Troponine - Myoglobine - lbmroanne.comlbmroanne.com/docs/Cardiologie/Troponine Myoglobine.pdf · Vitros ECI AIO Molécule de Troponine I = Dégradation ou phosphorylation ... 0 50

Troponine - Myoglobine

Bilan du Contrôle de qualitéPro Bio Qual

M. Manchon – R. Meley – JC Eynard – D. Grafmeyer

EPU 10 Avril 2006

Troponines

Plan

Rappel de la structure et des formescirculantes

Hétérogéneité des méthodes dedosages

Résultats du Contrôle Pro Bio Qual

Structure du complexe

Les trois molécules deTroponine

Troponine C 18 kDa fixe le calcium,

identique dans tous les muscles

Troponine T 37 kDa - 298 AA, isoformes cardiaque etsquelettique

Troponine I 24 kDa – 210 AA,

fait partie du complexe régulateur,existe sous 3 isoformes dont l’isoformecardiaque

Myocyte Formes circulantes

dans le sang, après nécrose

myofibrille

cytosol

précoces tardives

T libre

I libre

T – C – I

C – I

Formes dégradées

légende

Formes circulantes

Juste après la nécrose cardiaque la troponine libred’origine cytosolique est retrouvée dans le sang

Au pic, formes complexées, C-I ou C-I-T Présence de formes dégradées - Rôle des

protéases lysosomiales - Les extrémités N et C dela Tn I sensibles à la protéolyse - Site de coupureen position 27

Phosphorylation et Oxydation des SH de la Tn I---------------------

Problème des isoformes foetales

Difficultés des immunodosages

Dosages Immunometriques (sandwich)en phase hétérogène

Expression épitopique Calibration Anticoagulants Centrifugation Sensibilité

Expression épitopique

Anticorps dirigés contre la partiecardiospécifique mais reconnaissentl’ensemble des formes circulantes defaçon hétérogène

Les zones N et C terminales sont plusfragiles : proteolyse, phosphorylation

Liaison avec la Tn C Liaison avec l’héparine

Différents anticorps utilisés

NH2 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 COOH

AxSym

Architect

Advia Centaur

Access

AIA II

Vitros ECI

AIO

Molécule de Troponine I

= Dégradation ou phosphorylation

= liaison I - C= partie la plus stable

Calibration Troponine I

Le calibrant n’est encore passtandardisé

Matériau de référence internationaldécidé par l’AACC : complexe ternaireTn I-T-C sous forme liquide titré par leNIST

Autres difficultés

Anticoagulants :- EDTA chélate le Ca et provoque la rupture des

complexes d’où forte proportion de Troponine libre- Héparine semble modifier l’interaction avec les

anticorps d’où résultats différents entre sérum etplasma

Une centrifugation insuffisante peut conduireà des faux positifs à cause de débrisd’hématies

Anticorps hétérophiles

Contrôle ponctuel Pro-Bio-Qual

4 enquêtes par an Tn I, Tn T, Myoglobine 3 niveaux de concentration Sérum humain surchargé en myoglobine

et en complexe ternaire I-T-C Existe depuis 2003, nombre croissant

d’inscrits

Popularité des méthodes

Troponine T

Elecsys Roche24 réponses en 2002,42 en 2006 Apparition du cardiac

reader

Troponine I

202 réponses en 2002,219 en 2006

Grand nombre detechniques

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

1 2 3 4

Access (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)

Architect (Abbott Diagnostics) AxSym (Abbott Diagnostics) Dimension (Dade Behring)

Immulite (DPC France) Stratus CS (Dade Behring) Vidas (bioMérieux)

Vitros ECi (Ortho Diagnostics)

Popularité des techniques troponine I

Troponine T

Précision interlaboratoires (CV %)

0

4

8

12

2003 2004 2005 2006

2 CQ au lieu de 6

0

5

10

15

20

25

30

Acces

s (B

eckm

an)

Advia C

enta

ur (Bay

er D

iagnost

ics)

AIA (E

urogén

étics

)

Archite

ct (A

bbott Diag

nostics

)

AxSym

(Abbott

Diagnost

ics)

Dimen

sion (D

ade B

ehrin

g)

Imm

ulite (

DPC Fra

nce)

Stratu

s CS (D

ade B

ehrin

g)

Vidas

(bio

Mér

ieux)

Vitros E

Ci (Orth

o Diag

nostics

)

CV

%

2003

2004

2005

2006

Troponine I

Précision interlaboratoires (CV%)

0,0

2,0

4,0

6,0

8,0

10,0

12,0

14,0

16,0

18,0

20,0

Acces

( Bec

kman

)

Advia

Centa

ur (B

ayer

)

AIA (E

urog

énét

ics)

Archit

ect (

Abbot

t)

AxSym

(Abb

ott)

Dimen

sion

(Dad

e)

Imm

ulite

(DPC F

ranc

e)

Stratu

s CS (D

ade)

Vidas (

Biomér

ieux)

Vitros

Eci

(Orth

o)

CV

tr

mo

y %

contrôle seuilcontrôle positif contrôle très positif

Précision en fonction des sérums de contrôle (2005)

