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Laboratoire Hématologie CHU TIMONE Marseille
Cofrac 1-1740
Isabelle Arnoux GFHC
8 Février 2012
Accréditation en Hématologie Cellulaire :
Techniques non automatisées
Nature de l'échantillon biologique
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la
méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-plaquettes,
avec cellules anormales et
paramètres associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général : - Impédancemétrie, - Cytométrie en flux, - Cytochimie, - Spectrophotométrie, - Fluorescence, - Radiofréquence, - Calcul
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
SH INF 50
Nature de l'échantillon biologique
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s) d'origine
humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-
plaquettes, avec cellules anormales et paramètres
associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général des techniques
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme - FP (Formule
sanguine avec recherche,
identification et quantification de
cellules anormales et numération plaquettaire)
Méthode manuelle de type qualitatif et
quantitatif Identification
morphologique et numération en cellule
sur frottis, après coloration, par
microscopie optique
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Nature de l'échantillon
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-plaquettes,
avec cellules anormales et paramètres associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général des techniques
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme - FP (Formule
sanguine avec recherche,
identification et quantification de
cellules anormales et num plaquettaire)
Méthode manuelle de type qualitatif et
quantitatif Identification
morphologique et numération en cellule, après coloration, par microscopie optique
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Tout liquide biologique d'origine
humaine (*) moelle osseuse, LCR, LBA, autres liquides (*)
Tout échantillon biologique d'origine
humaine (*) tissus (ganglion, rate,
…), organes (*)
Recherche, identification et/ou
numération de cellules (avec
cellules anormales, blastes, neuroblastes,
histiocytes, …) Examen
cytologique : myélogramme, adénogramme,
splénogramme (*)
Méthode manuelle de type qualitatif et/ou quantitatif Principe général des techniques : - Identification morphologique et numération en cellule sur frottis, après coloration, par microscopie optique, -Cytochimie -Cytométrie de flux
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
« Pour les examens qui reposent sur une lecture réalisée par un opérateur (formules leucocytaires) il appartient au LBM d’évaluer régulièrement la qualification des opérateurs réalisant cette tâche. Il peut s’agir d’un recours à des doubles lectures par différents opérateurs. Les risques doivent être maitrisés au minimum pour les étapes critiques ».
Les techniques non automatisées
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme
Kleihauer
Les techniques non automatisées
Qualité de l’étalement Coloration : ◦ Qualité des colorants : pH ◦ Temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maitriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Qualité de l’étalement Coloration : ◦ Qualité des colorants : pH ◦ Temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maitriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Formation à la cytologie ◦ Temps de formation ◦ Temps d’habilitation ◦ Conserver dans le dossier personnel les
preuves de l’habilitation : Graphes automates et résultats validés
Participer au développement personnel continu
Habilitation
Contrôles inopinés : ◦ Vérification des compétences fonction de
l’activité réelle ◦ Nominatif et retour immédiat ◦ Difficile à tracer
Contrôles organisés : ◦ Lames de tests ◦ Garder toute la traçabilité ◦ Faire retour après analyse des résultats
Contrôles inopinés : ◦ Vérification des compétences fonction de
l’activité réelle ◦ Nominatif et retour immédiat ◦ Difficile à tracer selon la norme ISO 15189
Contrôles organisés : ◦ Lames de tests ◦ Garder toute la traçabilité ◦ Faire retour après analyse des résultats
CQ Lames « cytologie »
Le coefficient de variation de la répartition leucocytaire est fonction de 2 paramètres:
le nombre de cellules comptées le pourcentage respectif des populations leucocytaires.
Table de Rümke Variation des valeurs relatives d'une pop leucocytaire selon le nombre de cellules comptées (adaptée du CD-ROM "Das interaktive Handbuch der Hämatologie")
Polynucléaires Neutrophiles Automate Microscope
Mois Bas Norm Haut Janvier 2,7 1,8 2,2 Février 2,8 1,9 0,7 Mars 2,5 2,1 1,3 Avril 2,4 2,1 1,5 Mai 2,5 1,8 1,5 Juin 2,4 1,9 1,2
Juillet 2,9 2,3 1,2 Août 3,2 1,9 1,4 Sept 2,6 1,8 1,3
Octobre 2,6 1,9 1,2 Nov 2,6 1,8 1,3 Déc 2,7 1,7 1,1 Moy 2,6 1,9 1,3
Coloration : ◦ maîtriser le ph des tampons, ◦ les temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maîtriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Connaître et accepter les limites de chacun pour ces techniques spécialisées
Connaître son recrutement de patients
Avoir accès aux cytogrammes des automates aux moments de la validation biologique
Coloration : ◦ maîtriser le ph des tampons, ◦ les temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maîtriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Après saisie informatique des résultats, mise en place d’un contrôle opposé
Attention au compte-globule relié au SIL
Une saisie manuelle impose une validation biologique
Logiciel d’aide à la validation
Validation biologique
Diagramme ISHIKAWA (Règle des 5 M)
Analyse de risque
SH GTA 14
Préanalytique : de l’étalement à la coloration
Main d’oeuvre
Moyen Microhématocrite Lame Coloration
Milieu Bruit Risque d’erreur de tube++
Méthode Geste d’étalement++ MGG++ Habilitation
Matière Réactif, pH++
Analytique : identification cellulaire
Optique
Moyen Microscope
Méthode
Matière Huile à immersion
Milieu Conditions ambiantes Bruit++
Main d’oeuvre
Habilitation du personnel++++
Résultat
SH GTA 14
Postanalytique : de la saisie à la validation
Résultat
Saisie informatique contrôlée
Main d’oeuvre
Moyen Milieu
Méthode
Matière Qualification, Formation, Congrès, Spécialiste de BM
Conditions ambiantes , calme, RCP
Age, Clinique, Antérieurs, Esprit critique Littérature
SIL, Papier, Imprimante Compte rendu transmis
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme ou autres liquides biologiques
Kleihauer
Les techniques non automatisées
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Informations cliniques pertinentes : ◦ Age, sexe, grossesse, origine ethnique ◦ Pathologie : Hémopathie … ◦ Clinique : splénomégalie, ADP, fièvre, ◦ Traitement
◦Quelle est la question posée par le clinicien?
