SOUTENIR LA RECHERCHE MÉDICALE

AIDER

MOBILISER

La recherche médicale sur les leucémies :

pour que la vie gagne !

Rétrospective des projets de recherche soutenus par Laurette Fugain entre 2004 et 2010( version mise à jour en Novembre 2014 )

2

Laurette Fugain, l’association qui lutte contre la leucémie, remercie tout particulière-ment les différents acteurs ayant permis la concrétisation de ce projet de brochure pré-sentant les avancées des projets de recherche financés :

•DominiqueDumeniletFrançoiseMoreau-Gachelin,anciennesDirectricesdeRecherche del’InsermetChercheursScienSAs’*,pour laqualitédelarédactionet leur implication. Cettebrochureestlefruitdeleurmagnifiquetravail,créantainsiuntraitd’unionindispensable entreleschercheursetlegrandpublic.

*:ScienSAs’estunréseaud’échangeetdepartageentreScientifiquesSeniorsetAssociationsdemalades: http://sciensas.inserm.fr/

•LeConseilScientifiqueetMédicaldeLauretteFugain,etsesPrésidentssuccessifs,pour leurvisionainsiqueleursrecommandationspertinentesetargumentéesdanslasélection desprojetssoutenus.

•IsabelleAngeretRaffaellaCarron,bénévolesdelapremièreheuredeLauretteFugain, pour leur aide précieuse et professionnelle dans le suivi rigoureux des projets de recherche,ainsiquepourleurpersévérancedanslacollectedesinformationsayantpermis l’élaborationdecettebrochure.

•L’agencePHBEvents,poursesconseilsjudicieuxetlacréationgraphiquegracieuse

•L’imprimeriePPAMahépourl’impressiongracieusedesbrochures

•Etbiensûr,lesdonateurs,partenairesdel’association:c’estgrâceàleursoutienetleur confiancequetouscesprojetsderechercheontpuêtrefinancés.

3

p4 Edito

p6 Synthèsedesavancéesglobalessurlethèmedelarecherche

p10 Notionsclés

p19 LesprojetsSubventionnésContextescientifique/Questionposée,objectifs/Résultatsobtenus/Avancées

p64Lexique

Le plus beau don, c’est le Don de vie.

4

Cherstous,

Depuis2004,LauretteFugainapporteunecontributionessen-tielleaufinancementdelarecherchemédicalesurlesleucé-miesetmaladiesdusang:fin2014,cesontplusde111projetsquiaurontétésoutenus,pour5.1millionsd’eurosaffectés.

Nousapportonsunerigueurextrêmeàl’allocationdesfondsdédiés à la recherche. Les projets reçus dans le cadre d’unappeld’offreannuelsontsélectionnésparunConseilScien-tifiqueetMédicalpointu,regroupantlesplusgrandsprofes-seurs en hématologie. Chacun des projets retenu fait l’objetd’uneconventionjuridique.Leversementdufinancementesteffectuéendeuxfois,unepremièretrancheàsignaturedelaconvention, la seconde après analyse des rapports scienti-fiquesetfinanciersintermédiairesenvoyésàl’issuedela1ère

annéederecherche,élémentsnouspermettantdedéciderdubien-fondéduversementdela2èmetranche.Nousréclamonsensuitedesrapportsscientifiquesfinauxetdesbilansfinan-ciers détaillés, que nous pointons ligne à ligne pour nousassurer de la conformité des dépenses. A l’issue du projet,nousrécupéronsleséventuelstropperçus,pourlesremettredanslefinancementdesprojetsdesnouveauxappelsd’offres.Au-delàdel’équipebénévoledesmembresdenotreConseilScientifique et Médical, ce sont deux bénévoles et une per-manentede l’équipede LauretteFugainquiconsacrent leurénergieetleursérieuxsurcethème.

Cette exigence, nous avons envie de la partager avec vous,c’est pourquoi nous avons souhaité réaliser un bilan de lacontributiondeLauretteFugainàl’avancementdelarecherchesurlethèmedesleucémiesetmaladiesdusang.

Grâce à l’aide de ScienSAs’, réseau d’échange et de partagea l’initiative de L’Inserm pour créer un lien entre chercheursàlaretraiteetassociationsdepatients,labrochurequenousvousprésentonsvarévolutionnerlafaçondontvouspercevrez

““

larecherchemédicale,pourlarendrepluscompréhensibleàcellesetceuxquinefontpaspartiedumondemédi-cal.Aveccettebrochure,nousavonsl’ambition de rendre la recherchemédicale concrète et transparente,de vous donner les clés pour mieuxappréhender les projets que noussoutenons et ainsi vous montrer lesavancées réelles qu’elle permet pourles malades. Cette troisième éditionprésente les projets soutenus entre2004 et 2010 et sera mise à jourchaqueannée.

La recherche médicale, c’est vous,c’estnous.Soyons acteurs de ce monde enperpétuel mouvement, continuons àdonner aux chercheurs les moyensdeprogresserdansleursrecherches,pourlesmalades.

StéphanieFugain

5

Auneépoquecaractériséeparunexcèsd’information,toutesynthèsedidac-tiquemaisfidèleaucontenudevientextrêmementprécieuse.Depuissacréa-tion,l’AssociationLauretteFugainachoisidesebattrecontrelesleucémiesenrelevantuntripledéfi:souteniràlafoislarecherche,lesfamilles,etleséquipesmédicalesquiaccompagnentlesmaladeslorsd’unparcourséprou-vant.Cedéfiexpliquesûrementengrandepartiel’initiativedel’Associationdes’allieràSciensasdansceprojetdepartagedesavancéesréaliséesparlesnombreuxprojetssoutenus,quisoitàlaportéedetous.

Notrerôleauseinduconseilscientifiqueconsisteàs’assurerquelesprojetssélectionnéssont,certesdeniveauscientifiqueexemplaire,maiségalementensynergieaveclesprotocolescliniquesdesmaladies,etencadrésparlesgroupescoopérateurs.Sic’estauxinstancespubliquesdelaSantéetdelaRecherchedestructurerl’essentieldelapriseenchargeetlacompréhensiond’unCancerhématologique,lesoutiendeLauretteFugainpermetdecréerunpontindispensableentrel’hôpitaletlarecherche,vialesprojetsderecherchetranslationnelle.Chaqueprojetfinancéestportéparunchercheuretuncli-nicien,soitaunomd’uneéquipeindividuelle,soitd’ungroupecoopérateur.Cebinôme,unefoissoutenuparl’Association,noustientrégulièrementaucourantdesavancéesobtenues,maisdansunlangageunpeuinaccessibleaugrandpublic,etparfoismêmeauxcollègues!

Ayantparcouruleremarquabletravaild’homogénéisationetderédactionréa-lisé,jetiensàremercierleschercheusesdeScienSAs‘,etàsaluerl’initiativedeLauretteFugain,poursadéterminationetsoninvestissementpermanentdans lecombatqu’ellemène : ensemble,cesdeuxstructuresont relevé ledéfideprésenterunaperçulimpidedenotreactionconcertéecontrelesleu-cémies.

Jesuisconvaincuequecedocumentserviranonseulementàsoutenirlare-chercheenaidantàmieuxlafairecomprendre,maistrouveraégalementtoutesafinalitéauprèsdesfamillesquisetrouventconfrontéesàcesmaladies,etmêmeauxchercheurs,quicomprendronsprogressivementl’importancederendrenosrésultatsaccessiblesaugrandpublic.

PrElizabethMacintyrePrésidenteduConseilScientifiqueetMédicalLauretteFugain

““

FINANCÉS PAR L’ASSOCIATION LAURETTE FUGAINLaleucémieestuncancer du sang et de la moelle osseuse. Le siège de la maladie sesituedans la moelle osseuse quiestlesitedefabricationdescellulessanguines(globulesblancs,globulesrouges,plaquettes).

Quandcertainesmutations seproduisentdansunecellulenormaledelamoelleosseuse,lacelluledevientcancéreuse.Différentesmutationssontàl’originedesdifférentesleucémies.Letraitementdupatientestdifférentselonletypeetlestadedelaleucémie.Laconnaissancedesmutationsàl’originedelaleucémiepermetd’appliquerune thérapie cibléeplusefficacepourtuerlacelluleleucémique.

6

Ce

llule Souche

MO

ËL

LE

OS

SE

US

ES

AN

G

Auto-renouvellement

Tranformation leucémique Hématopoïèse normale

Maturation

DifférenciationProliférationanormalePasdedifférenciation

Cellules fonctionnelles absentes ou défectueuses

Cellules fonctionnelles

Blastes

Blastes

Glo

bules rouges Plaquettes

Glo

bules blancs

7

Malgrédesprogrèstrèsimportantsréalisésenrechercheetenclinique,beaucoupdequestionsrestentposées:

Quellessontlesmodificationsmoléculairesquitransformentunecellulenormaledusang enunecelluleleucémique?

Commentaméliorerletraitementdespatientsatteintsdeleucémie?

Comment expliquer et prévoir les rechutes observées quelquefois après traitements decertainesleucémies?

Transformationleucémique

Cellule souche dans la moelle osseuse

Blastes dans la moelle osseuse et le sang

Prolifération anormalePas de différentiation

Dansquellescellulesapparaissentlesmutationsgéniques?

Quellessontlesfonctionsdesprotéinesanormales?

Commentprévoir,commentéviterlesrechutesaprèstraitement?

Quelsgènessontmutés? Queltraitementpourtuerlescellulesleucémiques?

Questions posées dans les projets de recherche

Gène normal Gène muté

Transformation leucémique et projets de recherche

*Latransformationleucémiqueestdueàl’apparitiondemutationsdansunouplusieursgènesdansunecellulesouche.*Legénomemutéprovoquel’expressiondeprotéinesanormalesdanslesblastesleucémiques.

ADNProtéines ADNmuté

Protéinesanormales

8

DE RECHERCHE POUR CONTRIBUER À RÉPONDRE À CES QUESTIONSEntre 2004 et 2010, l’association a financé 71 projets (dont 7 sont tou-jours en cours) sur différents types de leucémie :1)La leucémie myéloïde chronique (LMC) Les cellules des patients sont caractériséespar la présence du chromosome de Philadel-phieportantlegènemutéBCR-ABL.L’ImatinibMesylate(Glivec®)estuntraitementefficacedelaLMC,ilinhibel’activitédeBCR-ABL.Cepen-dant, des résistances à ce médicament sontsouvent observées. Comment prédire le déve-loppement de cette résistance ? La résistanteauGlivecest-elledueàdenouvellesmutationsdans la cellule leucémique ? Ces nouvellesmutations peuvent-elles être des marqueursprédictifsd’unerechuteetpeuvent-ellesaboutiràlaprescriptiond’unnouveautraitement.

2)Les leucémies aigues myéloïdes (LAM)Ellessontcaractériséesparl’accumulationdanslesangdecellulesimmaturesquiprolifèrentac-tivement.Quellessontlesprotéinesanormalesprésentesdanslacelluleleucémiquequimodi-fientlespropriétésdecettecellule?

Cesleucémiessonttraitéesparunechimiothé-rapiesouventassociéeàunegreffedemoelle.Cependant ce traitement est lourd et pas tou-joursnécessaire.Existe-t-ildes«marqueurs»quipermettraientdedéterminerlanécessitéounond’unegreffedemoëlle?

3)Les leucémies aigües lymphoblastiques (LAL)Ellesévoluentavecdespopulationsdecellulesleucémiques qui présentent des niveaux diffé-rents d’agressivité, les plus agressives étantresponsables des rechutes. La caractérisationfine de ces cellules agressives est importantepouradapterletraitement.LesLALsontassociéesàungrandnombredemutations. L’utilisation des mutations commemarqueurs de diagnostic et le lien entre cesmarqueurset lepronosticaideraientà ladéci-sionthérapeutique.

4) Les syndromes myélodysplasiques (SMD)Ils sont caractérisés par des anomalies descellules souches hématopoïétiques (cellules àl’origine de toutes les cellules du sang locali-séesdanslamoelleosseuse)etsetransformentsouventenleucémiesaigues.La caractérisation des anomalies moléculairesdanslescellulesdusangdecespatientspour-raitpermettredenouvellesthérapiesciblées.

Ces travaux permettent de mieux comprendreles processus intracellulaires qui entraînentl’apparitionde la leucémie.Lesconnaissancesacquiseschaquejour,aucoursd’unlongtravailde recherche, améliorent l’efficacité des traite-mentsdesmalades.

9

10

LES LEUCÉMIES

Une leucémie est un cancer qui affecte les celluleshématopoiétiques.Ellesedéveloppedanslamoelleosseuseetrésultedelamultiplicationanormalesuiteà une mutation d’une cellule souche totipotente oud’une cellule progénitrice (amplification clonale*).Lescellulesleucémiquesprolifèrentets’accumulentdanslamoelleosseuseavantdemigrerdanslesangpériphérique.Selonlanaturelymphoïdeoumyéloïdedescellulesleucémiques,onparlede leucémies lymphoïdesoudeleucémiesmyéloïdes.Enfonctiondelavitessedel’évolutionclinique,ellessontdéfiniescommedesleucémiesaigües(évolutionrapide)oudesleu-cémieschroniques(évolutionsurplusieursannées).Lescellulesdeleucémiesaigüesetchroniquessontdifférentes.

•Danslesleucémiesaigües,lescellulesleucémiquesmontrentuneproliférationetunesurvieac-cruesparrapportàunecellulenormale.Deplus,cescellulessontbloquéesàunstadeprécisdeladifférenciation,provoquantuneaccumulationdecescellulesquinepeuventprogresserau-delàdecestadededifférenciation.Enenvahissantlamoelleosseuse,cescellules,appeléesblastesleucé-miques*, empêchent le développement des autres cellules du sang aboutissant à des cytopénies(déficitquantitatifencellules)danslesdifférentslignagesdusang.

•Danslesleucémieschroniques,lescellulesleucémiquesontuneproliférationaccruemaissansblocagedeladifférenciation.Ilenrésultel’amplificationd’unseullignagecellulairequisetraduitparun nombre élevé des cellules du lignage affecté. Ces leucémies sont des néoplasmes lymphopro-lifératifs (NLP)oumyéloprolifératifs (NMP).Lessyndromesmyélodysplasiques (SMD) regroupentdes affections clonales de la cellule totipotente. Les SMD sont caractérisés par une hématopoièseinefficaceaboutissantàuneouplusieurscytopéniespériphériquestandisquelamoelleprésentedesanomaliesdematurationdansunouplusieurslignageshématopoiétiques.

• Progression leucémique : Selon une progression ordonnée, un SMD, un NLP ou un NMP peutévoluerenleucémiechroniquemyéloïde(LMC)oulymphoïde(LLC)quifinalementpeutprogresser,aucoursd’unecriseblastique,versuneleucémieaigüemyéloïde(LAM)oulymphoïde(LAL).

11

•Diversitédesleucémies:Lesleucémiessonthétérogènesentermesdecaractéristiquesbiologiques,deprogressiondepronosticetde réponseà la thérapie.Uneconcertationmondialeassociantdescritèresmorphologiques, immunologiques,cytogénétiques*,biochimiquesetgénétiques*aaboutiàuneclassificationdesleucémiesendifférentstypesetsous-typesetapermisdesavancéessignifi-cativesdanslesvaleurspronostiquesdestraitements.Aussi,audiagnostic,lesblastesleucémiquesissusdeprélèvementssanguinsoudemoelleosseusedoivent-ilsêtrecaractériséssuivantcescritèrespourdéfinirlesous-typedeleucémie,enexcluantlesautrescausesd’insuffisancemédullaireetpourguiderlechoixdesthérapeutiques.

Bases moléculaires des leucémies :

L’analyseàgrandeéchelledugénome*entieretl’étudedétailléedeschromosomes*desblastesdepatients leucémiques a eu une grande incidence dans notre compréhension de la leucémogenèse.Ellesontpermisd’identifierungrandnombred’anomaliesmoléculaires.Cesanomaliessontdiversesmaisspécifiquesd’unsous-typedeleucémiescequipermetdecorrélerlesdonnéesbiologiquesàdespronosticscliniques.

•Commentsontacquiseslesanomaliesmoléculaires?-Lesmécanismessontmultiples.Lesbasesquicomposentl’ADN*dugénomepeuventêtrechangées(mutation)oumodifiées(modificationépi-génétique).Leschromosomespeuventéchangerdesfragments(translocationchromosomique),enperdre(délétiongénique)ouengagner(amplificationgénique).

•Quellessontlesconséquencesdesmutationsdanslesgènes?Lesgènes*codentpourdespro-téines*.Lesmutationsentraînentunemodificationdel’activitédesprotéines.Lesprotéinesmutéesvontmodifieroubloquerlesprogrammesnormauxdedifférenciation,proliférationetsurviedescel-lules.Lesprotéinesmutéessonttrèsnombreuses,ellespeuventêtreregroupéesselonleurfonction.Parexemple:

-Ungroupeestconstituéparlesfacteursdetranscription*quirégulentl’expressiondesgènes.Dansl’hématopoièsenormale,ilssontnécessairesàladéterminationdelanaturedelalignéehématopoiétiqueetàsadifférenciation.Les facteursde transcriptionmutésontperdu lacapacitéàpromouvoirladifférenciation,maissontdevenuscapablesd’empêcherladifférenciationdesblastes.

-Unautregroupeestconstituéparlesprotéinesdesignalisationcommeleskinasesquiactiventdesvoiesdesignalisation*àl’intérieurdelacellulepourrégulerlacroissanceetlasurviedelacellule.Lesprotéineskinasesmutéesaugmententlaproliférationdescellulesdanslesnéoplasmesprolifératifsetdanslesleucémies.

12

Leprocessusévolutifquitransformeuneleucémiechroniqueenleucémieaigüedépenddel’acquisi-tiondemutationsadditionnellesquidétruisentdesmécanismesrégulateursencorefonctionnelsdanslaphasechronique.C’estpourquoi,desmutationsciblant lesdifférentsgroupesdeprotéinessontsimultanémentdétectéesdansdesblastesleucémiques.

Implications cliniques et thérapeutiques :

Lacompréhensiondesmécanismesmoléculairesabeaucoupaidéàaffinerlediagnostic,établirlepronosticetdéterminerletraitementleplusapproprié.Plusieursmutationssontrecherchéesenrou-tineaudiagnosticchezlespatients,pourdéfinirdesgroupesderisque,adapterlestraitementsetassu-rerlesuividelamaladierésiduelle*.Connaissantl’impactdesprotéinesmutéessurlesdérèglementsdelaprolifération,delasurvieetdeladifférenciationdanslescellulesleucémiques,lerationneldesrecherchesdansledéveloppementdesnouvellesthérapiesdites«thérapiesciblées*»estdetrouverdesmoléculesquiinhibentcesprotéinesmutées.•Ainsi,leskinasesmutéesontprovoquéledéveloppementdedroguesinhibitricesdeceskinasesoudesvoiesdesignalisationqu’ellesactivent.Parexemple,dansla leucémiemyéloïdechronique,unetranslocationentreleschromosomes9et22aboutitàl’expressiondelakinaseBCR-ABLquiestresponsabledelaproliférationdescellulesleucémiques.L’ImatinibMesylate(Glivec®)eninhibantl’activitédeBCR-ABLprovoquelamortdescellulesleucémiques.L’ImatinibMesylateestuntraitementderéférencedanslaLMC.

•Unautreexempleestceluidelathérapiedifférenciatrice*àl’aciderétinoïque(ATRA)quiestutiliséepourtraiterlesleucémiespromyélocytaires.Unetranslocationentreleschromosomes15et17aboutità l’expressionde laprotéinemutéePML-RARαquiauneactivitéde facteurde transcriptionetestresponsabledublocagede ladifférenciationdesblastes.L’aciderétinoïqueen inhibant l’activitédePML-RARα lèveceblocageetprovoque ladifférenciationdesblastes.L’ATRAestun traitementderéférencedesleucémiespromyélocytaires.

Plusieurs mutations sont acquises dans les cellules leucémiquesaigües.Ensebasantsurl’activitéthérapeutiquequ’exercentdesdro-gues* différentes sur deux protéines mutées distinctes, beaucoupd’effortssontactuellementfaitspourtrouverdescombinaisonsdedrogues ayant une meilleure efficacité pour éliminer les cellulesleucémiquesque les traitementsparuneseuledrogue.De telles

13

combinaisonsdedroguespermettentderéduirelesdosesadministréesetdeminimiserainsilestoxi-citésliéesauxtraitements.

Signification thérapeutique :

Lestraitementsproposéspourlesleucémiesontlongtempsétédeschimiothérapiesassociéesounonàunegreffedemoelleosseuse.Cependantlagreffedemoelleresteréservéeàuneminoritédepatientsenraisondelalourdeurdutraitementetdeladifficultéàtrouverdesdonneurscompatibles.Deplus,l’inconvénientmajeurdeschimiothérapiesestlemanquedespécificitécarellesdétruisentàlafoislescellulescancéreusesetlescellulessaines.

Depuis10ans,ladécouvertepermanentedenouvellesaltérationsmoléculairesastimulélamiseaupointdenouvellesdroguesanti-cancéreuses.Dans lamesureoù lesprotéinesmutéessontspéci-fiquesdescellulescancéreuses,lesobjectifsontétédetrouverdesdroguesquiciblentcesprotéinesmutéeset les inhibent.Les thérapiescibléessont trèsattractivesparcequ’enciblant lesmoléculesspécifiquesdelacellulecancéreuse,ellesontdeseffetsréduitssurlescellulesnormalesetentraînentmoinsd’effetssecondaires.

Récemment,ledomainedesthérapiescibléesaconnudesavancéesmajeures,avecledéveloppementdesanalysesàhautdébitdugénomeetdel’expressiondesgènesassociéesàdesanalysesinforma-tiséesetdesbiostatistiques.Cecipermetdedéfinirunesignaturegéniqueparcancerquipeutêtreprédictivedel’évolutioncliniqueetconduitàmettreenplacedesessaisthérapeutiquesbaséssurleprofilmoléculairedespatients.