0

200

400

600

800

1000

0 4 8 12 16 20





Différences inter techniques 2003 – 2004% de variation

0

200

400

600

800

1000

0 4 8 12 16 20





Différences inter techniques 2005 – 2006% de variation

Cas de l’AxSym et de l’Architect

Hypothèse G. Lefèvre

24-40 40-49 87-92 24-40 40-49 87-92

- Si altération de la zone 24-40 AxSym plus bas que Architect- Si altération ou mauvaise reconnaissance de la zone 40- 49Perturbation des résultats sur les 2- Si altération de la zone 87-92 Pas de conséquence

AC Capture

AC Révélation

Essais à faire

Fabriquer des sérums de contrôle surchargésavec d’autres formes de Troponine : formeslibres, complexes binaires, formesphosphorylées, dégradées

Tester en parallèle différentes techniques surdes sérums de patients obtenus au coursd’une cinétique post infarctus du myocarde

Evaluer les techniques en terme de sensibilitéet de spécificité

Myoglobine

Plan

Rappel de la Structure Méthodes de dosage Résultats du contrôle Pro Bio Qual

Popularité Précision Exactitude Essai d’intercalibration

Structure de la Myoglobine

Protéine héminique deforme sphéroïde et defaible poids moléculaire(17,8 kDa)

Il n’existe pas d’isoformecardiospécifique

Dosage de la Myoglobine

Le dosage de la myoglobine est réalisésur sérum ou plasma hépariné.

La myoglobine est une molécule stablequi se conserve bien dans le sérum.

Méthodes de dosage

Dade BehringRéactif N Latex BNNéphélémétrie

BeckmanBayerEurogeneticsAbbottDade BehringRocheBiositeBioMerieux

AccessAdvia CentaurAIAArchitect, AxsymDimension, Stratus CSElecsysTriageVidas

Immunodosagesavec marqueurs(79 % des techniques)

Dade BehringOlympusRoche

Intégra, TurbiquantAU TurbidimétrieTinaquant

Turbidimétrie(20 % des techniques)

FournisseurTechniquePrincipe

Popularité des méthodes

0%

20%

40%

60%

80%

100%

1 2 3 4

Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)


Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring)

Tinaquant (Roche Diagnostics) Vidas (bioMérieux)

2003 2004 2005 2006

Précision Interlaboratoire

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

Acces

s/Lxi

(Bec

kman

)

Advia

Centa

ur (Bay

er D

iagnost

ics)

AIA (E

urogén

étics

)

AxSym

(Abbott

Diagnost

ics)

Dimen

sion (D

ade B

ehrin

g)

Elecs

ys (R

oche

Diagnost

ics)

Inte

gra (R

oche D

iagnost

ics)

Stratu

s CS (D

ade

Behrin

g)

Tinaq

uant (

Roche D

iagnost

ics)

Vidas

(bio

Mér

ieux)

CV

%

2003

2004

2005

2006

70

80

90

100

110

120

130

0 100 200 300 400 500

Access/Lxi (Beckman) Advia Centaur (Bayer Diagnostics) AIA (Eurogénétics)


Elecsys (Roche Diagnostics) Integra (Roche Diagnostics) Stratus CS (Dade Behring)

Tinaquant (Roche Diagnostics)

µg/l

%

Différences inter techniques

Essai d’intercalibration But : évaluer l’importance de l’étalonnage. Méthode :

- préparation d’une solution standard de myoglobinehumaine dans 4% d’albumine, soit une concentrationde 250 µg/L de myoglobine (Échantillon U1).- préparation d’un spécimen de concentration del’ordre de 60 µg/L (Échantillon U2).- analyse au cours d’une même série.

Résultats : l’échantillon U2 est recalculé en utilisantU1 comme standard.

Essai d'intercalibration

0 50 100 150 200 250

Access

Advia

AIA

Axsym

BN

Turbitimer

Dimension

Elecsys

Intégra

Opus

Stratus

Tinaquant

Vidas

An

alys

eur

Myoglobine µg/L

U2

U1

Grande dispersion des Résultats de U1 et U2

Essai de recalibration à partir de U1 pris comme étalon à

250 µg/L

Résultats : Essaid’intercalibration

Résultats U2 bruts

Résultats U2 corrigés

Conclusions

Pas de standardisation Précision des techniques acceptable Grande variabilité inter technique

Suivi des patients avec la même technique Méthode de dépannage identique à la

technique de routine

Bibliographie Recommandations sur la prescription, le dosage et

l’interprétation des troponines cardiaques Travail duGroupe de travail mixte SFBC – CNBH « Troponines »

ABC 2005 63 (3) : 245-61 Les Troponines et la Myoglobine - Fiche

Immunoanalytique - O. Gaillard Cahiers de formation Les marqueurs cardiaques n°27

2002 Standardization of immunoassay for mesurement of

myoglobin in serum. M. Panteghini et coll. ClinChimica Acta 341 (2004) 65-72.

Documents

Troponine - Myoglobine - lbmroanne.comlbmroanne.com/docs/Cardiologie/Troponine Myoglobine.pdf · Vitros ECI AIO Molécule de Troponine I = Dégradation ou phosphorylation ... 0 50