACIDES AMI- NES DES MATERIELS EXTRAITS :PAR CHAQUE ALCOOL.

L '61ec t rophor6se des ex t ra i t s a l coo l iques b ru t s ne r6v61e pas de d i f f6 rences no tab les de c o m p o s i - t ion du p o i n t de r u e s e m i q u a n t i t a t i f . A l ' e x c e p t i o n des ex t ra i t s h fa ib le c o n c e n t r a t i o n en a lcoo l qu i c o n t i e n n e n t peu d ' h o r d ~ i n e s (.fig. 2) on r e t r o u v e s y s t 6 m a t i q u e m e n t le m ~ m e 6 1 e c t r o p h o r 6 g r a m m e au-delh d ' une c e r t a i n e c o n c e n t r a t i o n en a]cool v o i s i n e de 25 p. cent . A l ' e x c e p t i o n d ' u n e bande , la m 6 m e image 61ec t rophor6 t ique est obse rv6e p o u r t o u s l e s p r6c ip i t6s : I h V. El le est cons t i tu6e de 13 b a n d e s b i e n v i s ib le s g roup6es en 4 sous- g roupes a, ~, : et 6 + e a ins i no inm6s p a r r6f6ren- ce avec les t r a v a u x de W a l d s c h m i d t - L e i t z [7, 8]. I1 est poss ib l e en fa i t p a r e x a m e n de f r a c t i o n s semi pur i f i6es (fig. 4) de d 6 n o m b r e r au m o i n s 17 ban- des 61ec t rophor6 t iques p a r m i les ho rd6 ine s . Ce

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 10.

Les protgines alcoolosolubles de l'Orge. 1239

dernier r6sultat est l~g~rement sup~rieur aux va- leurs trouv~es par Kling [24] qui trouve 14 compo- sants par 51ectrophor~se err gel de polyacrylamide . La bande 61ectrophor~tique pr~sente dans les ex- traits bruts et absente dans les preparations d'hor- d~ines se retrouve en fair dans ]e surnageant de pr6cipitation des hord~ines (fig. 4,B). Elle est situ~e

entre le groupe des (~ et des # hord6ines. I1 est im- possible actuel lement de classer avec certitude cette prot6ine darts les prolamines ou les aIbumi- nes et globulines.

L'analyse de ]a composi t ion en acides amin6s des pr6parations d'hord6ines I ~ V ne r6vble pas non plus de diff6rences s ignif icatives (tableau II).

1 5 '

2 5 .

3 5

4 5

5 5

6 5

7 5

1 5

2 5

3 5

4 5

5 5

6 5

1 0

15

2 5

3 5

4 5

5 5

6 5

®

J I I I I

0,4 ,A,,

01 t

i

m

m

¢- ©

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g. o

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~ " ,,o m

-~ ~-~

O -5)

~ ' ~ .

m

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 1 0 .

1240 M. Lauri~re et coll.

1.0

o A

1,C

A B C D E F G H I

1 0 0 0 1 5 0 0 m l

A_ BC DE F ~ (II)

'1000 1 5 0 0 m l .

1 23 4 5678910 1 1 1 2 1 3 1 4 15 t.....at..~ t..J, , t_.a t....s u ~ ~ t__..J t._.~ u L....t t_~ t__...t

Fractions soumises ~ 1 6 ] e c t r o p h o r 6 s e

FIG. 3. - - In f luence du proc~dd de prdcipitat ion sur la composi t ion des hord~ines mise en dvidence par chromatograp[tie sur gel de Sdphadex G 100.

Les fractions num6rot~es de 1 ~a 15 au has de la figure ont 6t6 soumises h l'61ectrophorbse (voir figu- re 4).

Les hord6ines ont 6t6 extraites par l'6thanol 65 p. . . . . . " ~ " n cent pros preclpltees solt par 1 etha ol h 80 p. cent (I)

soit par le chlorure de sodium (II).