Cependant, la limite principale des thérapies ciblées est l’émergence d’une résistance à la drogueaprèsuneréponseinitiale,souventspectaculaire,autraitement.Denouveau,définirlesbasesmolé-culairesdesmécanismesdelarechuteetdelarésistanceàladroguepermettradesurmontercetterésistance.Lesdonnéescollectéessurdescollectionsdetumeurs(tumorothèque)permettentdeclas-sifierensous-groupeslesrisquesderechute.Ceciestunepremièreavancéedansledéveloppementdethérapeutiquescibléespourprolongeraumaximumlesrémissions.

Cettevisiontrèspositivedelarecherchebiomédicalemetenévidence quel’avancementsimultanédesétudescliniquesetdesconnaissances biologiquesestlefondementdetoutprogrèsthérapeutique.

14

L’HÉMATOPOÏÈSE

L’hématopoïèseestleprocessusphysiologiquequiconcourtàlafabricationdescellules*dusangetàleurremplacementcontinuetrégulé.

Lescellulesdusangsontlesélémentsterminauxetfonctionnelsdelignageshématopoiétiques*diffé-rents.Leurduréedevieestcourte:quelquesheurespourlespolynucléaires,quelquesjourspourlesplaquettes,quelquesjourspourlesglobulesrouges.

Cellulesdusang Duréedevie Nombredecellulesproduitesparjourparl’organisme

Globulesrouges 120jours 200milliards

Polynucléaires quelquesjours 40milliards

Plaquettes 7jours 200milliards

L’hématopoïèseestdoncunprocessustrèsactif :chaquejour,environ1012cellulessanguinessontproduites.Parexemple,2millionsdeglobulesrougessontproduitsparseconde.Cetteproductionestfinementcontrôléeafindemaintenirconstantlenombredecellulessanguinesmalgrélesvariationsdeconsommationliéesàdescirconstancespathologiques(hémorragies,infec-tions...).

Les étapes de l’hématopoïèse :

Aprèslanaissance,l’hématopoïèseestlocaliséeexclusivementdanslamoelleosseuse.Touteslescellulesdusangsontproduitesàpartird’unemêmecelluleindifférenciéeappeléecellulesouchetotipotenteoucellulesoucheprimitive(voirleschémadel’hématopoïèseci-dessous).

Sousl’influencedefacteursstimulants,unecellulesouchetotipotentes’engagedansladifférenciationd’unlignagecellulaire.Elledevientalorsunprogéniteur.Aprèsplusieursdivisions,lesprogéniteursgénèrentdesprécurseursquisedivisentetmaturent.Ilsconstituentlamajoritédescellulesobservéessurunmyélogramme(frottisdemoelle).Lamaturationterminaleaboutitauxcellulesfonctionnellesquimigrentdelamoelledanslesang.

L’hématopoïèsesedérouleen4étapesaucoursdesquellessontproduitessuccessivementlescellulessouchestotipotentes,lesprogéniteurs,lesprécurseursetlescellulesmatures.

15

Ce

llule Souche

CELLULES DU SANG

AUTO

-REN

OUVE

LLEM

ENT

DIFF

ÉREN

CIAT

ION

MAT

URAT

ION

PROGÉNITEURS

PRÉCURSEURS

Lymphocyte NKMonocyteMacrophage

Basophile

Cellule dentrique

EosinophileNeutrophilePlaquettesErythrocyteGlobule rouge

Lymphocyte T Lymphocyte B

LIGNAGES MYLOÏDES LIGNAGES LYMPHOÏDES

L’HÉMATOPOÏÈSE

16

•Lescellulessouchestotipotentes:Lescellulessouchesdelamoelleconstituentlabased’unehématopoïèseefficace.Ellesont

deuxpropriétésessentielles:lacapacitéd’auto-renouvellementetlacapacitédedifférenciationverstousleslignageshématopoïétiques:

-l’autorenouvellementestlamultiplicationàl’identiquedelacellule,cequimaintientintact leréservoirdecellulessouchesetdonclepotentieldel’hématopoïèse.

-ladifférenciationestl’engagementirréversibledelacelluleversunouplusieurslignages, sousl’influencedefacteursdecroissance.Lacelluleperdsatotipotenceetdevientune cellulesoucheengagée.

Lenombredescellulessouchesestmaintenuconstantparunéquilibreentrelaproductiondescel-lulessouchesparautorenouvellement et lapertedescellulessouchespardifférenciationvers leslignagescellulaires.

Lescellulessouchestotipotentesnereprésententqu’unfaiblepourcentagedescellulesmédullaires(0,01à0,05%).Ellesnesontpasidentifiablesselondescritèresmorphologiques*maispeuventêtrereconnuesparcertainscritèresimmunologiques*,telquelaprésencedumarqueurCD34.

•Lesprogéniteurs:Lapremièreétapedeladifférenciationd’unecellulesouchetotipotenteestsonévolutionenun

progéniteurengagéversleslignageslymphoïdeoumyéloïde.Leprogéniteurlymphoïdegénèretroistypesdelymphocytes(T,BetNK).Leprogéniteurmyéloïdegénèrelestroislignagesérythroïde,granu-lo-monocytaireoumégakacaryocytaire.Leprogéniteurmyéloïdeetleprogéniteurlymphoïdepeuventgénérerlescellulesdendritiques.

Les progéniteurs ont une capacité d’autorenouvellement réduite. Ils ne sont pas identifiables mor-phologiquementmaisilsacquièrentdesmarqueursàleursurfacequisontreconnaissablespardesanticorps*.

•Lesprécurseurs:Les précurseurs sont les premières cellules identifiables par des critères morphologiques. Ils

ontperdutoutecapacitéd’autorenouvellement.Lesprécurseurslesplusimmaturessontleslympho-blastesquigénérerontleslymphocytesT,BetNK,lesmyéloblastesquidonnerontlespolynucléaires,lesmonoblastesquidonneront lesmacrophages, lesproérythroblastesquidonneront lesglobulesrougesetlesmégacaryoblastesquidonnerontlesplaquettes.

17

•Lescellulesmatures:Cesont lescellules fonctionnelles*.Laplupartconstitue lesystèmeimmunitairequi

défendl’organismecontrelesinfections.Lesneutrophilesetlesmacrophagesdétruisentlescellulesétrangèresouinfectées(phagocytose).Lesmacrophagesetlescellulesdendritiquesexprimentàleursurfacedesfragmentsdesagentspathogènes(antigènes*)afindelesprésenterauxlymphocytesBetT.LeslymphocytesBproduisentlesanticorpsquireconnaissentlesantigènesetlesdétruisent.LeslymphocytesTetNKprovoquentlamortdescellulesétrangèresàl’organisme.Leséosinophilesper-mettentdeluttercontrelesparasitesetlesbasophilesinterviennentdanslesréactionsinflammatoiresetallergiques.Lesplaquettespermettentlacoagulationlorsd’unsaignement.Lesglobulesrougesentransportantl’hémoglobine,assurentl’oxygénationdestissus.

Lescellulesmaturessontfacilementidentifiablespar-descritèresmorphologiques:lenoyau*despolynucléairesestpolylobé,lecytoplasme*estgranuleuxquantauGRlenoyauestexpulsédesglo-bulesrougesetdescritèresbiochimiques*:desprotéines*spécifiquesapparaîssentàlasurfacedescellulesetsontreconnaissablespardesanticorps.

Régulation de l’hématopoïèse :

Troisélémentssontimportantspourassurerlebondéroulementdel’hématopoïèse:lemicroenviron-nementmédullaire,lesvitaminesetoligoélémentsetlesfacteursdecroissance.

•Lemicroenvironnementmédullaireparticipeàl’organisationgénéraledelamoelle.Lescellulessouchessontlocaliséesdanslemicroenvironnementmédullaireconstituédedifférentstypes de cellules : certaines cellules maintiennent les capacités d’autorenouvellement des cellulessouches,d’autresproduisentdesfacteursdecroissancequipermettentlamultiplicationdesprogé-niteursetd’autresproduisentdesmoléculesd’adhésionquiretiennentlescellulessouchesdanslemicroenvironnementmédullaireetlesmaintiennentdansunétatindifférencié.

•LesvitaminesetoligoélémentsCertainsagissentsurtousleslignagescellulaires.C’estlecasdelavitamineB12etdel’acidefoliquequisontnécessairesàlasynthèsedel’ADNetdoncàladivisioncellulaire.Leurdéficitentraînedesanomaliesdeformationdanstousleslignageshématopoiétiques.

D’autressontnécessairesàlafabricationdeprotéinesspécifiquesd’unlignage.C’estlecasdufer,quiestunconstituantdel’hémoglobinetransportéeparlesglobulesrouges.

18

•Lesfacteursdecroissance(égalementappeléscytokines,lymphokinesouinterleukines)Ilssontnécessairesàlasurvie,lamultiplication,lamaturationetladifférenciationdescelluleshéma-topoïètiques.Lepremierfacteurcaractériséaétél’érythropoïétine(EPO).Depuisquelquesannéesdenombreuxautresfacteursontétéclonésetsynthétisés.Leurrôledansl’hématopoïèseestdemieuxenmieuxdéfini.Ilspermettentdegrandsespoirsdansletraitementdesmaladiesdel’hématopoïèseetcertainssontdéjàutilisésenthérapeutique.Lesfacteursdecroissancereconnaissentdesrécepteurs*àlasurfacedescellules-cibles.Laliaisondufacteurdecroissanceàsonrécepteurenvoieunensembledesignauxappelé«voiedesignalisa-tion*»àl’intérieurdelacellule.

Application à la thérapie cellulaire :

Les chimiothérapies* utiliséespour tuer les cellules cancé-reuses détruisent aussi lescellules hématopoïétiques quiprolifèrent.Pourpallierceseffetssecondaires de la chimiothéra-pie, la thérapie cellulaire* estutilisée.Lathérapiecellulaireex-ploitelacapacitéd’autorenouvel-lementdescellulessouches.Elleconsisteàpréleverlescellulesdelamoelleosseusedupatient(autogreffe*)oud’undonneurcom-patibleaveclepatient(allogreffe*),depurifierlescellulessouches(grâceaumarqueurCD34*quiestexpriméàlasurfacedescellulessouches).Cescellulespurifiéessontensuitegrefféesaupatientetvontrestaurerlaproductiondescellulesdusang.

EnFrance,1500allogreffessontréaliséesparan,principalementdans les pathologies leucémiques (mais aussi chez les patientsatteintsdelymphomesetdemyélomes)quirésistentàplusieursapproches thérapeutiques. Les résultats de greffe peuvent êtrespectaculairesetaboutiràunerémissioncomplète.

CONTEXTE SCIENTIFIQUE/ QUESTION POSÉE,

OBJECTIFS / RÉSULTATS OBTENUS / AVANCÉES

19

20

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2004-01Leucémies Aigües Promyélocytaires et Organisation Fonctionnelle du Noyau : Rôle des Corps Nucléaires PML et de la Voie SUMO

Datedelasubvention:2004A.Dejean,UnitéPasteur–OrganisationNucléaireetOncogenèse-INSERMU579

Contexte scientifique Laleucémieaiguëàpromyélocytes(LAP)estcaractériséeparunblocagedelamaturationdecertainescellulesdusangàunstagetrèsprécoce.LelaboratoireamontréquelescellulesleucémiquesdeLAPétaientcaractériséesparuneanomaliegénétiquecorrespondantàunefusionentredeuxchromosomes.Cettefusionréunitdeuxgènes:legèneRARαquicodepourunrécepteuràl’aciderétinoiqueetlegènePMLetconduitàl’expressiond’uneprotéineanormalePML-RARαresponsabledudéveloppementdesLAP.UnecaractéristiqueuniquedescellulesleucémiquesLAPestleurcapacitéàreprendrelechemindelamaturationsousl’effetde l’aciderétinoïque(AR).L’administrationd’ARparvoieorale induitdesguérisonschezplusde90%despatientssouffrantdeLAP.

Question posée, objectifs Dansunpetitpourcentagedecas,cependant,lespatientsrechutentetdéveloppentunerésistanceàl’AR.Récemment,uneéquipechinoiseapumontrerqu’undérivéde l’arsenic,uncomposéutilisédans lamédecinetraditionnellechinoise,étaitcapabled’induiredesrémissionschezlespatientsLAP.Leprojetavaitpourbutdecomprendrelesmécanismesmoléculairesàl’originedelaguérisonparl’arsenicdesLAP.

Résultats obtenus L’équipe a montré que la protéine PML-RARα, sous l’effet de l’arsenic, était étiquettée par une petiteprotéine,appeléeSUMO,etquecetétiquettageconduisaitàladégradationdelaprotéinePML-RARα,etdoncàlaguérisondumalade.

Avancées Cette découverte ouvre la voie à de nouvelles approches thérapeutiques dans le traitement du cancer faisant appel à des molécules susceptibles de moduler cette voie d’étiquettage par SUMO.

21

12 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2004-02Induction de la sénescence par le TNF alpha dans les cellules myéloïdes leucémiques : implication de la physiologie des myélodysplasies.

Datedelasubvention:2004V.DeMas,INSERMU563,Centredephysiopathologiedel’hôpitalPurpan,Toulouse

Contexte scientifique L’hématopoïèsereprésentel’ensembledesmécanismesquiassurentleremplacementcontinudesdiffé-rentescellulessanguines.Elleestréguléepardescytokinesstimulatrices(facteursdecroissance,Ery-thropoïétine,GM-CSF…)etdescytokinesinhibitrices(TNFα,TGFβ...).Cependant,cerenouvellementpeutsedérégleretentraînerdesmaladiescommedesleucémiesaiguësoudesétatspré-leucémiquesappeléssyndromesmyélodysplasiques(SMD).Destravauxontmontréquel’accumulationdecertainescytokinesinhibitricescommeleTNFαouleTGFβ,retrouvéedanslesSMDparexemple,avaientuneffetnéfastesurlaproductiondescellulessanguinesnormales.

Question posée, objectifsLatéloméraseestuneenzymequiapourfonctiondelimiterleraccourcissementdestélomères(extrémitédeschromosomes)etd’éviterlesanomalieschromosomiqueslorsdelaproliférationcellulaire,maissonrôledansl’hématopoïèsen’étaitpasconnu.Ceprojetapourbutd’étudierlesvoiesderégulationdelatéloméraseparlesfacteursdecroissanceetlescytokinesinhibitricesdanslescelluleshématopoïétiquesnormalesetleucémiques.

Résultats obtenus Lesrésultatsmontrentquelaquantitédetéloméraseestréguléedanslacelluleparl’érythropoïétineetleTGFβ.UnexcèsdecytokinesinhibitricescommeleTGFβentraîneladiminutiondelaquantité decetteenzyme.CesmodificationsdutauxdeTéloméraseprovoquentdeprofondesaltérationsdel’héma-topoïèse,sontresponsablesde l’insuffisancemédullaireretrouvéedanscertainespathologiescommelesSMD(diminutiondeproductiondesglobulesrougesetdoncanémie)etentraînentuneinstabilitéchromosomique(acquisitiond’anomalieschromosomiques)quifavoriseuneévolutionverslaleucémieaiguë.

Avancées Ces travaux participent à une meilleure connaissance de la physiopathologie de ces mala-dies et pourraient aboutir à la conception de nouvelles thérapeutiques.

22

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2004-03Comparaison des profils d’expression génique des leucémies ai-guës lymphoblastiques (LAL) de phénotype B de l’enfant en fonction de la réponse précoce au traitement.

Datedelasubvention:2004F.Sigaux,Laboratoired’hématologiedel’hôpitalSaint-LouisàParis

Contexte scientifiqueMêmesilepronosticdesleucémieslymphoblastiquesaigües(LAL)del’enfants’estaméliorédefaçonspectaculaireaucoursdes30dernièresannées,atteignant75à80%deguérison,encore1enfanttraitésur5rechute.Onsaitmaintenantquelaqualitédelaréponseauxphasesinitialesdutraitementestunfacteurpronostiquemajeurdelarechute.

Question posée, objectifsL’hypothèseétaitquelaréponseautraitementdépendaitpourpartiedelanaturedescellulesleucémiquesprésentesaudiagnosticdelamaladie.L’équipearecherchédescaractéristiquesphysiopathologiquessusceptiblesdeconféreràcescelluleslacapacitédesurvivreautraitementadministré.Pourcela,lesniveauxd’expressiondel’ensembledesgènesexprimésdanslescellulesleucémiquesontétémesuréschez27enfantstraitésdefaçoncomparable(20patientssensibleset7patientsrésistants).

Résultats obtenusCetteétudeautilisédespucesàADNquipermettentdemesurerl’expressiondel’ensembledesgènesexprimésdanslescellulesdeLAL.Cetteexpressiondel’ensembledesgènesaétécorréléeàlaqualitédelaréponseauxphasesinitialesdutraitement.Ainsi,30gènesontétéidentifiésdontlesniveauxd’expres-siondéfinissentune«signaturemoléculaire»associéeàunemauvaiseréponseautraitementetàuneévolutiondéfavorablesoustraitement.

AvancéesCe travail montre que les puces à ADN d’expression sont des outils susceptibles d’être utilisés dans les laboratoires hospitaliers pour identifier dès le diagnostic, les patients qui ne répondront pas bien au traitement. Ces résultats doivent être reproduits et confirmés avant que de tels outils soient utilisables en clinique pour la prise en charge des enfants atteints de LAL. On peut cependant imaginer que la mise en évidence de ce type de « signature moléculaire » permettra, dans un proche avenir, de proposer à chaque patient un traitement mieux adapté à sa maladie.

3

23

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-01Facteurs pronostiques des leucémies aigues lymphoblastiques

Datedelasubvention:2004J.P.Vernant,IntergroupeLALA/GOELAMS/SAKKnational,suisseetbelge

Contexte scientifique Le pronostic des leucémies aigües lymphoblastiques s’est amélioré au cours des dernières années.Cependantunenjeumajeurestd’identifierlesmaladesdontlepronosticdeguérisonestsuffisammentfavorablepourleuréviterunegreffedemoelle.

Question posée, Objectifs Cetteéquipes’estappliquéeàaffiner les facteurspronostiquesde laLALafindedéfinirpourchaquemalade,seschancesdeguérisonaprèsunechimiothérapieseule.L’allogreffeneseraitréservéequ’auxpatientsdont les facteurspronosticssontmauvais.Pourcela, lenombredecellulesdeLALquisub-sistentdanslamoelleosseuseaprèschimiothérapieaétéanalysé.

Résultats obtenus 262adultesatteintsdeLALontparticipéàcetteétude.Lesrésultatsmontrentquelapersistancedeplusd’unecellulepathologiquesur10000cellulesdemoelleosseuseest indicatived’un risqueélevéderechute.Cetteobservationinciteàréaliseruneallogreffedemoelle lorsqu’undonneurcompatibleestdisponible.Al’inverse,moinsd’unecellulepathologiquesur10000cellulesdemoelleosseusepermetdeprévoird’excellenteschancesdeguérisonaveclasimplepoursuitedelachimiothérapie.Cetteévalua-tiondelamaladierésiduelleleucémiqueaétérenforcéeparlarecherchedemutationsgénétiquesdanslesgènesIKF1etNOTCH1.

Avancées Ces éléments pronostiques serviront à proposer au malade le traitement le moins lourd, qui lui offrira les meilleures chances de guérison.

4

24

PROJET SUBVENTIONNÉ1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-02Rôle des mutations du gène codant pour la protéine NPM dans la biologie des LAM primitives : valeur pronostique et étude du rôle oncogénique.

Datedelasubvention:2005D.BouscaryetO.Bernard,InsermU362InstitutPasteuretGOELAMS

Contexte scientifique 45%despatientsatteintsd’uneleucémieaiguëmyéloblastique(LAM)ontuncaryotypenormal(leschro-mosomessontapparemmentnormaux).Lasurvieà5ansdecespatientsestde40à50%.Lescausesmoléculairesdecettemaladiesonthétérogènes.UnemutationdurécepteurFLT3danscettepathologieestunfacteurdemauvaispronostic.Récemment,unemutationdanslegènecodantlanucléophosmine(NPM)aététrouvéeavecunehauteincidencedanscetypedeLAM.

Question posée, Objectifs Deuxpointsontétédéveloppés: -DéterminerlerôledesmutationsdeNPMdanslesleucémiesaiguësparconstructiond’un systèmeexpérimentalchezlasouris(équiped’O.Bernard)

-DéfinirlafréquencedesmutationsdeNPMetdeFLT3danslespatientsLAMetétablirs’il existeunlienentrelaprésencedecesmutationsetleschancesdeguérison.Deplus,comme lespatientsjeunesquidéveloppentuneLAMàcarytoypenormalsontallogreffés (siprésenced’undonneurcompatible),cetteéquipearecherchésil’allogreffe,associéeàla chimiothérapie,amélioraitlepronosticdecespatients(équipedeD.Bouscary).

Résultats obtenus -LaprotéineNPMmutéeaétéintroduitedanslescellulesdemoelledelasouris.Aucune sourisn’adéveloppédemaladie.Parailleurs,aucuneanomalien’aétédétectéedanslesang, lamoelleetlesorganesdecessouris.L’étudebiologiqueadoncétéarrêtéeetlemécanisme desleucémiesassociéesauxmutationsdeNPMresteincompris.

-LesmutationsdeNPMetdurécepteurFLT3ontétérecherchéesdansunecohortede107 patientsatteintsdeLAM.lesrésultatsmontrentquel’espérancedesurvieest lameilleure danslegroupedepatientsayantunemutationdanslegèneNPMsansmutationdanslegène codantlerécepteurFLT3,mêmelorsqu’ilsn’ontpasreçud’allogreffe.

Avancées Les patients atteints d’une LAM à caryotype normal, avec mutation de NPM et sans muta-tion de FLT3 ne doivent donc pas être allogreffés en première intention. L’allo-greffe est favorable uniquement dans le cas où NPM n’est pas muté.

5

25

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-03Soutien au développement de stratégies thérapeutiques innovantes basées sur la thérapie cellulaire.