Permet une réponse adaptée
Ces données doivent pouvoir suivre le macroprocessus métier du LBM jusqu'au
rendu d’un résultat validé et interprété
Informations cliniques pertinentes :
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Des années de formation… et encore.. Il restera toujours des diagnostics difficiles Participer à RCP Rôle de prestation de conseil Médicalisation de la profession
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de
chaque type cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer
Table de Rümke
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de chaque type
cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer selon la norme EN 15189
Contrôles organisés : EEQ (Lames) ◦ Formule leucocytaire ◦ Myélogramme ◦ Proposition diagnostic cytologique
«Pour un spécialiste de Biologie Médicale l’item « JE NE SAIS PAS » ne devrait pas exister.
Vous devez obligatoirement faire des HYPOTHESES …à partir desquelles vous pourrez parler avec un clinicien… »
CTCB EN.CRHEM 02-11--11
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de chaque type
cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer selon la norme EN 15189
Contrôles organisés : EEQ (Lames) ◦ Formule leucocytaire ◦ Proposition diagnostic cytologique
Relecture dans le cadre des protocoles par des
référents nationaux : ◦ FRALLE ◦ ELAM
Habilitation
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Standardisation des conclusions : Ecriture d’un dictionnaire des conclusions ◦ Cytologie de Rémission Complète ◦ Bonne activité médullaire ◦ Cytologie d’hémopathie aiguë
Utiliser la terminologie des classifications
reconnues : ◦ OMS ◦ ADICAP
Saisie par secrétariat / validation par
biologistes
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme ou autres liquides biologiques
Kleihauer
Les techniques non automatisées
SH GTA 01
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Diagramme ISHIKAWA (Règle des 5 M)
Analyse de risque
SH GTA 14
Témoins +/-
Verrerie propre
Habilitation
Réactifs qualifiés Application et Minutie
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Témoin neg (Adulte)
Témoin pos (BB)
Témoin 50% Patient
Une « évaluation par nos pairs » Points forts de compétence Points qui restent à améliorer
La preuve d’une qualité Utile au patient et au clinicien Prouvée et pragmatique Inscrite dans le temps
ACCREDITATION
Accréditation d’un laboratoire d’Hématologie cellulaire Méthodes automatisées
Marie Loosveld 8 Février 2012 GFHC, Paris
Laboratoire d’Hématologie, CHU Timone, Marseille Pr P. E. Morange
Nature de l'échantillon biologique
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la
méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme NFP (Numération-formule-plaquettes,
avec cellules anormales et
paramètres associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général : - Impédancemétrie, - Cytométrie en flux, - Cytochimie, - Spectrophotométrie, - Fluorescence, - Radiofréquence, - Calcul
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
SH INF 50
Portée d’accréditation = Liste de compétences
Processus préanalytique
« Le laboratoire doit disposer de procédures documentées et d'informations pour les activités préanalytiques afin de
garantir la validité des résultats des examens. L'identité des personnes participants au processus préanalytique doit
être enregistrée ».
Informations cliniques pertinentes
• Age, sexe, grossesse, origine ethnique
• Pathologie : Hémopathie …
• Clinique : splénomégalie, ADP, fièvre,
• Conditions de vie
• Traitement
• Quelle est la question posée par le clinicien? Permet une réponse adaptée
Ces données doivent suivre le macroprocessus métier du LBM jusqu'au rendu d’un résultat validé et interprété
Processus préanalytique
Processus préanalytique
Critères d’acceptation des échantillons biologiques
• Quantité d’échantillons biologiques
• Modalités de recueil et conservation (nature des tubes…)
• Informations/Identifications rattachées
• Conditions d’acheminement
« Les échantillons primaires qui ne sont pas identifiés correctement ne sont ni acceptés, ni traités par le laboratoire ».
« ….dans le cas d’un échantillon primaire irremplaçable ou critique (LCR, biopsie…), le laboratoire peut choisir de procéder à l’examen dans les meilleurs délais mais de ne délivrer le résultat qu’après avoir obtenu de la personne responsable du prélèvement la confirmation qu’il/elle assume la responsabilité de l’identification… »
EN ISO 15189
Processus préanalytique
En cas d’échantillons biologiques non conformes:
Garantir la qualité des résultats
« Le laboratoire doit garantir la qualité des examens en les réalisant dans des conditions définies. Le laboratoire doit concevoir des procédures de contrôle de qualité permettant de vérifier que la qualité prévue des résultats est bien obtenue ».
EN ISO 15189
LAB GTA 06: les contrôles de qualité en BM SH GTA 04: vérification/validation des méthodes en BM SH GTA 14: évaluation des incertitudes de mesure en BM
• Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
Achat / choix d’un automate : Définir ses besoins Nombre automate selon activité / back up Etaleur / Colorateur Choix d’une technologie Technique automatisée de formule leucocytaire: Méthode optique Méthode colorimétrique Méthode immunologique
AUTOMATE
Garantir la qualité des résultats
• Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
• Formation du personnel • Evaluation et surveillance de la compétence
Garantir la qualité des résultats
PERSONNEL
Formation du personnel Evaluation et surveillance de la
compétence
Garantir la qualité des résultats
PERSONNEL
Seules les personnes formées et validées peuvent rendre des résultats
• Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
Principe
• Maitrise interne de la qualité : – Ensemble des procédures destinées à surveiller les
performances du laboratoire • Surveiller en continu les opérations et les résultats de mesure
pour décider si les résultats sont suffisamment fiables pour être communiqués
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
Prouver la maîtrise analytique MAIS Ne remplace pas la maitrise de l’ensemble du processus analytique
(PRE, ANA, POST)
• CIQ fournis par le fabricant de l’automate, indispensable car sert au SAV pour identifier l’origine d’une panne
• Moyenne mobile si processus suffisamment stable
• Contrôle intermachine • Validation technique des résultats: Cytogramme • Corrélation multiparamètrique à maitriser
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
Limites des CIQ
« Les erreurs détectées à l’aide des échantillons de contrôle doivent être le reflet de celles qui se produisent avec les échantillons de patient »
« La valeur du fournisseur est une indication et ne doit pas être utilisée pour interpréter »
Valeur cible : 15 déterminations pendant au moins 15 jours
• Interprétation immédiate : Règles 12s, 22s, 13s, R4s – Détecter en temps réel des résultats déviants – Détecter une tendance pour prévenir la dégradation
du processus – Utiliser ET qui estime la dispersion habituelle autour
de la moyenne
• Interprétation différée :
• Interprétation à long terme :
Exploitation des CIQ
• Interprétation immédiate :
• Interprétation différée : Règles 41s, 10x – Courbes de Levey Jennings – Permet des actions préventives et correctives
• Interprétation à long terme :
Exploitation des CIQ
• Interprétation immédiate :
• Interprétation différée :
• Interprétation à long terme : – Surveiller la pérennité des résultats, – Témoigner de l’efficacité du système, – Calcul des Incertitude de mesure (IM) avec EEQ
Exploitation des CIQ
Sang patient
GR GB
Plaq
CIQ
Advia 120, Siemens
CIQ
GB cible Qualification (10 utilisations) 4 jours
30 utilisations 17 jours
51 utilisations 25 jours
Moy 6.57 6.71 6.63 6.64
ET 0.43 0.14 0.12 0.12
Moy+2ET
7.42 6.99 6.87 6.88
Moy-2ET 5.72 6.43 6.39 6.40
Dans la vraie vie ….
