REF 20 100 / 20 160

bioMérieux® SA Français - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - FR - 2004/05

® 20 ESystème d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux

INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 E est un système standardisé pour l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice.

PRINCIPELa galerie API 20 E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification.

PRESENTATION Coffret de 25 tests (réf. 20 100) - 25 galeries API 20 E - 25 boîtes d'incubation - 25 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice

Coffret de 100 tests (réf. 20 160) - 100 galeries API 20 E (4x25 galeries) - 100 boîtes d'incubation - 100 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice

COMPOSITION DE LA GALERIE La composition de la galerie API 20 E est reportée dans le Tableau de Lecture de cette notice.

REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNISRéactifs :- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Réf. 20 230) ou

API Suspension Medium, 5 ml (Réf. 20 150) - API 20 E coffret de réactifs (Réf. 20 120) ou

réactifs individuels : TDA (Réf. 70 402) JAMES (Réf. 70 542) VP 1 + VP 2 (Réf. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442)

- Réactif Zn (Réf. 70 380) - Oxydase (Réf. 55 635*)

* référence non commercialisée dans certains pays : utiliser un réactif équivalent.

- Huile de paraffine (Réf. 70 100) - Catalogue Analytique API 20 E (Réf. 20 190) ou

logiciel d'identification (consulter bioMérieux)

Matériel : - Pipettes ou PSIpettes - Protège-ampoules - Portoir pour ampoules - Equipement général de laboratoire de bactériologie

REACTIFS COMPLEMENTAIRES : - API OF Medium (Réf. 50 110) :

Test pour la détermination du métabolisme fermentatif ou oxydatif du glucose.

- API M Medium (Réf. 50 120) : Test pour la détermination de la mobilité des bactéries aéro-anaérobies.

PRECAUTIONS D'UTILISATION • Pour diagnostic in vitro et pour contrôle micro-

biologique. • Pour usage professionnel uniquement. • Ce coffret contient des composants d'origine animale.

La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler).

• Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme poten-tiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation.

• Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption. • Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage

des différents composants. • Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy-

sique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, … • Les performances présentées sont obtenues avec la

méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé-viation de méthodologie peut altérer les résultats.

• L'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme.

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CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries sont présentes dans une poche en aluminium avec sachets déshydratants. Après ouverture de celle-ci (*), conserver les galeries restantes avec les déshydratants en refermant la poche à l'aide de la barrette de fermeture (présente dans le coffret) : placer l'extrémité de la poche entre les deux pièces de la barrette et les clamper soigneusement, à fond, sur toute leur longueur. Les galeries peuvent ainsi être conservées 10 mois après ouverture de la poche,à 2-8°C (ou jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage, si celle-ci est antérieure). (*) Recommandation pour l'ouverture de celle-ci : couper juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche droite, pour éviter d'endommager les sachets déshydra- tants.

ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 E ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autres. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté à la culture des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux selon les techniques usuelles de bactériologie.

MODE OPERATOIRE Test oxydase Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du fabricant, il constitue le 21ème test d’identification à noter sur la fiche de résultats.

Préparation de la galerie • Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et

répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.

• Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation).

• Sortir la galerie de son emballage. • Placer la galerie dans la boîte d'incubation. NOTE : API 20 E doit être utilisé avec des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants et nécessitant des précautions de manipulation particulières (ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base de données API 20 E. Il convient d'utiliser d'autres techniques pour exclure ou confirmer leur présence.

Préparation de l'inoculum • Ouvrir une ampoule d'API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)

ou une ampoule d'API Suspension Medium (5 ml) comme indiqué au paragraphe "Précautions" de la notice du produit, ou utiliser un tube contenant 5 ml d'eau physiologique stérile ou d'eau distillée stérile, sans additif.

• A l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utiliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures).

• Réaliser une suspension bactérienne en homo-généisant soigneusement les bactéries dans le milieu. Cette suspension doit être utilisée extemporanément.

NOTE : la plupart des espèces de Vibrio sont halophiles. En cas de suspicion d'un Vibrio, réaliser la suspension bactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium.

Inoculation de la galerie • Remplir tubes et cupules des tests CIT , VP et

GEL avec la suspension bactérienne en utilisant la pipette ayant servi au prélèvement.

• Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests.

• Créer une anaérobiose dans les tests ADH, LDC, ODC,H2S, URE en remplissant leur cupule d'huile de paraffine.

• Refermer la boîte d'incubation. • Incuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures.

LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie • Après incubation, la lecture de la galerie doit se faire en

se référant au Tableau de Lecture. • Si 3 tests ou plus (test GLU + ou –) sont positifs, noter

sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs : - Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA. Une

couleur marron-rougeâtre indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats.

- Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Une couleur rose diffusant dans toute la cupule indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats.

- Test VP : ajouter 1 goutte des réactifs VP 1 et VP 2. Attendre au minimum 10 minutes. Une couleur rose ou rouge indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. Une faible coloration roseapparaissant après 10 minutes doit être considérée négative.

NOTE : Le test de la recherche de production d’indole doit être réalisé en dernier, car cette réaction libère des gaz qui risquent d’altérer l’interprétation d’autres tests de la galerie. Ne pas remettre le couvercle d’incubation après l’ajout du réactif.

• Si le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y compris le test GLU) est inférieur à 3 : - Réincuber la galerie 24 heures (± 2 heures) de plus

sans rajouter les réactifs. - Révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs (voir

paragraphe précédent). - Pour compléter l'identification, il peut être utile de

réaliser des tests complémentaires (se reporter au paragraphe Identification).

InterprétationL'identification est obtenue à partir du profil numérique.• Détermination du profil numérique :

Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. La galerie API 20 E comportant 20 tests, en additionnant à l'intérieur de chaque groupe les valeurs correspondant à des réactions positives, on obtient 7 chiffres ; la réaction de l'oxydase qui constitue le 21ème test est affectée de la valeur 4 lorsqu'elle est positive.

• Identification : Elle est réalisée à partir de la base de données (V4.0) * à l'aide du Catalogue Analytique : - Rechercher le profil numérique dans la liste des

profils.* à l'aide du logiciel d'identification : - Entrer manuellement au clavier le profil numérique à

7 chiffres.

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Par ailleurs dans certains cas, le profil à 7 chiffres étant insuffisamment discriminant, les tests complémentaires suivants sont nécessaires : - Réduction des nitrates en nitrites (NO2) et en azote (N2) :

ajouter 1 goutte des réactifs NIT 1 et NIT 2 dans le tube GLU. Attendre 2 à 5 minutes. Une coloration rougeindique une réaction positive (NO2). Une réaction négative (coloration jaune) peut être due à la production d'azote (éventuellement signalée par la présence de microbulles) : ajouter 2 à 3 mg de réactif Zn dans la cupule GLU. Après 5 minutes, un tube resté jauneindique une réaction positive (N2) à noter sur la fiche de résultats. Si la cupule est orange-rouge, la réaction est négative, les nitrates encore présents dans le tube ont été réduits en nitrites par le Zinc. Cette réaction est intéressante pour les bacilles à Gram négatif oxydase positive.

NOTE : Pour les mêmes raisons que le test indole (se référer à la note du paragraphe "Lecture de la galerie"), le test de réduction des nitrates doit être réalisé en dernier.

- Mobilité (MOB) : Inoculer une ampoule d'API M Medium (cf notice).

- Culture sur gélose de MacConkey (McC) : Ensemencer un milieu de Mac Conkey (cf notice).

- Oxydation du glucose (OF-O) : Inoculer une ampoule d'API OF Medium (cf notice).

- Fermentation du glucose (OF-F) : Inoculer une ampoule d'API OF Medium (cf notice).

Ces tests complémentaires, mentionnés dans l'introduction (Codage des profils) du Catalogue Analytique, peuvent être utilisés pour constituer un profil à 9 chiffres, identifiable avec le logiciel d'identification.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae D’autres tests supplémentaires peuvent être proposés en cas de faible discrimination. Se référer au logiciel ou Catalogue Analytique.

CONTROLE DE QUALITE Les milieux, galeries et réactifs font l'objet de contrôles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur fabrication. Un contrôle bactériologique des tests de la galerie est de plus réalisable par l’utilisateur avec la souche 1. Escherichia coli ATCC 25922 de préférence ou l’une des souches suivantes :

2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047

4. Proteus mirabilis ATCC 35659 5. Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae ATCC 35657

ATCC : American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.

ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2*

1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* Le stade N2 (+) peut être observé pour la souche ATCC 13047 et la souche ATCC 25922. • Profil obtenu après 24-48 H d'incubation pour la souche ATCC 51331, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang.• Profils obtenus après 18-24 H d'incubation pour les autres souches, à partir de colonies cultivées sur gélose Trypcase Soja + sang.• Suspension bactérienne préparée en API NaCl 0.85 % Medium. Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que le contrôle de qualité est mis en oeuvre conformément à la législation locale en vigueur.

LIMITES DU TEST • Le système API 20 E est destiné à l'identification des

Enterobacteriaceae et des bacilles à Gram négatif non fastidieux présents dans la base de données (voir Tableau d'Identification en fin de notice) et à eux seuls. Il ne peut être utilisé pour identifier d'autres microorganismes ou exclure leur présence.

• Des discordances par rapport aux techniques conventionnelles peuvent être observées. Elles sont dues aux différences de principe des réactions utilisées en technique API. Des écarts de pourcentages peuvent également être observés et s'expliquent par des variations de substrat.

• Pour certaines espèces (ex. Klebsiella ou Proteus), des réactions du test glucose initialement positives peuvent parfois devenir négatives (apparition d'une coloration bleu-vert). Dans ce cas, cette réaction doit être considérée comme négative. Les pourcentages indiqués dans le Tableau d'Identification prennent en compte ce genre de phénomène.

• Dans le cas d’identification à Salmonella ou Shigella,une identification sérologique doit être effectuée pour confirmer l’identification bactérienne.

• Les bacilles à Gram négatif non fermentants, isolés de patients atteints de mucoviscidose, peuvent générer des profils biochimiques atypiques susceptibles d’altérer leur identification.

• Seules des cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent être utilisées.

RESULTATS ATTENDUS Se référer au Tableau d'Identification en fin de cette notice pour les résultats attendus des différentes réactions biochimiques.

PERFORMANCES • Enterobacteriaceae :

5514 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espèces de la base de données ont été testées : - 92,80 % des souches ont été correctement identifiées

(avec ou sans tests complémentaires). - 4,61 % des souches n'ont pas été identifiées. - 2,59 % des souches ont été mal identifiées.

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• autres bacilles à Gram négatif non fastidieux : 2386 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espèces de la base de données ont été testées : - 90,32 % des souches ont été correctement identifiées

(avec ou sans tests complémentaires). - 6,16 % des souches n'ont pas été identifiées. - 3,52 % des souches ont été mal identifiées.

ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les matériels à usage unique contaminés en suivant les procédures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectieux. Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et les effluents qu'il produit selon leur nature et leur dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le traitement et l'élimination selon les réglementations applicables.

TABLEAU DE LECTURE

RESULTATS TESTS COMPOSANTS ACTIFS QTE

(mg/cup.) REACTIONS/ENZYMESNEGATIF POSITIF

ONPG 2-nitrophényl-ßD- galactopyranoside 0,223

ß-galactosidase(Ortho NitroPhényl-ßD- Galactopyranosidase)

incolore jaune (1)

ADH L-arginine 1,9 Arginine DiHydrolase jaune rouge / orangé (2)

LDC L-lysine 1,9 Lysine DéCarboxylase jaune rouge / orangé (2)

ODC L-ornithine 1,9 Ornithine DéCarboxylase jaune rouge / orangé (2)

CIT trisodium citrate 0,756 utilisation du CITrate vert pâle / jaune bleu-vert / bleu (3)

H2S sodium thiosulfate 0,075 production d'H2S incolore / grisâtre dépot noir / fin liseré

URE urée 0,76 UREase jaune rouge / orangé (2)

TDA / immédiatTDA L-tryptophane 0,38 Tryptophane DésAminase jaune marron-rougeâtre

JAMES / immédiat

IND L-tryptophane 0,19 production d’INDole incolore vert pâle / jaune

rose

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP sodium pyruvate 1,9 production d'acétoïne (Voges Proskauer) incolore rose / rouge (5)

GEL gélatine(origine bovine) 0,6 Gélatinase (GELatine) non diffusion diffusion du pigment noir

GLU D-glucose 1,9 fermentation / oxydation (GLUcose) (4) bleu / bleu-vert jaune / jaune gris

MAN D-mannitol 1,9 fermentation / oxydation (MANnitol) (4) bleu / bleu-vert jaune

INO inositol 1,9 fermentation / oxydation (INOsitol) (4) bleu / bleu-vert jaune

SOR D-sorbitol 1,9 fermentation / oxydation (SORbitol) (4) bleu / bleu-vert jaune

RHA L-rhamnose 1,9 fermentation / oxydation (RHAmnose) (4) bleu / bleu-vert jaune

SAC D-saccharose 1,9 fermentation / oxydation (SACcharose) (4) bleu / bleu-vert jaune

MEL D-melibiose 1,9 fermentation / oxydation (MELibiose) (4) bleu / bleu-vert jaune

AMY amygdaline 0,57 fermentation / oxydation (AMYgdaline) (4) bleu / bleu-vert jaune

ARA L-arabinose 1,9 fermentation / oxydation (ARAbinose) (4) bleu / bleu-vert jaune

OX (voir notice du test oxydase) cytochrome-OXydase (voir notice du test oxydase)

(1) Une très légère couleur jaune est également positive. (2) Une couleur orange apparaissant après 36-48 H d'incubation doit être considérée négative. (3) Lecture dans la cupule (zone aérobie). (4) La fermentation commence dans la partie inférieure des tubes, l'oxydation commence dans la cupule. (5) Une légère coloration rose apparaissant après 10 minutes doit être lue négative. • Les quantités indiquées peuvent être ajustées en fonction des titres des matières premières. • Certaines cupules contiennent des composants d’origine animale, notamment des peptones.

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bioMérieux® SAau capital de 11 879 045 € 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com

bioMérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tél. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11

Imprimé en France

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TESTS COMPLEMENTAIRES

RESULTATSTESTS COMPOSANTS ACTIFS QTE

(mg/cup.) REACTIONS/ENZYMES NEGATIF POSITIF

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minproduction de NO2 jaune rouge

potassium nitrate 0,076 Zn / 5 min

Réductiondes

nitratestube GLU réduction au stade N2 orange-rouge jaune

MOBAPI M Medium ou microscope mobilité immobile mobile

McC milieu de MacConkey culture absence présence OF-F OF-O glucose (API OF Medium) fermentation : sous huile

oxydation : à l'air vert vert

jaunejaune

METHODOLOGIE p. I TABLEAU D'IDENTIFICATION p. II BIBLIOGRAPHIE p. IV TABLE DES SYMBOLES p. V

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REF 20 100 / 20 160 07584E - GB - 2004/05

® 20 EIdentification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious Gram-negative rods

SUMMARY AND EXPLANATION API 20 E is a standardized identification system for Enterobacteriaceae and other non-fastidious, Gram-negative rods which uses 21 miniaturized biochemical tests and a database. The complete list of those organisms that it is possible to identify with this system is given in the Identification Table at the end of this package insert.

PRINCIPLEThe API 20 E strip consists of 20 microtubes containing dehydrated substrates. These tests are inoculated with a bacterial suspension that reconstitutes the media. During incubation, metabolism produces color changes that are either spontaneous or revealed by the addition of reagents. The reactions are read according to the Reading Table and the identification is obtained by referring to the Analytical Profile Index or using the identification software.

CONTENT OF THE KIT Kit for 25 tests (ref. 20 100) - 25 API 20 E strips - 25 incubation boxes - 25 result sheets - 1 clip seal - 1 package insert

Kit for 100 tests (ref. 20 160) - 100 API 20 E strips (4x25 strips) - 100 incubation boxes - 100 result sheets - 1 clip seal - 1 package insert

COMPOSITION OF THE STRIP The composition of the API 20 E strip is given in the Reading Table of this package insert.

REAGENTS AND MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDEDReagents : - API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) or

API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) or

individual reagents : TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn reagent (Ref. 70 380) - Oxidase (Ref. 55 635*)

* reference not sold in certain countries : use an equivalent reagent.

- Mineral oil (Ref. 70 100) - API 20 E Analytical Profile Index (Ref. 20 190) or

identification software (consult bioMérieux)

Material : - Pipettes or PSIpettes - Ampule protector - Ampule rack - General microbiology laboratory equipment

POSSIBLE ADDITIONAL REAGENTS : - API OF Medium (Ref. 50 110) :

Test for the determination of fermentative or oxidative metabolism.

- API M Medium (Ref. 50 120) : Test for motility of facultative anaerobic bacteria.

WARNINGS AND PRECAUTIONS • For in vitro diagnostic use and microbiological

control. • For professional use only. • This kit contains products of animal origin. Certified

knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals does not totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infectious, and handled observing the usual safety precautions (do not ingest or inhale).

• All specimens, microbial cultures and inoculated products should be considered infectious and handled appropriately. Aseptic technique and usual precautions for handling the bacterial group studied should be observed throughout this procedure. Refer to "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue;Approved Guideline - Current revision". For additional handling precautions, refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Latest edition", or to the regulations currently in use in each country.

• Do not use reagents past the expiration date. • Before use, check that the packaging of the various

components is intact. • Do not use strips which have been damaged : cupules

deformed, desiccant sachet open, etc. • The performance data presented were obtained using

the procedure indicated in this package insert. Any change or modification in the procedure may affect the results.

• Interpretation of the test results should be made taking into consideration the patient history, the source of the specimen, colonial and microscopic morphology of the strain and, if necessary, the results of any other tests performed, particularly the antimicrobial susceptibility patterns.

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STORAGE CONDITIONS The strips are supplied in an aluminum pouch with desiccant sachets. Once opened (*), the pouch should be re-sealed using the clip seal (included in the kit) to preserve the remaining strips with the desiccant sachets : place the open end of the pouch along the seal and carefully clamp between the two parts. The strips may then be kept for up to 10 months after the pouch has been opened, at 2-8°C (or until the expiration date indicated on the packaging, if this comes before). (*) Recommended method for opening the pouches : cut open the pouch just below the seal while holding the pouch upright, in order to avoid damaging the desiccant sachets.

SPECIMENS (COLLECTION AND PREPARATION) API 20 E is not for use directly with clinical or other specimens. The microorganisms to be identified must first be isolated on a culture medium adapted to the culture of Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative rods, according to standard microbiological techniques.

INSTRUCTIONS FOR USE Oxidase test The oxidase test must be performed according to the manufacturer's instructions for use. The result should be recorded on the result sheet as it is an integral part of the final profile (21st identification test).

Preparation of the strip • Prepare an incubation box (tray and lid) and distribute

about 5 ml of distilled water or demineralized water [or any water without additives or chemicals which may release gases (e.g., Cl2, CO2, etc.)] into the honey- combed wells of the tray to create a humid atmosphere.

• Record the strain reference on the elongated flap of the tray. (Do not record the reference on the lid as it may be misplaced during the procedure.)

• Remove the strip from its packaging. • Place the strip in the incubation box. NOTE : API 20 E should only be used with Enterobacteriaceae and/or non-fastidious Gram-negative rods. Fastidious organisms having demanding nutritional requirements and requiring appropriate handling precautions (i.e., Brucella and Francisella) are not included in the API 20 E database. Alternative procedures must be used to exclude or confirm their presence.

Preparation of the inoculum • Open an ampule of API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) or

an ampule of API Suspension Medium (5 ml) as indicated in the paragraph "Warnings and Precautions" of the package insert for these products, or use any tube containing 5 ml of sterile saline or sterile distilled water, without additives.

• Using a pipette or PSIpette, remove a single well-isolated colony from an isolation plate. It is recommended to use young cultures (18-24 hours old).

• Carefully emulsify to achieve a homogeneous bacterial suspension.This suspension must be used immediately after preparation.

NOTE : most Vibrio species are halophilous. If a Vibrio is suspected, suspend the bacteria in API NaCl 0.85 % Medium.

Inoculation of the strip • Using the same pipette, fill both tube and cupule of

the tests CIT , VP and GEL with the bacterial suspension.

• Fill only the tube (and not the cupule) of the other tests. • Create anaerobiosis in the tests ADH, LDC, ODC, H2S

and URE by overlaying with mineral oil. • Close the incubation box. • Incubate at 36°C ± 2°C for 18-24 hours.

READING AND INTERPRETATION Reading the strip • After the incubation period, read the strip by referring to

the Reading Table. • If 3 or more tests (GLU test + or –) are positive, record

all the spontaneous reactions on the result sheet and then reveal the tests which require the addition of reagents : - TDA Test : add 1 drop of TDA reagent. A reddish

brown color indicates a positive reaction to be recorded on the result sheet.

- IND Test : add 1 drop of JAMES reagent. A pink color developed in the whole cupule indicates a positivereaction to be recorded on the result sheet.

- VP Test : add 1 drop each of VP 1 and VP 2 reagents. Wait at least 10 minutes. A pink or red color indicates a positive reaction to be recorded on the result sheet. If a slightly pink color appears after 10 minutes, the reaction should be considered negative.

NOTE : The indole production test must be performed last since this reaction releases gaseous products which interfere with the interpretation of other tests on the strip. The plastic incubation lid should not be replaced after the addition of the reagent.

• If the number of positive tests (including the GLU test) before adding the reagents is less than 3 : - Reincubate the strip for a further 24 hours (± 2 hours)

without adding any reagents. - Reveal the tests requiring the addition of reagents

(see previous paragraph). - To complete the identification, it may be necessary to

perform supplementary tests (refer to Identification paragraph).

InterpretationIdentification is obtained with the numerical profile.• Determination of the numerical profile :

On the result sheet, the tests are separated into groups of 3 and a value 1, 2 or 4 is indicated for each. By adding together the values corresponding to positive reactions within each group, a 7-digit profile number is obtained for the 20 tests of the API 20 E strip. The oxidase reaction constitutes the 21st test and has a value of 4 if it is positive.

• Identification : This is performed using the database (V4.0) * with the Analytical Profile Index : - Look up the numerical profile in the list of profiles.

* with the identification software : - Enter the 7-digit numerical profile manually via the

keyboard.

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In some cases, the 7-digit profile is not discriminatory enough and the following supplementary tests need to be carried out : - Reduction of nitrates to nitrites (NO2) and N2 gas (N2) :

add 1 drop each of NIT 1 and NIT 2 reagents to the GLU tube. Wait 2 to 5 minutes. A red color indicates a positive reaction (NO2). A negative reaction (yellow) may be due to the reduction to nitrogen (as sometimes evidenced by gas bubbles) : add 2 to 3 mg of Zn reagent to the GLU tube. After 5 minutes, if the tube remains yellow this indicates a positive reaction (N2) to be recorded on the result sheet. If the test turns orange-red, this is a negative reaction : the nitrates still present in the tube have been reduced by the Zinc. This reaction is useful when testing Gram-negative, oxidase positive rods.

NOTE : For the same reason as the indole test (see the note in the paragraph "Reading the strip"), the nitrate reduction test must be performed last.

- Motility (MOB) : Inoculate an ampule of API M Medium (see package insert).

- Growth on MacConkey agar medium (McC) : Streak a MacConkey agar plate (see package insert).

- Oxidation of glucose (OF-O) : Inoculate an ampule of API OF Medium (see package insert).

- Fermentation of glucose (OF-F) : Inoculate an ampule of API OF Medium (see package insert).

These supplementary tests, indicated in the introduction section (Profile coding) of the Analytical Profile Index, may be used to form a 9-digit profile. Identification is then obtained using the identification software.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviaeFurther tests may be proposed in case of low discrimination. Refer to the identification software or Analytical Profile Index.

QUALITY CONTROL The media, strips, and reagents are systematically quality controlled at various stages of their manufacture. For those users who wish to perform their own quality control tests with the strip, it is preferable to use the strain 1. Escherichia coli ATCC 25922 or else one of the following strains :





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* The N2 (+) state may be observed for the strain ATCC 13047 and the strain ATCC 25922. • Profile obtained after 24-48 hours of incubation for the strain ATCC 51331, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood.• Profiles obtained after 18-24 hours of incubation for the other strains, using colonies grown on Trypticase Soy agar + blood. • Bacterial suspensions prepared in API NaCl 0.85 % Medium. It is the responsibility of the user to perform Quality Control in accordance with any local applicable regulations.

LIMITATIONS OF THE METHOD • The API 20 E system is intended uniquely for the

identification of Enterobacteriaceae and those non-fastidious, Gram-negative rods included in the database (see Identification Table at the end of this package insert). It cannot be used to identify any other microorganisms or to exclude their presence.

• Discrepancies with respect to conventional methods may be observed. They are due to the different principles of the reactions used in the API technique. In addition, substrate variations exist that also account for percentage differences.

• On rare occasions, the glucose reactions for organisms such as Klebsiella or Proteus may revert from positive to negative, in which instance a bluish-green color is seen. This reaction will be recorded as a negative reaction. Such occurrences are reflected in the percentages indicated in the Identification Table.

• If Salmonella or Shigella are identified, serological identification must be performed to confirm the bacterial identification.

• Nonfermentative, Gram-negative rods, isolated from patients with cystic fibrosis, may generate atypical biochemical profiles, which may affect identification.

