Rôle des lipides dans le fonctionnement des chaînes de transport d'électrons de microsomes de Pomme de terre

BIOCHIMIE, 1978, 60, 767-775.

R61e des lipides dans le fonctionnement des chaines de transport d'dlectrons de microsomes de Pomme de terre.

Alain JOLLIOT ~, Chantal DEMAN,DRE et Paul MAZLIA,K.

(/~-~-1978).

L a b o r a t o i r e de P h y s i o l o g i e Ce l lu la i re , z~ p l a c e J u s s i e u - T.53.~3. E3, E .R .A . n ° 323, U n i v e r s i t ~ P i e r r e el Mar ie Cur ie , 75230 Par i s C e d e x 05 ( F r a n c e ) .

R dsum~.

Le traitement des membranes microsomales isol6es du tubercule de Pomme de terre par des solutions ac6toniques de plus en plus concen- tr6es (5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 70 et 90 p. cent) entralne l 'extraction progressive des lipides membrana i r e s : les concentrat ions ac6toniques sup6rieures & 30 p. cent entralnent de c.rrandes quantit6s de phospholipides membranai res . Corr6lativement, on observe une diminution de l 'activit6 NADH-cytochrome c r~ luc tase , alors que los activit6s des NADH-ferricyanure et NADPH-cytochrome c r6ductases ne sont pas sensiblement modifi6es. Le traitement des membranes microsomales pa r des concentrat ions crolssantes de d6soxycholate de sodium con- firme que l 'aclivit6 NADH-cytochrome c r6duc- tase est diminu6e par l 'extraction des lipides membranai res , alors que l 'activit6 NADH-ferricyanure r6ductase ne l 'est pas.

L'addition de quantit6s var iables de lipides d 'origines diverses so i t& des m e m b r a n e s d61i- pid6es par des solutions ac6toniques & 50 ou 90 p. cent, soit & des fractions microsomales solubilis6es par le triton X100, ne permet pas de restaurer l 'activit6 de la NADH-cytochrome c r6ductase.

Ces r6sultats sucjg&rent fortement clue dans le tubercule de Pomme de terre, les lipides sont n6cessaires au bon fonctionnement de la chalne microsomale de transport des 61ectrons par tant du NADH, non pas dans la r6qion de la flavoprot6ine, mais darts le cha lnon situ6 en aval . Par contre, la deuxi&me chalne microsomale de transpor~ des 61ectrons (partant du NADPH et faisant intervenir le cy tochrome P450) n'est pas r6qul6e par la pr6sence de lipides.

To whom all correspondence should be addressed.

S u m m a r y .

Microsomal membranes from potato tubers were extracted by acetone solutions of increas- ing concentrations (5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 70

I00

o ' ,~ " 2~) 3"0 4'o 5'0 7"0 7. a c e t o n o

Fro. 3. - - Ef fec ts of acelonic t reatments upon the phosphol ip id content and the NADH-eytochrome e reduetase, NADH-ferr icyanide reductase and NADPH- cytochrorne e reductase actioities of potato mierosomes.

I1--11 phospholipid content (per mg of protein). O--D NADH-eytoehrome e reduetase activity (per

mg of protein). (3--0 NA,D,H-ferrieyanide reductase activity (per mg

of protein). 0--@ NAI)PH-eytoehrome e reduetase aetivity (per

mg of protein). All measured values were adjusted to 100 for 0 per

cent acetone (Tris-HCJ buffer) treatment. Standard deviations are given for eaeh point, representing the average of two different experiments,

768 A. Jo l l io t el coll .

and 90 p. cent). Microsomal lipids were progres- sively extracted : acetone concentrations excee- ding 30 p. cent extracted large amounts of membraneous phospholipids (figure). Lipid extraction reduced NADH-cytochrome c reductase activity but did not affect NADH-ferricya- nide reductase and NADPH-cytochrome c reductase activities. This was confirmed by experiments using increasinq concentrations of sodium deoxycholate.

After lipid extraction with acetone (or solubi- lization by triton X100), NADH-cytochrome c reductase activity of microsomal membranes could not be recovered by adding back lipids under various experimental conditions.

These results strongly suggest that, in pota- to microsomes, lipids are undispensable com-

ponents of the electron transport chain stcrrtincJ from NADH, especially in the portion involving cytochrome b5. On the contrary, the second[ microsomal electron transport chain, starting from NADPH, is not regulated by lipids. However, plant microsomal membranes would be much more disturbed by lipid extraction than animal microsomes and suitable relipidation conditions remain to be found to prove definitely the lipid dependence of plant microsomal electron transport.

Mots-el6s : lipid - electron transport -plant mierosomes.

Introduct ion.

L ' in t e rven t ion des l ip ides , et plus sp6,cialement des phospho l ip ides , dans la r6gula t ion de cer ta ines act ivi t6s enzymat iques mic,rosomales a 6t6 trbs t6t soupgonn6e. Dbs 1954, Beaufay et de Duve [1] 6tu- d ibrent les effets de d ivers t ra i t ements p a r l '6 ther de p6trole, le tg t rach lo rure de carbone, le n-buta- nol, la phospho l ipase C ou le d6soxychola te de sod ium sur l 'act ivi t6 glucose 6-phosphatase de microsomes de foie de Rat. Ils t rouvbren t que tous ces t ra i t ements af fa ib l issa ient les l iens un issan t les p h o s p h o l i p i d e s aux cons t i tuants prot6iques de l 'enzyme. Mats bien que la d61ipidat ion des mic rosomes p a r les solvants organiques en t ra in fit une per te d 'ac t iv i t6 quas i -p ropor t ionne l l e fi la quanti t6 de l ip ides extrai ts , la r eeombina i son des f rac t ions membranes d61ipid6es et l ip ides ne r6g6n6rait pas l ' ac t iv i t6 enzymat ique .

NADH, > flavoprot~ine ~cytochrome b 5, I I

i z 1 i

ferricyanure cytochrome c

Depuis 1963, de nombreux t r avaux ont d6montr6 avec cer t i tude le r6te des phospho l ip ide s dans all- verses activit6s enzymat iques li6es aux membra - nes mic rosomales (pour une revue d6taill6e, voir Fou rcans et .rain [2]). Les cond i t ions d ' une tel le d6mons t ra t ion furent clai .rement 6.nonc6es pa r F l e i s che r et al. [3] : a) l ' ex t rac t ion des l ip ides m e m b r a n a i r e s doi t s ' a ccompagne r d 'une d iminu- t ion de l 'a 'ctivit6 enzymat iqne consid,6r6e ; b) on doit pouvo i r ob ten i r une corr61ation ent re la res- t au ra t ion de l ' ac t iv i t6 enzymat ique et la quanti t6 de l ip ides ajout6e aux membranes p r6a l ab l emen t d61ipid6es.