Type d’erreur Vérifier Actions correctives Humaine La transcription manuelle
des résultats du CIQ Refaire la transcription si erreur et ré-analyser selon les règles
Qualité des contrôles utilisés
- Lot, - pollution, - agitation correcte, - reconstitution, - conservation - bonne utilisation selon PF4 et PF6
Lot en cours Changement de lot Nouvelle agitation Nouvelle reconstitution Appliquer les procédures
CAT en cas de CIQ hors norme
Automate -Mauvaise calibration
-Réactif (manque ou altéré)
- Hydraulique : Bouchage Poubelle refluante Prise d’air (Alarme de l’automate)
- Identifier la raison pour laquelle la calibration précédente a été défectueuse. Refaire une calibration correcte - Changer les réactifs - Lavage complet Vider la poubelle Vérifier le bon état des principaux tuyaux
CAT en cas de CIQ hors norme
CIQ fournis par le fabricant de l’automate, indispensable car sert au SAV pour identifier l’origine d’une panne
Moyenne mobile si échantillonnage patient assez large et stable
Contrôle intermachine Validation technique des résultats: Cytogramme
Corrélation multiparamètrique à maitriser
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
Moyenne mobile Plaquettes du 10/11/2011
Moyenne mobile GB du 19/10 au 09/11/2011
CIQ fournis par le fabricant de l’automate,
indispensable car sert au SAV pour identifier l’origine d’une panne
Moyenne mobile si processus suffisamment stable
Contrôle inter machine Validation technique des résultats:
Cytogramme Corrélation multiparamètrique à maitriser
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
Contrôle inter-machines
Automate 1 Automate 2 Interprétation
Contrôle inter-machines
CIQ fournis par le fabricant de l’automate, indispensable car sert au SAV pour identifier l’origine d’une panne
Moyenne mobile si processus suffisamment stable
Contrôle inter machine Validation technique des résultats:
Cytogramme Corrélation multiparamètrique à maitriser
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
• Hb, VGM, TCMH, GR, CVGR :
Volume
Conc en Hb
Cytogrammes
• Leucocytes, Formule leucocytaire :
Taille
perox
Taille
Densité chrom, segmentation
Cytogrammes
Validation technique : exemples
GR GB Plaq
Validation technique : exemples
CIQ fournis par le fabricant de l’automate,
indispensable car sert au SAV pour identifier l’origine d’une panne
Moyenne mobile si processus suffisamment stable
Contrôle inter-machine Validation technique des résultats:
Cytogramme Corrélation multi-paramètrique à maitriser
Garantir la qualité des résultats
CONTRÔLE INTERNE DE QUALITE
• VGM paramètre stable • Paramètres quantitatifs calculés
– TCMH = Hb / GR – CCMH = Hb / Ht – Ht = VGM / GR
• Paramètres quantitatifs mesurés : – Numération GR – VGM – Hb – CHCM
Corrélation multi-paramétrique
Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
Contrôles externes ponctuels : – Essai d’aptitude ou EEQ. – Résultat d’une détermination en aveugle – Contrôle d’exactitude
Comparaisons inter laboratoire (CIL ) - Données de CIQ dont résultats sont soumis à un organisme externe pour comparaison - Contrôle de justesse
Garantir la qualité des résultats
Evaluation externe de qualité- Comparaisons interlaboratoires
justesse
fidélité
SDI = z = (moy labo-moy pool)/SD pool Compare notre moy à celle du pool
CVI (PI) = CV labo/CV pool Compare notre précision à celle du Pool
Comparaisons inter laboratoire (CIL )
Même échantillon utilisé pour les deux termes (IM) • Utiliser 2 CIQ différents : fournisseur automate + fournisseur
externe
Valeur cible est connue Personnel technique n’a pas accès aux valeurs
Limites du CIQ externalisé
• Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
( u C) = √u2 (CIQ)+ u2 (EEQ) Ou
( u C) = √u2 (CIQ)+ u2 (CIQ externalisé)
•u2 (CIQ) : représente la variance (carré de l'écart-type) de l'ensemble des résultats du contrôle interne de qualité (CIQ) ; •u2 (EEQ) : variance liée à la justesse (biais). •u2 (CIQ externalisé) : variance liée à la justesse (biais).