• Only pure cultures of a single organism should be used.

RANGE OF EXPECTED RESULTS Consult the Identification Table at the end of this package insert for the range of expected results for the various biochemical reactions.

PERFORMANCE • Enterobacteriaceae :

5514 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested:- 92.80 % of the strains were correctly identified

(with or without supplementary tests). - 4.61 % of the strains were not identified. - 2.59 % of the strains were misidentified.

• Other non-fastidious Gram-negative rods : 2386 collection strains and strains of various origins belonging to species included in the database were tested : - 90.32 % of the strains were correctly identified

(with or without supplementary tests). - 6.16 % of the strains were not identified. - 3.52 % of the strains were misidentified.

api® 20 E 07584E - GB - 2004/05


WASTE DISPOSAL Dispose of used or unused reagents as well as any other contaminated disposable materials following procedures for infectious or potentially infectious products. It is the responsibility of each laboratory to handle waste and effluents produced according to their type and degree of hazardousness and to treat and dispose of them (or have them treated and disposed of) in accordance with any applicable regulations.

WARRANTY bioMérieux disclaims all warranties, express or implied, including any implied warranties of MERCHANTABILITY AND FITNESS FOR A PARTICULAR USE. bioMérieux shall not be liable for any incidental or consequential damages. IN NO EVENT SHALL BIOMERIEUX’S LIABLITY TO CUSTOMER UNDER ANY CLAIM EXCEED A REFUND OF THE AMOUNT PAID TO BIOMERIEUX FOR THE PRODUCT OR SERVICE WHICH IS THE SUBJECT OF THE CLAIM.

READING TABLE

RESULTSTESTS ACTIVE INGREDIENTS QTY

(mg/cup.) REACTIONS/ENZYMESNEGATIVE POSITIVE

ONPG 2-nitrophenyl-ßD-galactopyranoside 0.223

ß-galactosidase(Ortho NitroPhenyl-ßD-Galactopyranosidase)

colorless yellow (1)

ADH L-arginine 1.9 Arginine DiHydrolase yellow red / orange (2)

LDC L-lysine 1.9 Lysine DeCarboxylase yellow red / orange (2)

ODC L-ornithine 1.9 Ornithine DeCarboxylase yellow red / orange (2)

CIT trisodium citrate 0.756 CITrate utilization pale green / yellow blue-green / blue (3)

H2S sodium thiosulfate 0.075 H2S production colorless / greyish black deposit / thin line

URE urea 0.76 UREase yellow red / orange (2)

TDA / immediateTDA L-tryptophane 0.38 Tryptophane DeAminase yellow reddish brown

JAMES / immediate

IND L-tryptophane 0.19 INDole production colorless pale green / yellow pink

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP sodium pyruvate 1.9 acetoin production(Voges Proskauer) colorless pink / red (5)

GEL Gelatin (bovine origin) 0.6 GELatinase no diffusion diffusion of black pigment

GLU D-glucose 1.9 fermentation / oxidation (GLUcose) (4) blue / blue-green yellow / greyish yellow

MAN D-mannitol 1.9 fermentation / oxidation (MANnitol) (4) blue / blue-green yellow

INO inositol 1.9 fermentation / oxidation (INOsitol) (4) blue / blue-green yellow

SOR D-sorbitol 1.9 fermentation / oxidation (SORbitol) (4) blue / blue-green yellow

RHA L-rhamnose 1.9 fermentation / oxidation (RHAmnose) (4) blue / blue-green yellow

SAC D-sucrose 1.9 fermentation / oxidation (SACcharose) (4) blue / blue-green yellow

MEL D-melibiose 1.9 fermentation / oxidation (MELibiose) (4) blue / blue-green yellow

AMY amygdalin 0.57 fermentation / oxidation (AMYgdalin) (4) blue / blue-green yellow

ARA L-arabinose 1.9 fermentation / oxidation (ARAbinose) (4) blue / blue-green yellow

OX (see oxidase test package insert) cytochrome-OXidase (see oxidase test package insert)

(1) A very pale yellow should also be considered positive. (2) An orange color after 36-48 hours incubation must be considered negative. (3) Reading made in the cupule (aerobic). (4) Fermentation begins in the lower portion of the tubes, oxidation begins in the cupule. (5) A slightly pink color after 10 minutes should be considered negative. • The quantities indicated may be adjusted depending on the titer of the raw materials used. • Certain cupules contain products of animal origin, notably peptones.

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bioMérieux® SAau capital de 11 879 045 € 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com

bioMérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tel. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11

Printed in France

The logo is a registered and protected trademark of bioMérieux SA or one of its subsidiaries.

SUPPLEMENTARY TESTS

RESULTSTESTS ACTIVE INGREDIENTS QTY

(mg/cup.)REACTIONS/ENZYMES

NEGATIVE POSITIVE

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minNO2 production yellow red

potassium nitrate 0.076 Zn / 5 min

NitratereductionGLU tube

reduction to N2 gas orange-red yellow

MOB API M Medium or microscope - motility non-motile motile

McC MacConkey medium - growth absence presence

OF-F

OF-Oglucose (API OF Medium)

-

-

fermentation : under mineral oil oxidation : exposed to the air

green

green

yellow

yellow

PROCEDURE p. I IDENTIFICATION TABLE p. II LITERATURE REFERENCES p. IV INDEX OF SYMBOLS p. V

bioMérieux® SA Deutsch - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - DE - 2004/05

® 20 ESystem zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen

EINFÜHRUNG UND TESTERKLÄRUNG API 20 E ist ein standardisiertes System zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und anderen gramnegativen, nicht anspruchsvollen Stäbchen anhand von 21 miniaturisierten biochemischen Reaktionen und einer Datenbasis. Die komplette Liste der mit dem System zu identifizierenden Mikroorganismen finden Sie in der Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung.

PRINZIPDer API 20 E Streifen besteht aus 20 Mikroröhrchen, die dehydrierte Substrate enthalten. Die Röhrchen werden mit einer Keimsuspension beimpft, welche die Substrate löst. Die Stoffwechselprodukte, die während der Inkubation entstehen, bewirken Farbumschläge, entweder direkt oder nach Zugabe der Reagenzien. Die Ablesung der Reaktionen erfolgt anhand der Ablesetabelle, die Identifizierung mit dem Analytischen Profil Index oder einer Identifizierungssoftware.

PACKUNGSGRÖSSE Packung für 25 Tests (Best.Nr. 20 100) - 25 API 20 E Streifen - 25 Inkubationswannen - 25 Ergebnisblätter - 1 Verschlussleiste - 1 Arbeitsanleitung

Packung für 100 Tests (Best.Nr. 20 160) - 100 API 20 E Streifen (4x25 Streifen) - 100 Inkubationswannen - 100 Ergebnisblätter - 1 Verschlussleiste - 1 Arbeitsanleitung

ZUSAMMENSETZUNG DES STREIFENS Die Zusammensetzung des API 20 E Streifens finden Sie in der Ablesetabelle dieser Arbeitsanleitung.

ZUSÄTZLICH ERFORDERLICHE REAGENZIEN UND MATERIALIEN Reagenzien:- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 230) oder

API Suspension Medium, 5 ml (Best.Nr. 20 150) - API 20 E Reagenzienkit (Best.Nr. 20 120) oder

Einzelreagenzien: TDA (Best.Nr. 70 402) JAMES (Best.Nr. 70 542) VP 1 + VP 2 (Best.Nr. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Best.Nr. 70 442)

- Zn Reagenz (Best.Nr. 70 380) - Oxidase (Best.Nr. 55 635*)

*Dieses Produkt wird in einigen Ländern nicht vertrieben. Verwenden Sie ein gleichwertiges Reagenz.

- Paraffinöl (Best.Nr. 70 100) - Analytischer Profil Index API 20 E (Best.Nr. 20 190)

oder Identifizierungssoftware (bei bioMérieux anfragen)

Materialien:- Pipetten oder PSIpetten - Schutzhülle für Ampullen - Ampullenständer - Allgemeine mikrobiologische Laborausrüstung

ERGÄNZENDE REAGENZIEN: - API OF Medium (Best.Nr. 50 110): zur Untersuchung

des oxidativen oder fermentativen Glukoseabbaus. - API M Medium (Best.Nr. 50 120): für die Beweglich-

keitsprüfung von aeroben/anaeroben Bakterien.

VORSICHTSMASSNAHMEN • Für die in vitro Diagnostik und die mikrobiologische

Kontrolle • Nur für die Verwendung durch Fachkundige bestimmt. • Dieser Kit enthält Bestandteile tierischen Ursprungs. Da

durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des Gesund-heitszustandes der Tiere nicht völlig gewährleistet werden kann, dass diese Produkte keine übertragbaren pathogenen Agenzien enthalten, ist es empfehlenswert, diese als potenziell infektiös zu betrachten und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen zu behandeln (nicht einnehmen, nicht einatmen).

• Die Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte müssen als potenziell infektiös betrachtet und unter Beachtung geeigneter Vorsichtsmaßnahmen sach-gemäß behandelt werden. Während der gesamten Testdurchführung müssen aseptische Arbeitsbe-dingungen und entsprechende Vorsichtsmaßnahmen für die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden, siehe „NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue;Approved Guideline – aktuelle Revision“. Weitere diesbezügliche Informationen finden Sie in „Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH – Letzte Ausgabe" oder in den jeweils gültigen Richtlinien.

• Die Reagenzien nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden.

• Vergewissern Sie sich vor Gebrauch, dass die Verpackung der verschiedenen Bestandteile nicht beschädigt ist.

• Streifen mit äußeren Anzeichen einer Beschädigung (deformierte Vertiefungen, geöffnete Trockenmittel-beutel etc.) nicht verwenden.

• Die angegebene Performance wurde gemäß dem Verfahren der vorliegenden Arbeitsanleitung ermittelt. Jede Abweichung von diesem Verfahren kann die Ergebnisse beeinflussen.

• Bei der Interpretation der Ergebnisse müssen der klinische Hintergrund oder andere Zusammenhänge, die Probenherkunft, Kolonie- und mikroskopische Morpho-logie des Stammes sowie gegebenenfalls die Ergebnis-se anderer Tests, insbesondere das Antibiogramm, berücksichtigt werden.

IVD

api® 20 E 07584E - DE - 2004/05


LAGERUNGSBEDINGUNGEN Die Streifen sind in einem Aluminiumbeutel verpackt, der Trockenmittel enthält. Legen Sie nach dem Öffnen des Beutels (*) die nicht benötigten Streifen zusammen mit dem Trockenmittel in den Aluminiumbeutel zurück und verschließen Sie diesen mit der (mitgelieferten) Ver-schlussleiste: das offene Beutelende zwischen die beiden Leisten legen und über die ganze Länge sorgfältig fest-klemmen. Die Streifen können auf diese Weise bis zu 10 Monate nach dem ersten Öffnen des Beutels (oder bis zu dem auf der Packung angegebenen Verfallsdatum, wenn dieses kürzer ist) bei 2-8°C gelagert werden. (*) Empfehlungen zum Öffnen des Beutels: Halten Sie den Beutel gerade und schneiden Sie ihn direkt unterhalb der Schweißnaht auf, so dass das Trockenmittel nicht beschädigt wird.

PROBEN (ENTNAHME UND VORBEREITUNG) API 20 E darf nicht zur direkten Testung von klinischen oder anderen Untersuchungsmaterialien verwendet werden. Die zu identifizierenden Mikroorganismen müssen zuerst gemäß den üblichen mikrobiologischen Verfahren auf einem Kulturmedium isoliert werden, das für die Anzucht von Enterobacteriaceae und/oder gramnegativer, nicht anspruchsvoller Stäbchen geeignet ist.

TESTDURCHFÜHRUNG Oxidase-Test Der Oxidase-Test muss gemäß den Angaben des Herstellers durchgeführt werden. Er stellt die 21. Identifikationsreaktion dar, die auf dem Ergebnisblatt notiert wird.

Vorbereitung des Streifens • Stellen Sie eine Inkubationswanne mit Deckel bereit und

geben Sie zur Herstellung einer feuchten Kammer ca. 5 ml destilliertes oder demineralisiertes Wasser [oder anderes Wasser ohne Zusätze bzw. Derivate, die Gase freisetzen können (z.B. Cl2, CO2...)] in die Wanne.

• Notieren Sie die Referenznummer des Stammes auf dem dafür vorgesehenen seitlichen Abschnitt der Inkubationswanne. (Die Referenznummer nicht auf dem Deckel notieren, da er während des Arbeitsablaufes verwechselt werden oder abhanden kommen kann).

• Nehmen Sie den Streifen aus der Verpackung. • Legen Sie den Streifen in die Wanne. ANMERKUNG: API 20 E ist nur zur Identifizierung von Enterobacteriaceae und gramnegativen, nicht anspruchs-vollen Stäbchen bestimmt. Anspruchsvolle Keime, bei deren Handhabung spezielle Vorsichtsmaßnahmen erforderlich sind (z.B. Brucella und Francisella), sind nicht in der API 20 E Datenbasis enthalten. Wir empfehlen, für den Ausschluss oder die Identifizierung dieser Keime andere Tests zu verwenden.

Vorbereitung des Inokulums • Eine Ampulle API NaCl 0,85% Medium (5 ml) oder eine

Ampulle API Suspension Medium (5 ml) öffnen, wie im Abschnitt "Vorsichtsmaßnahmen" der Arbeitsanleitung des Produktes beschrieben oder ein anderes Röhrchen mit 5 ml steriler physiologischer Kochsalzlösung oder sterilem Aqua dest. ohne Zusätze.

• Nehmen Sie mit einer Pipette oder PSIpette eine gut isolierte Einzelkolonie vom Agar ab. Verwenden Sie vorzugsweise junge Kulturen (18-24 h).

• Die Keime im Suspensionsmedium sorgfältig homogeni-sieren. Diese Suspension muss sofort verwendet werden.

ANMERKUNG: Die meisten Vibrio Spezies sind halophil. Bei Verdacht auf Vibrio-Spezies stellen Sie die Keimsuspension mit API NaCl 0,85% Medium her.

Beimpfung des Streifens • Pipettieren Sie die Keimsuspension mit derselben

Pipette, mit der Sie die Keime abgenommen haben, in die Mikroröhrchen.

• Füllen Sie für die Reaktionen CIT , VP und GELBecher und Röhrchen.

• Füllen Sie für die anderen Reaktionen nur die Röhrchen und nicht die Becher.

• Überschichten Sie bei den unterstrichenen Reaktionen ADH, LDC, ODC, H2S und URE die Becher mit Paraffinöl, so dass anaerobe Bedingungen entstehen.

• Decken Sie die Inkubationswanne ab. • Inkubieren Sie für 18-24 h bei 36°C ± 2°C.

ABLESUNG UND INTERPRETATION Ablesung des Streifens • Lesen Sie nach der Inkubation den Streifen mit Hilfe der

Ablesetabelle ab. • Wenn 3 oder mehr Tests (GLU + oder –) positiv sind,

notieren Sie auf dem Ergebnisblatt alle Spontan-reaktionen und prüfen Sie anschließend die Tests, die Reagenzzugaben erfordern: - TDA: Geben Sie 1 Tropfen TDA Reagenz zu. Eine

rotbraune Farbe zeigt eine positive Reaktion an. Notieren Sie das Resultat auf dem Ergebnisblatt.

- IND: Geben Sie 1 Tropfen JAMES Reagenz zu. Eine rosa Farbe, die im ganzen Becher diffundiert, zeigt eine positive Reaktion an. Notieren Sie das Resultat auf dem Ergebnisblatt.

- VP: Geben Sie je 1 Tropfen VP 1 und VP 2 Reagenz zu. Warten Sie mindestens 10 min. Eine rosa oder rote Farbe ist als positiv zu bewerten. Notieren Sie das Ergebnis auf dem Ergebnisblatt. Eine nach 10 min auftretende schwache rosa Verfärbung wird als negativ bewertet.

HINWEIS: Die Indolbildung muss zuletzt geprüft werden, da diese Reaktion Gase freisetzt, welche die Interpretation anderer Tests des Streifens beein-trächtigen können. Decken Sie nach Zugabe dieses Reagenzes den Streifen nicht wieder ab.

• Wenn die Anzahl der positiven Tests (einschließlich der GLUKOSE) vor der Reagenzienzugabe kleiner als 3 ist: - Inkubieren Sie den Streifen erneut für 24 h (± 2 h)

ohne Reagenzienzugabe. - Lesen Sie anschließend die Reaktionen ab, für die

Reagenzien zugegeben werden müssen (siehe vorheriger Abschnitt).

- Zur Ergänzung der Identifizierung kann es hilfreich sein, weitere Tests durchzuführen (siehe Abschnitt Identifizierung).

InterpretationDie Identifizierung erhält man anhand des numerischen Profils.• Erstellung des numerischen Profils:

Die biochemischen Reaktionen auf dem Ergebnisblatt sind in 3-er Gruppen eingeteilt. Jede positive Reaktion erhält den Wert 1, 2 oder 4 je nach Position des Tests innerhalb der Gruppe (1., 2. oder 3. Test). Die Zahlenwerte jeder Gruppe werden addiert (negative Reaktion = 0), so erhält man 7 Ziffern, welche das numerische Profil ergeben. Die Oxidasereaktion stellt den 21. Test dar, ihr wird bei positiver Reaktion der Zahlenwert 4 zugeordnet.

• Identifizierung: Die Identifizierung erfolgt anhand der Datenbasis (V4.0) * mit dem Analytischen Profil Index: - Schlagen Sie das numerische Profil in der Profilliste nach.

* mit der Identifizierungssoftware: - Geben Sie das 7-stellige numerische Profil über die

Tastatur ein.

api® 20 E 07584E - DE - 2004/05


In den Fällen, in denen das 7-stellige Zahlenprofil keine ausreichende Selektivität ergibt, müssen folgende Zusatz- reaktionen durchgeführt werden: - Nitratreduktion zu Nitrit (NO2) und Stickstoff (N2): Geben Sie je 1 Tropfen NIT 1 und NIT 2 Reagenz in das

GLU-Röhrchen. Warten Sie 2 bis 5 min. Eine roteFärbung zeigt eine positive Reaktion (NO2) an. Eine negative Reaktion (gelbe Farbe) kann auf eine eventuelle Stickstoffproduktion (gelegentlich durch Bildung kleiner Bläschen angezeigt) zurückgeführt werden: Geben Sie 2-3 mg Zn Reagenz in den GLU-Becher. Bleibt das Röhrchen nach 5 min gelb, ist die Reaktion (N2) positiv, notieren Sie das Ergebnis auf dem Ergebnisblatt. Wird es orangerot, ist die Reaktion negativ, da die im Becher noch vorhandenen Nitrate durch Zink zu Nitrit reduziert wurden. Diese Reaktion ist für gramnegative, Oxidase positive Stäbchen wichtig.

HINWEIS: Der Nitratnachweis muss aus denselben Gründen wie die Indolbildung (siehe HINWEIS im Abschnitt «Ablesung des Streifens») zuletzt durchgeführt werden.

- Beweglichkeit (MOB): Beimpfen Sie eine Ampulle API M Medium (siehe Arbeitsanleitung). - Anzucht auf MacConkey (McC) Agar: Beimpfen Sie

einen MacConkey Agar (siehe Arbeitsanleitung). - Glukoseoxidation (OF-O): Beimpfen Sie eine Ampulle

API OF Medium (siehe Arbeitsanleitung). - Glukosefermentation (OF-F): Beimpfen Sie eine

Ampulle OF Medium (siehe Arbeitsanleitung). Diese Zusatztests, die im Abschnitt Einführung (Codierung der Profile) des Analytischen Profil Index aufgeführt sind, können auch für die Erstellung eines mit der Software identifizierbaren 9-stelligen Profils verwendet werden.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae Bei schwacher Selektivität können Zusatztests zur Differenzierung vorgeschlagen werden. Siehe Identifizie-rungssoftware oder Analytischer-Profil-Index.

QUALITÄTSKONTROLLE Die Medien, Streifen und Reagenzien unterliegen in den verschiedenen Stadien der Produktion systematisch durchgeführten Qualitätskontrollen. Die mikrobiologische Qualitätskontrolle der API-Teststreifen im Labor kann vorzugsweise mit dem 1. Stamm Escherichia coli ATCC 25922 oder einem der folgenden Stämme durchgeführt werden: 2. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 3. Enterobacter cloacae ATCC 13047


ATCC: American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.


1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + – * Die Reduktion zu N2 (+) kann mit dem Stamm ATCC 13047 und dem Stamm ATCC 25922 nachgewiesen werden. • Profile nach 24-48 h Inkubation für den ATCC Stamm 51331, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut. • Profile nach 18-24 h Inkubation für die anderen Stämme, nach Anzucht auf Trypcase-Soja-Agar mit Hammelblut. • Mit API NaCl 0,85% Medium hergestellte Keimsuspension. Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Qualitätskontrolle in Übereinstimmung mit den jeweils gültigen Vorschriften durchzuführen.

LIMITIERUNGEN• API 20 E ist nur für die Identifizierung von

Enterobacteriaceae und in der Datenbasis enthaltener gramnegativer, nicht anspruchsvoller Stäbchen bestimmt (siehe Prozenttabelle am Ende der Arbeitsanleitung). Andere Mikroorganismen können weder identifiziert noch ausgeschlossen werden.

• Im Vergleich zu konventionellen Methoden können dis- krepante Ergebnisse einzelner Reaktionen beobachtet werden. Dies ist durch Unterschiede im Reaktions-prinzip bedingt. Außerdem können durch Substrat-veränderungen abweichende Prozentwerte im Vergleich zu konventionellen Methoden auftreten.

• Bei einigen Spezies (z.B. Klebsiella oder Proteus) kann eine zunächst positive Reaktionen des Glukose-Tests negativ werden (Auftreten einer blau-grünen Färbung). In diesem Fall wird diese Reaktion negativ bewertet. Dieses Phänomen ist in der Prozenttabelle berücksichtigt.

• Bei Erhalt des Identifizierungsergebnisses Salmonellaoder Shigella muss die biochemische Identifizierung serologisch bestätigt werden.

• Gramnegative, nicht fermentierende Stäbchen, die von Patienten mit Mukoviszidose isoliert wurden, können zu atypischen biochemischen Profilen führen, die die Identifizierung beeinträchtigen können.

• Es dürfen nur Reinkulturen verwendet werden.

ERWARTETE ERGEBNISSE Die erwarteten Ergebnisse der verschiedenen biochemischen Reaktionen entnehmen Sie der Prozent-tabelle am Ende dieser Arbeitsanleitung.

PERFORMANCE • Enterobacteriaceae:

5514 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Datenbasis gehören, wurden getestet: - 92,80 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit

oder ohne Zusatztests). - 4,61 % der Stämme wurden nicht identifiziert. - 2,59 % wurden falsch identifiziert.

api® 20 E 07584E - DE - 2004/05


• Andere gramnegative, nicht anspruchsvolle Stäbchen: 2386 Stämme unterschiedlicher Herkunft und Stämme aus Stammsammlungen, die zu den Spezies der Datenbasis gehören, wurden getestet: - 90,32 % der Stämme wurden korrekt identifiziert (mit

oder ohne Zusatztests). - 6,16 % der Stämme wurden nicht identifiziert. - 3,52 % wurden falsch identifiziert.

BESEITIGUNG DER ABFÄLLE Entsorgen Sie alle gebrauchten und nicht gebrauchten Reagenzien sowie kontaminierte Einwegmaterialien gemäß den für infektiöse oder potenziell infektiöse Materialien geltenden Bestimmungen. Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die entstandenen Fest- und Flüssigabfälle gemäß der jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren Entsorgung in Übereinstimmung mit den gültigen gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen.

