REPUBLIC ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

Ministère de L Enseignement supérieure et de la Recherche

Scientifique

Centre Universitaire Belhadj BOUCHAIB Ain Témouchent

Institue des Sciences et Technologie

Département de La Science de la Nature et de la Vie

Réaliser par :

Merzouk chahrazed

Saidi sara

Année Universitaire:2015/2016

Les bactéries lactiques appartiennent à un groupe des bactéries

bénéfiques, dont le trait commun est la production d’acide lactique.

Elle ont une activité antibactérienne due à une substance chimique

organique d’origine naturelle ou synthétique inhibant (bactériostatique)

ou tuant ( bactéricide) les bactéries pathogènes à faible concentration et

possédant une toxicité sélective

Dans se TP nous avons faire deux méthode de criblage des souches qui

signifier l'identification avec sélection

nous avons isolé deux souches lactiques, pour testé leur pouvoir acidifiant,

leur effet bactéricide et observé la zone des inhibition autours des cultures de

souche A ou B

i. Objectif de tp :

Sélection des souches productrices des substances

antibactériennes .

L'observation des zones de l'inhibition au toure des cultures.

Apprenez les deux méthode de criblage des souche.

ii. Choix des souches :

Souche à tester sont deux souches de bécteries lactiques (A et

B)

Souche indicatrice (test) (C)

1. criblage directe sur boit pour la production d’antibiotique :

1.1. Matériel :

1. Deux Souche de bactéries lactique (A et B) milieu gélosé.

2. milieu Muller-Hinton (semi solide) .

3. souche indicatrice C.

4. bec bunsen.

5. pépettes pasteure.

6. Incubateur.

1.2Protocol de méthode:

Ensemencement d'une

souche A et B sur milieu

gélosé et une Souche

inducatrice (C)

Souche indicatrice C Ensemencement dans 4ml de

milieu Muller -Hinton

Couler la gélose molle sur

Les biotes ensemencées

déjà A et B

Incubation 37°c /24à48

Observation

Incubation des boite une

nuit à 37°c /24à48

1.3 Résultat:

On observe une croissance de la bactérie souche (C) au tour de la boite

Pétré et au milieu

il n ya pas une zone d'inhibition au tour de souche lactique B

L'apparition d'une petite zone d'inhibition au tour de souche lactique A

1.4 Interprétation :

L'apparition d'une zone de inhibition autour de souche A indiquer que la souche A elle

produit des substances antibactériennes inhibitrices (antibiotique) qui inhibe la croissance au

tue la souche indicatrice (c) qui est sensible.

L'absence de zone d'inhibition autour de souche B indiquer que la souche B elle n'a pas

produit des substrats antibectienne.

1.5Remarque :

La condensation des colonies au milieu de boite pétré indique la présence d'un

contamination qui faussait nous résultat.

2 .Criblage par analyse du pouvoir bactériostatique de surnageant de culture :

2.1 Matériel:

1. Pré -culture de souche A et B.

2. boite de pétré coulé par milieu Müller-Hinton souche (c).

3. disque de papier buvarde.

4. centrifugeur.

5. Incubateur.

2.2Protocol de méthode:

Ensemence une souche C

dans la boit de pétri par

inondation

Séchage 20 min 37 °c

Centrifugation des pré-cultures

AetB (6000 T pendent 10 min )

Surnagent B Surnagent A

A B

C

A

B

Incubation

24 h à37°C

Un disque de papier

buvard impégné dans

le surnaget A

Un disque de papier

buvard impégné dans

le surnaget B

déposer les disques

sur la boite c

2.3Resultat :

On observe une croissance de la souche (C) au milieu de la boite Pétré

il n ya pas une zone d'inhibition au tour de disque de papier buvard

imprégné dans le surnagent de souche lactique B

L'apparition d'une petite zone d'inhibition au tour de disque de papier

buvard imprégné dans le surnagent de souche lactique A

2.4Interpritaion:

L'apparition d'une zone de inhibition autour de souche A indiquer que la

souche A elle produit des substances antibactériennes inhibitrices

(antibiotique) qui se trouvent dans le surnagent ,inhibe la croissance au

tue la souche indicatrice (c) qui est sensible.

L'absence de zone d'inhibition autour de souche B indiquer que la souche

B elle n'a pas produit des substrats antibactériennes et leur surnagent ne

contient pas des substances antibactériennes.

III.Milieu Mueller-Hinton :

La gélose Mueller-Hinton est une gélose riche pour la réalisation de

l'antibiogramme standard

Leur Composition :

infusion de viande de bœuf : 300,0 ml

peptone de caséine : 17,5 g

amidon de maïs : 1,5 g

agar : 17,0 g

pH = 7,4

Leur intérêt:

Nous avons utilisé le milieu de Mueller Hinton car il est reconnu par tous les

experts comme étant le milieu de référence pour l’étude de la sensibilité des

germes aux antibiotiques.

Les deux méthodes décrites pour la détection de souches

Lactiques productrices de bactériocines sont basées sur le principe que

ces substances protéiques peuvent diffuser dans un milieu de culture

solide ou semi solide qu’on inocule préalablement avec une souche

cible. La production de bactériocine est détectée par le pouvoir

inhibiteur du filtrat du micro-organisme testé sur la croissance du

germe cible.