Virusdelhpatiteaetevirusetmarqueursdiagnostiques 110211081248 Phpapp02 (1)

7/25/2019 Virusdelhpatiteaetevirusetmarqueursdiagnostiques 110211081248 Phpapp02 (1)

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V.Thibault DU_janv.-11 1

Virus de l'hpatite A et E

Virus et marqueurs diagnostiques

Vincent THIBAULTLaboratoire de Virologie

Groupe Hospitalier

Piti-SalptrireAssistance Publique Hpitaux de Paris


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Hpatites virales

parentral

non A, non BB1965

D1977

A1972

fco-oral

mode de transmission prfrentiel

F, G, TTV, autres

C1990

E1991

VaccinVaccin

(Vaccin)


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Historique VHA Avant J.C.: La Jaunisse (Ikterus / kirrhos)

1745 : Cockayne, hpatites pidmiques

1908 : McDonald, "notion de virus"

Reproduction de la maladie 1942 :

Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum

Entit clinique :

17-18me sicle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA "infectious"-VHB "serum")Transmission nosocomiale (prparation vaccinale : variole, fivre jaune)

Visualisation : 1973 (Feinstone)

Dveloppement de la srologie : pidmiologie 1979 : culture (Provost et Hilleman)

1981... : Clonage, Squences nuclotidiques

1991 : Vaccination

2006 : Dclaration obligatoire

1995 : Vaccin

1996 : recommandations

1999 : recommandations


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Virus de l'hpatite A


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Virus de lHpatite A

ARN (+)

Vpg

Capside

27-32nm

Famille : Picornaviridae

(entrovirus type 72)

Genre : hpatovirus

Taille 27-32 nm

Non envelopp Structure icosadrique

ARN simple brin, polarit positive

li de faon covalente une protine Vpg


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VP1VP3VP2

VP4 2AProtines de surfaceimmunognicit

3D (POL)3C (PRO)2C2B1D1C1B 3A-B2A

P1prot. Capside

Vpg

2.5kDa

P2 P3

0 7478

1AAAA

Structurales Non structurales

IRESTraduction(eIF-4G)

3D (POL)3C (PRO)2C2BVP1VP3VP2

3A-B

VP4

2Apoly-

protine2 227 AA

?

Liaison NTPHlicase

Vpg

Protase

ARNPolymrase

RplicationVP1VP3VP2VP4 2A

VP0

Maturation finale

X5 X12


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Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules

P3

P2

P1

TraductionSynthse

de la polyprotine

+-

-

+

Rplication

Maturation

Librationdu gnome

Attachement

Relargage

Mem

brane

ce

llu

lair

e

Rticulumendoplasmique

Espacede Disse

Canaliculebiliaire

Empaquetage


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Seth et al. Cell Research (2006)16: 141-147Fensterl et al. JOURNAL OF VIROLOGY, Sept. 2005, p. 1096810977Yang et al. (2007) PNAS 104 :7253-7258

Hepatitis A Virus Suppresses RIG-I Mediated IRF-3 Activation ToBlock Induction of Beta Interferon

*

*


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VHA : physiopathologie

Absence d'effet cytopathique direct :

cytolyse rsultant du processus immun de

dfense de l'hte,mdiation cellulaire

mdiation humorale


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Agents Stabilit

Chaleur

Autoclavage (121C, 20')

100C60Ctemprature ambiante

4CCongel

Inactivation

InactivationStable 1 heureStable 1 mois (selles, eaux, sols)Plusieurs jours sur surface sche4 h. Sur les mainsStable plusieurs moisStable des mois ou annes

Acide-base pH 1 : stable 5 h.PH 3-11 : stable au moins 30'

U.V. InactivationChimiques

Chlore, ozone,glutaraldhyde, iode

Inactivation

Alcool 70 3' : inactivation partielle

Proprits Physiques du VHA


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VHA et agents physiques ou chimiques

http://www.invs.sante.fr/publications/2009/guide_hepatite_a


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Variabilit gntique

Comparaison nuclotidique

7 Gnotypes : IA,B ; II; IIIA,B ; IV-VII

Homme : gnotype I (90%), (III, II=VII)Singes : IV, V, VI

Srotype unique

Nombre limit d'pitopes antigniques VP1, VP3

Tests immunologiques

Vaccination (HM175, CR326)

virus inactiv cultiv sur MRC-5

3D (POL)3C (PRO)2C2B1D1C1B 3A-B2A

P1prot. Capside

Vpg

2.5kDa

P2 P3

0 7478

1AAAA

Structurales Non structurales


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IV Nonhuman primate, PhilippinesV Nonhuman primate, KenyaVI Nonhuman primate, Indonesia

D'aprs Nainan et al. 2006Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79

Gnotypes et

phylognie

Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolatesin the VP1/P2B region (315-bp fragment).