ABLESETABELLE

ERGEBNISSE TESTS AKTIVE

BESTANDTEILE MENGE(mg/Vert.). REAKTIONEN/ENZYME

NEGATIV POSITIV

ONPG 2-Nitrophenyl-ßD- Galaktopyranosid 0,223

ß-Galaktosidase (Ortho-Nitrophenyl-ßD- Galaktopyranosidase)

farblos gelb (1)

ADH L-Arginin 1,9 Arginin DiHydrolase gelb rot / orange (2)

LDC L-Lysin 1,9 Lysin DeCarboxylase gelb rot / orange (2)

ODC L-Ornithin 1,9 Ornithin DeCarboxylase gelb rot / orange (2)

CIT Trinatriumcitrat 0,756 CITratverwertung hellgrün / gelb blau-grün / blau (3)

H2S Natriumthiosulfat 0,075 H2S-Bildung farblos / gräulich schwarzer Niederschlag

URE Harnstoff 0,76 UREase gelb rot / orange (2)

TDA / sofort

TDA L-Tryptophan 0,38 Tryptophan DesAminase gelb rotbraun

JAMES / sofort

IND L-Tryptophan 0,19 INDol-Bildung farblos

hellgrün / gelb rosa

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP Natriumpyruvat 1,9 Acetoinbildung(Voges Proskauer) farblos rosa / rot (5)

GEL Gelatine(bovinen Ursprungs) 0,6 Gelatinase (GELatine) keine Diffusion Diffusion der schwarzen

Tusche

GLU D-Glukose 1,9 Fermentation / Oxidation (GLUkose) (4) blau / blau-grün gelb / gelb grau

MAN D-Mannit 1,9 Fermentation / Oxidation (MANnit) (4) blau / blau-grün gelb

INO Inosit 1,9 Fermentation / Oxidation (INOsit) (4) blau / blau-grün gelb

SOR D-Sorbit 1,9 Fermentation / Oxidation (SORbit) (4) blau / blau-grün gelb

RHA L-Rhamnose 1,9 Fermentation / Oxidation (RHAmnose) (4) blau / blau-grün gelb

SAC D-Saccharose 1,9 Fermentation / Oxidation (SACcharose) (4) blau / blau-grün gelb

MEL D-Melibiose 1,9 Fermentation / Oxidation (MELibiose) (4) blau / blau-grün gelb

AMY Amygdalin 0,57 Fermentation / Oxidation (AMYgdalin) (4) blau / blau-grün gelb

ARA L-Arabinose 1,9 Fermentation / Oxidation (ARAbinose) (4) blau / blau-grün gelb

OX (siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests)

Cytochrom OXidase (siehe Arbeitsanleitung des Oxidase-Tests)

(1) Auch eine nur ganz leichte Gelbfärbung ist als positiv zu bewerten. (2) Eine orange Verfärbung nach einer 36-48-stündigen Inkubation wird als negativ bewertet. (3) Ablesung im Becher (aerober Bereich) (4) Die Fermentation beginnt im unteren Teil der Röhrchens, die Oxidation im Becher. (5) Eine nach 10 min auftretende schwache rosa Verfärbung wird als negativ bewertet. • Die angegebenen Mengen können je nach Konzentration der verwendeten Ausgangsmaterialien angeglichen werden. • Einige Näpfchen enthalten Bestandteile tierischen Ursprungs, vor allem Peptone.

api® 20 E 07584E - DE - 2004/05



Gedruckt in Frankreich

Das Logo ist eine eingetragene und geschützte Marke von bioMérieux SA oder einer ihrer Filialen.

ZUSATZREAKTIONEN

ERGEBNISSETESTS AKTIVE

BESTANDTEILEMENGE(mg/Vert.) REAKTIONEN/ENZYME NEGATIV POSITIV

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minNO2 Bildung gelb rot

Kaliumnitrat 0,076 Zn / 5 min

Nitrat-reduktion

GLURöhrchen Reduktion zu N2 orange-rot gelb

MOBAPI M Medium oder Mikroskop Beweglichkeit unbeweglich beweglich

McC MacConkey Agar Wachstum auf McConkey Agar

kein Wachstum Wachstum

OF-F OF-O Glukose (API OF Medium) Fermentation: unter Öl

Oxidation: aerob grüngrün

gelbgelb

METHODIK S. I PROZENTTABELLE S. II LITERATUR S. IV SYMBOLE S. V

bioMérieux® SA Español - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - ES - 2004/05

®20 ESistema de identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes

INTRODUCCIÓN Y OBJETO DEL ENSAYO API 20 E es un sistema estandarizado que permite la identificación de Enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes, que incluyen 21 tests bioquímicos miniaturizados, así como una base de datos. La lista completa de las bacterias posibles de identificar con este sistema se presenta en la Tabla de Identificación al final de la presente ficha técnica.

PRINCIPIOLa galería del sistema API 20 E se compone de 20 microtubos que contienen los substratos deshidratados. Los microtubos se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los tests. Las reacciones producidas durante el periodo de incubación se traducen en cambios de color espontáneos o revelados mediante la adición de reactivos. La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la Tabla de Lectura, y la identificación se obtiene con la ayuda del Catálogo Analítico o del software de identificación.

PRESENTACIÓN Caja de 25 tests (ref. 20 100) - 25 galerías API 20 E - 25 cámaras de incubación - 25 hojas de resultados - 1 barra de cierre - 1 ficha técnica

Caja de 100 tests (ref. 20 160) - 100 galerías API 20 E - 100 cámaras de incubación - 100 hojas de resultados - 1 barra de cierre - 1 ficha técnica

COMPOSICIÓN DE LA GALERÍA La composición de la galería API 20 E se puede consultar en la Tabla de Lectura de la presente ficha técnica.

REACTIVOS Y MATERIAL NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Reactivos: - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (ref. 20 230) o

API Suspension Medium, 5 ml (ref. 20 150) - Caja de reactivos API 20 E (ref. 20 120) o

reactivos individuales: TDA (ref. 70 402) JAMES (ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (ref. 70 442) - Reactivo Zn (ref. 70 380) - Oxidasa (ref. 55 635*)

* referencia no comercializada en ciertos países: utilizar un reactivo equivalente

- Aceite de parafina (ref. 70 100) - Catálogo Analítico API 20 E (ref. 20 190) o Software de Identificación (consultar con bioMérieux)

Material:- Pipetas o PSIpettes - Gradilla para ampollas - Protege-ampollas - Equipo general de laboratorio de bacteriología

REACTIVOS COMPLEMENTARIOS - API OF Medium (ref. 50 110):

Ensayo para la determinación del metabolismo fermentativo u oxidativo de la glucosa.

- API M Medium (ref. 50 120): Ensayo para la determinación de la movilidad de las bacterias aero-anaerobias.

PRECAUCIONES DE UTILIZACIÓN • Para diagnóstico in vitro y control microbiológico. • Exclusivamente para uso profesional. • Este envase contiene componentes de origen animal.

Dado que no se puede controlar el origen y/o el estado sanitario de los animales, no es posible garantizar de forma absoluta que estos productos no contengan ningún agente patógeno transmisible, por lo que se recomienda manipularlos con todas las precauciones de uso relativas a los productos potencialmente infecciosos, (no ingerir, no inhalar).

• Todas las muestras, cultivos bacterianos y productos inoculados deben ser considerados como potencialmente infecciosos y deben ser manipulados de modo apropiado. Durante toda la manipulación, deben respetarse las normas de asépsia y tomar las precauciones habituales de manipulación para el grupo de bacterias estudiadas; consultar (NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline – Revisión en vigor). Para información complementaria sobre las precauciones de manipulación, consultar al "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH - última edición," o la reglamentación vigente en el país de utilización.

• No utilizar los reactivos después de su fecha de caducidad.

• Antes de su utilización, asegurarse de la integridad del embalaje y sus componentes.

• No utilizar galerías que hayan sufrido una alteración física: cúpula deformada, bolsa deshidratante abierta, ....

• Los resultados presentados han sido obtenidos mediante la metodología indicada en la presente ficha técnica. Toda desviación de la metodología puede alterar los resultados.

• La interpretación de los resultados del test debe ser realizada teniendo en cuenta un contexto clínico o de otro tipo, el origen de las muestras, los aspectos macro y microscópicos de la cepa y, eventualmente, los resultados de otros tests, en particular del antibiograma.

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CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Las galerías API 20 E se presentan en una bolsa de aluminio con bolsitas deshidratantes. Después de su apertura (*), conservar las galerías restantes con los deshidratantes, volviendo a cerrar la bolsa con la ayuda del Sistema de cierre (presente en la caja): Colocar la extremidad de la bolsa entre las dos piezas de la barra y cerrarlos cuidadosamente, a fondo, en toda su longitud. Las galerías pueden conservarse de este modo hasta 10 meses después de la apertura de la bolsa, a 2-8º C (o hasta la fecha de caducidad indicada en el envase, si ésta fuese anterior). (*) Recomendación para su apertura: Cortar justo por debajo de la soldadura, manteniendo la bolsa recta, para evitar que las bolsitas deshidratantes puedan resultar dañadas.

MUESTRAS (RECOGIDA Y PREPARACIÓN) La galería API 20 E no debe ser utilizada directamente a partir de muestras de origen clínico o de otro tipo. Los microorganismos a identificar deben aislarse en una primera fase sobre un medio de cultivo adecuado según las técnicas usuales de bacteriología.

MODO DE EMPLEO Test de la Oxidasa El test Oxidasa debe ser realizado según las instrucciones de utilización del fabricante, y constituye el test de identificación n°21 a anotar en la hoja de resultados.

Preparación de la galería • Reunir fondo y tapa de una cámara de incubación y

repartir aproximadamente 5 ml de agua destilada o desmineralizada [o cualquier agua sin aditivos o derivados susceptibles de liberar gases (Ej.: Cl2, CO2...)] en los alvéolos para crear la atmósfera húmeda.

• Inscribir la referencia de la cepa en la lengüeta lateral de la cámara (no inscribir la referencia sobre la tapa, ya que ésta puede quedar desplazada durante la manipulación).

• Sacar la galería de su envase. • Colocar la galería en la cámara de incubación. NOTA: La galería API 20 E debe ser utilizada con las Enterobacteriaceae y/o los bacilos Gram negativos no exigentes. Los microorganismos exigentes y que necesiten precauciones de manipulación particulares (Ej.: Brucella y Francisella) no forman parte de la base de datos API 20 E. Conviene usar otras técnicas para excluir o confirmar su presencia.

Preparación del inóculo • Abrir una ampolla de API NaCl 0,85% Medium (5 ml) o

una ampolla de API Suspension Medium (5 ml), como se indica en el párrafo “Precauciones de utilización” de la presente ficha técnica o utilizar un tubo que contenga 5 ml de agua fisiológica estéril o de agua destilada estéril, sin aditivos.

• Con una pipeta o una PSIpipete, extraer una sola colonia bien aislada sobre medio agar. Utilizar preferentemente cultivos jóvenes (18-24 horas).

• Realizar una suspensión bacteriana homogeneizando cuidadosamente las bacterias en el medio. Esta suspensión debe ser utilizada inmediatamente después de su preparación.

NOTA: La mayoría de las especies de Vibrio son halófilas. En caso de sospechar la presencia de un Vibrio, realizar la suspensión bacteriana en el API NaCl 0,85% Medium.

Inoculación de la galería • Llenar los tubos y las cúpulas de los ensayos CIT ,

VP , GEL con la suspensión bacteriana, utilizando la pipeta que se ha usado para la toma de muestras.

• Llenar únicamente los tubos (y no las cúpulas) de los otros ensayos.

• Crear una anaerobiosis en los ensayos: ADH, LDC,ODC, H2S, URE, llenado su cúpula de aceite de parafina.

• Cerrar la cámara de incubación. • Incubar a 36ºC ± 2ºC durante 18-24 horas.

LECTURA E INTERPRETACIÓN Lectura de la galería • Después de la incubación, la lectura de la galería debe

hacerse remitiéndose a la Tabla de Lectura. • Caso de que 3 o más ensayos (test GLU + o -),

resultasen positivos, anotar en la hoja de resultados todas las reacciones espontáneas y después revelar los ensayos que necesitan la adición de reactivos: - Prueba TDA: agregar una gota del reactivo TDA.

Uncolor marrón-rojizo indica una reacción positivaque se anotará en la hoja de resultados.

- Prueba IND: agregar 1 gota del reactivo JAMES. Un color rosado que se difumina en toda la cúpula indica una reacción positiva, que se debe anotar en la hoja de resultados.

- Prueba VP: agregar una gota de los reactivos VP 1 y VP 2. Esperar un mínimo de 10 minutos. Un color rosa o rojo indica una reacción positiva que se anotará en la hoja de resultados. Una débil coloración rosa que aparece después de 10 minutos debe ser considerada como negativa.

NOTA: La prueba de investigación sobre la producción de Indól debe ser realizada en último lugar, pues esta reacción libera gases que pueden alterar la interpretación de las otras pruebas de la galería. No volver a colocar la tapa de la incubadora después de agregar el reactivo.

• Si el número de pruebas positivas antes de añadir los reactivos (incluyendo el ensayo GLU) es inferior a 3: - Reincubar la galería 24 horas (± 2 horas)

suplementarias sin volver a añadir los reactivos. - Revelar los ensayos que precisan adición de reactivos

(ver párrafo precedente). - Para completar la identificación, puede ser útil realizar

ensayos complementarios (consultar el párrafo "Identificación").

InterpretaciónLa identificación se obtiene a partir del perfil numérico:• Determinación del perfil numérico:

En la hoja de resultados, los tests están separados en grupos de tres y se indica para cada uno un valor de 1, 2 ó 4. Como la galería API 20 E comporta 20 ensayos, sumando al interior de cada grupo los valores que corresponden a reacciones positivas, se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. (A la reacción de la oxidasa, que constituye el test n° 21 se le asigna el valor 4, cuando resulte positiva).

• Identificación: Se realiza a partir de la base de datos (V4.0).

* Con la ayuda del Catálogo Analítico: -Localizar el perfil numérico en la lista de los perfiles.

* Con la ayuda del software de identificación:- Introducir manualmente mediante el teclado el perfil numérico de 7 cifras.

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Como además, en ciertos casos, el perfil de 7 cifras resulta insuficientemente discriminante, es necesario realizar los siguientes ensayos complementarios: - Reducción de los nitratos en nitritos (NO2) y en

nitrógeno (N2): añadir una gota de los reactivos NIT 1 y NIT 2 en el tubo GLU. Esperar de 2 a 5 minutos. Una coloración roja indica una reacción positiva (NO2).Una reacción negativa (coloración amarilla) puede de verse a la producción de nitrógeno (eventualmente señalado por la presencia de micro-burbujas): agregar de 2 a 3 mg de reactivo Zn en la cúpula GLU. Después de 5 minutos, si el color sigue siendo amarillo, indica una reacción positiva (N2), que anotaremos en la hoja de resultados. Si el color de la cúpula cambia a naranja-rojo, la reacción es negativa, ya que los nitratos aún presentes en el tubo han sido reducidos a nitritos por el Zinc. Esta reacción es interesante para los bacilos Gram negativos y oxidasa positivos.

NOTA: Por las mismas razones que en el ensayo de Indól (ver la nota del párrafo "Lectura de la galería"), el ensayo de reducción de los nitratos debe realizarse en último lugar.

- Movilidad (MOB): inocular una ampolla API M Medium (ver ficha técnica).

- Cultivo sobre agar MacConkey (McC: inocular un medio MacConkey (ver ficha técnica).

- Oxidación de la glucosa (OF-O): inocular una ampolla API OF Medium (ver ficha técnica).

- Fermentación de la glucosa (OF-F): inocular una ampolla API OF Medium (ver ficha técnica).

Estos ensayos complementarios mencionados en la introducción (codificación de perfiles) del Catálogo Analítico pueden ser utilizados para constituir un perfil de 9 cifras, identificable mediante el software de identificación.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

En casos de discriminación débil, pueden proponerse otros ensayos suplementarios. Consultar el software o Catálogo Analítico.

CONTROL DE CALIDAD Los medios, galerías y reactivos son sometidos a controles de calidad sistemáticos en las diferentes etapas de su fabricación. Puede además realizarse un control bacteriológico de las diferentes pruebas de la galería por el usuario con la cepa: 1. Escherichia coli ATCC 25922 de preferencia o una de las cepas siguientes: 1. Stenotrophomonas maltophilia ATCC 51331 2. Enterobacter cloacae ATCC 13047


ATCC: American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA.


1. + - + + - - - - + - - + + - + + - + - + + - 2. + - V - V - - - - - + - - - - - - - - - - - 3. + + - + + - - - - + - + + - + + + + + + + - 4. - - - + V + + + - - V + - - - - V - - - + - 5. + - + - + - V - - V - + + + + + + + + + + - * El estado N2 (+) puede observarse para la cepa ATCC 13047 y la cepa ATCC 25922. • Perfil obtenido después de 24-48 horas de incubación para la cepa ATCC 51331 a partir de colonias cultivadas sobre agar Trypcase

Soja + sangre. • Perfiles obtenidos después de 18-24 horas de incubación para otras cepas, a partir de las colonias cultivadas sobre agar Trypcase

Soja + sangre.• Suspensión bacteriana preparada en API NaCl 0,85% Medium.El usuario es responsable de asegurarse de que el control de calidad ha sido realizado conforme a la legislación local vigente.LIMITACIONES DEL ENSAYO • El sistema API 20 E está destinado a la identificación de las

Enterobacteriaceae y de los bacilos Gram negativos no exigentes presentes en la base de datos (ver Tabla de Identificación al final de esta ficha técnica) y sólo y exclusivamente a estos gérmenes. No puede ser utilizado para identificar otros microorganismos o excluir su presencia.

• Puede observarse discordancias con respecto a las técnicas convencionales. Esto se debe a los diferentes principios utilizados en la técnicas API. También puede observarse desviaciones en los porcentajes, hecho que se explica por las variaciones del substrato.

• Para algunas especies (Ej.: Klebsiella o Proteus), ciertas reacciones inicialmente positivas del ensayo de glucosa pueden transformarse en negativas (aparición de una coloración azul-verde). En estos casos esta reacción debe considerarse como negativa. Los porcentajes indicados en la Tabla de Identificación, toman en cuenta este tipo de fenómeno.

• En el caso de la identificación de Salmonella o Shigella,debe realizarse una identificación serológica para confirmar la identificación bacteriana.

• Los bacilos Gram negativos no fermentadores, aislados en pacientes afectados de mucoviscidosis, pueden generar perfiles bioquímicos atípicos susceptibles de alterar su identificación.

• Sólo se deberán emplear cultivos puros que contengan un sólo tipo de microorganismo.

RESULTADOS ESPERADOS Consultar la Tabla de Identificación que se incluye al final de esta ficha técnica para aclarar los resultados esperados en las diferentes reacciones bioquímicas. PRESTACIONES • Enterobacteriaceae

Han sido ensayadas 5.514 cepas de diversos orígenes, así como cepas de colección pertenecientes a especies de la base de datos: - 92,80% de las cepas han sido identificadas

correctamente (con o sin ensayos suplementarios). - 4,61% de las cepas no han sido identificadas. - 2,59% de las cepas se han identificado

incorrectamente.

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• Otros bacilos Gram negativos no perniciosos: Han sido ensayadas 2.386 cepas de diversos orígenes, así como cepas de colección pertenecientes a especies de la base de datos: - 90,32% de las cepas han sido identificadas

correctamente (con o sin ensayos suplementarios). - 6,16% de las cepas no han sido identificadas. - 3,52% de las cepas se han identificado

incorrectamente.

ELIMINACION DE LOS RESIDUOS Eliminar los reactivos utilizados o no utilizados, así como los materiales de un solo uso contaminados siguiendo los procedimientos relacionados con los productos infecciosos o potencialmente infecciosos. Es responsabilidad de cada laboratorio la gestión de los dresiduos y efluentes que produce, según la naturaleza y peligrosidad, garantizando (o haciendo garantizar) su tratamiento y eliminación según las reglamentaciones aplicables.

TABLA DE LECTURA RESULTADOS

TESTS COMPONENTES ACTIVOS

QTE (mg/cúp)

REACCIONES/ENZIMASNEGATIVO POSITIVO

ONPG 2-nitro-fenil-βD-

galactopiranosida 0,223β-galactosidasa (orto-nitrofenil-βD-galactoprianosidasa) incoloro amarillo (1)

ADH L-arganina 1,9 Arginina-dihidrolasa amarillo rojo/anaranjado (2)

LDC L-lisina 1,9 Lisina Decarboxilasa amarillo rojo/anaranjado (2)

ODC L-ornitina 1,9 Ornitina Decarboxilasa amarillo rojo/anaranjado (2)

CIT citrato trisódico 0,756 utilización del CITrato verde pálido/amarillo azul-verde/azul (3)

H2S tiosulfato sódico 0,075 producción de H2S incoloro/grisáceo depósito negro/fin liserado

URE urea 0,76 UREasa amarillo rojo/anaranjado (2)

TDA / inmediato

TDA L-triptófano 0,38 Triptofano DesAminasa amarillo marrón-rojizo

JAMES / inmediato

IND L-triptófano 0,19 producción de ÍNDole incoloro verde pálido/ amarillo

rosa

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP piruvato sódico 1,9 producción de acetoína (Voges Proskauer) incoloro rosa/rojo (5)

GEL Gelatina(origen bovino) 0,6 Gelatinasa (GELatina) no difusión difusión pigmento

negro

GLU D-glucosa 1,9 fermentación/oxidación (GLUcosa) (4) azul/azul verdoso amarillo/amarillo grisáceo

MAN D-manitol 1,9 fermentación/oxidación (MANitol) (4)

azul/azul verdoso amarillo

INO inositol 1,9 fermentación/oxidación (INOsitol) (4)


SOR D-sorbitol 1,9 fermentación/oxidación (SORbitol) (4)


RHA L-ramnosa 1,9 fermentación/oxidación (RHAmnosa) (4)


SAC D-sacarosa 1,9 fermentación/oxidación (SACarosa) (4)


MEL D-melibiosa 1,9 fermentación/oxidación (MELibiosa) (4)


AMY amigdalina 0,57 fermentación/oxidación (AMYgdalina) (4)


ARA L-arabinosa 1,9 fermentación/oxidación (ARAbinosa) (4)


OX (ver ficha técnica del test de oxidasa) citocromo-OXidasa (ver ficha técnica del test de oxidasa)

(1) Un color amarillo muy ligero también implica resultado positivo. (2) La aparición de un color naranja tras 36-48 H de incubación debe considerarse negativa. (3) Lectura en la cúpula (zona aerobia). (4) La fermentación comienza en la parte inferior de los tubos, mientras que la oxidación empieza en la cúpula. (5) Una ligera coloración rosa, que aparece tras 10 minutos, debe ser leída como negativa. • Las cantidades indicadas pueden ser ajustadas en función de los títulos de las materias primas. • Ciertas cúpulas contienen componentes de origen animal, notablemente peptonas.

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bioMérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA Tél. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11

Impreso en Francia

El logotipo es una marca registrada y protegida propiedad exclusiva de bioMérieux SA o de una de sus filiales

ENSAYOS COMPLEMENTARIOS

RESULTADOSTESTS

COMPONENTESQTE

(mg/cúp) REACCIONES/ENZIMAS NEGATIVO POSITIVO

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minproducción de NO2 amarillo rojo

Zn / 5 min

Reducciónde nitratos tubo GLU

nitrato potásico 0,076

reducción al estado N2 naranja-rojo amarillo

MOB API M Medium o microscopio movilidad inmóvil móvil

McC Medio de MacConkey cultivo ausencia presencia

OF-F

OF-O

Glucose(API OF Medium)

fermentación: bajo aceite

oxidación: al aire

Verde

verde

Amarillo

amarillo

METODOLOGÍA p. I TABLA DE IDENTIFICACIÓN p. II BIBLIOGRAFÍA p. IV TABLA DE SÍMBOLOS p. V

bioMérieux® SA Italiano - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - IT - 2004/05

® 20 ESistema di identificazione delle Enterobacteriaceae e di altri bacilli Gram negativi non esigenti

INTRODUZIONE E OBIETTIVO DEL TEST API 20 E è un sistema standardizzato per l'identificazione delle Enterobacteriaceae e di altri bacilli Gram negativi non esigenti, che comprende 21 tests biochimici miniaturizzati, oltre ad una base dati specifica. L'elenco completo dei batteri che possono essere identificati con questo sistema è riportato nella Tabella di Identificazione alla fine di questa scheda tecnica.

PRINCIPIOLa galleria API 20 E è costituita da 20 microprovette contenenti substrati disidratati. Le microprovette sono inoculate con una sospensione batterica che ricostituisce i terreni. Le reazioni prodotte durante il periodo di incubazione si traducono in viraggi di colore spontanei o rivelati dall'aggiunta di reattivi. La lettura di queste reazioni si effettua servendosi della Tabella di Lettura mentre l'identificazione si ottiene con l'Indice Analitico o con il software di identificazione.

PRESENTAZIONE Confezione da 25 test (cod. 20 100) - 25 gallerie API 20 E - 25 vaschette di incubazione - 25 schede per la registrazione dei risultati - 1 barretta di chiusura - 1 scheda tecnica

Confezione da 100 test (cod. 20 160) - 100 galeries API 20 E (4 x 25) - 100 vaschette di incubazione - 100 schede per la registrazione dei risultati - 1 barretta di chiusura - 1 scheda tecnica

COMPOSIZIONE DELLA GALLERIA La composizione della galleria API 20 E è riportata nella Tabella di Lettura di questa scheda tecnica.

REATTIVI E MATERIALE NECESSARI MA NONFORNITIReattivi : - API NaCl 0,85% Medium, 5 ml (Cod. 20 230) o

API Suspension Medium, 5 ml (Cod. 20 150) - Kit dei reattivi API 20 E (Cod. 20 120) o reattivi: TDA (Cod. 70 402)

JAMES (Cod. 70 542) VP 1 + VP 2 (Cod. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Cod. 70 442)

- Reattivo Zn (Cod. 70 380) - Ossidasi (Cod. 55 635*)

* Prodotto non commercializzato in alcuni Paesi : utilizzare un reattivo equivalente

- Olio di paraffina (Cod. 70 100) - Indice Analitico API 20 E (Cod. 20 190) o

Software di identificazione (consultare bioMérieux)

Materiale : - Pipette o PSIpette - Proteggi-fiala - Porta-fiale - Equipaggiamento generico per laboratorio di

batteriologia

REATTIVI COMPLEMENTARI - API OF Medium (cod. 50 110) :

Test per la determinazione del metabolismo fermentativo ed ossidativo del glucosio.

- API M Medium (cod. 50120) : Test per la determinazione della motilità dei batteri aero-anaerobi.