Le rSle des l ip ides dans le fonc t ionnement des deux chaines mic rosomales de t r anspo r t des 61ec- t rons a 6t6 bien 6tudi6. Rappelons que ces chaines c o m p r e n n e n t les 616ments suivants :

acyl CoA d~saturase---->O 2 )2 H20

NADPH )flavoprot~ine

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8.

cytochrome P450

$ cytochrome c

> 02 ~ 2 H20

(~) accepteurs artificiels

Rdle des lipides duns les transferts d'dleclrons microsomaux.

L ' i n t e r v e n t i o n des l i p ide s , et en p a r t i c u l i e r des p h o s p h o l i p i d e s , clans le f o n c t i o n n e m e n t de la c h a l n e de t r a n s p o r t des 61ec t rons p a r t a n t d u N A D H a 6t6 c l a i r e m e n t d ,6mont r6e p a r les 6 q u i p e s de D a l l n e r [4, 5], J o n e s [~ h 9] et Ozak i [ 1 ~ . L ' a c - t iv i t6 NAY)~H-cytochrome c r6 .duciase (EC 1.6.2.2) p e r d u e a p r b s u n t r a i t e m e n t de m e m b r a n e s m i c r o - s o m a l e s de foie de Ra t p a r u n e s o l u t i o n a c 6 t o n i q u e h 90 p. c e n t p e u t 6 t re r e s t a u r 6 e p a r l ' a d d i t i o n de l i p i d e s m i c r o s o m a u x de m 6 m e o r i g i n e , p a r des p h o s p h o ] i p i d e s n a t u r e l s ou de s y n t h ~ s e , a i n s i que p a r l ' a s o l e c t i n e (m6.1ange de p h o s p h o l i p i d e s ex- t r a i t s du S.oja). P a r c o n t r e , l ' a c t i v i t 6 N A D H - f e r r i - c y a n u r e r 6 d u c t a s e n ' e s t a b s o l u m e n t p a s m o d i f i 6 e h la su i t e d ' u n te l t v a i t e m e n t a c 6 t o n i q u e [6 h 8]. Ceci d 6 m o n t r e que les l i p i d e s s o n t n 6 c e s s a i r e s p o u r le t r a n s f e r t des 61ec t rons du N.ADH au cy to- c h r o m e c n o n p a s d u n s la r 6 g i o n de la f l a v o p r o - t6in.e, m a t s d a n s le c h a i n o n s i tu6 e n aval .

I~a d ,euxi~me chain .e de t r a n s p o r t des 61ec i rons ( p a r t a n t d u N A D P H et f a i s a n t i n t e r v e n i r le ey to - c h r o m e P#50) n e s e m b l e pus 6 t re sous la d 6 p e n - d a n c e des l i p i d e s p o n r u n f o n c t i o n n e m e n t op t i - m u m [6, 7] ; e n effet, l ' a c t i v i t 6 NAD~PH-cytochro- m e c r6 .ductase n ' e s t p a s mod i f i 6e h la su i t e du t . r a i i e m e n t d e m i c r o s o m e s de fo ie d e R a t p a r u n e s o l u t i o n a c 6 t o n i q u e h 90 p. c en t .

T o u t e s ces 6 t u d e s on t p o r t 6 s u r des m e m b r a - ne s m i e r o s o m a l e s d ' o r i g i n e a n i m a l e . I1 6 ta i t d o n e i n t 6 r e s s a n t de s a v o i r si ces r .6sul tats p o u v a i e n t ~tre ~ t e n d u s h des m e m b r a n e s d ' o r i g i n e v6g~ta le qu i g 6 n 6 r a l e m e n t r e n f e r m e n t des l i p i d e s p l u s in - s a t u r 6 s que les m i c r o s o m e s d ' o r i g i n e a n i m a l e . D a n s ce bu t , d eux m b t h o d e s d i f f ~ r e n t e s de d61i- p i d a t i o n o n t 6t6 u t i l i s6e s : a c t i o n de s o l u t i o n s a c 6 t o n i q u e s de c o n c e n t r a t i o n s c r o i s s a n t e s et so lu- b i . l i sa l ion p a r u n d ,6 tergent , 'le T r i t o n X~0 o.

Mat6riel et M6thodes exp6rimentales.

Les Potatoes de te r re util is6es (Solanum tuberosum L., oaridtd Bintje) p rovena ien t du C.E.R.D.I.A. (Massy, France) .

Obtention de la fraction microsomale. La f rac t ion microsomalc a fit6 obtenue seton la

m6thode pr6e6demment d6crite [11~. Le mil ieu de broyage utilis6 avai t la composi t ion suivante : sucrose 0,~ M, acide 6 thyl6ne-diamine- t6 t raac~t ique 1 m M, s6 rum-a tbumine de B cetff 1 g/l , eh lorhydra te de cys- t~ine 4 m M, t a m p o n Tris-IffC1 pH 7,2 0,1 M. Le mi l ieu de lavage avai t la m~me composi t ion que le mi l ieu de broyagc except6e la c~¢st6ine. Une premi6re centr i fu- gat ion est r6alisSe h 12,5(}0 g pendan t 10 m u ; le sur- nagean t est de nouveau cemr~fag~ h la m6me vitesse pendan t 20~ nan. Le sn rnagean t ainsi ob tenu est ensui te centrifug6 h 109000, g pendan t 60 ran. Le culot microsomal est repris et homog6ndis6 dans du mil ieu de lavage, puts recentr ifug6 dans les m~mes condi t ions ;

BIOCttlMIE, 1978, 60, n ° 8.

769

ce dern ie r culot microsomal est remis en suspension dans du t a m p o n Tris-tICl 20 m M pH 7,2,

Traitement de la fraction microsomale par des solutions acdtoniques de plus en plus concentrdes ou par da tampon Tris-HCl.

