7
Immunoanal Biol Sp~c (1990) 21, 39-45 © Elsevier, Paris 39 Strategies d'exploration fonctionnelle et de suivi therapeutique Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de I'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimetrie, et d'HCS par immunoenzymologie F Barb~, H Legagneur, Y Badonnel Laboratoire de chimie biologique, maternit&r&gionale, 54042Nancy, France (Regule ler d~cembre1989;accept~le 7 f~vrier 1990) R~sum~ m La technique de dosage de I'estriol par polarisation de fluorescence (total estriol, TDx Abbott) est simple et rapide. La rdp~tabilit~, la reproductibilit~ et la lin~arit~ sont bonnes. II n'existe pas de contamination interdchantillon. L'exactitude est satisfaisante pour les dosages en solution primaire. Par contre, la comparaison avec la mdthode de chromatographie en phase gazeuse apr~s extraction sur r~sine recommand~e par la soci~t~ frangaise de biologie cli- nique met en ~vidence I'existence d'une substance interf~rant dans le dosage par polarisation de fluorescence. L'inter- pr~tation clinique du bilan hormonal montre une assez bonne ~quivalence des r~sultats d'estriol par les deux m~thodes et une absence d'~quivalence des r6sultats d'estriol urinaire, d'estriol plasmatique et d'HCS. estriol / immunopolarofluorimdtrie / chromatographie en phase gazeuse / hormone chorionique somatomam- motrophique / grossesse Summary -- Hormonal surveillance of pregnancy : estriol dosage in urine and plasma by gas-liquid chromato- graphy, fluorescence polarization immunoassay, and HCS by immunoenzymology. The fluorescence polarization immunoassay for estriol (Total Estriol, TDx Abbott) is practical and rapid. The assay allows good reproductibility, linea- rity and no interassay carry-over. The comparison with our gas-liquid chromatography method which is recommended by the French Society of Clinical Biology and involves an extraction step, showed a substance which interfered with the dosage. The clinical interpretation between different results in plasma and urine (estriol and human chorionic somatomamnotropin) from the same pregnant women, showed a rather good equivalence between the 2 methods for estriol, and no equivalence between the other parameters, estriol and human chorionic somatomammotropin. estriol / fluorescence polarization immunoassay / gas-liquid chromatography / human chorionic somatomam- motropin / pregnancy Introduction On pouvait penser que I'av~nement de 1'6chogra- phie en obst~trique avait donn6 le coup de gr&ce I'hormonologie urinaire de la grossesse [8]. En fait, la surveillance hormonale de la gestation r~v~le plus pr~coc~ment que I'~chographie une souffrance fcetale latente [6, 14]. Elle contribue de fagon irremplagable & la prevention d'accidents, souvent difficiles & corriger une fois constitu~s, sans remplacer ou rejeter au second plan les investigations cliniques et ~chographiques. Depuis la d~couverte des techniques immuno- Iogiques non isotopiques, nous disposons de plu- sieurs m6thodes d'exploration du bien-~tre mater- nel et foetal. Depuis de nombreuses ann~es, le bilan hormonal de la grossesse fait appel, ~. la maternit6 r~gionale de Nancy, aux dosages chro- matographiques de l'estriol et du pr~gnandiol uri- naires auxquels s'ajoute depuis quelques ann6es la d~termination de I'hormone chorionique soma- tomammotrophique (HCS) plasmatique. La m~thode TDx Abbott permet d'explorer restriol plasmatique et urinaire par la m~me technique. Nous avons ~tudi~ 59 bilans hormonaux de grossesse comportant les dosages plasmatiques de I'HCS et de I'estriol ainsi que les dosages uri- naires de I'estriol par chromatographie en phase

Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

  • Upload
    y

  • View
    217

  • Download
    0

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

Immunoanal Biol Sp~c (1990) 21, 39-45 © Elsevier, Paris

39

Strategies d'exploration fonctionnelle et de suivi therapeutique

Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de I'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et

immunopolarofluorimetrie, et d'HCS par immunoenzymologie

F Barb~, H Legagneur, Y Badonnel

Laboratoire de chimie biologique, maternit& r&gionale, 54042 Nancy, France

(Regu le ler d~cembre 1989; accept~ le 7 f~vrier 1990)

