Pathologies dÕactualit en production avicole · 2 ¥Recrudescence ÐDans les levages de poules pondeuses ÐSur certaines souches de reproducteurs chair ÐSur les poulets de chair

1

Pathologies d’actualité en

production avicole

Colibacilloses

Adenovirus

Brachyspira

Brice ROBINEAU CELTIVET ZI de Kergré 22970 PLOUMAGOAR

Pierre Yves MOALIC FINALAB ZI de Bellevue 35220

CHATEAUBOURG

COLIBACILLOSE AVIAIRE

2

• Recrudescence– Dans les élevages de poules pondeuses

– Sur certaines souches de reproducteurs chair

– Sur les poulets de chair à croissance rapide

• Problématique– Reconnaître les souches réellement pathogènes

( APEC : Avian Pathogenic E.Coli ) a potentialitésepticémique

– Préciser leur épidémiologie

• Transmission horizontale

• Transmission verticale

Adam E. Pedrosa University of Georgia – The PoultryInformed Professional Issue 107 July-August 2009

Année 2009 et 2 premiers mois de 2010

Laboratoires

Labofarm ( Loudéac)

Bio Chene Vert ( Chateaubourg )

Trégobio ( Guingamp )

VT Bio ( Secondigny )

Colibacilles aviaires 3459

Colibacilles aviaires 01K1 56



3

Reproducteurs Production Total

élevage ponte

• Canard 1 5 203 209

• Dinde 1 4 174 179

• Gibier 3

• Pintade 1 1 8 10

• Gallus chair 21 69 345 435

• Gallus ponte 4 2 28 34

( Cas soumis dont les commémoratifs sont correctement renseignés )

COLIBACILLES 078 K80

RECONNAISSANCE DES SOUCHES DE

COLIBACILLES AVIAIRES

PATHOGENES

• Méthodes d’identification phénotypiques

• Méthodes d’identification génotypiques

4

METHODES PHENOTYPIQUES

• SEROTYPAGE

• Sérotypie: mise en évidence des facteurs antigéniques somatique

O, flagellaire H et capsulaire K

• La plupart des souches retrouvées dans des septicémies associées

à de fortes mortalités appartiennent au Sérotype 078K80

Antigène O : LPS Antigène K : capsule

5

METHODES GENOTYPIQUES

• ETUDE DES FACTEURS DE VIRULENCE

• MIGRATION EN CHAMP PULSE ( PFGE)

Facteurs de virulence des

Colibacilles Aviaires• Les adhésines (ou fimbriae)

L’adhésion de la bactérie aux tissus épithéliaux est considéréecomme une étape importante pour l’établissement de l’infection.

- Fimbriae de type 1

- Fimbriae 11 ( ou fimbriae P) : Gène PapC

• L’hémaglutination des érythrocytes

- TSH (thermo sensitive hémagglutinine)

• Résistance au sérum

• Production de colicine

• Hémolysine

• Les systèmes d’acquisition du Fe : sidérophore (aérobactine)

• - Autres mécanismes….

6

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Vandekerchove D et all Vet.Microbiol.2005

Jun 15 ; 108 ( 1-2) : 75 – 87

Virulence – associated traits in avian

Escherichia coli comparison between

isolates from colibacillosis-affected

and clinically healthy layer flocks.

7

Comparaison de souches de colibacilles prélevées sur des troupeauxsains de poules pondeuses ( 15 souches intestinales et 25 souchesextraintestinales ) et des souches prélevées sur des troupeaux depoules pondeuses avec colibacillose ( 20 souches intestinales et 20souches extraintestinales ) .

Facteurs de virulence plus souvent détectés dans les isolats provenantde colibacilloses

Tsh thermo sensitiv hemagglutinin

Iss increased sero survival

iuCa aérobactine

Irp2 yersiniobactine

fyuA récepteur yersiniobactine

ironC Enterobactin siderophore receptor protein

Colicin V production Production de colicine

Conclusion :

Seule la combinaison des facteurs de

virulence : Colicin Production , fyuA et

serum resistance était présente dans les

isolats »pathogènes » comparés aux

isolats d’élevages sans problèmes .

