ANALYSE BACTERIOLOGIQUE QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE BIOPSIES OSSEUSES DE PIEDS DIABETIQUESET RECHERCHE DES FACTEURS DE PATHOGENICITE

Florence BAUDOUXDiabétologue CHRU de Lille04 octobre 2011

Pourquoi s’intéresser à l’ostéite dans l’infection du pied diabétique?L’infection osseuse complique 1 /3 à 2/3 des

plaies chroniques du pied 

36% des patients qui ont une ostéite subissent une amputation durant le suivi.

68% des patients qui ont subi une amputation seront amputés une seconde fois dans les 5 ans;

Mortalité dans les 5 ans suivant l’amputation initiale est de 50%.

Ramsey, S.D. et al. Incidence, outcomes, and cost of foot ulcers in patients with diabetes. Diabetes Care 22, 382 -387 (1999).Goldner MG. The fate of the second leg in the diabetic amputee. Diabetes 1960;9:100-3Whitehouse, F.W., Jurgensen, C. & Block, M.A. The later life of the diabetic amputee. Another look at fate of the second leg. Diabetes 17, 520-521 (1968).

Objectifs de l’étude Caractériser la microbiologie de

l’ostéite du pied diabétiqueQuantitéQualité

Caractériser l’organisation des bactéries dans l’os

Caractériser les staphylocoquesCapacité d’adhérenceCapacité à créer un biofilm

Matériel et méthodeEtude prospective réalisée entre

février 2010 à mai 2011.

Tout patient diabétique présentant une ostéite du pied nécessitant une biopsie osseuse et/ou une amputation.Ostéite prouvée par clinique + radio ou

IRM

Laboratoire de bacteriologie clinique, Faculté de Pharmacie U995

Centre hospitalier de TourcoingHôpital Claude Huriez, CHRU Lille

Université Lille 1

2 à 3 biopsies osseuses

1 à 2 biopsies Quantitatif , qualitatif 1 biopsie

MEB

n= 38 prélèvements ; 35 patients65,8% d’hommes 89.4% diabétiques de type II âge moyen 65 ans.55% chirurgie orthopédique du CH de

Tourcoing 33% étaient conclus stériles (n=7) par le

laboratoire de routine.45% chirurgie vasculaire du CHRU de

Lille. 23% étaient conclus stériles (n=4).

3,7 log d’ufc/ g

5000 bactéries par gramme d’os

Bactérie identifiée dans l’ostéite nb

Cocci Gram+ Staphylococcus aureus 12

Staphylococcus capitis 2

Staphylococcus caprae 2

Staphylococcus epidermidis 9

Staphylococcus lugdunensis 2

Staphylococcus pettenkoferi 2

Staphylococcus sciuri 1

Staphylococcus simulans 1

Staphylococcus warneri 2

Staphylococcus sp 1

Micrococcus luteus 1

Micrococcus sp 1

Streptococcus agalactiae 1

Enterococcus faecalis 5

Enterococcus faecium 1

Bacille Gram+ Corynebacterium 10

Dermabacter hominis 2

Bacille Gram -Entérobactérie

Citrobacter diversus 1

Enterobacter cloacae 3

Escherichia coli 2

Serratia liquefaciens 1

Serratia marcescens 2

Proteus mirabilis 3

Providencia rettgeri 1

Morganella morganii 1

Autres BGN Pseudomonas aeruginosa 1

Anaérobie Anaerococcus prevotii 1

Finegoldia magna 2

Propionibacterium acnes 2

Veillonella 2

77 souches identifiées:28% staphylocoques coagulase négative15,3% Staphyloccus aureus 12,8% Corynebacterium

Ostéite chronique: 1,76 bactéries/ plvt 15.4% des souches

sont des anaérobies 28,6% des plvts:

présence d’anaérobies.

Caractéristiques des staphylocoquesCapacité à dégrader le collagèneGélatinase

Exprimée par 58% des staphylocoques11/12 des S.aureus8/22 des staphylocoques coagulase

négative

Capacité à produire un exopolysaccharide

Test au Rouge congo65% de positivité

70% des Staphylococcus aureus

Sur plaie chronique 55 souches de S. aureus: 69% + 20 souches S. epidermidis 73% +

Nasopharynx 146 Staphylococcus epidermidis 58,9% +

Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, 97-103

(2010)

Podbielska, A., Galkowska, H., Stelmach, E., Mlynarczyk, G. & Olszewski, W.L. Slime production by Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis strains isolated from patients with diabetic foot ulcers. Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz.) 58, 321-324 (2010).Arciola, C.R., Baldassarri, L. & Montanaro, L. Presence of icaA and icaD genes and slime production in a collection of staphylococcal strains from catheter-associated infections. J. Clin. Microbiol 39, 2151-2156 (2001).

Capacité d’adhérence à une surfaceTest au crystal violetLa positivité est définie par une

densité optique à 570 nm >0,2

Los, R. et al. A comparative analysis of phenotypic and genotypic methods for the determination of the biofilm-forming abilities of Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol. Lett 310, 97-103 (2010).Stepanović, S. et al. Quantification of biofilm in microtiter plates: overview of testing conditions and practical recommendations for assessment of biofilm production by staphylococci. APMIS 115, 891-899 (2007).

76,6%

MEB

PerspectivesPoursuite de la collection

bactérienneEvaluation moléculaire Collaboration avec l’équipe du Dr.

Brad Spellberg of UCLA Evaluation en microscopie

électronique des biofilms formés sur disques de biocéramique.