Immunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffine en ... - JA.pdf · LM à grandes cellules...

ImmunohistochimieImmunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffinesur tissu fixé et inclus en paraffine

en pathologie hématologiqueen pathologie hématologique

Rôle du pathologisteRôle du pathologiste

• Reconnaître un lymphome ou une autre tumeur hématopoïétique

• Classer la tumeur hématopoïétique selon la classification OMS 2008

• Diagnostic possible pour la majorité des cas

• Quelques cas difficiles soulignant l’importance de la gestion adaptée du prélèvement tissulaire +++ (Apposition, congélation,CMF, cytogénétique, biologie moléculaire)

• Problème du tissu prélevébiopsie ganglionnaire à l’aiguilleganglion, moelle osseuse, rate

CD20

BOM : localisation intrasinusale d’un lymphome B de la zone marginale splénique

DBA44

Biopsie Biopsie transpédiculairetranspédiculaire : nécrose: nécrose

ImmunohistochimieImmunohistochimie CD20 et CD3CD20 et CD3

Même grandissementMême grandissement

Dans la nécrose :Dans la nécrose :

grandes cellules CD20+grandes cellules CD20+

CD3

CD20

CD20

Pour le pathologiste, le diagnostic et la classification des lymPour le pathologiste, le diagnostic et la classification des lymphomes phomes dépendent :dépendent :

1. de la qualité de la technique conventionnelle2. de la rigueur de l’analyse morphologique3. de la qualité de la technique d’immunohistochimie4. de la rigueur de l’interprétation de l’immunohistochimie

► morphologie des cellules positives► topographie des cellules positives

et des cellules négatives► comparaison dans le même territoire des différents anticorps

sur niveaux rapprochés

Dans la majorité des cas, la morphologie et l’immunohistochimie avec un nombre restreint d’anticorps sont suffisants pour un diagnostic précis.

Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie

1. lymphome vs autre tumeur +++ Dias 8 -19

2. origine B ou T du lymphome +++ Dias 21- 38

3. classification des lymphomes B à petites cellules

4. classification des lymphomes périphériques T/NK

5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques

6. phénotype des néoplasies « blastiques »

7. phénotype des lymphomes de Hodgkin

8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53

1. Lymphome vs autre tumeur1. Lymphome vs autre tumeur

« Tumeur morphologiquement indifférenciée »•• LymphomeLymphome

- L. à grandes cellules anaplasiques- Maladie de Hodgkin riche en cellules tumorale- L. à grandes cellules B- L. à grandes cellules T

•• Tumeur hématopoïétique autre qu’un lymphomeTumeur hématopoïétique autre qu’un lymphome- Sarcome myéloïde- Mastocytose, etc...

•• Autre tumeurAutre tumeur- Carcinome indifférencié- Tumeur neuro-endocrine- Sarcome indifférencié- Mélanome- Séminome- PNET, Ewing, etc…

«« Tumeur morphologiquement indifférenciéeTumeur morphologiquement indifférenciée »»

L’immunohistochimie permet dans la quasi totalité des cas de reconnaître une tumeur d’origine hématopoïétique et de classer la tumeur.Les AC seront demandés en plusieurs étapes.

Un large panel d’anticorps est parfois nécessaire

1ère étape cytokératinesCD45 ou CD20 + CD3CD30

2ème étape CD79a, CD5, …EMA, Chromogranine A, HMB45 …

3ème étape CIg, MPO, lysozyme, CD68, PLAP, CD99, etc…

CD20 CD5

CD30

Tumeur du médiastin

CD56 PLAP

KL1

Tumeur du médiastin : séminome

Diagnostic initial de lymphomeDiagnostic initial de lymphome

1ère étape : CD45 1ère étape : CD45 Cytokératines EMACytokératines EMACD45CD45● exprimé par les cellules lymphoïdes normales et tumorales

● exprimé par les cellules d’origine hématopoïétiques normales et tumorales - cellules myéloïdes

- monocytes- cellules interdigitées- mastocytes …

● perte de l’expression dans quelques néoplasies lymphoïdes- myélome plasmocytaire et plasmocytome- lymphome lymphoblastique (20%)- lymphome à grandes cellules anaplasiques (30%)- lymphome immunoblastique à différenciation plasmocytaire

● expression inattendue : rares cas de carcinome indifférencié ouneuro-endocrine (Nandedkai et al. 1998)

CD45

Sarcome à cellules interdigitées CD45(+)