8

TRAVAUX REALISES A PARTIR DE LA

SOUCHOTHEQUE FINALAB

Etude préalable de 5 souches de Coli type 078 K80

isolées de reproducteurs chair et poulets de chair d’une

part et de poules pondeuses d’autres part

Victoria Morrison – Dept of food and environmental

safety – Veterinarian Laboratory Agencies – New Haw

Addleston – Surrey – Grande Bretagne

9

Résultats

0.01-0.01-0.010.000.00astA_consens_10

0.000.000.320.00-0.01sta1_110

1.031.001.021.031.02prob_ihfA_611

0.980.660.960.980.99prob_gapA_611

0.000.970.931.051.04mchF_10

1.031.051.061.071.09iss_10

1.040.961.051.081.08iroN_10

-0.01-0.03-0.01-0.010.00hp_vat_611

-0.020.030.971.041.07hp_tsh_611

-0.01-0.01-0.02-0.010.00hp_toxB_613

0.49-0.01-0.020.08-0.05hp_sigA_611

0.960.680.830.990.95hp_lpfA_611

0.980.910.960.991.01gad_10

NJHGFSubstance

Résultats

Reproducteurs et poulets de chair Reproducteurs et poulets de chair Lien géographiqueLien géographique

0.01-0.01-0.010.000.00astA_consens_10

0.000.000.320.00-0.01sta1_110

1.031.001.021.031.02prob_ihfA_611

0.980.660.960.980.99prob_gapA_611

0.000.970.931.051.04mchF_10

1.031.051.061.071.09iss_10

1.040.961.051.081.08iroN_10

-0.01-0.03-0.01-0.010.00hp_vat_611

-0.020.030.971.041.07hp_tsh_611

-0.01-0.01-0.02-0.010.00hp_toxB_613

0.49-0.01-0.020.08-0.05hp_sigA_611

0.960.680.830.990.95hp_lpfA_611

0.980.910.960.991.01gad_10

NJHGFSubstance

TshTsh = marqueur? = marqueur?

Pondeuses Pondeuses

10

PROUVER LA CLONALITE entre des souches susceptibles d’être liées

épidémiologiquement

Suspicion de transmission verticale des reproducteursvers les

poussins

• L ’idéal : séquençage, organisation de séquences et comparaison

des séquences

• En pratique : comparaison de profils de bandes d’un

échantillonnage du génome couplée à l’étude des facteurs de

virulence

EPIDEMIOLOGIE

- 14 souches E. coli reçues d’un laboratoire

(septicémiques, 078K80, même origine

géographique)

- certaines souches présentent des profils

ATB identiques

- analyses réalisées : Test PCR FV APEC

(11 facteurs de virulence (iss, irp2, iucD, iroN,

ompT, hlyF, astA, papC, tsh, vat, cvi))

11

55544321111111

+ + + + + + + + + + + + + +hémolysine aviairehlyF

+ + + + + + + + + + + + + +gène protéase de la

membrane externe

om

p

T

+ + + + + + + + + + + + + +

gène récepteur du

sidérophore

chalmodélineiroN

+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le

sérumiss

+ + + + + + + - - - - - - -Yersiniobactineirp2

- - - + + + + + + + + + + +Aerobactineiuc

D

- - - - - - - - - - - - - -Toxine thermo stable

enteroaggregative

ast

A

- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepap

C

- - - - - - + + + + + + + +

Hemagglutinine

thermo sensibletsh

- - - - - - - - - - - - - -

Toxine de

vacuolisationvat

- - - + + - + + + + + + + +Plasmide Colicine Vcvi

NMLKJIHGFEDCBADéfinition

Reproducteurs et poulets de chair Reproducteurs et poulets de chair 1 marqueur différent Pondeuses Pondeuses

Analyse

- 5 profils se dégagent : 1 à 5

- Profil 1 représente des souches partageant à la foisun lien géographique et épidémiologique

- 6 souches appartiennent aux profils 3, 4 et 5

- profil 2 : 1 souche intermédiaire

Conclusion

- PCR FV permet de faire un premier tri de souches :

1 cluster dominant

- Poursuivre par une analyse moléculaire plus fine

12

Outils d’analyse moléculaire : analyse en champ pulsé PFGE

(AFSSA Maisons Alfort – Dr Marault )