Garantir la qualité des résultats
Incertitude de Mesure
SH GTA 14
• Moyenne qui lisse le biais…
E = Moyenne des Biais = ET des Biais (est ajouté pour compléter le calcul de l’IM)
Incertitude de Mesure
Garantir la qualité des résultats
Polynucléaires Neutrophiles Automate Microscope
Mois Bas Norm Haut Janvier 2,7 1,8 2,2 Février 2,8 1,9 0,7 Mars 2,5 2,1 1,3 Avril 2,4 2,1 1,5 Mai 2,5 1,8 1,5 Juin 2,4 1,9 1,2
Juillet 2,9 2,3 1,2 Août 3,2 1,9 1,4 Sept 2,6 1,8 1,3
Octobre 2,6 1,9 1,2 Nov 2,6 1,8 1,3 Déc 2,7 1,7 1,1 Moy 2,6 1,9 1,3
• Automate • Personnel • Contrôle qualité
- CIQ - EEQ
• Incertitude de mesure • Fiche d’écart
Garantir la qualité des résultats
Résultat aberrant, non visible à l’écran
Validation technique dans une ambiance trop bruyante, trop de discussion parasite
Sensibiliser le personnel avec retour des fiches d’écart à la revue de direction
Conclusion
Laboratoire Hématologie CHU TIMONE Marseille
Cofrac 1-1740
Isabelle Arnoux GFHC
8 Février 2012
Accréditation en Hématologie Cellulaire :
Techniques non automatisées
Nature de l'échantillon biologique
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la
méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-plaquettes,
avec cellules anormales et
paramètres associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général : - Impédancemétrie, - Cytométrie en flux, - Cytochimie, - Spectrophotométrie, - Fluorescence, - Radiofréquence, - Calcul
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
SH INF 50
Nature de l'échantillon biologique
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s) d'origine
humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-
plaquettes, avec cellules anormales et paramètres
associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général des techniques
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme - FP (Formule
sanguine avec recherche,
identification et quantification de
cellules anormales et numération plaquettaire)
Méthode manuelle de type qualitatif et
quantitatif Identification
morphologique et numération en cellule
sur frottis, après coloration, par
microscopie optique
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Nature de l'échantillon
Nature de l'examen
Principe de la méthode
Référence de la méthode Remarques
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme – NFP (Numération-formule-plaquettes,
avec cellules anormales et paramètres associés)
Méthode automatisée de type qualitatif et quantitatif Principe général des techniques
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Kits réactifs commercialisés
Analyseur/Automate
Liquide(s) biologique(s)
d'origine humaine : sang et dérivés (*)
Hémogramme - FP (Formule
sanguine avec recherche,
identification et quantification de
cellules anormales et num plaquettaire)
Méthode manuelle de type qualitatif et
quantitatif Identification
morphologique et numération en cellule, après coloration, par microscopie optique
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
Tout liquide biologique d'origine
humaine (*) moelle osseuse, LCR, LBA, autres liquides (*)
Tout échantillon biologique d'origine
humaine (*) tissus (ganglion, rate,
…), organes (*)
Recherche, identification et/ou
numération de cellules (avec
cellules anormales, blastes, neuroblastes,
histiocytes, …) Examen
cytologique : myélogramme, adénogramme,
splénogramme (*)
Méthode manuelle de type qualitatif et/ou quantitatif Principe général des techniques : - Identification morphologique et numération en cellule sur frottis, après coloration, par microscopie optique, -Cytochimie -Cytométrie de flux
Méthodes reconnues (A)
Méthodes reconnues, adaptées ou
développées (B)
« Pour les examens qui reposent sur une lecture réalisée par un opérateur (formules leucocytaires) il appartient au LBM d’évaluer régulièrement la qualification des opérateurs réalisant cette tâche. Il peut s’agir d’un recours à des doubles lectures par différents opérateurs. Les risques doivent être maitrisés au minimum pour les étapes critiques ».
Les techniques non automatisées
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme
Kleihauer
Les techniques non automatisées
Qualité de l’étalement Coloration : ◦ Qualité des colorants : pH ◦ Temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maitriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Qualité de l’étalement Coloration : ◦ Qualité des colorants : pH ◦ Temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maitriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Formation à la cytologie ◦ Temps de formation ◦ Temps d’habilitation ◦ Conserver dans le dossier personnel les
preuves de l’habilitation : Graphes automates et résultats validés
Participer au développement personnel continu
Habilitation
Contrôles inopinés : ◦ Vérification des compétences fonction de
l’activité réelle ◦ Nominatif et retour immédiat ◦ Difficile à tracer
Contrôles organisés : ◦ Lames de tests ◦ Garder toute la traçabilité ◦ Faire retour après analyse des résultats
Contrôles inopinés : ◦ Vérification des compétences fonction de
l’activité réelle ◦ Nominatif et retour immédiat ◦ Difficile à tracer selon la norme ISO 15189
Contrôles organisés : ◦ Lames de tests ◦ Garder toute la traçabilité ◦ Faire retour après analyse des résultats
CQ Lames « cytologie »
Le coefficient de variation de la répartition leucocytaire est fonction de 2 paramètres:
le nombre de cellules comptées le pourcentage respectif des populations leucocytaires.
Table de Rümke Variation des valeurs relatives d'une pop leucocytaire selon le nombre de cellules comptées (adaptée du CD-ROM "Das interaktive Handbuch der Hämatologie")
Polynucléaires Neutrophiles Automate Microscope
Mois Bas Norm Haut Janvier 2,7 1,8 2,2 Février 2,8 1,9 0,7 Mars 2,5 2,1 1,3 Avril 2,4 2,1 1,5 Mai 2,5 1,8 1,5 Juin 2,4 1,9 1,2
Juillet 2,9 2,3 1,2 Août 3,2 1,9 1,4 Sept 2,6 1,8 1,3
Octobre 2,6 1,9 1,2 Nov 2,6 1,8 1,3 Déc 2,7 1,7 1,1 Moy 2,6 1,9 1,3
Coloration : ◦ maîtriser le ph des tampons, ◦ les temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maîtriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Connaître et accepter les limites de chacun pour ces techniques spécialisées
Connaître son recrutement de patients
Avoir accès aux cytogrammes des automates aux moments de la validation biologique
Coloration : ◦ maîtriser le ph des tampons, ◦ les temps de coloration
Reconnaissance cellulaire : compétence ◦ Analyse de forme/taille/couleur
Limite à chaque compétence : ◦ connaître et maîtriser
Erreur de saisie
Pour les étapes critiques…
Après saisie informatique des résultats, mise en place d’un contrôle opposé
Attention au compte-globule relié au SIL
Une saisie manuelle impose une validation biologique
Logiciel d’aide à la validation
Validation biologique
Diagramme ISHIKAWA (Règle des 5 M)
Analyse de risque
SH GTA 14
Préanalytique : de l’étalement à la coloration
Main d’oeuvre
Moyen Microhématocrite Lame Coloration
Milieu Bruit Risque d’erreur de tube++
Méthode Geste d’étalement++ MGG++ Habilitation
Matière Réactif, pH++
Analytique : identification cellulaire
Optique
Moyen Microscope
Méthode
Matière Huile à immersion
Milieu Conditions ambiantes Bruit++
Main d’oeuvre
Habilitation du personnel++++
Résultat
SH GTA 14
Postanalytique : de la saisie à la validation
Résultat
Saisie informatique contrôlée
Main d’oeuvre
Moyen Milieu
Méthode
Matière Qualification, Formation, Congrès, Spécialiste de BM
Conditions ambiantes , calme, RCP
Age, Clinique, Antérieurs, Esprit critique Littérature
SIL, Papier, Imprimante Compte rendu transmis
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme ou autres liquides biologiques
Kleihauer
Les techniques non automatisées
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Informations cliniques pertinentes : ◦ Age, sexe, grossesse, origine ethnique ◦ Pathologie : Hémopathie … ◦ Clinique : splénomégalie, ADP, fièvre, ◦ Traitement
◦Quelle est la question posée par le clinicien?