Datedelasubvention:2005C.Borg,EtablissementFrançaisdusang,InsermU645etServiced’HématologieduCHUJeanMinjozdeBesançon

Contexte scientifique Lespatientsatteintsdecancersdigestifssontgénéralementporteursdemétastaseshépatiques,c’est-à-direquedescellulescancéreusessontretrouvéesauniveaudufoie.Pourtraitercespatients,ilfautdoncnonseulementtuerlescellulesducancerdigestifmaisaussicellesdesmétastaseshépatiques.Lathé-rapiecellulaireconsisteàgrefferdescellulesprélevéeschezlepatientouchezundonneur.Cescellulessontsélectionnées,modifiéesoutraitéesinvitroavantd’êtreinjectéesaumalade.Lathérapiecellulaireestunealternativeauxtraitementschimiothérapeutiques.

Question posée, Objectifs L’objectifdecetteétudeestdedévelopperuneprocédurede thérapiecellulairepour le traitementdescancersdigestifs. Ils’agitd’utiliser lescellules immunitairesappelées«cellules tueusesnaturelles»issuesd’undonneurpourtraiterlesmétastaseshépatiques.

Résultats obtenus Uneprocéduredepurificationetdeproductiondecellulestueusesnaturellesaétémiseenplaceauseindel’unitédethérapiecellulairedel’EtablissementFrançaisduSang(EFS)BourgogneFrancheComté.L’équipederechercheamontréquecescellulestueusesnaturellesétaientcapablesdereconnaîtreetdedétruiredescellulesdecancerducolonrésistantàlachimiothérapie.Unprotocolederecherchecliniqueadoncpuêtreinitié(étudeNKEGFR-01)aveclesoutiendel’INCA(InstitutNationalduCancer).Lescel-lulestueusesnaturellessontpurifiéesàpartird’undonneurfamilialouvolontaireetactivéesinvitro.Cescellulessontensuiteréinjectéesparvoieintra-artériellehépatiquepourfavoriserletransfertdescellulestueusesnaturellesdansleslésionshépatiques.Lespremiersrésultatsontmontrél’absencedetoxicitéspécifiquedecetteprocéduredethérapiecellulaire.

Avancées L’absence de toxicité de cette procédure de thérapie cellulaire incite à prolonger le déve-loppement de ce protocole.

6

26

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-04Etude de NF-KappaB dans les syndromes myélodysplasiques comme cible thérapeutique potentielle

Datedelasubvention:2005G.Kroemer,CNRSdel’InstitutGustaveRoussydeVillejuifetl’HôpitalAvicennedeBobigny

Contexte scientifique NF-kappaBestun facteurde transcriptionquiparticipeaucontrôlede l’expressiondugénomedansbeaucoupdecellules.Pourêtrefonctionnel,NF-kappaBdoitêtreactivé.Parexemple,danslescellulesdusystèmeimmunitaire,NF-kappaBestactivéenréponseauxagentspathogènes.Quandsonactivationn’estplusréguléeetresteconstante,NF-kappaBpeutsecomportercommeunoncogène.Danscecas,NF-kappaBpeutempêcherleprocessusdemortcellulaireetcontribueràlarésistanceàlachimiothéra-piedescellulescancéreuses.

Question posée, ObjectifsPour déterminer si NF-kappaB peut contribuer à la pathogénie des syndromes myélodysplasiques(SMD)etdesleucémiesaiguësmyéloïdes(LAM)quiconstituentlacomplicationdesSMD,l’équipearecherchésiNF-kappaBétaitactivédanscespathologiesetsil’activationdeNF-kappaBétaitnécessaireàlasurviedescellulesdeSMDetLAM.

Résultats obtenus L’équipeadoncrecherchésil’inhibitiondel’activationdeNF-kappaBpouvaitprovoquerlamortdescel-lulesdanslesSMDetlesLAM.DanslescellulesSMDouLAM,NF-kappaBestactivépardeuxprotéinesayantuneactivitékinase:lerécepteurFlt3etlakinaseATMquiconvergentsuruneenzymeactivatricedelavoieNF-kappaB(appeléeIKK). IlaétémontréquedesdroguesquiinhibentlesactivitésdecesmoléculesactivatricesdelavoieNF-kappaB(lerécepteurdeFlt3,ATMouIKK)pouvaienttuersélective-mentlescellulesdeMDSetdeLAM,alorsqu’ellessontsanseffetsurlescellulesnormalesdelamoelleosseuse.

AvancéesLa survie des cellules de MDS et de LAM dépend donc de l’activation de NF-kappaB, ses activateurs Flt3, ATM ou IKK constituent donc des cibles thérapeutiques potentielles pour le traitement des MDS et de LAM.

7

27

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-05Induction de l’apoptose par l’acide rétinoïque dans les syndromes hyperéosinophiles

Datedelasubvention:2005C.ChomienneetP.Fenaux,InsermU-718HôpitalSaintLouisdeParisetl’HôpitalAvicennedeBobigny

Contexte scientifiqueLaleucémiechroniqueàéosinophiles(LCE)estcaractériséeparl’accumulationdegranulocyteséosino-philesdanslesangetlesorganes.ElleestdueàuneanomaliechromosomiquequigénèreunekinaseFIP1L1-PDGFRdontl’activitéentrainelaproliférationanormaledeséosinophiles.LespatientsatteintsdeLCEpeuventêtretraitésavecl’ImatinibMesylate(Glivec®)quiinhibel’activitédelakinaseFIP1L1-PDGFR.Toutefois,lesétudescliniquesmontrentquecetraitementn’estpasoptimumetquedesrechutesfréquentessontobservéesduesàl’émergencedecellulesrésistantesauGlivec®.

Question posée, objectifsL’aciderétinoïquetout-trans(ATRA)estunmédicamentutiliséencliniquepourlathérapiedelaleucémiepromyélocytaireaiguë.L’équipearecherchésil’ATRAseulouencombinaisonavecleGlivec®pouvaitavoirunintérêtthérapeutiquepourlapriseenchargedelaleucémiechroniqueàéosinophiles.

Résultats obtenusLestravauxréalisésmontrentquel’ATRApeutprovoquerlamortprogrammée(apoptose)descellulesleucémiquesisoléesdepatientsatteintsdeLCE.Deplus,ilsmettentenévidencequel’associationdel’ATRAavecl’ImatinibMesylateexerceuneeffetanti-leucémiqueplusimportantquechacunedesdro-guesséparément.

AvancéesLa mise en évidence de l’effet anti-leucémique de l’ATRA, seul ou combiné à des médica-ments de type Glivec® peut servir de base pour de futures approches thérapeutiques des leucémies chroniques à éosinophiles.

8

28

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-06Les kinases oncogéniques dans les syndromes myéloprolifératifs : caractérisation de nouveaux gènes et de nouveaux mécanismes-

Datedelasubvention:2005D.Maraninchi,InsermUMR599etInstitutPaoliCalmettedeMarseille

Contexte scientifiqueLessyndromesmyeloprolifératifs(SMP)sontdesmaladiesdusangetdelamoelleosseusequiévo-luentinéluctablementversunetransformationenleucémieaigüe.LesSMPsontduesàdesprotéinesanormalesquisontgénéréesaucoursd’échangesentredeuxchromosomesdistoinctsappeléstranslo-cations.LeSMPleplusfréquentestlaleucémiemyéloïdechroniquedueàunetranlocationquiengendrelaprotéineBCR-ABL.MaisilexistedesSMPditsatypiquesquisontplusraresetimpliquentd’autrestranslocations.

Question posée, ObjectifsLacaractérisationmoléculairedenouvellestranslocationsdanslesSMPatypiquespermettrademieuxcomprendrelesmécanismesdelaleucémogenèseetensuited’adapterlestraitements.L’équipeapourobjectifdecaractériserlesprotéinesexpriméesanormalementdanslescellulesdespatientsetquipour-raientparticiperàlaproliférationnoncontrôléedelacelluleleucémique.

Résultats obtenusL’équipeaidentifiédansunSMPatypiqueunetranslocationparticulièrequigénéreuneprotéinePCM1-JAK2. Elle a ensuite montré que cette protéine anormale PCM1-JAK2 était exprimée dans plusieurspatientsatteintsdeSMPatypiquemaiségalementdansuneleucémieaigüeetdansunlymphome.LaprotéinePCM1estconnuepoursonrôlecentraldanslecontôledeladivisioncellulaire.IlestprobablequelaprotéineanormalePCM1-JAK2favoriselaproliférationleucémiquesuiteàundysfonctionnementdeladivisioncellulaire.

AvancéesLa protéine PCM1-JAK2 peut être considérée comme une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement des SMP atypiques présentant cette translocation.

9

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-071

29

Recherche de marqueurs pronostics dans la Leucémie Myéloïde Chronique.

Datedelasubvention:2005M.Mohty,institutPaoliCalmettesdeMarseille

Contexte scientifiqueLaleucémieMyéloïdeChronique(LMC)estunemaladierare,avecenviron600nouveauxcasenFrancechaqueannée.Cettemaladiesedéveloppeleplussouventchezlespersonnesâgées(environ50ans),maistouteslestranchesd’âgepeuventêtretouchées.Lesdéveloppementsmédicamenteuxdeces10der-nièresannéesontpermisdetraiterlespatientsavecdesmédicamentsappelés«inhibiteursdetyrosinekinase».Cesmédicamentspeuventempêcherl’activitédelaprotéineanormaleBCR-ABLquiestres-ponsabledecetteleucémie.Ainsi,lespatientsquireçoiventcesmédicamentsbénéficientd’unelonguerémission.

Question posée, Objectifs Endépitdecesgrandesavancéesenmatièredetraitement,lesévolutionsdelaLMCrestenttrèshété-rogènes.Certainspatientspeuventprésenterrapidementunerechute,malgré le traitement.Pourcetteraison,ilparaîttrèsimportantderechercherchezlespatientsatteintsdeLMCdenouveauxmarqueursquipermettentdemieuxcaractériserlepronosticdespatientsetd’identifierceuxquirépondrontmalautraitement.

Résultats obtenus Denouveauxmarqueurspronosticsutilespourévaluerl’évolutiondelaLMContétédéfinis.Cependant,ilsdoiventêtrevalidéssurd’autressériesdepatients.

Avancées La caractérisation de nouveaux facteurs pronostics de la LMC permet un meilleur ajus-tement du traitement. Ces marqueurs pourraient aussi être exploités pour améliorer le pronostic d’autres leucémies.

10

1

30

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-08Adhésion, prolifération et leucémogenèse.

Datedelasubvention:2005S.Manenti,InsermetCHUdePurpanToulouse

Contexte scientifiqueDanslamoelleosseuse,certainescellulesquientourentlescellulesimmaturesàl’originedescellulesdusang,produisentdesmoléculesquirestentdanslesespacesintercellulaires,constituantunematriceextracellulaire:lemicroenvironnementmédullaire.Cettematricejoueunrôleimportantdansledevenirdescellulesdusang.Danslecontextedesleucémiesaiguësmyéloïdes(LAM),lamatriceextracellulairecontrôleaussicertainespropriétésdescellulesleucémiques.

Question posée, Objectifs Cetteéquipeétudiel’importancedumicroenvironnementmédullairesurlaproliférationdescellulesleu-cémiques,ainsiquesurleurrésistanceauxdroguesutiliséesdanslesprotocolesthérapeutiques.

Résultats obtenusLesrésultatsmontrentquelescellulesleucémiquesontunniveaudeproliférationplusélevélorsqu’ellesinteragissentavecdesmoléculesde la matriceextracellulaire.Cetteaugmentationde laproliférationdescellulesestdueàl’accumulationd’uneprotéinequiparticipeaucontrôledelaprolifération,laphos-phataseCDC25A.CestravauxmontrentaussiquelakinaseLynestsurexpriméeetsuractivéedanslesLAMsetqu’elleparticipeàlaproliférationanormaledecescellules.IlsmontrentégalementquelakinaseGSK3betaestactivéedanscesystèmeetpeutconstitueruneciblethérapeutiquepotentielle.L’adhésionàlamatriceextracellulaireaugmentelarésistancedescellulesleucémiques,enassociationavecl’effetdefacteurssolubles(Wnt)sécrétéspard’autrescellulesdelamoelle(lesostéoblastes).

Avancées Les molécules impliquées dans le contrôle de la prolifération et dans les mécanismes de résistance des cellules leucémiques aux drogues sont de nouvelles cibles thérapeutiques et leur caractérisation ouvre de nouveaux champs d’investigation pour de nouvelles dro-gues thérapeutiques

11

1

31

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-09Analyse des mécanismes permettant la génération in vitro de glo-bules rouges humains. Application à la production de masse dans un but transfusionnel.

Datedelasubvention:2005L.Douay,ServiceHématologieBiologique,HôpitalTrousseau

Contexte scientifiqueLatransfusionsanguineestdansdenombreusessituationsd’urgenceetchroniquesleseultraitementsymptomatique.L’approvisionnementenproduitssanguinsreposesurledonvolontaire.Chaqueannée,90millionsdeconcentrésdeglobulesrouges(CGR)sontcollectésetdistribuésdanslemonde.Maiscesdonsserontviteinsuffisantsfaceàdesbesoinstransfusionnelsgrandissants,liésengrandepartieauvieillissementdelapopulation.

Question posée, objectifsDevantlerisquedepénurie,unenjeumajeurdesantépubliqueestdedisposerdesourcescomplémen-tairesdeglobulesrougespourlatransfusionsanguine.Danscecontexte,l’équipeaélaboréunprotocoleexpérimentalpermettantdeproduireinvitrodeglobulesrougesfonctionnelsutilisablesàdesfinstrans-fusionnelles.Cetteproductionest réaliséeàpartirdecellulessoucheshématopoïétiquesquipeuventgénérerpardifférenciationdescellulesspécialiséescommelesglobulesrouges.

Résultats obtenusDes cellules souches hématopoïétiques ont été prélevées dans la moelle d’un volontaire sain et ontétécultivéesdansdesconditionsquileurpermettentdesedifférencierenglobulesrouges.L’équipeacontrôléquelespropriétésbiochimiquesetcellulairesdecesglobulesrougesproduitsinvitroétaientidentiquesàcellesdesglobulesrougesprélevéschezdesdonneurs.Elleaaussivérifiéquecesglobulesrougesproduitsinvitroontunesurvieetuncomportementdansl’organisme(transfusionàdessourisettransfusionàunpremierreceveurhumain)comparablesàceuxdesglobulesrougestransfusés«clas-siques».

AvancéesCette étude établit la preuve que la génération de globules rouges fonctionnels à partir de cellules souches hématopoiétiques est possible. Cette production doit maintenant être optimisée pour aboutir à une application clinique transfusionnelle, soulevant de véritables problèmes technologiques compte tenu du volume nécessaire à la production d’un nombre élevé de globules rouges.

12

1

32

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-10Interactions récepteurs-ligands dans la lyse NK des leucémies ai-gües myéloblastiques et mise en place d’un essai clinique d’immu-nothérapie.

Datedelasubvention:2005H.Dombret,HôpitalSaintLouisdeParis

Contexte scientifiqueLescellulesNK(pour«naturalkiller»oucellules tueusesnaturelles)sontdes lymphocytesquiontla capacité de reconnaître et de tuer les cellules tumorales. Plusieurs sous-populations de NK sontidentifiables par des marqueurs de surface. Deux sous-groupes prédominants de NK sont appelés«CD56bright»et«CD56dim».CD56estunrécepteurprésentàlasurfacedesNKquireconnaîtdesprotéinesprésentesàlasurfacedescellulestumorales.Cesdeuxsous-groupesontdespropriétésdiffé-rentesdansleurfonctionetleurlocalisationdansl’organisme.

Question posée, Objectifs L’objectifétaitdecomparer lescaractéristiques fonctionnellesdescellulesNKdespatientsLAMaveccellesdescellulesdeLAMpourdéterminersileprofildesmarqueursdesurfacedesNKpermettaitdeprévoirleurcapacitéàreconnaîtrelescellulesleucémiquesetàleséliminer.Cesanalysesontétémenéessur49patientsatteintsdeLAMaumomentdudiagnosticetpendantletraitementdelamaladieetlorsdeséventuellesphasesderechute.

Résultats obtenusLesrésultatsmontrentquelaréductiondunombrederécepteurssurlesNKCD56brightaudiagnosticestassociéeàunrisqueaccruderechutedansunsous-groupedepatientsleucémiques.Cesanomaliess’accompagnentd’uneefficacitéréduiteàdetruirelescellulestumorales.LeprojetaainsimisenévidencedesanomaliesspécifiquesdescellulesNKCD56brightdansungroupedepatientsdemauvaispronostic,cequin’étaitpasconnuauparavant.

Avancées Sur un plan thérapeutique, ces résultats peuvent conduire à des traitements visant à acti-ver spécifiquement la sous-population « CD56bright », par exemple à l’aide de cytokines, comme l’interleukine 15 (IL-15).

13

1

33

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-11Registre des neutropénies sévèresEtude de la corrélation génotype phénotype dans le syndrome de Shwachman Diamond.« facteurs de risque des transformations leucémiques dans la ma-ladie de shwachman »

Datedelasubvention:2005G.LevergeretJ.Donadieu,Grouped’étudedesneutropéniesdel’HôpitalTrousseau

Contexte scientifiqueLesneutropéniescongénitalessontdesmaladiesrarescaractériséesparundéficitchroniqueenpolynu-cléairesneutrophilessanguinsentraînantunrisqueinfectieux.Cespatientsprésententaussiunrisqueimportantdetransformationleucémique.LaplusfréquentedecesmaladiesestlesyndromedeShwach-man-Diamond(SDS)danslaquellelegèneSBDS(Shwachman–Bodian–Diamondsyndrome)estmuté.Legroupefrançaisaestiméà30%lerisquedetransformationleucémique(résultatspubliésen2005)chezcesmalades.

Question posée, objectifs Cegroupeatentédecaractériserlesfacteursderisquedecestransformationsleucémiques.

Résultats obtenus LesrésultatsmontrentquechezlespatientsatteintsdusyndromedeShwachman-Diamond:

-descomplicationshématologiquessévèresaboutissentàl’apparitiondemyelodysplasieset decytopéniesréfractairesnonclonales,

-legénotype(c’est-à-direletypeexactdemutations)dugèneSBDSn’estpascorréléavec l’apparitiondeleucémieoudecytopéniesréfractaires,

-unecorrélationforteexisteentrel’âgeaudiagnostic(moinsde3moisouau-delàde3mois), lesparamètreshématologiquesdudiagnostic(tauxdeneutrophiles,plaquetteset hémoglobine)etlerisquedecomplicationshématologiquessévères,

-unecorrélationforteesttrouvéeentredéficitenvitamineAetcytopénie.

Avancées Les résultats de cette étude montrent que l’évolution du syndrome de Shwachman-Dia-mond est complexe. Il faut donc classer les patients SDS en groupes de risque et adapter le traitement aux différents groupes.

14

1

34

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2005-12Epidémiologie et impact pronostique des anomalies moléculaires associés aux leucémies aiguës myéloblastiques de l’enfant. Etude Ancillaire du protocole ELAM2.

Datedelasubvention:2005P.BallerinietLandran,GroupeLAME,HôpitalTrousseaudeParisetHôpitalCalmettedeLille

Contexte scientifiqueLesLAMdel’enfantconstituentunensembledepathologiescomplexes,difficilesàguérir.80nouveauxcasparansont répertoriésen France.Beaucoupdeprogrèsontétéenregistrésdepuis ledébutdesannées2000:reconnaissancedesanomaliesmoléculairestouchantlastructuredesgènes(cassures,délétions,mutations…)etcompréhensiondesmécanismesderégulationdel’expressionl’informationgénétique.L’analysecytogénétiquedescellules leucémiques-c’est-à-dire l’étudedunombreetde lastructuredeschromosomes-resteparmilescritèrespronostiquesderéférenceetontpermisdedéfinirtroisgroupespronostiquesdesLAM:(1)lesleucémiesàbasrisque,(2)lesleucémiesderisqueintermé-diaireet(3)lesleucémiesàhautrisque.Récemment,desétudesglobalesdugénomeetdel’expressiongéniquedanslescellulesleucémiquesontdonnédesnouvellesinformationsutilespour(re)définirleprofilpathologiquedechaqueLAM.

Question posée, objectifsL’objectifprincipaldecetteétudeaétéd’analyserl’expressiondegènesimportantspourlaproliférationetl’auto-renouvellementdelacelluleleucémiqueetdemesurersil’expressiondecesgènesavaientunevaleurpronostiquedelaréponsedelamaladieauxthérapies.

Résultats obtenusCetteétudeconfirmelerôleprépondérantdesgènesimpliquésdansledéveloppementetdansl’auto-renouvellementdescellulessoucheshématopoïétiquesdanslatransformationleucémique,notammentdesgènesHOXAetB.Parailleurs,l’importancedesgènesSALL4etBMI1aétéobservée.L’expressioninappropriéedecesgènesdanslescellulesleucémiques,àdestauxsignificativementplusélevésquedanslescelluleshématopoïétiquesnormales,contribueàdéfinirlerisquederechutedesLAMdel’enfant.

Avancées La caractérisation de l’importance des modifications des gènes HOXA et B, SALL4 et BMI1 permet de considérer que ces gènes pourraient être de nouvelles cibles thérapeutiques pour le traitement des leucémies aiguës myéloblastiques de l’enfant.

15

1

35

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-01Etude de phase II, multicentrique, en ouvert, évaluant la dasatinib chez les patients atteints de leucémie aiguë myéloblastiques (LAM) à core binding factor (CBF) résistants à la chimiothérapie conven-tionnelle ou en rechute moléculaire. Etude DasaCBF.