R~sum~ m La technique de dosage de I'estriol par polarisation de fluorescence (total estriol, TDx Abbott) est simple et rapide. La rdp~tabilit~, la reproductibilit~ et la lin~arit~ sont bonnes. II n'existe pas de contamination interdchantillon. L'exactitude est satisfaisante pour les dosages en solution primaire. Par contre, la comparaison avec la mdthode de chromatographie en phase gazeuse apr~s extraction sur r~sine recommand~e par la soci~t~ frangaise de biologie cli- nique met en ~vidence I'existence d'une substance interf~rant dans le dosage par polarisation de fluorescence. L'inter- pr~tation clinique du bilan hormonal montre une assez bonne ~quivalence des r~sultats d'estriol par les deux m~thodes et une absence d'~quivalence des r6sultats d'estriol urinaire, d'estriol plasmatique et d'HCS.

estriol / immunopolarofluorimdtrie / chromatographie en phase gazeuse / hormone chorionique somatomam- motrophique / grossesse

Summary - - Hormonal surveillance of pregnancy : estriol dosage in urine and plasma by gas-liquid chromato- graphy, fluorescence polarization immunoassay, and HCS by immunoenzymology. The fluorescence polarization immunoassay for estriol (Total Estriol, TDx Abbott) is practical and rapid. The assay allows good reproductibility, linea- rity and no interassay carry-over. The comparison with our gas-liquid chromatography method which is recommended by the French Society of Clinical Biology and involves an extraction step, showed a substance which interfered with the dosage. The clinical interpretation between different results in plasma and urine (estriol and human chorionic somatomamnotropin) from the same pregnant women, showed a rather good equivalence between the 2 methods for estriol, and no equivalence between the other parameters, estriol and human chorionic somatomammotropin.

estriol / fluorescence polarization immunoassay / gas-liquid chromatography / human chorionic somatomam- motropin / pregnancy

Introduction

On pouvait penser que I'av~nement de 1'6chogra- phie en obst~trique avait donn6 le coup de gr&ce

I'hormonologie urinaire de la grossesse [8]. En fait, la surveillance hormonale de la gestation r~v~le plus pr~coc~ment que I'~chographie une souffrance fcetale latente [6, 14]. Elle contribue de fagon irremplagable & la prevention d'accidents, souvent difficiles & corriger une fois constitu~s, sans remplacer ou rejeter au second plan les investigations cliniques et ~chographiques.

Depuis la d~couverte des techniques immuno- Iogiques non isotopiques, nous disposons de plu-

sieurs m6thodes d'exploration du bien-~tre mater- nel et foetal. Depuis de nombreuses ann~es, le bilan hormonal de la grossesse fait appel, ~. la maternit6 r~gionale de Nancy, aux dosages chro- matographiques de l'estriol et du pr~gnandiol uri- naires auxquels s'ajoute depuis quelques ann6es la d~termination de I'hormone chorionique soma- tomammotrophique (HCS) plasmatique. La m~thode TDx Abbott permet d'explorer restriol plasmatique et urinaire par la m~me technique.

Nous avons ~tudi~ 59 bilans hormonaux de grossesse comportant les dosages plasmatiques de I'HCS et de I'estriol ainsi que les dosages uri- naires de I'estriol par chromatographie en phase

Page 2: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

40 F Barb6 et al

gazeuse et par polarisation de fluorescence (technique TDx Total Estriol Abbott), m~thode que nous nous proposons d'~tudier.

M a t e r i e l e t m e t h o d e s

Patientes

L'~tude porte sur un ou plusieurs dosages concernant 47 femmes enceintes de moyenne d'&ge 27,3 + 6,3 ans (extremes 17 & 43 ans). Les bilans hormonaux uri- naires et plasmatiques ont ~td rdalis~s au cours du 2 e ou du 3 e trimestre de grossesse dans respectivement 25 et 75% des cas, la moyenne de I'&ge de grossesse ~tant 31,6 + 6,3 semaines (extr6mes 16 & 40). Trois femmes ont #t~ re£ues en consultation externe, la majorit~ 6tait hospitalisde. Le bilan a 6t~ rdalisd dans le cadre d'une surveillance syst~matique (20) ou d'une pathologie (27) : hydramnios (1), hypertension art6rielle (3), insuffisance rdnale (1), menace d'accouchement pr~matur~ (4), rupture prdmatur~e des membranes (4), m~trorragies (1), pneumopathie (1), diab~te (4), exc~s pond~ral (3), scl~rodermie (1), grossesse g~mellaire (2), ant#c~dent de fausse couche (1), hypotrophie (1).