Permet une réponse adaptée
Ces données doivent pouvoir suivre le macroprocessus métier du LBM jusqu'au
rendu d’un résultat validé et interprété
Informations cliniques pertinentes :
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Des années de formation… et encore.. Il restera toujours des diagnostics difficiles Participer à RCP Rôle de prestation de conseil Médicalisation de la profession
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de
chaque type cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer
Table de Rümke
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de chaque type
cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer selon la norme EN 15189
Contrôles organisés : EEQ (Lames) ◦ Formule leucocytaire ◦ Myélogramme ◦ Proposition diagnostic cytologique
«Pour un spécialiste de Biologie Médicale l’item « JE NE SAIS PAS » ne devrait pas exister.
Vous devez obligatoirement faire des HYPOTHESES …à partir desquelles vous pourrez parler avec un clinicien… »
CTCB EN.CRHEM 02-11--11
« Doubles lectures inopinées » pour avis: ◦ Vérification de la concordance des % de chaque type
cellulaire obtenue par 2 lecteurs ◦ Difficile à tracer selon la norme EN 15189
Contrôles organisés : EEQ (Lames) ◦ Formule leucocytaire ◦ Proposition diagnostic cytologique
Relecture dans le cadre des protocoles par des
référents nationaux : ◦ FRALLE ◦ ELAM
Habilitation
Phase préanalytique Formation et contrôle des compétences Difficulté du diagnostic cytologique Standardisation des conclusions Saisie du résultat
Pour les étapes critiques…
Standardisation des conclusions : Ecriture d’un dictionnaire des conclusions ◦ Cytologie de Rémission Complète ◦ Bonne activité médullaire ◦ Cytologie d’hémopathie aiguë
Utiliser la terminologie des classifications
reconnues : ◦ OMS ◦ ADICAP
Saisie par secrétariat / validation par
biologistes
Formule sanguine leucocytaire au microscope
Myélogramme ou autres liquides biologiques
Kleihauer
Les techniques non automatisées
SH GTA 01
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Diagramme ISHIKAWA (Règle des 5 M)
Analyse de risque
SH GTA 14
Témoins +/-
Verrerie propre
Habilitation
Réactifs qualifiés Application et Minutie
Phase préanalytique : prélèvement++
Phase analytique : cytochimie délicate Phase post analytique : lecture au microscope
Pour les étapes critiques…
Témoin neg (Adulte)
Témoin pos (BB)
Témoin 50% Patient
Une « évaluation par nos pairs » Points forts de compétence Points qui restent à améliorer
La preuve d’une qualité Utile au patient et au clinicien Prouvée et pragmatique Inscrite dans le temps
ACCREDITATION
Vérification de méthode en Hématologie Exemple de l’Hémogramme automatisé
Delphine Mercier-Bataille CHU Marseille
Vérification/Validation des procédures analytiques
NF EN ISO 15189
Vérification/Validation des procédures analytiques
Vérification/Validation des procédures analytiques
FICHE TYPE QUANTITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 43 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
FICHE TYPE QUALITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 44 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
VERIFICATION VALIDATION
• Portée A • Méthode fournisseur
• Portée B • Méthode non normalisée
Environnement du LBM
Exigences satisfaites (caractéristiques des performances)
Hémogramme
• Vérification / Validation ? • Quantitatif / Qualitatif?
FICHE TYPE QUANTITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 43 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
FICHE TYPE QUALITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 44 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
Hémogramme
• Vérification / Validation ? • Quantitatif / Qualitatif?
FICHE TYPE QUANTITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 43 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
FICHE TYPE QUALITATIF Vérification (portée A) / validation (portée B)
d’une méthode de biologie médicale
Référence : SH FORM 44 Indice de révision : 00 Date d’application : 15/04/11
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
DESCRIPTION DE LA METHODE Analyte/Mesurande : GB – GR – Hb – Hte – VGM - CCMH –
PQ – PNN… Hémogramme et paramètres dérivés
Principe de la Mesure :
Méthode automatisée de type quantitatif Principe général des techniques : - Impédancemétrie - Cytométrie en flux - Cytochimie - Spectrophotométrie - Fluorescence - Radiofréquence - Calcul
SH INF 50
Méthode de mesure : Diffraction – Oxydoréduction – MPO GB-GR-PQ Hb Formule
Type d'échantillon primaire (urine, sang, …) : Sang
Type de récipient, Additifs (tubes, …) :
Tube EDTA microtainer, 2,5mL, 5mL…
Prétraitement de l'échantillon (centrifugation, dilution,…) :
Agitation si passage manuel
Unités : G/L, Tera/L, g/L, Fl, L/L… Intervalles de référence : England JM, Bain BJ. Total and differential leukocyte
count. Br J Haematol 1976; CLSIDocumentC28A3,Wayne, PA, 2008
Marquage CE (Oui/Non) : Oui Codage C.N.Q. (s'il existe) : S.O Instrument (analyseur automatique, etc.) :
Advia 2120i, Siemens
DESCRIPTION DE LA METHODE suite
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
MISE EN ŒUVRE
Opérateur(s) habilité(s) ayant réalisé la vérification de méthode :
A. G. Technicien référent V. B. Biologiste responsable technique
Procédure de validation : 00ANAP01
Procédure de gestion de la portée flexible :
00ANAP02
Période d'évaluation : Du 4.10.10 au 30.10.10 Date de mise en service : Après la fin de la validation Autorisation de mise en service par :
Le biologiste responsable technique
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
MAITRISE DES RISQUES Données d'entrée Points critiques à maîtriser Modalités de maîtrise
Type d'échantillon primaire (urine, sang, Type de récipient (tubes, …), Additifs :
Prétraitement de l'échantillon (centrifugation, dilution, …) :
Main d'œuvre (habilitation du personnel) : Préciser les références des procédures et enregistrements.