AVVERTENZE E PRECAUZIONI • Per diagnostica in vitro e per controllo micro-

biologico. • Esclusivamente per uso professionale. • Questa confezione contiene dei componenti di origine

animale. Poiché i controlli sull’origine e/o sullo stato sanitario degli animali non possono garantire in maniera assoluta che questi prodotti non contengano nessun agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di manipolarli con le precauzioni d’uso relative ai prodotti potenzialmente infettivi (non ingerire, non inalare).

• I prelievi, le colture batteriche ed i prodotti seminati devono essere considerati come potenzialmente infettivi e devono essere manipolati in maniera appropriata. Le tecniche di asepsi e le precauzioni d’uso per il gruppo batterico studiato devono essere rispettate durante tutta la manipolazione; fare riferimento a "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline -Revisione in vigore". Per ulteriori informazioni sulle precauzioni di manipolazione, consultare "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH - Ultima edizione", oppure fare riferimento alla normativa vigente nel Paese.

• Non utilizzare i reattivi dopo la data di scadenza. • Prima dell’uso assicurarsi che gli imballaggi dei differenti

componenti siano integri. • Non utilizzare gallerie che abbiano subito una

alterazione fisica : cupole deformate, sacchetto del disidratante aperto, …

• Le performance riportate di seguito sono state ottenute seguendo il procedimento indicato nella scheda tecnica. Qualsiasi deviazione dal procedimento indicato può alterare i risultati.

• L’interpretazione dei risultati del test deve tener conto del contesto clinico o di altra natura, dell’origine del campione, degli aspetti macro e microscopici del ceppo ed, eventualmente, dei risultati di altri esami, in particolare dell’antibiogramma.

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CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Le gallerie sono contenute in una busta di alluminio contenente dei sacchetti di disidratante. Una volta aperta (*), la busta può essere richiusa, utilizzando la barretta di chiusura contenuta nella confezione, permettendo la conservazione delle gallerie rimanenti insieme ai sacchetti del disidratante: inserire l'estremità della busta tra le due parti della barretta e bloccarla con cura per tutta la lunghezza. Le gallerie possono essere conservate per 10 mesi, dopo l'apertura della busta, a 2-8° C (o fino alla data di scadenza indicata sulla confezione, se anteriore). (*) Raccomandazione per l’apertura della busta di alluminio: tagliare subito sotto la saldatura, mantenendo la busta dritta, per evitare di danneggiare i sacchetti del disidratante.

CAMPIONI (PRELIEVO E, PREPARAZIONE) L’API 20 E non deve essere utilizzato direttamente su campioni clinici o di altra natura. I microrganismi da identificare devono dapprima essere isolati su un terreno di coltura idoneo per la coltura delle Enterobacteriaceae e/o dei bacilli Gram negativi non esigenti con le normali tecniche batteriologiche.

PROCEDIMENTOTest Ossidasi Utilizzare il test secondo le istruzioni d’uso del fabbricante. Costituisce il 21° test di identificazione : annotare il risultato sulla scheda dei risultati.

Preparazione della galleria • Riunire fondo e coperchio di una vaschetta di

incubazione e distribuire circa 5 ml di acqua distillata o demineralizzata [o semplicemente dell'acqua senza additivi o derivati che potrebbero liberare gas (ad es. Cl2, CO2 ...)] nei pozzetti per creare un ambiente umido.

• Annotare il riferimento del ceppo sulla linguetta laterale della vaschetta. (Non annotare il riferimento sul coperchio, in quanto potrebbe essere spostato al momento della manipolazione).

• Estrarre la galleria dal suo involucro. • Mettere la galleria nella vaschetta di incubazione. NOTA: l’API 20 E deve essere utilizzata con Enterobacteriaceae e/o con bacilli Gram negativi non esigenti. I microrganismi esigenti che necessitano di particolari precauzioni di manipolazione (ad es. Brucella e Francisella) non fanno parte della base dei dati dell’API 20 E. Si consiglia di utilizzare altre tecniche per escluderne o confermarne la presenza.

Preparazione dell’inoculo • Aprire una fiala di API NaCl 0,85% Medium (5 ml) o una

fiala di API Suspension Medium (5 ml) come indicato al paragrafo “Precauzioni” della scheda tecnica del prodotto o utilizzare una provetta contenente 5 ml di soluzione fisiologica sterile o di acqua distillata sterile, senza additivi.

• Servendosi di una pipetta o di una PSIpetta, prelevare una sola colonia ben isolata su terreno agarizzato. Utilizzare preferibilmente colonie giovani (18-24 ore).

• Mescolare accuratamente per realizzare una sospensione batterica omogenea. Questa sospensione deve essere utilizzata immediatamente dopo la preparazione.

NOTA: la maggior parte della specie di Vibrio sono alofile. In caso si sospetti la presenza di Vibrio, eseguire la sospensione batterica nell’API NaCl 0,85% Medium.

Inoculo della galleria • Riempire microprovette e cupole dei tests CIT , VP e

GEL con la sospensione batterica servendosi della pipetta utilizzata per il prelievo.

• Riempire solo le microprovette (e non le cupole) degli altri tests.

• Creare un'anaerobiosi nei tests: ADH, LDC, ODC, H2S,URE riempiendo le cupole con olio di paraffina.

• Richiudere la vaschetta di incubazione. • Incubare a 36°C ± 2°C per 18-24 ore.

LETTURA E INTERPRETAZIONE Lettura della galleria • Dopo l’incubazione, la lettura della galleria deve essere

effettuata servendosi della Tabella di Lettura. • Se 3 o più test (test GLU + o –) sono positivi, annotare

sulla scheda di registrazione dei risultati tutte le reazioni spontanee, quindi procedere con i tests che necessitano dell'aggiunta di reattivi: - Test TDA: aggiungere 1 goccia di reattivo TDA. Una

colorazione marrone-rossastro indica una reazione positiva da annotare sulla scheda di registrazione dei risultati.

- Test IND: aggiungere 1 goccia di reattivo JAMES. Una colorazione rosa che si diffonde in tutta la cupola indica una reazione positiva da annotare sulla scheda dei risultati.

- Test VP: aggiungere 1 goccia dei reattivi VP 1 e VP 2. Attendere almeno 10 minuti. Un colore rosa o rosso indica una reazione positiva da annotare sulla scheda dei risultati. Una debole colorazione rosa che appaia dopo i 10 minuti deve essere considerata negativa.

NOTA: Il test della ricerca di produzione dell’indolo deve essere eseguito alla fine, poiché questa reazione libera gas che potrebbero alterare l’interpretazione di altri tests della galleria. Non rimettere il coperchio dopo l’aggiunta di questi reattivi.

• Se il numero di tests positivi (compreso il test GLU) è inferiore a 3, non aggiungere i reattivi: - Incubare nuovamente la galleria per altre 24 ore

(± 2 ore) senza aggiungere i reattivi. - Rilevare i tests che necessitano dell'aggiunta di reattivi

(vedere il paragrafo precedente). - Per completare l’identificazione può essere utile

eseguire dei test complementari (vedere il paragrafo Identificazione).

InterpretazioneL'identificazione si ottiene partendo dal profilo numerico.• Determinazione del profilo numerico:

Sulla scheda dei risultati, i test sono separati in gruppi di tre e ad ognuno viene attribuito un valore pari a 1, 2 o 4. Poichè la galleria API 20 E è costituita da 20 test, aggiungendo all'interno di ogni gruppo i valori corrispondenti alle reazioni positive, si ottengono 7 cifre; quando è positiva, alla reazione dell'ossidasi, che costituisce il 21° test, si attribuisce il valore 4.

• Identificazione Si ottiene partendo dalla base dei dati (V4.0) * utilizzando l’Indice Analitico:

- Ricercare il profilo numerico nella lista dei profili. * tramite il software di identificazione:

- Digitare sulla tastiera il profilo numerico a 7 cifre.

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Tuttavia in alcuni casi il profilo a 7 cifre non è sufficientemente discriminante e si rendono quindi necessari i seguenti test : - Riduzione dei nitrati in nitriti (NO2) ed in azoto (N2) :

aggiungere una goccia dei reattivi Nit 1 e NIT 2 nel microtubo GLU. Attendere da 2 a 5 minuti. Una colorazione rossa indica una reazione positiva (NO2).Una reazione negativa (colorazione gialla) può essere dovuta alla produzione di azoto (eventualmente segnalata dalla presenza di microbolle) : aggiungere 2-3 mg di reattivo Zn nella cupola GLU. Se dopo 5 minuti un tubo rimane giallo indica una reazione positiva (N2) da annotare sulle scheda dei risultati. Se la cupola è arancio-rosso, la reazione è negativa: i nitrati ancora presenti nel tubo sono stati ridotti a nitriti dallo Zinco. Questa reazione è interessante per i bacilli Gram negativi ossdasi positivi. NOTA : Il test di riduzione dei nitrati deve essere eseguito alla fine per le stesse ragioni del test indolo (vedere la nota del paragrafo "Lettura della galleria").

- Mobilità (MOB) : Inoculare una fiala di API M Medium (vedere la scheda tecnica).

- Coltura su agar MacConkey (McC) : Seminare una piastra di Mac Conkey (vedere la scheda tecnica).

- Ossidazione del glucosio (OF-O) : Inoculare una fiala di API OF Medium (vedere la scheda tecnica).

- Fermentazione del glucosio (OF-F) : Inoculare una fiala di API OF Medium (vedere la scheda tecnica).

Questi test complementari, indicati nell’introduzione (Codifica dei profili) dell’Indice Analitico, possono essere utilizzati per costituire unprofilo a 9 cifre, identificabile con il software di identificazione.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviaeIn caso di debole discriminazione possono essere proposti altri test supplementari. Far riferimento al software di identificazione o all’Indice Analitico.

CONTROLLO DI QUALITA’ I terreni, le gallerie ed i reattivi sono sottoposti a controlli di qualità sistematici nelle diverse fasi del ciclo produttivo.Inoltre l’utilizzatore può effettuare un controllo batteriologico dei test della galleria utilizzando il ceppo : 1. Escherichia coli ATCC 25922 di preferenza, oppure uno dei seguenti ceppi :





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* Lo stadio N2 (+) può essere osservato per il ceppo ATCC 13047 e per il ceppo ATCC 25922. • Profilo ottenuto dopo 24-48 ore di incubazione per il ceppo ATCC 51331, partendo da colonie isolate su agar Tripticasi Soia + sangue.• Profili ottenuti dopo 18-24 ore di incubazione per gli altri ceppi, partendo da colonie isolate su agar Tripticasi Soia + sangue.• Sospensione batterica preparata nell’API NaCl 0.85 % Medium. E’ responsabilità dell’utilizzatore assicurarsi che il controllo di qualità corrisponda a quanto previsto dalla legislazione vigente.

LIMITI DEL METODO • Il sistema API 20 E è destinato all’identificazione delle

Enterobacteriaceae e dei bacilli Gram negativi non esigenti inclusi nella base dei dati (vedere la Tabella di Identificazione alla fine della scheda tecnica) e solo di questi. Non può essere utilizzato per identificare altri microrganismi o per escluderne la presenza.

• E’ possibile osservare delle discordanze rispetto alle tecniche tradizionali a causa delle differenze di principio delle reazioni utilizzate con la tecnica API. Possono anche essere osservati degli scarti di percentuale che dipendono da variazione di substrato.

• Per alcune specie (ad es. Klebsiella o Proteus), reazioni del test glucosio inizialmente positive possono talvolta diventare negative (comparsa di una colorazione blu-verde). In questi casi la reazione deve essere considerata negativa. Le percentuali indicate nella Tabella di Identificazione tengono conto di questo tipo di fenomeno.

• Nel caso di identificazione di Salmonella o Shigella è necessario effettuare un’identificazione sierologica per confermare l’identificazione batterica.

• I bacilli Gram negativi non fermentanti, isolati da pazienti affetti da mucoviscidosi, possono generare profili biochimici atipici che possono alterare la loro identificazione.

• Devono essere utilizzate unicamente colture pure contenenti un solo tipo di microrganismo.

RISULTATI ATTESI Per i valori attesi per le differenti reazioni biochimiche far riferimento alla Tabella di Identificazione alla fine della scheda tecnica.

PERFORMANCE • Enterobacteriaceae :

Sono stati testati 5514 ceppi di diversa origine e ceppi di collezione appartenenti a quelli inclusi nella base dei dati:- il 92,80 % dei ceppi è stato correttamente identificato

(con o senza test complementari). - il 4,61 % dei ceppi non è stato identificato. - il 2,59 % dei ceppi non è stato identificato correttamente.

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• altri bacilli Gram negativi non esigenti : Sono stati testati 2386 ceppi di diversa origine e ceppi di collezione appartenenti a quelli inclusi nella base dei dati:- il 90,32 % dei ceppi è stato correttamente identificato

(con o senza test complementari). - il 6,16 % dei ceppi non è stato identificato. - il 3,52 % dei ceppi non è stato identificato correttamente.

SMALTIMENTO DEI RIFIUTI Smaltire i reattivi utilizzati o non utilizzati ed i materiali monouso contaminati seguendo le procedure relative ai prodotti infettivi o potenzialmente infettivi. E’ responsabilità di ogni laboratorio gestire i rifiuti e gli effluenti prodotti a seconda della loro natura e della loro pericolosità ed assicurarne (o farne assicurare) il trattamento e lo smaltimento conformemente alla legislazione vigente.

TABELLA DI LETTURA

RISULTATITEST SUBSTRATI Q.TA’

(mg/cup.) REAZIONI/ENZIMINEGATIVO POSITIVO

ONPG 2-nitrofenil-ßD- galattopiranoside 0,223

ß-galattosidasi(Orto-NitroFenil-ßD- Galattopiranoside)

incolore giallo (1)

ADH L-arginina 1,9 Arginina Deidrolasi giallo rosso / arancio (2)

LDC L-lisina 1,9 Lisina DeCarbossilasi giallo rosso / arancio (2)

ODC L-ornitina 1,9 Ornitina DeCcarbossilasi giallo rosso / arancio (2)

CIT citrato trisodico 0,756 utilizzazione del CITrato verde chiaro / giallo blu-verde / blu (3)

H2S tiosolfato di sodio 0,075 produzione di H2S incolore / grigiastro deposito nero / orlo sottile

URE urea 0,76 UREasi giallo rosso / arancio (2)

TDA / immediatoTDA L-triptofano 0,38 Triptofano DeAminasi giallo marrone-rossastro

JAMES / immediato

IND L-triptofano 0,19 produzione di INDolo incolore

verde chiaro / giallo rosa

VP 1 + VP 2 / 10 min.VP piruvato di sodio 1,9 produzione di acetoina

(Voges Proskauer) incolore rosa / rosso (5)

GEL gelatina(origine bovina) 0,6 GELatinasi nessuna diffusione diffusione del

pigmento nero

GLU D-glucosio 1,9 fermentazione / ossidazione (GLUcosio) (4) blu / blu-verde giallo / giallo grigio

MAN D-mannitolo 1,9 fermentazione / ossidazione (MANnitolo) (4)

blu / blu-verde giallo

INO inositolo 1,9 fermentazione / ossidazione (INOsitolo) (4)


SOR D-sorbitolo 1,9 fermentazione / ossidazione (SORbitolo) (4)


RHA L-ramnosio 1,9 fermentazione / ossidazione (Ramnosio) (4)


SAC D-saccarosio 1,9 fermentazione / ossidazione (SACcarosio) (4)


MEL D-melibioso 1,9 fermentazione / ossidazione (MELibiosio) (4)


AMY amigdalina 0,57 fermentazione / ossidazione (AMigdalina) (4)


ARA L-arabinosio 1,9 fermentazione / ossidazione (ARAbinosio) (4)


OX (vedere scheda tecnica del test ossidasi) citocromo-Ossidasi (vedere scheda tecnica del test ossidasi)

(1) Una leggerissima colorazione gialla è comunque positiva. (2) Se dopo 36-48 ore di incubazione appare una colorazione arancione, la reazione deve essere considerata negativa. (3) Lettura nella cupola (zona aerobia). (4) La fermentazione comincia nella parte inferiore delle microprovette, mentre l'ossidazione comincia nella cupola. (5) Una debole colorazione rosa che appaia dopo oltre 10 minuti deve essere considerata negativa. • Le quantità indicate possono essere aggiustate in funzione dei titoli delle materie prime. • Alcune cupole contengono dei componenti di origine animale, in particolare dei peptoni.

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Satmpato in Francia

Il logo è un marchio depositato e protetto di proprietà esclusiva di bioMérieux SA o di una delle sue filiali.

TEST COMPLEMENTARI

RISULTATITESTS SUBSTRATI Q.TA’

(mg/cup REAZIONI/ENZIMI

NEGATIVO POSITIVO NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min.

produzione di NO2 giallo rosso nitrato di potassio 0,076

Zn / 5 min.

Riduzionedei nitrati provetta

GLU riduzione allo stadio N2 arancione-rosso giallo

MOB API M Medium o microscopio - MOBilità MOBilità mobile

McC Terreno di MacConkey - coltura coltura presenza

OF-F OF-O glucosio (API OF Medium)

-- fermentazione : sotto olio ossidazione : all’aria

fermentazione : sotto olio ossidazione : all’aria

giallogiallo

PROCEDIMENTO p. I TABELLA DI IDENTIFICAZIONE p. II BIBLIOGRAFIA p. IV TABELLA DEI SIMBOLI p. V

bioMérieux® SA Português - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - PT - 2004/05

® 20 ESistema de identificação das Enterobacteriaceae e outros bacilos Gram negativos não fastidiosos

INTRODUÇÃO E OBJECTIVO DO TESTE O API 20 E é um sistema padronizado para a identificação das Enterobacteriaceae e outros bacilos Gram negativos não fastidiosos, engloba 21 mini-testes bioquímicos e uma base de dados. A lista completa das bactérias possíveis de identificar com este sistema encontra-se no Quadro de Identificação no final deste folheto informativo.

PRINCÍPIOA galeria API 20 E engloba 20 microtubos que contêm os substratos desidratados. Os microtubos são inoculados com uma suspensão bacteriana que reconstitui os testes. As reacções produzidas durante o período de incubação traduzem-se por viragens espontâneas de cor ou reveladas através da adição de reagentes. A leitura destas reacções efectua-se consultando o Quadro de Leitura e a identificação obtém-se com o Catálogo Analítico ou com um programa de identificação.

APRESENTAÇÃO Embalagem de 25 testes (ref. 20 100) - 25 galerias API 20 E - 25 caixas de incubação - 25 fichas de resultados - 1 barra para fechar - 1 folheto informativo

Embalagem de 100 testes (ref. 20 160) - 100 galerias API 20 E (4x25 galerias) - 100 caixas de incubação - 100 fichas de resultados - 1 barra para fechar - 1 folheto informativo

COMPOSIÇÃO DA GALERIA A composição da galeria API 20 E está indicada no Quadro de Leitura deste folheto informativo.

REAGENTES E MATERIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOSReagentes :- API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) ou

API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E embalagem de reagentes (Ref. 20 120) ou

reagentes individuais: TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Reagente Zn (Ref. 70 380) - Oxidase (Ref. 55 635*)

* referência não comercializada em alguns países: utilizar um reagente equivalente.

- Óleo de parafina (Ref. 70 100) - Catálogo Analítico API 20 E (Ref. 20 190) ou

programa de identificação (consultar a bioMérieux)

Materiais : - Pipetas ou PSIpetas - Suporte de protecção de ampolas - Suporte para ampolas - Equipamento geral de laboratório de bacteriologia

REAGENTES COMPLEMENTARES: - API OF Medium (Ref. 50 110):

Teste para a determinação do metabolismo fermentativo ou oxidativo da glucose.

- API M Medium (Ref. 50 120) : Teste para a determinação da mobilidade das bactérias aero-anaeróbias.

PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO • Para diagnóstico in vitro e para controlo

microbiológico. • Unicamente para uso profissional. • Este dispositivo contém componentes de origem animal.

O controlo da origem e/ou estado sanitário dos animais não podem garantir de maneira absoluta que estes produtos não contenham nenhum agente patogénico transmissível, é recomendado manipulá-los com as precauções de utilização relativas aos produtos potencialmente infecciosos (não ingerir; não inalar).

• As amostras, culturas bacterianas e produtos semeados devem ser considerados potencialmente infecciosos e manipulados de maneira apropriada. As técnicas assépticas e as precauções habituais de manipulação para o grupo bacteriano estudado devem ser respeitadas durante toda a manipulação; consultar o "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue;Approved Guideline – Revisão em vigor". Para informações complementares sobre as precauções de manipulação, consultar o "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH – Última edição" ou a regulamentação em vigor no país de utilização.

• Não utilizar os reagentes após a data de validade. • Antes da utilização, assegurar-se de que a embalagem

dos diferentes componentes não está danificada. • Não utilizar galerias que tenham sofrido uma alteração

física: cúpula deformada, saqueta/sachet desidratante aberta, …

• O comportamento funcional apresentado foi obtido com o procedimento indicado neste folheto informativo. Qualquer desvio ao procedimento pode alterar os resultados.

• A interpretação dos resultados do teste deve ser efectuada tendo em conta o contexto clínico ou outro, a origem da amostra, os aspectos macro e microscópicos e, eventualmente, os resultados de outros testes, em especial, do antibiograma.

IVD

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CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO As galerias apresentam-se numa bolsa de alumínio com saquetas/sachets desidratantes. Depois da abertura da bolsa (*), conservar as galerias com os desidratantes fechando-a com a barra para fechar (junta na embalagem) : colocar a extremidade da bolsa entre as duas peças da barra e pressioná-las cuidadosamente, em todo o seu comprimento. As galerias podem ser assim conservadas durante 10 meses após a abertura da bolsa, a 2º - 8° C (ou até à data de validade indicada na embalagem, se esta for anterior). (*) Recomendação para abrir a bolsa: cortar mesmo por baixo da soldadura, mantendo a bolsa direita para evitar a danificação das saquetas/sachets desidratantes.

AMOSTRAS (COLHEITA/COLETA E PREPARAÇÃO) O API 20 E não deve ser utilizado directamente a partir de amostras de origem clínica ou outras. Os microrganismos a identificar devem primeiro ser isolados num meio de cultura adaptado à cultura das Enterobacteriaceae e/ou dos bacilos Gram negativos não fastidiosos segundo as técnicas habituais de bacteriologia.

PROCEDIMENTOTeste oxidase O teste oxidase deve ser efectuado segundo as instruções do fabricante, constitui o 21º teste de identificação a anotar na ficha de resultados.

Preparação da galeria • Juntar fundo e tampa de uma caixa de incubação e

distribuir cerca de 5 ml de água destilada estéril ou desmineralizada [ou qualquer água sem aditivos ou derivados susceptíveis de libertarem gases (Ex : Cl2,CO2 ...)] nos alvéolos para criar uma atmosfera húmida.

• Inscrever a referência da estirpe/cepa na lingueta lateral da caixa. (Não inscrever a referência na tampa, esta pode ser deslocada durante a manipulação).

• Tirar a galeria da embalagem. • Colocar a galeria na caixa de incubação. NOTA : O API 20 E deve ser utilizado com as Enterobacteriaceae e/ou os bacilos Gram negativos não fastidiosos. Os microrganismos fastidiosos, exigentes e que necessitam das precauções de manipulação especiais (ex. Brucella e Francisella) não fazem parte da base de dados API 20 E. Convém utilizar outras técnicas para excluir ou confirmar a sua presença.

Preparação do inóculo • Abrir uma ampola de API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)

ou uma ampola de API Suspension Medium (5 ml) como indicado no parágrafo "Precauções" do folheto informativo do produto, ou utilizar um tubo contendo 5 ml de soro fisiológico estéril ou água destilada estéril, sem aditivos.

• Com uma pipeta ou um PSIpeta, colher/coletar uma única colónia bem isolada no meio gelosado. Utilizar preferencialmente culturas recentes (18-24 horas).

• Efectuar uma suspensão bacteriana homogeneizando cuidadosamente as bactérias no meio. Esta suspensão deve ser utilizada extemporaneamente.

NOTA: a maioria das espécies de Vibrio são halófilas. Se se suspeitar de um Vibrio, efectuar a suspensão bacteriana em API NaCl 0,85 % Medium.

Inoculação da galeria • Encher os tubos e cúpulas nos testes CIT , VP e

GEL com a suspensão bacteriana utilizando a pipeta que serviu para a colheita/coleta.

• Encher unicamente os tubos (e não as cúpulas) dos outros testes.

• Criar uma anaerobiose nos testes ADH, LDC, ODC,H2S, URE enchendo as cúpulas com óleo de parafina.

• Fechar a caixa de incubação. • Incubar a 36° C ± 2° C durante 18-24 horas.

LEITURA E INTERPRETAÇÃO Leitura da galeria • Após incubação, a leitura da galeria deve efectuar-se

consultando o Quadro de Leitura. • Se 3 ou mais testes (teste GLU + ou –) forem positivos,

anotar na ficha de resultados todas as reacções espontâneas e em seguida revelar os testes que necessitam da adição de reagentes: - Teste TDA : adicionar 1 gota de reagente TDA. Uma

cor castanha-avermelhada indica uma reacção positiva a anotar na ficha de resultados.

- Teste IND : adicionar 1 gota de reagente JAMES. Uma cor rosa difundida em toda a cúpula indica uma reacção positiva a anotar na ficha de resultados.