Pr#l#vements

L'estriol urinaire est dos~ sur urines de 24 h conser- v~es sur cyanure de mercure (0,04 g par flacon de 2,5 I). [.'analyse chromatographique est effectu~e dans les 24 & 48 h (n=58). La mesure par polarisation de fluorescence est faite apr~s congdlation & -20°C puis d~cong~lation lente & 4°C (n=54)

L'hormone chorionique somatomammotrophique (HCS) et I'estriol sont dos6s dans le plasma (sang recueilli sur h~parinate de lithium), le pr61~vement ~tant effectu~ le matin & jeun pendant la dur~e du pr~l~ve- ment urinaire. L'HCS est dos6e dans les 24 h, I'estriol apr6s cong~lation puis d~cong~lation lente.

M#thodes

L'estriol urinaire est mesur~ par chromatographie en phase gazeuse (CPG) selon la technique standardis~e de la soci~t~ fran(;aise de biologie clinique (SFBC), d'aprds la m~thode de Pierrat et al [12] modifi~e [1, 2, 7] utilis~e en routine dans notre laboratoire, ainsi que par polarisation de fluorescence selon la technique TDx Total Estriol Abbott.

Principe du dosage de I'estriol par CPG Apr~s hydrolyse enzymatique (suc d'Helix pomatia pH 5,2 durant 16 h ~. 37°C), I'estriol est extrait par passage sur r6sine Dowex AGI-X2 acetate en milieu acide (HCI 2N) [7]. L'extrait m~thanolique est ~vapor~ ~ 60°C sous azote, silyl~ par 100 ILl du m~lange bis-trim~thylsilyltri- fluoroac~tamine (80v)/trim~thylchlorosilane (20v) [5, 1], puis mesur~ par CPG (chromatographe Girdel G30-1, colonne capillaire en quartz SE 30 de 15 m x 0,32 mm, four isotherme & 235°C, d~tecteur & ionisation de flam- me).

Principe du dosage de I'estriol urinaire et plas- matique par polarisation de fluorescence (TDx

Total Estriol Abbott, 94510 Rungis, France. R6f 9112-20) Apr~s prdtraitement de I'dchantillon (solution P, surfac- tant), puis hydrolyse (solution S, glucuronidase d'E coh), I'estriol entre en compdtition avec le traceur (solu- tion T, estriol lid & de la fluorescdine) pour occuper un nombre iimitd de sites de liaison d'anticorps spdci- fiques (solution S, antisdrum de lapin anti-estriol). L'intensit~ de la polarisation de fluorescence qui est inversement proportionnelle & la quantitd de traceur lid

I'anticorps et t~ la concentration d'estriol de I'dchan- tillon, est comparde & une gamme d'dtalonnage en 6 points de 0 & 1457 nmol/I (Total Estriol Calibrator, rdf 9112-01, concentration des calibrateurs 0, 104, 208, 364, 729, 1457 nmol/I). Le plasma est analysd non dilu6, les urines le sont au 1/100 ou 1/200 dans du tampon phosphate (tampon TDx, r~f 9519-02).

Principe du dosage de I'HCS (HPL-Nosticon Organon Teknika, 94267 Fresnes France) L'HCS plasmatique est mesurde par mdthode immu- noenzymatique de type compdtitif, dtudide par Cddart et al [3] et Patricot et al [11]. L'HCS de I'dchantillon entre en compdtition avec de I'HCS marqud par une enzyme pour occuper un nombre de sites anticorps spdcifiques (antisdrum de lapin anti-HCS). Apr~s prdci- pitation du conjugud libre par une suspension d'anti- corps anti-immunoglobulines de lapin couplds & de la cellulose puis rdvdlation par le substrat spdcifique, on mesure I'intensitd de la coloration obtenue, qui est inversement proportionnelle & la quantitd d'HCS de I'dchantillon.

R e s u l t a t s

L'ensemble des r6sultats d'estriol et d'HCS obte- nus pour chaque patiente est pr~sent~ dans le tableau I.

Nous avons ~tudi~ les caract~ristiques de la m~thode Abbott : (precision, lin~arit~, exactitude, specificitY, contamination inter-6chantillon) et compar~ la signification des interpr6tations cli- niques des r~sultats d'estriol et d'HCS.

Etude de la m6thode TDX total estriol Abbott

Precision R~p6tabilit~. Pour r6pondre ~. la d~finition de r6p~tabilit6, il faut au moins 20 d~terminations pratiqu~es dans la m~me s~rie par le m~me tech- nicien, ce qui n'a pu ~tre r~alis~.

Nous avons dos~ 5 & 7 fois dans une m~me s~rie le m~me 6chantillon & des niveaux diff,- rents, faiblement et moyennement doses par rap- port & la gamme 6talonnage : - plasma de concentration faible en estriol : n=5, m=136,7+3,2 nmol/I, CV=2,3%; - urines de concentration moyenne d'estriol d i lu tes 1/100 :n=7, m=605,9+8 nmol, CV=2,3% soit une concentration moyenne dans I'urine de 60 593 nmoi/I; - n=5, m=541,5+11,8 nmol/I, CV=2,1% soit une concentration urinaire moyenne de 54 150 nmol/l.