Conditions ambiantes requises (ex : Température, organisation des locaux, éclairage,…) :
Référence du réactif (référence fournisseur, version) : Matériau de référence :
Equipements : Exigences métrologiques* (Exigences informatiques* spécifiques
Maitrise des risques Facteurs non quantifiables Déterminer des actions préventives et correctives
Résultat erroné
Processus analytique, gestion des ressources humaines…
Résultat erroné
PREANALYTIQUE POSTANALYTIQUE
ANALYTIQUE
Résultat erroné
PREANALYTIQUE POSTANALYTIQUE
ANALYTIQUE
Milieu
Matière
Moyens
Main d’œuvre
Méthode
Milieu
Matière
Main d’œuvre
Moyens
Main d’œuvre
Méthode
Moyens
Résultat erroné
PREANALYTIQUE POSTANALYTIQUE
ANALYTIQUE
Milieu
Matière
Moyens
Main d’œuvre Prélèvement coagulé hémolysé Identification erronée
Méthode Délai d’acheminement Erreur d’anticoagulant
Milieu
Matière
Main d’œuvre
Moyens
Main d’œuvre
Méthode
Moyens
Résultat erroné
PREANALYTIQUE POSTANALYTIQUE
ANALYTIQUE
Milieu
Matière
Moyens
Main d’œuvre Prélèvement coagulé hémolysé Identification erronée
Méthode Délai d’acheminement Erreur d’anticoagulant
Milieu Température Poussière Luminosité
Matière Réactifs et matériels défectueux Gestion des stocks
Main d’œuvre Erreur de manipulation Validation technique inappropriée
Moyens
Main d’œuvre
Méthode Modes opératoires obsolètes
Moyens Maintenance Automates Défaut Informatique
Résultat erroné
PREANALYTIQUE POSTANALYTIQUE
ANALYTIQUE
Milieu
Matière
Moyen
Main d’œuvre Prélèvement coagulé hémolysé Identification erronée
Méthode Délai d’acheminement Erreur d’anticoagulant
Milieu Température Poussière Luminosité
Matière Réactifs et matériels défectueux Gestion des stocks
Main d’œuvre Erreur de manipulation Validation technique inappropriée
Moyen Défaillance informatique
Main d’œuvre Interprétation biologique Erreur de saisie
Méthode Modes opératoires obsolètes
Moyens Maintenance Automates Défaut Informatique
MAITRISE DES RISQUES: PHASES PREANALYTIQUE ET ANALYTIQUE
Données d'entrée Points critiques à maîtriser Modalités de maîtrise
Echantillons, prétraitement Identification erronée Tube coagulé ou hémolysé Délai acheminement Agitation (mode manuel)
PREANALYTIQUE Manuel de prélèvement Catalogue des analyses GESTION RH Habilitations techniciens
Automates Informatique
CQ non gérés Maintenances automates
ANALYTIQUE Procédure d’acceptation CQ CAT Violation des règles de Westgard GESTION MATERIEL Procédures de maintenance Contrat avec le fournisseur
Système documentaire Procédures
Procédures obsolètes Mauvaise connaissance des M.O
AMELIORATION QUALITE Système efficace d’information Révision des procédures
Main d'œuvre (habilitation du personnel) :
Erreur de manipulation Validation technique inappropriée
GESTION RH Fiches de poste Fiches d’habilitation Formation continue
Conditions ambiantes requises
Température Poussière Luminosité
GESTION MATERIEL Métrologie Procédures d’entretien
MATIERE
MILIEU
MAIN D’OEUVRE
METHODE
MOYENS
MAITRISE DES RISQUES: PHASES PREANALYTIQUE ET ANALYTIQUE
Données d'entrée Points critiques à maîtriser Modalités de maîtrise
Echantillons, prétraitement Identification erronée Tube coagulé ou hémolysé Délai acheminement Agitation (mode manuel)
PREANALYTIQUE Manuel de prélèvement Catalogue des analyses GESTION RH Habilitations techniciens
Automates Informatique
CQ non gérés Maintenances automates
ANALYTIQUE Procédure d’acceptation CQ CAT Violation des règles de Westgard GESTION MATERIEL Procédures de maintenance Contrat avec le fournisseur
Système documentaire Procédures
Procédures obsolètes Mauvaise connaissance des M.O
AMELIORATION QUALITE Système efficace d’information Révision des procédures
Main d'œuvre (habilitation du personnel) :
Erreur de manipulation Validation technique inappropriée
GESTION RH Fiches de poste Fiches d’habilitation Formation continue
Conditions ambiantes requises
Température Poussière Luminosité
GESTION MATERIEL Métrologie Procédures d’entretien
MATIERE
MILIEU
MAIN D’OEUVRE
METHODE
MOYENS
MAITRISE DES RISQUES: PHASES PREANALYTIQUE ET ANALYTIQUE
Données d'entrée Points critiques à maîtriser Modalités de maîtrise
Echantillons, prétraitement Identification erronée Tube coagulé ou hémolysé Délai acheminement Agitation (mode manuel)
PREANALYTIQUE Manuel de prélèvement Catalogue des analyses GESTION RH Habilitations techniciens
Automates Informatique
CQ non gérés Maintenances automates
ANALYTIQUE Procédure d’acceptation CQ CAT Violation des règles de Westgard GESTION MATERIEL Procédures de maintenance Contrat avec le fournisseur
Système documentaire Procédures
Procédures obsolètes Mauvaise connaissance des M.O
AMELIORATION QUALITE Système efficace d’information Révision des procédures
Main d'œuvre (habilitation du personnel) :
Erreur de manipulation Validation technique inappropriée
GESTION RH Fiches de poste Fiches d’habilitation Formation continue
Conditions ambiantes requises
Température Poussière Luminosité
GESTION MATERIEL Métrologie Procédures d’entretien
MATIERE
MILIEU
MAIN D’OEUVRE
METHODE
MOYENS
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
PARAMETRES A VERIFIER ET/OU A CONNAITRE Bibliographie Vérification sur site
Portée de type A Validation
Portée de type B
Spécificité analytique Oui Non Oui
Fidélité (répétabilité et fidélité intermédiaire) Oui Oui Oui
Justesse (approche de la) Oui Oui, dès que possible Oui
Intervalle de mesure (Limite de quantification et limites de linéarité) Oui Si besoin Oui
Incertitudes/facteurs de variabilité et évaluation Oui Oui Oui