- Teste VP : adicionar 1 gota dos reagentes VP 1 e VP 2. Esperar, no mínimo, 10 minutos. Uma cor rosa ou vermelha indica uma reacção positiva a anotar na ficha de resultados. Uma fraca coloração rosa depois de 10 minutos deve ser considerada negativa.

NOTA: O teste para detectar a produção de indol deve ser efectuado por último, visto que esta reacção liberta gases que podem alterar a interpretação de outros testes da galeria. Não colocar novamente a tampa de incubação depois da adição do reagente.

• Se o número de testes positivos aos quais foram adicionados reagentes (incluindo o teste GLU) for inferior a 3 : - Reincubar a galeria durante mais 24 horas (± 2 horas)

sem adicionar os reagentes. - Revelar os testes que necessitem da adição de

reagentes (consultar o parágrafo anterior). - Para completar a identificação, pode ser útil efectuar

testes complementares (consultar o parágrafo Identificação).

Interpretação A identificação obtém-se a partir do perfil numérico.• Determinação do perfil numérico:

Na ficha de resultados, os testes são separados por grupos de três e um valor 1, 2 ou 4 é indicado para cada um. A galeria API 20 E engloba 20 testes, adicionando no interior de cada grupo os valores que correspondem às reacções positivas, obtém-se 7 algarismos; a reacção da oxidase que constitui o 21º teste é assinalada com o valor 4 se for positiva.

• Identificação: É efectuada a partir da base de dados (V4.0) * com o Catálogo Analítico: - Procurar o perfil numérico na lista dos perfis.

* com o programa de identificação: - Introduzir manualmente no teclado o perfil numérico

com 7 algarismos.

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Nalguns casos, pode haver necessidade de efectuar testes complementares por o perfil de 7 algarismos não ser iuficientemente discriminativo: - Redução dos nitratos em nitritos (NO2) e em azoto (N2) :

adicionar 1 gota dos reagentes NIT 1 e NIT 2 no tubo GLU. Esperar 2 a 5 minutos. Uma cor vermelha indica uma reacção positiva (NO2). Uma reacção negativa (coloração amarela) pode ser devida à produção de azoto (eventualmente assinalada pela presença de bolhas mínimas): adicionar 2 a 3 mg de reagente Zn na cúpula GLU. Após 5 minutos, se um tubo permanecer amarelo indica uma reacção positiva (N2) a anotar na ficha de resultados. Se a cúpula estiver laranja-vermelha, a reacção é negativa, os nitratos ainda presentes no tubo foram reduzidos a nitritos pelo Zinco. Esta reacção é especialmente interessante para os bacilos Gram negativos oxidase positiva.

NOTA: Pelas mesmas razões que as do teste indol (consultar a nota do parágrafo "Leitura da galeria"), o teste de redução dos nitratos deve efectuar-se por último.

- Mobilidade (MOB) : Inocular uma ampola de API M Medium (cfr folheto informativo).

- Cultura em gelose MacConkey (McC): Semear um meio de Mac Conkey (cfr folheto informativo).

- Oxidação da glucose (OF-O) : Inocular uma ampola de API OF Medium (cfr folheto informativo).

- Fermentação da glucose (OF-F) : Inocular uma ampola de API OF Medium (cfr folheto informativo).

Estes testes complementares, mencionados na introdução (Código dos perfis) do Catálogo Analítico, podem ser utilizados para constituir um perfil de 9 algarismos, identificável com o programa de identificação.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae Podem ser propostos testes suplementares se houver fraca discriminação. Consultar o programa ou o Catálogo Analítico.

CONTROLO DE QUALIDADE

Os meios, galerias e reagentes são objecto de controlos de qualidade sistemáticos nas diferentes etapas do seu fabrico. Além disso, o utilizador pode efectuar um controlo bacteriológico dos testes da galeria, preferencialmente com a estirpe/cepa 1. Escherichia coli ATCC 25922 ou com uma das estirpes/cepas seguintes:





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + – * O estado N2 (+) pode ser observado para a estirpe/cepa ATCC 13047 e a estirpe/cepa ATCC 25922. • Perfil obtido após 24-48 H de incubação para a estirpe/cepa ATCC 51331, a partir de colónias cultivadas em gelose Trypcase Soja +

sangue.• Perfis obtidos após 18-24 H de incubação para as outras estirpes/cepas, a partir de colónias cultivadas em gelose Trypcase Soja +

sangue.• Suspensão bacteriana preparada em API NaCl 0.85 % Medium. É da responsabilidade do utilizador assegurar que o controlo de qualidade é efectuado em conformidade com a legislação local em vigor.

LIMITES DO TESTE • O sistema API 20 E destina-se à identificação das

Enterobacteriaceae e dos bacilos Gram negativos não fastidiosos presentes na base de dados (consultar o Quadro de Identificação no final do folheto informativo) e apenas a estes. Não pode ser utilizado para identificar outros microrganismos ou excluir a sua presença.

• Podem observar-se discordâncias em relação às técnicas convencionais devidas às diferenças de princípio das reacções utilizadas em técnica API. Podem também observar-se desvios de percentagens causados pelas variações de substrato.

• Para algumas espécies (ex. Klebsiella ou Proteus), as reacções do teste glucose inicialmente positivas podem tornar-se negativas (aparecimento de uma coloração azul-esverdeada). Neste caso, esta reacção deve ser considerada negativa. As percentagens indicadas no Quadro de Identificação têm em consideração este género de fenómeno.

• No caso de identificação de Salmonella ou Shigella,deve efectuar-se uma identificação serológica para confirmar a identificação bacteriana.

• Os bacilos Gram negativos não fermentadores, isolados de doentes com mucoviscidose, podem criar perfis bioquímicos atípicos susceptíveis de alterar a sua identificação.

• Devem apenas ser utilizadas as culturas puras que contenham um único tipo de microrganismo.

RESULTADOS ESPERADOS Consultar o Quadro de Identificação no final deste folheto informativo para saber os resultados esperados para as diferentes reacções bioquímicas.

COMPORTAMENTO FUNCIONAL • Enterobacteriaceae :

Foram testadas 5514 estirpes/cepas de diversas origens e estirpes/cepas de colecção pertencentes às espécies da base de dados: - 92,80 % das estirpes/cepas foram correctamente

identificadas (com ou sem testes complementares). - 4,61 % das estirpes/cepas não foram identificadas. - 2,59 % das estirpes/cepas foram mal identificadas.

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• Outros bacilos Gram negativos não fastidiosos: Foram testadas 2386 estirpes/cepas de diversas origens e estirpes/cepas de colecção perctencentes às espécies da base de dados: - 90,32 % das estirpes/cepas foram correctamente

identificadas (com ou sem testes complementares). - 6,16 % das estirpes/cepas não foram identificadas. - 3,52 % das estirpes/cepas foram mal identificadas.

ELIMINAÇÃO DE RESÍDUOS Eliminar os reagentes utilizados ou não utilizados bem como os materiais descartáveis contaminados em conformidade com os procedimentos relativos aos produtos infecciosos ou potencialmente infecciosos. É da responsabilidade de cada laboratório gerir os resíduos e os efluentes que este produz consoante a sua natureza e o seu perigo, e assegurar (ou fazer assegurar) o tratamento e a eliminação em conformidade com as regulamentações aplicáveis.

QUADRO DE LEITURA RESULTADOS

TESTES COMPONENTES ACTIVOS

QTD(mg/cúp.) REACÇÕES/ENZIMAS

NEGATIVO POSITIVO

ONPG 2-nitrofenil-ßD- galactopiranosida 0,223

ß-galactosidase(Orto Nitrofenil-ßD- Galactopiranosidase)

incolor amarelo (1)

ADH L-arginina 1,9 Arginina DiHidrolase amarelo vermelho / alaranjado (2)

LDC L-lisina 1,9 Lisina DesCarboxilase amarelo vermelho / alaranjado (2)

ODC L-ornitina 1,9 Ornitina DesCarboxilase amarelo vermelho / alaranjado (2)

CIT Citrato de sódio 0,756 Utilização do CITrato verde pálido / amarelo azul-esverdeado / azul (3)

H2S Tiosulfato de sódio 0,075 Produção de H2S incolor / acinzentado depósito negro / orla fina

URE Ureia 0,76 UREase amarelo vermelho / alaranjado (2)

TDA / imediatoTDA L-triptofano 0,38 Triptofano DesAminase amarelo castanho-avermelhado

JAMES / imediato

IND L-triptofano 0,19 Produção de INDol incolor verde pálido / amarelo

rosa

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP Piruvato de sódio 1,9 Produção de acetoína (Voges Proskauer) incolor rosa / vermelho (5)

GEL Gelatina(origem bovina) 0,6 Gelatinase (GELatina) não difusão difusão do pigmento

negro

GLU D-glucose 1,9 fermentação / oxidação (GLUcose) (4)

azul / azul-esverdeado amarelo / amarelo acinzentado

MAN D-manitol 1,9 fermentação / oxidação (MANitol) (4)

azul / azul-esverdeado amarelo

INO Inositol 1,9 fermentação / oxidação (INOsitol) (4)


SOR D-sorbitol 1,9 fermentação / oxidação (SORbitol) (4)


RHA L-ramnose 1,9 fermentação / oxidação (RAmnose) (4)

Azul / azul-esverdeado amarelo

SAC D-sacarose 1,9 fermentação / oxidação (SACarose) (4)


MEL D-melibiose 1,9 fermentação / oxidação (MELibiose) (4)

azul / azul esverdeado amarelo

AMY Amigdalina 0,57 Fermentação / oxidação (AMIgdalina) (4)


ARA L-arabinose 1,9 fermentação / oxidação (ARAbinose) (4)

Azul / azul-esverdeado amarelo

OX (consultar o folheto informativo do teste oxidase)

Citocromo-Oxidase (consultar o folheto informativo do teste oxidase)

(1) Uma cor amarela muito ligeira é também positiva. (2) Uma cor laranja após 36-48 H de incubação deve ser considerada negativa. (3) Leitura na cúpula (zona aeróbia). (4) A fermentação começa na parte inferior dos tubos, a oxidação começa na cúpula. (5) Uma ligeira coloração rosa depois de 10 minutos deve ser considerada negativa. • As quantidades indicadas podem ser ajustadas em função dos títulos das matérias-primas. • Algumas cúpulas contêm componentes de origem animal, nomeadamente, peptonas.

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TESTES COMPLEMENTARES

RESULTADOSTESTES COMPONENTES

ACTIVOSQTD

(mg/cúp.) REACÇÕES/ENZIMAS NEGATIVO POSITIVO

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minprodução de NO2 amarelo vermelho

nitrato de potássio 0,076 Zn / 5 min

Reduçãodos

nitratostubo GLU redução ao estado N2 laranja-vermelho amarelo

MOBAPI M Medium ou microscópio mobilidade imóvel móvel

McC Meio de MacConkey cultura ausência presença OF-F OF-O glucose (API OF Medium) fermentação: em óleo

oxidação: no ar verdeverde

amareloamarelo

PROCEDIMENTO p. I QUADRO DE IDENTIFICAÇÃO p. II BIBLIOGRAFIA p. IV QUADRO DOS SÍMBOLOS p. IV

Brasil: Distribuído por biolab-Mérieux, S.A. - Estrada do Mapuá, 491 - Jacarepaguá - R.J. - CEP 22710-261 CNPJ: 33.040.635/0001-71

Atendimento ao Consumidor Tel.: 0800-264848Prazo de Validade, N° de Lote, N° de Registro de Ministério da Saúde e Responsável Técnico:

VIDE EMBALAGEM

bioMérieux® SA - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - GR - 2004/05

® 20 Eµ Enterobacteriaceae µ Gram-

API 20 E µ µEnterobacteriaceae µ

Gram- , µ21 µ µ µ

µ .µ µ

µ.

API 20 E 20 µµ µ .

µ µ µ.

, µ µ µµ µ µ

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µµ

µ .

25 (ref. 20 100) - 25 API 20 E - 25 - 25 µ- 1 µ- 1

100 (ref. 20 160) - 100 API 20 E (4x25 )- 100 - 100 µ- 1 µ- 1

API 20 E .

:- API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230)

API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E reagent kit (Ref. 20 120)

µ µ µ :TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn reagent (Ref. 70 380) - Oxidase (Ref. 55 635*)

* µ: µ .

- Mineral oil (Ref. 70 100) - API 20 E Analytical Profile Index (Ref. 20 190)

µ ( µbioMérieux)

: - PSIpettes --- µ µ

: - API OF Medium (Ref. 50 110) :

µ µ µ µ .

- API M Medium (Ref. 50 120) :

.

• in vitr µ.

• µ .•

. µ/ µ

µ µ. ’

µµ µ µ µ

( µ µ).

• µ , µµ µ

µ µ µ .µ

µ µ µ.

"NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline –

".µ , "Biosafety in Microbiological

and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – " µ .

• µ µ µ µ.

• ,µ .

• µ: µ µ ,

, .• µ µ

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µ .

IVD

api® 20 E 07584E - GR - 2004/05


µ µ.

(*), µ µ

( µ µ )µ µ:

µ µ µ . µ

µ 10 µ, 2-8°C ( µ µ µ

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(*) µ µ :

µ µ.

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Enterobacteriaceae / µ Gram-, µ µ

µ .

µ µ. µ

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µ• µ ( µµ )

µ 5 ml µµ [

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• µ. (

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• .• .

: API 20 E µµ µ Enterobacteriaceae / µ Gram-

. µ

µ ( ., Brucella Francisella)µ µ API 20 E.

µ.

µ µ• µ API NaCl 0.85 % Medium (5 ml)

µ API Suspension Medium (5 ml) «

», µ

5 ml µ , .

• µ PSIpette, µµ µ µ

µ . µ (18-24 ).

• µ µµ .

µ µ µµ µ .

: Vibrio .Vibrio,

API NaCl 0.85 % Medium.

µ µ• µ , µ

CIT , VP GEL µ µ .

• µ µ ( ).

• µ ADH, LDC,ODC, H2S URE µ

.• .• 36°C ± 2°C 18-24 .

• , µ.

• 3 ( GLU + -) , µ

µ :

- TDA : 1 TDA. µ µ

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VP 1 1 VP 2. µ 10 . µ

µ µµ .

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µ 3 :

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µ µ( ).

api® 20 E 07584E - GR - 2004/05


µ µ µ .

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µ 3 µ µ 1, 2 4. µ

µ µ ,7 µ 20 API 20 E. 21

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µ ., 7

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(NO2). ( )

( µ) : 2 3 mg

Zn µ GLU. 5 , µ

(N2)µ .

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- (MOB) : µ µ API M Medium ( ).

- MacConkey agar (McC) : µ MacConkey agar (

).- (OF-O) : µ µ

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API OF Medium ( ).µ µ ,

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µ µ µ 9.

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5 315 173 (57) Enterobacter gergoviae

µ .µ

.

, µ. µ µ

, µ µ 1. Escherichia coli ATCC 25922:





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + – * N2 (+) µ ATCC 13047 ATCC 25922. • µ 24-48 ATCC 51331, µ

Trypticase Soy agar + µ .• µ 18-24 , µ

Trypticase Soy agar + µ .• µ µ API NaCl 0.85 % Medium.

µ µµ .

api® 20 E 07584E - GR - 2004/05


• µ API 20 E µEnterobacteriaceae µ

, Gram-µ µ (

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,- µ .

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.• µ µ Gram- ,

µ µ µµ µ µ ,

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µ µ .

µ

µ µ µµ .

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µ µ µ :- 92.80 % (µ

µ µ ).- 4.61 % .- 2.59 % µ .

• µ Gram- : 2386

µ µ µ : - 90.32 % (µ

µ µ ).- 6.16 % .- 3.52 % µ .

µ µ µ µ µµ µ

µµ µ µ µ .

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api® 20 E 07584E - GR - 2004/05


.(mg/ .) /

ONPG 2- -ßD- 0.223ß-( -ßD-

)µ (1)

ADH L- 1.9 / (2)

LDC L- 1.9 / (2)

ODC L- 1.9 / (2)

CIT 0.756 / / (3)

H2S 0.075 H2S µ / µ µµ / µµ

URE 0.76 / (2)

TDA / µTDA L- 0.38 µ

JAMES / µ

IND L- 0.19µ

/

VP 1 + VP 2 / 10

VP 1.9 (Voges Proskauer) µ / (5)

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GLU D- 1.9 µ / ( ) (4) / /

MAN D-µ 1.9 µ / (µ ) (4) /

INO 1.9 µ / ( ) (4) /

SOR D- 1.9 µ / ( ) (4) /

RHA L- µ 1.9 µ / ( µ ) (4) /

SAC D- 1.9 µ / ( ) (4) /

MEL D-µ 1.9 µ / (µ ) (4) /

AMY µ 0.57 µ / ( µ ) (4) /

ARA L- 1.9 µ / ( ) (4) /

OX () µ ( )

(1) µ .(2) µ µ 36-48 .(3) ( ).(4) µ µ µ , .(5) µ µ 10 .• µ µ µ µ

µ .• µ , .

api® 20 E 07584E - GR - 2004/05

bioMérieux® SAau capital de 11 879 045 € 673 620 399 RCS LYON 69280 Marcy-l'Etoile / France

. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com

bioMérieux, Inc Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA

. (1) 919 620 20 00 Fax (1) 919 620 22 11

µ µ µ µ of bioMérieux SA µ.

.(mg/ .) /

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 NO2

0.076 Zn / 5 -

GLU N2 -

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McC MacConkey -

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µ : :

. I

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bioMérieux® SA Svenska - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - SE - 2004/05

® 20 EIdentifieringssystem för Enterobacteriaceae och andra icke-krävande Gram-negativa stavar

SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING API 20 E är ett standardiserat identifieringssystem för Enterobacteriaceae och andra icke-krävande Gram-negativa stavar. Testet består av 21 biokemiska tester i miniatyr och en databas. En fullständig lista över de organismer som är möjliga att identifiera med hjälp av detta system återfinns i Identifieringstabellen, sist i denna bipacksedel.

METODAPI 20 E strips består av 20 mikrobrunnar innehållande dehydrerade substrat. Dessa tester inokuleras med en bakteriesuspension som rekonstituerar mediet Under inkubationen frambringar metabolismen färgförändringar som antingen uppträder spontant eller framkallas genom att reagenser tillsätts. Reaktionerna avläses enligt Avläsningstabellen och identifieringen sker med hjälp av ett index över analytiska profiler eller med hjälp av identifieringsprogrammet.

KITETS INNEHÅLL Kit för 25 tester (Art.nr. 20 100) - 25 API 20 E strips - 25 inkubationsboxar - 25 rapportblad - 1 tätningsklips - 1 bipacksedel

Kit för 100 tester (Art.nr. 20 160) - 100 API 20 E strips (4x25 strips) - 100 inkubationsboxar - 100 rapportblad - 1 tätningsklips - 1 bipacksedel

STRIPSETS SAMMANSÄTTNING API 20 E-stripsets sammansättning anges i avläsnings-tabellen i denna bipacksedel.

REAGENSER OCH NÖDVÄNDIGT MATERIAL (SOM INTE MEDFÖLJER) Reagenser: - API NaCl 0,85% Medium, 5 ml (Art.nr. 20 230) eller

API Suspensionsmedium, 5 ml (Art.nr. 20 150) - API 20 E reagenskit (Art,nr. 20 120) eller

enskilda reagenser : TDA (Art.nr. 70 402) JAMES (Art.nr. 70 542) VP 1 + VP 2 (Art.nr. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Art.nr. 70 442)

- Zn-reagens (Art.nr. 70 380) - Oxidas (Art.nr. 55 635*)

* säljs inte i vissa länder: använd ett motsvarande reagens

- Mineralolja (Art.nr. 70 100) - API 20 E Analytical Profile Index (Art.nr. 20 190) eller

identifieringsprogram (kontakta bioMérieux)

Material:- Pipetter eller PSIpetter- Ampullskydd - Ampullställ - Allmän utrustning för mikrobiologiskt laboratorium

YTTERLIGARE TÄNKBARA REAGENSER : - API OF Medium (Art.nr. 50 110) :

Test för bestämning av fermentativ eller oxidativ metabolism.

- API M Medium (Art.nr. 50 120) : Motitlitetstest för fakultativt anaeroba bakterier.

FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER • Används för in vitro-diagnostik och mikrobiologisk

kontroll.• Endast för professionell användning. • Detta kit innehåller produkter av animaliskt ursprung.

Certifierade data angående ursprunget och/eller hälsotillståndet hos djuren garanterar inte total frånvaro av överförbara patogena agens. Vi rekommenderar därför att dessa produkter behandlas som potentiellt infektiösa och handhas enligt sedvanliga försiktighetsåtgärder (ska inte förtäras eller inandas).

• Alla prover, odlingar av mikroorganismer och inokulerade produkter skall anses infektiösa och behandlas på ett lämpligt sätt. Sterilteknik och vanliga försiktighetsåtgärder för att handha den speciella gruppen av bakterier skall iakttas under hela proceduren. Se "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline - Nuvarande upplaga". För ytterligare information angående försiktighetsåtgärder vid hantering, se “Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH – Senaste upplaga", eller de f.n. gällande reglerna i det aktuella landet.

• Använd inte reagenser efter sista förbrukningsdatum. • Kontrollera före användning att de olika

komponenternas förpackningar är intakta. • Använd inte strips som har blivit skadade: med

deformerade kupoler, påsen med torkmedel öppen, etc. • Data angående prestanda som presenteras har

uppnåtts med hjälp av den metod som anges i denna bipacksedel. Varje ändring i utförandet kan påverka resultaten.

• Tolkningen av testresultaten skall göras med hänsyn till patientens anamnes, provkälla, kolonial och mikroskopisk morfologi hos stammen och, om nödvändigt, resultaten av andra utförda tester, speciellt antibiotikakänslighet.

IVD

api® 20 E 07584E - SE - 2004/05


FÖRVARING Stripsen levereras i en aluminiumpåse innehållande påsar med torkmedel.Påsen bör, när den en gång har öppnats (*), återförslutas med tätningsklipset (medföljer kitet). För att bevara de kvarvarande stripsen med torkmedelspåsarna: placera den öppna änden av påsen längs med tätningsklipset och kläm försiktigt samman de båda delarna. Stripsen kan sedan förvaras vid 2-8°C i upp till 10 månader efter det att påsen öppnats (eller fram till det utgångsdatum som är angivet på förpackningen, om detta inträffar tidigare). (*) Rekommenderad metod för att öppna påsarna: klipp upp påsen precis under förseglingen medan påsen hålls upprätt, så att påsarna med torkmedel inte skadas.

PROVER (INSAMLING OCH PREPARERING) API 20 E är inte avsett för användning direkt med kliniska eller andra prover. Mikroorganismerna som ska identifieras måste först isoleras på ett lämpligt medium, anpassat till odling av Enterobacteriaceae och/eller icke-krävande gramnegativa stavar i enlighet med mikrobiologiska standardtekniker.

BRUKSANVISNING Oxidastest Oxidastestet måste utföras enligt tillverkarens bruksanvisningar. Resultatet ska antecknas på rapportbladet eftersom det utgör en väsentlig del av den slutliga profilen (21:a identifieringssteget).

Preparering av stripset • Gör i ordning en inkubationsbox (platta och lock) och

tillsätt ca 5 ml destillerat vatten eller avmineraliserat vatten [eller vatten utan tillsatser eller kemikalier, vilka skulle kunna utveckla gaser (t.ex. Cl2, CO2, etc.)] till håligheterna i plattan för att skapa en fuktig atmosfär.

• Anteckna stammens referens på den förlängda fliken på plattan. (Skriv inte referensen på locket eftersom det kan komma att förläggas under arbetet.)

• Ta ut stripset ur dess förpackning • Placera stripset i inkubationsboxen OBS: API 20 E bör enbart användas med Enterobacteriaceae och/eller icke-krävande gramnegativa stavar. Krävande organismer som har speciella krav på näring och som ska handhas på speciellt sätt (t.ex. Brucella och Francisella) är inte inkluderade i API 20 E-databasen. För att utesluta eller bekräfta deras närvaro behövs andra metoder.

Preparering av inokulatet • Öppna en ampull med API NaCl 0,85 % Medium (5 ml)

eller en ampull med API Suspensionsmedium (5 ml), som beskrivet under "Försiktighetsåtgärder" i bipacksedeln för dessa produkter, eller använd ett rör med 5 ml. steril saltlösning eller sterilt destillerat vatten, utan tillsatser.

• Plocka en enskild och välisolerad koloni från en isoleringsplatta med hjälp av en pipett eller PSIpett. Det rekommenderas att använda unga kulturer (18 – 24 timmar gamla)

• Emulgera försiktigt för att få en homogen bakteriesuspension. Denna suspension måste användas genast efter beredning.

OBS: de flesta Vibrio-arter är halofila. Vid misstanke om Vibrio suspenderas bakterierna i API NaCl 0,85% Medium.

Inokulering av stripset • Använd samma för pipett för att fylla både brunn och

kupol med bakteriesuspension för testerna CIT , VPand GEL .

• Fyll bara brunnen (och inte kupolen) för de övriga testerna.

• Skapa en anaerob miljö för testerna ADH, LDC, ODC,H2S och URE genom att täcka över med mineralolja.