Page 3: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

Surveillance hormonale de la grossesse 41

T a b l e a u I. R~sultats des dosages d'estriol urinaire par chromatographie, d'estriol urinaire et plasmatique par immunoenzymofluor~po- larim~trie et d'HCS par immunoenzymologie,

N ° ,~ge grossesse Diur~se E3 urinaire CPG E3 urinaire TDx E3 plasmatique HCS (semaines ml nmol/I nmol/24 h nmol/I nmol/24 h nmol/I ug/1

d'am~norrh~e)

1 16 1640 4099 6723 < 173 - - 86 1131 2 19 780 14443 11266 20655 16111 - - 2000 3 36 1260 40900 51535 54342 68471 599 4101 4 37 1500 25538 38308 42710 64065 892 13281 5 36 790 52885 41779 81192 64142 663 4138 6 40 1470 62774 92278 73370 107854 997 5248 7 35 1600 40298 64478 - - - - 330 5160 8 31 1940 9582 18591 14946 28995 191 1709 9 31 1820 12856 13397 33646 61236 - - 1478

10 38 760 77902 59206 127878 89343 2342 9702 11 37 960 23377 22442 38229 36700 222 4366 12 30 1420 5152 7316 20178 28653 96 1518 13 23 620 15880 9846 18367 11387 68 2985 14 22 1550 20060 31093 29354 45499 135 3777 15 23 1470 26423 38842 30023 44134 198 4181 16 28 2080 25436 52907 32883 68397 260 4303 17 36 1500 53147 79721 79270 118905 535 6527 18 35 760 33480 25445 45606 34660 1069 4983 19 37 2800 33727 94436 40469 113296 1023 4939 20 38 2350 45135 106068 51430 118289 637 3696 21 36 1950 18294 35675 37850 73808 507 5160 22 28 2160 16750 36181 16521 35685 224 4389 23 18 3040 439 - - - - 3286 42 263 24 24 4660 5997 27947 - - - - 123 2182 25 31 1970 34673 68306 44705 88069 221 2866 26 33 2220 4355 9670 17767 39443 224 4586 27 36 1040 62237 64727 - - - - 750 7982 28 37 1380 46983 64837 60256 83153 430 2055 29 33 1180 37208 43906 52588 62054 326 7894 30 39 4440 22370 98432 ~ - - 1048 10106 31 22 1580 6609 10443 18256 28845 - - 2030 32 28 1030 37531 38657 28509 29364 295 2934 33 32 1160 48066 55757 39006 45247 246 3175 34 33 1400 13042 18259 - - - - 266 5041 35 34 1540 16507 25422 18256 28114 __ m

36 34 1580 22812 36043 26613 42049 390 4002 37 36 1120 38374 43539 48890 54757 - - 38 38 1320 35246 46525 46384 61227 - - 4719 39 37 1080 75932 82007 96870 104619 688 6703 40 25 1760 16686 29369 18589 32716 276 4158 41 37 2090 23029 48131 25056 52367 578 5821 42 21 1860 26030 48416 31174 57894 368 4666 43 34 840 32296 27129 37390 31406 211 7232 44 25 1930 13987 26995 19210 37075 210 4274 45 37 1660 22617 37545 28312 46998 210 5072 46 35 990 22295 22072 26611 26345 214 4145 47 21 3420 3223 11022 3163 10817 35 1969 48 20 870 5156 4486 10214 8886 < 17 877 49 40 860 109497 94167 118535 101940 - - - - 50 39 860 41026 35282 58546 50350 369 5178 51 26 1960 23334 45734 29181 57195 - - - - 52 30 690 40271 27787 51283 35385 191 1705 53 30 1500 27809 41714 32988 49482 184 3829 54 31 1220 46507 56739 51875 63287 260 4903 55 32 2260 24108 54485 29517 66708 409 5109 56 32 1230 56927 70021 67386 82884 - - - - 57 33 1120 52296 58572 63040 70605 605 8365 58 39 1090 60158 65573 67423 73491 312 5117 59 39 360 177161 63778 170452 61363 689 6431

Page 4: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

42 F Barb~ et al

Tableau I1. Reproductibilit~ de la m~thode de dosage de I'estriol plasmatique et urinaire par FPIA.