A

B

C

D

E

F

G

I

J

K

L

M

N

Outils d’analyse moléculaire : analyse en champ pulsé

PFGE

A

B

C

D

E

F

G

I

J

K

L

M

N

Reproducteurs et poulets de chairReproducteurs et poulets de chair

13

A

I

J

K

L

•A et I : moins de 80% de similitude

•A/I et le reste : moins de 70% de similitude

•Les souches J et K : 91% de similitude / profils FV identiques

14

Bilan

555432?1111111Profil PFGE

55544321111111Profil FV


+ + + + + + + + + + + + + +

gène protéase de la membrane

externe

omp

T

+ + + + + + + + + + + + + +

gène récepteur du sidérophore

chalmodélineiroN

+ + + + + + + + + + + + + +facteur de survie dans le sérumiss


- - - + + + + + + + + + + +AerobactineiucD

- - - - - - - - - - - - - -

Toxine thermo stable

enteroaggregativeastA

- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC

- - - - - - + + + + + + + +Hemagglutinine thermo sensibletsh

- - - - - - - - - - - - - -Toxine de vacuolisationvat



Bilan


55544321111111Profil FV


+ + + + + + + + + + + + + +


externe

omp

T

+ + + + + + + + + + + + + +


chalmodélineiroN




- - - - - - - - - - - - - -



- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC





Cluster

15

Bilan


55544321111111Profil FV


+ + + + + + + + + + + + + +


externe

omp

T

+ + + + + + + + + + + + + +


chalmodélineiroN




- - - - - - - - - - - - - -



- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC





Souche « intermédiaire »

Bilan


55544321111111Profil FV


+ + + + + + + + + + + + + +


externe

omp

T

+ + + + + + + + + + + + + +


chalmodélineiroN




- - - - - - - - - - - - - -



- - - - - + - - - - - - - -P fimbriaepapC





Groupe « hétérogène »

16

Conclusion

• PCR sur facteurs de virulence et PFGEpermettent une approche épidémiologique descolibacilles aviaires

• La transmission verticale dominante estfortement suspectée

• Pour limiter les traitements antibiotiquesl’utilisation de vaccins ou d’autovaccins sur lesreproducteurs est une perspective intéressante

ADENOVIRUS AVIAIRES

17

ADENOVIRUS CHEZ LES

VOLAILLES

• Aviadenovirus• - chicken: FAdV 1-12 (5 species A-E)

• - goose: GAdV 1-3

• - duck: DAdV 2

• - turkey: TAdV 1-2

• Siadenovirus• - turkey: TAdV 3

• pheasant: MSDV

• chicken: AASV

• Atadenovirus• -chicken: EDS (DAdV 1)

Fowl adenovirus (FAdV)

• Inclusion Body Hepatitis (IBH)

1957: Yates & Fry: Premier isolement d’Adenovirus Aviaire

(CELO (Chicken embryo lethal orphan)

1963: Helmboldt & Frazier: Description d’une hépatite àcorps d’inclusion

1973: Winterfield et al.: hepatite chez de jeunes pouletsinduite par une inoculation sous cutanée de virus FaDV

1990 PAKISTAN : Syndrôme d’Hydropéricarde ( HHS )

18

Michael HESS – Université de Vienne – Réunion Couvoirs Dec 2009 -

Chateaubourg

EXPRESSION CLINIQUE

Dépend de la quantité de virus transmis

• transmission verticale : forte quantité

•Transmission horizontale : faible quantité

Association possible avec d’autres virus immunodépresseurs

• Gumboro

•Anémie Infectieuse

Maladie des élevages de reproducteurs bien protégés .

Transmission verticale prépondérante

19

1976: Fadly et al.: Co-infection of adenovirus

with infectious bursal disease virus is of

importance for IBH

1979: Yuasa et al.: Description of chicken

aneamia virus (CAV)

1986: v.Bülow et al.: pathogenicity of certain

avian adenoviruses increase after co-infection

with CAV

ASSOCIATION DES ADENOVIRUS AVEC VIRUS

IMMUNODEPRESSEURS

• Cas clinique - Poulettes futures repros

Mortalité journalière

0

50

100

150

200

250

300

1 3 5 7 9

11

13

15

17

19

21

23

25

27

p3 6810 poulettes

départ

p4 10320 poulettes

départ

20

• Diagnostic histologique : hépatite à inclusion

• Diagnostic sérologique : précipitation en milieugélosé à 8 semaines ; robuste mais peu sensible

– P1 0 + / 15 sérums

– P2 0 + / 15 sérums

– P3 4 + / 15 sérums Mortalité

– P4 6 + / 15 sérums Mortalité

• Pas se diagnostic sérologique de routinepermettant de connaître le statut des troupeauxde reproducteurs

21

HYDRO PERICARDE

Diagnostic histologique

Cliché fourni par Dr Olivier ALBARIC ENV Nantes

22

• Pathologie d’actualité du fait de l’isolement

sanitaire des reproducteurs ne permettant

pas une contamination « naturelle » avant

la ponte

• Risque de contamination des noyaux

génétiques

• Diffusion verticale très importante du fait

de l’absence de vaccination

23

BRACHYSPIRA

• Les Brachyspirae appartiennent au groupe des Spirochetae ,bactéries connues pour leur pouvoir pathogène chez l’homme etl’animal où elles provoquent principalement des affectionsdigestives et génitales.