Datedelasubvention:2006N.Ifrah,IntergroupeFrançaisdesleucémiesaiguësmyéloblastiques(GroupeALFAetGOELAMS)etlaboratoiresd’hématologiedesCHUdeLille,SaintLouisdeParis,d’AngersetdeToulouse

Contexte scientifique Une certaine catégorie de leucémies aiguës myéloblastiques (LAM) présente des mutations dans lesgènescodantlesprotéinesrégulatricesquifontpartieducomplexeCBF,«corebindingfactor».EllessontappeléesLAM-CBF.Parailleursd’autresmutationssont retrouvéesdans lesLAM-CBF.Cesontdesmutationsdanslesgènescodantdesmoléculesàactivitékinase(enzymesquiphosphorylentlesmoléculesrégulatrices).Unedrogueappeléedasatinibestutiliséedansletraitementdecespathologiespourinhiberl’activitédeskinases.

Question posée, objectifs CeprojetmetenplaceuneétudemulticentriquedephaseIIafind’évaluerl’efficacitédudasatinibdansletraitementdesLAM-CBF.

Résultats obtenus Lamiseenplacedecetteétude,quifaitsuiteàcellequiaétémiseenplaceen2006(LAM-CBF2006)aétéréaliséeparl’attachédeRechercheCliniqued’Angers.Uneconventionaétésignéepar6hôpitaux.Desoutilsontétémisenplacepouroptimiserlaqualitédel’essai:classeursinvestigateurs,procéduresd’inclusion(notesd’informationspourlepatient),fichesdeconsentement,procédured’envoideséchan-tillons,tableaurécapitulatifdesrésultats….

Avancées Les résultats de cette étude devraient préciser l’effet de cette drogue dans le traitement des LAM-CBF.

16

1

36

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-02Caractérisation des mécanismes de résistance à l’imatinib dans les leucémies aiguës lymphoblastiques à chromosome Philadelphie et lors de la progression de la Leucémie Myéloïde Chronique.

Datedelasubvention:2006S.HayetteetF.Nicoloni,laboratoiredecytogénétiqueetbiologiemoléculaireduCHLyonSudetleserviced’hématologiecliniqueduCHUdeLyon

Contexte scientifiqueL’ImatinibMésylate(Glivec®)estlepremieragentthérapeutiqueutilisédansletraitementdelaLeucé-mieMyéloïdeChronique(LMC)etdesLeucémiesAiguëslymphoblastiquespossédantlechromosomeanormalditchromosomedePhiladelphie,(LALPh+).LeGlivec®inhibel’activitédelaprotéineBCR-ABLquiestexpriméeparlechromosomePhiladelphieetestresponsabledelaleucémogénèse.Cependant,certainspatientsdeviennentrésistantsautraitement.

Question posée, Objectifs CeprojetderechercheapourobjectifdecaractériserlesmécanismesdelarésistanceauGlivec®pourtrouverdenouveauxtraitements.Iltented’évaluersileskinasesSRC,ensesubstituantàlakinaseBCR-ABL,seraientresponsablesdel’insensibilitédescellulesleucémiquesàl’IM.

Résultats obtenusL’équipearéaliséuneanalysequantitativedeskinasesSRCsurdespatientsatteintsdeLMCoudeLALPhi1,audiagnostic,àlaréponsesousImatinibMésylateoulorsdelarésistancesousImatinibMésylate(s’ilyalieu).CetteétudeamontréqueleskinasesSRCsontaugmentéeslorsdel’acutisation(phasedetransformation)desLMCetLALPhietsontassociéesàl’acquisitiondelarésistanceàl’Imatinibdans30%descasdeLMCet100%descasdeLALPhi+.

AvancéesCe résultat pourrait avoir un impact majeur sur le choix de la thérapeutique à administrer aux patients atteints de LMC ou de LAL Phi1. En effet, le dasatinib est un inhibiteur spéci-fique des SRC et serait donc un nouveau traitement possible lors des phases de transfor-mation et de la résistance au Glivec dans ces pathologies.

17

1

37

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-03Notch1 et oncogenèse des Leucémies Aiguës Lymphoblastiques T (LAL-T)

Datedelasubvention:2006V.AsnafietH.Dombret,Unitéd’InvestigationBiologiquedel’HôpitalNeckerEnfants-Maladesetleserviced’hématologieadultedel’HôpitalSaintLouisàParis

Contexte scientifiqueLa leucémie lymphoblastiqueaiguëT (LAL-T)estuncancerdusangquiest caractérisepar laproli-férationanormaleet leblocagedanslamaturationdecellulesissuesdela lignéelymphocytaireT.Lepronosticdecettemaladierestedéfavorable,notammentencasderechuteaprèstraitement.

Question posée, ObjectifsBienquedemultiplesanomaliesgénétiquesaientétéidentifiéesdanslesLAL-T,ellesnepermettentpasd’identifierunsous-groupedepatientsetdedéfiniruntraitementspécifiquepourcesous-groupe.Lacaractérisationdenouveauxfacteurspronostiquesquiidentifientdessous-groupesdepatientssuscep-tiblesdebénéficierd’untraitementplusadaptéestdoncunenjeuimportantdelarecherchemédicaledanscedomaine.LavoiedesignalisationenavaldesrécepteursNOTCHestactivéedans50%desLAL-Tpédiatriques.CetteactivationestdueàdesmutationsdeNOTCHoud’undesesrégulateursFBXW7.L’objectifdece travailaétéd’évaluer l’incidenceet l’impactpronostiquedesmutationsdeNOTCHetFBXW7danslesLAL-Tdel’adulte.

Résultats obtenusL’étude réaliséeauprèsde141adultesatteintsdeLAL-T,montreque62%d’entreeuxprésententdesmutationsdeNOTCH1,24%présententdesmutationsdeFBXW7et28%n’ontpasdemutationsdanscesdeuxgènes.LadétectionsimultanéedemutationsdanslesgènesNOTCHetFBXW7estlefacteurleplusétroitementassociéàuneévolutionfavorableetaunevaleurpronostiquesupérieureàcelledeladétectiondeNOTCH1seule.

AvancéesDes mutations dans les gènes NOTCH1 et FBXW7 identifient ainsi un groupe important de patients dont la pathologie présente une évolution favorable. L’identification de ces muta-tions constitue un facteur de bon pronostic et représente un marqueur clinique utilisable pour une classification thérapeutique des patients LAL-T adultes.

18

1

38

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-04Etude des anomalies de l’immunité innée dans les syndromes myé-lodysplasiques : conséquences physiopathologiques et perspec-tives thérapeutiques

Datedelasubvention:2006A.Caignard,InsermU753InstitutGustaveRoussyàVillejuifetserviced’hématologiecliniquedel’HôpitalAvicenneàBobigny

Contexte scientifique Lessyndromesmyélodysplasiques(MDS)constituentungroupedemaladiespré-leucémiquesquipré-sententdesanomaliesdanslescellulessouchesdelamoelleosseuse.Lescellulesimmunescytotoxiquesdusang,notammentlescellulesNK,NKTetlymphocytesTγδ,sontcapablesdereconnaîtreetdedétruirelescellulesleucémiques.Eneffet,lescellulesleucémiquessyn-thétisentdesmoléculesmodifiéesquel’onneretrouvepasdanslescellulesnormales.Lescellulescyto-toxiquesreconnaissentcesmoléculesmodifiéesetéliminentlescellulesquilessynthétisent.

Question posée, ObjectifsLescellulescytotoxiquesdespatientsatteintsdesyndromesmyélodysplasiquesont-elles lesmêmespropriétésquelescellulescytotoxiquesnormales?Sont-ellescapablesdereconnaitrelescellulesleu-cémiques?LafonctiondeslymphocytescytotoxiquesTγδaétéétudiéechezdespatientsmyélodyspla-siques.

Résultats obtenusLesrésultatsmontrentqueleslymphocytesT(particulièrementleslymphocytesTγδ)sontennombreréduitchezcertainspatientsMDS.Cespatientsdéveloppentunemaladieautoimmunerésultantde ladiminutionde la réponse immunitaire.Les lymphocytesprolifèrent trèspeuchezcespatients,cequipourraitexpliquer la réductionde leurnombre.Parcontre, les lymphocytesTγδdecespatientssontcytotoxiquesetsécrètentdescytokinesquisonttoxiquespourlescellulesleucémiques.

AvancéesCes résultats combinés aux résultats antérieurs de l’équipe montrent que les cellules cyto-toxiques du sang prolifèrent moins chez les patients MDS que chez les témoins et qu’une restauration de leur fonction pourrait améliorer leur effet anti-leucémique

19

1

39

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-05Etude de la domiciliation des cellules souches leucémiques dans les LAM : rôle et régulation du récepteur CXCR4.

Datedelasubvention:2006F.Louache,InsermU790InstitutGustaveRoussyàVillejuifetleserviced’hématologiecliniquedel’HôpitalSaintLouisàParis

Contexte scientifique Laleucémieaiguemyéloïde(LAM)estuncancerdesglobulesblancsquiprendnaissancedanslamoelleosseuse.Sontraitementestbasésurdeschimiothérapies.Cependant,tropsouventdesrechutesduesàunerésistanceàceschimiothérapiessontobservées.Ilestdoncessentieldecomprendrecommentsedéveloppentlesmécanismesderésistanceauxchimiothérapiesdanslesleucémies.

Question posée, Objectifs Lemicro-environnementdelamoelleosseuseprotègelescelluleshématopoiétiquesnormalesouleu-cémiques.Unensemblecomplexed’interactionsentredesmoléculescirculantes(cytokinesetchemo-kines) et leurs récepteurs exprimés à la surface des cellules est responsable de la domiciliation descelluleshématopoiétiquesdanslamoelleosseuse.UnrôlemajeurdanscettedomiciliationestjouéparlachemokineSDF-1etsonrécepteurCXCR4.

Résultats obtenus PourétudierlerôleducoupleCXCR4/SDF1danslesinteractionsdescellulesdeLAMaveclamoelleosseuse,unmodèledetransplantationdecellulesleucémiquesdansdessourisimmuno-deficientesaétéutilisé.Ilaétémontréquel’inhibitiondeCXCR4oudeSDF1danslescellulesgrefféesentrainaitunediminutionimportantedunombredescellulesdeLAMdanslamoelle.Ainsi,l’inhibitiondesinteractionsdescellulesleucémiquesaveclamoellepermetuneéradicationdescellulesleucémiques.

Avancées Le blocage de CXCR4 pourrait être une stratégie thérapeutique pour empêcher les cellules leucémiques de résider dans la moelle osseuse et entrainer leur élimination.

20

1

40

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-06Recherche d’évènements génétiques impliqués dans la pathogénie de la myélofibrose primitive

Datedelasubvention:2006C.Bilhou-NaberaetSGiraudier,LaboratoireduCHUduKremlin-Bicêtre,InsermU602HôpitalPaulBrousseàVillejuifetserviced’hématologiecliniquedel’HôpitalHenriMondoràCréteil

Contexte scientifiqueLamyélofibroseprimitiveestcaractériséeparlaproliférationclonaledescellulessouches/progéniteurshématopoïétiques.Cescellulessontprésentesdanslamoelleosseuseetsontcapablesdegénérerlesdifférenteslignéessanguines.Laproliférationdecescellulesestassociéeàunemyélofibrose.Aucunemutationspécifiquedelamaladiequipuisserendrecomptedudéveloppementduclonecellulairepatho-logiquen’avaitétéidentifiée.

Question posée, ObjectifsL’objectifdecetravailétaitderechercherdesanomaliesgénomiquesquisoientspécifiquesdescellulesenproliférationetdedéterminerlesconséquencesdecesanomaliessurleplanphysiopathologique.Destechniquesd’analysedugénomedehauterésolutionontétéutiliséespourétudierl’ensembledesgènesexprimésdanslescellulespathologiquesissuesdepatients.

Résultats obtenusCetteétudeaidentifiéuneanomaliedanslegèneFLT3danslesprogéniteurshématopoïétiquesdepa-tientsatteintsdemyélofibroseprimitive.L’équipeamontréquecetteanomalieétait responsabledelaproliférationdesprogéniteurshématopoïétiquesetconstituaitainsiunesignaturedecettepathologie.

AvancéesFLT3 est une kinase dont l’activité peut être inhibée par certaines drogues. Cette étude incite à considérer que les inhibiteurs de la kinase FLT3 pourrait être une option thérapeu-tique pour le traitement de la myélofibrose primitive.

21

1

41

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-07Caractérisation des voies dépendantes de Ras mises en jeu dans les SMD et LAM secondaires : implication de IEX-1 et PP2A

Datedelasubvention:2006F.PorteuetM.Fontenay,InsermU567InstitutCochinetserviced’hématologiedel’HôpitalCochinàParis

Contexte scientifique Lessyndromesmyélodysplasiques(SMD)représententungroupedemaladiespré-leucémiquesquipré-sententdesanomaliesauniveaudescellulessouchesde lamoelleosseusequidonneront lesdiversescellulessanguines.Lamaladieévolueengénéralversuneleucémieaiguë.Lafréquencedecesyndromeestfaible(5/100000)maisaugmenteavecl’âge(80/100000après80ans)etestenconstanteaugmentationdepuisplusieursannées.Lacroissance,laproliférationetladifférenciationdescellulesimmaturesdelamoelleosseusesontcontrô-léespar les facteursdecroissance.Lesfacteursdecroissanceensefixantsurunecelluleenvoientunecascadedesignauxditevoiedesignalisationdufacteurdecroissanceàl’intérieurdelacellule.L’érythro-poïètine(EPO)estlefacteurdecroissancedescellulesquiproduirontlesglobulesrouges.C’estpourquoiletraitementparl’EPOestletraitementdechoixpourlesanémieschezlespatientsporteursd’unSMDdefaiblerisque.Cependant,seulement2/3despatientstraitésparl’EPOrépondentàcetraitementcequisuggèrequ’ilexistedesmécanismesderésistanceautraitement.

Question posée, Objectifs Certainespathologiessontassociéesàunesuractivationdesvoiesdesignalisationdesfacteursdecrois-sance.L’objectifprincipaldeceprojetétaitd’étudierlaréponsedescellulesimmaturesdeSMDauxfacteursdecroissance.L’hypothèseétaitquecesfacteursdecroissanceentraînentunetropforteactivationd’unevoiedesignalisationappeléevoiedesMAPkinasesetdeleurcible(IEX-1).

Résultats obtenus Cesétudesontdonnédesrésultatsinattendus.Alorsqu’uneaugmentationdel’activationdesvoiesdesi-gnalisationdesfacteursdecroissanceétaitattendue,c’estunediminutiondecetteactivationquiaétéobser-véedanslesSMD.Eneffet,dansuneétudeprospectivede94patientsSMDdefaiblerisqueenintentiondetraitementparl’EPO,uneréductiondel’activationdelavoieMAPkinaseaétéobservéechez38patients.Cespatientssesontavérésêtrenon-répondeursautraitementparl’EPO.L’activationd’uneautrevoiedesignalisation,lavoieERK-IEX-1,estaussidiminuéechezlespatients.Commecettevoieparticipeàlarépa-rationdesdommagesàl’ADNetaucontrôledelastabilitédugénome,ladiminutiondesonactivationchezlespatientsSMD,pourraitfavoriserl’apparitiondemutationsetconduireàlatransformationleucémique.

AvancéesLa mise en place d’une thérapie qui pallie à ce défaut de signalisation peut être considérée comme une nouvelle approche thérapeutique pour les SMD.

22

1

42

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-08Etude de la résistance à l’imatinib dans les LMC, recherche de gènes prédictifs de la résistance

Datedelasubvention:2006B.Turcq,Laboratoired’hématopoïèseleucémiqueetciblesthérapeutiquesdel’UniversitéVictorSegalenBordeaux2etleCentreRégionaldeLutteContreleCancerdeBordeauxetduSud-Ouest

Contexte scientifiqueLaleucémiemyéloïdechronique(LMC)estcaractériséeparlaformationd’ungènedefusionBCR-ABLqui provoque la prolifération des cellules leucémiques. L’Imatinib Mesylate (Glivec®) est une droguequiinhibel’activitédeBCR-ABL.Pourcetteraison,letraitementdespatientsavecl’ImatinibMesylateconstitue le traitement de référence de cette maladie. Cependant dans 20% des cas, des résistancesapparaissentetlespatientstraitésrechutent.

Question posée, ObjectifsL’objectifdecetravailaétéderechercherdesgènesprédictifsdelarésistanceàl’Imatinibafindepouvoiradapterrapidementletraitement.

Résultats obtenus DeuxgènesprédictifsontétéidentifiésdanslescellulesdeLMC:lesgènescodantladéfensinealpha1-3etladéfensinealpha4.Uneétudedel’expressiondecesdéfensinesaétéréaliséechezdespatientsquisontsensiblesautraitementparl’ImatinibMesylateetdespatientsquisontrésistantsàcetraitement.Lesrésultatsmontrentquel’expressiondeladéfensinealpha1-3etdeladéfensinealpha4estfortementaugmentéechezlespatientsrésistants.Alorsquelarechutenepeutactuellementêtreidentifiéequ’aumomentoùl’expressiondeBCR-ABLaugmente,l’augmentationdesdéfensinesestdétectable6moisavantlarechute.Parailleurs,lamesureduniveaud’expressiondecesdéfensinesaumomentdel’ini-tiationdutraitementpermetdedistinguerlespatientsrépondeursdespatientsquidévelopperontunerésistanceautraitement.

Avancées L’expression des défensines est donc un marqueur précoce de la résistance à l’Imatinib et pourrait être utile pour prédire les patients atteints de LMC qui ne répondront pas au traitement.

23

1

43

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-09Eradication des cellules leucémiques résiduelles murines par im-munothérapie : établissement d’un modèle pré-clinique

Datedelasubvention:2006M.Colin,InsermU817del’InstitutdeRecherchesurleCancerdeLilleetleServicedesMaladiesduSangduCHRUdeLille

Contexte scientifique Malgrédenombreuxprogrèsréalisésdanslalutteanti-tumorale,lesthérapiesproposéesàcejoursontsouventinefficacesàlongterme.Descellulesrésistantesàlachimiothérapieapparaissentetsontres-ponsablesderechutes.Ilestdoncsouhaitablededétruiresélectivementcescellules.Pourcefaire,denouvellestechnologies,commelathérapiegénique(introductiondansunecelluledemoléculesd’ADN),sontappliquéesauxtraitementsdescancers.

Question posée, objectifsLescellulesrésistanteséchappentàlasurveillanceimmunitaireparl’expressiondecertainesmolécules(B7.1andB7-H1)oupardesmodificationsépigénétiquesquiaboutissentàlamodificationdel’expres-siondecertainsgènes.L’équipeadoncconçuuneapprochedethérapiegéniqueencréantdesoutilspourmodulerl’expressiondesgènesimpliquésdanscesmécanismesderésistance.

Résultats obtenusUnvecteuradéno-viralaétéconstruit.L’équipeapumontrerquecevecteurinduitspécifiquementl’ex-pressiond’unADNdansunmodèledecellulesleucémiquesrésistanteschezlasouris.

AvancéesIl est maintenant nécessaire de développer un modèle animal afin de tester la capacité de ce vecteur à induire la mort sélective de cellules leucémiques résiduelles.

24

1

44

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-10Evaluation de la chimiosensibilité au cours du traitement d’induc-tion de la LAM par mesure cinétique de la décroissance des blastes en cytométrie de flux.

Datedelasubvention:2008F.Lacombe,Laboratoired’hématologieCHUdeBordeauxetServicedesMaladiesduSangduCHUd’Angers

Contexte scientifiqueLes leucémiesaigüesmyéloblastiques (LAM)sontdescancersdescellulesdusang.Dans lamoelleosseuse,certainescellulesdites«immatures»doiventsedifférencierpourproduirelescellulesdenotresang:globulesrouges,plaquettesetglobulesblancs.Lescellulesimmaturesàl’originedesglobulesblancspeuventparfoissetransformeretperdreleursfonctionnalités.Lescellulesimmaturestransfor-mées,appelées«blastes»,vontsemultiplieractivementmaisnedonnerontpasdeglobulesblancs.Acôtédesblastes,persistentdescellulesimmaturesnormalesmaisleurfonctionnalitéestétoufféeparlesblastes.LetraitementdesLAMsconsisteàdétruirelesblastestransforméstoutenpréservantlescellulesimmaturesnormales,quipourrontdenouveausedifférencier.LesLAMssesoignentrelativementbienaveclestraitementsactuels,chezlespatientsdemoinsde60ans.Au-delàdecetâge,cestraitementslourdsettoxiquessontmaltolérésparlespatients.Lamoyenned’âgeconcernéeparlaLeucémieAigüeMyéloblastiquetouchemajoritairementdespatientsâgésdeplusde60ans.Ilestdoncimportantd’iden-tifierdenouveauxtraitementsplusefficacesetmoinstoxiques.

Question posée, ObjectifsLebutdecetteétudeaétédetesterl’efficacitéd’uneassociationdedeuxdroguesdansletraitementdesLAMs.:-lapremièremoléculebloqueuneactivitéenzymatiquequifavoriselaproliférationdescellules,elleestégalementutiliséepourletraitementd’autrescancers,-lasecondemoléculemodifiedespro-téinesquiassurentlasurviecellulaire,poussantlacelluletraitéeversunemortprogrammée.

Résultats obtenusDesmodèlescellulairesainsiquedesprélèvements issusdemoelledepatientsontétéutilisésdanscetravail.Danslesdeuxcas,l’associationdecesmoléculesàdesdosestrèsfaiblesprovoquelamortdescellulesleucémiquessansinduiredetoxicitévis-à-visdescellulesimmaturesnormales.Lesméca-nismesintra-cellulairespouvantexpliquercebénéficeontétépartiellementidentifiés,leshypothèsesdetravailsontencoursdevérification.

AvancéesLa combinaison de ces deux molécules permet de les utiliser à des doses suffisamment faibles pour ne pas détruire les cellules immatures normales tout en induisant la mort des cellules leucémiques.