N Moyenne Ecart-type CV (nmol/I) (nmol/I) (%)

Urine ContrSle bas 7 15529 1131 7,2 ContrSle ~lev~ 6 45614 1871 4,1 Sang ContrSle bas 15 151,9 19,0 12,6 Contr5le moyen 13 554,1 25,6 4,6 ContrSle ~lev6 6 930,8 21,6 2,3

Reproductibilit&. Les contrSles urinaires (total estriol controls for urine, r~f 9112-40) et s~riques (total estriol controls for s~rum, r~f 9112-10) ont ~t~ doses dans chaque s~rie. Les r~sultats sont pr~sent~s dans le tableau I1.

Lin~arit~ L'urine n ° 50 titrant 109 850 nmol/I a 6t6 dilute #. raison de 6 dilutions diff~rentes du 1/2 au 1/12 (tableau III). La droite de r~gression obtenue est Y=38 + 0,896 x avec un coefficient de correlation de r=0,999.

Exactitude L'approche de I'exactitude a ~t~ abord~e de 2 mani~res • dosage d'une solution 6talon et com- paraison avec la technique recommand~e par la soci~t~ frangaise de biologie clinique.

Dosage d'une solution ~talon. Nous avons dilu~ au 1/5000 une solution-m~re ~thanolique d'estriol dans la solution tampon TDx. La solution-fille titrant 347 nmol/I a ~t~ dos~e 10 fois. Les r~sul- tats obtenus sont les suivants • n=10; m=348,38; s=26,43; CV=7,5%. La comparaison de la valeur trouv6e ~. la valeur th~orique, utilisant la table du t de Student montre une difference non significati- ve entre les deux r~sultats (~cart-r~duit 0,16%).

Comparaison avec la technique standardis~e de la SFBC. La comparaison du dosage de I'e,~triol

Tableau III. Test de dilution d'une urine.

Dilution Valeur Valeur th~orique trouv~e (nmol/I) (nmol/I)

Non dilu~ 109850 101234 1/2 54925 54925 1/4 27463 29937 1/6 18308 19988 1/8 13731 15327

1/12 9154 10765

Y -- 38 + 0,896X r = 0,999

par la technique TDx Abbott et notre m~thode chromatographique standardis~e par la SFBC a ~t~ effectu~e en ~tudiant la droite de correlation et la comparaison par s~rie appari~e. La tech- nique CPG, elle-m~me, corr~le avec la m6thode de r6f6rence (chromatographie en phase gazeu- se coupl~e ~ la spectrom~trie de masse, la droite de corr61ation en nmol/I ~tant Y=288 + 0,999 x avec n=10, r=0,997 [2]).

La comparaison par s~ries appari6esss a mon- tr~ une difference significative entre les 2 tech- niques • ~cart-r~duit=7,50 ddl 52, P <0,001 pour les r~sultats en nmol/24 h et ~cart-r~duit=7,08 ddl=52, P <0,001 pour les r~sultats en nmol/l.

Les droites de corr61ation CPG (x) et TDx (y), Y=9899 + 1,058 x, avec r=0,927 (r~sultats en nmol/24 h) et Y=8305 + 1,028 x, avec r=0,953 (r~sultats en nmol/I) montrent I'existence d'une constante d'addition de 9 899 nmol/24 h ou 8 305 nmol/l.

Sp6cificit6 La difference significative entre 2 m~thodes pour- rait s'expliquer soit par une difference de qualit~ de I'hydrolyse des glucuronides de I'estriol, I'origi- ne de I'enzyme et les conditions n'~tant pas les m~mes, soit par une interference analytique.

La premiere hypoth~se ne suffirait pas & expli- quer les r~sultats obtenus. Quel compos~ pouvait interf~rer ?

Nous avons dos~ par polarisation de fluores- cence plusieurs solutions primaires : estrone (370 nmol/I), estradiol (295 nmol/I), 16-17 epiestriol (347 nmol/I), pregnandiol (626 nmol/I). Dans cha- cun des cas le r6sultat obtenu ~tait inf~rieur au seuil de d~tection. Aucun des compos~s 6tudi~s n'interf~re dans le dosage, comme I'ont montr~ d'autres ~tudes [10, 15].

La confirmation de la presence d'une substance interf~rente a ~t~ apport~e par I'~tude des r6sul- tats des dosages de I'estriol dans-10 urines (tableau IV). L'estriol urinaire a ~t6 dos6 par la m~thode chromatographique comportant une extraction sur r6sine Dowex AGI-X2 ac6tate d'une part et par polarisation de fluorescence avec et sans extraction sur r~sine d'autre part. Nous avons analys6 les r6sultats obtenus en effectuant une comparaison par s6ries appari6es et en ~tudiant la droite de corr61ation (tableau V).