Contamination entre échantillons (s'il y a lieu) Oui Oui, pour les paramètres sensibles Oui
Stabilité réactifs (après ouverture, embarqués) Oui Non Oui
Robustesse Non Non si besoin
Interférences (lipémie, hémoglobine plasmatique, bilirubine, médicaments) Oui Si besoin Oui
Intervalle de référence « ex- valeurs normales » Oui à vérifier dès que possible, si justifié Oui à établir
Comparaison avec une méthode de référence Oui (si existe) Non Oui (si possible)
Comparaison avec méthode déjà utilisée au labo ou autre méthode du laboratoire (appareil en miroir, EBMD)
Oui (si existe) Oui (si possible) Oui
Analyse des discordances Oui Oui Oui
Le dossier doit conclure sur l'avis d'aptitude de la méthode ou du système analytique. SH GTA 04
Répétabilité (Within-subject variation ou CVw): même échantillon passé X fois dans mêmes conditions
Hémoglobine 17,5g/dL: Sang de sujet sain Hémoglobine 6,8g/dL: Sang de sujet sain dilué
EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Ech (N) Moyenne[1] Ecart-type CV (%) CV (%)
fourniss CV (%) limite
RICOS Concl[3]
Hb 6,8g/dL 20 6,805 0,07 1 0,8 2.8 CONFORME
Hb 17,7g/dL 20 17,46 0,13 0,7 0,8 2.8 CONFORME
SH GTA 04
CV (%)= ET x 100 / m
Validation des performances CVw = 2.8
C. Ricós, Scand J Clin Lab Invest 1999
Ech (N) Moy2 Ecart-type
CV (%)
CV (%) fournisseur
CV (%) limite RICOS Conclusion4
Leucocytes niveau 1 30 3.58 0.09 2.52 5.3 CONFORME
Leucocytes niveau 2 30 7.34 0.16 2.16 5.3 CONFORME
Leucocytes Niveau 3 A ajouter
30 17.24 0.34 1.97 5.3 CONFORME
Fidélité intermédiaire (Between-subject variation ou CVb) : même échantillon dans conditions différentes (CIQ) Du 01.10.10 au 30.10.10 Niveau 1 : Leucocytes bas Niveau 2 : Leucocytes normaux Niveau 3 : Leucocytes hauts
CV (%)= SD x 100 / m
TABLES DE RICOS
Validation des performances selon RICOS Imprécision: I < 0.5 CVw 0.5 x 10.9 = 5.3
Justesse • APPROCHE 1 – INEXACTITUDE DE LA METHODE/ UTILISATION DES EEQ Inexactitude (%) = (x - V) x 100 V
• APPROCHE 2 – ETUDE DE JUSTESSE : UTILISATION DE CIQ EXTERNALISES biais (%) = (m - V) x 100 V
• APPROCHE 3 – ECHANGES INTER-LABORATOIRES D’ECHANTILLONS Inexactitude (%) = (xn - Vn) x 100 Vn Valeur cible = Moyenne des
résultats des participants
Valeur cible = Valeur vraie proposée par le fournisseur
Valeur cible = Moyenne des résultats des participants ou du groupe de pairs
SH GTA 04
BIAIS MOY
Justesse (approche de la) : Exemple des leucocytes Cas des contrôles internes externalisés
Ech Nbre (N)
Val Labo
Cible (grpe
de pairs)
Moy (toutes tech)
Biais (%) /gr de pairs
Biais (%)
/moy génér
ale
Biais (%) Limite RICOS
Concl4
GB Bas 10 3.48 3.36 3.3 3.57 S.O 5.6 CONFORME
GB Normal 11 8.02 7.83 7.8 2.42 S.O 5.6 CONFORME
GB Haut 12 18.9 18 17.9 5 S.O 5.6 CONFORME
Conclusions : Selon RICOS Biais: B = <0,25 (CVw² +CVb²) ½ 0.25 x (10.92 + 19.62)1/2 = 5.6
VALIDATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Performance (RICOS) Limite souhaitable
Imprécision (I) < 0.5 CVw
Biais (B) <0,25 (CVw² +CVb²) 1/2
Erreur totale (ET) <1.65I+B
GB RICOS Labo
CVb 19.6 2.16
I = 0.5*10.9 5.45 2.04
Biais 5.6 2.28
ET 14.6 2.42
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
COMPARAISON DE METHODES (Lymphocytes) : EN CAS DE CHANGEMENT D’AUTOMATE
Données bibliographiques (fournisseurs, publications,…) :
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le laboratoire, appareil en miroir ou EBMD :
Coulter Gen’S
Nombre de mesures : 40
Intervalle de comparaison adaptée à l'activité du laboratoire :
0.4 – 5 G/L
Méthode d'exploitation des résultats : Droite de régression
Equation de la droite de régression : Y = 0.94 x + 0.17 Diagramme des différences et/ou des rapports :
Conclusions et dispositions CONFORME
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
INTERVALLE DE MESURE (indispensable en portée B)
Mode de détermination Données fournisseur
Limite inférieure de linéarité (de quantification) Profil de fidélité
Globules blancs: 0.02 G/L Plaquettes: 5 G/L Globules rouges: 0 T/L Hb:0 g/L Réticulocytes: 0.2 %
Limite supérieure de linéarité Globules blancs: 400 G/L Plaquettes: 3500 G/L Globules rouges: 7 T/L Hb: 225 g/L Réticulocytes: 24.5%
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
INTERFERENCES
Vérification bibliographique : Données fournisseurs Hémolyse GB Lactescence Hb Cryoglobulines PQ Agglutinines Froides CCMH Défaut de lyse des GR GBp
Vérification :
Cf GRAPHES
PLAN 1. Description de la méthode 2. Mise en œuvre 3. Maitrise des risques 4. Evaluation des performances 5. Incertitudes de mesure 6. Comparaison de Méthodes 7. Intervalles de mesure 8. Interférences 9. Contamination
Contamination inter-échantillons
Plaquettes hautes: H1, H2, H3 Plaquettes basses: B1, B2, B3
contamination (%) = (mB1 – mB3) x 100
(mH – mB3) Exemple Plaquettes B = 13 G/L H = 760 G/L
(12 – 12) x100 = 0 757-12
CONTAMINATION (indispensable en portée B et pour les paramètres sensibles en
portée A) Inter échantillon PLAQUETTES LEUCOCYTES GR
0 % 0 % 0 %
Inter réactif si nécessaire SANS OBJET
Vérification bibliographique : SANS OBJET
Vérification : SANS OBJET
Conclusion
Analyse et maitrise des risques
ADAPTER le SH FORM 43
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 1
Accreditation of hematology in the core lab of Ghent University Hospital
Veronique Stove 27 februari 2012
2 2 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
University Hospital with 1062 beds 1600 orders/day (600 000/jaar) + 800 POC 3000 tubes/day Accreditation since 1998