A I ml de la f rac t ion microsomale ( repr6sentant de 2,0 h 30 mg de prot6ines) sont ajout~s 31 mt de diffd- rentes solut ions d'ae~tone duns le t ampon Tris-H(;1 20 m M pH 7,2, relies que les concent ra t ions finales soient ~gales h 5, 10, 15, 21), 30, 40, 50, 70 et 91) p. cent ou bien 31 ml de t ampon . Les suspensions microso- mates sont agit~es doucement pendan t 10 mn, puts eentr ifug~es h 1000ff1) g pendan t 50 mn. Les su rnagean t s sont alors 6cart6s ~ et les eulots so igneusement lav6s et homog6n6isds dans 32 ml de t a m p o n Tris-HG1 21) m M pH 7,2. Une nouvel tc een t r i fuga t ion de 51) m n h 100000' g permet d ' ob ten i r des eulots qni, une lois remis en suspens ion dans le t a m p o n pr6c~dent, cons t i tuen t les f rac t ions mierosomales que nous appel lerons frac- t ions t rai tdes pa r les solut ions acbtoniques h 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 70 et 90 p. cent ou pa r le t a m p o n Tris- ttC1.

Traitement des fractions microsomales ddlipiddcs (acdtone 50 p. cent) ca non dglipiddes (tampon Tris- HCl) par le ddsoxycholate,

Des quant i t6s var iab les de d6soxycholate (telles que les concent ra t ions finales soient dgales h 0,005, 0,0~0, 0,050, 0,100 et 0,25~} p. cent) sont ajout~es d i rec tement h une suspens ion mierosomale trai tSe pa r le t ampon Tris-HC1 ou pa r l 'ac~tone h 50 p. cent ( respect ivement 20 et 100 Fxg de prot6ines microsomales pour les mestlres des aetivit~s N&DH-cytoehrcme c r6ductase et NADH-ferr icyanure r~duetase). Les m~langes (de volume tota l 6gal ~ 0,3 mll sont agit6s pendan t 20 secondes, puts laiss6s darts un ba in mar ie h la tempe- r a tu re de 4- 26°C pendan t 5 ran. Les rdactions enzymat iques sont e n s u r e mesur6es d i rec tement sur les m~langes. Un t6moin, qui sert de r6f~rence, est t ra i t6 dans les m~mes condit ions, le d~tergent 6 tant remplac6 par un volume 6quivalent de t ampon Tris-HC1.

Traitemenl de la fraction microsomale par le Triton XIO0. Du Tr i ton Xl0o (h la concen t ra t ion finale de 0,1 p.

cent) est a jout6 h une suspension microsomale (20 h 30 mg de prot~ines pa r ml) ; la suspension est agit6e pendan t 20 seeondes, puts eentr ifug6e 1 h h 10~)000 g. Le su rnagean t est so igneusement pr61ev6 h la pipet te ; les aetivit6s enzymat iques sont mesur6es d i rec tement sur lc surnageant .

Mesurc des activitds enzymatiques. L'activit~ de la NA, DH-ferr icyanure r6ductase est

mesur~e selon la t echnique de Lee el al. [12], les activit~s des NAD~- et NA~DPH-cytochrome c r6ductase selon la t echnique de Hacket t et al. [13]. Les activit6s enzymat iques sont routes mesur6es h + 25°G pa r dif- f6rence ent re la cure exp~rimentale et une cuve de r6f~renee ; eette derni6re eont ient tous les r6actifs n6cessaires ~ la r6action, except6 le subs t ra t (et, dans le cas de la NADH-ferr ieyanure r6duetase, le ferr icyanure) et, s.elon les cas, le d~tergent e t / ou les l iposomes. Cc dern ie r po in t est i m p o r t a n t car nous avons pu cons- t a t e r qu 'h 550 rim, la densit6 opt ique d 'un m~lange cytochrome c et l iposomes a u g m e n t a i t de faqon r6gu- li~re, ce ph~nom~ne cor rcspondan t en fair non /~ une rgduct ion du cytochrome c, mats h une diffusion accrue de lumi6rc p a r los l iposomes.

Les prot~ines microsomales ont 6t~ dos6es pa r la mgthode de Lowry et at. [14], le phosphore phospho-

770 A. Jol l io t et coil.

l ipidique par la m6thode de Shibuya et al. [15] et les aeides gras par la m~thode de M~etealfe et al. [16]. Les phospholipides ont 6t6 sdpar6s par chromatographic sur eouehe mince de ge4 de sil~ce par la technique de Tr~moli~res et Lepage [17].

Traitements de relipidation. Les lipides utilis6s pour ees exp6rienees sont extraits

de tissu entier, de mierosomes de Pomme de terre on de foie de Rat par la m~thode de Bligh et Dyer [18]. Les phospholipides sont s6pal, dS des autres categories l ipidiques par passage de l 'extrai t lipiffique total sur une eolonne d'aeide silicique (100 mesh) selon la mdthode de Vorbeck et Marinetti [19]. E~vapords ~. sec, les lipides sont ensuite dispersSs dons une solution de Tris-HC1 .9'0 raM, pH 8,0 eontenant de t 'aeide ~thy~6ne- diamine-t6traae~tique 1 mM. par un double t rai tement aux ultrasons de 16 mn sous courant d'azote (d~sintd- grateur M.S.E. n ° 7.1.00). Une centrifugation d'une heure h 100000 g permet d'61iminer les lipides non dis- pers6s ; le surnageant est recueilli h la pipette et est utilis~ sans autre t rai tement.

Les conditions de relipidation, variables selon les manipulations, sont d6crites dans, le texte.

R f s u l t a t s .

La f r a c t i o n m i c r o s o m a l e t 6moin n o n t r a i t6e pr6- sen te de b o n n e s ac t iv i t6s e n z y m a t i q u e s : l ' ac t iv i t6 N A D H - f e r r i c y a n u r e r6duc t a se va r i e de 1,0 1,4 ~moles de f e r r i c y a n u r e r6du i t × mn-~ × mg-I p ro t6 ines , l ' ac t iv i t6 NA,DH-cy toch rome c r6duc t a se de 90 h 160 nmoles de c y t o c h r o m e c r6du i t × mn-~ × mg-1 'prot6 ines et l 'activit .6 N,A,DP~H-cytochrome c r6duc t a se de 2 ~ 7 nmolcs de c y t o c h r o m e c r6du i t × mn-a × m g ~ pro t~ ines . Ces va l eu r s sont en bon a c c o r d avec cel les m e n t i o n n 6 e s p a r d ' au- t res au teurs sur des m i c r o s o m e s d ' o r i g i n e v6gSthle [20 h 22]. Nous avons 6ga l emen t v6rifi6 que la f rac-

t i on m i c r o s o m a l e ne p r6 sen t a i t pas d ' a c t i v i t 6 suc- c i n a t e - c y t o c h r o m e c r6duc t a se et que l ' a c t iv i t6

N & D H - c y t o c h r o m e c r6duc t a se 6tait b i e n insens i - ble h l ' a n t i m y c i n e A e t au c y a n u r e .