VP1/P2AGnotypes : >15% variationsSous types : 7.5% variations


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Rpartition mondiale des gnotypes

Gnotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.Souche PA21 (gnotype IIIA), isole d'un singe Panamanian Owl en vert.

Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.


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Application l'tude

de diffusion decertaines souches

Diffusion du gnotype IIA enFrance partir d'une origine

Africaine

Diversit gntique dun gnotype raredu virus de lhpatite APathologie Biologie, I n P r e s s , Available

online 6 September 2010D. Desbois et al.

I

I I

I I I


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Symptomes

Ictre

VHA : Paramtres Biologiques

Semaines

Ag foie

VHA Sang

VHA Selles

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24

IgM

IgG

protection contre rinfection

Ac anti-VHA = hpatite A ancienne ou vaccinationIgM anti-VHA = hpatite aigu A (clinique)


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IgM HAV uniquement bon escient !

Alaska : test "rflexe" si Ig-VHA totales + Ig M HAV32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)

Vaccination : 8 20 % d'IgM VHA + dans les 2 3 semaines suivantl'injection

NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGU

Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887

82 %

11 %

1 %

Faux positifs


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Diagnostic

Srologie +++ IgM anti VHA : infection rcente

IgG anti VHA : infection passe ou vaccination

IgM et IgG anti VHA

Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'tudes]

Virmie : techniques sensibles (105 v./mL)

Recherche de virus dans les selles, prolonge, importante

(109v./mL), pidmiologie

Marqueurs biochimiques

Transaminases (ALAT, ASAT)

BilirubinePhosphatase alcaline

Facteurs de coagulation

Salive :

IgG (ELISA)Gnome viral (RT-PCR)


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V.Thibault DU_janv.-11 20Rezende et al., Hepatology 38:613-618 (2003)

Hpatite fulminante Evolution bnigne

Limite dequantification

50 Hpatites A dont 19 fulminantes (10 OLT)Hpatite fulminante :

-virmie (p=0.03) *-bilirubine -(p=0.04) *-age (p=0.09)

-gnotype non IA (p=0.09)

Normann et al.,Journal of Medical Virology 72:1016 (2004)

11 Hpatites A

Quantification de la virmie ?

Fujiwara K et al.J. Med Virol. 2011 Feb;83(2):201-7.

Hepatitis A viral load in relation toseverity of the infection.

11 patients with fulminant hepatitis

10 with severe acute hepatitis

70 with self-limited acute hepatitis


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Dure de la virmie: consquences cliniques et biologiques

Duration of viremia in hepatitis A virusinfection

Bower et al. Journal of Infectious Diseases2000;182:127

6-7 5-6 2-5 Log particules/mL

Suivi de 13 patients : dure moyenne 95 joursdont 2 avec rechute (1-2 mois)

Suivi de 27 patients

High and Persistent Excretion of Hepatitis AVirus in Immunocompetent Patients

Tjon et al.Journal of Medical Virology 78:13981405 (2006)


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Hpatite A : le vaccinvirus inactiv

AVAXIM 160U suspension injectable seringue prremplie

Virus de l'hpatite A souche GBM cultive sur cellules diplodes humaines MRC-

5 , inactiv

HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue

Souche HM 175 du virus de l'hpatite A cultive sur cellules humaines

diplodes MRC5

Le schma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6

12 mois plus tard.

La persistance des anticorps anti-VHA aprs vaccination n'est

actuellement pas connue . Les donnes disponibles suggrent la persistancedes anticorps anti-VHA un niveau protecteur au moins jusqu' 20 ans

aprs primo-immunisation.

Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure ProphylaxisVictor et al. 2007 N Engl J Med 357;17


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Difficults diagnostiquesEn routine

Adresser prlvementsau

Centre national de rfrence du VHA

Pr E DussaixLaboratoire de virologie

Hpital Paul Brousse12-14 av Paul Vaillant Couturier

94804 Villejuif cedexTel : 01 45 59 37 21

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste


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Grippe

SRAS ?

Hpatite E ?Hpatite E ? GrippeHpatite E ?


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Historique VHE

Dcouverte dpendante de la connaissance des virus des hpatites1955 : Inde, hpatite chez des personnes immunises contre le

VHA, pidmie particulire. "NANBH"

Entit clinique 1980 - similitude avec lhpatite A :

Inde : prvalence de lhpatite A importante

Epidmie : autre virus des hpatites, contamination par leau

1983 : reproduction de lhpatite non A-non B chez un volontaire

immunis contre VHA (Balayan) Hpatite J36

J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)

Reproduction de linfection chez le singe (cynomolgus)

Hpatite "non A - non B" transmission entrique (ENANB)

1990 : Reyes et al. clonage et squenage "VHE"

1991 : Tam et al. VHE

2000 : Panda et al. cDNA infectieux


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Coloured transmission electron micrograph of hepatitis E virus particles (purple)

Holmberg, Lancet Vol 376 September 11, 2010


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VHE Virus non envelopp

Sphrique (SRV)Surface irrgulireCapside 27-34 nm

Symtrie icosadrique

ARN simple brinhlice droite

polarit +7,5kbpoly-A extrmit 3

StabilitAu laboratoire : instable(-70 +8C)

Dconglation/conglation

Tractus GI : stable (pH)

Famille : HepeviridaeGenre : Hepevirus


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Organisation gnomique

Non structurales Structurales

28 5109 71245 NC 3NC

Poly-A

ARN polarit +7 200 nt

Protines

immunognes DIAGNOSTIC

MeT Y Pro P X Hel RdRp

ORF3

ORF2

Gnotypes 1-3

Htrognit gntique

Au moins 4 groupes majeurs (


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Similarits des souches humaines et animales

Bilic et al. Journal of General Virology(2009), 90, 863873

Unrooted phylogenetic tree of four avian HEV

and nine mammalian HEV isolates, based onthe complete genome region

aviaireshumaines

Epidmique

Sporadique


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Evolution VHE

Purdy MA, Khudyakov YE. Evolutionary history and populationdynamics of hepatitis e virus. PLoS One. 2010 Dec 17;5(12):e14376.

Anthropotropic

enzootic

536 to 1344 years ago


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Culture et Modles animaux

Culture Difficile

Culture primaire dhpatocytes de macaques (cynomolgus) Cellules PLC/PRF/5 hpatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007)

Cellule embryonnaire

Modles animaux Primates : reproduction de la pathologie humaine

Volontaires...

VHE du porc, du poulet Prsence dAc chez poulet, porc, rat, souris, mouton...Lapin Ma H et al. Experimental infection of rabbits with rabbit and genotypes 1and 4 hepatitis E viruses. PLoS One. 2010 Feb 11;5(2):e9160


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Rsistance thermique du VHE

Colson et al. JI D 2 0 1 0 : 2 0 2

VHE dans des suspensions fcales :Inactivation : 70C 10' ou 95C 1 min;56 C 30 min maintien de l'infectiosit

Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007


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VHE et contamination des eaux

J. Rodriguez-Manzano et al. Excretion patterns of HAV and HEV infections

in Eastern Spain Journal of Water and Health 08.2 2010

Presence of hepatitis A virus (HAV) and hepatitis E virus (HEV) inurban wastewater

Prdominance du gnotype 3


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Symptomes

Ictre

VHE : Paramtres Biologiques

Jours

VHE Sang

VHE Selles

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200

IgM

IgG

Titre peu levprotection contre rinfection ?

K h u r o o M S, K h u r o o M S.Seroepidemiology of a second epidemic of hepatitis

E in a population that had recorded first epidemic

30 years before and has been under surveillance

since then.