25

1

45

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2006-11Caractérisation de l’instabilité génomique des cellules leucémiques dans le modèle de la Leucémie Myéloïde Chronique. Analyse et compréhension de ses conséquences sur la résistance et la pro-gression de la maladie sous traitement par un inhibiteur de tyrosine

kinase, l’Imatinib Mesylate (Glivec®).Datedelasubvention:2006C.Roche-Lestienne,LaboratoiredeGénétiquemédicale,l’INSERMU817etleServicedesMaladiesduSangduCHRUdeLille

Contexte scientifiqueLaleucémiemyéloïdechronique(LMC)est lapremière leucémiehumainedont lacausedirecteaétéidentifiée.Cetteleucémieestdueàuneanomaliechromosomique(chromosomePhiladelphie,Ph)quigénèreuneprotéinetyrosinekinase(diteBCR-ABL)dontl’activitéempêchelescellulesleucémiquesdemourir.Nontraitée,lamaladieévolueversunephased’accélération(criseblastique)caractériséeparlaprésencedecellulesindifférenciéesdanslesang.Cettephaseaigüeestassociéeàuneinstabilitégéné-tiquedelacellulesoucheleucémique.

Question posée, ObjectifsLespatientsatteintsdeLMCsonttraitésavecl’ImatinibMesylate,Glivec®,droguequiinhibel’activitédeBCR-ABL.Lacriseblastiqueestassociéeàunepertederéponseàcetraitement.Lacaractérisationdesmécanismesquiaboutissentàlacriseblastiqueestnécessairepourdemeilleursajustementsthérapeu-tiqueschezlespatientsdanslaphaseaigüedelamaladie.

Résultats obtenusL’équipearéaliséuneanalysedugénomedescellulessouchesleucémiquesprélevéeschezdespatientsatteints de LMC résistants au traitement par l’Imatinib Mesylate ou de patients sensibles à l’ImatinibMesylate.Desaltérationsdansplusieursrégionsdugénomesontassociéesàlapertederéponsethéra-peutiqueauGlivec®.CetteétudesoulignequedemultiplesaltérationsgénétiquesseproduisentchezlespatientsatteintsdeLMCqui,enassociationavecl’activitédeBCR-ABL,sontresponsablesdelaphaseaigüedelamaladieetdel’échappementautraitementdelaLMC.

AvancéesCes altérations moléculaires peuvent être considérées comme des cibles thérapeutiques et ouvrent des perspectives d’amélioration des protocoles thérapeutiques des LMC.

26

1

46

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-01Analyse multiparamétrique des leucémies/lymphomes T/NK/Myé-loïdes immatures comme modèle de cancers arrêtés proche des cellules souches cancéreuses

Datedelasubvention:2007E.Macintyre,HôpitalNeckeràParis

Contexte scientifique Letraitementd’uneleucémieaigueestdéterminéprincipalementparsonappartenanceàlalignéelym-phoïdeoumyéloïde.Cetteappartenanceestbaséehistoriquementsurlamorphologieetladétectiondesprotéinesexpriméesàlasurface,maisl’estdeplusenpluspardesanalysesmoléculaires.Cependant,ilestfréquentdeconstaterquelescellulesimmaturesdenombreusesleucémiesaigüesprésententàlafoisdescaractéristiqueslymphoïdesetmyéloïdescequirenddifficileleurclassificationetparvoiedeconséquencel’ajustementdutraitement.

Question posée, objectifsExiste-t-ildesmarqueursmoléculairesdescellulesleucémiquesimmaturesquipermettraientdemieuxlescaractériseretdemieuxadapterletraitement?Cesmarqueurspourraientêtreceuxquiontétécarac-térisésdanslescellulesimmaturesnormales(lesLMPpourLymphoidprimedMultipotentProgenitors).

Résultats obtenus Uneanalysemultiparamétriquedel’ensembledesgènesexprimésetdugénomeaétéréaliséesurungrandnombredeleucémiesimmatures.Lesrésultatsmontrentquedesmarqueurspermettentdedis-tinguerlesleucémiesàcellulesdendritiquesdesleucémiesmyéloïdesoulymphoïdes.Desmarqueurspermettantdedistinguerleucémieslymphoïdesetmyéloïdessontplusdifficilesàidentifier.CependantuneanomalieaétéobservéedanslecomplexeCBF(constituédeRUNX1etCBFß)quiestunrégulateurmajeurdel’hématopoïèse.D’autrepart,desmodificationsdel’étatdeméthylation(quireflètel’activitédesgènes)ontétéobservéespourcertainsgènesdanslesleucémieslymphoïdesLAL-Timmatures.

AvancéesLa capacité à moduler l’état de méthylation des gènes représente une voie prometteuse de traitement des leucémies. Par ailleurs, d’autres marqueurs phénotypiques sont en cours de caractérisation. Ces marqueurs pourraient permettre la réorientation des patients des protocoles LAM et LAL vers des protocoles de leucémies immatures plus appropriés.

27

1

47

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-02Fréquence et valeur pronostique des mutations de PAX5 dans les LAL-B de l’adulte

Datedelasubvention:2007E.Delabesse,HôpitaldeToulouse

Contexte scientifiqueLesleucémiesaiguëslymphoblastiquesB(LAL-B)sontcaractériséesparlaproliférationnoncontrôléede cellules lymphocytaires B bloquées dans la différenciation. Les progrès de la chimiothérapie ontaméliorégrandement lepronosticdesLAL-B,enparticulierchez l’enfant.Lesprogrès thérapeutiquessontmoindreschez lesadultes,principalementdu faitd’uneplusgrande toxicitémédicamenteuseetde ladiversitédesmutations trouvéesdanscesmaladies.Un traitementalternatifà lachimiothérapieest lagreffedemoelleosseusequipermetuneguérisondéfinitivedans lamajoritédescas,maisestune intervention très lourde.Unemeilleureconnaissancede labiologiedesLALpermettradedéfinirdesmarqueurspronostiquesquipourraientêtredesoutilsdécisionnelsdanslechoixdutraitementenfonctiondecepronostic.

Question posée, ObjectifsCesdernièresannées,ledéveloppementdestechniquesàhautdébitpouranalyserlegénomeapermisuneanalysesystématiquedesmutationssurvenantdanslegénomedescellulesleucémiquesaucoursdudéveloppementdelamaladie.Récemment,uneétudeaméricaineamontréquelegènePAX5,gèneessentielà ladifférenciationlymphoïdeB,étaitmutédans39%desLALde l’enfant, représentantunedesmutationslesplusfréquentesdecesleucémies.Ceprojetavaitpourobjectifdedéterminersicesmutationsétaientégalementprésenteschezlespatientsadultesetsicesmutationspouvaientreprésenteruncritèrededécisionpourlescliniciensentreuntraitementdetypechimiothérapieoulagreffedemoelleosseuse.

Résultats obtenusUne série de117 patients inclus dans le protocole national GRAALL03 visant à améliorer la prise enchargedesLAL-Bdel’adulte,aétéanalysée.Ellereprésente lapluslargecohortedepatientsadultesétudiéedanslemonde.DesmutationsdePAX5ontétédétectéesdans34%despatientsadultescequiestsimilaireàlafréquencedesmutationschezl’enfant.Deplus,cesmutationssontdemêmenaturequelesmutationsdePAX5décritesdanslesLALdel’enfant.

AvancéesCes mutations n’ont pas montré de valeurs pronostiques qui permettent de prendre en compte les mutations de PAX5 pour décider du meilleur traitement.

28

1

48

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-03Immunothérapie des hémopathies malignes par le clonage du re-cepteur de la transferrine.

Datedelasubvention:2007O.Hermine,HôpitalNeckeràParis

Contexte scientifiqueLesleucémiessontduesàlafoisàuneproliférationnoncontrôléeetàunblocagedelamaturationdecellulesimmaturesprésentesdanslamoelleosseuse,appeléesblastes.Actuellement,lesthérapiespro-poséesciblentlaproliférationcellulairedecescellulesetnesontpasassezefficacescardenombreusesrechutessontobservées.Ceprojetviseàciblerlamaturationdesblastesdelamoelleosseuse.Leferestunemoléculequijoueunrôleimportantdanscettematuration.L’équipeamontréquelescellulesleucémiquesétaientplussensiblesàlaprivationenferquelescellulesnormales.

Question posée, ObjectifsUneprivationenferpeut-elleêtreunmoyendeleverleblocagedematurationdesblastesleucémiques?Mieuxcaractériserlesmécanismesdecettesensibilitéàlacarenceenferdescellulesleucémiquesouvri-raitlavoieàdestraitementsinnovantsetmieuxtolérés.

Résultats obtenusL’équipeamontréquelescellulesleucémiquespeuventêtrecarencéesenferquandellessonttraitéespardesagentschélateursouunanticorpsquibloquent l’entréedu ferdans lescellules.Lescellulescarencéescessentdeproliférer,sedifférencientetàterme,meurent.Cettestratégiethérapeutiques’estavéréeprometteusechezunpatientatteintdeleucémie.

AvancéesCes traitements pourraient être particulièrement efficaces sur les cellules initiatrices de leucémies qui sont à l’origine des rechutes. De plus, un modèle de leucémie au laboratoire a été établi afin de confirmer les hypothèses ainsi que pour tester de nouvelles associa-tions thérapeutiques. Ceci constitue les étapes qui précédent un essai thérapeutique chez l’homme

29

1

49

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-04Role de la Fludarabine sur la niche hématopoïétique.

Datedelasubvention:2007V.Maguer-SattaetM.Berger,CHUClermont-FerrandetInsermdeLyon

Contexte scientifiqueLesLeucémiesLymphoïdesChroniques(LLC)sontdesleucémiesquitouchentlescelluleslymphoïdesetatteignentleplussouventlesadultesdeplusde55ans.Dans30à40%descas,cetteleucémienécessiteuntraitementàlaFludarabinequidétruitlescellulesleucémiques.Cependant,laFludarabinesembleavoiruneffettoxiquesurlescellulessoucheshéma-topoïétiques.Cescellulesdonnentnaissanceàl’ensembledescellulesdusang.Silespropriétésdescellulessouchessontaltérées,laproductiondescellulesdusangestmodifiée(diminutiondunombredeglobulesrougesoudeglobulesblancs)etdegravestroubless’ensuivent.

Question posée, objectifsLaFludarabinea-t-elleuneffetsurlescellulessoucheshématopoïétiquesnormales?Sicemédicamentaltéraitlescellulessouchesnormales,sonutilisationpourraitêtreremiseencauseàmoinsquelaprotectionsimultanéedescellulessoucheshématopoïétiquesnormalesnesoitpossible.

Résultats obtenusLe traitement des cellules souches hématopoïétiques par la Fludarabine modifie leurs propriétés demigrationetd’adhérence.Deplus,cemédicamentsembleêtretoxiquepourlescellules«nourricières»delamoelleosseusequientourentlescellulessoucheshématopoïétiques.Lorsdelaproductiondescellulesdusangparl’organisme,lescellulessouchessedécollentdescellulesnourricières.Danslecasd’untraitementparlaFludarabine,lescellulessoucheshématopoïétiquescolleraientdefaçonanormaleauxcellulesnourricièresdelamoelleosseuseetnepourraientplusgénérerlescellulesdusang.CesrésultatspourraientexpliquerladiminutiondunombredescellulesdusangobservéechezlespatientstraitésparlaFludarabine.

AvancéesCe résultat souligne l’importance de comprendre les mécanismes d’action de la Fludara-bine utilisée comme agent thérapeutique dans les LLC. La Fludarabine est efficace pour tuer les cellules leucémiques, mais elle peut modifier les propriétés de migration et d’ad-hérence des cellules souches hématopoïétiques qui sont nécessaires à la production de toutes les cellules du sang. Pallier cet inconvénient est donc un enjeu majeur pour la thérapie de ces leucémies.

30

1

50

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-05Résistance des cellules leucémiques lymphoïdes chroniques-B dans la cytotoxicité cellulaire dépendante du Rituximab.

Datedelasubvention:2007A.Quillet-Mary,HôpitalPurpandeToulouse

Contexte scientifiqueCetravailportesurlesLeucémiesLymphoïdesChroniques-B(LLC-B).Cetteleucémietouchelescel-luleslymphoïdesdetypeB(lymphocytesB).2500nouveauxcasenFrancesontdétectéschaqueannée.Letraitementstandarddecettemaladieassocieunechimiothérapie(Fludarabine+cyclophosphamide)etlerituximab,unanticorpsmonoclonal(FCR).Cependantunnombreimportantderechutesestobservéaprèscetraitement.

Question posée, objectifsCeprojetviseàmettreenplaceundiagnosticquiseraitétablitrèstôtaprèsledébutdutraitement.Cediagnosticétantplusfiableaideraitàl’orientationthérapeutique.Deuxquestionssontposées: -L’évolutiondunombredesdifférentescellulesdusangdansles2ansquisuivent letraitementest-ellecorréléeàl’évolutiondelamaladie? -L’existenced’unepopulationdecellulesleucémiquesrésistantesauxtraitementsest-elleun indicateurprédictifdelarechute?

Résultats obtenusSi,unanaprèsarrêtdutraitement,laproportiondecellulesleucémiquesdanslesangdespatientstraitésestsupérieureà1%,ilyadeforteschancesderechute.Unepopulationdecellulesrésistantesàlachimiothérapieaétéidentifiée,cettepopulationestrespon-sabledelarechutedelamaladie.Cescellulesrésistantessontencoursdecaractérisation.

AvancéesLa détection de cellules leucémiques ainsi que de la population cellulaire résistante dans le sang des patients, 1 an après le traitement, est un indicateur de la rechute de la maladie. L’étape suivante consiste à rechercher un moyen d’éradiquer cette population cellulaire résistante à la chimiothérapie, ce qui constituerait un progrès important dans le traitement des LLC-B.

31

1

51

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-06Etude et caractérisation de l’effet des agents modulant l’épigéné-tique sur la voie de la signalisation NF-KappaB dans les syndromes myélodysplasiques

Datedelasubvention:2005G.Kroemer,InstitutGustaveRoussyàVilljuifetHôpitalAvicenneàBobigny

Contexte scientifique Les syndromes myélodysplasiques (SMD) sont des états pré-leucémiques du sujet âgé qui évoluentdans30%descasenleucémieaiguemyéloblastique(LAM).LetraitementdesSMDestdansl’ensembleassezdécevantparticulièrementdanslesSMDde«hautrisque».L’allogreffedecellulessouchesresteleseultraitementcuratif,maisn’estaccessiblequ’auxpatientssuffisammentjeunesetayantundonneurfamilial.Ilaétémontréqu’unevoiedesignalisation*(appeléevoiedesignalisationNF-KappaB)impliquéedanslecontrôledelamortcellulaireétaitanormalementactivéedanslescellulesdepatientsatteintsdeSMD.

Question posée, objectifsUnenouvelleapprochethérapeutiquepourraitêtred’empêcherl’activationdecettevoiedesignalisation.Unemolécule,la5-azacytidine(AZA)quiagitsurlesprotéinesdecettevoiedesignalisationNF-KappaBetinhibesonactivationestactuellementutiliséedansletraitementdesSMD.L’équipeacherchéàcarac-tériserlemoded’actiondecettemolécule.

Résultats obtenusLesrésultatsdecetteéquipeontconfirméqueletraitementparl’azacytidineinduisaitlamortcellulaireeninhibantlavoiedesignalisationNF-KappaB.Parailleurs,ilsontcaractériséunemoléculequiseraitresponsablede l’activationdecettevoiedesignalisation. Ils’agitd’unekinase*appeléeATM(AtaxiaTelangiectasiaMutated)quijoueunrôledanslaréparationdel’ADN.Cestravauxsuggèrentquel’azacy-tidineauraituneffetàlafoissurlamortcellulaireetsurlaréparationdel’ADN.

AvancéesLa molécule ATM pourrait être une nouvelle cible thérapeutique dans les syndromes myé-lodysplasiques.

32

1

52

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-07Etude des mutations de c-Kit, FLT3, et Ras dans les LAM du groupe CBF.

Datedelasubvention:2007J.J.SOTTO,HôpitaldeLille,HôpitaldeNîmespourlesgroupesALFAetGOELAMS

Contexte scientifique LesLAMcaractériséespar lesanomaliescytogénétiques: t(8;21)qui implique leschromosomes8et21ouinv(16)quiimpliquelechromosome16constituentunsous-groupedeleucémies(groupeCBF)quisontconsidéréescommederelativementbonpronostic.Eneffet,ellesprésententuntauxélevédeRémissionComplète(RC),plusélevécomparativementauxautressous-groupesdeLAM.Néanmoins,30à50%decespatientsrechutent,unefréquencequirestetropélevée.DesmutationsdanslesgènesKIT,RASetFLT3ontétécaractériséesdanslesLAMdugroupeCBFetsemblentassociéesàunmauvaispronostic.

Question posée, ObjectifsLeprotocoleCBF-2006aétéélaboréparlesdeuxprincipauxgroupesfrançaisimpliquésdansletraite-mentdesLAM(ALFAetGOELAMS)pourréaliserlapremièreétudeinternationalesurungrandnombredepatientsatteintsdeLAMdetypeCBF.LebutestdedéterminersilesmutationsdanslesgènesKIT,FLT3ouRASontunevaleurpronostiquederechute.

Résultats obtenus200patientstraitésdefaçonhomogèneontétéinclusdansceprotocole.L’analysedesmutationsapuêtreréaliséesur194d’entreeux.Cetteétudeconfirmel’incidenceélevéedecesmutationsauseindesLAM-CBF(environ50%desLAMavect(8;21)etles75%desLAMsavecinv(16)sontmutées).Parmicesmutations,seuleslesmutationsdeFLT3ontunevaleurpronostiqueindépendante(augmentationdurisquederechute).

AvancéesLa recherche des mutations de FLT3 au diagnostic d’une LAM-CBF devrait permettre de cibler au mieux les indications thérapeutiques, en particulier en ce qui concerne la réali-sation d’une greffe allogénique en première rémission complète.

33

1

53

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-08Définition et étude de la régulation moléculaire du compartiment des cellules initiant les leucémies des leucémies aiguës lympho-blastiques T humaines.

Datedelasubvention:2007F.Pfumio,HôpitalCochinetHôpitalTrousseauàParis

Contexte scientifique LesleucémiesaiguëslymphoblastiquesTontunpronosticquirestepéjoratifmalgrédesavancéesma-jeuresdanslestraitements.Cesleucémiessonthétérogènesd’unpointdevuecellulaireetgénétiqueaudiagnosticetàlarechute.Ellescontiennentdespopulationsdecellulesquidiffèrentparleurdegréd’agressivité.L’agressivitédescellulesestdéfiniepar leurcapacitéàproliférerenculture invitroetàformerdestumeursquandellessontgrefféesdansdessourisdépourvuesdedéfenseimmunitaire.

Question posée, Objectifs DesmarqueursquipermettentdedistinguerlesdifférentstypesdecellulesontétérecherchésdansunmodèledeleucémieaiguëlymphoblastiqueTobtenupargreffedescellulesleucémiquesdansdessourisimmunodéficientes.

Résultats obtenus L’équipeamontréquelatransplantationdescellulesleucémiquesdansdessourisimmunodéficientesétaitunbonmodèlepour l’étudedes leucémiesaiguës lymphoblastiquesT.Cemodèlepermetd’étu-dierlesdifférentespopulationscellulairesleucémiques.Deplus,cetteéquipeamontréquel’expressionconcomitantededeuxprotéine(CD34etCD7)àlasurfacedescellulesleucémiquespermettaitdediscri-minerlespopulationsdecellulesleucémiqueslesplusagressives.

Avancées Ces modèles de greffe de cellules leucémiques dans les souris immunodéficientes sont intéressants pour tester de nouvelles thérapies qui permettraient d’empêcher le dévelop-pement et la rechute de la maladie.

34

1

54

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-09Etude, dans les syndromes myeloproliferatifs, des rôles respectifs de Stat5 a et b et du potentiel thérapeutique que représente leur régulation par la voie PPAR-γ/Stat5.

Datedelasubvention:2007S.Prost,HôpitaldeVersaillesetHôpitalSaintLouisàParis

Contexte scientifique LaLeucémieMyéloïdeChronique(LMC)estuneaffectionclonalequitouchelacellulesouchehémato-poïétique.LescellulesleucémiquesexprimentlaprotéineBCR-ABLquiauneactivitétyrosinekinase.C’estpourquoilesinhibiteursd’activitétyrosinekinase(ITKs)constituentactuellementletraitementderéférencedelaLMC.Toutefois, lafaiblesensibilitédescellulessouchesleucémiques(CSL)auxITKsnepermetpasleurélimination.Ilenrésultelamiseenplaced’unemaladierésiduelleetlarechutedespatientsàl’arrêtdutraitement.Parconséquent,uneguérisoncomplètepasseparledéveloppementdestratégiesthérapeutiquesqui,enassociationaveclestraitementsparlesITKs,seraientcapablesdetuerlescellulessouchesleucémiques.

Question posée, Objectifs LesprotéinesSTAT5sontnécessairesàlafonctiondelaprotéineBCR-ABLetaumaintiendescellulessouchesleucémiques.L’équipeavaitprécédemmentdécritquelaPioglitazonepermettaitunediminutiondel’expressiondeSTAT5danslescellulesleucémiques.L’objectifestactuellementdedéterminersilaPioglitazoneestefficacepourréduirelescellulessouchesleucémiquesdepatientsaudiagnostic.

Résultats obtenus Enutilisantdestestsdecultureinvitro,ilaétéobservéquelaPioglitazonediminuaitlaproportiondeCSLsetavaituneffet thérapeutiquequis’ajoutait àceluides ITKs.Plusprécisément, laPioglitazonepermetd’éliminerlegroupedesCSL«quiescentes»quisontnaturellementrésistantesauxITKs.Cestravauxinvitroontconstituélerationnelbiologiquepourlelancementd’unessaicliniquedephaseII(ACTIM),pilotéparleProfesseurPhilippeRousselot,quiviseàétudierl’efficacitédel’associationd’unITK(Glivec®)etdelapioglitazone(Actos®)pourlaréductiondelamaladierésiduelledepatientsatteintsdeLMCettraitésparleGlivec®.

Avancées Le traitement de patients atteints de LMC avec une combinaison de Pioglitazone + ITK permet d’envisager la suppression de la maladie résiduelle et le risque de rechute associé au traitement par les ITKs seuls.