La comparaison CPG/TDx sans extraction confirme les r~sultats obtenus en consid~rant I'ensemble des 52 dosages, que les concentra- tions soient exprim~es par 24 h ou par litre. Dans le premier cas toutefois, la difference est plus sensible.

La comparaison des r~sultats des dosages sans et avec extraction montre que celle-ci apporte une diminution de I'~cart entre les

Page 5: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

Surveillance hormonale de la grossesse

Tableau IV. Dosage de I'estriol urinaire par CPG, FPIA sans extraction et FPIA apr~s extraction. R6sultats.

43

N ° CPG TDx TDx sans extraction avec extraction

nmol/I nmol/24 h nmol/I nmol/24 h nmol/I nmol/24 h

49 109497 94167 118535 101940 102234 87921 51 23334 45734 29181 57195 29735 58280 52 40271 27787 51283 35385 44885 30570 53 27809 41714 32988 49482 36865 55298 54 46507 56739 51875 63287 50420 61512 55 24108 54485 29517 66708 27390 61901 56 56927 70021 67386 82884 63685 78332 57 52296 58572 63040 70605 64932 61523 58 60158 65573 67423 73491 54166 59040 59 177161 63778 170452 61363 158592 57093

Tableau V. I~tude comparative des r6sultats des dosages pr~sent6s dans le tableau IV (S : significatif ; NS : non significatif).

X Y Comparaison par s6ries apparides Corr61ation ER interpr6tation

CPG TDx sans extraction nmol/24 h

nmol/I

TDx sans TDx avec extraction extraction

nmol/24 h

CPG

nmol/I

TDx avec extraction nmol/24 h

nmol/I

5,93 S p <0,01 Y = 9324 + 0,984 x r = 0,969

3,89 S p <0,001 Y = 10689 + 0,930 x r = 0,996

2,86 S p <0,02 Y = 9536 + 0,779 x r = 0,947

2,24 NS ° Y = 2674 + 0,889 x r = 0,993

0,27 NS Y = 17304 + 0,758 x r = 0,908

0,50 NS Y = 11966 + 0,830 x r --- 0,993

dosages chromatographiques et par polarisation de fluorescence. Si le calcul est effectu6 par 24 heures, la diff6rence est significative avec une probabilit(~ de 0,02. S'il est fait par litre, la diffe- rence est statistiquement non significative, mais elle est en fait & la limite de la significativit6 & une probabilit6 de 0,05. La comparaison des r6sultats obtenus apr~s extraction par CPG et par polarisa- tion de fluorescence montre une difference non significative, que les concentrations soient expri- m~es par 24 heures ou par litre.

Une ~tape d'extraction n'est donc pas suffisan- te pour ~liminer I'interf~rence observ~e.

Contamination inter~chantillon Une urine & concentration moyenne d'estriol par

rapport & la droite d'6talonnage a 6t~ dos~e 5 fois en alternance avec le calibrateur A titrant 0 nmol/l. Les 5 r6sultats obtenus ont ~t~ inf~rieurs au seuil de d~tection annonc6, soit 17 nmol/I. Cette absence de contamination inter~chantillon est en accord avec les travaux de Chan [4].

Limite de d6tection

La d6termination de la limite de d~tection n'a pas 6t6 abord~e dans ce travail. Elle a ~t6 calcul~e sur la concentration & deux ~carts-types au-des- sus de la valeur de I'~talon z~ro & 28 nmol/I par Chan [4], ce qui est diff6rent de la valeur annon- c~e par Abbott.

Page 6: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

44 F Barb~ et al

Interpretation clinique des r~sultats d'estriol et d'HCS

Les r~sultats des dosages d'estriol urinaires et plasmatiques ont 6t~ rangds en quatre classes en fonction des valeurs habituelles ~. chaque &ge de grossesse : - classe 1, concentrations inf~deures ~ la limite inf~rieure des valeurs habituelles; - classe 2, concentrations comprises entre la limite inf~rieure et la m~diane des valeurs habi- tuelles; - classe 3, concentrations comprises entre la m~diane et la limite sup~rieure des valeurs habi- tuelles; - classe 4, concentrations sup~rieures & la limite sup~rieure des valeurs habituelles.

Le tableau Vl montre la fr~quence de I'~quiva- lence de classe entre deux param~tres A et B.

Un travail identique a ~t~ rdalis~ avec les r~sul- tats d'HCS (tableau VII).

Tableau VI. Comparaison des interpretations cliniques des concentrations urinaires et plasmatiques d'estriol.