H ep a t o l I n t . 2010 Feb 3;4(2):494-9

f l


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Virmie et excrtion fcale

Aggarwal et al. THE LANCET Vol 356 September 23, 2000, p1081-1082Dtection du RNA-VHE chez 20 patients ayant une hpatite E aigu

Virmie Selles

Chandra NS et al. Dynamics of HEV viremia, fecal sheddingand its relationship with transaminases and antibodyresponse in patients with sporadic acute hepatitis E.Virol J. 2 0 1 0 Sep 6;7:213

HEV virmie- selle


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HEV virmie-transmission

Matsubayashi K, et al. Transfusion.

2008 Jul;48(7):1368-75.

serum

salive

selle

IgG

IgM

Concentr de plaquettes J0Transfus un homme de64 ans trait pour Lymphomenon-Hodgkinien par GMautologue

Immunodpression hpatite chronique et


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Immunodpression, hpatite chronique etstratgie diagnostique

Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 17441748

Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno dprim,

La dtection du gnome viral (RT-PCR) sera privilgie !

(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)


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Marqueurs non biologiques

circonstances de la maladie (voyage, autres causes, pidmie)

A adapter en fonction de la zone gographique ? (Sud versusNord ?)

clinique : hpatite classique, absence de chronicit (chez

l'immunocomptent ! ) Portage prolong en cas d'immunodpression

Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion

Absence des marqueurs des virus des autres hpatites (A, B, C, D) Notions srologiques pour dautres virus (EBV, CMV, herps)

Marqueurs srologiques spcifiques

IgM anti-HEV

IgG anti-HEV (+++)

RT-PCR : dtection du gnome viral (sang, selles)

ATTENTION : spcificit - performances

Stratgie Diagnostique

Incidence des cas d'hpatite E en France :


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Incidence des cas d hpatite E en France :un gradient Nord-Sud

Nicand et al. Pathol Biol. 2009 Mar;57(2):203-11

Renou et al. 2008 Aliment Pharmacol Ther 27, 10861093


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Performance des tests

MicroplaqueAdaltis

MicroplaqueMP Diagnostics

941644545Total (n=50)

544545Negatif (n=9)

437239140Positif (n=41)

ngatifpositifngatifpositifngatifpositif

Test rapideMP Diagnostics

IgM anti-HEV

anti-HEV IgG

Legrand-Abravanel CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY, May 2009, p. 772774

Panels50 srums ARN HEV (+), G3406 srums IgG ARN HEV (-)

Sensibilit 90 88 82

Spcificit 100 99.5 100VPP 100 95.7 100

VPN 98.8 98.5 97.8


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Stratgie Diagnostique

Se donner les moyens de faire le diagnostic

--+Immunitancienne

--+++Douteux

+-- ou +Probable

+++++Certain

RT-PCRIgMIgGDiagnostic

Diagnostic Direct

Recherche du gnome sur

prlvements sang et selles

Diagnostic Indirect

Recherche de l'immunit antivirale

IgM anti VHE

IgG anti VHE

Huang S et al. 2010 Profile of Acute Infectious Markersin Sporadic Hepatitis E. PLoS ONE 5(10): e13560


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VHE et traitement

Efficacit du PEG-IFN

Efficacit de la ribavirine chez les patients

Pas de mcanisme virologique prcis dcrit

Haagsma EB et al Liver Transpl. 2010 Apr;16(4):474-7Mallet V et al. Ann Intern Med. 2010 Jul 20;153(2):85-9.Kamar N et al. Nephrol Dial Transplant. 2010 Aug;25(8):2792-5.Kamar N et al. Gastroenterology. 2010 Nov;139(5):1612-8.

VHE


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VHE et vaccination

Risque cumul d'un premier pisoded'hpatite E

Moyenne gomtrique du tauxd'anticorps anti-VHE

20 g d'antigne rHEV (capside exprimedans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.3 injections

Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9

Efficacit : 95,5% aprs 3 doses

VHE i i

HEV 239 (Hecolin; Xiamen Innovax Biotech,Xiamen, China),


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VHE et vaccination

Zhu et al Lancet. 2010 Sep 11;376(9744):895-902

produced in bacterial cells : safe andefficacious against infection with hepatitis Evirus in seronegative participants in a phase 2trial


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Difficults diagnostiquesEn routine

Adresser les prlvements

auCentre national de rfrence du VHA/VHE

Pr E DussaixLaboratoire de virologieHpital Paul Brousse

12-14 av Paul Vaillant Couturier

94804 Villejuif cedexTel : 01 45 59 37 21

http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste

Documents

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