De sorte que si l 'on ne consid6re que les diagranl- rues 61ectrophor6tiques, ou la composi t ion en aci- des ainin6s comme moyens d ' ident i f ica t ion tous ces mat6riels sont s imilaires.

C O M P A R A I S O N P A R F I L T R A T I O N S , U R G E L D E S E P H A -

D E X G 1 0 0 D E S M A T E R I E L S : G X T R A I T S P A R C H A Q U E

A L C O O L .

Par fi l tration stir gel de S6phadex G 100 on note des diff6rences de composi t ion des pr6parat ions d 'hord6ines, suivant le mode de prbc ip i ta t ion et suivant l 'a lcool utilis6 pour l ' ext ract ion.

Ainsi la compara i son des profils d'61ution (fig. 3) des pr6cipit6s I e t H, qui ne diff6rent que par ]e proc6d6 de pr6cipi ta t ion (tableau I), r6vble essen- t ie l lement deux diff6rences notables. La premibre f rac t ion (A) qui est exclue sur S6phadex G 100 est moths impor tan te dans le pr6cipit6 I (tableau IID ; de plus ce mSme pr6cipi t6 pr6sente par rappor t au pr6cipit6 H, 3 pics suppl6mentaires qui sont com- pos6s de prot6ines sal inosolubles d 'apr6s l 'analyse 61ectrophor6tique. La pr6c ip i ta t ion par le ch lorure de sodium est par cons6quent plus s61ective et mieux adapt6e h la pr6para t ion des hord6ines que l'616vation du degr6 alcool ique utilis6 par beau- coup d 'auteurs [3, 7, 81, puisqu 'e l le permet d'61i-

TABLEAU II.

C o m p o s i t i o n s en a c i d e s a m i n e s des d i f t ~ r e n t e s p r d p a r a l i o n s et f r a c t i o n s d ' h o r d d i n e s ~tudides .

Acides amin6s

I l lI

Gly 21,3 23,4 Ala 22,4 20,1 Val 33,7 38,7 Leu 57,9 60,4 Ile 34,0 36,9

Ser 37,2 40,5 Thr 20,8 19,6

Cys 18,1 18,7 Met 9,2 9,0

Phe 61,3 61,0 Tyr 21,8 23,2 Try

Pro

Asx Glx

Lys His Arg

24,2 i 20,8 39,1 6 1 , 7 36,9

39,8 20,2

19,7 8,9

60,3 21,7

Pr6parations

249,3 242,4

20,9 15,0 357,8 354,5

6 , 1 6 , 6 9,8 11,2

18,6 18,9

Fraction A isolde fi partir

de :

,v I v

24,1 22,2 44 ,I 64,2 37,1

I V

25,6 25,2 27,3 25,0 55,0 49,0 71 ,7 72,1 39,1 40,5

46,4 48,7 43,7 21,4 23,1

24,5 20,4 9,9 i ' 9,?

[

50,3 42,2 23,2 21,6

240,31223,7 , 210,5

15,0 16,8 14,3 354,6 357,4 350,5

I 6,8 6,2 7,9

11,4 11,9 13,3 18,6 19,3 21.3

23,2

19,6 9,5

44,2 23,9

210,1

14,1 354,2

7,0 12,7 21,2

L

Glut61ines i Hord6ines extraites par AcOH ~ purifi6es

snr G 100 t p. cent I

32,2 20,1 26,9 16,2 51,9 29,2 6 6 , 4 55,9 40,2 34,9

48,2 35,2 24,6 16,8

25,0 13,1 12,6 7,0

48,9 67,8 25,4 22,4

207,4 264,6

17,1 11,8 33O ,9 373,9

8,2 5,6 12,8 10,7 21,5 14,8

Le tryptophane n'a pas 6t~ dos6. Les r6sultats sont exprim6s en r6sidus d'acides amin6s pour 1

trouv6s (R %°). BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 10.

0O0 aeides amin6s re-

Les prot~ines alcoolosolubles de l'Orge. 1 2 4 1

>

®

Ii

I I I 1 ALB_+ GLOB. HORD.

