ACQUITY UPLC H-Class - Home : Waters · 2010-10-12 · Avis de droits d'auteur ... valides utilisant au moins cinq étalons pour tracer la courbe d'étalonnage. La plage de concentration

ACQUITY UPLC H-ClassManuel du système

Révision B

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Avis de droits d'auteur

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Marques

ACQUITY, ACQUITY UPLC, Connections INSIGHT, Millennium, PIC, UPLC et Waters sont des marques déposées ; Auto•Blend Plus, eCord, Empower, LAC/E, MassLynx et THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE sont des marques de Waters Corporation.

Kel-F est une marque déposée de 3M.

Keps est une marque déposée de la division Shakeproof d'Illinois Tool Works, Inc.

Phillips est une marque déposée de Phillips Screw Company.

Teflon est une marque déposée de E. I. du Pont de Nemours et Cie.

TORX est une marque déposée de Textron Corporation.

PEEK est une marque de Victrex Corporation.

TRITON est une marque de Union Carbide Corporation.

TWEEN est une marque de ICI Americas, Inc.

Toutes les autres marques commerciales ou marques déposées sont la propriété exclusive de leurs propriétaires respectifs.

ii

Remarques et suggestions

Le service d'assistance technique de Waters vous invite à signaler toute erreur rencontrée dans ce manuel et à faire part de vos suggestions pour l'améliorer. Vous nous aiderez ainsi à mieux comprendre vos attentes et à améliorer en permanence l'exactitude et la convivialité de nos manuels.

Toutes les remarques et suggestions que nous recevons sont étudiées avec soin. Vous pouvez nous joindre à l’adresse suivante : [email protected].

Contacter Waters

Contactez Waters® pour toute demande de mise à jour et toute question technique sur l'utilisation, le transport, le déplacement ou l'élimination d'un produit Waters. Nous sommes joignables par Internet, téléphone ou courrier.

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Courrier Waters SAS5 rue Jacques Monod78280 GuyancourtFrance

iii

Règles de sécurité

Certains réactifs et échantillons utilisés avec les intruments Waters peuvent présenter des risques chimiques, biologiques ou radiologiques. Vous devez connaître les dangers potentiels de toutes les substances manipulées. Respectez systématiquement les Bonnes Pratiques de Laboratoire, ou BPL, ainsi que les recommandations du Responsable Sécurité de votre entreprise.

Remarques spécifiques aux instruments ACQUITY UPLC H-Class

Risque lié aux hautes tensions

Conseils de sécuritéUne liste complète d'avertissements et de conseils de sécurité est disponible en Annexe A.

Avertissement : pour éviter les électrisations, ne retirez pas les panneaux de protection des instruments ACQUITY UPLC H-Class. Les composants protégés par ces panneaux ne sont pas réparables par l'utilisateur.

iv

Utilisation du système ACQUITY UPLC H-Class

Lors de l'utilisation des instruments ACQUITY UPLC H-Class, respectez les procédures standard de contrôle de la qualité et les directives de la présente rubrique.

Symboles rencontrés

Objectif et personnes concernéesCe manuel est destiné au personnel chargé de l'installation, de l'utilisation et de la maintenance des instruments ACQUITY UPLC H-Class. Il donne un aperçu général de la technologie du système et de son fonctionnement.

Utilisation prévue du système ACQUITY UPLC H-ClassLe système ACQUITY UPLC H-Class de Waters est exclusivement destiné à être utilisé dans un contexte de recherche.

Symbole Description

Fabricant

Représentant agréé de la Communauté européenne

Atteste de la conformité d'un produit à l'ensemble des directives de la Communauté européenne applicables à ce produit

Conforme à la norme australienne C-Tick relative à la compatibilité électromagnétique

Atteste de la conformité d'un produit à l'ensemble des exigences de sécurité en vigueur aux États-Unis d'Amérique et au Canada

Consulter les instructions d’utilisation

v

ÉtalonnageLors de l'étalonnage des systèmes LC, appliquez des méthodes d'étalonnage valides utilisant au moins cinq étalons pour tracer la courbe d'étalonnage. La plage de concentration des étalons doit couvrir celles des échantillons de référence et des prélèvements typiques ou atypiques.

Pour étalonner un spectromètre de masse, consultez la section correspondante du manuel de l'utilisateur de l'instrument à étalonner. Lorsque seul un manuel d'utilisation et de maintenance, et non un manuel de l'utilisateur, a été livré avec l'instrument, consultez l'aide en ligne de l'instrument pour des procédures d'étalonnage détaillées.

Contrôle de la qualitéAnalysez régulièrement trois échantillons de référence contenant un même composé à concentration faible, normale et forte. Vérifiez que les résultats obtenus avec ces échantillons sont compris dans une plage acceptable et évaluez la fidélité quotidiennement et d'un test à l'autre. Lorsque les échantillons de référence sont hors de la plage acceptable, les données collectées risquent de ne pas être valables. Utilisez ces données uniquement après avoir vérifié le bon fonctionnement de l'appareil.

Lors de l'analyse d'échantillons provenant d'une matrice complexe, par exemple, du sol, du tissu, du sérum, du plasma, du sang total ou autre, les constituants de la matrice peuvent augmenter ou diminuer l'ionisation et, ainsi, affecter les résultats de l'analyse par LC/MS. Waters recommande les mesures suivantes pour minimiser ces effets de matrice :

• Avant l'analyse instrumentale, appliquez aux échantillons un pré-traitement approprié tel que la précipitation des protéines, l'extraction liquide-liquide (ELL) ou l'extraction en phase solide (EPS), pour éliminer les interférences de la matrice.

• Autant que possible, vérifiez l'exactitude et la fidélité de la méthode en utilisant des étalons et des échantillons de référence adaptés à la matrice.

• Utilisez un ou plusieurs étalons internes, de préférence des analytes à marquage isotopique.

vi

Classification ISM

Classification ISM : ISM groupe 1, classe BCette classification est en accord avec la norme CISPR 11, caractéristiques des appareils industriels, scientifiques et médicaux (ISM). Les radiofréquences à couplage inductif des appareils de Groupe 1 sont générées et/ou utilisées intentionnellement ; elles sont nécessaires au fonctionnement interne de l'appareil. Les produits de Classe B sont adaptés à une utilisation dans des locaux commerciaux ou résidentiels et peuvent être directement reliés au réseau électrique basse tension.

Représentant agréé CE

Waters Corporation (Micromass UK Ltd.)Floats RoadWythenshaweManchester M23 9LZRoyaume-Uni

Téléphone : +44-161-946-2400

Télécopie : +44-161-946-2480

Interlocuteur : Responsable Qualité

vii

viii

Table des matières

Avis de droits d'auteur ........................................................................................ ii

Marques ................................................................................................................... ii

Remarques et suggestions ................................................................................. iii

Contacter Waters ................................................................................................. iii

Règles de sécurité ................................................................................................ iv Remarques spécifiques aux instruments ACQUITY UPLC H-Class............... iv Conseils de sécurité ............................................................................................ iv

Utilisation du système ACQUITY UPLC H-Class ........................................... v Symboles rencontrés ............................................................................................ v Objectif et personnes concernées ........................................................................ v Utilisation prévue du système ACQUITY UPLC H-Class ................................ v Étalonnage .......................................................................................................... vi Contrôle de la qualité ......................................................................................... vi

Classification ISM ............................................................................................... vii Classification ISM : ISM groupe 1, classe B.................................................... vii

Représentant agréé CE ...................................................................................... vii

1 Système ACQUITY UPLC H-Class ...................................................... 1-1

Chromatographie liquide UltraPerformance (UPLC) ............................. 1-2

Caractéristiques du système ACQUITY UPLC H-Class ........................... 1-4 Injecteur à débit via aiguille ........................................................................... 1-4 Solvant de lavage ............................................................................................. 1-5 Solvant de purge .............................................................................................. 1-5 Conditionnement actif du solvant................................................................... 1-5 Améliorations logicielles.................................................................................. 1-5

Composants du système .................................................................................. 1-8 Technologie de colonne .................................................................................. 1-11 Pour plus d’informations ............................................................................... 1-12

Table des matières ix

2 Optimisation des performances ......................................................... 2-1

Recommandations générales ......................................................................... 2-2

Dispersion ........................................................................................................... 2-4

Contamination inter-échantillons ................................................................ 2-4

Reproductibilité ................................................................................................ 2-5

Durées des cycles entre injections ................................................................ 2-5

Prévention des fuites ....................................................................................... 2-6

Préparation des échantillons ......................................................................... 2-6 Particules ......................................................................................................... 2-6 Choix du diluant d'échantillon ........................................................................ 2-7

Transfert des méthodes ................................................................................... 2-7 Détermination du volume de retard ............................................................. 2-10 Transfert de l'HPLC à l'UPLC ...................................................................... 2-10 Transfert de l'UPLC à l'HPLC ...................................................................... 2-11

Développement de méthodes ....................................................................... 2-12

3 Préparation du système ....................................................................... 3-1

Préparation du matériel du système ............................................................ 3-2 Mise en marche du système ............................................................................ 3-2 Suivi des tests de démarrage .......................................................................... 3-3 Surveillance des voyants des modules du système ........................................ 3-3 Voyant d'alimentation ..................................................................................... 3-3 Voyants d'état .................................................................................................. 3-3 Activation des capteurs de fuite...................................................................... 3-5 Démarrage du système.................................................................................... 3-6

Configuration du logiciel de gestion des données chromatographiques ................................................................................. 3-9

x Table des matières

Panneaux de commande ACQUITY .............................................................. 3-9 Panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire ................. 3-9 Panneau de commande du Gestionnaire d’échantillons .............................. 3-12 Panneau de commande du Détecteur TUV .................................................. 3-14 Panneau de commande du Gestionnaire de colonne.................................... 3-16

Démarrage de l'application « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) ..................................................................... 3-18

A Conseils de sécurité ............................................................................. A-1

Symboles d'avertissement ............................................................................... A-2 Avertissement de sécurité propres à une tâche ............................................. A-2 Avertissements spécifiques ............................................................................. A-3

Symbole de mise en garde ............................................................................... A-6

Avertissements applicables à tous les instruments Waters .................... A-6

Symboles électriques et symboles relatifs à la manipulation ................ A-7 Symboles électriques ....................................................................................... A-7 Symboles relatifs à la manipulation ............................................................... A-8

B Branchements externes ...................................................................... B-1

Raccords de tubulure du système ................................................................ B-1

Câblage extérieur des instruments ............................................................. B-3 Câblage extérieur des instruments ACQUITY UPLC H-Class..................... B-3 Connexions Ethernet ....................................................................................... B-4 Branchements du four pour colonne............................................................... B-4

Connexions des signaux ................................................................................. B-4 Connexion des signaux .................................................................................... B-4

Raccordement à la source d'alimentation électrique ............................. B-9

Table des matières xi

C Choix des solvants ................................................................................ C-1

Introduction ...................................................................................................... C-2 Protection contre la contamination................................................................. C-2 Propreté des solvants....................................................................................... C-2 Qualité des solvants......................................................................................... C-2 Préparation des solvants ................................................................................. C-2 Eau.................................................................................................................... C-3

Recommandations relatives aux solvants .................................................. C-4 Recommandations générales relatives aux solvants ..................................... C-4 Solvants déconseillés ....................................................................................... C-7 Recommandations pour le système ACQUITY UPLC H-Class..................... C-7 Recommandations relatives au Gestionnaire de solvant quaternaire.......... C-8 Recommandations relatives au Gestionnaire d’échantillons......................... C-9 Recommandations relatives aux détecteurs................................................... C-9

Propriétés des solvants courants ................................................................. C-9

Miscibilité des solvants ................................................................................ C-11 Indices de miscibilité (indices M).................................................................. C-12

Stabilisants pour solvant ............................................................................. C-13

Viscosité du solvant ....................................................................................... C-13

Sélection de la longueur d'onde ................................................................. C-13 Limites d'absorbance UV des solvants courants .......................................... C-14 Phases mobiles mélangées ............................................................................ C-14 Absorbance de la phase mobile ..................................................................... C-16

xii Table des matières

1 Système ACQUITY UPLC H-Class

Waters a conçu le système ACQUITY UPLC® H-Class pour réaliser des analyses UPLC® et HPLC sur un même appareil. Les caractéristiques matérielles et logicielles du système facilitent le passage d'un type de chromatographie à l'autre et le développement de nouvelles méthodes.

Table des matières :

Rubrique PageChromatographie liquide UltraPerformance (UPLC) 1-2

Caractéristiques du système ACQUITY UPLC H-Class 1-4

Composants du système 1-8

1-1

Chromatographie liquide UltraPerformance (UPLC)

En 2004, Waters a réalisé une percée majeure en instrumentation et conception de colonne en introduisant la technologie UPLC dans le domaine de la séparation analytique. Cette technologie augmente la résolution, la vitesse et la sensibilité de nos systèmes de chromatographie liquide ACQUITY UPLC par rapport aux appareillages classiques.

Les colonnes pour chromatographie liquide UltraPerformance sont garnies de particules sphériques de 1,7 μm de diamètre et fonctionnent à des pressions pouvant atteindre 15 000 psi. La formule empirique de van Deemter décrit la relation entre la vitesse linéaire et l'efficacité de la colonne. La taille des particules est l'une des variables. Cette équation peut servir à caractériser les performances théoriques sur une plage de tailles de particules.

Historique des tailles de particules en chromatographie liquide :

Technologie HPLC existante

Particules de 10 µm(années 1970)

Particules de 5 µm (années 1980)

Particules de 2,5 µm (années 2000) Particules de 1,7 µm

(année 2004)

Plage de functionnementde la technologie UPLCTM

Vitesse linéaire [U, mm/sec]

La meilleure combinasion de vitesse et d’efficacité

1-2 Système ACQUITY UPLC H-Class

La figure ci-dessus montre qu'une plus grande efficacité est atteinte avec les particules de 1,7 μm. Cette efficacité se conserve avec l'augmentation du débit, une hauteur équivalente à un plateau théorique (HETP) faible correspondant à une efficacité élevée. Dans cette zone du graphique, le nombre maximal de pics détectés et la vitesse de séparation peuvent limiter l'analyse au-delà des capacités de la HPLC classique. Nous avons appelé ce nouveau seuil de performances la chromatographie UltraPerformance.

Comparaison de séparations chromatographiques avec des particules de 5,0 μm et de 1,7 μm :

Toutes les séparations utilisent une colonne 2,1 x 50 mm. Les conditions chromatographiques des séparations sont identiques à l'exception du débit, qui dépend de la taille des particules.

Colonne HPLC 5 µm

Colonne UPLC 1,7 µm

Chromatographie liquide UltraPerformance (UPLC) 1-3

Caractéristiques du système ACQUITY UPLC H-Class

Le système ACQUITY UPLC H-Class dispose de la vitesse et des performances de l'UPLC, tout en conservant la possibilité d'effectuer des séparations HPLC. Cette association offre entre autres les avantages suivants :

• Chromatographie haute pression sur petites particules pour des analyses plus rapides et à résolution plus élevée que la HPLC classique

• Faible consommation de solvant, significativement moindre qu'en HPLC classique

• Flexibilité de la combinaison de solvants grâce au Gestionnaire de solvant quaternaire

• Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille pour faciliter l'adaptation des méthodes de l'HPLC à l'UPLC

• Améliorations de la pompe et du Gestionnaire d'échantillons, pour minimiser la dispersion et réduire la durée des cycles

• Gestionnaire de colonne polyvalent, proposé en option pour faciliter le développement des méthodes.