Core lab Ghent University Hospital
3 3 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
100
80
60
40
20
0
Time of arrival
# R
eque
sts
700 CBC orders on 01/06/2010
4 4 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Flowchart
DM96 (CellaVision)
5 5 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Procedure: - Accreditation structure is based on the Law of July 20, 1990. - Application for accreditation: BELAC
- Since August 1, 2006, the only Belgian Accreditation Body - It was established by the provisions of the Royal Decree of January 31, 2006 and is placed under the responsibility of the Federal Ministry of Economy - BELAC has signed all agreements of EA (European co-operation for Accreditation), ILAC (International Laboratory Accreditation Cooperation) and IAF (International Accreditation Forum). - BELAC accreditation certificates are internationally recognized.
- Proof of competence to audit team with technical experts and quality experts - Reporting correct patient results - Supplying high-quality patient care - Presence of a functional quality system - ...
-Accreditation for a period of max. 5 years, with yearly control-audits.
Accreditation according to Standard NBN EN ISO 15189
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 6
Accreditation of our new EXPERTline (Sysmex)
Automation: Integration of the hematology analysers into 1 platform (2010)
7 7 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
SIS
EXPERTline (Sysmex)
Cellavision
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 8
- hematology parameters (2 instruments) - expert system - smear/stainer instrument - tube sorter - sedimentation rate instrument
1) Validation files
9 9 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Validation procedures
CE labeled methods:
Evaluation of inaccuracy (bias) Evaluation of imprecision (intrarun + day tot day / between run) Evaluation of reference values CE Determination of total error and comparison with acceptable error Method comparison between currently used and new instrument
10 10 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
C Imprecision (in %)
Bias (in %)
Acceptable Error (in %)
WIV-LP in %
RBC 2 1.6 1.7 4.4 4.0 WBC 2 5.5 5.6 14.6 10.0 Platelets 2 4.6 5.9 13.4 15.0 Hemoglobin 2 1.4 1.8 4.1 4.0 Hematocrit 2 1.4 1.7 4.1 4.0
MCV 4 2
0.7
1.2
5.0 2.3 5.0
Granulocytes 2 8.1 9.1 22.4 Immature granulocytes 3 10.5 19.8 37.1 Lymfocytes 2 5.2 7.4 16.0 Monocytes 2 8.9 13.2 27.9 Eosinophils 2 10.5 19.8 37.1 Basophils 2 14.0 15.4 38.5 Reticulocytes 2 5.5 7.8 16.8
Ret-He 5 10
1/3 AF
1/3 AF
5 ---
Erythroblasts 9 10
1/3 AF
1/3 AF
37.1 ---
C=2 : Westgard website (update 2006). bias + 1.65 x imprecisie. C=3 : analogous with related parameter Immature granulocytes : cfr eosinophils C=4 : WIV year report 2007 C=5 : expert opinion C=10 : rule of 1/3 (= 1/3 van AF) for imprecision according to Laessig & Ehrmeyer; can also be used for bias, when no other rules are available.
Criteria
11 11 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Reference values 1) CLSI:
- calculation - “verification”: n= 20 2) Multicentre reference values: regional
“same platform” 3) A posteriori
Hoffmann, Bhattacharya
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 12
2) Standard Operating Procedures & Internal Quality Control management
13 13 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Timing of internal quality control
Quality control material Before and after maintenance procedures (open and closed sampling mode) At the end of daily routine (evening)
Patient sample Weekly comparison of open and closed sampling mode on both analysers
Moving average (XBarM) Daily check for drifts
14 14 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
Defining limits of IQC (e-check, Sysmex)
Target e-check (defined by Sysmex) User mean (defined by first lab results)
Acceptable error
Upper (stop) limit
Lower (stop) limit
Westgard (alert) rules
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 15
- Records of education and qualification - Authorization to perform specific tasks - Assessment of competency after training and re-evaluation
3) Personnel
16 16 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 17
4) External quality assurance (Scientific Institute of Public Health)
18 18 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
© 2008 Universitair Ziekenhuis Gent 19
5) Automation and accreditation
20 20 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
REQUESTS: • CBC • ESR • Tacrolimus
Improved traceability of tubes
21 21 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
RBC
0,0
30,0
60,0
90,0
p25 p50 p75 p90
Routine_XE2100
STAT_XE2100
Routine_HST
STAT_HST
Med
ian
TAT
(min
utes
) Impact of automation on TAT
Routine TAT = STAT TAT P90 decreases for all samples
22 22 © 2008 Universitair Ziekenhuis Gent
MCV Delta check
| Current – Previous result | Average
Change in MCV indicates
Transfusion Sample mishandling Sample mix-up
Parameter TAT (p50 percentile)
Chemistry 44 min
Coagulation 39 min
Hematology 15 min
> 5%
Example (93 – 87) / 93 = 7%
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6) Some remarks of last Belac audits ... - Verification of calculated, reported parameters - Determination of own reference values - Carry-over validation on SP-1000i - Tuning for automated microscopy - Back-ups for all raw data - Remarks concerning SOPs
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