H T

1 2

3.

4

5

H T 6

7

8

9

lO

H T

@

HT

S

11

12

19

14

15

a~

.2

~a

,2

©

-za ~,

~ ...-~ ,..~ -~

..~ , ~ ~ ,'~ . ~

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 10.

1242 M. Lauri~re et coll.

mine r les prot6ines sal inosolubles codissoutes. Pour cette raison, ce proc~d6 de pr6c ip i ta t ion a 6t6 conserv6 pour la suite des exp6r iences expo- s6es ici.

Les chromatograph ies sur S6phadex G 100 des pr6para t ions II, III, IV et V (fig. 5) r6v61ent des diff6rences impor tan tes au niveau des prot6ines exclues (fract ion A). L 'es t imat ion des p ropor t ions des trois p r inc ipa les f ract ions obtenues (ta- bleau III) confirme que ces pr~eipit6s ne different que par la p ropo r t i on de la f rac t ion A. En effet, si

termin6e (tableau II). Les f ract ions A des pr6ci- pit~s I e t V qui repr6sentent respec t ivement 2 et 17 p. cent de l 'azote total, pr6sentent la m6me composi t ion en acides amin6s. I1 s 'agit par con- s6quent d 'une f rac t ion prot6ique bien ind iv idua- lis6e. Par ai l leurs cette composi t ion est tr6s pro- che de la composi t ion globale des hord6ines de sorte que la pr6sence de eette f ract ion en plus ou moins grande quantit6 n'est d6celable dans une pr6para t ion d 'hord6ines donn6e ni par l ' analyse des acides amin6s ni par l '61ectrophor6se.

TABLEAU III.

Estimation des proportions de chaque [raction obtenue par [titration sur gel de Sdphadex G 100 des di[fdrentes prOparations d'horddines.

Pr6paration analys6e

I

II l I I IV V

A

14 1 9

3 2

47 5 6

Fractions s6par6es par le S6phadex G lC0 P. cent des poids r6cup6r6s

B+C] D÷E+F

60 [ 18 61 [ 20 48 ~ 20 3 5 [ 18 31 i 13

G+ Hd-I i BCDEF --~ Hord.

t 8 ] 78

_ _ I 81 - - 6 8

- - 5 3

- - r 4 4

B + C Hord.

77 75 71 6 6

71

Hord. en p. cent de N total

11 8

11 9

13

A, B, C, D, E, F, G, H, I. Diffdrentes fractions d'hordfines obtenues (volt figures 3 et 5). I, II, III, IV, V. Prdparations d'hord~ines (voir tableau I).

on rappor te la p ropor t ion des hord6ines bien caract6vis6es h l '61ectrophor~se (fract ions B, C, D, E, F) h l 'azote total de la far ine en tenant compte du pourcentage d 'ex t rac t ion (tableau IH, colon- ne 6,), on se rend compte que les quantit6s de ces hord6ines sont extrai tes de fa~on constante, aux erreurs de Inesure pr6s et i nd6pendamment de la nature de l 'a lcool utilis6. De plus, les p ropor t ions des const i tuants de ces hord6ines ne semblent pas modifi6es ; c 'est-h-dire que les f ract ions B + C par rappor t aux f rac t ions D -4- E + F var ien t peu, ce qui est attest6 par la mesure du rappor t B + C / Hord. qui reste h peu pr6s constant.

Ces observat ions mont ren t que route augmenta- t ion du pourcentage d'azote aleoolosoluble extra i t se t radui t essent ie l lement par une ext rac t ion plus efficaee des prot6ines pr6sentes dans la f rac t ion A.

Or l 'analyse 61ectrophor6tique de cette f rac t ion ne pr6sente que des train6es (.fig. 4), ee qni indi- que, comme l ' exc lus ion sur S6phadex G 100, qu ' i l s 'agit d 'un mat6riel de trbs haut poids mol6culai re migran t tr6s diff ici lement dans le gel d 'amidon. Ce compor temen t e s t e n g6n6ral celui des glnt61ines.