Injecteur à débit via aiguilleLe Gestionnaire d'échantillons du système ACQUITY UPLC H-Class comporte un mécanisme de débit via aiguille qui diffère radicalement de l'injecteur à boucle du système ACQUITY UPLC. Le mécanisme de débit via aiguille aspire l'échantillon et le conserve dans l'aiguille de prélèvement jusqu'à l'injection sur la colonne. L'aiguille s'intègre au circuit fluidique d'injection lorsque l'échantillon est introduit dans la colonne.

Grâce à ce mécanisme, le système fonctionne de la même façon que la plupart des HPLC classiques, ce qui facilite le transfert des méthodes HPLC. Le débit via aiguille évite également aux utilisateurs d'avoir à se familiariser avec d'autres modes d'injection. Il améliore l'exactitude des injections et réduit la durée des cycles lors de l'injection de faibles volumes. Les gradients traversent l'aiguille pendant l'injection, ce qui garantit une récupération totale du solvant.


Solvant de lavageLe système de lavage utilise le même solvant pour son armorçage et pour le nettoyage de l'extérieur de l'aiguille de prélèvement de l'échantillon. Le solvant ne pénètre jamais dans le circuit fluidique d'injection.

Solvant de purgeLa fonction première du solvant de purge est de pousser l'échantillon dans le circuit d'injection. Le solvant de purge amorce également la seringue de prélèvement de l'échantillon et le circuit d'injection. Il est injecté sur la colonne uniquement en mode Auto-Dilution, lorsqu'il est utilisé comme solvant de dilution.

Conditionnement actif du solvantLe chauffage de la phase mobile avant l'entrée dans la colonne améliore les séparations HPLC et UPLC. Le four pour colonne ACQUITY UPLC H-Class conditionne le solvant à son entrée dans la colonne au moyen d'un préchauffeur actif. Le préchauffeur est une source de chaleur qui augmente la température de la phase mobile entrante, et donc de l'échantillon injecté, jusqu'au point de consigne du compartiment de la colonne.

Précision : le préchauffeur actif est installé par défaut sur le système ACQUITY UPLC H-Class. Un stabilisateur de colonne passif est disponible en option pour les méthodes chromatographiques existantes inadaptées au préchauffeur actif.

Améliorations logicielles

Quantum Synchronization

L'injection d'un échantillon à basse pression dans le circuit fluidique haute pression provoque un saut de pression susceptible d'affecter les résultats chromatographiques. L'application Quantum Synchronization réduit l'effet de ce saut de pression. Le Gestionnaire d'échantillons et le Gestionnaire de solvant communiquent pour coordonner automatiquement la séquence d'injection. Au moment précis où le Gestionnaire d'échantillons bascule sa vanne d'injection en position d'injection pour introduire l'échantillon basse pression, le Gestionnaire de solvant fournit une pression supplémentaire.


Gradient Smart Start

En général, avant chaque injection d'échantillon, le Gestionnaire d'échantillons exécute des séquences de lavage et aspire le volume d'échantillon adapté. Une fois ces opérations terminées, le Gestionnaire de solvant introduit le gradient dans la vanne d'injection. Le volume de temporisation du système influe sur la durée que met le gradient à atteindre la colonne. Il peut constituer une partie importante de la durée totale d'un cycle.

L'application Gradient Smart Start coordonne les opérations avant injection et réduit l'effet du volume de retard du Gestionnaire d'échantillon sur la durée des cycles. Le gradient démarre avant ou durant les fonctions pré-injection du Gestionnaire d'échantillons, ce qui accélère la procédure.

« Wash Plungers » (Laver les pistons)

Les matières précipitées qui s'accumulent sur les pistons de la pompe du Gestionnaire de solvant peuvent endommager les joints haute pression. La fonction Wash Plungers (Laver les pistons) lave les joints au solvant pour éliminer toute matière précipitée. La fonction Wash Plungers (Laver les pistons) peut être utilisée indépendamment ou intégrée à la procédure No-Flow Shutdown (Arrêt sans débit).

« No-Flow Shutdown » (Arrêt sans débit)

La procédure No-Flow Shutdown (Arrêt sans débit) exécute la fonction Wash Plungers (Laver les pistons) si le Gestionnaire de solvant reste au repos pendant un intervalle de temps défini. Elle empêche le dépôt de matières précipitées sur les pistons de la pompe lorsque le système est au repos.

« Automatic Prime » (Amorçage automatique)

Lorsque cette fonction du Gestionnaire de solvant est activée, le système amorce les lignes de la vanne de sélection de solvant en option lorsqu'un nouveau solvant est sélectionné. Vous pouvez préciser le débit et la durée de l'amorçage de la ligne du nouveau solvant.

Par exemple : lorsqu'une première injection utilise la ligne D1 et qu'une seconde injection utilise la ligne D2, le Gestionnaire de solvant amorce la ligne D2 entre la première et la seconde injection.


« Flow Ramping » (Augmentation progressive du débit)

Cette fonction permet de définir la vitesse d'augmentation ou de diminution du débit par le Gestionnaire de solvant.

« Auto•Blend Plus »

Cette fonction permet de générer automatiquement des profils de gradient fondés sur des informations définies par l'utilisateur concernant le pH, la concentration d'acides et de bases et la concentration en sels (et non sur des compositions de solvant définies dans l'éditeur de méthodes).


Composants du système

Modules (instruments) :

Le système ACQUITY UPLC H-Class de base se compose d’un Gestionnaire de solvant quaternaire, d’un Gestionnaire d’échantillons à débit via aiguille, d’un four pour colonne, de détecteurs ultraviolet réglable, à barrette de diodes, évaporatif à diffusion de lumière, fluorescent ou à spectrométrie de masse et d’une colonne ACQUITY UPLC.

Le système ACQUITY UPLC H-Class est piloté par le logiciel de chromatogra-phie Waters® Empower™ ou par le logiciel de spectrométrie de masse Mass-Lynx™.

AVANT ARRIÈRE

Bac à solvants

Détecteur

Four pour colonne

Gestionnaire d'échantillons - débit via aiguille, ou SM-FTN

Gestionnaire de solvant quaternaire



Le Gestionnaire de solvant quaternaire combine un mélangeur basse pression et une pompe haute pression. Il délivre un flux de solvant stable et sans pics à des débits analytiques pouvant atteindre 1 mL/min à 103 421 kPa, soit 1034 bar ou 15 000 psi, et 2 mL/min à des pressions réduites jusqu'à 62 053 kPa, soit 621 bar ou 9000 psi. Le Gestionnaire de solvant quaternaire peut pomper quatre solvants dégazés simultanément grâce à une vanne proportionnante ou GPV, créant ainsi en temps réel la composition demandée.


Le Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille, ou SM-FTN, comporte un mécanisme d'injection directe qui injecte les échantillons de plaques et de flacons sur la colonne chromatographique. Des boucles d'extension en option, placées entre l'aiguille de prélèvement de l'échantillon et la vanne d'injection, permettent d'augmenter le volume d'injection. Le mécanisme de débit via aiguille du Gestionnaire d'échantillons permet également de diluer des échantillons grâce à l'option Auto-Dilution.

Four pour colonne

Les variations de température des colonnes peuvent modifier les temps de rétention et la forme des pics, rendant difficile l'obtention de résultats précis. Le four pour colonne du système ACQUITY UPLC H-Class garantit des séparations précises et reproductibles en régulant la température de la colonne.

Le four pour colonne est capable de chauffer le compartiment de la colonne de 20 ºC à 90 ºC, c'est-à-dire au moins 5 ºC au-dessus de la température ambiante. Un dispositif de préchauffage actif chauffe le solvant avant son entrée dans la colonne. Le compartiment de la colonne est conçu pour des colonnes de 2,1 à 4,6 mm de diamètre intérieur et de 50 à 150 mm de longueur.

Précision : le préchauffeur actif est installé par défaut sur le système ACQUITY UPLC H-Class. Un stabilisateur de colonne passif est disponible en option pour les méthodes chromatographiques existantes inadaptées au préchauffeur actif.


Gestionnaire de colonne, disponible en optionLe Gestionnaire de colonne ACQUITY UPLC H-Class, proposé en option, permet d'obtenir des séparations fidèles et reproductibles. Il régule la température des colonnes entre 4 et 90 °C. Ses logements rectangulaires peuvent accueillir des colonnes de 2,1 à 4,6 mm de diamètre intérieur et de 50 à 150 mm de longueur, selon la configuration. Chacun des deux logements rectangulaires peut conditionner une colonne de 15 cm, avec filtre, ou deux colonnes de 50 mm, sans filtres.

Le Gestionnaire de colonne offre également un canal de contournement et une fonction de basculement automatique programmable entre colonnes, destinée au développement de méthodes.

En plus de l'unité de base, le Gestionnaire de colonne peut être configuré pour fonctionner avec un ou deux réchauffeurs/refroidisseurs de colonne. Les réchauffeurs/refroidisseurs sont commandés par le Gestionnaire de colonne. Ils fonctionnent sur la même plage de température. Chacun des deux logements rectangulaires pour colonne des réchauffeurs/refroidisseurs peuvent accueillir une colonne de 2,1 mm à 4,6 mm de diamètre intérieur et de 50 à 150 mm de longueur. Les deux logements peuvent être chauffés et refroidis séparément.

Remarque : un système comprenant un Gestionnaire de colonne principal, et aucun réchauffeur/refroidisseur supplémentaire, peut accueillir quatre colonnes de 50 mm au maximum ; un système avec un Gestionnaire de colonne principal et un réchauffeur/refroidisseur peut accueillir quatre colonnes au maximum ; et enfin un système avec un Gestionnaire de colonne principal et deux réchauffeur/refroidisseur peut accueillir six colonnes au maximum, dont deux dans l'unité principale.

Console de commande locale, en optionLa console de commande locale ACQUITY UPLC, ou LCC pour Local Console Controller, complète les logiciels de gestion de données chromatographiques. Cette console permet de piloter localement les systèmes. Dotée d'un simple clavier et de fonctions minimales, la LCC ne peut pas être utilisée comme système de commande autonome. Son installation dans un système ne remplace pas le pilotage par le logiciel de gestion de données chomatographiques. Waters a plutôt conçu la console LCC pour préparer les différents modules du système avant utilisation, définir les conditions initiales et exécuter les tests de diagnostic du système ACQUITY UPLC. Ces fonctions de base s'exécutent ainsi rapidement, même lorsque le système est à distance de la station de travail de pilotage et d'acquisition ou du module LAC/E™32, ou que le système ne peut pas être commandé via le réseau.


FlexCartLe chariot FlexCart, disponible en option, constitue une plate-forme mobile pour le système ACQUITY UPLC H-Class. Il peut contenir les instruments du système ainsi que le PC et l'écran. Il est doté de prises électriques pour les modules du système et d’un dispositif intégré de gestion des déchets. Utilisé avec un spectromètre de masse, le chariot permet, grâce à sa hauteur réglable, de positionner la sortie de la colonne à proximité de la sonde d'introduction, minimisant ainsi les volumes morts.

Technologie de colonneLes colonnes ACQUITY UPLC sont garnies de particules hybrides d'éthylsiloxane pontées de 1,7 μm ou de particules de silice haute résistance de 1,8 μm offrant une résistance mécanique aux hautes pressions. Le matériau de la colonne et les tuyaux de sortie correspondants peuvent supporter jusqu'à 103 421 kPa, soit 1034 bar ou 15 000 psi. Les dimensions de la colonne permettent des débits optimaux parfaitement adaptés aux applications MS. L'effet du volume en aval de la colonne est minimisé par les tuyaux de sortie spéciaux.

Bien que l'appareil fonctionne avec n’importe quelle colonne HPLC, les colonnes ACQUITY UPLC spécialement conçues permettent de profiter au maximum des aptitudes du système à travailler à de très hautes pressions. Comparées aux colonnes chromatographiques classiques, les colonnes ACQUITY UPLC fournissent une meilleure résolution et une sensibilité accrue pour une durée d’analyse égale, ou une résolution équivalente pour une sensibilité plus élevée et des temps d’analyse réduits.

Technologie eCordLes colonnes ACQUITY UPLC sont dotées d’une puce de colonne appelée eCord™, qui sauvegarde l’historique de la colonne. La puce de colonne eCord interagit avec le logiciel du système, enregistrant les informations concernant jusqu’à 50 queues d'échantillons analysés sur la colonne. Dans des environnements soumis à réglementation, la puce de colonne eCord fournit des renseignements sur la colonne utilisée pour la validation de la méthode.

En plus des informations sur les différentes utilisations de la colonne, la puce de colonne eCord contient les données de fabrication de la colonne, y compris :

• Identification propre à la colonne

• Certificat d’analyse

• Résultats des tests de contrôle qualité


Une fois la puce de colonne eCord branchée sur son port d'accueil sur le four pour colonne ou le Gestionnaire de colonne, les informations sont automatiquement enregistrées par le système. L’utilisateur n'a pas à intervenir. Ces données sont conservées uniquement sur la puce de colonne eCord.

Détecteurs

Les systèmes chimiques de faible granulométrie utilisés par la chromatographie du système UPLC génèrent des pics très étroits. Les détecteurs ACQUITY® TUV, PDA, ELS et FLR et les spectromètres de masse SQ et TQ collectent les données suffisamment rapidement pour obtenir des pics bien définis sans affecter la sensibilité ni l'exactitude de la mesure. Ces détecteurs spécialement conçus pour le système emploient un volume inférieur de cuve de circulation, des tubulures de volume minimal et des raccords spéciaux pour maîtriser l'étalement des pics et conserver l'étroitesse qui les caractérise.

Pour plus d’informationsLe CD de documentation accompagnant le système comporte les documents suivants, qui donnent des informations supplémentaires sur le système ACQUITY UPLC H-Class :

• Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire de solvant quaternaire ACQUITY UPLC H-Class

• Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille ACQUITY UPLC H-Class

• Informations d'utilisation et de maintenance des compartiments à colonne ACQUITY UPLC H-Class

• Caractéristiques techniques du système

Pour plus d'informations et pour rejoindre la communité virtuelle ACQUITY UPLC, rendez-vous sur waters.com. Vous pourrez :

• Partager des informations, discuter et poser des questions à nos experts ACQUITY UPLC et nos scientifiques

• Télécharger les publications ACQUITY UPLC et accéder aux retours d'utilisateurs du monde entier

• Obtenir des astuces, des didacticiels et des FAQ exclusifs

• Découvrir les dernières applications et informations sur ACQUITY UPLC.


2 Optimisation des performances

Les conseils et recommandations de ce chapitre vous aideront à optimiser les performances de votre système ACQUITY.


Rubrique PageRecommandations générales 2-2

Dispersion 2-4

Contamination inter-échantillons 2-4

Reproductibilité 2-5

Durées des cycles entre injections 2-5

Prévention des fuites 2-6

Préparation des échantillons 2-6

Transfert des méthodes 2-7

Développement de méthodes 2-12

2-1

Recommandations générales

Les recommandations relatives au système ACQUITY UPLC H-Class sont différentes de celles qui concernent les systèmes HPLC classiques, principalement du fait des contraintes imposées au système par la chromatographie sur petites particules, de taille inférieure à 2 μm. La chromatographie UPLC est une séparation à échelle beaucoup plus petite et à résolution plus élevée. La durée d'analyse est en outre plus courte en UPLC, et les consommations de solvants et d'échantillons sont significativement réduites.

