test de Lyme maladie antigène par cytométrie en flux

Un nouveau test de diagnostic pour la

maladie de Lyme par cytométrie en flux

Cliff Threlkeld, D.O.Central Florida Research

Un nouveau test de diagnostic pour la maladie de Lyme par cytométrie en flux

Introduction - Utilisation de la cytométrie en flux pour détecter Borrelia burgdorferi (Bb)Principes de base de la cytométrie en fluxDemande de dépistage des maladies de LymeComparaison de cytométrie en flux pour d'autres méthodes de dépistage des maladies de LymeDisponibilité de la cytométrie en flux la maladie de Lyme essais

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Bases de la cytométrie en flux◦ cytomètre de flux typique -électriques, mécaniques et de détection et système informatiqueinstallation par défautChambre de mesureComment sont les événements détectés?Comment anticorps travail

Cytomètre en flux typique

Computer SystemDétecteur &Mécanique

Puissance

Cytometer

Puissance

Computer

Specimen Tube

InjecteurPointe

FluorescenceSignaux

laser focaliséfaisceau

•Gainefluide

Flow Cytometry

PMT FITC

PMT PE

PMT ECD

PMT PC5

Filtresdichroïques

Laser

1

2

3

4

Chambre de mesure

Passe-bande des filtres

Comment fonctionne le Abs

319

ZAP

70

5

FS

SS

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Application de la cytométrie en flux pour le dépistage des maladies de Lyme◦ Traditionnels d'essai de deux test d'anticorps du

protocole - ELISA et Western Blot (WB)méthodes de détection bactérienne - Culture et de la réaction en chaîne par polymérase (PCR) - La cytométrie en flux sous-utilisésEn utilisant la cytométrie en flux pour détecter Borrelia burgdorferi dans le sang du patient Anticorps avec l'étiquette de la fluorescéine

(chèvre, KPL) ajouté à aliquote de sang du patient (EDTA)Incubation 1 heure à 37 ° CAnalyser le FC - Bb sont lumineuses fluorescentes événements

Cytométrie en flux de Borrelia burgdorferi positive patients

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Comparaison des FC à la Banque mondiale et PCR◦ Étude de phase 1 par rapport FC avec la Banque mondiale66 patients avec diagnostic clinique de la LD

5 positifs par WB, 4 de ces positive par le FC28 autres patients positifs par le FC

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Comparaison des FC à la PCR◦ Phase 2 par rapport au FC PCR chez 42 patients avec un diagnostic clinique de la LD16 patients positifs par le FC et 18 positifs par PCR

8 patients positifs par PCR et le FCSéquençage des gènes, effectuée le 14 PCR positive patients (5 FC positive)Bb 8 stricto sensu (4 CF)7 Bb lato sensu (nouveau sous-groupe, 2 par le FC)

Résultats

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La sensibilité et la spécificité des FC et de la BM par rapport◦ Sensibilité FC Spécificité = 66% = 92%

◦ WB Sensibilité Spécificité = 52% = 100%

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La sensibilité et la spécificité des FC et de la PCR par rapport◦ Sensibilité FC Spécificité = 62% = 100%

◦ PCR Sensibilité Spécificité = 64% = 100%

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Disponibilité de la cytométrie en flux LD essais◦ Recherche de la Floride centrale, Winter Haven, Floride

site Web - Http: / / www.centralfloridaresearch.com

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Les applications futures◦ Test de la maladie transmise par les tiques multiples pathogènes simultanément

◦ Ajouter anticorps espèces européennes de Borrelia

◦ Rechercher des antigènes dans les monocytes Bb