Dans le but de mieux d6finir cette f ract ion pro- t6ique, la composi t ion en acides amin6s a 6t6 dS-

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 10.

COMPARAISON DE LA FRACTION A AUX GLUTELINES EXTRAITES PAR L'ACIDE ACETIQUE PAR ~LECTROPHO- RESE APRES R~DUCTION ~T ALKYLATION.

Le mat6riel contenu dans la f rac t ion A se coin- por tan t comme les glut61ines h l '61ectrophorSse, nous l 'avons compar6 h des glut61ines extrai tes par l ' ac ide ac6tique, [18] apr~s extract ion pr6alable des prot6ines salinosolubles.

I1 est r emarquab le que dans FOrge, les glut61ines ne puissent 6tre extrai tes par l ' ac ide ac6tique, si les prot6ines sal inosolubles n 'ont pas 6t6 61imin6es pr6alablement . En effet, une seule ex t rac t ion par l ' ac ide ac6tique 1 p. cent de la far ine d61ipid6e n 'ex t ra i t que 9 p. cent de l 'azote total, cette va]eur n 'est que pen modifi6e si la d61ipidation est omise. Dans ce dern ie r cas, on n 'ex t ra i t que 13 p. cent de l 'azote total.

Par contre l ' ex t rac t ion pr6alable des prot6ines sal inosolubles d 'une far ine non d61ipid6e pe rmet d ' ex t ra i re 31 p. cent de l 'azote total par une seule ex t rac t ion par l ' ac ide ac6tique. II est alors possi- ble ~ par t i r de ce dern ie r extrai t de pr6cipi ter les glut61ines par neutra l isa t ion [18].

La f rac t ion A pr6sente une composi t ion en act- des aminds tr6s vois ine de celle des glut61ines ex-

L e s p r o t d i n e s a l c o o l o s o l u b l e s d e l ' O r g e . 1 2 4 3

t r a i t e s p a r l ' a c i d e a c 6 t i q u e ( t a b l e a u II) . Ces glut6- l i ne s ou t 6t6 r 6 d u i t e s et a lky l6es a i n s i que ]es p r e - m i e r s p i c s A des e x t r a i t s I I et V et ]es h o r d 6 i n e s i so l6es p a r c h r o m a t o g r a p h i e s u r gel de S 6 p h a d e x

A B C D E F

1 ooo m l

~" 1,0 ~ ( I I I )

O 00 04 ,~ m l

~o ( I V )

! ! ! 0fo ! I ! i , 0 ~ m l

,o (V)

/ , i ! ! ! i . , ! ~o0o m l

v O L U M E O E L U T I O N

FIG. 5. - - Comparaison par chromatographic sur gel de S~phadex G 100 des horddines pr~cipit~es par le chlorure de sodium.

Les nombres II, IIl, IV, V, cor respondent aux pr6- para t ions d 'hord6ines obtenues comme il est d6crit dans le t ab leau I. Les eourbes repr6sent6es m o n t r e n t l ' inflnence du t i t re de l 'alcool uti l is~ pour la prSpara- t ion des hord~ines (compara ison entre II et III), et le r61e de la na tu re de l 'a lcool cboisi (compara ison en t re HI, IV et V).

G 100, c o r r e s p o n d a n t a u x p i c s B, C, D, E, F, et c o m p a r 6 s p a r 6 1 e c t r o p h o r b s e . Les r 6 s u l t a t s s o n t r e p o r t 6 s dar ts la f igure 6 ; i ls m o n t r e n t que la r6- d u c t i o n et l ' a l k y l a t i o n ne m o d i f i e n t p a s les h o r - d 6 i n e s ~ et e. Seu les les b a n d e s c o r r e s p o n d a n t

au x a, ~ et 7 h o r d 6 i n e s v o i e n t l e u r m o b i l i t 6 r 6 d u i t e et s o n t r e g r o u p 6 e s en 2 s o u s - g r o u p e s .

