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diagnostic sérologique de Salmonella typhi, de salmonella para typhi A,B et C et éventuellement de salmonella typhi –murium et Salmonella enteritidis...
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Abdsalah
Sérodiagnostic de Widal-Félix
(Méthode par centrifugation)
Par : S / Abdessemed
Abdsalah
Principe :
• Des dilutions croissantes de sérum sont mises en présence des suspensions « O » (alcoolisées) et « H » (formolées) de Salmonella typhi, de salmonella para typhi A,B et C et éventuellement de salmonella typhi –murium et Salmonella enteritidis ou de suspension « Vi ».
Abdsalah
• Ceci permet la mise en évidence dans le sérum du sujet d’agglutinines O correspondant à l’antigène somatique et d’agglutinines H correspondant à l’antigène flagellaire.
Abdsalah
Réactifs :
Soluté physiologique à 8. gr/l ClNa
Suspension antigéniques «O »et « H »
- de Salmonella typhi
-de Salmonella paratyphi A
-de Salmonella paratyphi B
-de Salmonella paratyphi C
Abdsalah
Suspension « H »
-de Salmonella enteritidis
-de Salmonella typhi-murium
Suspension Vi de salmonella typhi
Abdsalah
Mode opératoire :
Méthode qualitative :• Technique par centrifugation :• Préparer des dilutions au 1/10 et au 1/20
des sérums à examiner, en solution de ClNaà 8.5 g/l :-dilution au 1/10 : 0.2 ml de sérum + 1.8 ml
de ClNa-Dilution au 1/20 : 0.1 ml de sérum+1.9 ml
de ClNa• Préparer la galerie suivante :
Abdsalah
N° des tubes
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
sérum au 1/20 (ml)
- 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1
sérum au 1/10 (ml)
0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 - 0.1 -
Ajouter les suspensions antigéniques
TO0,9
TO0,9
TH0,9
TH0,9
AO0,9
AO0,9
AH0,9
AH0,9
BO0,9
BO0,9
BH0,9
BH0,9
Dilution……
1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200 1/100 1/200
Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn. Lecture après remise en suspension par une chiquenaude
Abdsalah
• Méthode quantitative :
• Préparer les dilutions suivantes de sérum :
NaCl (ml)Sérum(ml)
1.80.2
1.01.0
1.01.0
1.01.0
1.01.0
Dilutions obtenues…….
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160
Abdsalah
• Pour chaque suspension réaliser la galerie suivante, à l’aide des dilutions de sérum :
Dilution du sérum…
1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 Témoin antigène
sérum dilué (ml)NaCl ( ml )suspension antigénique....
0.1-0.9
0.1-0.9
0.1-0.9
0.1-0.9
0.1-0.9
-0.10.9
Dilution finale.. 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600
Centrifuger 5 mn à environ 3000 tours/mn. Lecture après remise en suspension par une chiquenaude
Abdsalah
Lecture :• Les témoins antigène sont troubles de
façon homogène.• Si le sérum contient des agglutinines » H
« correspondant à l’une des suspensions on observe une agglutination floconneuse facilement dissociable.
• Si le sérum contient des agglutinines » O » correspondant à l’une des suspensions, on observe une agglutination fine, granulaire, difficilement dissociable.
Abdsalah
Interprétation :
• Dans les fièvres typho-paratyphoidiques, les agglutinines « O » apparaissent vers le 8e jour de la maladie, les agglutinines » H » vers le 10-12 jour.
• A la période d’état, il y aura donc simultanément des agglutinines anti O et anti H, ces dernières atteignant un titre plus élevé.
Abdsalah
Abdsalah
• Il faut prélever au moins deux échantillons de sérum, espacés de 7 à 10 jours. Une élévation du taux des agglutinines est le signe d’une infection en cours.
• L’interprétation des résultats sur un seul prélèvement est difficile et nécessite la connaissance des antécédents de vaccination du malade et de l’évolution de la maladie.
Abdsalah
• Les titres élevés contre les antigènes » O » sont considérés de plus grande signification que les titres contre les antigènes « H », car les anticorps anti O disparaissent plus vite après immunisation.
• Cependant, un traitement précoce du malade par du chloramphénicol et les corticoïdes peut empêcher l’apparition dans son sérum des agglutinines » O ».
Abdsalah
• L’interprétation des résultats nécessite aussi la connaissance des parentés antigénique existant entre les différentes espèces de Salmonelles.
• Par exemple Salmonella enteritidis a des antigènes « O » en commun avec Salmonella typhi ;
• Salmonella typhi-murium à des antigènes « O » en commun avec Salmonella para B.
Abdsalah
• Pour confirmer ou éliminer l’hypothèse d’une infection due à ces germes,
• il faudra rechercher les agglutinines «H » anti Salmonella enteritidis ou Salmonella typhi-murium.
Abdsalah
• Les agglutinines « Vi » sont présentes dans le sérum de 80 à 90 % des porteurs de Salmonella typhi, et chez 5 à 10 % des individus normaux. L’intérêt de leur recherche est donc limité aux enquêtes épidémiologiques.
Abdsalah
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