35

1

55

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-10Dysrégulation du couple télomères-télomérase dans la leucémogé-nèse : applications diagnostiques, pronostiques et thérapeutiques.Datedelasubvention:2007

E.Wattel,HôpitalEdHerriotdeLyon

Contexte scientifique Lesréarrangementschromosomiquesetgénétiquescaractérisentlescellulesducloneleucémique.Cesanomaliesacquisessontfavoriséesparunraccourcissementanormalouuneabsencedeprotectiondestélomères.Lestélomèressontlesextrémitésdeschromosomes.Uneenzyme,latélomérase,estrespon-sabledumaintiendelalongueurdestélomères.Silestélomèressonttropcourtsoumalprotégés,desfusionstélomériquespeuventseproduirelorsquelacellulesedivisecequiaboutitàunnombreanormaldechromosomesdanslescellulesfilles.Danslescellulesleucémiquesavecréarrangementschromo-somiques, les télomères sont significativement plus courts que dans les cellules ayant un caryotypenormal.D’autrepart,l’activitédelatélomérase,estdifférenteselonletypedelaleucémie.

Question posée, objectifs Leprojetconsisteàétudierlesfacteursimpliquésdanslaprotectiondestélomères,l’activitédel’enzymetéloméraseetlesmodificationsmoléculairescrééesparlesanomalieschromosomiquesdanslescel-lulesdepatientsatteintsdeleucémieaigue.

Résultats obtenus Cegroupeamisenévidenceunemolécule(DEK)quiréguleleniveaud’expressiondel’enzymetélomé-rasedanslesLAM,lesLMCetlesLLC.Lesmécanismesd’actiondecettemoléculeDEKontétéétudiés.Deplus,legroupeamontréqueleniveaud’expressiondel’enzymetéloméraseestcorréléàlaréponseàlachimiothérapieetàlasurvie.

Avancées La longueur des télomères ainsi que le niveau d’expression de l’enzyme télomérase constitue un facteur pronostique des LAM mais aussi dans d’autres types de leucémies. Les molécules régulatrices qui modulent la longueur des télomères et l’activité télomérase pourraient être de nouvelles cibles thérapeutiques.

36

1

56

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-11Expression et mécanismes d’activation du gène EVI1 dans les LAM de l’enfant

Datedelasubvention:2007H.Lapillonne,HôpitalTrousseauetHôpitalSaintLouisàParis

Contexte scientifique Lesleucémiesaiguësmyéloblastiques(LAM)del’enfantsontdemauvaispronostic,lespatientsprésen-tantunesurvieglobaleinférieureà60%.L’analysecytogénétiquedescellulesdemoellerestel’élémentpronostiqueessentieldanscettepathologiemaislesdifférentsgroupescytogénétiquesétablissonttrèshétérogènes.

Question posée, ObjectifsLegèneEVI1codepourunrégulateurdelamégacaryopoïèse,processusbiologiquequigénèrelespla-quettesdusang.Plusieursétudesontmontréqu’uneaugmentationdel’expressiondecegène,etdoncuneplusgrandequantitédelaprotéinedanslescellulescancéreuses,étaitassociéeàunrisqueélevéd’évolutiondéfavorabledescancers.Lesquestionsétaientdedéterminersi l’expressiondeEVI1étaitaugmentéedanslesLAMdel’enfantetd’évaluersonintérêtpronostique.

Résultats obtenusL’expressiondugèneEVI1aétéanalyséedansunecohortedeLAMpédiatriques.Dansundessous-groupescytogénétiques,27%présententuneaugmentationde l’expressiondeEVI1.Uneassociationaveccertainscritèresmoléculairesdemauvaispronosticdéjàconnusaététrouvée.Parcontre,iln’apasétéobservédedifférenceentermedesurviedanslesLAMquiprésententunehyperexpressiondeEVI1.

AvancéesIl existe un groupe de LAM pédiatriques qui peut être caractérisé par une hyperexpression de EVI1 et qui semble associé à des critères cliniques et biologiques de mauvais pronostic.

37

1

57

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-12Etude de la reconstitution précoce des cellules NK après greffe de cellules souches hématopoïétiques allogéniques.

Datedelasubvention:2007A.CaignardetJ.HenriBourhis,InstitutGustaveRoussyàVillejuif

Contexte scientifique LescellulesNaturalKiller (NK)sontdes lymphocytescapablesde tuerd’autrescellulesetqui jouentunrôleimportantdansl’immunité.Cescellulesparticipentnotammentaurejetdelagreffe(effetGVL)lorsdelatransplantationdecellulessoucheshématopoïétiques(CSH)allogéniques(danslecasdelagreffeallogéniqueouallogreffe,donneuretreceveursontdifférentsmaiscompatibles)chezlespatientsleucémiques.LescellulesNKsuscitentungrandintérêtcarellessontcapablesdedétruirelescellulescancéreuses,dont lesblastes leucémiques.Deplus,ellessont lespremièrescellules lymphoïdesà reconstituer lesystèmeimmunitaireaprèsunegreffedeCSH.

Question posée, Objectifs ChezlespatientsatteintsdeLAM,lafonctiondescellulesNKestfortementaltérée,cequipourraitréduirel’efficacitédelareconstitutionhématopoiétiqueaprèsgreffe.PourmieuxcomprendrelerôledescellulesNKaucoursdelareconstitutionimmuneaprèsgreffe,lecomportementdecescelluleschezdespatientsayantuneleucémiemyéloïdeaigue(LAM)etayantreçuunegreffedeCSHallogéniqueaétéanalysé.

Résultats obtenus LafonctionetlamorphologiedescellulesNKontétéétudiéeschez35patientsLAM,30et60joursaprèslagreffedeCSH.LestatutdesNKaétémesuréparleurcapacitéàdétruiredescellulesleucémiquesinvitroetparlamesuredecertainesdeleursactivitésfonctionnelles.Aujour30aprèsgreffedesCSH,lesNKdepatientsLAMsontfonctionnelles.Aujour60aprèslagreffe,unediminutiondel’activitédesNKestobservéespécifiquementchezlespatientsLAM.Cecisuggèrequ’uneaugmentationdel’activitédesNKaprèsgreffedeCSHallogéniquesestimportantepourlaréussitedelatransplantation.

Avancées Chez les patients atteints de LAM, une modulation précoce de l’activité des cellules NK pourrait améliorer l’effet de la greffe de CSH allogéniques.

38

1

58

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2007-13Réponse des cellules souches leucémiques à l’hypoxie : étude de la prolifération, du cycle cellulaire et de l’apoptose induite par des chimiotoxiques.

Datedelasubvention:2007V.Praloran,CHUdeBordeaux

Contexte scientifique Al’étatnormal,lescellulessouchesdelamoelleosseusesontmaintenuesàdesconcentrationsbassesenoxygène(hypoxie)cequi leurpermetde resterà l’étatdequiescence,phénomèneessentielà leursurvielorsd’agressionsexternes.

Question posée, objectifs Quelest lerôledel’hypoxiedanslarésistanceprimairedescellulessouchesleucémiques(CSL)auxchimiothérapiesusuelles?Eneffet,certainesrechutesdeleucémiespourraientêtreduesàlapersistancedanslamoelledeCSLquiescentes, insensiblesà lachimiothérapie.L’équipeadoncmisaupointunsystèmedeculturedescellulessouchesleucémiquesàbassepressiond’oxygèneafind’étudierlerôledel’hypoxiedanslemaintiendescellulessouchesàl’étatdequiescenceaucoursdelarésistanceauxchimiothérapies.

Résultats obtenus Letravailaétéréalisésurlesleucémiesaigueslymphoblastiques(LAL).Ilamontréqueunefortehypoxie(0,1%d’O2)induisaitlaquiescencedescellulessouchesdeLALcommeellelefaitpourlesCSHnor-males.Parailleurs,pardestechniquesdecultureetaprèsgreffeàdessourisimmunodéficientes,ilaétémontréque lesCSLquiescentesrésistaientau5-Fluoro-Uracilealorsquecettedroguedétruit lescellulesquiprolifèrent.

Avancées Ce projet se poursuit avec l’analyse des mécanismes de la quiescence des CSL en hypoxie pour explorer des voies permettant d’agir spécifiquement sur ces cellules en quiescence sans toxicité pour les CSH.

39

1

59

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-01Recherche de facteurs prédictifs de la réponse à l’azacytidine et à l’érythropoiétine dans les syndromes myélodysplasiques de l’adulte : étude génomique et épigénomique à haut débit.

Datedelasubvention:2008C.PreudhommeetP.Fenaux,HôpitalAvicennedeBobignyetCHRUdeLille

Contexte scientifique Lessyndromesmyélodysplasiquessontdespathologiesdessujetsâgés,quiévoluentfréquemmentversuneleucémieaigüedifficileàtraiter.Lessyndromesmyélodysplasiquessontassociésnotammentàuneanémierécidivantenécessitantdestransfusionsrégulièresdeglobulesrouges.L’efficacitédestransfu-sionspeutêtreamélioréeparuntraitementparl’érythropoiétineet/ouparl’azacitidine.

Question posée, objectifsL’objectifdecetteétudeétaitderechercherparuneanalysesystématiquedetoutlegénomedespatients,l’existence d’anomalies génétiques et de mutations ponctuelles qui pourraient être prédictives d’unemeilleureréponseàl’azacitidine.

Résultats obtenusCesétudesgénétiquesontétéréaliséeschezlespatientsatteintsdemyélodysplasiequisontdépendantsdestransfusionsetsont traitésavecl’érythropoiétineseuleoul’azacitidineseuleouunecombinaisond’érythropoiétineetd’azacitidine.Lesétudesgénétiquesontétécorréléesavec lesdonnéescliniquesafindedéterminersicertainesanomaliessontassociéesàunemeilleureefficacitéet/ouuneefficacitéprolongéedutraitementparl’azacitidine.

AvancéesCette étude est la première étude génétique à grande échelle, menée en parallèle avec une étude clinique thérapeutique rigoureuse chez les patients atteints de myélodysplasies qui pourrait permettre de prédire une réponse favorable à l’azacitidine.

40

1

60

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-02Analyse du profil d’expression des micro-ARNs dans les LALT de l’enfant : étude des relations entre les facteurs SCL/TAL1, HOX11L2/TLX3 et les miARNs dans le développement des LALT et sur l’activité des cellules souches leucémiques T (CSL-T)

Datedelasubvention:2008IrinaNAGUIBNEVA,CEAàFontenayauxroses

Contexte scientifiqueLesleucémiesaiguëslymphoblastiquesT(LAL-T)constituent10à15%desLALdiagnostiquéeschezlesenfants.EllesrésultentdelatransformationmalignedesthymocytesquigénèrentleslymphocytesT.Environ50%desLAL-TprésententdesaltérationsspécifiquesdanslesgènescodantpourlesfacteursdetranscriptionTAL1etTLX3.Les microARNs (miR) sont des petites molécules d’ARN qui participent à la régulation de l’expres-siondesgènes.LadérégulationdesmiRsestassociéeaudéveloppementdenombreusespathologieshumaines.Ilsreprésententdenouveauxmarqueursdiagnostiquesdelapathologie.

Question posée, ObjectifsCetteétudeproposed’étudierlerôledesmiRdanslatransformationmalignedesthymocytesdanslesLAL-T.L’expressionde3miR:miR125b,miR99aetmiR100estaugmentéedanslesLAL-TquiprésententunealtérationdeTLX3.Elleestdétectéedanslesthymocytesetdiminuequandcescellulessedifféren-cient.

Résultats obtenusCes travauxmontrentqueTLX3contrôle l’expressiondesmiR125b,miR99aetmiR100. Ils indiquentquelerôledemiR-125bestd’augmenter lenombredescellulesTenaccroissant leurproliférationetendiminuantleurmort.Parailleurs,l’inhibitiondeTLX3quicontrôlel’expressiondemiR-125boulasuppressiondemiR-125binhibelaproliférationdescellulesleucémiques.

AvancéesCes résultats établissent un lien original entre l’altération du facteur de transcription TLX3 et l’augmentation de miR-125b qui est associé à la prolifération des cellules leucémiques. Ils démontrent la contribution des miRNAs à la transformation leucémique des thymocytes et permettront de déterminer si les miRNAs constituent des cibles thérapeutiques poten-tielles.

41

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-03Réponses des cellules souches leucémiques à l’hypoxie : études de la prolifération, du cycle cellulaire et de l’apoptose induite par chimiothérapie.

Datedelasubvention:2007V.PraloranetA.Pigneux,CHUdeBordeaux

Contexte scientifique Danslamoelleosseuse,certainescellulesdites«immatures»doiventsedifférencierpourproduirelescellulesdusang:globulesrouges,plaquettesetglobulesblancs.Danslamoelleosseusedespatientsatteintsde leucémiesaigüesmyéloblastiques (LAM), lescellules immaturesappelées«blastes»setransforment,semultiplieractivementetperdentleurscapacitésàsedifférencierpourformerlesglo-bulesblancs.Acôtédesblastes,persistentdescellulesimmaturesnormales,maisleursfonctionnalitéssontétoufféesparlesblastes.

Question posée, Objectifs LetraitementdelaLAMconsisteàdétruirelesblastestransforméstoutenpréservantlescellulesimma-turesnormales,quipourrontdenouveausedifférencierpourformerlescellulesdusang.Laleucémieaigüemyéloblastiquetouchemajoritairementdespatientsâgésdeplusde60ans.LesLAMsesoignentrelativementbienaveclestraitementsactuels,pourlespatientsdemoinsde60ans.Au-delàdecetâge,cestraitementslourdsettoxiquessontmaltolérésparlespatients.Ilestdoncimportantd’identifierdenouveauxtraitementsplusefficacesetmoinstoxiques.

Résultats obtenus Aucoursdecetteétude,leseffetsdel’associationdedeuxmoléculesontétéétudiés.Lapremièremolé-culebloqueuneactivitéenzymatiquequifavoriselaproliférationdescellules.Elleestconnuepoursonefficacitédansd’autrescancers.Lasecondemoléculepousselacelluletraitéeverslamortenmodifiantlesinteractionsentrelesprotéinesquiassurentlasurviecellulaire.Cesdeuxmoléculesontétéutiliséesàdesdosessuffisammentfaiblespournepasinduiredetoxicitévis-à-visdescellulesimmaturesnor-malestoutenpotentialisantlamortdescellulesleucémiques.LeseffetsdecesdeuxmoléculesassociéessurdescellulesdeLAMcultivéesinvitroetsurdesprélè-vementsissusdemoellesdepatientsencultureontétéanalysés.Danslesdeuxcas,l’associationdecesmoléculesàdesdosestrèsfaiblesinduitlamortdescellulesleucémiques.Lesmécanismesintra-cellu-lairespouvantexpliquercebénéficesontencoursd’étude.

Avancées L’association de ces deux molécules à faible dose permet de traiter les patients. Ce traitement est mieux toléré par le patient tout en étant efficaces pour tuer les cellules leucémiques.

42

61

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-04Analyse de la valeur pronostique et du rôle fonctionnel de SUZ12 dans les leucémies aiguës myéloïdes (LAM) à caryotype normal de l’adulte.

Datedelasubvention:2008C.Chabannon,Centred’ImmunologiedeMarseille-LuminyetInstitutPaoli-CalmettesdeMarseille

Contexte scientifiqueLesleucémiessontdescancersaffectantlescellulesdelamoelleosseusequiproduisentlescellulesdusang.L’objectifdecetravailétaitd’identifierdenouveauxmarqueurspronostiquespourlesleucémiesaiguësmyéloïdes(LAM)àcaryotypenormaldel’adultequireprésententenvironlamoitiédesleucémiesaiguësdel’adulte.Cegroupedeleucémiesesttrèshétérogène:certainspatientsontunemaladiedebonpronosticalorsqued’autresdéveloppentdesformesplusgraves.L’agressivitédecesleucémiesnepeutêtrepréditeaudiagnosticcarleschromosomesdescellulesleucémiquessontnormaux.

Question posée, ObjectifsCertainesprotéinesmodifientl’ADNsansenaltérerlaséquence.Ellesparticipentainsiaucontrôledel’expressiondesgènes.Cesmodificationsquisontindépendantesdelaséquencedel’ADNetsonttrans-missibles constituent une signature épigénétique. Les methyl-transférases (par exemple SUZ12) fontpartiedecesprotéines.Laquestionétaitderecherchersiunesignatureépigénétiquepouvaitpermettrel’identificationdenouveauxmarqueurspouradapterletraitementàl’agressivitédelamaladie,etcedèslediagnostic.

Résultats obtenusL’équipeautilisédestechniquesd’analysedugénomeàhauterésolutionpourcaractériserlasignatureépigénétiquedescellulesdeLAMàcaryotypenormal.Cetravailapermisdedéfinirunesignatureépigé-nétiquequidistinguelesleucémiesdebonpronosticdesleucémiesdemauvaispronostic.L’intérêtdecettesignatureépigénétiqueestencoursdeconfirmationdansunecohortedepatientsplusimportantequelegroupeinitial.

AvancéesL’utilisation de ce marqueur laisse entrevoir une meilleure prévision du pronostic de ces leucémies et donc une amélioration du traitement en fonction de leur agressivité.

43

62

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-06Développement d’une thérapie différentiatrice CD44 cibléedes leucémies aigües myéloïdes (LAM)

Datedelasubvention:2008F.Smadja-Joffe,HôpitalSaintLouisdeParisetCHUdeNantes

Contexte scientifiqueLesLAM5représententunsous-groupedeleucémiesaiguësmyéloïdes(LAM).LesLAM5sontcaracté-riséesparl’accumulationdanslamoelleosseuseetlesangdecellulesmonoblastiquestrèsindifféren-ciées.LesLAM5répondentmalàlachimiothérapieetsontdemauvaispronostic.L’équipeavaitmontréprécédemmentquelamoléculeCD44quiestàlasurfacedescellulesmonoblastiquesleucémiquespeutêtrereconnueparunanticorpsspécifiqueanti-CD44.LaliaisondeCD44parl’anticorpsanti-CD44pro-voqueladifférenciationdescellulesleucémiquesenmonocytesetreprésenteunepossibilitédethérapiepardifférenciationdesLAM5.

Question posée, ObjectifsDanslebutd’optimisercettethérapie,l’équipeaétudiélesmécanismesimpliquésdansladifférenciationdescellulesleucémiquesenmonocytesquiest induitepar lafixationdel’anticorpsanti-CD44sursacible.

Résultats obtenusL’équipeamontréquelafixationdel’anticorpsanti-CD44sursacibleinduitlaproductionparlacelluleleucémique des cytokines qui sont nécessaires à la différenciation des monoblastes leucémiques enmonocytesdifférenciés.Elleaensuiterecherchésil’actiondifférenciatricedesanticorpsanti-CD44alieudanstouteslesLAMouseulementdanscertainstypesdeLAM.Desblastesreprésentatifsd’unéventaildesdifférentssous-typesdeLAMontététraitéspardesanticorpsanti-CD44.Cetraitementainduitleurdifférenciation. La production de cytokines différentiatrices par ces différents types de blastes est encoursd’analyse.

AvancéesCes travaux suggèrent que de telles cytokines différenciatrices pourraient améliorer la thérapie des LAM5.

44

63

1

64

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-08Développement d’une nouvelle méthode de production plaquettaire in vitro

Datedelasubvention:2008E.Cramer,HôpitalCochinàParis

Contexte scientifiqueLesplaquettessanguinesontpour fonctionprincipale l’arrêt rapidedusaignement.La thrombopénieoudiminutiondesplaquettess’accompagned’unsyndromehémorragique.Ellepeutêtreunecompli-cationsévèredesleucémiesetêtreégalementuneconséquencedeschimiothérapiesanti-cancéreuses.Lesplaquettessontproduitesparlesmégacaryocytesquisontdescellulesgéantesprésentesdanslamoelleosseuse.

Question posée, ObjectifsCommentlesplaquettessont-elleslibéréesdanslesang,quelssontlesmécanismesimpliquésetpeut-oninfluencercettelibération?

Résultats obtenusCette équipe a montré que 3 paramètres influençaient la libération des plaquettes dans le sang :- la présence de cellules stromales qui adhérent aux mégacaryocytes et empêchent la libération desplaquettes,-laprésencedescellulesendothélialessurlesparoisdesvaisseauxsanguinsquifavorisentlalibération,-lesforcesphysiquesdelacirculationsanguinequiaidentàlalibération.Des analyses en vidéo-microscopie ont montré que les mégacaryocytes, qui sont des cellules ayantplusieursnoyaux,sedivisentsousl’influencedufluxsanguinetquechaquepartiedumégacaryocytepeutproduiredesplaquettesdenaturedifférente.

AvancéesLa compréhension des mécanismes régulant la formation des plaquettes permettra de contrôler ou d’influencer le nombre de plaquettes produites. Ainsi, dans les cas d’insuffi-sance plaquettaire (thrombopénie) souvent associée aux chimiothérapies, il sera possible de stimuler la formation de plaquettes pour aider les patients thrombopéniques.

45

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2008-09Etude des mécanismes moléculaires responsables des syndromes myéloprolifératifs : rôle des mutations de TET2 dans les syndromes myéloprolifératifs

Datedelasubvention:2008F.Delhommeau,INSERMU790InstitutGustaveRoussyVillejuifetHôpitalStAntoine,Paris

Contexte scientifique Lessyndromesmyéloprolifératifs(SMP)sontcaractérisésparlasur-productiondecertainescellulesdusangdanslamoelleosseuse.CetteéquipeamisenévidencelaprésencedemutationsdugèneTET2danslesSMPetdansd’autrescancersdusangcommelesleucémiesaiguësmyéloïdes.TET2estuneenzymequimodifieunedesbasesde l’ADN.Lesmutationsdugènequicodepour laprotéineTET2modifientlafonctiondelaprotéine,cequiadesrépercussionssurl’expressiondegènesimportantspourlaformationdescellulesdusang.