N R A I i 1 2 3 4 5 I l i l l

R A | i 5 3 4 2 1 I J i l l

. . ?~.

i i

; 2 : : . . . . .

G Fro. 6. Comparaison de la f ract ion A aux glut~-

lines et aux horddines apr~s rdduction el alkglat ion. RA : f rac t ions r~duites et alkyl~es. NRA : non r~duite's et alkyl~es. 1) AcOH 1 : glut61ines extra i tes par l 'acide ac~tique

l p. cent p/p. 2) AcOH 2 : glut61ines extra i tes par l 'acide ac~tique

apr~s ex t rac t ion de AcOH 1. 3) Frac t ion A d 'une p repara t ion d 'hord~ines ext ra i -

tes pa r l '~ thanol 65 p. cent. 4) Frac t ion A d 'une p repa ra t ion d 'hordSines cxtra i -

tes par le n -p ropano l 35 p. cent. 5) Hord~ines purifi~es par chromatograph ic sur S6-

phadex G 100 (fract ions B C D E F).

Les g lu t61ines e x t r a i t e s p a r l ' a c i d e ac6 ' t ique et les f r a c t i o n s A des e x t r a i t s I I et V d o n n e n t ]e m S m e p ro f i l 6 1 e c t r o p h o r ~ t i q u e c o m p o s 6 d ' a u l n o i n s 5 b a n d e s . I1 es t r e m a r q u a b l e q u e 4 d ' e n t r e e l les m i g r e n t e x a c t e m e n t au n i v e a u des b a n d e s mo- di f i6es p a r la r 6 d u c t i o n et l ' a l k y l a t i o n des h o r -

d 6 i n e s a, ~ et 7.

BIOCHIMIE, 1976, 58, n ° 10.

1244 M. Laur ibre et coll.

Par ailleurs aucune bande impor tante n 'est visi- ble au-delh de la dis tance maximale de migra t ion des hord6ines les plus rapides, ce qui nmnt re que l 'acide ac6tique n 'ext ra i t que peu ou pas de glut6- l ines de type sal inosolnble raises en 6vidence par Landry [15].

Tous ces r6sultats mont ren t que la fract ion A et les glut61ines extraites par l 'ac ide ac6tique sont vra i semblablement constitu6es d 'hord6ines asso- ci6es entre elles, soil au cours de l 'ext ract ion et il s 'agit alors d 'une d6naturat ion, soit de facon native dans les s t ructures cellulaires.

CONCLUSION.

IMPORTANCE DU CHOIX DE LA NAT'URE ET DU TITRE,

DE L ' A L C 0 0 L UTILISE P O U R L?EXTRACTION DE:S H O R -

DEINES,

Les r6sultats obtenus mon t ren t que le choix du titre est aussi impor tan t que celui de la na ture de ] 'alcool utilis6 pour extraire les prot6ines alcoolo- solubles de l'Orge. Ces protSines sont solubles sur une vaste 6tendue de concentra t ions , de 20 h 80 p. cent pour les alcools 6tudi6s. Ent re ces deux va- leurs leur extractibil i t6 varie consid~rablement , de m6me que leur composit ion.

Les diff@ences de composi t ions ne sont pas visi- bles par 61ectrophor6se des extraits alcooliques, ou des prepara t ions d'hord6,ines semi purifi6es par pr6cipi tat ion. De m6me la composi t ion en acides amin6s est re la t ivement constante d 'une pr4para- l ion d 'hord6ine h l 'autre.