E F F E T S DES TRAITEMENTS DE LA FRACTION M I C R O S O -

MALE PAR DE~ S O L U T I O N S AC~TONIQUES DE, PLUS EN

PLUS CONCENTR~,ES :

Dans le but d 'extra i , re des quan t i t6s c ro i s s an t e s de l ip ides , nous avons t ra i t~ la f r a c t i o n m i c r o s o - m a l e p a r des so lu t ions ac~ ton iques h 5, 10, 15, 20, 3:0, 40, 50; 70 et 90 p. cent . Un t r a i t e m e n t paral l61e oh la so lu t ion ac6 ton ique est r e m p l a c ~ e p a r une quan t i t6 6 q u i v a l e n t e de t a m p o n Tris-HC1 nous ser t de t6moin .

Le t a b l e a u I r e g r o u p e les r6sul ta ts p r o v e n a n t d ' u n e e x p 6 r i e n c e pr6sen t6e h t i t r e d ' e x e m p l e . Les t e n e u r s en l i p ide s p e u v e n t p r 6 s e n t e r des 6car ts h la m o y e n n e de +__ 18 p. cen t au m a x i m u m d ' u n e e x p 6 r i e n c e h l ' au t re . Nous i n d i q u o n s dans la f igure 3 c i -dessous les d6v ia t ions s t a n d a r d ca lcu- 16es su r les r6sul ta t s de d e u x s6ries d ' e x p 6 r i e n c e s . N~ous p o u v o n s o b s e r v e r que les t r a i t e m e n t s acdto- n i q u e s e n t r a i n e n t , p a r r a p p o r t h un t r a i t e m e n t i d e n t i q u e p a r le t a m p o n Tr i s .HCl , une pe,rte non n6g l igeab le de p ro t6 ines , c r o i s s a n t au fu r et h me- sure qu ' aug rnen te la t e n e u r en ace tone . Les rap- po r t s ac ides g r a s / p r o t ~ i n e s et p h o s p h o l i p i d e s / p r o - t6 ines ne sont pas s e n s i b l e m e n t modif i6s h la sui te de t r a i t e m e n t s p a r de fa ib les c o n c e n t r a t i o n s ac6- t o n i q u e s (de 5 h 2.0 p. cent) ; i ls d 6 c r o i s s e n i p o u r des c o n c e n t r a t i o n s p lus 61ev6es et apr6s u n e ex- t r a c t i o n p a r un m~lange h 90 p. cen t d ' ac~ tone , en- v i r o n 85 p. cen t des ac ides gras et 80 p. cen t des p h o s p h o l i p i d e s son t en lev6s des m e m b r a n e s .

Le t r a i t e m e n t ,des m i c r o s o m e s p a r les so lu t ions ac6 ton iques de 5 h 50 p. cen t ne mod i f i e pas la c o m p o s i t i o n en ac ides gras des l i p ides m i c r o s o - m a u x (figure 1). P a r con t re , les so lu t ions ac~ioni -

TABLEAU I. Effets des traitements d'une fraction microsomale de Pomme de terre (correspon-

dant fi 9,8 g de tissu frais) par des solutions ac~toniques de plus en plus concentrdes : pertes de protdines, d'acides gras on de phospholipides.

Traitement mg prot6ines/ mg aeides gras/ ~g aeides gras/ mg phospholi- 0Lg phospholipi- eulot eulot mg prot6ines pides/culot des/mg protdines

Ti'is-HC1 2.40 (100) 1,40 (100) 583 (100) 1,19 (100) 406 (100) Ac6tone 5 p. cent 2,31 (96) 1,34 (96) 583 (100) 1,08 (60) 466 (94) Ae6tnne 10 p. cent 2,33 (97) 1,32 (94) 565 (97) 1,15 (96) 491 (99) Ac(!tone 15 p. cent 2.28 (95) 1.32 (94) 579 (99) 1,11 (93) 485 (98) Acetone 20 p. cent 2,26 ~94) 1,31 (94) 582 (100) 1,02 (86) 452 (91) Acetone 30 p. cent 2,07 (80) 1,16 (83) 560 (96) 0,83 ~70) 400 (81) Ac6tone 50 p. cent 2,07 (86) 1,06 (76) 513 (88) 0,63 (53) 304 (61) Ac6tone 70 p. cent 2,13 (89) 0,52 (37) 245 (42) 0,36 (30) 168 (34) Acetone 90 p. cent 1,82 (76) 0,16 (12) 91 (16) 0,18 (15) 10,3 (20)

Les valeurs entre parenth6ses sont caleul6es: en prenant eomme base 100 eoneernant la fraction microsomale trait6e par le tampon Tria-HG1,

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8,

les r~sultats

R61e des lipides dans les transferts d'dlectrons microsomaux. 771

ques h 710 et 90 p. c e n t e x t r a i e n t p r 6 f 6 r e n t i e l l e m e n t l ' a c i d e l i no l6 ique (,C~8:2) don t les p r o p o r t i o n s re la - t ives t o m b e n t de 53 p. c e n t des ac ides gras tota,ux duns les m e m b r a n e s non d61 ip id&s h 32 p. cen t potw les m e m b r a n e s t ra i t6es h l ' ac6 tone h 90 p. cent . Cor r61a t ivement , on obse rve une a u g m e n t a -

t ion des p o u r c e n t a g e s des ac ides gras sa tur6s en ClC , et Cls dans les l i p ides d e m e u r a n t li6s aux m e m b r a n e s . Ceci s ignif ie que les so lu t ions ac6to- n iques f o r t e m e n t c o n c e n t r 6 e s n ' e x t r a i e n t pas de fa~on 6gale t o u s l e s l ip ides m i c r o s o m a u x , les p lus sa tur6s 6tant r e l a t i v e m e n t m o i n s en t r a ln6s que les l i p ide s tr~s insa tur6s .

l . . . . . . .

• • ,&

so, - \ o

o ~ 2s: - . o "o o o

~b 2"o 3"0 s'o ~'o e'o"' t~ ac~toRe

Fx6. 1. - - Effets des traitements d'une fraction microsomale de Pomme de terre par des solutions acdtoniques de plus en plus concentrdes sur les proportions relatives des diffdrents aeides gras demeurant lids aux membranes.