Estriol urinaire TDx

n = 52 I~quivalence 77% Estriol A < B de 1 classe 19% urinaire A < B de 2 classes 4% CPG

Estriol urinaire TDx

n -- 34 I~quivalence 52% Estriol C < B de I classe 21% l, 24% plasmatique C < B de 2 classes 3% J

TDx C > B de 1 classe 21% ], 24% C > B de 2 classes 3% J

D i s c u s s i o n

La technique TDx total estriol est facile ~. mettre en oeuvre et rapide. La r~p~tabilit~, la reproducti- bilit~ et la lin~arit~ sont bonnes. Nous n'avons pas montr~ de contamination inter~chantillon. Au niveau de concentration ~tudi~ (347 nmol/I), la technique pr~sente une exactitude satisfaisante pour les dosages de solutions ~thanoliques. Par contre, les dosages urinaires posent des pro- blames d'exactitude : un compos~ existant dans les urines de femmes enceintes interfere, peut- Otre par r6action crois~e avec le syst~me immu- nologique. II ne s'agit pas de I'estrone, ni de I'estradiol, ni du pr~gnandiol, ce qui 6tait pr~visible par I'existence d'une constante d'addi- tion mise en ~vidence dans I'~tude de I'exactitu- de. En effet, si I'interf~rence ~tait due & ces st~- roTdes, elle serait proportionnelle & la concentration en estriol, 1'61imination urinaire des ph6nolst~roTdes augmentant consid6rablement au cours de la gestation.

En ce qui concerne I'interpr6tation clinique du bilan hormonal, nous avons montr~ une assez bonne ~quivalence des r~sultats d'estriol urinaire (80% des cas) quelle que soit la m~thode utilis~e (tableau Vl). Par contre, la comparaison des r~sultats d'estriol urinaire et des hormones plas- matiques d'une part, des hormones plasmatiques entre elles d'autre part (tableaux Vl et VII), montre qu'il n'existe une ~quivalence que dans 50% voire 30% des cas. Les cas o~J r~quivalence n'est pas observ~e pourraient ~tre expliqu~s par le fait que les dosages d'estriol et d'HCS n'explo- rent pas les mOmes compartiments de runit6 materno-placento-foetale. En effet, I'estriol fait intervenir les trois compartiments de cette unit6, alors que I'HCS est spdcifiquement placentaire [9, 13, 16].

T a b l e a u VII. Comparaison des interpr6tations cli- niques des concentrations urinaires et plasmatiques d'estriol et d'HCS.

A • HCS

n = 53 I~quivalence 30 % Estriol A < B de 1 classe 39% urinaire A < B de 2 classes 4% I 45% CPG A < B de 3 classes 2%

A > B de 1 classe 21% } 25% A > B de 2 classes 4%

C• HCS I~quivalence 51%

Estriol C < B de 1 classe 18% } 18% plasmatique C > B de 1 classe 26% TDx C > B de 2 classes 5% j 31%

C o n c l u s i o n

Parmi la panoplie de tests & notre disposition, quelle m~thode de dosage de restriol retenir et que choisir : un dosage plasmatique ou urinaire ? La technique TDx, bien que pratique, n'est pas suffisamment exacte. Les taux plasmatiques seraient plus sujets & des variations d'un jour ~. l'autre [6], mais la r~ponse est obtenue plus rapi- dement.

Le recueil de I'urine est long, fastidieux, parfois incomplet et tributaire de I'~tat r6nal de la patien- te. Mais le dosage urinaire refl6te mieux la pro- duction de I'estriol, un dosage plasmatique n'6tant qu'un instantan~ de cette s~cr~tion.

Le choix entre un dosage d'HCS et d'estriol est fonction de la clinique. Une suspicion de souffran-

Page 7: Surveillance hormonale de la grossesse : dosage de l'estriol urinaire et plasmatique par chromatographie en phase gazeuse et immunopolarofluorimétrie, et d'HCS par immunoenzymologie

Surveillance hormonale de la grossesse 45

ce placentaire fera pr~f~rer un dosage d'HCS, une souffrance feetale celui de I'estriol, bien que la premi6re puisse entraTner la seconde [3].

En fait, nous confirmons qu'un dosage d'estriol ou d'HCS ne permet pas & lui seul, sauf s'il est effondr~, de diagnostiquer une souffrance feetale. II faut consid6rer I'~volution des concentrations plasmatiques et des 61iminations urinaires. Une ~tude int6ressante serait & envisager qui pren- drait en compte I'~volution, au cours de la gros- sesse de plusieurs patientes, des concentrations d'HCS et d'estriol plasmatique et urinaire dos6 par les deux techniques.