CD1a pS100

Sarcome myéloïde : CD45+

CD45

CD79aTdT

CD45

Lymphome lymphoblastique B, CD45(-)

Diagnostic initial de lymphomeDiagnostic initial de lymphomeCytokératinesCytokératines

Positives dans des lymphomes souvent CD45--- Quelques LM à grandes cellules B -- Néoplasies plasmocytaires -- Quelques LM NK/T

EMAEMAExprimé dans de nombreux lymphomes -- L. de Hodgkin à prédominance lymphocytaire nodulaire-- LM diffus à grandes cellules B riche en cellules T et/ou en histiocytes -- % néoplasies plasmocytaires-- % LM immunoblastique à différenciation plasmocytaire-- LM NK/T à grandes cellules anaplasiques

EMABOM

plasmocyteplasmocyte

erythroblasteserythroblastes

KL-1

EMACD20

Tumeur à grandes cellules, cytokeratines (+), EMA (+), CD20 (-), CD79a (-) : CARCINOME ?

IgM

NONNON : Lymphome Immunoblastique B IgM-Kappa

CD79a

Lambda

Kappa

Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie

1. lymphome vs autre tumeur +++ Dias 8 -19

2. origine B ou T du lymphome +++ Dias 21- 38

3. classification des lymphomes B à petites cellules

4. classification des lymphomes périphériques T/NK

5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques

6. phénotype des néoplasies « blastiques »

7. phénotype des lymphomes de Hodgkin

8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53

2. Origine B ou T du lymphome2. Origine B ou T du lymphome

• L’immunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffine est obligatoire, • en particulier pour les lymphomes à grandes cellules

• Un nombre restreint d ’anticorps est nécessaire dans la majorité des cas

Cellules B : CD20 CD79aCellules T : CD3 CD5

CD20 CD3

Lymphome à grandes cellules B Lymphome T

Lymphomes B : particularitésLymphomes B : particularitésExpression faible deExpression faible de CD20 : LLCCD20 : LLC--BB

Perte dePerte de CD20CD20-- néoplasies plasmocytaires-- LM immunoblastique-- rares cas de rechute de LM B CD20(+) après traitement

par Rituximab-- [lymphome/leucémie lymphoblastique B : acquisition tardive au cours

de la maturation]

utilitutilitéé de CD79ade CD79a

Perte dePerte de CD20CD20 etet CD79aCD79a-- % LM immunoblastique avec différenciation plasmocytaire-- LM diffus à grandes cellules B avec expression de la protéine

ALK (Delsol et al, 1999)-- LM B primitif des séreuses

Dans ces cas Dans ces cas : utilité de la détection des Ig cytoplasmiques

CD79a

CD20

LLC-B

CD20CD79a

CD20

Lymphome à grandes cellules B, CD20(+) : rechute après Rituximab, CD20(-)

κ λ

CD79a CD20

Plasmocytome extra-osseux CD20(-) CD79a(+)

Lymphome NK/T périphérique : Lymphome NK/T périphérique : particularitésparticularités

●● Perte d’un ou plusieurs antigènes panPerte d’un ou plusieurs antigènes pan--TT

-- fréquent, bon argument pour le diagnostic de lymphome T/NK

-- maismais quelques lymphocytes T normaux peuvent perdre un antigène au cours de leur maturation(ex. perte de CD7 par les lymphocytes T cutanés)

●● Réactivités inhabituellesRéactivités inhabituelles

-- CD20(+)ou CD79a(+) : % lymphome T/NK périphérique

-- CD79a(+) : lymphome lymphoblastique T (40 %)

-- CD10(+), bcl-6(+) : lymphome T angio-immunoblastique

CD3 CD5

TIA-1

Lymphome NK/T de type nasal, CD3(+), CD5(-)

CD20 CD5

CD3

Lymphome exprimant CD3 and CD20 mais CD5(-) : lymphome B ? Lymphome T ?

CD10

CD3

Diagnostic: Lymphome T angioimmunoblastic CD20(+)

CD20 EMA

CD30

Lymphome à grandes cellules CD30(+) CD20(+) EMA(+) : LYMPHOME B ?