0---(3 C~6 A - - A C~s:2 @-~I, C~8 Zk--A C~. :s C]--[3 C ~ : =

100,

~ gO,

o. N

ta tJ r~

D o o

I o . 0 5 10 15 20 30 --E'0 7

~o " a c e t o n e

FzG. 2. ~ Effets des traitements d'une fraction microsomale de Pomme de terre par des solutions ae~toniques de plus en plus concentrdes sur les proportions relatives des diffdrents phospholipides demeurant lids a u x membranes.

[3--~ phosphatidyleholine. O- -Q phosphatidyl6bhanolamine. O - - 0 phosphatidylinositol .

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8.

100- _1©

50.

O ' 10 ' 20 30 #~0 50 70 7. a c e t o n e

FIG, 3. - - Effets des traitements d'une fraction microsomale de Pomme de terrc par des solutions acdtoniques de plus en plus concentrdes sur la teneur en phospholipides et sur les actioitds NADH-cgtochrome c rdductasc, NADH-ferricyanure rdductase el NADPH- cgtochrome e rdduetase. Les points sont les, moyeanes de r~sultats obtenus dans deux s6ries d'essais diff6- rents ; les barres indiquent les d~viations standard. Nous avons pris comme base 100 les r~sultats concer- nant la fraction microsomale t ra i t& par le tampon Tris-HC1 (D p. cent acetone).

I I - -m teneur en phospholipides (par mg de protdines).

E]--[] NA'DH-cytochrome c r~ductase (par nag de pro- t6ines).

O - - O NAI)H-ferricyanure r6ductasc (par mg de pro- t6ines).

Q - - O NA'DPH-cytochrome c r~ductase (par mg de prot~ines).

Les p r o p o r t i o n s r e l a t ives des t ro i s p h o s p h o - l i p ides m a j e u r s des m e m b r a n e s m i c r o s o m a l e s ( p h o s p h a t i d y l c h o l i n e , p h o s p h a t i d y l 6 t h a n o l a m i n e et p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l ) he son t pus modi f i6es p a r le t r a i t e m e n t de ees m e m b r a n e s p a r des so lu t ions ac6 ton iques f a i b l e m e n t e o n c e n t r 6 e s de 5 h 20 p. cen t (f igure 2). P o u r des t eneu r s p lus for tes en

772 A . J o l l i o t e t co l l .

ac6tone, la p ropor t ion relative de phosphat idyl - 6 thanolamine s'abaisse, alors qu 'augmente celle du phosphat idyl inosi tol . Ceci signifie que les solu- t ions ac6toniques for tement concentr6es extraient davantage la phospha t idy l6 thanolamine que le phosphat idyl inosi to l . La p ropor t ion relat ive de phosphat idy lchol ine reste h peu pros stable quelle que soit la concen t ra t ion de la solut ion ac6tonique.

L'activit6 NADH - cytochrome c r6ductase (figure 3) rapport~e au mi l l igramme de prot6ines augmente 16g~rement mats de facon significative 2oo

c

,so

q~ E x

7 c £

100, x

D

OI

>, 0

5 0 ,

0

C

C @

0

o-

7 O~

E x

x .0,5

Z

Q) tl.

0 E

o, o,;~2 o,~s 030 "' o,~s o D e s o x y c h o l a t e ( o ~ }

FIG. 4. - - Ef fe t s de concentrat ions croissantes de ddsoxycholate de sod ium sur les activitds NADH-ferricyanure rdductase (A) et NADH-cytochrome e r~ductase (O) de fract ions microsomales non d~lipiddes [trait6es par le tampon Tris-~C1 ( ),] ou d~lipid~es [trait6es par la solution ac6tonique & 5,0 p. cent ( . . . . . ) ] .

la suite du t ra i tement des membranes microsomales par les solutions ac6toniques fa iblement concentr6es, puts cette activit6 d iminue pour des concent ra t ions plus 61ev6es en ac6tone comprises entre 30 et 50 p. cent. En revanche, les activit6s

NADH-ferr icyanure r~ductase et NADPH-cytochrome c r6ductase ne sont paN sensiblement nio- difi~,es h la suite des t ra i tements par les solutions ac6toniques h 50 et 9,0 p. cent.

A C T I O N D U D E S O X Y C H O L A T E D E S O D I U M S U R D E S M I -

CROSOME,S T R A I T ~ : S P A R L E T A M P O N Tris-HC10U P A R

U N E S O L U T I O N A C ] ~ T O N I Q U E A 50 p . c e n t .

La figure 4 indique les effets de concent ra t ions croissantes de d6soxycholate de sodium (de 0,00,5 h 0,25,0 p. cent) sur les microsomes non 461ipides (trait6s ,par le t ampon Tris-HC1) ou d61ipid6s (par l 'ac6tone ~t 50 p. cent), ce qui permet de dis t inguer un 6ventuel effet toxique du d6tergent et les con- s6quences de l 'extract ion des l ipides membra- naires. On ne note aucune diff6rence sensible entre les deux types de microsomes en ce qui con- cerne les effets t.rbs discrets du d6tergent sur l 'act ivi t6 NADH-ferr icyanure r6ductase. Par contre, l 'activit6 NADH-cytochrome c r6ductase dimi- nue de 165 "~ 33 nmoles de cytochrome c r6dui t × mn -1 × m g -1 prot6ines lorsque l 'on traite les microsomes non d61ipid6s par du d6soxycholate h 0,05.0 p. c e n t ; dans les m6mes condi t ions, l 'acti- vii6 NADH-cytochrome c r6ductase des microsomes d61ipid6s par l 'ac6tone ~ ,50 p. cent passe seulement de 25 h 19 nmoles de cytochrome c r6duit X mn -1 × nag -I prot6,ines.

T R A I T E M E N T DES M I C R O S O M E S P A R LE T R I T O N Xlo 0 :

.Le t ra i tement de microsomes de Pomme de terre par du t r i ton Xlo o h la concent ra t ion finale de 0,1 p. cent en t ra ine une augmenta t ion de 27 p. cent de l 'activit6 de l~a NAD~-fer r icyanure r6ductase alors que dans le m6me temps, l'activit@ NADH-cytochrome c r6ductase est abaiss6e de 81 p. cent. Darts ces condi t ions, 60 p. cent de l 'activit6 NADH-ferr icyanure r6ductase et 100 p. cent de l 'activit6 NA,DH-cytochrome c r6ductase se t rouvent dans le surnageant apr6s une centr i - fugation du m6'lange microsomes et t r i ton X,o o h 100.00.0 g p e n d a n t I heure.