• Stäng inkubationslådan. • Inkubera vid 36°C ± 2°C under 18-24 timmar.

AVLÄSNING OCH TOLKNING Avläsning av stripset • Efter inkubationtiden avläses stripset mot Avläsnings-

tabellen. • Om 3 eller flera tester (GLU test + eller –) är positiva,

anteckna alla spontana reaktioner på rapportbladet. Bestäm sedan vilka tester som kräver en tillsats av reagens: - TDA Test: tillsätt 1 droppe TDA-reagens. En rödbrun

färg indikerar en positiv reaktion som ska antecknas på rapportbladet.

- IND Test: tillsätt 1 droppe JAMES-reagens. En rosafärg som utvecklats i hela kupolen indikerar en positivreaktion som ska antecknas på rapportbladet.

- VP Test: tillsätt 1 droppe av vardera VP 1 och VP 2-reagens. Avvakta i minst 10 minuter. En rosa eller rödfärg indikerar en positiv reaktion som ska antecknas på rapportbladet. Om en svagt rosa färg uppträder efter 10 minuter, ska reaktionen anses som negativ.

OBS: Indolproduktionstestet ska utföras sist, eftersom denna reaktion utlöser gasproduktion, vilket interfererar med tolkningen av andra tester på stripset. Inkubationslocket av plast ska inte sättas tillbaka sedan detta reagens tillsatts.

• Om antalet positiva tester (inkl. GLU-testet) innan tillsats av reagens är färre än 3: - Återinkubera stripset under ytterligare 24 timmar

(± 2 timmar) utan tillsats av reagens. - Fastställ vilka tester som kräver tillsats av reagens (se

föregående stycke). - För att få en fullständig identifiering, kan det vara

nödvändigt att utföra kompletterande tester (se stycket om identifiering).

Tolkning Identifieringen görs med hjälp av den numeriska profilen.• Bestämning av den numeriska profilen:

På rapportbladet delas testerna upp i grupper om 3, varpå varje grupp tilldelas ett värde: 1, 2 eller 4. Genom att addera de värden som motsvarar positiva reaktioner inom varje grupp, erhålls en 7-siffrig numerisk profil för de 20 testerna på API 20 E-stripset. Oxidasreaktionen utgör det 21:a testet och har värdet 4 om det är positivt.

• Identifiering : Denna utförs med hjälp av databasen (V4.0) * med Analytical Profile Index : - Sök den numeriska profilen i listan över profiler.

* med identifieringsprogrammet: - Skriv in den 7-siffriga numeriska profilen via

tangentbordet.

api® 20 E 07584E - SE - 2004/05


I vissa fall är den 7-siffriga profilen inte tillräckligt särskiljande och följande kompletterande tester kan bli nödvändiga att utföra: - Reduktion av nitrater till nitriter (NO2) och N2-gas (N2) :

tillsätt 1 droppe vardera av NIT 1- och NIT 2-reagenserna till GLU-brunnen. Avvakta 2 till 5 minuter. En röd färg indikerar en positiv reaktion (NO2). En negativ reaktion (gul) kan bero på en reduktion till nitrogen (ibland signalerat av gasbubblor): tillsätt 2 till 3 mg Zn-reagens till GLU-brunnen. Om brunnen förblir gulefter 5 minuter indikerar detta en positiv reaktion (N2), som ska antecknas på rapportbladet. Om testet blir orange-rött, visar detta en negativ reaktion : zinken har reducerat de kvarvarande nitraterna i bunnen. Detta är en användbar reaktion för att testa Gram-negativa, oxidaspositiva stavar. OBS: Av samma skäl som för indoltestet (se anmärkning i stycket “Avläsning av stripset”), måste nitratreduktionstestet utföras sist.

- Motilitet (MOB) : Inokulera en ampull API M Medium (se bipacksedeln).

- Tillväxt på MacConkey agarmedium (McC) : Gör utstryk på en MacConkey agarplatta (se bipacksedeln).

- Oxidation av glukos (OF-O) : Inokulera en ampull API OF Medium (se bipacksedeln).

- Jäsning av glukos (OF-F): Inokulera en ampull API OF Medium (se bipacksedeln).

Dessa kompletterande tester, som anges i inledningen (Profilkodning) till Analytical Profile Index, kan användas för att skapa en 9-siffrig profil. Identifieringen erhålls sedan med hjälp av identifieringsprogrammet.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviaeYtterligare tester kan föreslås vid dålig urskiljning. Använd identifieringsprogrammet eller index över analytiska profiler.

KVALITETSKONTROLL Medier, strips och reagenser är systematiskt kvalitetskontrollerade vid olika steg i tillverkningen. För de användare som önskar utföra egna tester för kvalitetskontroll av stripset är användning av stammen 1. Escherichia coli ATCC 25922 eller en av följande stammar att föredra:




ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA NO2 N2*

1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + – * N2 (+)-tillståndet kan observeras för stammen ATCC 13047 och för stammen ATCC 25922. • Profil som erhålls efter 24-48 timmars inkubation för stammen ATCC 51331, där kolonierna odlats på Trypticase Soy agar + blod. • Profiler som erhålls efter 18-24 timmars inkubation för övriga stammar, där kolonierna odlats på Trypticase Soy agar + blod. • Bakteriesuspensioner som beretts i API NaCl 0,85 % Medium. Det är användarens ansvar att utföra kvalitetskontroll i enlighet med de lokalt tillämpade bestämmelserna.

METODENS BEGRÄNSNINGAR • API 20 S-systemet är uteslutande avsett för identifiering

av Enterobacteriaceae och de icke-krävande Gram-negativa stavar som ingår i databasen (se Identifieringstabellen sist i denna bipacksedel). Systemet kan inte användas för att identifiera några andra mikroorganismer eller för att utesluta deras närvaro.

• Avvikelser i jämförelse med konventionella metoder kan förekomma. De beror på de annorlunda reaktions-tekniker som används i API-tekniken. Därtill kommer substratvariationer som också kan förklara procentuella skillnader.

• Vid sällsynta tillfällen kan glukosreaktionerna skifta för organismer som Klebsiella eller Proteus från positivt till negativt, varvid en blågrön färg kan iakttas. Denna reaktion antecknas som negativ. Sådana tillfällen återspeglas i de procenttal som anges i Identifieringstabellen.

• Om Salmonella eller Shigella identifieras, ska serologisk identifiering utföras för att bekräfta bakterieidentifier-ingen.

• Icke-fermenterande, gramnegativa stavar, isolerade från patienter med cystisk fibros kan genera atypiska biokemiska profiler som kan påverka identifieringen.

• Endast rena kulturer av en enda organism bör användas.

FÖRVÄNTADE RESULTAT De förväntade resultaten för de olika biokemiska reaktionerna framgår av Identifieringstabellen i slutet av denna bipacksedel.

PRESTANDA • Enterobacteriaceae :

5514 stammar från insamling och stammar av olika ursprung, tillhörande arter inkluderade i databasen, testades:- 92,80% av stammarna identifierades korrekt (med

eller utan kompletterande tester). - 4,61% av stammarna identifierades inte. - 2,59% av stammarna blev felidentifierade.

• Andra icke-krävande Gram-negativa stavar: 2386 stammar från insamling och stammar av olika ursprung, tillhörande arter inkluderade i databasen, testades:- 90,32% av stammarna identifierades korrekt (med

eller utan kompletterande tester). - 6,16% av stammarna identifierades inte. - 3,52% av stammarna blev felidentifierade.

api® 20 E 07584E - SE - 2004/05


AVFALLSHANTERING Avfallshantering av använda eller oanvända reagenser såsom andra kontaminerade engångsmaterial bör ske enligt procedurer för infektiösa eller potentiellt infektiösa produkter.

Det är varje laboratoriums ansvar att handha avfalls- och avloppsprodukter efter typ och farlighetsgrad och behandla och avlägsna dem (eller få dem behandlade och avlägsnade) i enlighet med alla tillämpliga föreskrifter.

AVLÄSNINGSTABELL

RESULTATTESTER AKTIVA

INGREDIENSERMÄNGD

(mg/kup.) REAKTIONER/ENZYMERNEGATIVT POSITIVT

ONPG 2-nitrofenyl-ßD-galaktopyranosid 0,223

ß-galaktosidas(orto-nitrofenyl-ßD-galaktopyranosidas)

färglös gul (1)

ADH L-arginin 1,9 Arginin dihydrolas gul röd / orange (2)

LDC L-lysin 1,9 Lysindekarboxylas gul röd / orange (2)

ODC L-ornitin 1,9 Ornitin-dekarboxylas gul röd / orange (2)

CIT trinatriumcitrat 0,756 CITratanvändning ljusgrön / gul blå / blågrön (3)

H2S natriumtiosulfat 0,075 H2S-bildning färglös / gråaktig svart avlagring / tunn linje

URE urinämne 0,76 UREas gul röd / orange (2)

TDA / omedelbarTDA L-tryptofan 0,38 Tryptofan-deaminas gul rödbrun

JAMES / omedelbar

IND L-tryptofan 0,19 INDol-bildning färglös ljusgrön / gul rosa

VP 1 + VP 2/10 min

VP natriumpyruvat 1,9 acetoinbildning(Voges Proskauer) färglös rosa / röd (5)

GEL Gelatin (av nöt) 0,6 GELatinas ingen spridning spridning av svart

pigment

GLU D-glukos 1,9 jäsning / oxidation (GLUkos) (4) blå / blågrön gul / grågul

MAN D-mannitol 1,9 jäsning / oxidation (MANnitol) (4) blå / blågrön gul

INO inositol 1,9 jäsning / oxidation (INOsitol) (4) blå / blågrön gul

SOR D-sorbitol 1,9 jäsning / oxidation (SORbitol) (4) blå / blågrön gul

RHA L-ramnos 1,9 jäsning / oxidation (RHAmnos) (4) blå / blågrön gul

SAC D-sukros 1,9 jäsning / oxidation (SACkaros) (4) blå / blågrön gul

MEL D-melibios 1,9 jäsning / oxidation (MELibios) (4) blå / blågrön gul

AMY amygdalin 0,57 jäsning / oxidation (AMYgdalin) (4) blå / blågrön gul

ARA L-arabinos 1,9 jäsning / oxidation (ARAbinos) (4) blå / blågrön gul

OX (se bipacksedel för oxidastest) cytokrom-Oxidas (se bipacksedel för oxidastest)

(1) En mycket ljust gul färgning ska också anses som positiv. (2) En orange färg efter 36-48 timmars inkubation ska anses negativ. (3) Avläsning utförd i kupolen (aerob). (4) Jäsning börjar i brunnens nedre delar, oxidation börjar i kupolen. (5) En svagt rosa färg efter 10 minuter, ska anses negativ. • Den angivna mängden kan justeras beroende på titern av de använda råmaterialen. • Vissa kupoler innehåller produkter av animaliskt ursprung, i synnerhet peptoner.

api® 20 E 07584E - SE - 2004/05



Tryckt i Frankrike

Logotypen är ett registrerat och skyddat varumärke för bioMérieux SA eller ett av dess dotterbolag.

KOMPLETTERANDE TESTER

RESULTATTESTER AKTIVA

INGREDIENSERMÄNGD

(mg/kup.) REAKTIONER/ENZYMER

NEGATIVT POSITIVT

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minNO2-bildning gul röd

kaliumnitrat 0.076Zn / 5 min

Nitrat-reduktion

GLU-brunn reduktion till N2 gas orange-röd gul

MOB API M Medium eller mikroskop - motilitet icke-motil motil

McC MacConkey medium - tillväxt frånvaro närvaro

OF-F OF-O

glukos (API OF Medium)--

jäsning : under mineraloljaoxidation : exponerad för luft

gröngrön

gulgul

METOD s. I IDENTIFIERINGSTABELL s. II REFERENSLITTERATUR s. IV SYMBOLER s. V

bioMérieux® SA Dansk - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - DK - 2004/05

® 20 EIdentifikationssystem for Enterobacteriaceae og andre ikke-kræsne Gram-negative stave

RESUMÉ OG FORKLARING API 20 E er et standardiseret identifikationssystem til Enterobacteriaceae og andre ikke-kræsne Gram-negative stave, som anvender 21 minimerede biokemiske tests samt en database. Den komplette liste over de organismer, som det er muligt at identificere med dette system, er angivet i Identifikationstabellen i slutningen af denne indlægsseddel.

PRINCIPAPI 20 E strip består af 20 mikrorør indeholdende dehydrerede substrater. Disse tests inokuleres med en bakteriesuspension, der rekonstituerer mediet. Under inkubationen fremkalder metabolismen farveændringer, som enten sker spontant eller afsløres ved tilsætning af reagenser. Reaktionerne aflæses i henhold til aflæsningstabellen, og identifikationen opnås ved opslag i det analytiske profilindeks eller ved anvendelse af identifikations-softwaren.

KITTETS INDHOLD Kit til 25 tests (ref. 20 100) - 25 API 20 E strips - 25 inkubationsæsker - 25 resultatark - 1 poseforsegler - 1 indlægsseddel

Kit til 100 tests (ref. 20 160) - 100 API 20 E strips (4x25 strips) - 100 inkubationsæsker - 100 resultatark - 1 klemtætning - 1 indlægsseddel

SAMMENSÆTNING AF STRIP'EN Sammensætningen af API 20 E strip’en er angivet i aflæsningstabellen på denne indlægsseddel.

NØDVENDIGE MEN IKKE MEDFØLGENDE REAGENSER OG MATERIALER Reagenser: - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) eller

API Suspensionsmedium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E reagenskit (Ref. 20 120) eller

individuelle reagenser : TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Zn reagens (Ref. 70 380) - Oxidase (Ref. 55 635*)

* reference, sælges ikke i visse lande: anvend et tilsvarende reagens.

- Mineralsk olie (Ref. 70 100) - API 20 E Analytisk Profilindeks (Ref. 20 190) eller

identifikationssoftware (spørg bioMérieux)

Materiale:- Pipetter eller PSIpetter - Ampulbeskytter - Ampulstativ- Almindeligt laboratorieustyr til mikrobiologi

EVENTUELLE SUPPLERENDE REAGENSER : - API OF Medium (Ref. 50 110) :

Test til bestemmelse af fermentativ eller oxidativ metabolisme.

- API M Medium (Ref. 50 120) : Test for fakultativt anaerobe bakteriers motilitet.

ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER • Til in-vitro diagnostisk brug og mikrobiologisk

kontrol. • Kun til professionel brug. • Dette kit indeholder produkter af animalsk oprindelse.

Certificeret kendskab til dyrenes oprindelse og/eller sundhedstilstand er ikke nogen fuldgyldig garanti for, at der ikke er indeholdt nogen patogene stoffer. Det anbefales derfor, at disse produkter behandles som potentielt smittefarlige og håndteres under iagttagelse af de normale sikkerhedsforanstaltninger (må ikke indtages eller indåndes).

• Alle prøver, bakteriekulturer og inokulerede produkter skal betragtes som smittefarlige og håndteres i overensstemmelse hermed. Der skal anvendes aseptisk teknik og sædvanlige forholdsregler for håndtering af den undersøgte bakteriekultur gennem hele denne procedure. Se venligst "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline - Gældende revision". For yderligere forsigtighedsforanstaltninger ved håndtering henvises til "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Seneste udgivelse", eller de bestemmelser, der aktuelt anvendes i det enkelte land.

• Reagenserne må ikke anvendes efter udløbsdatoen. • Check inden brug, at de forskellige komponenters

pakninger er intakte. • Brug ikke strips, der er beskadiget: deformerede

brønde, åbne poser med tørremiddel, osv. • De fremlagte præstationsdata blev fundet ved

anvendelse af den procedure, der er angivet på denne indlægsseddel. Enhver ændring eller modifikation af denne procedure kan påvirke resultaterne.

• Ved fortolkning af testresultaterne skal der tages højde for patientens sygehistorie, prøvens kilde, koloniens og mikroskopiens morfologi for stammen samt om nødvendigt resultaterne af eventuelle andre udførte prøver, specielt de antibakterielle følsomhedsmønstre.

IVD

api® 20 E 07584E - DK - 2004/05


OPBEVARINGSFORHOLD Strips leveres i en aluminiumpose med poser med tørremiddel. Når posen er åbnet (*), skal den forsegles igen med poseforsegleren (medfølger i kittet) for at bevare de resterende strips med poserne med tørremiddel: Anbring den åbne ende af posen langs forsegleren og klem omhyggeligt klemmen sammen mellem de to dele. Hver strip kan derefter opbevares i op til 10 måneder efter, at posen er åbnet, ved 2-8°C (eller indtil den udløbsdato, der er angivet på pakningen, hvis dette sker inden). (*) Anbefalet metode til åbning af poserne : Klip posen op lige under forseglingen, mens posen holdes opret for at undgå at beskadige poserne med tørremiddel.

PRØVER (OPSAMLING OG PRÆPARERING) API 20 E må ikke bruges direkte sammen med kliniske eller andre prøver. De mikroorganismer, der skal identificeres, skal først isoleres på et dyrkningsmedium, der er tilpasset dyrkning af Enterobacteriaceae og/eller ikke-kræsne Gram-negative stave i henhold til mikrobiologiske standard teknikker.

BRUGSANVISNING Oxidasetest Oxidasetesten skal gennemføres i overensstemmelse med producentens brugervejledning. Resultatet bør indføres på resultatarket, da det er en integreret del af den endelige profil (21. identifikationstest).

Præparering af strip'en • Præparer en inkubationsæske (bakke og låg) og fordel

cirka 5 ml destilleret eller demineraliseret vand [eller eventuelt vand uden tilsætningsstoffer eller kemikalier, der kan frigive gasser (f.eks. Cl2, CO2, etc.)] i bakkens fordybninger for at skabe en fugtig atmosfære.

• Notér stammereferencen på bakkens forlængede klap. (Notér ikke referencen på låget, da det kan blive flyttet under proceduren).

• Fjern strip'en fra pakningen. • Anbring strip'en i inkubationsæsken. BEMÆRK: API 20 E bør kun anvendes sammen med Enterobacteriaceae og/eller ikke-kræsne Gram-negative stave. Kræsne organismer med krævende ernæringskrav, og som kræver særlige håndteringsforanstaltninger (dvs. Brucella og Francisella) er ikke medtaget i API 20 E databasen. Der må ikke anvendes alternative procedurer for at udelukke eller bekræfte deres tilstedeværelse.

Præparering af inokulum • Åbn en ampul med API NaCl 0,85 % Medium (5 ml) eller

en ampul med API Suspensionsmedium (5 ml) som angivet i afsnittet "Advarsler og forholdsregler" på indlægssedlen til disse produkter, eller anvend et rør, der indeholder 5 ml sterilt saltvand eller sterilt destilleret vand uden tilsætningsstoffer.

• Fjern en enkelt brøndisoleret koloni fra en isolationsplade med en pipette eller PSIpette. Det anbefales at anvende unge kulturer (18-24 timer gamle).

• Emulgér omhyggeligt for at opnå en homogen bakteriesuspension. Denne suspension skal anvendes umiddelbart efter præpareringen.

BEMÆRK: De fleste Vibrio species er halofile. Hvis der er mistanke om en Vibrio, opslemmes bakterien i API NaCl 0,85 % Medium.

Inokulation af strip'en • Brug den samme pipette til at fylde både røret og

brønden i testen CIT , VP og GEL med bakteriesuspensionen.

• Fyld kun røret (ikke brønden) til de øvrige tests. • Skab anaerobiose i prøverne ADH, LDC, ODC, H2S og

URE ved at overlejre dem med mineralsk olie. • Luk inkubationsæsken. • Inkubér ved 36°C ± 2°C i 18-24 timer.

AFLÆSNING OG FORTOLKNING Aflæsning af strip'en • Efter inkubationsperioden aflæses strip'en ved at

referere til Aflæsningstabellen. • Hvis 3 eller flere tests (GLU test + eller -) er positive,

noteres alle de spontane reaktioner på resultatarket, og derefter afsløres de tests, der kræver tilsætning af reagenser : - TDA-Test : Tilsæt en dråbe TDA-reagens. En rødbrun

farve er tegn på en positiv reaktion at notere på resultatarket.

- IND-Test : Tilsæt en dråbe JAMES-reagens. Hvis der udvikles en lyserød farve i hele brønden, er det tegn på en positiv reaktion at notere på resultatarket.

- VP-Test : Tilsæt 1 dråbe af hvert af reagenserne VP 1 og VP 2. Vent mindst 10 minutter. En lyserød eller rød farve angiver, at en positiv reaktion skal noteres på resultatarket. Hvis der viser sig en let lyserød farve efter 10 minutter, bør reaktionen betragtes som negativ.

BEMÆRK: Indolproduktionstesten skal udføres sidst, da denne reaktion frigør gasprodukter, som påvirker fortolkningen af andre tests på strip'en. Plastinkubationslåget må ikke sættes på igen, når reagenset er tilsat.

• Hvis antallet af positive tests (inklusive GLU-test) før tilsætning af reagenserne er under 3 : - Reinkuberes strip'en i yderligere 24 timer (± 2 timer)

uden at tilsætte nogen reagenser. - Afslør de tests, der kræver tilsætning af reagenser (se

foregående afsnit). - For at afslutte identifikationen kan det være

nødvendigt at udføre supplerende tests (se Identifikations-afsnittet).

Fortolkning Identifikation sker med den numeriske profil.• Bestemmelse af den numeriske profil:

På resultatarket er testene opdelt i grupper på 3, og en værdi, 1,2 eller 4, er angivet for hver. Ved at addere de værdier, der svarer til positive reaktioner inden for hver gruppe opnår man et 7-cifret profilnummer for de 20 tests i API 20 E-strip'en. Oxidasereaktionen udgør den 21. test og har en værdi på 4, hvis den er positiv.

• Identifikation : Denne udføres ved hjælp af databasen (V4.0) * med Analytisk Profilindeks : - Slå den numeriske profil op i fortegnelsen over

profiler. * med identifikations-softwaren: - Indtast den 7-cifrede numeriske profil manuelt via

tastaturet.

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I visse tilfælde er den 7-cifrede profil ikke tilstrækkeligt diskriminerende, og det er nødvendigt at udføre følgende supplerende tests. - Reduktion af nitrater til nitriter (NO2) og N2 gas (N2) :

Tilsæt en dråbe NIT 1 og en dråbe NIT 2 reagens til GLU-røret. Vent 2 til 5 minutter. En rød farve er tegn på en positiv reaktion (NO2). En negativ reaktion (gul) kan skyldes reduktionen til nitrogen (hvilket sommetider viser sig i form af luftbobler) : Tilsæt 2 til 3 mg Zn-reagens til GLU-røret. Hvis røret efter 5 minutter stadig er gult, er det tegn på en positiv reaktion (N2) at notere på resultatarket. Hvis testen bliver orange-rød, er dette en negativ reaktion. De nitrater, der stadig er i røret, er blevet reduceret af zinken. Denne reaktion er nyttig ved testning af Gram-negative oxidasepositive stave.

BEMÆRK: Af samme årsag som indol-testen (se bemærkning i afsnittet "Aflæsning af strip") skal nitratreduktionstesten udføres sidst.

- Motilitet (MOB) : Inokulér en ampul med API M Medium (se indlægsseddel).

- Dyrkning på MacConkey-agarmedium (McC) : Udstryg en MacConkey agarplade (se indlægsseddel).

- Oxidation af glukose (OF-O) : Inokulér en ampul med API OF Medium (se indlægsseddel).

- Fermentation af glukose (OF-F) : Inokulér en ampul med API OF Medium (se indlægsseddel).

Disse supplerende tests, der er angivet i det indledende afsnit (Profilkodning) af det Analytiske Profilindeks, kan anvendes til at skabe en 9-cifret profil. Identifikation opnås da ved hjælp af Identifikationssoftwaren.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviaeDer kan foreslås flere tests i tilfælde af lav diskrimination. Der henvises til identifikations-softwaren eller Analytisk Profilindeks.

KVALITETSKONTROL Medier, strips og reagenser kvalitetskontrolleres systematisk på forskellige trin under fremstillingen. For de brugere, der ønsker at udføre deres egne kvalitetskontroltests med strip'en er det bedst at anvende stammen 1. Escherichia coli ATCC 25922 eller en af følgende stammer:





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + – * N2 (+) tilstand kan observeres for stammen ATCC 13047 og stammen ATCC 25922. • Profil opnået efter 24-48 timers inkubation for stammen ATCC 51331 ved brug af kolonier dyrket på Trypticasesojaagar + blod. • Profiler opnået efter 18–24 timers inkubation for de øvrige stammer ved brug af kolonier dyrket på Trypticasesojaagar + blod. • Bacterieopslemninger præpareret i API NaCl 0,85 % Medium. Det er brugerens ansvar at foretage kvalitetskontrol i overensstemmelse med lokale gældende bestemmelser.

METODENS BEGRÆNSNINGER • API 20 E-systemet er udelukkende beregnet til

identifikation af Enterobacteriaceae og de ikke-kræsne Gram-negative stave, der er indeholdt i databasen (se Identifikationstabellen i slutningen af denne indlægsseddel). Det kan ikke benyttes til at identificere nogen andre mikroorganismer eller til at udelukke, at de er til stede.

• Afvigelser i forhold til konventionelle metoder kan observeres. De skyldes de forskellige reaktionsprincipper, der anvendes i API-teknikken. Desuden findes der substratvariationer, som også tager højde for procentuelle forskelle.