Question posée, Objectifs LeprojetestdemieuxcomprendrelafonctiondeTET2.Deuxquestionssontposées:(1)quelleestlafréquencedesmutationsdeTET2chezlespatientsatteintsdeSMPetdansquellescellulesdelamoelleosseusecesmutationssont-ellesprésentes?(2)quellessontlesanomaliesdespropriétésdescellulessoucheshématopoïétiquesquandlaprotéineTET2estsupprimée?

Résultats obtenus LesmutationsdeTET2ontétérecherchéesdansunecohortede706patientsatteintsdeSMP.Lafré-quencedesmutationsdeTET2estde13%dansl’ensembledesSMP,maisellemonteà20%danslesformeslesplusgraves.Cesmutationssontprésentesdansdescellulesimmaturesdelamoelle.Ellessontdoncdesévénementsprécocesquisurviennenttrèstôtdanslamaladie.

Avancées Les mutations de TET2 pourraient participer à la fois à l’initiation des SMP et à leur évolu-tion en leucémie aiguë. La connaissance des anomalies moléculaires qui caractérisent les SMP permettrait de développer des stratégies thérapeutiques ciblant celles qui initient la maladie en même temps que celles qui en déclenchent les symptômes.

46

65

1

66

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-01Mutations et valeur pronostique de TET2 dans la LMC et les LAM

Datedelasubvention:2009C.Preudhomme/F.Guilhot-HôpitalSaintLouisdeParisetCHRUdeLille

Contexte scientifiqueParmi les hémopathies myéloides, on peut distinguer biologiquement et cliniquement, les leu-cémies myéloides chroniques (LMC), les syndromes myéloprolifératifs (SMP), les syndromesmyélodysplasiques (SMD) et les leucémies aigües myéloides (LAM). ont été identifiées comme Latranslocation chromosomique BCR-ABL a été identifiée dans la LMC et des mutations de NPM1dans les LAM. Ces anomalies moléculaires sont considérées comme responsables de la maladie.

Question posée, ObjectifsRécemmentdesmutationsdans lesgènesTET2, IDH1/2,DNMT3a,ASXL1ontétécaractériséesdansles SMD et SMP. Ces gènes codent pour des protéines qui provoquent une modification chimique(méthylation) de l’ADN qui conditionnera l’expression des gènes. Cette étude avait pour but dedéterminerlafréquencedecesmutationsetleurvaleurpronostiquedanslaLMCetlesLAM.

Résultats obtenusLesrésultatsmontrentquedanslaLMC,lesmutationsdeTET2etIDH1/2sonttrèsrares.ParcontredesmutationsdeASXL1sonttrouvéesdans7%desLMC,maisellessontsansimpactsurlepronostic.DesmutationsdeTET2,IDH1/2etDNMT3asonttrouvéesdanslesLAMquiontdéjàunemutationdeNPM1.Ellessontassociéesàunmauvaispronostic.Ainsi,cetteobservationjustifiel’optionthérapeutiqued’uneallogreffedemoelleosseusechezlespatientsporteursdecesmutations.

AvancéesCes résultats établissent que les mutations dans les gènes IDH1/2 et DNMT3a sont fréquentes dans le groupe des LAM mutées pour NPM1. En raison de leur valeur pronostique, la détection de ces mutations a été incluse dans le protocole 0701 qui concerne les LAM des patients âgés de 50-70 ans.

47

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-02Implication de la voie de la glutamine et des acides aminés essentiels dans la biologie des leucémies aiguës myéloides

Datedelasubvention:2009DidierBouscary,HôpitalCochindeParis

Contexte scientifique Les traitements actuels des leucémies aiguës myéloides (LAM) reposent le plus souvent surune chimiothérapie intensive et, chez les sujets jeunes, sur les procédures d’auto-greffe oud’allo-greffe. Les principales voies de recherche actuelles, dans le domaine des LAM, recherchentdes altérations moléculaires qui pourraient constituer des cibles pour des traitements spécifiques.

Question posée, Objectifs Leglucoseetlaglutaminesontdesélémentsnutritifsessentielsàlacroissanceetàlasurviedescellules.Leurutilisationparlescellulescancéreusesestdéréguléedanscertainscancers.L’objectifdecetravailaétéd’étudierlerôledelaglutaminedanslasurviedescellulesleucémiquesdepatientsatteintsdeLAM.

Résultats obtenus Lesdonnéesmontrentqu’uneprivationbrutaleenglutamineprovoquéeparuncomposantchimique:l’asparaginase,entrainelamortdescellulesleucémiques.Laglutaminepénètredanslacelluleenseliantàsonrécepteurexpriméàlasurfacedescellules.Lasuppressiondecerécepteurentrainelesmêmeseffetsquelaprivationenglutamine,confirmantl’importancedelaglutaminepourlasurviedescellulesleucémiques.Lesrecherchesencoursontpourobjectifdecomprendrelemécanismedelamortcellu-laireinduiteparlaprivationenglutamine.

Avancées Ces données nouvelles montrent l’intérêt potentiel de l’asparaginase dans le traitement des LAM. Elles amènent aussi à rechercher des molécules capables d’inhiber le méta-bolisme de la glutamine dans la cellule et qui pourraient constituer de nouveaux outils thérapeutiques.

48

67

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-03Caractérisations biologique et clinique de l’infection par l’herpesvirus humain de type 6-B après allogreffe de sang placentaire: cibles cellulaires, influence du profil de reconstitution immune et conséquences cliniques.

Datedelasubvention:2009BMImbert-MarcilleetPChevallier,CHUdeNantes

Contexte scientifiqueLes allogreffes (cellules greffées prélevées chez une autre personne que le donneur) de cellules soucheshématopoïétiques représentent un des traitements des patients atteints de leucémies. Ces allogreffes ex-posent le patient à différents risques et notamment à des infections bactériennes et virales. La fréquencede ces infections peut être influencée par le type de greffon. En particulier, les greffes de sang placen-taire (encore appelé sang de cordon) semblent être associées à une haute fréquence de ces infections.

Question posée, ObjectifsParmi les virus concernés, l’herpesvirus humain de type 6 (HHV6) a été découvert récemment.Pourmieuxcomprendrelesconséquencesdecetteinfectionvirale,65patientsayantreçuuneallogreffedecellulessoucheshématopoïétiquespourtraiteruncancerhématologiqueontétéétudiés.

Résultats obtenusLamoitiédecespatientsaétégrefféeàl’aided’unsangplacentaireetl’autremoitiépardescellulessouchesprove-nantdusangpériphériqued’undonneurnonfamilial.Chezcespatients,différentsparamètresviraux(présenceounonduvirusdanslesang,etquantité),paramètresimmunologiquesethématologiques(typesetquantitédecellulesprésentesdanslesang)ontétésuivistousles15jourspendantles6moissuivantlagreffe.Lesconséquencesdel’infectionpourlepatient,notammententermededuréed’aplasieetdebesoinsentransfusions,deprisedelagreffe,derechute,desurvenuedecomplications,tellesqu’unemaladiedugreffoncontrel’hôteoud’autresinfectionsontétédéterminées.LesrésultatsmontrentquelesinfectionsHHV6sontbeaucoupplusfréquentesaprèsallogreffedesangplacentaire.84%despatientsayantreçuunegreffeplacentairesontinfectésalorsqueseulement23,5%despatientsdel’autregroupe développent une infection HHV6. Cette augmentation se traduit par des durées d’infection plus longuesdanslegroupe«cordon».Deplus,lespatientsinfectésontdesduréesd’aplasiepluslonguesetdesbesoinsdetransfusionplusimportantsquelespatientsnoninfectés.Quantàl’étudeimmunologique,ellemontrequelestypescellulairesquiapparaissentprogressivementaprèslagreffediffèrentenfonctiondutypedegreffon.Enparticulier,chezlespatients«cordons»,undestypescellulairescapablesdeproduiredel’HHV6(lymphocytesTCD4+)estprésentplusprécocementetenquantitésplusimportantesaprèslagreffe.

AvancéesCette étude montre le lien entre l’infection HHV6 et la greffe de sang placentaire. Dans la mesure où ces greffes sont de plus en plus pratiquées, la question qui se pose maintenant est de savoir si l’administration d’un traitement antiviral aurait un intérêt pour limiter notamment la durée de séjour en secteur stérile et le nombre de transfusions.

49

68

PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-04Cellules souches de leucémie myéloïde chronique (LMC) : nouveaux marqueurs prédictifs de résistance et d’instabilité génétique

Datedelasubvention:2009A.Turhan,UniversitésdePoitiersetParisXI

Contexte scientifique Danslaleucémiemyéloïdechronique(LMC),lescellulesmalignessontcaractériséesparlaprésenced’uneanomaliechromosomique:lechromosomePhiladelphiequiestresponsabledelasurvenuedecetteleucémie.Desmédicamentsdits«thérapiesciblées»ontétédéveloppésquitouchentuniquementlescellulesleucémiquesetpermettentaujourd’huidesrémissionschezquasimenttouslesmalades.

Question posée, Objectifs Silescellulesleucémiquesnesontpaséradiquéesrapidement,desrésistancespeuventsurvenir.Ellessontduesàdesanomaliesgénétiquessupplémentaires,avecnotammentdesmutationsquiempêchentlesmédicamentsdetrouverleurcible.Parailleurs,les«cellulessouches»àl’originedelamaladiesonttrèsraresetdifficilesà identifier.Ellesdoiventcependantêtre totalementéliminéesafinque l’arrêtdutraitementchezlespatientsquisemblentguéris,neconduisepasàdesrechutesdelaleucémie.Les objectifsdece travailétaientdedévelopperdes techniquesquipermettent (1)decomprendre lasurvenue des mutations sous thérapies ciblées (2) d’identifier et de quantifier les cellules souchesleucémiques.

Résultats obtenus Cette étude montre que les cellules souches leucémiques persistent en effet chez les pa-tients en rémission complète, un test pour les identifier a été mis au point. Le but est main-tenant de déterminer si ce test peut être utilisé pour des décisions d’arrêt du traitement.

Avancées S’il existait une corrélation entre la présence des cellules souches leucémiques et la rechute de la LMC, ce test permettrait de prendre une décision quant à l‘arret des traitements, coûteux et parfois difficiles à tolérer.

50

69

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-05Fréquence et valeur pronostique de nouvelles mutations récemment décrites dans les LAL-B de l’adulte (protocole GRAALL03)

Datedelasubvention:2009EricDelabesse,CHUdeToulouse

Contexte scientifique Les leucémies aigües lymphoblastiques de la lignée B (LAL-B) résultent à la fois d’un blocagede ladifférenciationdescellules immaturesde lamoelleosseuse(cellulesà l’originedescellulesdusang)etd’uneproliférationincontrôlée.

Question posée, objectifs Denouvellesmutationsdanslesgènesdescellulesd’enfantsatteintsdeLAL-Bontétédécrites.LeprojetconsisteàétudiersicesnouvellesmutationsexistentaussidanslesLAL-Bdel’adulteetàdéterminersicesmutationsontunevaleurpronostique.

Résultats obtenus 46LAL-Bdel’adulteontétéanalysées.Lafréquenced’unedélétion(disparitiond’unmorceaud’ADN)decertainsgènes(EBF1,IKZF1,ADD3etRB1)oud’unerégiongénique(région13q14)estplusélevéedanslesLAL-Bdel’adultequedanscellesdel’enfant.Cependantiln’apasétéretrouvédecorrélationentrelaprésencecesdélétions(EBF1,IKZF1,ADD3etRB1)et lasurviedespatients.Laseulevaleurpronostique retrouvéeconcerne lesgènesCDKN2AetCDKN2B.

Avancées L’analyse de ces mutations n’a pas permis de trouver de nouvelles cibles thérapeutiques innovantes ni d’identifier de mutations à valeur pronostique.

51

70

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-06Inhibition du facteur de transcription leucémogène, HoxA9, dans les leucémies aigües myéloblastiques par des ligands spécifiques de l’ADN

Datedelasubvention:2009MHDavid-Cordonnier/C.Preudhomme,InsermetCHRUdeLille

Contexte scientifique Les leucémiesaigüesmyéloblastiques (LAM)sontdescancersdescellulesdusang.Dans lamoelleosseuse,lescellulesimmaturesàl’originedescellulesdusang,peuventparfoissetransformeretperdreleurfonction.Danscecas,ellesnegénérerontpluslescellulesfonctionnellesdusang.LesLAMssesoignent relativementbienpardes traitementsdechimiothérapieoupardesgreffesdemoelle.Cependantcestraitementslourdsettoxiquessontleplussouventmaltolérésparlespatients.Ilestdoncimportantd’identifierdenouveauxtraitementsplusefficacesetmoinstoxiques.Plusieurs groupes de recherche ont trouvé que les cellules leucémiques de patients atteints de LAMcontenaient une protéine HoxA9 qui pourrait être à l’origine de la transformation leucémique. Cetteprotéineesttrouvéespécifiquementdanslescellulesleucémiquesetpasdanslescellulesnormales.

Question posée, ObjectifsCetteéquiperecherchedenouveauxmoyenspoursupprimerlafonctiondelaprotéineHoxA9danslescellulesleucémiques.HoxA9sefixesurdesséquencesspécifiquesdel’ADNpourinduirelasynthèsed’autresprotéines.EmpêcherHoxA9desefixersurl’ADNpermettraitd’éliminerleseffetsdelaprotéineanormalementexpriméeetdetransformerlescellulescancéreusesencellulessaines.L’équipeadéveloppédesmoléculeschimiquesdesynthèsecapablesdesefixersurlesciblesADNàlaplacedelaprotéineHoxA9.

Résultats obtenusDespetitesmoléculessynthétiquesqui lient laséquenced’ADNsur lesquellessefixeHoxA9ontétésynthétisées. Ces molécules entrent en compétition avec HoxA9 et empêchent sa fixation à l’ADN.Ainsi,HoxA9nepeutplusagirdanslescellulesleucémiques.

AvancéesL’utilisation de molécules chimiques ciblant des molécules actives dans la transformation leucémique constitue une approche intéressante. Supprimer les effets biologiques de la protéine HoxA9 paraît spécialement intéressant dans la mesure où cette protéine n’est exprimée que dans les cellules leucémiques..

52

71

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-07Etudes génétique et fonctionnelle des syndromes myéloprolifératifs atypiques

Datedelasubvention:2009ELippert,CHUdeBordeauxetdeToulouse

Contexte scientifique Dansles«syndromesmyéloprolifératifs»(SMP),lescellulesimmaturesdelamoelleosseuseproli-fèrentdefaçonanormalemaissedifférencientnormalementencellulesmatures.Onobservedoncdanscettepathologieunexcèsdecellulesmatures.Parcontredanslesmyélodysplasies(SMD),ladifféren-ciationestanormale,asynchrone,entraînantlamortprématuréedenombreusescellules.Ilexisteungroupedemaladiesquiassocientàlafoisdescaractéristiquesmyéloproliférativesetmyélo-dysplasiques,cespathologiessontappelées«syndromesmyéloprolifératifsatypiques»(SMPa).

Question posée, Objectifs Lebutdece travailestdedéterminer lesanomaliesmoléculairesspécifiquesdespathologiesSMPa.DanslesSMPouSMDclassiques,lesgènescodantdestyrosine-kinases,enzymesindispensablesàlaproliférationcellulaire,sontmodifiés.Parcontre,danslamajoritédescasdeSMPa,lesgènescodantcestyrosine-kinasessontnormaux,ilfautdoncrechercherd’autrestypesd’anomalies.

Résultats obtenus Récemment, il a été montré que des petits ARNs (micro-ARN) jouaient un rôle dans la régulation del’expressiondesgènes. Ce travailamontréque lemicro-ARN(miR10) jouece rôlede régulateurdel’expression génique et que son expression est très anormale dans les SMPa. Cette anomalie pour-rait donc être responsable d’une dérégulation de l’expression de plusieurs gènes dans les SMPa.

Avancées Ces travaux participent à une meilleure compréhension du rôle des petits ARN dans les phénomènes de transformation. Actuellement, le développement de nouvelles drogues ciblant ces petits ARN dans des cellules de patients atteints d’hémopathie est en pleine expansion. Ces travaux permettent d’envisager de nouvelles cibles thérapeutiques dans les SMPa.

53

72

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-08Etude des cibles des protéines PLZF/RARA et PLZF en relation avec les protéines du groupe polycomb dans les leucémies aiguës myéloïdes

Datedelasubvention:2009E.Duprez,InstitutPaoli-CalmettesdeMarseille

Contexte scientifique Dans un grand nombre d’hémopathies malignes, les protéines du groupe Polycomb ou PcG sontmodifiées. Ces protéines jouent un rôle important dans la régulation de l’expression génique. Eninduisant ou réprimant spécifiquement l’expression de certains gènes, elles sont particulièrementimportantes pour le développement du corps et pour l’identité et la survie des cellules du sang.

Question posée, objectifs CelaboratoireamontréquelaprotéinedefusionanormalePLZF/RARAquiestexpriméedanslescellulesdepatientsatteintsd’uneformedeleucémieaiguë,selieauxprotéinesPolycomb.Enconséquence,laprotéinePLZF/RARAmodifie l’activitédesprotéinesPolycomb,provoquant leurfixationanormalesurcertainsgènesdontl’expressionestainsimodifiée.CeprojetviseàidentifierlesgénesciblesdesprotéinesPolycombdontl’expressionestmodifiéequandlesPcGsontliéesàlaprotéinedefusionPLZF/RARAdanslescellulesleucémiques.

Résultats obtenus LesgènesciblesdesprotéinesPolycombliéesparlaprotéinePLZF/RARAontétéidentifiées.Leurrégu-lationanormalepar lesprotéinesPolycombpourraitêtre responsablede lamauvaise réponsedecesmaladesauxtraitements.UndéfautsimilairedefixationdesprotéinesPolycombsurlesgènesaétéretrouvédansd’autrestypesdeleucémiesaiguesmyéloïdes.

Avancées La compréhension du rôle de la protéine de fusion PLZF/RARA est une avancée significative dans la compréhension des mécanismes de leucémogénèse. L’intérêt clinique et biologique de ces modifications doit être confirmé.

54

73

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-09Identification de facteurs biologiques de stratification thérapeutique dans les leucémies aigues lymphoblastiques T (LAL-T) de l’adulte (protocole GRAALL05)

Datedelasubvention:2009V.Asfani/H.Dombret,HôpitalNeckeretHôpitalSaintLouisàParis

Contexte scientifique Les leucémies aigues lymphoblastiques T (LAL-T) sont des cancers rares de l’adulte jeune.Ilscorrespondentàuneproliférationincontrôléedescellulesimmaturesdutissusanguin.

Question posée, objectifsLacompréhensiondesmécanismesmoléculairesdetransformationdescellulesnormalesencellulescancéreusesontfaitdegrandsprogrès.Cependant,ilfautidentifierlesmutationsquiseraientrespon-sablesdelarésistanceàlachimiothérapieetassociéesàunfortrisquederechute.Uneanalyseextensivedesdifférentesmutationsgéniquesquipourraientêtreàl’originedelarechuteaétéréaliséedansunelargesériedeLAL-T.

Résultats obtenusLesrésultatsontmontréquedans70%desLAL-T,ilexisteunemutationdanslegènecodantlaprotéineNOTCH1et/oulaprotéineFBXW7.Laprésencedecesmutationsconstitueunbonpronostiquepourlaréponseautraitement.

AvancéesIl est donc maintenant possible de réaliser une classification des LAL-T basée sur la présence ou non de ces mutations et d’adapter le traitement.

55

74

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2009-10Etude des interactions lymphocytaires fonctionnelles au sein des ganglions de patients atteints de Leucémie Lymphoïde Chronique.

Datedelasubvention:2009NadineVarin-Blank-UniversitéParis13-Bobigny

Contexte scientifique LaLeucémielymphoïdechronique(LLC)estdueàuneaccumulationdeslymphocytesBdanslamoelle,lesang,larateetlesganglionslymphatiques.

Question posée, objectifsPourquoileslymphocytesBdeLLCs’accumulent-ilsdanslesganglions?Quelssontlesmécanismesmisen jeu?Peut-on,grâceàdes techniquesdemarquagespécifiquedes lymphocytes,visualiseretsuivrelesdifférentstypesdecellulesprésentesdanslesangetdanslesganglionsaucoursdelamaladieetaucoursdetraitements.

Résultats obtenusL’équipe a montré que plusieurs protéines contribuaient à l’accrochage et à la migration au sein desganglions.L’expressiondecesprotéinesestmodulée,demanièrecoordonnée,enfonctiondelagravitédelamaladie.Lescellulesdespatientslesplusévolutifssontretenuesdanslesganglionsquiserventdesortederéservoirdecellulestumorales.Lastructuredesganglionsdespatientsestaltéréeetprovoquelarétentiondescellules.

AvancéesLes protéines impliquées dans l’accrochage et la migration dans les circuits ganglion-naires pourraient être de nouvelles cibles thérapeutiques. En ciblant ces protéines, il serait possible d’augmenter la remise en circulation des cellules lymphocytaires tumorales, ce qui pourrait les rendre accessibles aux traitements comme l’immunothérapie .

56

75

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-01Caractérisation transcriptomique d’une sous-population chimio-résistante dans la leucémie lymphoïde chronique.

Datedelasubvention:2010A.Quillet-Mary-InsermU563-Toulouse

Contexte scientifique LaleucémielymphoïdechroniqueB(LLC-B)estlaleucémielaplusfréquenteenOccidentchezl’adulte.La maladie résulte de l’accumulation dans le sang, la moelle osseuse et les tissus lymphoïdes, delymphocytes monoclonaux d’apparence normale. Les mécanismes moléculaires intervenant dans laphysiopathologiede laLLC-Bsontmalconnuset les rechutesaprèschimiothérapiesont fréquentes.

Question posée, objectifs Il existe une sous-population de cellules extrêmement chimiorésistantes au sein des cellules tumo-ralesquiseraitàl’originedesrechutes.L’équipetentedemettreenévidencedesprotéinesquiseraientprésentesenquantitéanormale(augmentationoudiminution)danslescellulesdecettesous-populationcellulaire.Cettemodificationduniveaudecertainesprotéinesdanslacellulepourraitêtreàl’origineducancer.