Le chromatographe ACQUITY UPLC H-Class exige un fonctionnement optimal du Gestionnaire d'échantillons. La dispersion d'échantillons est plus critique sur les petites colonnes. La réduction de la durée d'analyse chromatographique oblige également à une gestion efficace de la durée des cycles.

Lors d'analyses UPLC rapides, il est possible que la largeur d’un des pics observés soit inférieure à une demi-seconde. Waters recommande un taux d’échantillonnage de 25 à 50 points sur la largeur du pic pour obtenir des dosages et une représentation des pics corrects. Les taux d’échantillonnage supérieurs à 20 points par seconde génèrent davantage de bruit sur la ligne de base et nécessitent un ajustement en conséquence des constantes de temps de filtrage. Le débit ACQUITY UPLC idéal diffère de celui d’une colonne HPLC classique. Le tableau ci-dessous répertorie les recommandations relatives à l’utilisation des colonnes ACQUITY UPLC pour les analyses isocratiques et par gradient. Notez que les valeurs répertoriées sont données à titre indicatif uniquement : la séparation optimale peut avoir lieu à une pression et/ou un débit différents.

Débits idéaux pour la plage de masses moléculaires :

Taille de la colonne Masse moléculaire Débit2,1 × 50 mm <500 600 μL/min

2,1 × 50 mm 1000 300 μL/min

2,1 × 50 mm 1500 150 μL/min

2,1 × 50 mm 2000 100 μL/min

2-2 Optimisation des performances

Suivez les recommandations générales ci-après lors d'une analyse UPLC :

• Utilisez des solvants, tampons et additifs de haute qualité, HPLC ou MS.

• Utilisez de l'eau de haute qualité, HPLC ou MS.

• Utilisez toujours des filtres à solvant sur les tubulures plongeant dans les flacons de solvant.

• Filtrez les tampons sur une membrane de 0,2 μm.

• Conservez des solutions mères concentrées pour préparer vos solutions de travail.

• Ne complétez pas le volume des tampons usagés avec de la solution fraîche, pour éviter toute croissance microbienne.

• N'obstruez pas la ligne d'évacuation du dégazeur. Recoupez-la si nécessaire.

• Ne noyez pas les lignes d'évacuation des déchets et du dégazeur. Consultez le document Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire de solvant quaternaire ACQUITY UPLC H-Class pour plus de détails sur le déploiement des tubulures.

• Amorcez toutes les lignes de solvant et gardez-les amorcées.

• Éliminez les tampons du système, en les purgeant avec de l'eau immédiatement après leur utilisation.

• Ajoutez 10 à 20 % de solvant organique dans l'eau pour la conserver si le système reste au repos pendant une période prolongée, c'est-à-dire supérieure à 24 heures.

• Amorcez la ligne de lavage des joints et gardez-la amorcée.

• Amorcez les lignes de solvant pendant le démarrage du système.

• Vérifiez que le niveau de déchets n'est pas trop élevé.

• Démarrez vos gradients en incluant une proportion de solvant organique, par exemple 0,1 %, pour une formation de gradient plus fiable et prévisible que dans le cas d'une proportion de 0 % au démarrage.

• Utilisez l'option Load Ahead (Pré-charge) si vous souhaitez raccourcir la durée des cycles.

Recommandations générales 2-3

• N'utilisez pas l'option Load Ahead (Pré-charge) ou Loop Offline (Boucle hors ligne) si vous dépannez des problèmes de contamination inter-échantillons.

• Lors de l'installation ou du démontage d'une colonne, maintenez toujours en place le raccord de compression réutilisable du préchauffeur actif. Faites tourner la colonne ou le filtre intégré en option pour installer ou démonter la colonne.

Dispersion

La dispersion des systèmes et des passeurs d'échantillons UPLC est faible. C'est une caractéristique fixée pour chaque instrument, mesurée d'après l'élargissement des pics, spécifique à chaque système.

La chromatographie à faible granulométrie utilise des colonnes courtes d'efficacité élevée. Le volume d'une colonne UPLC 2,1 x 50 mm typique est d'environ 174 μL, à comparer aux 2,5 mL d'une colonne HPLC classique de 4,6 x 150 mm. La taille inférieure des colonnes et des particules nécessite un système de faible dispersion pour réduire la dilution et l'élargissement de la bande. Le système permet ainsi de conserver la forme et la taille des pics ainsi que la sensibilité obtenues sur une colonne d'efficacité élevée.

Un système ACQUITY UPLC H-Class présente en général un étalement des pics entre 10 et 12 μL. La valeur dépend de la configuration de votre système. L'étalement des pics d'un système HPLC Alliance peut être compris entre 35 μL et 50 μL. Du fait des différences de dispersion, une bande d'un système Alliance présente une dilution trois fois plus élevée qu'un système ACQUITY UPLC H-Class. Il en résulte que les concentrations des pics UPLC sont supérieures à celles des pics HPLC. Les effets de solubilité sont plus évidents dans les systèmes à faible dispersion et à haute pression. Il est donc primordial de régler correctement la charge de la colonne.

Contamination inter-échantillons

Une contamination inter-échantillons se produit dans un système chromatographique lorsque le pic d'un analyte précédemment injecté apparaît sur le chromatogramme d'échantillons ultérieurs. La contamination inter-échantillons se produit généralement lorsqu'une faible quantité d'analyte reste dans le système après injection. Elle se mesure en observant les pics d'analyte qui apparaissent lorsque vous lancez une analyse de blanc immédiatement après un échantillon analytique. La contamination inter-échantillons mesurée par Waters est inférieure à 0,004 % sur le système ACQUITY UPLC H-Class. Consultez les Caractéristiques techniques du système ACQUITY UPLC H-Class pour plus de détails.


L'une des causes fréquentes de contamination inter-échantillons est un lavage incomplet du système. Le choix du bon solvant de lavage pour une analyse spécifique permet de minimiser la contamination inter-échantillons. Le solvant de lavage doit être suffisamment fort pour dissoudre les éventuelles traces d'échantillon restantes. La durée de lavage doit être suffisante pour éliminer le résidu du système.

Les conditions des méthodes affectent également la contamination inter-échantillons. Tous les analytes ne seront pas éliminés du système si la durée de maintien des conditions finales du gradient est trop courte, en particulier si la pente du gradient est forte. Purgez entièrement le système et rééquilibrez la colonne avant de passer à l'analyse suivante. Sélectionnez avec discernement les options Load-Ahead (Pré-charge) et Loop-Offline (Boucle hors ligne). En cas d'activation de ces options avant que la partie du gradient à forte teneur organique n'atteigne l'aiguille, des résidus d'échantillon peuvent demeurer dans le système. Le temps gagné peut finalement être perdu en raison de la propreté insuffisante du système.

L'hydrophobicité et la solubilité de vos échantillons, ainsi que le soin apporté à la préparation des échantillons et la propreté du matériel utilisé pendant la préparation, sont autant de facteurs supplémentaires de minimisation de la contamination inter-échantillons.

Reproductibilité

La fidélité, ou reproductibilité des aires, du Gestionnaire d'échantillons SM-FTN se traduit par un coefficient de variation inférieur à 0,5 % pour des volumes d'injection compris entre 2,0 et 10,0 μL. Consultez les Caractéristiques techniques du système ACQUITY UPLC H-Class pour plus de détails.

Durées des cycles entre injections

La faible durée d'analyse des séparations UPLC nécessite une exploitation efficace du temps qui sépare deux analyses.

Le Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille est doté de l'option Load-Ahead (Pré-charge), qui diminue la durée des cycles en signalant au Gestionnaire d'échantillons d'aspirer l'échantillon suivant en cours d'analyse.

Reproductibilité 2-5

L'option Loop Offline (Boucle hors ligne) du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille réduit l'influence du volume de retard sur la durée des cycles. Cette option permet de mettre hors-circuit l'aiguille et la boucle d'extension, avant que le gradient n'atteigne la vanne d'injection et après le transfert de l'échantillon au port d'injection.

Le réglage de la vitesse de prélèvement de la seringue permet également de réduire la durée des cycles. Par défaut, le système optimise la vitesse de prélèvement de la seringue à partir des informations renvoyées par un transducteur de pression, pour obtenir un débit et des performances maximum.

Prévention des fuites

Prévenir les fuites est essentiel pour conserver la pression du système et l'intégrité de l'échantillon pendant l'analyse.

Tout raccord de tubulure, ou joint dans une moindre mesure, peut être source de fuite. Les fuites côté basse pression, comme dans le système d'admission de la pompe du Gestionnaire de solvant, entraînent des pertes de solvant et des entrées d'air lors du cycle d'admission. Les fuites des raccords haute pression, en aval des soupapes d'admission « intelligentes », entraînent essentiellement des pertes de solvants et non des entrées d'air.

Pour prévenir les fuites, respectez nos recommandations de serrage des raccords du système. Ces recommandations ne sont pas les mêmes dans le cas du serrage d'un raccord neuf ou d'un raccord déjà utilisé.

Préparation des échantillons

L'analyse UPLC pose des conditions supplémentaires de préparation des échantillons.

ParticulesDu fait de sa petite taille, 0,2 μm, le fritté de la colonne s'obstrue plus facilement que les frittés des colonnes HPLC de 2,0 μm. En analyse UPLC, il faut donc utiliser des solvants de phase mobile et des solutions d'échantillon sans aucune particule. Consultez « Recommandations générales », page 2-2 pour les recommandations sur le choix et la manipulation des solvants.


Choix du diluant d'échantillonDans l'option Auto-Dilution du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille, le solvant de purge est utilisé comme diluant d'échantillon. Vérifiez que votre solution d'échantillon est soluble et miscible dans le solvant de purge choisi.

Transfert des méthodes

Il peut parfois s'avérer nécessaire de transférer une méthode LC d'un système à un autre. L'objectif dans ce cas est de maintenir les performances de la séparation, ou de les augmenter en réduisant la durée d'analyse ou en améliorant la sélectivité et/ou la résolution. Spécialement conçu par Waters pour faciliter le transfert des méthodes, le système ACQUITY UPLC H-Class est l'outil idéal pour cela, avec son Gestionnaire de solvant quaternaire, son mélangeur haute pression et son injecteur à débit via aiguille. Le Gestionnaire de colonne, proposé en option, facilite la permutation des colonnes tout en empêchant l'élargissement des pics et en maintenant le même profil de température que le four pour colonne standard.

L'exemple de transfert de méthode suivant concerne l’essai des substances apparentées pour la galantamine, un alcaloïde utilisé pour le traitement de la maladie d’Alzheimer. La méthode USP (monographie : USP32-NF27, supplément : n° 2, page 4245) est tout d'abord présentée sur un système HPLC. Elle est ensuite transférée sur un système ACQUITY UPLC H-Class équipé d'une colonne HPLC, qui permet de conserver la sélectivité et la résolution. Puis, avec le convertisseur de colonnes ACQUITY UPLC, la méthode est mise à l'échelle de l'UPLC et optimisée pour obtenir le temps d'analyse le plus court possible, à capacité de pics égale. Le temps d'analyse est réduit de 46 minutes.


Transfert d'une méthode de l'HPLC à l'UPLC :


Lors du transfert d'une méthode d'un système à un autre, il est essentiel de définir et de caractériser parfaitement la méthode d'origine. Notez soigneusement les dimensions des colonnes, les volumes de retard, les configurations, les volumes d'injection, les masses moléculaires des analytes et les profils de gradient. La réussite du transfert dépend du calcul de différents paramètres sur les deux systèmes, avec la même méthode. Le convertisseur Waters ACQUITY UPLC Columns Calculator garantit les meilleurs résultats lors du transfert d'une méthode LC d'un système HPLC à un système UPLC, et inversement.

Le convertisseur s'installe depuis le CD de pilotes du système ACQUITY UPLC ou le CD Method Assistance Kit (Kit d'assistance pour les méthodes). Une icône correspondant au convertisseur pour colonnes ACQUITY UPLC s'affiche sur le bureau de votre ordinateur après installation.

Le convertisseur ACQUITY UPLC Columns Calculator effectue les tâches suivantes :

• Automatisation des calculs d'échelle nécessaires pour convertit les méthodes isocratiques ou avec gradient, et intégration des données nécessaires.

• Prise en compte de la différence entre les systèmes à mélanges binaires ou quaternaires.

• Estimation du nombre de plateaux théoriques d'une séparation isocratique ou de la capacité en pics (Pc) d'un séparation avec gradient, en fonction des conditions de la méthode transférée et des dimensions de colonne.

• Prise en compte de débits personnalisés dans la section des résultats, puis re-calcul du gradient cible selon le débit souhaité. Pour de meilleurs résultats, utilisez l'option consistant à calculer le débit en fonction de la taille des particules des nouvelles conditions LC.

• Calcul du nouveau volume d'injection, permettant de conserver la charge massique et volumique sur la colonne.

Ces options donnent la souplesse et les informations supplémentaires nécessaires pour réussir le transfert des méthodes.

Consultez également : la documentation du convertisseur pour colonnes ACQUITY UPLC et l'aide en ligne de la console ACQUITY pour plus de détails.


Détermination du volume de retardLe transfert d'une méthode LC avec gradient implique de calculer le volume de retard pour les deux systèmes. Le volume de retard représente le volume système entre le point de formation du gradient et l'entrée de la colonne. Il varie d'un système à l'autre mais se situe généralement entre 0,1 et 5,0 mL.

Le volume de retard peut être mesuré en utilisant le milieu d'un gradient de 0 à 100 %. Pour cela, lancez un gradient entre deux solvants A et B identiques, le solvant B étant différencié au moyen d'un marqueur. Effectuez la mesure après avoir configuré le système sans la colonne pour la méthode à transférer. Remplacez la colonne par un restricteur de faible volume, pour que la pompe continuer de fonctionner normalement.

Consultez également : la rubrique Mesure du volume système lors d'un transfert de méthode dans l'aide en ligne de la console ACQUITY.

Transfert de l'HPLC à l'UPLC

Respectez les recommandations suivantes pour conserver un profil chromatographique d'un système à l'autre :

• Prenez en compte la différence entre les volumes de retard des deux systèmes. Le convertisseur détermine le nombre de volumes de colonne du gradient à partir de cette différence, puis il conserve ce nombre lors de chaque étape. Le convertisseur ajuste automatiquement la durée du gradient en fonction de la différence de volume.

• Le volume avant injection, spécifié dans la méthode d'instrument, permet de faire démarrer le gradient avant le déclenchement de l'injection. Utilisez un volume avant injection pour conserver constant le rapport des volumes de retard des deux systèmes.

Volume avant injection = {[Volume de retard_Système 1(mL) - Volume de retard_Système 2(mL)] × Volume_Colonne 2(mL)}/Volume_Colonne 1(mL)

• Lorsque le volume du système cible est inférieur, prévoyez une période de maintien isocratique pour prendre en compte la différence entre les volumes de retard.