Seule la fi l tration sur gel de S6phadex G 100 permet de mettre en 6vidence deux grands groupes de prot6ines. L ' un est par fa i tement s6par6 par le S6phadex G 100 et par 61ectrophor6se en gel d 'ami- don, et repr6sente toujours sens ib lement la m~me propor t ion de l 'azote de la far ine dans toutes nos pr6parat ions d'hord&ines. L'autre, la f ract ion A, est exclue du S6phadex G 100 et migre tr~s real "~ l'61ectrophor6se, ne donnan t pas de bandes bien individual is6es h l 'oppos6 des hord6ines du pre- mier groupe. La propor t ion de cette fract ion varie en fonct ion de l'efficacit6 du solvant utilis6 pour extraire les prolamines , de telle sorte que route augmentat ion du mater iel extrait par modificat ion du titre ou de la nature du solvant se t radui t pr in- c ipalement par une augmentat ion de sa p ropor t ion par rappor t aux proldines du p remier groupe. Par ailleurs, la composi t ion en acides amin6s de cette fract ion A est tr6s proche de la composi t ion moyenne des hor~16ines du premier groupe de sorte que sa pr6sence peut passer inaperque si on util ise la composi t ion en acides amin6s ou I'61ec-

BIOCHIM1E, 1976, 58, n ° 10.

trophor6se en gel d ' amidon comme crit6re d 'ana- lyse. I1 est remarquable aussi que cette f rac t ion n 'appara isse pas non plus de facon individual is6e dans les f rac t ionnements d 'hord6ines par 61ectro- pbor~se selon Tiselius, r~alis6s par Waldschmidt - Leitz [7] ou selon Hannig par Ivanov [251.

N A T U R E DE, LA FRACTION A ~XCLU~ DU SEPHADEX

G 100.

La taille mol6culaire 61ev6e de la fract ion A et ses propri6t6s 61ectrophor6tiques l ' apparen ten t h des glut61ines.

La compara ison de la fract ion A avec des glut&- lines extraites par l 'acide ac6tique, par l ' analyse de leur composi t ion en acides amin6s, et par 61ec- trophor6se en gel d ' amidon apr6s r6duct ion et aIkylation, mont re que ces produi ts sont ident i- ques. Ils sont constitu6s d 'au moins c inq compo- sants dont quatre migrent exactement au niveau des hord6ines a, ~, v. r6duites et alkyl6es.

Ces observat ions mon t ren t que le mat6riel exclu du S6phadex G 100 ou extrait par l 'acide ac6tique est tr6s semblable s inon ident ique aux hord6ines.

Les propri6t6s par t icul i6res de ce mater iel font qu ' i l peut 6tre extrait de facon plus ou moins im- por tante avec les hord6ines mats aussi apr~s l 'ex- t rac t ion de ces derni~res lots d 'une extract ion plus pouss6e de la farine. Ainsi, il est probable qu' i l const i lue une part impor tan te de l 'hord6al ine de 9ol lock et al. [4I du fail de sa faible solubilit6 dans l '6thanol 65 p. cent et de son extractibil i t6 par l 'acide ac6tique. De m~me sa sensibil i t~ aux agents r6ducteurs dolt faire qu 'on le re t rouve tout ou part ie dans les extraits alcooliques con tenan t des r6ducteurs ntilis6s par plusieurs auteurs [11, 13, 14, 15].

II existe par cons6quent au moins deux cat&go- ries parmi les prot6ines alcoolosolubles de l 'Orge : une extraite assez sp6cifiquement par l '6 thanol 70 p. cent et une autre class6e jusqu'h pr6sent par- m i l e s glut61ines et qui n 'est extraite que par des solvants plus ef,ficaces que l '6thanol h 70 p. cent.

Ces deux fract ions prot6iques sont vraisembla- blelnent associ6es h l ' in t6r ieur des corpuscules prot6iques avec d 'autres substances. En effet, I 'acide ac6tique, h l 'oppos6 des alcools est inca- pable d 'extraire d i rectement les prot6ines alcoolo- solubles sans extract ion pr6alable des prot6ines salinosolubles.

Remerc iements .

Nous remercions de ]eur assistance MM. J. C. Huet pour ies analyses d'acides aminds et M. Sallantin pour les 61ectrophor6ses.

Les prot~ines alcoolosolubles de I'Orge. 1245

R~SUM~.