CD79a TIA-1

CD7ALK-1

NON NON : Lymphome à grandes cellules anaplasiques ALK-1(+), de phénotype NK/T

Cellules réactionnelles dans les lymphomes Cellules réactionnelles dans les lymphomes

Le nombre des cellules réactionnelles peut constituer un piège pLe nombre des cellules réactionnelles peut constituer un piège pour le our le diagnostic et la classification des lymphomesdiagnostic et la classification des lymphomes

LM BLM B

1 1 -- • LM à grandes cellules B riche en lymphocytes T et en histiocytes• quelques LM diffus à grandes cellules B

Le nombre élevé de cellules T réactionnelles et/ou d’histiocytes peut masquer des cellules néoplasiques peu nombreuses

2 2 -- LM folliculaire :

les lymphocytes T peuvent représenter plus de 50% de la population centrofolliculaire : illusoire d’interpréter bcl-2 …

3 3 -- LM de la zone marginale et lymphome lymphoplasmocytique :

les lymphocytes T réactionnels peuvent être très nombreux, en particulier dans les localisations médullaires osseuses

Lymphome à gandes cellules B riche en T/histiocytes

CD68 CD3

CD20

Bcl-2

CD3

Bcl-2

CD3

Lymphome folliculaire contenant de nombreux lymphocytes TLymphome folliculaire contenant de nombreux lymphocytes T

Cellules réactionnelles dans les lymphomesCellules réactionnelles dans les lymphomes

lymphomes T/NKlymphomes T/NK

1.1. LM T périphérique angio-immunoblastique : présence de : - nombreux immunoblastes B souvent EBV(+)- et/ou parfois plasmocytose > 30%

2.2. LM à grandes cellules anaplasiques NK/T, variante lymphohistiocytique

présence de nombreux histiocytes masquantles cellules tumorales

CD20

CD3

Lymphome T angioimmunoblastique : immunoblates B CD20(+)

Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie

1. lymphome vs autre tumeur +++

2. origine B ou T du lymphome +++

3. classification des lymphomes B à petites cellules

4. classification des lymphomes périphériques T/NK

5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques

6. phénotype des néoplasies « blastiques »

7. phénotype des lymphomes de Hodgkin

8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53

8. Lésion lymphoïde bénigne vs lymphome8. Lésion lymphoïde bénigne vs lymphome

Amélioration de l’efficacité de l’IHC sur tissu fixé et inclus eAmélioration de l’efficacité de l’IHC sur tissu fixé et inclus en paraffine.n paraffine.

Prolifération à cellules BProlifération à cellules B

- hyperplasie folliculaire vs lymphome folliculaire• cellules B centrofolliculaire : bcl-2+• cellules B interfolliculaires : CD10+

- plasmocytose réactionnelle vs LM lymphoplasmocytique ou myélome. • CIg polytypique vs CIg monotypique +++

Bcl-2

Hyperplasie folliculaire

IgD

CD10Bcl-2

Lymphome folliculaire de type floral

Biopsie ostéomédullaire : myélome ?

IgM IgMIgA

κ λCD79

Biopsie ostéomédullaire myélome ? NON NON plasmocytose réactionnelle (M. de Castleman)

Prolifération à cellules TProlifération à cellules T

- Infiltrat réactionnel à cellules T vs lymphome T

• perte d’un antigène associé aux lymphocytes T

- réaction d ’hypersensibilité vs LMT angio-immunoblastique

• hyperplasie extrafolliculaire des CFD

• morphologie des cellules CD3+

Prolifération Prolifération immunoblastiqueimmunoblastique

- MNI, Kikuchi, etc... vs lymphome à grandes cellules

• Immunoblastes B polytypiques

• grandes cellules T activées souvent CD8 +

Ganglion : Lymphome ? Lésion réactionnelle ?

CD2

CD20

CD7

CD21

Lymphome T angio-immunoblastique

Ganglion : Nécrose et grandes cellules : lymphome ?

CD3CD20

CD68

NON NON : maladie de Kikuchi avec hyperplasie immunoblastic pseudo- lymphomateuse

CD68

CONCLUSIONCONCLUSION

L’immunohistochimie est aujourd’hui un outil indispensable pour le diagnostic et la classification de la plupart des LM.

Les résultats seront interprétés avec prudence en tenant compte des réactivités inhabituelles des cellules tumorales.

Dans les cas difficiles, les pièges seront contournés par une étude morphologique précise et par l’interprétation précise de l’ensemble de l’étude immunohistochimique.

En fait, devant une réactivité inhabituelle, le diagnostic finalreposera avant tout sur le diagnostic morphologique et sur la corrélation avec les données cliniques et biologiques.

Dans quelques cas, le recours à d’autres techniques (cytogénétique, biologie moléculaire) sera utile.