• Le préchauffeur actif est installé par défaut sur le système ACQUITY UPLC H-Class. Un stabilisateur de colonne passif est disponible en option pour les méthodes chromatographiques existantes inadaptées au préchauffeur actif.

• Sélectionnez la colonne présentant la sélectivité la plus proche dans le tableau Waters Reversed Phase Column Selectivity Chart (Sélectivité des colonnes en phase inverse Waters). Téléchargez ce tableau depuis le site Internet de Waters ou double-cliquez sur le raccourci sur votre bureau. Les colonnes Waters sont mises en évidence (points blancs plus grands).

• Lors de l'évaluation initiale, conservez des conditions aussi semblables que possible. Vous optimiserez ultérieurement la séparation.

• Avec le programme Waters Prep Calculator, référence 720001457, déterminez la charge massique, le volume d'injection, le débit et le volume de la colonne.

• Deux options supplémentaires sont proposées dans la partie des résultats du convertisseur de colonnes ACQUITY UPLC :

– Conserver la capacité de pics de la méthode d'origine

– Conserver la durée d'analyse de la méthode d'origine

Ces options permettent de disposer de plus de souplesse et d'informations lors du processus de transfert de méthode.

Consultez également : la rubrique Transfert des méthodes dans l'aide en ligne de la console ACQUITY.

Transfert de l'UPLC à l'HPLC

Respectez les principes suivants pour conserver l'intégrité d'une séparation chromatographique :

• Le rapport de la longueur de la colonne sur le diamètre des particules, L/dp, qui donne le pouvoir de résolution, doit être conservé.

• Dans le cas d'un gradient, le nombre de volumes de colonne à chaque étape du gradient doit être le même, pour conserver le pouvoir de séparation.

• Lors du passage à un système de moindre volume, calculez les volumes appropriés de maintien du gradient aux conditions initiales. Le convertisseur ajoute automatiquement le maintien du gradient au tableau du gradient lorsque cette option est sélectionnée.


Volume de maintien du gradient = {[Volume de retard_Système 1(mL) - Volume de retard_Système 2(mL)] × Volume_Colonne 2(mL)}/[Volume_Colonne 1(mL) × Débit_Colonne 2(mL/min)]

Une fois les informations saisies, le convertisseur affiche les conditions de la nouvelle méthode. Il affiche éventuellement d'autres dimensions relatives à la colonne cible. Le convertisseur affiche automatiquement le rapport L/dp de la colonne de départ et de la colonne cible.

Le volume de retard des systèmes ACQUITY UPLC H-Class étant bien plus faible que celui des systèmes HPLC classiques, un temps de maintien du gradient est souvent nécessaire.

Des chimies de colonne similaires sont proposées pour les colonnes UPLC et HPLC, ce qui simplifie leur choix et le transfert des méthodes d'un système ACQUITY UPLC H-Class vers un système analytique HPLC ordinaire.

Notez enfin que les conditions proposées par le convertisseur sont un simple point de départ. Elles peuvent être optimisées selon les caractéristiques de votre séparation.

Consultez également : la rubrique Transfert des méthodes dans l'aide en ligne de la console ACQUITY.

Développement de méthodes

Consultez également : le document A Guide to Systematic Method Development and Validation (Guide pour le développement et la validation systématiques des méthodes), fourni sur le CD de documentation.

Pour un développement aisé et efficace de vos méthodes, nous vous recommandons l'utilisation du système ACQUITY UPLC H-Class avec Gestionnaire de colonne et fonctionnalité Auto•Blend Plus™.


3 Préparation du système


Rubrique PagePréparation du matériel du système 3-2

Configuration du logiciel de gestion des données chromatographiques 3-9

Panneaux de commande ACQUITY 3-9

Démarrage de l'application « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) 3-18

3-1

Préparation du matériel du système

Mise en marche du systèmeL'allumage du système inclut le démarrage de la station de travail du système ACQUITY UPLC H-Class, des instruments du système et le lancement du logiciel de chromatographie. Chaque module et instrument du système émet trois bips et exécute une série de tests de démarrage. Consultez « Voyants d'état », page 3-3 et « Voyant d'alimentation », page 3-3 pour plus d'informations sur les indications des voyants et leur signification en termes de débit et de fonctionnement des instruments.

Conseil : si votre système comprend un four pour colonne, celui-ci est automatiquement mis en marche au démarrage du Gestionnaire d'échantillons.

Pour mettre en marche le système :

1. Allumez la station de travail du système ACQUITY UPLC H-Class.

2. Allumez le Gestionnaire de solvant quaternaire et le Gestionnaire d'échantillons en appuyant sur le bouton Marche/Arrêt situé en haut à gauche de leurs portes respectives.

Consultez également : « Voyants d'état », page 3-3 et « Voyant d'alimentation », page 3-3 pour plus d'informations sur les indications des voyants et leur signification en termes de débit et de fonctionnement des instruments.

3. Lorsque les voyants d'alimentation respectifs du Gestionnaire de solvant quaternaire et du Gestionnaire d'échantillons sont allumés au vert fixe, allumez les détecteurs en appuyant sur le bouton Marche/Arrêt situé en haut, à gauche de chaque détecteur.

Conseil : pour éviter les erreurs d'initialisation, allumez les détecteurs uniquement lorsque la cuve de circulation est humidifiée.

4. Démarrez le logiciel de gestion des données chromatographiques.

Conseil : les messages et les indications des voyants s'affichent dans ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

3-2 Préparation du système

Suivi des tests de démarrageDes tests de démarrage s’exécutent lorsque vous allumez la station de travail du système ACQUITY UPLC H-Class. Ils portent sur les éléments suivants :

• La carte de l'unité centrale

• La mémoire (RAM et ROM)

• Le système de communication externe (Ethernet)

• L'horloge

Si les tests de démarrage indiquent une erreur, consultez l'aide en ligne de ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

Surveillance des voyants des modules du systèmeLes voyants qui se trouvent sur chacun des modules du système indiquent l'état de fonctionnement de l'instrument. Les voyants sont spécifiques à chaque instrument, la signification de leurs différentes couleurs et modes peut donc varier d’un instrument à l’autre.

Voyant d'alimentationLe voyant d'alimentation qui se trouve sur le côté gauche du panneau avant d'un instrument ou d'un module indique si ce dernier est allumé. Le voyant est allumé au vert lorsque l'instrument est sous tension ; il est éteint dans le cas contraire.

Conseil : pour assurer une ventilation adéquate, les ventilateurs du Gestionnaire d'échantillons fonctionnent en continu, même lorsque le bouton Marche/Arrêt est en position Arrêt. Les ventilateurs s'arrêtent uniquement lorsque le câble d'alimentation est débranché de l'arrière de l'instrument.

Voyants d'état

Voyant du débit (Gestionnaire de solvant quaternaire)

Le voyant du débit, placé à droite du voyant d'alimentation sur le panneau avant du Gestionnaire de solvant quaternaire, indique l'état du débit. Lorsqu'il est au vert fixe, ce voyant indique que du solvant circule dans le Gestionnaire de solvant quaternaire.

Préparation du matériel du système 3-3

Voyant d'analyse (Gestionnaire d'échantillons)

Le voyant d'analyse, placé à droite du voyant d'alimentation sur le panneau avant du Gestionnaire d'échantillons, indique l’état de l'analyse. Lorsqu'il est au vert fixe, ce voyant indique que des injections sont en cours d'analyse.

Voyant de la lampe (détecteur)

Le voyant de la lampe, placé à droite du voyant d'alimentation sur le panneau avant du détecteur, indique l'état de la lampe. Lorsqu'il est au vert fixe, ce voyant indique que la lampe est allumée.

Indications du voyant d'état :

Voyant DescriptionÉteint • Gestionnaire de solvant quaternaire et

Gestionnaire d'échantillons : indique que le dispositif est au repos.

• Détecteur : indique que la lampe du détecteur est éteinte.

Vert fixe • Gestionnaire de solvant quaternaire : indique que le Gestionnaire de solvant délivre un débit.

• Gestionnaire d'échantillons : indique que le Gestionnaire d'échantillons fonctionne normalement et qu'il tente de terminer des requêtes d'échantillons ou de diagnostic non traitées. Lorsque tous les échantillons ont été traités et les diagnostics exécutés, les voyants s’éteignent à nouveau.

• Détecteur : indique que la lampe du détecteur est allumée.

Vert clignotant • Gestionnaire de solvant quaternaire et Gestionnaire d'échantillons : indique que l'instrument est en cours d’initialisation.

• Détecteur : indique que le détecteur est en cours d’initialisation ou d'étalonnage.

Rouge clignotant Indique qu'une erreur a provoqué l'arrêt de l'instrument ou du dispositif. Consultez le message d'erreur affiché dans la fenêtre ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).


Activation des capteurs de fuiteRègle : lors de l'allumage du système, les capteurs de fuite sont par défaut désactivés s'ils n'ont jamais été activés auparavant.

Pour activer les capteurs de fuite :

1. Dans la fenêtre ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC), cliquez sur Control > Leak Sensors (Contrôler > Capteurs de fuite).

Boîte de dialogue « Leak Sensors » (Capteurs de fuite) :

2. Pour activer le capteur de fuite d'un élément, cliquez sur le statut indiqué à gauche de la description de l'élément.

Conseil : pour activer tous les capteurs de fuite, cliquez sur Enable All (Activer tous)

Rouge fixe Indique une erreur qui provoque une panne de l'instrument. Éteignez puis rallumez l’instrument. Si le voyant est toujours au rouge fixe, contactez un représentant de l'assistance technique de Waters.

Indications du voyant d'état : (suite)

Voyant Description

Cliquez pour activer ou désactiver les capteurs de fuite de chaque élément.

Cliquez pour activer ou désactiver les capteurs de fuite des instruments.


Démarrage du systèmeUtilisez la fonction Start Up System (Démarrer le système) pour amorcer le Gestionnaire de solvant quaternaire après avoir changé de phase mobile ou remplacé l'aiguille de prélèvement de l'échantillon, ou lorsque le système a été longtemps au repos, par exemple pendant toute une nuit. Avant de démarrer la procédure, vérifiez que le système est correctement configuré en vue de son utilisation.

Recommandation : amorcez le Gestionnaire de solvant quaternaire pendant au moins 5 minutes si vous remplacez les solvants présents dans le système par des solvants de composition différente.

Pour démarrer le système :

1. Dans la fenêtre ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC), cliquez sur Control > Start Up System (Contrôler > Démarrer le système).

2. Dans l'onglet Prime Solvent (Amorcer les solvants) de la boîte de dialogue System Startup (Démarrer le système), vérifiez les paramètres de la rubrique A/B/C/D Solvents (Solvants A/B/C/D) de la phase mobile.

Conseil : cochez ou décochez les solvants souhaités dans la rubrique A/B/C/D Solvents (Solvants A/B/C/D) : A, B, C, D. Vous pouvez modifier la durée d'amorçage des solvants A à D en saisissant une valeur différente dans le champ Duration of Prime (Durée de l'amorçage). La même durée d'amorçage s'applique à tous les solvants sélectionnés.

Conseil : cliquez sur Set Defaults (Rétablir les valeurs par défaut) pour rétablir si besoin les valeurs initiales des paramètres d'un onglet quelconque.

3. Sélectionnez ou désélectionnez l'amorçage du solvant de lavage des joints, du solvant de lavage et du solvant de purge.

Valeurs des paramètres d'amorçage :

Plage de valeurs De 0.1 à 60.0 minutes

Valeur par défaut La durée d'amorçage est de 2.0 minutes pour chaque solvant.

Recommandation Amorcez pendant 3 minutes, ou 7 minutes après un changement de solvants.


4. Si nécessaire, modifiez la durée d'amorçage du solvant de lavage des joints et du solvant de lavage, ainsi que le nombre de cycles d'amorçage du solvant de purge.

Valeur par défaut : la durée d'amorçage du solvant de lavage des joints est de 2.0 minutes, celle du solvant de lavage de 15 secondes. Le solvant de purge s'amorce pendant 5 cycles.

5. Sélectionnez l'onglet Equilibrate to Method (Équilibrer par rapport à la méthode) pour vérifier le réglage des paramètres du débit final, des phases mobiles, de la composition, de la température et de l'état de la lampe.

6. Modifiez si nécessaire les valeurs des paramètres de l'onglet Equilibrate to Method (Équilibrer par rapport à la méthode), pour répondre à vos exigences d'équilibrage.

Valeurs de l'onglet « Equilibrate to Method » (Équilibrer par rapport à la méthode) :

Paramètres de démarrage du système

Valeur par défaut Valeurs autorisées

Method initial flow rate (Débit initial de la méthode)

0.500 mL/min 0.1 à 2.0 mL/min

Composition of A, B, C, and D (Composition de A, B, C et D) - le total doit être de 100 %

A : 100 %B,C,D : 0 %

A : 0 à 100 %B : 0 à 100 %C : 0 à 100 %D : 0 à 100 %

Column temperature (Température de la colonne)

Off (Désactivé) Variable selon le type de compartiment à colonne

Sample temperature (Température de l'échantillon)

On (Activé) Off (Arrêt), ou 4.0 à 40.0 °C (39.2 à 104 °F)


7. Si vous avez remplacé l'aiguille de prélèvement de l'échantillon, cliquez sur Change (Changer).

8. Dans la boîte de dialogue Volume Configuration (Configuration du volume), sélectionnez la taille de la nouvelle aiguille puis cliquez sur OK.

9. Cliquez sur Start (Démarrer).

Résultat : la lampe du détecteur optique s'allume, le système ACQUITY UPLC H-Class règle les températures de la colonne et de l'échantillon et tous les amorçages démarrent. Une fois les amorçages terminés, si la fonction de caractérisation du joint d'étanchéité et de l'aiguille a été sélectionnée, le Gestionnaire d'échantillons exécute la fonction et enregistre les résultats dans la base de données. Enfin, le système établit le débit de la méthode, les solvants choisis et la composition.

Lamp (Lampe) On (Activé) On (Allumée) ou Off (Éteinte)Remarque : pour les cuves de circulation avec guide-lumière, la lampe du détecteur ne doit pas être mise sous tension, utilisée ou allumée lorsque la cuve est sèche ou qu'aucun liquide n'y circule.

Valeurs de l'onglet « Equilibrate to Method » (Équilibrer par rapport à la méthode) : (suite)

Paramètres de démarrage du système

Valeur par défaut Valeurs autorisées


Configuration du logiciel de gestion des données chromatographiques

Configurez le logiciel de gestion des données chromatographiques destiné à être utilisé avec le système ACQUITY :

• Démarrez le logiciel de gestion des données chromatographiques et ouvrez une session.

• Sélectionnez les instruments du système et donnez-lui un nom. Consultez l'aide d'Empower ou de MassLynx pour plus de détails.

• Ouvrez ACQUITY Console (Console ACQUITY) et les panneaux de commande.

Panneaux de commande ACQUITY

Le logiciel de gestion des données chromatographiques permet de contrôler les panneaux de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire, du Gestionnaire d'échantillons et du détecteur.

Panneaux de commande :

Si le système est commandé par le logiciel Empower, les panneaux de commande s'affichent dans le bas de la fenêtre Run Samples (Analyse des échantillons). Si le système est commandé par le logiciel MassLynx, les panneaux de commande s'affichent dans l'onglet Additional Status (Indicateurs d'état supplémentaires) de la fenêtre Inlet Editor (Éditeur des entrées).

Panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaireLe panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire affiche les paramètres relatifs au débit, à la pression du système, au débit total et à la composition du solvant.

Configuration du logiciel de gestion des données chromatographiques 3-9

Règle : ces paramètres peuvent être modifiés lorsque le système est au repos en cliquant sur la valeur soulignée. Les paramètres du Gestionnaire de solvant quaternaire ne peuvent pas être modifiés lorsque le système est en train d'analyser des échantillons.

Panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Le tableau ci-dessous décrit les différents paramètres du panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire.

Paramètres du panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Paramètre DescriptionVoyant du débit Affiche le voyant réel du panneau avant du

Gestionnaire de solvant quaternaire, sauf lorsque la communication est coupée avec ce dernier.

État Indique l'état de l'opération en cours.

Pression du système Affiche la pression du système, en kPa, bar ou psi. Les unités de pression peuvent être personnalisées dans ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

Débit Affiche le débit dans toutes les lignes de solvant du Gestionnaire de solvant quaternaire. Les valeurs du débit varient entre 0.000 et 2.000 mL/min dans des conditions normales de fonctionnement et entre 0.000 et 4.000 mL/min pendant l’amorçage.

Composition du solvant

Affiche le pourcentage des solvants A à D que les lignes de solvant doivent délivrer. Les valeurs de composition varient entre 0.0 et 100.0 %.

(Arrêt du débit) Interrompt immédiatement le débit du Gestionnaire de solvant quaternaire.

État

Voyant du débit

Pression du système Débit

Arrêt du débitComposition du solvant


Pour accéder aux fonctions supplémentaires ci-dessous, cliquez avec le bouton droit de la souris sur le panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Fonctions supplémentaires du panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Fonction DescriptionStart Up System (Démarrage du système)

Remet le système dans les conditions de fonctionnement lorsque ce dernier a été au repos pendant une durée prolongée, ou lors du passage à des solvants différents.Consultez « Démarrage du système » dans les Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire de solvant quaternaire.

Prime solvents (Amorcer les solvants)

Affiche la boîte de dialogue Prime Solvants (Amorcer les solvants).Consultez « Amorçage du Gestionnaire de solvant quaternaire » dans les Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire de solvant quaternaire.

Prime Seal Wash (Amorcer le lavage des joints des pistons)

Démarre l'amorçage du solvant de lavage des joints des pistons.Consultez « Amorçage du système de lavage des joints » dans les Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire de solvant quaternaire.

Wash Plungers (Laver les pistons)

Lance la séquence de lavage des pistons, qui consiste à remplir du mélange actif de solvants les chambres de la pompe primaire et de la pompe à accumulateur, puis à les vider lentement, tout en effectuant un lavage des joints à volume et vitesse élevés. Cela permet d'éviter l'accumulation de solides précipités, qui pourraient endommager les joints haute pression, sur les pistons des pompes.


Panneau de commande du Gestionnaire d’échantillonsLe panneau de commande du Gestionnaire d'échantillons affiche les températures et les points de consigne actifs du compartiment des échantillons et du four pour colonne. Ces valeurs peuvent être modifiées lorsque le système est au repos, en cliquant sur la valeur soulignée. Il est impossible de modifier les points de consigne du Gestionnaire d’échantillons lorsque le système est en train d'analyser des échantillons.

Conseils :• Pour conserver une température constante dans le compartiment des

échantillons, n'ouvrez la porte du compartiment que lorsque cela est nécessaire.

• Les ventilateurs du Gestionnaire d'échantillons cessent de faire circuler de l'air lorsque la porte du compartiment des échantillons est ouverte.

Launch ACQUITY UPLC Console (Lancer la Console ACQUITY UPLC)

Lance l'application ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

Reset QSM (Réinitialiser le Gestionnaire de solvant quaternaire)

Réinitialise le Gestionnaire de solvant quaternaire après une erreur.

Help (Aide) Affiche l'aide en ligne de ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

Fonctions supplémentaires du panneau de commande du Gestionnaire de solvant quaternaire : (suite)

Fonction Description


Panneau de commande du Gestionnaire d’échantillons :

Le tableau ci-dessous décrit les différents paramètres du panneau de commande du Gestionnaire d'échantillons.

Paramètres du panneau de commande du Gestionnaire d’échantillons :

Paramètre DescriptionVoyant d'analyse Affiche le voyant d'analyse réel du panneau

avant, sauf lorsque la communication est coupée avec ce dernier.


Température actuelle du compartiment des échantillons

Affiche la température actuelle du compartiment des échantillons à 0,1 °C près, même lorsque le contrôle actif de la température est désactivé.

Point de consigne du compartiment des échantillons

Affiche le point de consigne du compartiment des échantillons à 0,1 °C près. Lorsque le contrôle actif de température est désactivé, ce champ affiche Off (Désactivé).

Température actuelle du four pour colonne

Affiche la température actuelle du Gestionnaire de colonne à 0,1 °C près, même lorsque le contrôle actif de la température est désactivé.

Point de consigne du four pour colonne

Affiche le point de consigne actuel du four pour colonne à 0,1 °C près. Lorsque le contrôle actif de température est désactivé, ce champ affiche Off (Désactivé).

(Console) Affiche ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC).

Voyant d'analyse

Température actuelle du four pour colonne

Retour à la Console ACQUITY UPLCPoint de consigne du

four pour colonne

Indicateur d'état

Température actuelle du compartiment des échantillonsPoint de consigne du compartiment des échantillons


Pour accéder aux fonctions supplémentaires ci-après, cliquez avec le bouton droit de la souris dans le panneau de commande du Gestionnaire d'échantillons.

Panneau de commande du Détecteur TUVLe panneau de commande du Détecteur TUV affiche les unités d'absorbance et les longueurs d'onde. Ces paramètres peuvent être modifiés lorsque le système est au repos, en cliquant sur la valeur soulignée. Il est toutefois impossible de modifier les paramètres du détecteur lorsqu'une analyse est en cours sur le système.

Les panneaux de commande des autres détecteurs fonctionnent de façon similaire :

• Détecteur PDA : consultez le Manuel d'initiation du Détecteur PDA ACQUITY UPLC.

Fonctions supplémentaires du panneau de commande du Gestionnaire d'échantillons :

Fonction DescriptionPrime (Amorcer) Affiche la boîte de dialogue Prime

(Amorcer).Consultez « Amorçage du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille » dans les Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille.

Wash Needle (Laver l'aiguille)

Affiche la boîte de dialogue Wash Needle (Laver l'aiguille).Consultez « Lavage de l'aiguille du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille » dans les Informations d'utilisation et de maintenance du Gestionnaire d'échantillons à débit via aiguille.

Reset SM (Réinitialiser le Gestionnaire d'échantillons)

Réinitialise le Gestionnaire d'échantillons après une erreur.



• Détecteur ELS : consultez le Manuel d'initiation du Détecteur ELS ACQUITY UPLC.

• Détecteur FLR : consultez le Manuel d'initiation du Détecteur FLR ACQUITY UPLC.

Panneau de commande :

Le tableau suivant décrit les paramètres du panneau de commande du Détecteur TUV.

Paramètres du panneau de commande du Détecteur TUV :

Paramètre DescriptionVoyant de la lampe Affiche le voyant de la lampe réel du

panneau avant du détecteur, sauf lorsque la communication est coupée avec ce dernier.


AU Affiche les unités d'absorbance.

nm Affiche la valeur de la longueur d’onde A en nm. Si le détecteur est en mode double longueur d’onde, la valeur de la longueur d’onde B s'affiche également.

(Lampe allumée)Allume la lampe du détecteur.

(Lampe éteinte) Éteint la lampe du détecteur.

Voyant de la lampe

Allume ou éteint la lampe du détecteur

État

Unités d'absorbance

Valeur de la longueur d’onde A


Pour accéder aux fonctions supplémentaires ci-après, cliquez avec le bouton droit de la souris dans le panneau de commande du détecteur.

Panneau de commande du Gestionnaire de colonneSi le système est commandé par le logiciel Empower, le panneau de commande du Gestionnaire de colonne s'affiche dans le bas de la fenêtre Run Samples (Analyser les échantillons). Si le système est commandé par le logiciel MassLynx, le panneau de commande du Gestionnaire de colonne s'affiche dans l'onglet Additional Status (Indicateurs d'état supplémentaires) de la fenêtre Inlet Editor (Éditeur des entrées).

Panneau de commande du Gestionnaire de colonne :

Le panneau de commande du Gestionnaire de colonne affiche la température actuelle et la température de consigne de la colonne. La consigne peut être modifiée lorsque le système est au repos en cliquant sur la valeur soulignée. Il est impossible d'éditer la consigne de température et la sélection de colonne, tant que le système analyse des échantillons.

Fonctions supplémentaires du panneau de commande du détecteur :

Fonction DescriptionAutozero (Mise à zéro automatique)

Remet à zéro la valeur d'absorbance.

Reset TUV (Réinitialiser le Détecteur TUV)

Réinitialise le cas échéant le détecteur après une erreur.


Voyant d'analyse

Température actuelle

Consigne de température

Colonne actuellement utilisée


Le tableau ci-dessous liste les différents paramètres du panneau de commande du Gestionnaire de colonne.

Pour accéder à des fonctions supplémentaires, cliquez avec le bouton droit de la souris sur le panneau de commande du Gestionnaire de colonne.

Paramètres du panneau de commande du Gestionnaire de colonne :

Paramètre DescriptionVoyant Run(Analyse) Affiche le voyant d'analyse réel du panneau

avant du Gestionnaire de colonne, sauf lorsque la communication est coupée avec ce dernier.

Temperature (Température) Affiche la température actuelle et le point de consigne du compartiment de la colonne à 0.1 °C près. Lorsque le contrôle actif de température est désactivé, ce champ affiche Off (Désactivé).

Column Selection(Colonne sélectionnée)

Affiche la colonne actuellement utilisée.

Fonctions supplémentaires du panneau de commande du Gestionnaire de colonne :

Fonction DescriptionReset CM (Réinitialiser CM) Réinitialise le cas échéant le Gestionnaire

de colonne après la survenue d’une erreur.



Démarrage de l'application « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC)

L'application ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC) est un outil pratique de paramétrage, de suivi des performances, de réalisation de tests de diagnostic et de maintenance du système et de ses modules. Elle remplace les claviers et les petits écrans qui équipaient auparavant les panneaux avant des instruments du système. L'application ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC) fonctionne indépendamment des logiciels de gestion des données, qu'elle ne reconnaît pas ni ne commande.

L'interface de ACQUITY UPLC Console (Console ACQUITY UPLC) facilite la navigation et offre un accès rapide aux représentations visuelles des modules du système et de leurs composants. Vous pouvez aussi accéder à des diagrammes interactifs, qui présentent les interconnexions et proposent des outils de diagnostic pour résoudre les problèmes.


Pour afficher « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) dans Empower :

Dans la fenêtre Run samples (Analyse des échantillons), cliquez sur Display console (Afficher la console) dans le panneau de commande du Gestionnaire d’échantillons.

Fenêtre « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) :

Pour afficher « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) dans le logiciel MassLynx :

1. Cliquez sur l’option Inlet Method (Méthode d’entrée) dans la fenêtre MassLynx.

2. Dans la fenêtre Inlet Method (Méthode d'entrée), cliquez sur l'onglet ACQUITY Additional Status (Indicateurs supplémentaires d’état ACQUITY).

3. Cliquez sur Display console (Afficher la console) .

Démarrage de l'application « ACQUITY UPLC Console » (Console ACQUITY UPLC) 3-19


A Conseils de sécurité

Les instruments Waters présentent des symboles de risque conçus pour vous signaler les dangers cachés présents lors du fonctionnement et de l'entretien des instruments. Les manuels de l'utilisateur correspondants comportent également ces symboles accompagnés de phrases décrivant ces risques et vous indiquant comment les éviter. Cette annexe présente tous les symboles de risque et les remarques correspondantes, valables pour toute la famille des produits Waters.


Rubrique PageSymboles d'avertissement A-2

Symbole de mise en garde A-6

Avertissements applicables à tous les instruments Waters A-6

Symboles électriques et symboles relatifs à la manipulation A-7

A-1

Symboles d'avertissement

Les symboles d’avertissement vous signalent les risques de décès, de blessures ou de réactions physiologiques graves dus à l’utilisation, ou au mauvais usage, d’un instrument. Tous les avertissements doivent être pris en compte lors de l'installation, de la réparation ou du fonctionnement des instruments Waters. Waters n'assume aucune responsabilité en cas de non-respect d'une règle de sécurité par les utilisateurs lors de l'installation, de la réparation ou de l'utilisation de l'instrument.

Avertissement de sécurité propres à une tâcheLes symboles d'avertissement suivants vous signalent les risques potentiels lors du fonctionnement ou de l'entretien d'un instrument ou de l'un de ses éléments. Ces risques incluent les brûlures, les électrisations et les expositions aux rayonnements ultraviolets.

Quand ces symboles apparaissent dans les descriptions ou les procédures d’un manuel, le texte qui les accompagne indique le risque spécifique et explique comment l’éviter.

Avertissement : risque général. Quand ce symbole figure sur un instrument, avant de l’utiliser, consultez la documentation de l'utilisateur de l’instrument qui comporte des informations importantes relatives à la sécurité.

Avertissement : risque de brûlure au contact de surfaces chaudes.

Avertissement : risque d'électrisation.

Avertissement : risque d'incendie.

Avertissement : risque de piqûre par un objet pointu.

Avertissement : risque d'écrasement des mains.

Avertissement : risque d’exposition à un rayonnement ultraviolet.

Avertissement : risque d'exposition à des substances corrosives.

A-2 Conseils de sécurité

Avertissements spécifiquesLes avertissements suivants peuvent figurer dans les manuels de l'utilisateur de certains instruments et sur les étiquettes collées sur les appareils ou sur l’un de leurs éléments.

Avertissement relatif à l'éclatement

Cet avertissement s'applique aux instruments Waters équipés de tuyaux non métalliques.

Avertissement : risque d'exposition à une substance toxique.

Avertissement : risque d’exposition à un rayonnement laser.

Avertissement : risque d'exposition à des agents biologiquement actifs pouvant présenter un risque grave pour la santé.

Avertissement : risque de basculement.

Avertissement : risque d'explosion.

Avertissement : risque de blessure à l'œil.

Avertissement : les tuyaux sous pression, non métalliques ou en polymère, sont susceptibles d’éclater. Les précautions suivantes doivent être respectées lorsque vous travaillez à proximité de tels tubes :• Portez des lunettes de protection.• Éteignez toute flamme se trouvant à proximité de l'instrument.• N'utilisez pas de tuyaux qui sont, ou qui ont été, déformés ou

endommagés.• N’exposez pas des tubes non métalliques à des composés

incompatibles comme le tétrahydrofurane, ou THF, ou l'acide nitrique ou sulfurique.

• Certains composés, comme le dichlorométhane et le diméthylsulfoxyde, provoquent le gonflement des tubes non métalliques et réduisent considérablement leur pression de rupture.

Symboles d'avertissement A-3

Avertissement relatif aux solvants inflammables utilisés dans les spectromètres de masse

Cet avertissement s’applique aux instruments utilisés avec des solvants inflammables.