E F F E T S D E S T R A I T E M E N T S D E R E L , I P I D A T I O N :

a) S u r les f r a c t i o n s m i c r o s o m a l e s t ra i t~es p a r les s o l u t i o n s a c d t o n i q u e s dt 50 et 90 p. cen t .

De nombreux essais de re l ip idat ion ont 6t6 ten- t6s sur des fract ions microsomales trait,~es par les solutions ac~toniques h 90 et 50 p. cent. Des quantit~s croissantes des l ipides (sous forme de lipo- somes) sont ajout~es directement "h la suspension microsomale d61ipid6e. ,La suspension est alors agit6e doucement pendan t quelques minutes et l 'activit6 NADH-cytochrorne c r6ductase est mesu- r6e di rectement sur le m61ange. Dans ces exp6- r iences nouN avons fair yarner non seulement la

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8.

Rdle des l ip ides dans Ies t r a n s f e r t s d 'd l ec t rons m i c r o s o m a u x . 773

quant i t6 de l ip ides ajout6s, m,ais 6galement la qualit6 de ces l ip ides , en u t i l i san t p o u r f ab r ique r ces l iposomes soit des l ip ides to taux ou des phospho l ip ides pur i f i6s ext ra i t s de t issu ent ie r ou de mic rosomes de Pomme de terre , soit des l ip ides to taux ext ra i t s de mic rosomes de foie de Rat, soit encore des p h o s p h o l i p i d e s synth6t iques (d ipa lmy- t o y l p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ou d ipa lmi toy tphospha t i_ dy l6 thanolamine) . Nous avons 6galement var i6 les condi t ions d ' i ncuba t ion des membranes d61ipid6es en pr6sence des l iposomes : incuba t ions pendan t des t emps var iables , de 5 mn ~ 24 h, h diff6rentes temp6ra tures 0, 20, 25 et 40°C, h deux pH 7,2 et 8,0, en pr6sence 6ventuel lement de fai bles quant i - t6s de d6tergents (d6soxychola te de sodium ou tr i- ton Xlo o ~ 0,0,05 et 0,020 p. cent) ou de MgC½ 0,1 M. Le m61ange mic rosomes d61ipid6s et l iposomes a aussi 6t6 soumis h u n t r a i t emen t pa r les u l t rasons (de 5 h 10 secondes) , ce t r a i t emen t s '6tant av6r6 n6cessaire pour ob ten i r la r e s taura t ion de cer- ta ines act ivi t6s enzymat iques conce rnan t la cha lne de t r anspo r t des 61ectrons de mi tochond r i e s v6g6- tales [23!. Cependant , seuls des t r a i t ements de cou,rte duv6e ( inf6rieurs h 10 secondes) pourvaient 6tre appl iqu6s ca r l 'act ivi t6 de la NA'DH-cytochrome c rdductase est d iminu6e de 29 h 73 p. cent (selon l '6tat de conserva t ion du tubercule de Pomme de terre) h la suite d 'un t r a i t ement de membranes mic rosomales p a r les u l t rasons d 'une dur6e d 'une minute. Notons d ' a i l l eu r s que, dans les m6mes condi t ions , l 'act ivi t6 NADH-fer r icyanure r6ductase n 'est pas modifi,6e ou est m~me par fo is 16g6rement augment6e.

b) Sur la [ractlon microsomale solubilis~e par le tri ton Xlo o :

Nous avons r ep r i s la m6thode d6.crite pa r Gra- ham et al. [24] qui consis te h m61anger le surnageant i00 000 g X 1 h p rovenan t du t ra i t ement de la f rac t ion mic rosomale pa r du t r i ton X100 (h la concen t ra t ion finale de 0,1 p. cent) avec des l ip ides d ispers6s dans un tampon Tris-HC1 25 mM, KC1 I27 mM, pH 8,0. l ,e m61ange est mis en incuba t ion h 4 ou 25°C en pr6sence de ¢ b iobeads >> qui fixent les mo16cules de d6tergents (Hol loway [25]). A des temps d ivers (de 0 h 24 h) une pa r t i e a l iquote du m61ange est pr61ev6e (h l ' excep t ion des <~biobeads>>) et l 'act ivi t6 NADH-cytcohrome c r6.ductase mesur6c directe,men~ sur ce m61ange. Th6or iquement , un 6change se r6alise entre les mo16cules de d6te~gent li6es aux prot6ines solubi- lis6es et les mol,6cules l ip id iques .

Cette m6thode n 'a pas pe rmis de res taure r l 'act ivi t6 NA~DH-cytochrome c r6.ductase solubi- lis6e p a r le t r i ton X~00.

D i s c u s s i o n .

Pour met t re en 6vidence l ' impor t ance des l ip ides dans le fonc t ionnemen t des enzymes mem- b rana i res , nous avons uti l is6 une app roche exp6- r imenta le quelque peu diff6rente de celle pr6co- nis6.e p a r les 6quipes de Dal lner [4, 5] et Jones [6 /l 9]. Ces auteurs ont church6 h ex t ra i re d ' em- bl6e le m a x i m u m de l ip ides en u t i l i san t pour cela une solut ion acOonique /i 90 p. cent. Pour notre par t , darts le but .de b ien mon t r e r l ' ex is tence d 'une corr61ation entre la pe r t e des l ip ides mic rosomaux et la d iminu t ion des act ivi t6s enzymal iques , nous avons enlev6 les l ip ides d 'une faqon progress ive en u t i l i sant des solut ions ac6toniques de plus en plus concentr6es.

Le t r a i t emen t de la f rac t ion mic rosomale p a r les solut ions ac6toniques fa ib lement concentr6es n ' en t r a ine pas, p a r r a p p o r t ~ un t r a i t ement pa ra l - 161e p a r le t ampon Trris-HCl, de va r ia t ion sensible du r a p p o r t pond6rM phopshol ip i ,des /pro t6 ines . Dans le m6me temps, l 'act ivi t6 NADH-cytochrome c r6ductase rappor t6e au mi l l ig ramme de prot6ines est 16gbrement, mats s ignif icat ivement , augment6e (jusqu'h pr6s de 20 p. cent). Cette der- ni6re augmenta t ion ne peut pas s ' exp l ique r p a r la per te de prot6.ines 6 t rang6res / i la cha ine de t rans- fert des 61ectrons car, si r ac t iv i t6 est r appor t6e non pas au mi l l i g r amme de prot6ines, mats ~ une m6me quanti t6 in i t ia le de microsomes , on re- t rouve 6galement une augmenta t ion de cette acti- vit6 enzymat ique de 15 p. cent environ. On peut doric penser qu 'apr6s ces t r a i t ements pa r de fai- bles solut ions ac6toniques, l ' i n f r a s t ruc tu re mol6- cu la i re des membranes mic rosomales est per tur - b~e et que, ,par exemple , des prot6ines p6r iph6r i - ques se d6tachent , ce qui pou r r a i t en t r a ine r une mei l leure access ibi l i t6 des sites enzymat iques au subs t ra t ou au cy toch rome c. Un ph6nom6ne iden- t ique, quoique beaucoup ~plus impor tan t , a p a r a i l leurs 6t6 observ6 sur les activit6s glucose 6~phosphatase, g lucurony l t rans f6 rase et an i l ine p a r a - h y d r o x y l a s e de mic rosomes d ' o r i g ine ant- male [26 fi 28].