L ' ex t r ac t i b i l i t 6 p a r l ' 6 t h a n o l , l ' i s o p r o p a n o l et le n - p r o p a n o l a q u e n x des p r o t 6 i n e s a l c o o l o s o l u b ] e s de FOrge es t m e s u r 6 e h t e m p 5 r a t u r e a m b i a n t e . Les q u a n - t i t6s d ' a z o t e e x t r a i t e s p a r c h a q u e a lcool d 6 p e n d e n t 6 t r o i t e m e n t d u t i t r e u t i l i sS. Les c o n c e n t r a t i o n s opt i - m a l e s p o u r c h a c u n tie ces t ro i s a l eoo l s s o n t p a r o rd r e d 'ef f ieaci t5 c r o i s s a n t e : 6 t h a n o l 45 p. cent , i s o p r o p a n o l 40 p. cent , n - p r o p a n o l 35 p. cen t (p /p) .

Des p v 6 p a r a t i o n s d ' h o r d 6 i n e s e x t r a i t e s p a r ees t ro i s s o l u t i o n s a l e o o l i q u e s a i n s i que p a r l ' 6 t h a n o l h 65 p. cen t (p /p ) s o n t c o m p a r 6 e s e n t r e el les , d ' a p r ~ s le p o u r - cen tage d ' azo te de ]a f a r i n e q u ' e l l e s r e p r 6 s e n t e n t et p a r les t e c h n i q u e s s n i v a n t e s : 61ect rophor~se , a n a l y s e de la c o m p o s i t i o n en ac ides aminOs et f i l t r a t ion s u r gel de S e p h a d e x G 100.

Les p r f ipa ra t i ons d tudi6es ne p r ~ s e n t e n t pas de diffe- r e n c e s n o t a b l e s d ' ap r~s leur c o m p o s i t i o n en ae ides amim'~s, on de l e u r d i a g r a m m e 61ec t rophor6 t ique qu i co inpo r t e a u m o i n s 17 b a n d e s . P a r c o n t r e la f i l t r a t ion s u r gel de S 6 p h a d e x G 100 p e r m e t de m e t t r e en 6vi- dence d e u x g r o u p e s p r i n c i p a u x de p r o t 6 i n e s d a n s c h a e u n e des p r e p a r a t i o n s .

L ' u n , e x t r a i t de fa~on e o n s t a n t e q u a l i t a t i v e m e n t et q u a n t i t a t i v e m e n t , darts c h a c u n e des p r 6 p a r a t i o n s , es t f o r m 6 de p r o t 6 i n e s r6vSlab les h l ' 61ec t rophorbse et c o n s t i t u a n t les h o r d S i n e s c l a s s i q u e m e n t d6er i tes .

L ' a u t r e r e p r ~ s e n t e u n e f r a c t i o n d ' a u t a n t p l u s i m p o r - l a n t e de la p r 6 p a r a t i o n que le s o l v a n t u t i l i s6 p o u r l ' e x t r a c t i o n es t p l u s efficace. Ce d e u x i ~ m e g r o u p e de p r o t 6 i n e s e s t exc lu du gel de S 6 p h a d e x G 100 et m i g r e real h l ' 61ec t rophor6se ; il s ' a p p a r e n t e de ce f a i t h des glut61ines. C e p e n d a n l sa c o m p o s i t i o n en ac ides a m i n 6 ses t t r~s v o i s i n e de la c o m p o s i t i o n g loba le des ho rd~ ines . Sa c o m p a r a i s o n avec des g l u t ~ l i n e s e x t r a i t e s p a r l ' ac ide ae~t ique et avec des b o r d 6 i n e s apr6s r~duc- t ion et a l k y l a t i o n , d a n s les t r o i s cas, m o n t r e p a r 61ee- t rophor/~se u n e q u a s i iden t i t5 de cette f r a c t i o n avee ces g lu t~ l ines et c e r t a i n s c o m p o s a n t s r a p i d e s des hord(~ines a p p a r t e n a n t a u x g r o u p e s (~, ~ et y.

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