Risque d'électrisation au niveau du spectromètre de masse

Cet avertissement s'applique à tous les spectromètres de masse Waters.

Cet avertissement s'applique à certains instruments lorsqu'ils sont en mode Operate (Fonctionnement).

Avertissement : quand des quantités significatives de solvants inflammables sont utilisées, un débit continu d’azote est nécessaire dans la source afin de prévenir leur inflammation dans cette enceinte close. Vérifiez que la pression d’alimentation en azote ne tombe jamais au-dessous de 690 kPa, soit 6,9 bar ou 100 psi, pendant une analyse utilisant des solvants inflammables. Un câble signalant un défaut d'approvisionnement en gaz doit être relié au système LC afin d'interrompre le débit du solvant LC en cas de défaillance de l'alimentation en azote.

Avertissement : pour éviter les électrisations, ne retirez pas les panneaux de protection du spectromètre de masse. Les composants protégés par ces panneaux ne sont pas réparables par l'utilisateur.

Avertissement : des hautes tensions peuvent exister sur certaines surfaces externes du spectromètre de masse fonctionnant en mode Operate (Fonctionnement). Pour éviter les électrisations, l'instrument doit être en mode Standby (Veille) avant de toucher les surfaces portant ce symbole d'avertissement.


Avertissement relatif au risque biologique

Cet avertissement s’applique aux instruments Waters pouvant être utilisés pour traiter des matières susceptibles de présenter des risques biologiques : des substances contenant des agents biologiques pouvant provoquer des effets nocifs pour les êtres humains.

Avertissement relatif au risque chimique

Cet avertissement s'applique aux instruments Waters capables de traiter des matières corrosives, toxiques, inflammables ou présentant d'autres types de dangers.

Avertissement : les instruments et les logiciels Waters peuvent être utilisés pour analyser ou traiter des produits d'origine humaine potentiellement infectieux, des micro-organismes inactivés ainsi que d'autres matières biologiques. Pour éviter les infections dues à ces agents, considérez que tous les liquides biologiques sont infectieux, respectez les bonnes pratiques de laboratoire et obtenez du responsable sécurité chargé des risques biologiques de votre entreprise les consignes relatives à l'utilisation et à la manipulation de ces substances. Des précautions spécifiques sont indiquées dans la dernière édition du document Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, ou BMBL, publié par le National Institutes of Health, ou NIH, États-Unis.

Avertissement : les instruments Waters peuvent être utilisés pour analyser ou traiter des substances potentiellement dangereuses. Pour éviter les blessures dues à ces substances, familiarisez-vous avec leur utilisation et les risques qu'elles présentent, respectez les Bonnes Pratiques de Laboratoire et obtenez du responsable sécurité de votre entreprise les consignes relatives à l'utilisation et à la manipulation des matières dangereuses. Des recommandations sont fournies dans la dernière édition du document Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Disposal of Chemicals, publié par le National Research Council, ou NRC, États-Unis.

Symboles d'avertissement A-5

Symbole de mise en garde

Le symbole de mise en garde signifie que l'utilisation ou le mauvais usage de l'instrument est susceptible de l'endommager ou de porter atteinte à l'intégrité de l'échantillon. Le symbole suivant et le texte d'avertissement qui l'accompagne sont généralement utilisés pour vous mettre en garde contre un risque d'endommagement de l'instrument ou de l'échantillon.

Avertissements applicables à tous les instruments Waters

Lors de l'utilisation de cet appareil, respectez les procédures standard de contrôle de la qualité et les recommandations relatives à l'équipement de cette rubrique.

Attention : pour éviter d'endommager le boîtier, n'utilisez ni abrasifs ni solvants pour le nettoyer.

Important : toute modification sur cette unité n’ayant pas été expressément approuvée par l’autorité responsable de la conformité à la réglementation peut entraîner l’annulation du droit de l’utilisateur à exploiter l’équipement.

Avertissement : usez de prudence avec les tuyaux en polymère sous pression, quels qu'ils soient :• Portez systématiquement des lunettes de protection à proximité de tubes en

polymère sous pression.• Éteignez toute flamme se trouvant à proximité de l'instrument.• N'utilisez pas de tubes sérieusement déformés ou endommagés.• N’exposez pas les tuyaux non métalliques au tétrahydrofurane, ou THF, ou

à l’acide nitrique ou sulfurique concentré.• Le dichlorométhane et le diméthylsulfoxyde provoquent le gonflement des

tuyaux non métalliques et réduisent considérablement leur pression de rupture

Avertissement : l'utilisateur doit savoir que l'utilisation de l'équipement d'une manière non spécifiée par le fabricant peut empêcher le fonctionnement correct de ses dispositifs de protection.


Symboles électriques et symboles relatifs à la manipulation

Symboles électriquesIls peuvent figurer dans les manuels utilisateur de l’instrument et sur les panneaux avant ou arrière de l’instrument.

Allumé

Éteint

Veille

Courant continu

Courant alternatif

Borne de mise à la terre

Mise à la masse du cadre ou du châssis

Fusible

Symbole de recyclage : ne pas mettre au rebut en décharge municipale.

Symboles électriques et symboles relatifs à la manipulation A-7

Symboles relatifs à la manipulationCes symboles relatifs à la manipulation et les textes correspondants peuvent figurer sur les étiquettes collées sur les cartons d'emballage utilisés lors de l'expédition des instruments Waters et de leurs éléments.

Maintenir en position verticale !

Maintenir au sec !

Fragile !

Ne pas utiliser de crochets !


B Branchements externes

Cette rubrique décrit les branchements externes du système ACQUITY UPLC® H-Class.

Remarque : les instruments ACQUITY UPLC H-Class sont déballés et installés par un représentant du service d'assistance technique.

Raccords de tubulure du système

Les raccords de tubulure externes du système pour les circuits de solvant et de drainage sont présentés ci-après.

Avertissement : pour éviter les problèmes de dos, deux personnes au moins sont nécessaires pour soulever les instruments.

Attention : • Contactez le service d'assistance technique de Waters avant de

déplacer les instruments ACQUITY UPLC H-Class.• Si vous devez transporter un instrument ou le mettre hors

service, contactez le service d'assistance technique de Waters qui vous communiquera les procédures de nettoyage, de rinçage et d'emballage.


Rubrique PageRaccords de tubulure du système B-1

Câblage extérieur des instruments B-3

Connexions des signaux B-4

Raccordement à la source d'alimentation électrique B-9

Raccords de tubulure du système B-1

Circuits de solvant et de drainage :

Bac à solvants

Détecteur

Four pour colonne



Circuit du systèmeDrainage du systèmeDétecteur de fuites

Emplacement du régulateur de contre-pression

Tubulure annelée en PTFE

Tubulure en PTFE de 1/8 de pouce de diamètre extérieur (4 lignes pour les solvants A, B, C et D et 1 ligne pour le solvant de lavage des joints)

Tubulure en PTFE de 1/8 de pouce de diamètre extérieur (1 ligne de purge)

Emplacement de la cuve de circulation

Emplacement du bloc préchauffeur actif

Tubulure en acier inoxydable entre le GSQ et le SM-FTN

Tubulure de la seringue du SM-FTN en PEEK en provenance du GSQ

Tubulure transparente en PTFE vers la vanne de purge, tubulure en PEEK vers les déchets

Tubulure en PTFE de 1/8 de pouce de diamètre extérieur du Gestionnaire d'échantillons SM-FTN

Déchets

B-2 Branchements externes

Câblage extérieur des instruments

Câblage extérieur des instruments ACQUITY UPLC H-ClassLes branchements du panneau arrière des instruments ACQUITY UPLC H-Class sont présentés ci-dessous.

��

Commutateur Ethernet

Câble d'alimentation et de communication externe

Câbles Ethernet

Cordons d'alimentation

Câble Ethernet vers le PC

Plateau à solvants

Détecteur

Four pour colonne

Gestionnaire d'échantillons


Câblage extérieur des instruments B-3

Connexions EthernetLe Gestionnaire d'échantillons est doté d'un commutateur Ethernet interne permettant de connecter la station de travail et jusqu'à six modules ACQUITY UPLC H-Class. Branchez les câbles Ethernet blindés de chaque module dans les connecteurs électroniques du panneau arrière du Gestionnaire d'échantillons. Le Gestionnaire d'échantillon est relié en interne au commutateur Ethernet.

Branchements du four pour colonneLe Gestionnaire d'échantillons alimente le four pour colonne et communique avec celui-ci. Le câble de communication externe doit être branché à l'arrière du four pour colonne et du Gestionnaire d'échantillons.

Pour brancher les connexions du four pour colonne :

1. Vérifiez que le Gestionnaire d'échantillons et le four pour colonne sont hors tension.

2. Branchez le câble de communication externe au port HD (High Density) situé à l'arrière du four pour colonne.

3. Branchez l'autre extrémité du câble de communication externe sur le port QSPI situé à l'arrière du Gestionnaire d'échantillons.

Connexions des signaux

Connexion des signauxReportez-vous à l'étiquette sérigraphiée indiquant les emplacements des connecteurs de signaux sur le panneau arrière de chaque instrument.

Attention : pour éviter d'endommager les composants électriques, veillez à ne jamais débrancher un dispositif électrique lorsque l'instrument est sous tension. Pour couper complètement le courant qui alimente un instrument, placez l'interrupteur sur Arrêt puis débranchez le cordon d'alimentation de la prise de courant alternatif. Après avoir éteint un instrument, patientez dix secondes avant de le débrancher.


Équipement nécessaire

• Tournevis à douille de 9/32 de pouce

• Tournevis à lame plate

• Connecteur

• Câble de signal

Pour effectuer des connexions de signaux :

1. Insérez le connecteur dans le port de connexion à l'arrière de l'instrument.

2. Pour réaliser une connexion de signal, fixez les fils positif et négatif du câble de signal au connecteur avec le petit tournevis à lame plate.

Connecteur

Port de connexion

Câble de signal

Connecteur

Vis


3. Enfilez la fourche du câble de masse sur le goujon de mise à la masse du panneau arrière. Fixez-la avec l'écrou de verrouillage.

Conseil : avec le tournevis à douille de 9/32 de pouce, serrez l'écrou de verrouillage jusqu'à ce que la fourche ne bouge plus.

Connecteurs de signaux d'entrées/sorties du Gestionnaire de solvant quaternaire

Le panneau arrière du Gestionnaire de solvant quaternaire est doté d'un connecteur détachable sur lequel sont fixées les bornes à vis pour les câbles des signaux d'entrées/sorties. Ce connecteur est claveté pour être inséré dans un seul sens.

Connexions de signaux d'entrées/sorties du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Fourche

Écrou de verrouillage

Goujon de mise à la masse

Gra

dien

t Sta

rt +

Gra

dien

t Sta

rt -

Gro

und

Gro

und

Stop

Flo

w +

Stop

Flo

w -

1 2 3 4 5 6


Pour plus d'informations sur les normes électriques, consultez les Caractéristiques techniques du système ACQUITY UPLC H-Class.

Connecteurs de signaux d'entrées/sorties du Gestionnaire d'échantillons

Le panneau arrière du Gestionnaire d'échantillons est doté d'un connecteur détachable sur lesquels sont fixées les bornes à vis pour les câbles des signaux d'entrées/sorties. Ce connecteur est claveté pour que le câble de signal soit inséré dans un seul sens.

Condition requise : une connexion de sortie de fermeture de contact Inject Start Out (Démarrage de l’injection [Sortie]) depuis le Gestionnaire d'échantillons est nécessaire pour déclencher le démarrage d'un spectromètre de masse, d'un Détecteur ACQUITY 2996 PDA ou d'un Détecteur ACQUITY ELS pilotés par le logiciel MassLynx.

Connecteurs de signaux d'entrées/sorties du Gestionnaire d'échantillons :

Connexions d'entrée d'événement du Gestionnaire de solvant quaternaire :

Connexion des signaux DescriptionGradient Start (Démarrage du gradient)

Lance la mise en fonctionnement des pompes en mode gradient par une entrée de fermeture de contact ou par une entrée de 0 volt.

Stop Flow (Arrêt du débit)

Arrête le débit provenant du Gestionnaire de solvant quaternaire lorsqu'il reçoit une entrée de fermeture de contact ou une entrée de 0 volt, comme par exemple une erreur ou une défaillance matérielle d'un autre instrument.

Inje

ct S

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Out

+In

ject

Sta

rt O

ut -

Gro

und

Gro

und

Inje

ct H

old

In +

Inje

ct H

old

In -

1 2 3 4 5 6


Pour plus d'informations sur les normes électriques, consultez les Caractéristiques techniques du système ACQUITY UPLC H-Class.

Connecteurs des signaux du Détecteur TUV

Si votre système comprend un Détecteur TUV, consultez le Manuel d'initiation du Détecteur TUV ACQUITY UPLC pour plus d'informations sur les connecteurs de signaux.

Connecteurs des signaux du Détecteur PDA

Si votre système comprend un Détecteur PDA, consultez le Manuel d'initiation du Détecteur PDA ACQUITY UPLC pour plus d'informations sur les connecteurs de signaux.

Connecteurs des signaux du Détecteur ELS

Si votre système comprend un Détecteur ELS, consultez le Manuel d'initiation du Détecteur ELS ACQUITY UPLC pour plus d'informations sur les connecteurs de signaux.

Connecteurs des signaux du Détecteur FLR

Si votre système comprend un Détecteur FLR, consultez le Manuel d'initiation du Détecteur FLR ACQUITY UPLC pour plus d'informations sur les connecteurs de signaux.

Connexions de sortie et d'entrée d'événement du Gestionnaire d'échantillons :

Connexions des signaux Description

Inject Start (Démarrage de l'injection)

Indique par une sortie de fermeture de contact qu'une injection a démarré.

Inject Hold (Retenir l'injection)

Retarde l'injection suivante si le Gestionnaire d'échantillons reçoit une entrée de fermeture de contact, par exemple d'un autre instrument du système.


Raccordement à la source d'alimentation électrique

Chaque instrument du système doit être relié à sa propre source d’alimentation électrique avec une borne de mise à la terre. Toutes les prises de courant doivent disposer d’une connexion à la terre commune et située à proximité du système.

Pour raccorder l'instrument à la source électrique :

Recommandation : utilisez un filtre de secteur et un système d'alimentation sans coupure, ou UPS, pour une stabilité optimale et continue de la tension d'alimentation.

1. Branchez l'extrémité femelle du câble d'alimentation sur la prise qui se trouve à l'arrière de chaque instrument.

2. Branchez l’extrémité mâle du câble d'alimentation sur une prise de courant murale appropriée.

Autre méthode : si vous disposez du chariot FlexCart (disponible en option), branchez l'extrémité femelle des câbles électriques du chariot (inclus dans le kit de démarrage) sur la prise du panneau arrière de chaque instrument. Branchez l'extrémité mâle encapuchonnée des câbles électriques du chariot sur les barrettes de connexion placées à l'arrière du chariot, puis branchez le câble de chaque barrette de connexion sur une prise murale reliée à son propre circuit.

Avertissement : pour éviter les électrisations :• Utilisez des câbles d'alimentation de type SVT aux États-Unis et de

type HAR, ou harmonisé, ou mieux en Europe. Pour les normes des autres pays, contactez votre fournisseur Waters local.