Résultats obtenus Plusieursprotéinesanormalementexpriméesdanslescellulesissuesdecettesous-populationcellulaireontétécaractériséesetleurrôlepotentieldanslaLLC-Bestencoursd’étude.

Avancées Ces marqueurs spécifiques des cellules souches cancéreuses à l’origine de la LLC-B pourraient être la cible de nouvelles thérapies. Ces thérapies cibleraient spécifiquement les cellules chimiorésistantes à l’origine de la tumeur.

57

76

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-02Caractérisation de nouvelles cibles moléculaires dans les hémopathies myéloïdes

Datedelasubvention:2010DrMJMozziconacci-InstitutPaoli-Calmettes-Marseille

Contexte scientifique Ledéveloppementdesleucémiesmyéloïdesestassociéàl’apparitiond’uncertainnombredemutationsdansdesgènesconnus.Actuellement,desétudessystématiquesdugénomedescellulesleucémiquessontmenéespourcaractériserleplusgrandnombredegènesmutésquiparticipentaudéveloppementdecespathologies.

Question posée, objectifs Lebutdeceprojetétaitd’identifieretdecaractériserdenouvellesmoléculesparticipantàlasurvenuedesleucémiesmyéloïdes.Ildevraitcontribueràuneclassificationpluspréciseetpluspointuedecesmaladies,permettantdetrouverdenouveauxfacteurspronostiquesetdenouveauxtraitements.

Résultats obtenus Par les stratégies de séquençage à haut débit qui permettent une analyse globale de l’ensemble desgènesd’unecellule,desmutationsauniveaudeplusieursgènesontété identifiées.Cesmutationsetleurfréquenceontétécaractériséesdansdifférentescatégoriesdeleucémiesmyéloïdes.Enparticulier,lesmutationsdugèneASXL1ontpuêtreassociéesàunpronosticdéfavorabledanscertainesdecesleucémies.

Avancées La recherche systématique de ces mutations pourrait faire partie des analyses réalisées dans ces pathologies au diagnostic et favorisera le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques avec combinaison de drogues.

58

77

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-03Etude physiopathologique de la leucémie myélomonocytaire chronique (LMMC)

Datedelasubvention:2010NathalieDROIN–Inserm–InstitutGustaveRoussy–Villejuif

Contexte scientifique LaLMMCsecaractériseparuneaccumulationdanslamoelledesos,lesangetsouventlarated’uneformeparticulièredeglobulesblancsappelésmonocytes.Cetteleucémien’estpastrèsfréquente.Elletouchelespersonnesâgées(l’âgemoyenaudiagnosticest72ans).Al’heureactuelleiln’existeaucuntraitementcurateur,mêmesiladécitabinestabilise,voireaméliorelasurviedespatients.

Question posée, objectifsDans la LMMC, les cellules souches hématopoïétiques portent au moins une et souvent plusieursmutations. Le pronostic est d’autant plus mauvais que le nombre de mutations est grand. Existe-t-ildesmarqueursgénétiquesspécifiquesde laLMMCetsioui,quelleest lavaleurpronostiquedecesmarqueurs?

Résultats obtenusEncollaborationaveclegroupefrancophonedesMyélodysplasies(GFM),unessaicliniqueaconfirmél’efficacité de la décitabine chez 40% des patients atteints de LMMC. Par ailleurs, ce travail suggèreque lesexpressionsdesgènes c-JUNetc-MYBpourraientconstituerdes marqueursde laLMMC.D’autrepart,l’étudedesmutationsdugèneASXL1montrequecesmutationssontunfacteurdemauvaispronostic.

AvancéesUn score pronostique a été établi à partir de 5 variables (âge, taux d’hémoglobine, le nombre de plaquettes et de globules blancs, mutation ASXL1). Ce score permet d’identifier les patients les plus graves et de proposer un traitement approprié.

59

78

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-04Recherche par analyse de la séquence de l’ensemble des exons de nouveaux gènes mutés dans les syndromes myélodysplasiques humains

Datedelasubvention:2010O.Bernard,InsermU985-InstitutGustaveRoussy-Villejuif

Contexte scientifique Les syndromes myélodysplasiques (SMD) humains évoluent généralement enleucémies aigües. Cette évolution est caractérisée par l’acquisition de mutations.L’identification de ces mutations et l’analyse de la chronologie de leur apparition au cours dudéveloppement de la maladie sont des étapes majeures dans la mise en place de thérapies ciblées.

Question posée, objectifs Le projet a pour but d’identifier les mutations acquises dans les SMD et d’analyser leur dynamiqued’apparitionaucoursdel’évolutiondusyndromemyélodysplasiqueenleucémieaiguëpourunmêmepatient. Cette étude devrait permettre de comprendre comment se produit l’évolution des SMD enleucémiesaigües.

Résultats obtenus Dansunpremiertemps,leschercheursontrecherchéslesmutationsexistantesdans18gènesdécritscommeétantmutéschezlespatientsatteintsdeSMD.70%des221patientsanalysésontdesmutationsdans l’undeces18gènes.Cetteétude,quidoitêtreélargieà350patientsdans lecadred’unPHRC,montreparailleurs,quelesmutationsdesgènesBCORetBCORL1détectéesdanscertainescellulesdelamoelleaudébutdelamaladie,ontunimpactdéfavorablesurlepronostic.Dansunedeuxièmeapproche,utilisantleséquençageàhautdébit,laséquencedesgènesdescellulestumoralesetdescellulesnontumoralesaétécomparéechez48patients.L’analysemetenévidence10mutations différentes par patient, plusieurs mutations peuvent être présentes dans une même celluletumoraleetcertainesmutationsnesontprésentesquedansunefractiondescellulesdelamoelle.

Avancées Le dépistage précoce des mutations dans les SMD permet d’évaluer au mieux le pronostic en complément de l’index international de pronostic (IPSS-R) et ainsi d’élaborer la meil-leure stratégie de traitement.

60

79

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-06Rôle de la protéine CD34, des récepteurs NOTCH et de la voie ERK/MAPK dans le développement des LAL-T humaines, en particulier pour l’activité des cellules initiant les leucémies.

Datedelasubvention:2010FrançoisePflumio-Commissariatàl’EnergieAtomiqueetauxénergiesalternatives,Paris

Contexte scientifique Les leucémiesaigües lymphoblastiquesT (LAL-T)sontdes leucémiesqui touchent les lymphocytes.Au cours du développement des LAL-T, des populations hétérogènes de cellules apparaissent quidiffèrentparleuragressivité.Ellespeuventêtredistinguéesparlaprésencedecertainesprotéinesàlamembranecellulaire.Lelaboratoireadéveloppédesconditionspourétudiercescelluleshumainessoitencultureinvitro,soitdansdessourissanssystèmeimmunitaire.

Question posée, objectifsL’objectif est de déterminer quels sont les facteurs génétiques et les facteurs moléculaires quidéterminentl’apparitiondesdifférentescellulesleucémiquesaucoursdudéveloppementdesLAL-T.

Résultats obtenusPoureffectuercetravail,unréseaudecollaborationavecdesmédecinsdelarégionparisienneetlyon-naiseaétémisenplaceafind’avoiraccèsàdescellulesleucémiquesainsiqu’àdesplasmas(extraitssanguins sans cellules) de malades. L’équipe a détecté des différences génétiques entre les cellulesagressives et les cellules moins agressives des LAL-T. Elle a identifié un facteur, appelé interleukine18(IL18)quialacapacitédestimulerlacroissancedescellulesdeLAL‐Tàlafoisencultureinvitroetinvivolorsquelescellulessontgrefféesdanslessouris.Cefacteurappartientàlafamilledesfacteursproinflammatoires et les patients atteints de LAL‐T en produisent plus que les personnes normales.QuandlescellulesdeLAL-Tsontgrefféesàdessouris,lescellulesleucémiquespeuventelles‐mêmesentrainerlaproductiondecefacteurparlasouris.Lesétudesencourstententdedéterminerlesiteetlescellulesresponsablesdelaproductiondecefacteur.

AvancéesLa présence du facteur IL18 pourrait s’avérer être un facteur pronostique important pour les patients atteints de LAL-T.

61

80

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-07Recherche de profils d’expression protéique des lymphoblastes de moelle osseuse, en relation avec les facteurs pronostiques des leucémies aiguës lymphoblastiques (LAL) de l’enfant

Datedelasubvention:2010O.Costa–FacultédeMédecineetdePharmacie-Rouen

Contexte scientifique Actuellement,lagravitédelaleucémieLALdel’enfantestévaluée,enfonctiondel’âge,selonlescritèressuivants:nombredeglobulesblancsdanslesangetaltérationschromosomiques.

Question posée, objectifsDenouveauxmarqueursdevraientpermettredemieuxappréhenderlagravitédelamaladieetdepro-poserunemeilleurethérapie.Lacomparaisondel’ensembledesprotéinesexpriméesdanslescellulessainesetdanslescellulesleucémiquespourraitapporterdesélémentspourcomprendrelacausedelamaladie.L’analysequalitativeetquantitativedesprotéinesprésentesdans lescellules leucémiquesetdanslescellulesnormalesaétéréalisée.

Résultats obtenusLesprotéinesexpriméespar lescellulesleucémiquesontétéanalyséeschez13patients. 6protéinesontuneexpressionquiestdifférenteentrelescellulesleucémiquesetlescellulesnormales.4sontenquantitéplusgrande(laCalponine2, laPSMB2, laPITP‐‐et l’HSPC263)et2sontenquantitéplusfaible(laProtéineKinaseCK2‐etlaSeptine).Actuellement,l’équipedéveloppedestestspourquantifierrapidementcesprotéinesdansleslymphoblastesdespatientsetétudielarelationentrelaquantitédecesprotéinesetl’évolutiondelamaladie.

AvancéesCes résultats identifient de nouveaux marqueurs qui pourraient être utilisés comme fac-teurs prognostic de l’évolution clinique des LAL. Ils peuvent permettre de déceler préco-cement un risque évolutif défavorable associé à une trop forte expression des protéines décrites. Ces protéines pourraient être la cible de nouvelles thérapies.

62

81

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-10Les enzymes de déubiquitinylation DéUBiquitinases (DUBs): de nouvelles cibles thérapeutiques dans la leucémie lymphoïde chronique ?

Datedelasubvention:2010DrM.Deckert-InsermUnité576,UniversitédeNiceSophiaAntipolis.Hôpitaldel’Archet.Nice

Contexte scientifique Laleucémielymphoïdechronique(LLC)est laformedeleucémielaplusfréquentechezl’adultedansle monde occidental. La LLC se traduit par des complications hématologiques graves dues à l’accu-mulation de cellules B leucémiques. Ces cellules leucémiques présentent une capacité à résister àun processus de mort cellulaire appelé apoptose. Cet échappement aux mécanismes de la mort cel-lulaire est dû à la surexpression anormale de protéines qui empêchent la mort cellulaire, comme laprotéineMcl-1.ParmilesmécanismesmoléculairesquirendentcomptedelasurexpressiondeMcl-1,le laboratoireamontré le rôledesenzymescellulairesdéubiquitinylasesDUBs.LesDUBscontrôlentla dégradation des protéines de la cellule et leur activité est souvent perturbée dans les cancers.

Question posée, objectifs PourquoilescellulesBleucémiquesnesont-ellespaséliminéeschezlespatientsatteintsdeLeucémieLymphoïdeChronique?Leprocessusd’apoptosemetenjeuplusieursprotéinesenzymatiquesetl’uned’entreellesestsansdoutealtéréedans lescellules leucémiques,entrainant lamauvaiseéliminationdescellules.Ceprojetderechercheavaitpourobjectifd’identifierlesenzymesDUBsquiempêchentladégradationdelaprotéineMcl-1etfavorisentlasurviedescellulesBleucémiques.

Résultats obtenus LaprotéineDUBUSP14aétéidentifiéedanslescellulesleucémiques.LesrésultatsmontrentqueDUBUSP14empêcheladégradationdeMcl-1etprovoqueainsilasurvieaccruedescellulesBleucémiques.

Avancées Ces travaux indiquent que les enzymes DUBs sont des cibles thérapeutiques potentielles dans les leucémies. Ils constituent une étape essentielle dans le développement de nou-veaux traitements de la LLC-B.

63

82

1 PROJET SUBVENTIONNÉ n°2010-11Evaluation de l’alloréactivité NK anti-tumorale en fonction du degré d’incompatibilité HLA entre cellule NK et cible: De la théorie à la thérapie cellulaires

Datedelasubvention:2010DrVincentVieillard-InsermUnité543,HôpitalPitié-Salpêtrière-Paris

Contexte scientifique Les cellules Natural Killer (NK) ont la capacité de distinguer une cellule normale d’unecellule leucémique. Cette reconnaissance se fait par l’intermédiaire de marqueursspécifiques,lesKIR,exprimésàlasurfacedescellulesNK.LesKIRreconnaissentlesmoléculesHLAprésentes à la surface de pratiquement toutes les cellules de l’organisme. Les molécules HLAsont particulières à chaque individu, sont déterminées génétiquement et confèrent ainsi une« carte d’identité » individuelle. A la surface d’une cellule anormale, comme la cellule leucémique,le profil de ces molécules est modifié ce qui va provoquer leur destruction par les cellules NK..

Question posée, objectifs L’objectifdesétudesétaitdedéterminerdansdeuxétudescliniquesmulticentriquesréaliséesenFrance,lerôleexactjouéparcescellulesNKdansledestructiondescellulesleucémiques.

Résultats obtenus Dansunepremièreétude,descellulesNKontétéinjectéeschezunpatientenrechuted’uneleucémieaigüemyeloide(LAM).Aucuneffetadversen’aétéobservé.LescellulesNKinjectéessesontamplifiéesetontétécapablesdedétruirelescellulestumorales.UnesecondeétudeestencourssurdespatientsatteintsdeLAMet traitésparunegreffedesangdecordon. LescellulesNKsontparmi lespremièrescellulesàsereconstitueraprès lagreffe. Il resteàoptimiserlesprocéduresdesélectiondescellulesNKquiserontgreffées.

Avancées Ces travaux indiquent que les cellules NK pourraient être des outils thérapeutiques dans les LAM.

64

83

84

ADN AbréviationdeAcideDésoxyriboNucléique.Cettemoléculeestlesupportdel’informationgénétiquequicontient l’ensembledes informationsnécessairesaudéveloppementetau fonctionnementd’unorganisme.L’ADNestdonclesupportdel’héréditétransmiseaucoursdelareproduction.Ilestconsti-tuédequatrenucléotidesdifférentsetleurenchaînementdéfinitlaséquencenucléotidique.

ARN MessagerC’estunemoléculed’AcideRiboNucléiquequiestproduitetransitoirementdanslacellulepartranscription(copie)del’ADN.C’estl’ARNmessagerquiseraensuitetraduitenprotéines. Autogreffe ou greffe autologue Elleconsisteàpréleverdescelluleschezlepatientetàlesréinjecterchezcemêmepatientaprèsuntraitementquiéliminelescellulescancéreuses.

AllogreffeElleconsisteàgrefferàunpatientdescellulesprélevéessuruneautrepersonne.

Amplification clonaleC’estleprocessusdemultiplicationdescellulesàpartird’uneseulecellule.Unclonecellulaireestconstituéparunensembledecellulesquisontissuesd’uneseulecelluleetontdonclesmêmespro-priétés.Uneamplificationclonaleaucoursd’uneleucémiesignifiequel’ensembledescellulesleucé-miquesdupatientprovientdelamultiplicationd’uneseulecelluletransformée.

Antigène Moléculeprésenteà lasurfacedescellulesquiest reconnueparuneseuleautremoléculeappeléeanticorps.

AnticorpsProtéine produite par le système immunitaire qui détecte et neutralise un antigène spécifique. LesanticorpssontsécrétéspardescellulesdérivéesdeslymphocytesB:lesplasmocytes.

Blastes leucémiquesCesontlescellulesleucémiquescaractériséesparleurétatindifférencié.

85

CelluleLacelluleestl’unitéstructuraleetfonctionnellequiconstituelesorganismesvivants.Elleestconsti-tuéed’uncytoplasmeetd’unnoyauetestdélimitéeparlamembraneplasmique.

Cellules fonctionnellesChaquecelluleaunefonction.Parexemple,parmilescelluleshématopoiétiques,lafonctiondesglo-bulesrougesestdetransporterl’oxygènedanslestissusetlafonctiondesplaquettesestdepermettrelacoagulationdusanglorsd’unsaignement.

Chimiothérapie - Drogues anticancéreuses Lachimiothérapieestletraitementdesmaladiesavecdesdroguesoudesproduitschimiques.Cesproduitschimiquestuentlescellulesenbloquantlasynthèsedemoléculesessentiellesàlavieetlafonctioncellulaire.Leterme«chimiothérapie»estgénéralementutilisépourletraitementcontrelecancer.Lesdroguesanticancéreusespeuventêtreadministréesseulesouenassociationavecd’autresdrogues.

Chromosome Ilestconstituéparlesmoléculesd’ADNsousuneformecompacteetcontiennentdonctouslesgènes.Ilssontregroupésdanslenoyaudelacellule.Lorsdeladivisioncellulaire,ilssepartagentendeuxchromosomesidentiquesquisontrépartisdanslesdeuxcellulesfilles.

Critères biochimiques Ilssontdéfinisparlesmoléculesprésentesdanslacellule.

Critères cytogénétiquesIlsdécriventleschromosomesetleursanomalies.

Critères génétiques Ilsdécriventlesgènesetsontétablisaprèsséquençagenucléotidiquedel’ADN.

Critères immunologiques Ilsdécriventlesmoléculesquisontàlasurfacedelacellule(lesantigènes)etsontreconnuespardesanticorps.

86

Critères morphologiques Ilsdécriventlesparamètresobservésaumicroscope:taille,aspect,forme,tailledunoyauparrapportaucytoplasme…

Cytoplasme Ildésigne lecontenude lacellulevivante. Ilestconstituéd’unmilieuhétérogène, lecytosol,danslequelbaignent lesorganitescellulaires(noyau,mitochondries,appareildeGolgi,réticulumendo-plasmique...) EXONLegénome(l’ADN)d’unecelluleestconstituéd’unesuccessiondedomaines:lesexonsetlesintrons.Lesexonssontlesrégionsdel’ADNquisonttranscritesenARNmessager.LesintronsnesontpastrancritsenARNmessager.

Facteur de transcription Protéinequisefixeàl’ADNetquijoueunrôledanslarégulationdel’expressiongénique.

Gène Ungèneestunfragmentd’ADNquiestresponsabledelaformationd’uneprotéine.Ungènes’exprime(expressiongénique)quandilcodepouruneprotéine.Ungèneestdit«éteint»quandilneproduitpasdeprotéine.Touslesgènessontprésentsdanstouteslescellulesmaisselonletypedelacellule,ils’exprimeouestéteint.Parexemple,legènedel’hémoglobines’exprimedanslescellulesquipro-duirontlesglobulesrouges,ilestéteintdanslescellulesquidonnentlesglobulesblancs.

GénomeL’ensembledesgènesconstituelegénome.

Lignage hématopoiétiqueUnlignagehématopoïétiqueestl’ensembledescellulesquidériventd’unecellulesoucheetgénèrentlescellulessanguinesfonctionnelles.Letissuhématopoïétiqueestconstituédedifférentslignages:lelignageérytroïde(aboutissantauxglobulesrouges),lelignagegranulo-macrophagique(aboutissantauxpolynucléairesetauxmacrophages),lelignagemégacaryocytaire(aboutissantauxplaquettes)etleslignageslymphoïdes(aboutissantauxlymphocytes).

Maladie résiduelle Lamaladie résiduelleest représentéepar lescellulescancéreuses (blastes)quisubsistentdans lamoëlleàl’issuedestraitementsetnesontpasdétectéesparlestechniquesenusage.

87

Marqueur CD34Antigèneprésentàlasurfacedescellulessouchesetdesprogéniteurshématopoïètiques.L’antigèneCD34permetdedénombreretdesélectionnerlescellulessouchesquil’expriment.

MutationModificationdelaséquencenucléotidiqued’ungèneetdelaséquencedelaprotéinecorrespondante.

Noyau Lenoyauestl’organitecellulairequicontientlematérielgénétique.Ilestdélimitéparlamembranenucléaire.

Récepteurs Protéinesquisontintégréesdanslamembranecellulaireetpeuventfixerunfacteurdecroissance.

Protéine Moléculequiestexpriméeàpartird’ungène.Ellecomposéed’uneouplusieurschaînesconstituéesde21acidesaminésdifférents.L’enchainementdesacidesaminésdéfinitlaséquenceprotéique.Parexemple,lesenzymes,lesfacteursdecroissancesontdesprotéines.

Thérapie cellulaire Lathérapiecellulaireutilisedescellulescommemédicamentpourréparerlesorganesendommagésouremplacerlescellulesdontlafonctionestdevenueanormale.

Thérapie ciblée Quandl’altérationd’uneprotéineparticulièreluiconfèreunefonctionanormalequientraineunemala-die,unethérapiecibléeapourbutdesupprimerlafonctionanormaledecetteprotéine.

Thérapie différenciatrice Lathérapiedifférenciatriceapourbutd’imposeràunecellulebloquéedanssadifférenciationdesedifférencier.

Voie de signalisationC’estlacascadederéactionsbiochimiquesquiestdéclanchéelorsdelafixationdufacteurdecrois-sancesursonrécepteur.Plusieursvoiesdesignalisationpeuventêtreactivées.Ellesprovoquentlaprolifération,ladifférenciationoulamortdelacellule.

88

AssociationLauretteFugainLotn°1674-101ruedeSèvres75279Pariscedex06

www.laurettefugain.orgSuiveznotreactualitésurlesréseauxsociaux:https://www.facebook.com/associationlaurettefugainhttps://twitter.com/AssoALF

Pourtoutequestion,vouspouvezcontacterDelphineHoffmann(delphinehoffmann@laurettefugain),quiacoordonnélaréalisationdecettebrochure.