Lorsque l 'on t ra i te les membranes mic rosomales p a r des solut ions ac6toniques plus concentr6es , corr61at ivement ~ l ' ex t rac t ion des l ip ides , on observe une d iminu t ion de l 'act ivi t6 NADH-cyto- ch rome c r6ductase ; cependant , pour des concen- t ra t ions ac6toniques compr i ses entre 30 et 50 p. cent pour lesquelles 29 et 42 p. cent seulement des phospho l ip ide s m e m b r a n a i r e s sont extrai ts , on note une d iminu t ion beaucoup plus ma.rqu6e (de 0 h 83 p. cent) de l 'act ivi t6 6tudi6e. P lus ieurs hypoth6ses peuvent 6tre avanc6es pour exp l iquer cette chute bru ta le d 'ac t iv i t6 :

BIOCHIMIE, 1978, 60, n° 8.

774 A . J o l l i o t e t co l l .

a) des l ip ides pa r t i cu l i e r s situ~s autour des pro t6 ines act ives et r6gulant leur act ivi t6 sera ient plus for tement ex t ra i t s p a r la solut ion ac6tonique h 50 p. cent que les autres mol6cules l ip id iques membrana i r e s .

b) la solut ion ac6tonique h 50 p. cent pou r r a i t ex t ra i r e pr~f~,rentiel lement un l ip ide dont le com- plexe enzymat ique aura i t un besoin ~bsolu comme cela a 6t6 d6montr~ pour la 8 - h y d r o x y b u t y r a t e d~shydrog6nase de mi tochondr i e s animales [29]. Ov nous avons montr6 que les solut ions ac6toni- ques h 30 et 50 p. cent entra~naient une p r o p o r t i o n plus for te de phospha t i dy l~ thano l amine que d 'au- t res phospho l ip ides .

c) la solut ion ac6tonique p o u r r a i t r o m p r e des l ia isons exis tant ent re l ip ides et prot6 ines [$0], ce qui aba i sse ra i t l ' ac t iv i t6 enzymat ique sans pour autant en t r a lne r une per le impor t an te de l ip ides membrana i r e s .

d) un composan t pro tb ique n~cessaire h la r6ac- t ion sera i t pe rdu au t o u r s de l ' ex t r ac t ion ac~tonique ; cette dern i~re hypoth6se peut sans doute 8tre rejet6e puisque Pi t t et J.ones [9] ont montr6 qu 'apr6s un t r a i t emen t h l 'ac6tone h 9'0 ou 93,5 p. cent, le contenu de mic rosomes de foie de Mou- ton en f lavoprot~ine et en cy toch rome b~ 6tait comparab le ~ celui de mic rosomes non t r a i l , s .

On note donc une corr61ation nette entre l 'ex- t rac t ion des l ip ides membran.a i res et l~a d iminu- t ion de l 'aet ivi t~ NADH-cy tochrome c r6duct,ase. Ceite observa t ion p la ide for tement en faveur de l ' imp l i ca t ion des l ip ides dan's cett.e act ivi t6 enzymat ique.

Le t r a i t emen t de membranes mic rosomales p a r des solut ions ac6toniques h 50 et 90 p. cent ne modi f i e pas l ' ac t iv i t6 NAD,H-f~rricyanure rd.ductase. Ce de rn i e r r6sultat pe rme t d 'a f f i rmer que, comme pour les membranes mic rosomales d 'o r i - gine animale, la f lavoprot6ine n 'a pas besoin de l ip ides pour t r ans f6 re r les 61ectrons du NADH an cy toch rome b~.

.L'activit6 de la NAD,P.H-cytochrome c r6ductase n '6tant pas modif i6e p a r ces m6mes t ra i t ements de d61ipidation, nous pouvons conc lure que la deuxibme chalne de t r a n s p o r t 'des 61ectro,ns ne n.6cessite pas de l ip ides pour le t r ans fe r t des 61ec- t rons du NADPH au cy toch rome P450.

ton Xlo 0 n o u s permet ten t de con f i rmer les conclu- s ions pr6c6dentes , h savoi r que l 'act ivi t~ NADH- cytoc, h rome c r6ductase, mats non eel le de la NADH-fe r r i cyanure r6ductase, sera i t sous la d~- p e n d a n e e des l ip ides pour un fonc t ionnemen t opt imum.

Malgr6 de tr6s nombreuses tentat ives, dans les cond i t ions exp6r imenta les les plus diverses, nous n 'avons pas r6ussi ~t r e s t au re r l 'activit$ ' NADH- cy toch rome c r6ductase en ra jou tan t des l ip ides des mic rosomes d~lipid6s. Sur les m e m b r a n e s mi- c rosomales d 'o r ig ine an imale , le r61e ind i spensa - ble des l ip ides a pu 8tre d6montr6 pou r l ' ac t iv i t6 de nombreuses enzymes ; dans la p lupa r t des cas, la s imple add i t i on de l ip ides h des membranes d61ipid6es suffit pour ,restaurer pa r t i e l l emen t ou to ta lement l ' ac t iv i t6 en,zymatique consid6r6e. I1 est f r a p p a n t de cons ta te r que malgr6 l ' abondance de la l i t t&a tu re conce rnan t l ' i n t e rven t ion des l ip ides dans la r t gu l a t i on d ' enzymes de mem- b ranes animales , h not re connaissance , aucun t ra- vai l s imi la i re n 'a por t6 sur des membranes mi- c rosomales d 'o r ig ine v6g~tale. On peut s ' i n te r ro - ger sur le fai t que la r ecombina i son des l ip ides et des prot~ines m e m b r a n a i r e s d61ipid~es pe rme t de r e s t au re r fac i lement les act ivi t6s enzymat iques m e m b r a n a i r e s dans le r~gne an imal et qu 'une telle r e s taura t ion n ' a i t pu ~tre obtenue pou r des activi t6s enzymat iques in ic rosomales d 'o r ig ine v6g~tale. Les mic rosomes d 'o r ig ine vtg6ta le sera ient- i l s plus sensibles aux t r a i t ement s de d~li- p i d a t i o n que les membranes animales ? L 'exis- tence de composants sp,6cifiques aux membranes v6g6tales (comme les p igments ) suffit-il h expl i - quer cette diff6rence .9 I1 reste que, tant que les bonnes cond i t ions e~p6r imenta les pe rme t t an t la r es taura t ion des activit6s enzymat iques pe rdues apr~s un t r a i t emen t de d~l ip ida t ion n ' au ron t pas 6t6 trouv6es, notre d6mons t ra t ion du r61e indis - pensable des l ip ides dans l 'act ivi t6 de cer ta ines enzymes mic rosomales v~g~tales res tera incom- pl6te. Cependant , nos r6sultats sugg~rent fortement que, comme pour les mic rosomes d 'o r ig ine animale , les l ip ides i n t e rv i ennen t dans la cha lne de t r ans fe r t des 61ectrons pa r t a n t du NADH (dans la r~gion situ6e en aval de la f lavoprot6ine) , mats ne jouent aucun r61e dans le t r anspo r t des 61ec- t rons de la cha lne mic rosomale pa r t a n t du NAD,PH et fa isant i n t e rven i r le cy tocb rome P450.