• Éteignez et débranchez chaque instrument du système avant toute intervention de maintenance sur l'instrument.

• Reliez chaque instrument du système à une masse commune.

Raccordement à la source d'alimentation électrique B-9

Connexions électriques du FlexCart :

Vers circuit A

Vers circuit B

1 mètre

2 mètres

1 mètre

1 mètre

1 mètre

1 mètre

2 mètres

Coupleur CEI universel

Ligne CA

Ligne CA

Commutateur réseau

Détecteur

Gestionnaire d'échantillons


Organisateur d'échantillons

Écran LCD/moniteur

Unité centrale

Barrettes de connexion du FlexCart


C Choix des solvants

Les informations de la présente annexe concernent uniquement les instruments suivants :

• Modules du système ACQUITY UPLC® H-Class

• Détecteur ACQUITY UPLC PDA

• Détecteur ACQUITY UPLC PDA eλ

• Détecteur TUV ACQUITY UPLC

• Détecteur ELS ACQUITY UPLC

• Détecteur FLR ACQUITY UPLC

Avertissement : pour éviter tout accident résultant de l'utilisation de produits chimiques, observez systématiquement les Bonnes Pratiques de Laboratoire lors de l'utilisation du système, de la manipulation des solvants ou du remplacement des tubulures. Consultez les Fiches de Données de Sécurité des solvants utilisés.


Rubrique PageIntroduction C-2

Recommandations relatives aux solvants C-4

Propriétés des solvants courants C-9

Miscibilité des solvants C-11

Stabilisants pour solvant C-13

Viscosité du solvant C-13

Sélection de la longueur d'onde C-13

C-1

Introduction

Protection contre la contaminationPour plus d'informations concernant la protection contre la contamination, consultez le document Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS and HPLC/MS Systems (Contrôle de la contamination des systèmes LC/MS Ultra Performance et HPLC/MS), numéro de référence 715001307, sur notre site Internet. Rendez-vous sur www.waters.com.

Propreté des solvantsLes solvants propres assurent des résultats reproductibles et permettent de réduire au minimum l'entretien de l'instrument.

Les solvants pollués peuvent causer une dérive et du bruit au niveau de la ligne de base ; ils peuvent également boucher les filtres des réservoirs de solvant, les filtres d'entrée et les lignes capillaires.

Qualité des solvantsPour obtenir les meilleurs résultats, utilisez des solvants de qualité MS (et de qualité HPLC au minimum). Filtrez les solvants sur une membrane de filtration appropriée.

Recommandation : vérifiez que vos choix de solvant correspondent aux recommandations du fabricant ou du fournisseur du filtre à membrane.

Préparation des solvantsUne bonne préparation des solvants, et principalement leur filtration, permet de prévenir de nombreux problèmes de pompage.

Recommandation : utilisez de la verrerie teintée de couleur marron pour empêcher la prolifération de micro-organismes.

C-2 Choix des solvants

EauUtilisez uniquement de l'eau provenant d'un système de purification de haute qualité. Si l'eau fournie par le système n'est pas filtrée, filtrez-la sur une membrane de 0,2 μm.

Utilisation de tampons

Ajustez le pH des tampons aqueux. Filtrez ces derniers pour éliminer les matières insolubles puis mélangez-les avec des modificateurs organiques appropriés. Après avoir utilisé un tampon, rincez la pompe en effectuant un amorçage humide avec une quantité d’eau distillée ou déionisée de qualité HPLC équivalente à au moins 5 fois le volume du système.

En cas d'arrêt de plus d'une journée, rincez la pompe avec un mélange méthanol/eau à 20 % pour éviter la prolifération de micro-organismes.

Conseil : pour éviter la précipitation des sels, la concentration des tampons non volatils ne doit pas excéder 100 mM.

Solvants tamponnésLorsque vous utilisez un tampon, choisissez des réactifs de bonne qualité et filtrez-les sur un filtre à membrane de 0,2 μm.

Recommandation : remplacez quotidiennement les phases mobiles aqueuses à 100 % pour éviter de favoriser la prolifération des micro-organismes.

Consultez également : pour plus d'informations concernant la protection contre la contamination, consultez le document Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS and HPLC/MS Systems (Contrôle de la contamination des systèmes LC/MS Ultra Performance et HPLC/MS), numéro de référence 715001307, sur notre site Internet. Rendez-vous sur www.waters.com.

Attention : l'utilisation d'eau à 100 % peut provoquer une prolifération des micro-organismes. Waters recommande de changer les solutions aqueuses à 100 % tous les jours. L'ajout d'une petite quantité de solvant organique (~10 %) empêche la prolifération des micro-organismes.

Attention : certains tampons sont incompatibles avec les spectromètres de masse. Consultez la documentation qui accompagne votre instrument pour savoir quels sont les tampons compatibles.

Introduction C-3

Recommandations relatives aux solvants

Le système ACQUITY UPLC H-Class est conçu pour la chromatographie en phase inverse et les chimies de colonne ACQUITY UPLC BEH. Nous avons évalué la fiabilité de nos systèmes avec les solvants habituellement utilisés pour la chromatographie en phase inverse.

Conseil : les solvants prévus pour la chromatographie en phase normale peuvent être utilisés sur le système à condition d'effectuer certaines modifications. Voir « Autres solvants », page C-5 et « Kit de compatibilité hexane/THF », page C-5.

Cette rubrique répertorie les solvants recommandés pour le système ACQUITY UPLC H-Class. Veuillez contacter le service clientèle de Waters pour déterminer si vous pouvez utiliser un solvant non cité dans la liste sans risquer d'endommager l'instrument ou de nuire aux performances du système.

Recommandations générales relatives aux solvantsRespectez systématiquement les recommandations générales suivantes concernant les solvants :

• Utilisez de la verrerie teintée de couleur marron de qualité supérieure pour empêcher la prolifération de micro-organismes.

• Filtrez les solvants. Les petites particules peuvent boucher de manière irréversible les lignes capillaires. La filtration des solvants améliore également le fonctionnement des clapets anti-retour.

Solvants recommandés

• Acétonitrile

• Mélanges acétonitrile/eau

• Isopropanol

• Méthanol

• Mélanges méthanol/eau

• Eau


Autres solvants

Les solvants suivants peuvent être utilisés. Veuillez cependant noter que ces solvants peuvent raccourcir la durée de vie de l'instrument. Si vous utilisez couramment les solvants de cette liste, nous vous recommandons d'installer le Kit de compatibilité hexane/THF.

• Tétrahydrofurane (THF)

• Hexane

• Acétone

• Acétate d'éthyle

• Hexafluoroisopropanol (HFIP)

Remarques :– Solutions aqueuses à 1-4 % de HFIP pour les analyses

d'oligonucléotides.

– Le HFIP ne doit jamais être inclus dans des solvants de lavage.

Pour plus d'informations, consultez la page C-7.

Tenez compte de la polarité des solvants lors du remplacement des solvants typiquement employés pour la chromatographie en phase inverse. Rincez le système avec un solvant de polarité intermédiaire tel que l'isopropanol avant d'introduire des solvants non polaires comme le THF ou l'hexane.

Kit de compatibilité hexane/THF

Le kit de compatibilité hexane/THF du système ACQUITY UPLC (contactez Waters pour le numéro de référence) peut être installé dans les systèmes ACQUITY UPLC à gestion des déchets fermée. Conçu pour les utilisateurs d'hexane ou de THF à concentration et pression élévée, il est recommandé dans de nombreuses applications ELS employant le THF comme phase mobile à concentration élevée.

Additifs/modificateurs

• Acide éthylènediaminetétracétique (EDTA) à 0,1 %

• Acide heptafluorobutyrique à 0,1 %

• Triéthylamine (TEA) à 0,1 %

• Acide trifluoroacétique (TFA) à 0,1 %


• Acide formique à 0,2 %

• Acide acétique à 0,3 %

• Bicarbonate d'ammonium, 10 mM

• Tampon phosphate, 10 mM

• Acétate d'ammonium, 50 mM

• Hydroxyde d'ammonium, 50 mM

Diluants de l'échantillon

• Acétonitrile

• Mélanges acétonitrile/eau

• Chloroforme

• Diméthylformamide (DMF)

• Diméthylsulfoxyde (DMSO)

• Isooctane

• Isopropanol

• Méthanol

• Mélanges méthanol/eau

• Dichlorométhane

• Eau

Recommandation : n'utilisez pas de solutions tampons pour rincer les aiguilles.

Agents de nettoyage

Recommandation : pour plus d'informations sur les procédures de nettoyage, consultez le document Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS and HPLC/MS Systems (Contrôle de la contamination des systèmes LC/MS Ultra Performance et HPLC/MS), numéro de référence 715001307, sur notre site Internet. Rendez-vous sur www.waters.com.

• Acide phosphorique (≤30 %)

• Hydroxyde de sodium (≤1 Μ)

• Acide formique, de concentration ≤10 %


Solvants déconseillésÉvitez les solvants suivants :

• Solvants halogénés : contenant du fluor, du brome ou de l'iode.

• Acides forts (ne les utilisez qu'à faible concentration, <5 %, sauf en tant qu'agents de nettoyage. Évitez d'utiliser les acides en tant que phases mobiles lorsque leur pH est <1,0).

• Composés peroxydables tels que les éthers de qualité UV, le THF non stabilisé, le dioxane et le diisopropyléther. (Si vous êtes obligé d'utilisé un composé peroxydable, veillez à le filtrer sur de l'oxyde d'aluminium sec afin d'adsorber les peroxydes formés).

• Solutions contenant des concentrations élevées en agents complexants tels que l'acide éthylènediaminetétracétique, ou EDTA.

Recommandations pour le système ACQUITY UPLC H-ClassContactez Waters pour obtenir les procédures de nettoyage et de rinçage recommandées pour votre système.

Consultez également : le document Controlling Contamination in Ultra Performance LC/MS and HPLC/MS Systems (Contrôle de la contamination des systèmes LC/MS Ultra Performance et HPLC/MS), numéro de référence 715001307, sur notre site Internet. Rendez-vous sur www.waters.com.

• Le THF, l'hexane, l'acétate d'éthyle et l'acétone peuvent être utilisés en tant que phase mobile dans les systèmes ACQUITY UPLC H-Class. Toutefois, comme de nombreux solvants non aqueux, ils peuvent raccourcir la durée de vie du système et des instruments par rapport aux solvants typiquement utilisés pour la chromatographie en phase inverse.

Avertissement : risques d'explosion : les peroxydes contaminant le THF peuvent spontanément causer des explosions destructrices si vous évaporez le THF partiellement ou à siccité.

Avertissement : risques pour la santé : l'hexane est neurotoxique, tandis que le THF est irritant pour les yeux, la peau et les muqueuses et peut causer des dommages neurologiques. Si vous utilisez l'un ou l'autre de ces solvants ou même les deux, placez votre système ACQUITY UPLC H-Class sous une hotte de laboratoire ou dans une chambre fermée afin de minimiser l'exposition aux vapeurs de solvant nocives.


Si vous utilisez couramment le THF, l'hexane, l'acétate d'éthyle ou l'acétone, nous vous recommandons d'installer le Kit de compatibilité hexane/THF.

• Lors de l'utilisation de THF non stabilisé, assurez-vous que le solvant est fraîchement préparé. Si le flacon a été ouvert auparavant, il contient des impuretés (peroxydes) qui causent une dérive de la ligne de base.

• Le chloroforme, le dichlorométhane, les solvants halogénés et le toluène sont généralement déconseillés dans les systèmes ACQUITY UPLC H-Class. Vous cependant utiliser ces solvants à faible concentration (<10 %) en tant qu'additifs, diluants d'échantillon ou modificateurs.

• Contactez votre représentant Waters ou le service local d'assistance technique pour déterminer si une méthode spécifique peut être utilisée avec les instruments et éléments du système ACQUITY UPLC H-Class.

• Avec le THF ou l'hexane, utilisez une tubulure en acier inoxydable et réduisez au minimum l'utilisation des éléments en PEEK™.

• Les solvants aqueux ne doivent pas demeurer dans le système lorsque celui-ci a été éteint, car ils servent de substrats pour la prolifération des micro-organismes. Les micro-organismes peuvent boucher les filtres et les lignes capillaires du système. Pour éviter leur prolifération, ajoutez une faible quantité (~10 %) de solvant organique, acétonitrile ou méthanol par exemple.

• L'utilisation de l'acide méthanesulfonique est déconseillée dans les systèmes ACQUITY UPLC H-Class.

Recommandations relatives au Gestionnaire de solvant quaternaire

• Le système de lavage des joints des pistons ne doit jamais se trouver à sec, en particulier lors de séparations utilisant une phase mobile polaire.

• L'alcool isopropylique et les mélanges méthanol/eau (à 20 %, par exemple) constituent des solvants efficaces de lavage des joints quand des mélanges de solvants contenant du THF sont utilisés.

• Pour les applications en phase inverse, utilisez des solutions aqueuses contenant un composé organique en faible quantité (par exemple mélange méthanol/eau 1:9) en tant que solutions de lavage des joints des pistons.

• N’utilisez pas de solutions 100 % organiques pour le lavage des joints des pistons.


Recommandations relatives au Gestionnaire d’échantillons• N'utilisez pas de concentrations de THF ou d'hexane supérieures à 10 %

en tant que solvant de purge.

• Le système accepte les diluants organiques courants tels que le diméthylsulfoxyde, ou DMSO et le diméthylformamide, ou DMF.

Recommandations relatives aux détecteursPour transporter une cuve de circulation à une température inférieure à 5 °C, remplissez-la d'alcool.

Propriétés des solvants courants

Le tableau ci-dessous répertorie les propriétés des solvants les plus couramment utilisés en chromatographie.