• I sjældne tilfælde kan glukosereaktioner for organismer som Klebsiella eller Proteus reversere fra positiv til negativ; i sådanne tilfælde ses en blågrøn farve. Denne reaktion noteres som en negativ reaktion. Sådanne forekomster afspejles i de procentdele, der er angivet i Identifikationstabellen.

• Hvis der identificeres Salmonella eller Shigella, skal der udføres serologisk identifikation for at bekræfte den bakterielle identifikation.

• Non-fermentative Gram-negative stave, isoleret fra patienter med cystisk fibrose, kan resultere i atypiske biokemiske profiler, hvilket kan påvirke identifikationen.

• Der bør kun anvendes rene kulturer af en enkelt organisme.

FORVENTEDE RESULTATER Se Identifikationsoversigten i slutningen af denne indlægsseddel for forventede resultater for de forskellige biokemiske reaktioner.

PRÆSTATION • Enterobacteriaceae :

5514 kollektions-stammer og stammer af forskellig oprindelse, som hører til species, der er inkluderet i databasen, blev testet: - 92,80 % af stammerne blev korrekt identificeret

(med eller uden supplerende tests). - 4,61 % af stammerne blev ikke identificeret. - 2,59 % af stammerne blev fejlidentificeret.

• Andre ikke-kræsne Gram-negative stave: 2386 kollektionsstammer og stammer af forskellig oprindelse, som hører til species, der er inkluderet i databasen, blev testet: - 90,32 % af stammerne blev korrekt identificeret

(med eller uden supplerende tests). - 6,16 % af stammerne blev ikke identificeret. - 3,52 % af stammerne blev fejlidentificeret.

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BORTSKAFFELSE AF AFFALD Bortskaf alle brugte eller ubrugte komponenter samt eventuelle andre kontaminerede materialer efter procedurer for infektiøse eller potentielt infektiøse produkter.

Det er ethvert laboratoriums ansvar at håndtere det affald og spildevand, der opstår, i overensstemmelse med dets type og grad af farlighed, og at behandle og bortskaffe det (eller få det behandlet og bortskaffet) i henhold til gældende forskrifter.

AFLÆSNINGSTABEL

RESULTATERTESTS AKTIVE

INDHOLDSSTOFFERMÆNGDE

(mg/brønd) REAKTIONER/ENZYMERNEGATIVE POSITIVE

ONPG 2-nitrofenyl-ßD-galaktopyranosid 0.223

ß-galaktosidase(Ortho-NitroFenyl-ßD-Galaktopyranosidase)

farveløs gul (1)

ADH L-arginin 1.9 Arginin DiHydrolase gul rød / orange (2)

LDC L-lysin 1.9 Lysin DeCarboxylase gul rød / orange (2)

ODC L-ornitin 1.9 Ornitin DeCarboxylase gul rød / orange (2)

CIT trinatriumcitrat 0.756 CITratudnyttelse lysegrøn / gul blågrøn / blå (3)

H2S natriumthiosulfat 0.075 H2S produktion farveløs / grålig sort aflejring / tynd stribe

URE urea 0.76 UREase gul rød / orange (2)

TDA / umiddelbarTDA L-tryptofan 0.38 Tryptofan DeAminase gul rødbrun

JAMES / umiddelbar

IND L-tryptofan 0.19 INDol produktion farveløs lysegrøn / gul lyserød

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP natriumpyruvat 1.9 acetoindannelse(Voges-Proskauer) farveløs lyserød / rød (5)

GEL Gelatine(okse-oprindelse) 0.6 GELatinase ingen diffusion diffusion af sort pigment

GLU D-glukose 1.9 fermentation / oxidation (GLUkose) (4) blå / blågrøn gul / grågul

MAN D-mannitol 1.9 fermentation / oxidation (MANnitol) (4) blå / blågrøn gul

INO inositol 1.9 fermentation / oxidation (INOsitol) (4) blå / blågrøn gul

SOR D-sorbitol 1.9 fermentation / oxidation (SORbitol) (4) blå / blågrøn gul

RHA L-rhamnose 1.9 fermentation / oxidation (RHAmnose) (4) blå / blågrøn gul

SAC D-sucrose 1.9 fermentation / oxidation (SACcharose) (4) blå / blågrøn gul

MEL D-melibiose 1.9 fermentation / oxidation (MELibiose) (4) blå / blågrøn gul

AMY amygdalin 0.57 fermentation / oxidation (AMYgdalin) (4) blå / blågrøn gul

ARA L-arabinose 1.9 fermentation / oxidation (ARAbinose) (4) blå / blågrøn gul

OX (se indlægsseddel for oxidase-test) cytochrom-OXidase (se indlægsseddel for oxidase-test)

(1) En meget lys gul skal også betragtes som positiv. (2) En orange farve efter 36-48 timers inkubation skal betragtes som negativ. (3) Aflæsning foretaget i brønden (aerob). (4) Fermentation starter i den nederste del af rørene, oxidation starter i brønden. (5) En let lyserød farve efter 10 minutter skal betragtes som negativ. • De angivne mængder kan justeres, afhængigt af titeren for de anvendte råmaterialer. • Visse brønde indeholder produkter af animalsk oprindelse, specielt peptoner.

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Trykt i Frankrig Logoet er et registreret og beskyttet varemærke tilhørende bioMérieux SA eller et af dettes datterselskaber.

SUPPLERENDE TESTS

RESULTATERTESTS AKTIVE

INDHOLDSSTOFFERMÆNGDE(mg/brønd)

REAKTIONER/ENZYMERNEGATIVE POSITIVE

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 min.NO2 produktion gul rød

kaliumnitrat 0.076Zn / 5 min

Nitrat-reduktionGLU-rør

reduktion til N2 gas orange-rød gul

MOB API M Medium eller mikroskop - motilitet ikke-motil motil

McC MacConkey medium - vækst findes ikke findes

OF-F

OF-Oglukose (API OF Medium)

-

-

fermentation : under mineralsk olieoxidation : udsat for luft

grøn

grøn

gul

gul

PROCEDURE p. I IDENTIFIKATIONSTABEL p. II BIBLIOGRAFI p. IV SYMBOLFORTEGNELSE p. V

bioMérieux® SA Polski - 1

REF 20 100 / 20 160 07584E - PL - 2004/05

® 20 EZestaw do identyfikacji Enterobacteriaceae i innych pa eczek Gram-ujemnych o niewysokich wymaganiach od ywczych

WPROWADZENIE API 20 E jest wystandaryzowanym zestawem do identyfikacji Enterobacteriaceae i innych ma owymagaj cych pa eczek Gram-ujemnych, który stanowi21 zminiaturyzowane testy biochemiczne i baza danych. Pe na lista organizmów, które mo na zidentyfikowa przy u yciu tego systemu jest podana na ko cu niniejszej instrukcji w Tabeli Identyfikacyjnej.

ZASADA DZIA ANIA Paski API 20 E sk adaj si z 20 mikroprobówek zawieraj cych odwodnione substraty. Testy te snape niane zawiesinami bakteryjnymi, co odtwarza pod o a. Procesy metaboliczne zachodz ce podczas inkubacji powoduj zmiany koloru, które s albo spontaniczne, lub wywo ane przez dodanie odczynników. Po odczytaniu reakcji wed ug Tabeli Odczytów, otrzymuje si identyfikacj przez porównanie z Ksi k Kodów lub stosuj c program komputerowy.

ZAWARTO ZESTAWU Zestaw na 25 testów (ref. 20 100) - 25 pasków API 20 E - 25 komór inkubacyjnych - 25 kart wyników - 1 zacisk zamykaj cy - 1 instrukcja

Zestaw na 100 testów (ref. 20 160) - 100 pasków API 20 E (4x25 pasków) - 100 komór inkubacyjnych - 100 kart wyników - 1 zacisk zamykaj cy - 1 instrukcja

SK AD PASKA Sk ad paska API 20 E podano w tej instrukcji w Tabeli Odczytów.

WYPOSA ENIE WYMAGANE NIE NALE CE DO ZESTAWU Odczynniki : - API NaCl 0.85 % Medium, 5 ml (Ref. 20 230) lub

API Suspension Medium, 5 ml (Ref. 20 150) - API 20 E reagent kit (Ref. 20 120) lub

pojedyncze odczynniki : TDA (Ref. 70 402) JAMES (Ref. 70 542) VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Ref. 70 442)

- Odczynnik Zn (Ref. 70 380) - Oksydaza (Ref. 55 635*)

* produkt nie sprzedawany w niektórych krajach: u ywa równowa nego odczynnika.

- Olej mineralny (Ref. 70 100) - Ksi ka Kodów dla API 20 E (Ref. 20 190) lub

oprogramowanie komputerowe do identifikacji (skontaktuj si z bioMérieux)

Materia y : - Pipety lub PSIpety - Os ona na ampu k- Statyw do ampu ek- Wyposa enie zazwyczaj stosowane w laboratorium

mikrobiologicznym

EWENTUALNE DODATKOWE ODCZYNNIKI: - API OF Medium (Ref. 50 110) :

Test do okre lania metabolizmu fermentacyjnego lub oksydacyjnego.

- API M Medium (Ref. 50 120) : Test do oznaczania ruchu bakterii wzgl dnie beztlenowych.

RODKI OSTRO NO CI• Do diagnostyki in vitro i kontroli mikrobiologicznej. • Do wykorzystania wy cznie przez profesjonalistów. • Produkt zawiera materia y pochodzenia zwierz cego.

wiadectwo pochodzenia i/lub stanu sanitarnego zwierz t nie gwarantuje w pe ni nieobecno ci czynników chorobotwórczych. Dlatego nale y obchodzi si z nim zgodnie z zasadami post powania z materia em potencjalnie zaka nym (nie spo ywa i nie wdycha ).

• Wszystkie próbki pobrane od pacjentów, hodowle bakteryjne i wykorzystane produkty s potencjalnie zaka ne i powinny by traktowane zgodnie z zalecanymi rodkami ostro no ci. Nale y stosowa techniki

aseptyczne i zwyk e procedury obowi zuj ce przy pracy ze szczepami bakteryjnymi zgodnie z "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline – Bie ca wersja". Dodatkowe rodki ostro no ci zawarte s w "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Ostatnie wydanie", lub regulowane przepisami w a ciwymi dla poszczególnych pa stw.

• Nie u ywa odczynników przeterminowanych. • Przed u yciem sprawdzi , czy opakowania

poszczególnych sk adników s nienaruszone. • Nie u ywa pasków uszkodzonych : odkszta cone

studzienki, otwarty rodek odwadniaj cy, itd. • W celu osi gni cia odpowiednich wyników nale y

stosowa procedur zawart w opakowaniu. Ka da modyfikacja procedury mo e wp ywa na wyniki.

• W interpretacji wyników testu nale y wzi pod uwaghistori choroby pacjenta, miejsce pobrania materia u,makro- i mikroskopow morfologi oraz je li b dzie konieczne, wyniki innych przeprowadzonych testów, szczególnie lekowra liwo ci.

IVD

api® 20 E 07584E - PL - 2004/05


PRZECHOWYWANIE Paski s dostarczane w aluminiowych opakowaniach ze rodkiem odwadniaj cym. Raz otwarte (*) opakowanie powinno by zamykane przy u yciu zacisku (zawartego w zestawie), aby zabezpieczypozosta e paski wraz ze rodkiem odwadniaj cym: umie ci otwarte ko ce opakowania wzd u zacisku i dok adnie zamkn mi dzy jego dwiema cz ciami. Po otwarciu opakowania paski mog byprzechowywane do 10 miesi cy, w 2-8°C (lub do up yni cia daty wa no ci oznaczonej na opakowaniu, je liprzypada ona wcze niej). (*) Zalecany sposób otwierania opakowa : obciopakowanie tu poni ej miejsca zamkni cia trzymaj c je pionowo, aby unikn uszkodzenia rodkaodwadniaj cego.

MATERIA DO BADA (POBIERANIE I OPRACOWANIE) Paski API 20 E nie s przeznaczone do bezpo rednich bada materia u klinicznego lub innych próbek. Identyfikowany mikroorganizm musi by najpierw wyizolowany na pod o ach hodowlanych dostosowanych dla Enterobacteriaceae i/lub niewymagaj cych Gram-ujemnych pa eczek, zgodnie ze standardowymi technikami mikrobiologicznymi.

SPOSÓB WYKONANIA Test na oksydaz :Test na oksydaz nale y wykona zgodnie z instrukcjw nim zawart . Wynik nale y zanotowa na karcie wyników, poniewa stanowi on integraln czostatecznego profilu (21 test identyfikacyjny). Przygotowanie paska • Przygotowa komor inkubacyjn (podstawk

i pokrywk ) i nanie oko o 5 ml destylowanej lub demineralizowanej wody [lub jakiejkolwiek wody bez dodatków lub zwi zków chemicznych, z których mogwydziela si gazy (np. Cl2, CO2, itd.)] na podstawkw kszta cie plastra miodu, w celu wytworzenia komory wilgotnej.

• Zanotowa numer szczepu na wyd u onej cz cipodstawki. (Nie notowa numeru na pokrywce, poniewa mo e ona ulec zamianie w trakcie bada )

• Wyj pasek z opakowania. • Umie ci pasek w komorze inkubacyjnej. UWAGA: API 20 E nale y stosowa tylko dla Enterobacteriaceae i/lub niewybrednych pa eczek Gram-ujemnych. Organizmy o du ych potrzebach od ywczych i wymagaj ce odpowiednich rodków ostro no ci w post powaniu z nimi (np. Brucella oraz Francisella), nie s w czone do bazy danych API 20 E. W celu potwierdzenia lub wykluczenia ich obecno ci muszzosta zastosowane alternatywne metody. Przygotowanie inokulum • Otworzy ampu k API NaCl 0.85 % Medium (5 ml) lub

ampu k API Suspension Medium (5 ml) w sposób opisany w paragrafie " rodki ostro no ci" w instrukcji dla tego produktu, lub u y jak kolwiek probówkzawieraj c 5 ml ja owej soli fizjologicznej lub ja owej wody destylowanej, bez dodatków.

• U ywaj c pipety lub PSIpety pobra pojedyncz , dobrze wyizolowan koloni z p ytki. Zaleca si u ywanie m odych hodowli (18-24 godzinnych).

• Ostro nie rozetrze w celu osi gni cia jednorodnej zawiesiny. Zawiesin t u y natychmiast po sporz dzeniu.

UWAGA: wi kszo gatunków Vibrio jest halofilnych. Je li zachodzi podejrzenie otrzymania Vibrio nale ysporz dzi zawiesin w API NaCl 0.85 % Medium.

Nape nianie paska• U ywaj c tej samej pipety, nape ni zawiesin

bakteryjn zarówno probówk jak i wg bienie mikroprobówki dla testów CIT , VP i GEL .

• Nape ni wy cznie probówki (bez wg bie pozosta ych testów.

• Wytworzy warunki beztlenowe w testach ADH, LDC,ODC, H2S i URE poprzez naniesienie oleju mineralnego.

• Zamkn komor inkubacyjn .• Inkubowa w 36°C ± 2°C przez 18-24 godziny.

ODCZYT I INTERPRETACJA Odczyt paska • Po inkubacji odczyta pasek korzystaj c z Tabeli

Odczytu. • Je li 3 lub wi cej testów (test GLU + lub –) jest

pozytywnych, zanotowa wyniki wszystkich reakcji spontanicznych na karcie wyników, nast pnie odczytatesty wymagaj ce dodania odczynników: - Test TDA : doda 1 kropl odczynnika TDA.

Czerwono-br zowy kolor wskazuje na reakcjpozytywn , co nale y wpisa do karty wyników.

- Test IND : doda 1 kropl odczynnika JAMES. Ró owy kolor powstaj cy w ca ej probówce wskazuje na reakcj pozytywn , co nale y wpisa do karty wyników.

- Test VP: doda po 1 kropli z ka dego odczynnika VP 1 i VP 2. Odczeka przynajmniej 10 minut. Ró owy lub czerwony kolor wskazuje na reakcjpozytywn , Je li po 10 minutach pojawi si blado ró owy kolor, reakcj nale y uzna za negatywn .

UWAGA : Test na indol nale y wykona na ko cu, poniewa w jego trakcie dochodzi do wytworzenia produktów gazowych, które wp ywaj na interpretacjinnych testów na pasku. Plastikowa pokrywka inkubacyjna nie powinna by podnoszona po dodaniu odczynnika.

• Je eli liczba pozytywnych testów przed dodaniem odczynników (w czaj c w to test GLU) jest mniejsza ni 3: - Przed u y inkubacj paska o dalsze 24 godziny

(± 2 godziny) bez dodania odczynników. - Odczyta testy wymagaj ce dodania odczynników

(patrz poprzedni paragraf). - W celu uzupe nienia identyfikacji, mo e by konieczne

przeprowadzenie dodatkowych testów (zgodnie z paragrafem identyfikacji).

Interpretacja Identyfikacj otrzymuje si z profilu numerycznego.• Okre lanie profilu numerycznego:

Na karcie wyników testy podzielone s na grupy po 3, ka dy odpowiednio o warto ci 1, 2 lub 4. Przez dodanie do siebie warto ci odpowiadaj cych pozytywnym reakcjom w obr bie ka dej grupy otrzymuje si 7 cyfrowy profil numeryczny dla 20 testów wyst puj cych na pasku API 20 E. Reakcja oksydazy stanowi 21 test i ma warto 4, je li jest pozytywna.

• Identyfikacja: Uzyskuje si j u ywaj c bazy danych (V4.0) * z Ksi ki Kodowej: - Odszuka w a ciwy profil numeryczny na li cie

profili.* z oprogramowania komputerowego: - Wprowadzi 7 cyfrowy profil numeryczny manualnie

przy u yciu klawiatury.

api® 20 E 07584E - PL - 2004/05


W niektórych przypadkach 7 cyfrowy profil nie jest wystarczaj co charakterystyczny i nale y przeprowadzinast puj ce testy uzupe niaj ce:- Redukcja azotanów do azotynów (NO2) i gazowego N2

(N2):doda po 1 kropli z ka dego odczynnika NIT 1 i NIT 2 do probówki GLU. Odczeka 2 do 5 minut. Czerwonykolor wskazuje na reakcj pozytywn (NO2). Reakcja negatywna ( ó ty) mo e by spowodowana redukcj do azotu (co czasami jest uwidocznione przez p cherzyki gazu): doda 2 do 3 mg odczynnika Zn do probówki GLU. Po 5 minutach, je li probówka pozostaje ó tawskazuje to na reakcj pozytywn (N2), co nale yzanotowa w karcie wyników. Je eli pojawia si kolor pomara czowo-czerwony jest to wynik negatywny:azotany nadal wyst puj ce w probówce zosta yzredukowane przez cynk. Reakcja jest u yteczna w badaniu Gram-ujemnych, oksydazododatnich pa eczek.

UWAGA : Dla takich samych powodów jak test na indol (patrz uwaga w paragrafie "Odczyt paska"), test redukcji azotanów musi by przeprowadzony jako ostatni.

- Ruchliwo (MOB) : Posia ampu k API M Medium (zapozna si z instrukcj ).

- Wzrost na pod o u agar MacConkey’a (McC): Posiap ytk z agarem MacConkey’a (zapozna siz instrukcj ).

- Utlenianie glukozy (OF-O): Posia ampu k API OF Medium (zapozna si z instrukcj ).

- Fermentacja glukozy (OF-F): Posia ampu k API OF Medium (zapozna si z instrukcj ).

Te uzupe niaj ce testy wskazane w sekcji Ksi ki Kodów, mog by u yte do utworzenia 9 cyfrowego profilu. Identyfikacj mo na wtedy otrzyma stosuj c wy cznie oprogramowanie komputerowe.

5 315 173 (57) Enterobacter gergoviaeDalsze testy mog by proponowane w przypadku s abego rozró nienia zgodnie z oprogramowaniem komputerowym lub Ksi k Kodów.

KONTROLA JAKO CIPod o a, paski i odczynniki s systematycznie poddawane kontroli jako ci na ró nym poziomie procesu produkcji. Dla tych u ytkowników, którzy chc prowadzi swoj w asn kontrol pasków zaleca si szczep wzorcowy 1. Escherichia coli ATCC 25922 lub jeden z nast puj cych szczepów:





1. + – + + – – – – + – – + + – + + – + – + + – 2. + – V – V – – – – – + – – – – – – – – – – – 3. + + – + + – – – – + – + + – + + + + + + + – 4. – – – + V + + + – – V + – – – – V – – – + – 5. + – + – + – V – – V – + + + + + + + + + + –

* Wynik N2 (+) mo na zaobserwowa dla szczepów ATCC 13047 i ATCC 25922. • Profil otrzymywany po 24-48 godzinach inkubacji dla szczepu ATCC 51331, u ywaj c kolonii wyros ych na agarze tryptozowo-

sojowym z krwi .• Profil otrzymywany po 18-24 godzinach inkubacji dla pozosta ych szczepów, u ywaj c kolonii wyros ych na agarze tryptozowo-

sojowym z krwi .• Zawiesina bakteryjna przygotowywana w API NaCl 0.85 % Medium. U ytkownik jest zobowi zany do prowadzenia kontroli jako ci zgodnie z lokalnymi przepisami.

OGRANICZENIA METODY • System API 20 E s u y jedynie do identyfikacji

Enterobacteriaceae i tych niewymagaj cych pa eczek, Gram-ujemnych, które znajduj si w bazie danych (patrz Tabela Identyfikacyjna na ko cu instrukcji). Nie mo e by u ywany do identyfikacji innych mikroorganizmów lub wykluczania ich obecno ci.

• Mog by obserwowane rozbie no ci w odniesieniu do metod konwencjonalnych, spowodowane ró nicami w przebiegu reakcji zastosowanych w technice API. W dodatku, substraty mog ró ni si procentowzawarto ci .

• Reakcje z glukoz dla takich organizmów jak Klebsiella lub Proteus mog rzadko ulec odwróceniu z pozytywnej do negatywnej, co uwidacznia si jako niebieskawo-zielony kolor. Taka reakcja mo e byzapisana jako negatywna. W tym wypadku nale yzastanowi si nad procentowym wska nikiem w Tabeli Identyfikacyjnej.

• Identyfikacja Salmonella lub Shigella musi bypotwierdzona testami serologicznymi.

• Niefermentuj ce pa eczki gram-ujemne, wyizolowane od pacjentów z mukowiscydoz , mog dawa atypowe profile biochemiczne, co ma wp yw na identyfikacj .

• Nale y u ywa tylko czysto wyizolowanych bakterii.

ZAKRES SPODZIEWANYCH WYNIKÓW W Tabeli Identyfikacyjnej na ko cu instrukcji sprawdzizakres spodziewanych wyników dla ró nych testów biochemicznych.

OCENA TESTU • Enterobacteriaceae :

Przebadano 5514 szczepów, z kolekcji i ró nych róde ,nale cych do gatunków zawartych w bazie danych: - 92.80 % szczepów prawid owo zidentyfikowano

(z lub bez testów uzupe niaj cych). - 4.61 % szczepów nie zidentyfikowano. - 2.59 % zosta o nieprawid owo zidentyfikowanych.

api® 20 E 07584E - PL - 2004/05


• Inne niewymagaj ce Gram-ujemne pa eczki: Przebadano 2386 szczepów, z kolekcji i ró nych róde ,nale cych do gatunków zawartych w bazie danych: - 90.32 % szczepów zidentyfikowano prawid owo

(z lub bez testów uzupe niaj cych). - 6.16 % szczepów nie zidentyfikowano. - 3.52 % szczepów zidentyfikowano nieprawid owo.

POST POWANIE ZE ZU YTYMI TESTAMI Zu ytych i niezu ytych odczynników, jak równiezanieczyszczonych sprz tów jadnorazowych, nale ypozbywa si zgodnie z procedurami dla materia ów zaka nych lub potencjalnie zaka nych. Obowi zkiem ka dego laboratorium jest pozbywanie sizu ytych testów i wytworzonych cieków w zale no ci od typu i stopnia zabezpieczenia laboratorium oraz dezynfekowa je i usuwa (zleci dezynfekcj i usuwanie) zgodnie z zatwierdzonymi procedurami.