• Ce sont des bactéries assimilées Gram - , hélicoidales ( L : 8 à 10microns ) , non sporulées , extrémement mobiles ce qui permet deles déceler par examen microscopique où elles apparaissentanimées d’un mouvement ondulatoire continu les faisant traverser lechamp du microscope .

• Chez les volailles les Brachyspirae sont associés à des pathologiesintestinales et appartiennent aux principales espèces suivantes :

• Brachyspira Intermediae

• Bracyspira Pilosicoli

• Bracyspira Innocens

• On peut également isoler Brachyspira Hyodysenteriae plus fréquentchez le porc mais pouvant être associé à des épisodespathologiques chez la poule.

• Brachyspira Alvinipulli et Brachhyspira Murdochii sont deux espècesdécrites chez les volailles mais de pathogénicité discutable.

24

• La transmission horizontale entre différentesespèces est avérée notamment pourBrachyspira Pilosicoli .Brachyspira Intermediaeest connu uniquement chez le porc et la volaillece qui limite la transmission entre ces deuxespèces , de même que pour BrachyspiraHyodysenteriae essentiellement porcin.

• La persistance du germe dans l’environnementest connue . Brachyspira Pilosicoli résisterait210 jours dans des fecès ( Boyé et al 2001 ) .Ceci explique les recontaminations dans desélevages de poules au sol ( Swayne et al 1992 ). La contamination par des eaux stagnantes estpossible car Brachyspira Pilosicoli peut y résister66 jours à 4°C ( Oxberry et all )

Symptomatologie

• Expérimentalement l’infection des poulespondeuses par Brachyspira Intermediaeprovoque une élévation du contenu hydriquedes caecums et une réduction de la productiond’œufs ( Hampson et Mac Laren Avianpathology 19999 – 28 )

• Chez les poules pondeuses les signes d’alertesont une baisse de ponte progressive ainsique la présence de fientes mousseuses ouliquides associée à une odeur fétide . Aprèsquelque temps d’évolution des animaux auxcrêtes rabougries et montrant une prostrationapparaissent dans le troupeau .

25

Fiente caecale mousseuse suspecte de contamination par

Brachyspira

Brachyspira au microscope optique

26

Prevalence de Brachyspira dans

les élevages de pondeuses(Dwar et al, 1989; Stephens & Hampson, 1999; Bano et al, 2005)

28*3134Pathogenic

spirochaetes (%)

28*7268All spirochaetes

(%)

1792950Number of flocks

NetherlandsItalyAustraliaCountry

* = Troupeaux avec entérite

PCR Classique ( ADIAGENE ) détecte le

genre Bracyspira + Typage Pilosicoli

RT PCR ( LABOFARM )

15 écouvillons cloacaux

27

Statistiques Brachyspira

LABOFARM

2009 : 110 Brachytests en France

• 58% positifs

• Brachyspira Intermediae 75%

• Brachyspira Pilosicoli 35%

• Brachyspira Hyodysentariae 7,3%

• Brachyspira 0%

ISA BROWN 2006 - TABLEAU DE BORD

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1618 2022 242628 3032 343638 4042 4446 485052 5456 586062 6466 687072 7476 7880

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

% viabilité

%ponte

170

190

180

160

150

Age en semaines

Poids

de

l'oeuf

en g

08&10 46 800

lundi 9 juin

NomN° de Date Date de Nombre de

28

CONCLUSION

- Prévalence en relation avec nouveaux

modes d’élevages ( élevages de poules

au sol )

- Possible relation avec qualité de l’aliment

Documents

Pathologies dÕactualit en production avicole · 2 ¥Recrudescence ÐDans les levages de poules pondeuses ÐSur certaines souches de reproducteurs chair ÐSur les poulets de chair