Propriétés des solvants courants :

SolvantPression de vapeur en mm Hg (Torr)

Température d'ébullition (°C)

Pointéclair (°C)

Acétone 184,5 à 20 °C 56,29 -20

Acétonitrile 88,8 à 25 °C 81,6 6

Acétate de n-butyle 7,8 à 20 °C 126,11 22

n-butanol 4,4 à 20 °C 117,5 37

Chlorure de n-butyle 80,1 à 20 °C 78,44 -9

Chlorobenzène 8,8 à 20 °C 131,69 28

Chloroforme 158,4 à 20 °C 61,15

Cyclohexane 77,5 à 20 °C 80,72 -20

Cyclopentane 400 à 20 °C 49,26 -7

o-dichlorobenzène 1,2 à 20 °C 180,48 66

Dichlorométhane 350 à 20 °C 39,75

Diméthylacétamide 1,3 à 25 °C 166,1 70

N,N-diméthylformamide 2,7 à 20 °C 153,0 58

Diméthylsulfoxyde 0,6 à 25 °C 189,0 88

Propriétés des solvants courants C-9

1,4-Dioxane 29 à 20 °C 101,32 12

Acétate d'éthyle 73 à 20 °C 77,11 -4

Éthanol 43,9 à 20 °C 78,32 15

Éther éthylique 442 à 20 °C 34,55 -45

Dichlorure d'éthylène 83,35 à 20 °C 83,48 13

Heptane 35,5 à 20 °C 98,43 -4

Hexane 124 à 20 °C 68,7 -22

Isooctane 41 à 20 °C 99,24 -12

Isobutanol 8,8 à 20 °C 107,7 28

Isopropanol 32,4 à 20 °C 82,26 12

Myristate d'isopropyle < 1 à 20 °C 192,6 164

Méthanol 97 à 20 °C 64,7 11

t-butylméthyléther (tBME)

240 à 20 °C 55,2 -28

Méthyléthylcétone 74 à 20 °C 79,64 -9

Méthylisobutylcétone 16 à 20 °C 117,4 18

N-méthylpyrrolidone 0,33 à 25 °C 202,0 86

Pentane 420 à 20 °C 36,07 -49

n-propanol 15 à 20 °C 97,2 23

Carbonate de propylène 241,7 135

Pyridine 18 à 25 °C 115,25 20

Tétrahydrofurane 142 à 20 °C 66,0 -14

Toluène 28,5 à 20 °C 110,62 4

1,2,4-trichlorobenzène 1 à 20 °C 213,5 106

Triéthylamine 57 à 25 °C 89,5 -9

Acide trifluoroacétique 97,5 à 20 °C 71,8 -3

Eau 17,54 à 20 °C 100,0

o-xylène 6 à 20 °C 144,41 17

Propriétés des solvants courants : (suite)

SolvantPression de vapeur en mm Hg (Torr)

Température d'ébullition (°C)

Pointéclair (°C)


Miscibilité des solvants

Avant de remplacer les solvants, consultez le tableau ci-dessous pour connaître leur miscibilité. Rappelez-vous les effets suivants :

• Le passage d'un solvant miscible à un autre peut être effectué directement. Les changements impliquant deux solvants partiellement miscibles (par exemple, chloroforme et eau) nécessitent un solvant intermédiaire tel que le n-propanol.

• La température influence la miscibilité des solvants. Lors d'une application à température élevée, prenez en compte l'effet de cette température sur la solubilité des solvants.

• Les tampons dissous dans l'eau peuvent précipiter lorsqu'ils sont mélangés avec des solvants organiques.

Lors du remplacement d'une solution tampon forte par un solvant organique, rincez abondamment le système avec de l'eau distillée avant d'y injecter le solvant organique.

Miscibilité des solvants :

Indice de polarité Solvant

Viscosité cP, à 20 °C et 1 atm

Températu-re d'ébulli-tion °C, à 1 atm

Indice de miscibilité, M

Longueur d'onde λ absorbée en nm

0,0 n-Hexane 0,313 68,7 29 ––

1,8 Triéthylamine 0,38 89,5 26 ––

4,2 Tétrahydrofurane (THF)

0,55 66,0 17 220

4,3 Propan-1-ol 2,30 97,2 15 210

4,3 Propan-2-ol 2,35 117,7 15 ––

5,2 Éthanol 1,20 78,3 14 210

5,4 Acétone 0,32 56,3 15, 17 330

5,5 Alcool benzylique 5,80 205,5 13 ––

5,7 Méthoxyéthanol 1,72 124,6 13 ––

6,2 Acétonitrile 0,37 81,6 11, 17 190

6,2 Acide acétique 1,26 117,9 14 ––

6,4 Diméthylformamide 0,90 153,0 12 ––

Miscibilité des solvants C-11

Indices de miscibilité (indices M)Les indices de miscibilité, appelés indices M, permettent de prédire la miscibilité (ou la solubilité) d'un liquide avec un solvant.

Pour prédire la miscibilité de deux liquides, soustrayez le plus petit indice M au plus grand.

• Si la différence entre les deux paramètres est inférieure ou égale à 15, les deux liquides sont miscibles en toutes proportions à 15 °C.

• Une différence de 16 indique une température critique de la solution située entre 25 et 75 °C, 50 °C étant la température optimale.

• Lorsque la différence est supérieure ou égale à 17, les liquides ne sont pas miscibles ou leur température critique de solution est supérieure à 75 °C.

Quelques solvants sont notoirement non miscibles avec les solvants situés aux extrémités de l'échelle de lipophilie. Un double indice M a été attribué à ces solvants.

• Le premier indice, toujours inférieur à 16, indique le degré de miscibilité avec les solvants hautement lipophiles.

• Le second s'applique à l'autre extrémité de l'échelle. Une forte différence entre les deux indices indique un domaine de miscibilité restreint.

Par exemple, certains fluorocarbones ne sont miscibles avec aucun des solvants standard et possèdent des indices M de 0 et 32. Deux liquides possédant un double indice M sont généralement miscibles entre eux.

L'indice M d'un liquide est déterminé en le soumettant à des tests de miscibilité avec une gamme de solvants standard. Un terme de correction de 15 unités est, soit ajouté, soit retranché, de la valeur pour laquelle la miscibilité n'est plus atteinte.

6,5 Diméthylsulfoxyde 2,24 189,0 9 ––

6,6 Méthanol 0,60 64,7 12 210

9,0 Eau 1,00 100,0 –– ––

Miscibilité des solvants : (suite)

Indice de polarité Solvant

Viscosité cP, à 20 °C et 1 atm

Températu-re d'ébulli-tion °C, à 1 atm

Indice de miscibilité, M

Longueur d'onde λ absorbée en nm


Stabilisants pour solvant

Ne laissez pas les solvants contenant des stabilisants comme par exemple, le THF contenant de l'hydroxytoluène butylé, ou BHT, sécher dans le circuit fluidique du système. Le stabilisant résiduel est susceptible de contaminer les circuits fluidiques asséchés, tels que la cuve de circulation du détecteur. Il faut par conséquent procéder à un nettoyage beaucoup plus poussé pour retrouver les conditions de propreté initiales.

Viscosité du solvant

En général, la viscosité du solvant n'entre pas en ligne de compte lorsque vous n'en utilisez qu'un seul avec le système ou que ce dernier est à basse pression. Cependant, en chromatographie de gradient, les changements de viscosité survenant lorsque les solvants sont mélangés dans des proportions différentes peuvent entraîner des changements de pression au cours de l'analyse. Par exemple, un mélange eau/méthanol 1:1 génère une pression deux fois plus importante que celle obtenue avec de l'eau ou du méthanol seul.

Si vous ne savez pas dans quelle mesure l'augmentation de pression influence l'analyse, observez la pression tout au long de l'analyse.

Sélection de la longueur d'onde

Les tableaux de cette section indiquent les valeurs limites d'absorbance UV pour :

• Les solvants les plus fréquemment utilisés

• Les mélanges courants pour phases mobiles

Stabilisants pour solvant C-13

Limites d'absorbance UV des solvants courantsLe tableau ci-dessous indique la limite d'absorbance UV (longueur d'onde à laquelle l'absorbance du solvant est égale à 1 AU) pour certains solvants chromatographiques courants. Procéder à la détection à une longueur d'onde proche ou inférieure à cette limite augmente le bruit de la ligne de base en raison de l'absorbance du solvant.

Phases mobiles mélangéesLe tableau ci-dessous indique les longueurs d'onde absorbées par d'autres solvants, tampons, détergents et phases mobiles. Les concentrations de solvant mentionnées sont les plus fréquemment utilisées. Pour travailler avec des concentrations différentes, il est possible, avec la loi de Beer, de déterminer une absorbance approximative ; elle est proportionnelle à la concentration.

Longueur d'onde absorbée par les solvants chromatographiques les plus courants :

Solvant Longueur d'onde minimale en nm

Acétone 330

Acétonitrile 190

Diéthylamine 275

Éthanol 210

Isopropanol 205

Éther isopropylique 220

Méthanol 205

n-Propanol 210

Tétrahydrofurane (THF) 230


Longueur d'onde absorbée par différentes phases mobiles :

Phase mobile

Longueur d'onde minimale en nm

Phase mobile

Longueur d'onde minimale en nm

Acide acétique, 1 % 230 Chlorure de sodium, 1 M 207

Acétate d'ammonium, 10 mM 205 Citrate de sodium, 10 mM

225

Bicarbonate d'ammonium, 10 mM

190 Dodécylsulfate de sodium

190

Éther laurique de polyoxyéthylène 35 (BRIJ 35), 0,1 %

190 Formiate de sodium, 10 mM

200

3-[(3-cholamidopropyl)-diméthylammonio]-1-propanesulfonate) (CHAPS), 0,1 %

215 Triéthylamine, 1 % 235

Phosphate de diammonium, 50 mM

205 Acide trifluoracétique, 0,1 %

190

Sel disodique de l'acide (éthylènedinitrilo) tétracétique (EDTA disodique), 1 mM

190 TRIS HCl, 20 mM, pH 7,0, pH 8,0

202, 212

Acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazineéthanesulfonique (HEPES), 10 mM, pH 7,6

225 Triton™ X-100, 0,1 % 240

Acide chlorhydrique, 0,1 % 190 Réactif A PIC® de Waters, 1 flacon/litre

200

Acide morpholinoéthanesulfo-nique (MES), 10 mM, pH 6,0

215 Réactif B-6 PIC de Waters, 1 flacon/litre

225

Phosphate de potassium, monobasique, 10 mM dibasique, 10 mM

190190

Réactif B-6 PIC de Waters, faible UV, 1 flacon/litre

190

Acétate de sodium, 10 mM 205 Réactif D-4 PIC de Waters, 1 flacon/litre

190


Absorbance de la phase mobileCette section répertorie les absorbances, à différentes longueurs d'onde, des phases mobiles les plus utilisées. Choisissez soigneusement la phase mobile, de manière à ce que le bruit de la ligne de base soit le plus bas possible.

La phase mobile idéale est celle qui est transparente aux longueurs d'onde de détection sélectionnées. Avec une telle phase mobile, assurez-vous que toute absorbance est due uniquement à l'échantillon. L'absorbance par la phase mobile réduit également la plage dynamique linéaire du détecteur d'une valeur équivalente à la quantité d'absorbance annulée, ou remise à zéro, par la fonction de mise à zéro automatique. La longueur d'onde, le pH ainsi que la concentration de la phase mobile affectent également son absorbance. Le tableau ci-dessous répertorie de nombreuses phases mobiles.

Les absorbances indiquées dans le tableau correspondent à un trajet optique de 10 mm.

Mesure de l'absorbance d'une phase mobile par rapport à l'air ou à l'eau :

Absorbance à une longueur d'onde donnée, en nm

200 205 210 215 220 230 240 250 260 280

Solvants

Acétonitrile 0,05 0,03 0,02 0,01 0,01 <0,01 — — — —

Méthanol (non dégazé)

2,06 1,00 0,53 0,37 0,24 0,11 0,05 0,02 <0,01 —

Méthanol (dégazé) 1,91 0,76 0,35 0,21 0,15 0,06 0,02 <0,01 — —

Isopropanol 1,80 0,68 0,34 0,24 0,19 0,08 0,04 0,03 0,02 0,02

Tétrahydrofurane non stabilisé (THF, frais)

2,44 2,57 2,31 1,80 1,54 0,94 0,42 0,21 0,09 0,05

Tétrahydrofurane non stabilisé (THF, ancien)

>2,5 >2,5 >2,5 >2,5 >2,5 >2,5 >2,5 >2,5 2,5 1,45


Acides et bases

Acide acétique, 1 % 2,61 2,63 2,61 2,43 2,17 0,87 0,14 0,01 <0,01 —

Acide chlorhy-drique, 0,1 %

0,11 0,02 <0,01 — — — — — — —

Acide phospho-rique, 0,1 %

<0,01 — — — — — — — — —

Acide trifluoroacé-tique

1,20 0,78 0,54 0,34 0,22 0,06 <0,02 <0,01 — —

Phosphatede diammonium50 mM

1,85 0,67 0,15 0,02 <0,01 — — — — —

Triéthylamine, 1% 2,33 2,42 2,50 2,45 2,37 1,96 0,50 0,12 0,04 <0,01

Tampons et sels

Acétate d'ammonium, 10 mM

1,88 0,94 0,53 0,29 0,15 0,02 <0,01 — — —

Bicarbonate d'ammonium, 10 mM

0,41 0,10 0,01 <0,01 — — — — — —

Sel disodique de l'acide (éthylènedi-nitril)tétracétique (EDTA disodique), 1 mM

0,11 0,07 0,06 0,04 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02

Acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazineéthane-sulfonique (HEPES), 10 mM, pH 7,6

2,45 2,50 2,37 2,08 1,50 0,29 0,03 <0,01 — —

Acide morpholinoé-thane sulfonique (MES), 10 mM,pH 6,0

2,42 2,38 1,89 0,90 0,45 0,06 <0,01 — — —

Mesure de l'absorbance d'une phase mobile par rapport à l'air ou à l'eau : (suite)


200 205 210 215 220 230 240 250 260 280


Phosphate de potassium, monobasique (KH2PO4), 10 mM

0,03 <0,01 — — — — — — — —

Phosphate de potassium, dibasique, (K2HPO4), 10 mM

0,53 0,16 0,05 0,01 <0,01 — — — — —

Acétate de sodium, 10 mM

1,85 0,96 0,52 0,30 0,15 0,03 <0,01 — — —

Chlorure de sodium, 1 M

2,00 1,67 0,40 0,10 <0,01 — — — — —

Citrate de sodium, 10 mM

2,48 2,84 2,31 2,02 1,49 0,54 0,12 0,03 0,02 0,01

Formiate de sodium, 10 mM

1,00 0,73 0,53 0,33 0,20 0,03 <0,01 — — —

Phosphate de sodium, 100 mM, pH 6,8

1,99 0,75 0,19 0,06 0,02 0,01 0,01 0,01 0,01 <0,01

Tris HCl, 20 mM, pH 7,0

1,40 0,77 0,28 0,10 0,04 <0,01 — — — —

Tris HCl, 20 mM, pH 8,0

1,80 1,90 1,11 0,43 0,13 <0,01 — — — —

Réactifs PIC® de Waters

PIC A, 1 flacon/L 0,67 0,29 0,13 0,05 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02 <0,01

PIC B6, 1 flacon/L 2,46 2,50 2,42 2,25 1,83 0,63 0,07 <0,01 — —

PIC B6, faible UV, 1 flacon/L

0,01 <0,01 — — — — — — — —

PIC D4, 1 flacon/L 0,03 0,03 0,03 0,03 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02 0,01



200 205 210 215 220 230 240 250 260 280


Détergents

BRI J 35, 1 % 0,06 0,03 0,02 0,02 0,02 0,01 <0,01 — — —

3-[(3-cholamido-propyl)-diméthyl-ammonio]-1-propa-nesulfonate) (CHAPS), 0,1%

2,40 2,32 1,48 0,80 0,40 0,08 0,04 0,02 0,02 0,01

Dodécyle sulfate de sodium (SDS), 0,1 %

0,02 0,01 <0,01 — — — — — — —

4-octylphénolpolyé-thoxylate (Triton™ X-100), 0,1 %

2,48 2,50 2,43 2,42 2,37 2,37 0,50 0,25 0,67 1,42

Monolaurate de polyoxyéthylène-sorbitane (Tween™ 20), 0,1%

0,21 0,14 0,11 0,10 0,09 0,06 0,05 0,04 0,04 0,03



200 205 210 215 220 230 240 250 260 280



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ACQUITY UPLC H-Class - Home : Waters · 2010-10-12 · Avis de droits d'auteur ... valides utilisant au moins cinq étalons pour tracer la courbe d'étalonnage. La plage de concentration