TABELA ODCZYTÓW

WYNIKITEST AKTYWNE

SK ADNIKIST ENIE

(mg/probówka) REAKCJE/ENZYMYNEGATYWNY POZYTYWNY

ONPG 2-nitrofenylo-ßD-galaktopiranozyd 0.223

ß-galaktozydaza (orto nitrofenylo-ßD-galaktopiranozyd)

bezbarwny ó ty (1)

ADH L-arginina 1.9 dihydrolaza argininy ó ty czerwony / pomara czowy (2)

LDC L-lizyna 1.9 dekarbosylaza lizyny ó ty czerwony / pomara czowy (2)

ODC L-ornityna 1.9 dekarbosylaza ornityny ó ty czerwony / pomara czowy (2)

CIT cytrynian trisodowy 0.756 wykorzystanie cytrynianu jasno szary / ó ty niebiesko-zielony / niebieski (3)

H2S tiosiarczan sodowy 0.075 wytwarzanie H2S bezbarwny / szarawy czarny osad / rozp yni ta linia

URE mocznik 0.76 ureaza ó ty czerwony / pomara czowy (2)

TDA / natychmiastTDA L-tryptofan 0.38 dezaminaza tryptofanu ó ty czerwono-br zowy

JAMES / natychmiast

IND L-tryptofan 0.19 wytwarzanie indolu bezbarwny jasno zielony / ó ty ró owy

VP 1 + VP 2 / 10 min

VP pirogronian sodu 1.9 wytwarzanie acetoiny (Voges Proskauer) bezbarwny ró owy / czerwony (5)

GEL elatyna (wo owa) 0.6 elatynaza brak dyfuzji dyfuzja czarnego

pigmentu

GLU D-glukoza 1.9 fermentacja / utlenianie (glukoza) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty / szaro- ó ty

MAN D-mannitol 1.9 fermentacja / utlenianie (mannitol) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

INO inozytol 1.9 fermentacja / utlenianie (inozytol) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

SOR D-sorbitol 1.9 fermentacja / utlenianie (sorbitol) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

RHA L-ramnoza 1.9 fermentacja / utlenianie (ramnoza) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

SAC D-sacharoza 1.9 fermentacja / utlenianie (sacharoza) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

MEL D-melibioza 1.9 fermentacja / utlenianie (melibioza) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

AMY amigdalina 0.57 fermentacja / utlenianie (amigdalina) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

ARA L-arabinoza 1.9 fermentacja / utlenianie (arabinoza) (4) niebieski / niebiesko-zielony ó ty

OX (przeczyta instrukcj do testu oksydazy) oksydaza cytochromowa (przeczyta instrukcj do testu oksydazy)

(1) Nawet bardzo blady ó ty kolor nale y rozpatrywa jako pozytywny. (2) Pomara czowy kolor po 36-48 godzinach inkubacji nale y uwa a za negatywny. (3) Odczytu dokona we wg bieniu (warunki tlenowe). (4) Fermentacja zachodzi w najni szej cz ci probówki, utlenianie we wg bieniu.(5) S abo ró owy kolor po 10 minutach nale y uwa a za negatywny. • Wskazane st enia mog by regulowane w zale no ci od miana u ytego surowego materia u.• Niektóre mikroprobówki zawieraj produkty pochodzenia zwierz cego,zw aszcza peptony.

api® 20 E 07584E - PL - 2004/05



Wydrukowano we Francji

Logo jest znakiem towarowym zastrze onym dla bioMérieux SA lub jednego z przedstawicielstw.

TESTY UZUPE NIAJ CE

WYNIKTEST AKTYWNY SK ADNIK ST ENIE

(mg/probówka)REAKCJE/ENZYMY

NEGATYWNY POZYTYWNY

NIT 1 + NIT 2 / 2-5 minwytwarzanie NO2 ó ty czerwony

azotan potasu 0.076 Zn / 5 min

Redukcjaazotanów probówka

GLU redukcja do gazowego N2 pomara czowo-czerwony ó ty

MOB API M Medium lub badanie mikroskopowe - ruchliwo brak ruchu ruch

McC pod o e MacConkey - wzrost brak obecno

OF-F

OF-O

Glukoza(API OF Medium)

-

-

fermentacja : pod olejem mineralnym utlenianie : ekspozycja na powietrze

zielony

zielony

ó ty

ó ty

METODYKA str. I TABELA IDENTYFIKACYJNA str. II PI MIENNICTWO str. IVTABELA SYMBOLI str. V

bioMérieux® SA I

api® 20 E 07584E - XL - 2004/05

METHODOLOGIE / PROCEDURE / METHODIK / TECNICA / PROCEDIMENTO / / METOD / METODYKA

OX

API NaCl 0.85 % Medium 5 ml / API Suspension Medium 5 ml

1 colonie / 1 colony / 1 Kolonie / 1 colonia / 1 colónia / 1 /1 koloni / 1 kolonia

api 20 E

- | CIT | - | VP | - | GEL |

ADH ODC H2S - URE

18:00-24:00 / 48:0036°C

±2°C

Tests ⊕ < 3 (y compris / including /

einschließlich / incluído / compreso / incluindo /

µ µ / inklusive /inklusiv / w czaj c test GLU)

api 20 E

api 20 E

TDA : TDA IND : JAMES VP : VP 1 + VP 2

GLU (NO2) : NIT 1 + NIT 2 (+Zn)

+ - + - + -

api® 20 E 07584E - XL - 2004/05

bioMérieux® SA II

TABLEAU D'IDENTIFICATION / IDENTIFICATION TABLE / PROZENTTABELLE / TABLA DE IDENTIFICACION / TABELLA DI IDENTIFICAZIONE / QUADRO DE IDENTIFICAÇÃO / IDENTIFIKATIONSTABEL / IDENTIFIERINGSTABELL / TABELA IDENTYFIKACYJNA

% de réactions positives après 18-24 / 48 h à 36°C ± 2°C / % of positive reactions after 18-24 / 48 hrs. at 36°C ± 2°C / % der positiven Reaktionen nach 18-24 / 48 Std. bei 36°C ± 2°C / % de las reacciones positivas después de 18-24 / 48 H a 36°C ± 2°C / % di reazioni positive dopo 18-24 / 48 ore a 36°C ± 2°C / % de reacções positivas após 18-24 / 48 h a 36º C ± 2º C /

% µ 18-24 / 48 36°C ± 2°C / % positiva reaktioner efter 18-24 / 48 timmar vid 36°C ± 2°C / % af positive reaktioner efter 18-24 / 48 timer ved 36°C ± 2°C / % pozytywnych reakcji po 18-24 / 48 godzinach w 36°C ± 2°C

API 20 E V4.0 ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX NO2 N2 MOB McC OF/O OF/F Buttiauxella agrestis 100 0 0 85 25 0 0 0 0 0 0 100 100 0 1 99 0 92 99 100 0 100 0 100 100 100 100Cedecea davisae 99 89 0 99 75 0 0 0 0 89 0 100 100 10 0 0 100 0 100 1 0 99 0 87 100 100 100Cedecea lapagei 99 99 0 0 75 0 0 0 0 90 0 100 99 0 0 0 0 1 100 1 0 99 0 87 100 100 100Citrobacter braakii 50 45 0 99 75 81 1 0 4 0 0 100 100 1 100 100 1 91 99 99 0 100 0 95 100 100 100Citrobacter freundii 90 24 0 0 75 75 1 0 1 0 0 100 99 25 99 99 99 82 40 99 0 98 0 95 100 100 100Citrobacter koseri/amalonaticus 99 75 0 100 97 0 1 0 99 0 0 100 100 25 99 99 1 1 98 99 0 100 0 95 100 100 100Citrobacter koseri/farmeri 99 2 0 100 25 0 1 0 99 0 0 100 100 1 99 99 99 80 99 99 0 100 0 95 100 100 100Citrobacter youngae 100 50 0 1 80 80 0 0 1 0 0 100 100 0 95 100 1 0 25 100 0 85 0 95 100 100 100Edwardsiella hoshinae 0 0 100 99 50 94 0 0 99 0 0 100 100 0 0 1 100 0 0 1 0 100 0 100 100 100 100Edwardsiella tarda 0 0 100 99 1 75 0 0 99 0 0 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 100 0 98 100 100 100Enterobacter aerogenes 99 0 99 98 82 0 1 0 0 85 0 99 99 99 99 99 99 99 99 99 0 100 0 97 100 100 100Enterobacter amnigenus 1 99 25 0 99 40 0 0 0 0 75 0 100 100 0 1 100 99 99 99 99 0 100 0 92 100 100 100Enterobacter amnigenus 2 99 80 0 99 80 0 0 0 0 75 0 100 100 0 99 100 1 99 99 99 0 100 0 100 100 100 100Enterobacter asburiae 100 25 0 99 80 0 0 0 0 10 0 100 99 25 100 0 99 0 100 100 0 100 0 95 100 100 100Enterobacter cancerogenus 100 75 0 99 99 0 0 0 0 89 0 100 100 0 1 100 1 1 100 100 0 100 0 99 100 100 100Enterobacter cloacae 98 82 1 92 90 0 1 0 0 85 0 99 99 12 90 85 96 90 99 99 0 100 0 95 100 100 100Enterobacter gergoviae 99 0 32 100 75 0 99 0 0 90 0 100 99 23 1 100 99 100 99 100 0 100 0 90 100 100 100Enterobacter intermedius 99 0 0 99 1 0 0 0 0 2 0 100 97 0 88 99 40 100 99 99 0 100 0 92 100 100 100Enterobacter sakazakii 100 96 0 91 94 0 1 0 25 91 10 100 100 75 8 99 99 99 99 99 0 100 0 96 100 100 100Escherichia coli 1 90 1 74 70 0 1 3 0 89 0 0 99 98 1 91 82 36 75 3 99 0 100 0 95 100 100 100Escherichia coli 2 26 1 45 20 0 1 1 0 50 0 0 99 90 1 42 30 3 3 1 70 0 98 0 5 100 100 100Escherichia fergusonii 96 1 99 100 1 0 0 0 99 0 0 100 99 1 0 87 0 1 99 99 0 100 0 93 100 100 100Escherichia hermannii 100 0 1 100 1 0 0 0 99 0 0 100 100 0 0 99 25 0 99 99 0 100 0 99 100 100 100Escherichia vulneris 100 30 50 0 0 0 0 0 0 0 0 100 100 0 1 95 7 95 95 99 0 100 0 100 100 100 100Ewingella americana 98 0 0 0 75 0 0 0 0 95 1 99 99 0 0 1 0 1 50 1 0 100 0 60 100 100 100Hafnia alvei 1 75 0 99 98 50 0 10 0 0 50 0 99 99 0 1 99 0 0 25 99 0 100 0 85 100 100 100Hafnia alvei 2 50 0 99 99 1 0 1 0 0 10 0 99 98 0 1 1 1 0 0 1 0 100 0 0 100 100 100Klebsiella ornithinolytica 100 0 99 99 99 0 85 0 100 65 0 100 100 99 100 100 100 100 100 100 0 100 0 0 100 100 100Klebsiella oxytoca 99 0 80 0 89 0 78 0 99 80 0 100 100 99 100 99 99 100 100 100 0 100 0 0 100 100 100Klebsiella pneumoniae ssp ozaenae 94 18 25 1 18 0 1 0 0 1 0 99 96 57 66 58 20 80 97 85 0 92 0 0 100 100 100Klebsiella pneumoniae ssp pneumoniae 99 0 73 0 86 0 75 0 0 90 0 100 99 99 99 99 99 99 99 99 0 100 0 0 100 100 100Klebsiella pneumoniae ssp rhinoscleromatis 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 99 100 90 90 75 75 1 99 10 0 100 0 0 100 100 100Klebsiella terrigena 100 0 99 6 52 0 0 0 0 75 0 99 99 99 99 99 100 100 100 99 0 100 0 0 100 100 100Kluyvera spp 95 0 25 99 60 0 0 0 80 0 0 100 99 0 25 93 89 99 99 99 0 95 0 94 100 100 100Leclercia adecarboxylata 99 0 0 0 0 0 1 0 99 0 1 100 99 0 2 100 66 99 99 100 0 100 0 100 100 100 100Moellerella wisconsensis 97 0 0 0 40 0 0 0 15 1 0 100 1 0 0 0 100 99 0 0 0 90 0 0 100 100 100Morganella morganii 1 0 10 98 1 1 99 93 99 0 0 99 0 0 0 0 1 0 0 0 0 88 0 95 100 100 100Pantoea spp 1 85 1 0 0 13 0 1 0 1 9 1 100 99 1 26 1 98 26 59 61 0 85 0 85 100 100 100Pantoea spp 2 99 1 0 0 99 0 1 0 53 62 4 100 99 36 82 90 98 81 99 99 0 85 0 85 100 100 100Pantoea spp 3 99 1 0 0 21 0 1 0 1 86 15 100 99 34 1 97 93 23 65 97 0 85 0 85 100 100 100Pantoea spp 4 86 1 0 0 29 0 1 0 59 1 1 99 100 10 32 99 72 89 99 99 0 85 0 85 100 100 100Proteus mirabilis 1 0 0 99 50 75 99 98 1 1 82 98 0 0 0 0 1 0 0 0 0 93 0 95 100 100 100Proteus penneri 1 0 0 0 1 20 100 99 0 0 50 99 0 0 0 0 100 0 1 0 0 99 0 85 100 100 100Proteus vulgaris 1 0 0 0 12 83 99 99 92 0 74 99 1 1 0 1 89 0 66 1 0 100 0 94 100 100 100Providencia alcalifaciens/rustigianii 0 0 0 0 80 0 0 100 99 0 0 99 1 1 0 0 1 0 0 1 0 100 0 96 100 100 100Providencia rettgeri 1 1 0 0 74 0 99 99 90 0 0 98 82 78 1 50 25 0 40 1 0 98 0 94 100 100 100Providencia stuartii 1 0 0 0 85 0 30 98 95 0 0 98 3 80 0 0 15 0 0 0 0 100 0 85 100 100 100Rahnella aquatilis 100 0 0 0 50 0 0 1 0 99 0 100 100 0 98 99 100 97 100 98 0 100 0 6 100 100 100Salmonella arizonae 98 75 97 98 75 99 0 0 1 0 0 100 99 0 99 99 1 78 0 99 0 100 0 99 100 100 100Salmonella choleraesuis 0 15 99 99 6 64 0 0 0 0 0 100 99 0 98 99 0 20 0 0 0 100 0 95 100 100 100Salmonella gallinarum 0 1 100 1 0 25 0 0 0 0 0 100 100 0 0 1 0 0 0 100 0 100 0 0 100 100 100

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bioMérieux® SA III

API 20 E V4.0 ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX NO2 N2 MOB McC OF/O OF/F Salmonella paratyphi A 0 5 0 99 0 1 0 0 0 0 0 100 99 0 99 98 0 96 0 99 0 100 0 95 100 100 100Salmonella pullorum 0 1 75 100 0 85 0 0 0 0 0 100 100 0 0 100 0 0 0 75 0 100 0 0 100 100 100Salmonella typhi 0 1 99 0 0 8 0 0 0 0 0 100 99 0 99 0 0 99 0 0 0 100 0 97 100 100 100Salmonella spp 1 56 82 93 65 83 0 0 1 0 1 99 100 40 99 86 1 90 1 99 1 100 0 95 100 100 100Serratia ficaria 99 0 0 0 100 0 0 0 0 40 90 100 100 50 99 74 99 99 100 99 0 92 0 100 100 100 100Serratia fonticola 99 0 73 99 75 0 0 0 0 0 0 100 100 97 100 99 30 99 99 99 0 99 0 91 100 100 100Serratia liquefaciens 95 1 78 98 80 0 2 0 0 59 65 100 99 80 98 2 99 72 97 97 0 100 0 95 100 100 100Serratia marcescens 94 0 95 95 96 0 25 0 1 70 87 100 99 85 98 1 99 68 97 25 0 95 0 97 100 100 100Serratia odorifera 1 95 0 95 99 95 0 0 0 99 50 99 100 99 99 99 99 99 99 99 99 0 99 0 100 100 100 100Serratia odorifera 2 95 0 96 1 95 0 0 0 99 50 99 100 99 99 99 99 1 99 99 95 0 99 0 100 100 100 100Serratia plymuthica 99 0 0 0 65 0 0 0 0 65 50 100 90 70 70 1 99 85 98 98 0 99 0 50 100 100 100Serratia rubidaea 99 0 30 0 92 0 1 0 0 71 82 99 99 75 1 3 99 95 99 99 0 100 0 85 100 100 100Shigella spp 1 0 0 1 0 0 0 0 29 0 0 99 63 0 7 7 1 20 0 50 0 100 0 0 100 100 100Shigella sonnei 96 0 0 93 0 0 0 0 0 0 0 99 99 0 1 75 1 1 0 99 0 100 0 0 100 100 100Yersinia enterocolitica 80 0 0 90 0 0 98 0 50 5 0 99 99 25 98 1 99 4 75 75 0 98 0 2 100 100 100Yersinia frederiksenii/intermedia 99 0 0 75 1 0 99 0 99 1 0 100 99 25 99 99 99 1 99 99 0 98 0 5 100 100 100Yersinia kristensenii 80 0 0 80 0 0 99 0 97 0 0 100 99 10 99 0 0 0 99 99 0 98 0 5 100 100 100Yersinia pestis 68 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 99 99 0 70 0 0 0 30 30 0 47 0 0 99 100 100Yersinia pseudotuberculosis 98 0 0 0 1 0 99 0 0 0 0 99 97 0 0 75 0 50 25 50 0 95 0 0 100 100 100Aeromonas hydrophila gr. 1 98 90 25 1 25 0 0 0 85 25 90 99 99 1 3 5 97 1 75 75 100 97 0 95 99 99 99Aeromonas hydrophila gr. 2 99 97 80 1 80 0 0 0 85 80 97 97 99 9 9 1 80 1 75 5 100 97 0 95 99 99 99Aeromonas salmonicida ssp salmonicida 1 60 1 0 0 0 0 0 1 0 75 50 54 0 0 0 0 0 1 0 100 98 0 1 99 99 99Photobacterium damsela 1 99 75 0 1 0 98 0 0 10 1 50 0 0 0 0 1 0 0 0 100 100 0 25 99 99 99Plesiomonas shigelloides 95 99 100 100 0 0 0 0 100 0 0 99 0 99 0 0 0 0 0 0 100 99 0 95 99 99 99Vibrio alginolyticus 0 0 98 75 60 0 1 0 100 10 75 99 100 0 1 0 100 0 10 1 100 47 0 100 99 94 94Vibrio cholerae 98 1 94 97 75 0 0 0 99 58 92 98 98 0 0 0 94 0 5 0 100 96 0 100 96 99 99Vibrio fluvialis 95 99 0 0 1 0 0 0 80 0 75 75 80 0 1 0 75 0 36 75 100 100 0 100 99 99 99Vibrio hollisae 1 0 0 0 0 0 0 0 94 0 0 10 0 0 0 0 0 0 0 0 100 100 0 0 99 99 99Vibrio mimicus 99 0 99 99 50 0 0 0 99 1 99 99 99 0 0 0 0 0 0 0 100 95 0 100 95 99 99Vibrio parahaemolyticus 0 0 100 99 50 0 1 0 100 1 75 100 99 0 0 1 1 0 12 50 100 63 0 100 98 99 99Vibrio vulnificus 99 0 91 90 25 0 0 0 99 1 99 99 75 0 0 0 1 0 90 0 99 54 0 100 99 99 99Pasteurella aerogenes 99 0 0 80 0 0 99 0 0 0 0 99 0 97 0 1 99 0 0 75 75 100 0 0 100 100 100Pasteurella multocida 1 4 0 0 25 0 0 0 0 99 0 0 29 1 0 1 0 75 0 0 0 99 90 0 0 2 23 23 Pasteurella multocida 2 7 0 0 45 0 0 0 0 99 0 0 44 99 0 99 0 99 0 0 0 89 90 0 0 2 23 23 Pasteurella pneumotropica/haemolytica 60 0 1 10 0 0 25 0 15 7 3 35 12 12 12 1 35 1 2 1 80 99 0 0 9 33 33Acinetobacter baumannii/calcoaceticus 0 0 0 0 51 0 1 0 0 5 5 99 0 0 0 0 0 99 1 99 0 3 0 0 90 98 0Bordetella/Alcaligenes/Moraxella spp * 0 0 0 0 52 0 14 1 0 25 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 95 62 1 75 75 0 0 Burkholderia cepacia 50 0 25 16 78 0 0 0 0 1 43 60 1 0 0 0 13 0 7 20 90 40 0 99 88 97 0Chromobacterium violaceum 0 99 0 0 75 0 0 0 14 0 99 99 0 0 0 0 10 0 0 0 99 75 0 99 99 99 99Chryseomonas luteola 86 75 0 0 94 0 0 0 0 25 13 84 0 1 0 1 1 15 1 85 0 30 0 100 91 94 0Chryseobacterium indologenes 5 0 0 0 12 0 90 0 75 0 80 0 0 0 0 0 0 0 0 0 99 20 0 0 57 90 10Chryseobacterium meningosepticum 77 0 0 0 20 0 1 0 85 0 90 0 0 0 0 0 0 0 0 0 99 6 0 0 48 93 6Eikenella corrodens 0 0 75 99 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 100 95 0 1 1 49 49Flavimonas oryzihabitans 0 0 0 0 89 0 0 0 0 25 1 10 0 1 0 1 0 10 0 45 0 7 0 100 99 99 0Myroides /Chryseobacterium indologenes 0 0 0 0 50 0 75 0 0 1 75 0 0 0 0 0 0 0 0 0 99 0 0 0 84 2 2 Ochrobactrum anthropi 15 0 0 0 30 0 25 1 0 15 0 1 0 0 0 0 0 0 0 10 90 42 60 99 99 47 0Pseudomonas aeruginosa 0 89 0 0 92 0 25 0 0 1 75 50 0 0 0 0 1 10 1 25 97 12 56 97 100 98 0Pseudomonas fluorescens/putida 0 75 0 0 75 0 0 0 0 10 27 25 0 0 0 0 0 25 1 20 99 26 0 100 96 93 0Non-fermenter spp 1 1 0 0 37 0 1 0 0 15 9 9 0 0 0 1 1 1 1 1 93 48 35 99 85 49 0Shewanella putrefaciens 0 0 0 80 75 75 1 0 0 0 75 1 0 0 0 0 1 0 0 2 99 96 0 100 96 9 0 Stenotrophomonas maltophilia 70 0 75 1 75 1 0 0 0 0 90 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 26 1 100 91 49 0

* Brucella spp possible / möglich / posible / possibile / possível / / möjlig / mulig / Mo liwo .

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BIBLIOGRAPHIE / LITERATURE REFERENCES / LITERATUR / BIBLIOGRAFIA / / REFERENSLITTERATUR / LITTERATURHENVISNINGER /

PISMIENNICTWO

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Le logo est une marque déposée et protégée qui est la propriété exclusive de bioMérieux SA ou de l’une de ses filialesThe logo is a registered and protected trademark of bioMérieux SA or one of its subsidiaries Das Logo ist eine eingetragene und geschützte Marke von bioMérieux SA oder einer ihrer Filialen El logo es una marca registrada y protegida, propiedad exclusiva de bioMérieux SA o de cada una de sus filiales Il logo è un marchio depositato e protetto di proprietà esclusiva di bioMérieux SA o di una delle sue filiali O logotipo é uma marca registada e protegida, propriedade exclusiva da bioMérieux SA ou de uma das suas filiais

µ µ µ µ bioMérieux SA µLogotypen är ett registrerat och skyddat varumärke för bioMérieux SA eller ett av dess dotterbolag Logoet er et registreret og beskyttet varemærke tilhørende bioMérieux SA eller et af dettes datterselskaber Logo jest znakiem towarowym zastrze onym dla bioMérieux SA lub jednego z przedstawicielstw

TABLE DES SYMBOLES / INDEX OF SYMBOLS / SYMBOLE / CUADRO DE SIMBOLOS / TABELLA DEI SIMBOLI / QUADRO DOS SÍMBOLOS /

/ SYMBOLER / SYMBOLFORTEGNELSE /TABELA SYMBOLI

Symbole / Symbol / Simbolo / Símbolo /

µ

Signification / Meaning / Bedeutung / Significado / Significato / / Betydelse /

Betydning / Znaczenie

REF / Référence du catalogue / Catalog number / Bestellnummer / Número de catálogo / Numero di catalogo / Referência de catálogo /

µ / Artikelnummer / Katalognummer / Numer katalogowy

Dispositif medical de diagnostic in vitro / In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnostikum / Producto sanitario para diagnóstico in vitro / Dispositivo medico-diagnostico in vitro / Dispositivo médico para diagnóstico in vitro / In Vitro

/ Medicinsk utrustning för in vitro-diagnostik / Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik / Urz dzenie medyczne do diagnostyki in vitro

Fabricant / Manufacturer / Hersteller / Fabricante / Fabbricante / Fabricante / / Tillverkad av /Producent / Producent

Limites de température / Temperature limitation / Zulässiger Temperaturbereich / Limite de temperatura / Limiti di temperatura / Limites de temperatura /

µ µ / Temperaturgräns / Temperaturbegrænsning / Przechowywa w temperaturze

Utiliser jusque / Use by / Verwendbar bis / Fecha de caducidad / Utilizzare entro / Prazo de validade / µ µ /Används före / Holdbar til / Zu y do

Code du lot / Batch code / Chargenbezeichnung / Codigo de lote / Codice del lotto / Código do lote / µ / Batchnummer / Lotnummer / Numer serii

Consulter les instructions d'utilisation / Consult Instructions for Use / Gebrauchsanweisung beachten / Consulte las instrucciones de uso / Consultare le istruzioni per l’uso / Consulte as instruções de utilização / µ /Se användarinstruktionerna / Se brugsanvisning / Odnie si do instrukcji u ycia

ΣContenu suffisant pour "n" tests / Contains sufficient for <n> tests /Ausreichend für "n" Ansätze / Contenido suficiente para <n> ensayos/ Contenuto sufficiente per "n" saggi / Conteúdo suficiente para “n” ensaios / µ « » /Innehållet räcker till <n> tester / Indeholder tilstrækkeligt til "n" test / Zawarto wystarczy do wykonania <n> oznacze

IVD

LOT

REF

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REF 20 100 / 20 160