References

1 Badonnel Y, Legagneur H (1980) I~tude comparati- ve du dosage de l'estriol urinaire au cours de la grossesse apr6s extraction par r~sine ~changeuse d'ions et extraction par solvants. In : Biologie pros- pective. Comptes rendus du 4 e colloque de Pont- &-Mousson (Siest G, Galteau MM, eds) Masson, Paris, 776-780

2 Badonnel Y, Legagneur H, Patricot MC (1984) Dosage de restriol au cours de la grossesse de plus de 16 semaines. Extraction par chromatogra- phie sur r6sine 6changeuse d'ions et mesure par chromatographie en phase gazeuse. ISB 10, 13-17

3 Cedar L, Dallot E, Janssens Y (1980) Dosages enzymo-immunologiques de I'hormone lactog6ne placentaire et des oestrog6nes totaux dans les grossesses normales et pathologiques (premi6re et deuxi6me pattie). Feuill biol XXl, 47-58 et XXl, 39- 51

4 Chan DW, Kinzler J, Taylor E (1985) Evaluation of Total Estriol by Fluorescence Polarization Immu- noassay in Serum and Urine from Patients with high Risk Pregnancy. Clin Chem 31,964

5 De Hertogh R, Bietlot Y, Thomas K, Vanderheyden I, F6rin J (1973) D6termination simultan~e de I'HCS et des ~strog6nes libres plasmatiques au cours de la grossesse normale. In : Exploration hormonale de la grossesse. Symposium International Paris / Fresnes octobre 1973 (Fondation de Recherche en Hormonologie R Scholler, eds) SEPE, Paris, 373- 384

6 Fiet J, Gourmel B, Villette JM, Tabuteau F, Julieff R, Ciraru-Vigneron N, Dreux C (1983) R61e actuel du laboratoire dans la surveillance hormonale de la grossesse. Feuill Biol XXlV, 39-52

7 Kekhia B, Kalai N, Alguemi C, Khouadja C, Kallal Z (1978) Dosage des st6ro'fdes urinaires par colonnes Biorad : avantages et inconv6nients. In : M~thodologie. Exploration de la corticosurr~nale. Exploration de la grossesse. Exploration de I'ovai- re. Comptes rendus du symposium international sur les hormones st~ro'fdes (Kekhia B, Scholler R, Kallal Z, eds) Soci6t6 Africaine de Presse, Tunis, 31-61

8 Merger C, Blanc B, Ruf H (1981) Actualit6 des dosages hormonaux en obst6trique. Concours M&d 103, 3155-3167

9 Merger C, Guinot N, Blanc B, Ruf H (1982) Dosage plasmatique de HCS et b6taSP1 dans les gros- sesses normales et pathoiogiques. J Gyn~col Obst et Biol Reprod 11,573-582

10 Osikowicz G, Vanderbilt A, Spring T, Fino J, Ship- chandler M (1984) A Fluorescence Polarization Immunoassay Quantitating Total Estriol in Serum and Urine. Clin Chem 30, 1043

11 Patricot MC, Cadot R, Mathian B, Revol A (1981) Dosages immunoenzymatiques de I'hPL et des ~strog6nes totaux au cours de la grossesse. Ann Biol clin 39, 351-354

12 Pierrat G, Prost M, Lavou~ G, Lumbroso C (1976) Utilisation d'un 6changeur d'ions comme moyen rapide d'extraction appliqu6 au dosage des ~stro- g6nes et du pr~gnandiol urinaires de grossesse par colorim~trie ou par chromatographie en phase gazeuse. Ann Biol clin 34, 423-430

13 Puech F (1977) Surveillance obst6tricale et m6dica- le de la grossesse Rev M~d 2, 71-78

14 Ribon M (1989) Le bon <<gouvernement,, de la femme enceinte. Bulletin de rassociation des 616ves et anciennes 616ves de 1'6cole d'accouche- ment de la maternit~ de Nancy juin, 12-17

15 Starup-Brynes I, Osikowicz G, Vanderbilt AS, Fino J, Schipchandler MT (1986) A Fluorescence Polari- zation Immunoassay Quantitating Unconjugated (free) Estdol in Serum. Clin Chem32, 1170

16 Vokaer R (1978) Caract6ristiques hormonales de la grossesse : applications pratiques (1978) In : M~thodologie. Exploration de la corticosurr~nale. Exploration de la grossesse. Exploration de I'ovai- re. Comptes rendus du symposium international sur les hormones st~roides (Kekhia B, Scholler R, Kallal Z, eds) Soci~t6 Africaine de Presse, Tunis, 329-365