L'ac t ion des d6tergents sur les membranes mi- c rosomales const i tue une deuxi6me vote d ' a p p r o - che pou r p r6c i se r le r61e 6ventuel des l ip ides dans un processus enzymal ique [31]. Les ,r6sultats obtenus avec le d6soxychola te de sod ium et le t r i -

Remerciements.

Nous tenons & remereier Monsieur le Professeur Ducet (Universit( de Marseille Luminy) pour l'int~rdt qu'il a portd h ce traoai[ et pour l 'examen critique de nos rgsultats.

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8.

Rdle des lipides dans les transferls

BIBLIOGRAPHIE.

d'dlectrons microsomaux.

1. Beaufay, H. ~ de Duve, C. (1954) Bull . Soc. Chim. Biol., 36, 1551-1508.

2. Fourcans, B. ~ Jain, M. K. (1974) Advances in Lipid Research, 12, 147-2~6.

3. Fleiseher, S., Brierley, G., Klouwen, H. ~ Slautter- back, D. B. (19'62 ~) J. Biol. Chem., 257, 32,64-3272.

4. Dallner, G., Siekevitz, P. ~ Palade, G. E. (1905) Biochem. Biophys . Res. Com., 20, lzb2-148.

5. Dallner, G., Siekevitz, P. • Palade, G. E. (1966) J. Cell Biol., 30, 97-117.

6. Jones, P. D. (19.66) Fed. Prec., 25, 405. 7. Jones, P. D. & Wakil, S. (1967) J. Biol. Chem., 242,

5267-~273. 8. Jones, P. D., Holloway, P. W., Peluffo, R. O.

Wa,kil, S. J. (19&9) J. Biol. Chem., 244, 744-754. 9. Pitt, M. A. ,~ Jones, P. D. (1976) Int . J. Biochem.,

7, 397-4~02. 10. Ozaki, S. T., Onishi, T. a Imai, Y. (10.70.) Twel f th

Proceedings Japan Council of B iochemis t ry of Lipids, 12, 1-5.

11. Jolliot, A., Demandre, C. ~ M'azliak, P. (1976) Phy- siol. Plant. , 38, ~87-292.

12. Lee, C. P., S.ottocasa, G. L. ~ Ernster , L. (1967) Methods in Enzymology , 10, 33-37.

13. Haekett, D. P., Haas, D. W., (~riffiths, S. K. Nieder Pruem, D. J. (1960) Plan t Physiol . , 37, 8-19.

14. Lowry, O. H., Rosebrough, ,N. J., Farr, A. L. ~ Ran- dall, R. J. (1951) J. Biol. Chem., 193, 265-276.

15. Shibuya, I., Honda, H. ~ Maruo, E. (1967) Agr. Biol. Chem. (Tokyo), ~1, 111-114.

16. Metealfe, L. D., Sehmitz, A. A. ~ Pelka, S. R. (19661) Anal. Chem., 38, 514-51'5.

775

17. Tr~moli~res, A. a Lepage, M. (1971) Plant Physiol . , 47, 329-334.

18. Bligh, E. G. • Dyer, V¢. J. (1959) Can. J. Biochem., 37, 911-917.

19. Vorbeek, M. L. ~ Marinetti, G. V. (19~5) J. Lipid Res., 6, 3-6.

20. Ben Abdelkader, A. (1972) Thbse Univ. Paris VI, 184 p.

21. Moreau, F. a Lance, C. (1972) Biochimie, 54, 1335- 1348.

22. Rungie, J. M. ,~ V¢iskich, J. T. (197~) Aus. J. Biol. Sc., 25, 89-102.

23. Jolliot, A. ~ Mazliak, P. (1'973) Plant Sc. Let., 1, 21-29.

24. Graham, A. B., Pechey, D. T., Toogood, K. C., Thomas, S. B. ~ Wood, G. C. (19773 Biochem. J., 163, 117-124.

25. Holloway, P. W. (1973) Anal. Biochem., 53, 304-308. 26. Lueders, K. K. ,¢ Kuff, E. L. (1967) Arch. Biochem.

Biophys., 120, 198-203. 27. Snoke, R. E. ~ Nordlie, R. C. (1967) Biochim. Bio-

phys . Acta, 139, 19.0-192. 28. Anders, M. W. (1969) in Microsomes and drug oxi-

dations (Gilette J. R. ed.) pp. 533-540, Academic Press, New York and London.

29. Gotterer, G. S. (1967) Biochemis try , 6, 2,147-2152. 30. Green, D. E., Allmann, D. W., Bachmann, E., Baum,

H., Kopaczyk, K., Korman, E. F., Lipton, S., Mac- Lennan, D. H., MacConnell, D. G., Perdue, J. F., Rieske, J. S. ~ Tzagoloff, A. (1967) Arch. Biochem. Biophys., 119, 312-335.

31. Jolliot, A. ~ Mazliak, P. (1977) C. R. Acad. Sci. Paris, 285, 973-976.

BIOCHIMIE, 1978, 60, n ° 8.

Documents

Rôle des lipides dans le fonctionnement des chaînes de transport d'électrons de microsomes de Pomme de terre