ATC , Rouen , 24 Septembre 2011

M. Roumiguières, V.Goutaloy

Apport de la cytogénétique dans le diagnostic des phases leucémiques

des lymphomes de la zone marginale :

- l’expérience du laboratoire Biomnis Lyon -

2www.biomnis.com

Les études cytogénétiques ont permis une grande avancée dans la classification des hémopathies lymphoïdes chroniques.

Le diagnostic et le pronostic des SLP reposent sur:

- les données cliniques

-l’étude cytologique/histologique

-l’étude immunophénotypique

-l’étude cytogénétique

3

Devant la présence d’un hyperlymphocytose (>5000/mm3)

1==> Etude cytologique du frottis sanguin :

Cytologie typique de LLC : petits lymphocytes matures + ombres de Gümprecht

2==> Etude immunophénotypique : Monoclonalité + Score de Matutes

LLC typique : score de Matutes > 3

LLC atypique : score de Matutes = 3

Score de Matutes < 3 = pas une LLC

Immunophénotypage : Diagnostic de certitude de la LLC

4www.biomnis.com

Rôle « PRONOSTIQUE »de la CYTOGENETIQUE

CARYOTYPE FISH

5

Culture en 72h +Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2]

6

Culture en 72h+Oligonucléotides: [DSP30 (CpG stimulants)+ IL2]

7

Pour les scores de MATUTES ≤ à 3

Etude CYTOLOGIQUE : indispensable

ex : Lymphocytes clivés et Lymphome folliculaire

Etude CYTOGENETIQUE : peut permettre de préciser le DIAGNOSTIC et le PRONOSTIC du lymphome malin non hodgkinien B.

-cas de la translocation (14;18)(q32;q21) et lymphome folliculaire

8

CLASSICATION OMS DES LMNH-B

9

Parmi les LZM, 3 hémopathies bien distinctes sont identifiées en fonction des sites atteints :

- le lymphome de type MALT (gastrique principalement) - 50 à 70% - le LZM splénique (S-MZL) – 20% - le LZM ganglionnaire (N-MZL) – 10%

Ce sont généralement des lymphomes indolents du sujet âgé

Prise en charge thérapeutique fonction de l'organe atteint : Antibiothérapie (MALT), Splénectomie

ZONEMARGINALE

10

.... dans le cadre des phases leucémiques des LZM non MALT

Le score de Matutes est souvent nul (=0) ou faible (groupe CD5-/CD10-)

L’analyse cytologique de la prolifération lymphocytaire peut poser des problèmes diagnostiques (à l’exception des lymphocytes villeux)

EXISTE-T-IL UN AUTRE OUTIL DIAGNOSTIQUE ?

dans le cadre du LZM:DIAGNOSTIC HISTOLOGIQUE = DIAGNOSTIC DE CERTITUDE ...

11www.biomnis.com

LZMLZM : Profils génétiques différents

LZM - Malt LZM Splénique ou ganglionnaire

Translocations réciproques Anomalies de nombre

Gains et/ou délétions

t(11;18)(q21;q21) API2 / MALT1

Translocations avec IGH en14q32

t(1;14)(p22;q32) – BCL10-IGHt(14;18)(q32;q21) – IGH-MALT1t (3;14)(p14;q32)- FOXP1-IGH

Trisomie 3 / 3q Del 7q Trisomie 18 Del 6q Trisomie 12 / 12q Del 8p

12

Comment poser un diagnostic de LZM ?

Intérêt de la cytologie ? Oui si L.villeux

Intérêt de l’immunophénotypage ? Matutes 0 à 2 et groupe CD5- / CD10-

souvent insuffisant

Intérêt de la cytogénétique ? Peut apporter une aide précieuse +++

13www.biomnis.com

Etude de 3 cas cliniqueset

Experience de Biomnis sur 2009-2011

14

Hyperlymphocytose à 14 G/l

Cytologie atypique

Lymphocyte B normal

15

Immunophénotypage :

Matutes < 3 (1/5)

Groupe CD5- / CD10-

Phase leucémique de quel LMNH-B ?

16

Délétion de la bande 7q32 = commune à tous les LZM

3q31

q3546,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35)

17

4646,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),del(8)(p12)

Evolution en 2 clones:

1er clone : del (8)(p12)

18

46,XX,dup(1)(q12q44),del(7)(q31q35),der(8) t(8;12) (p12;q13)

2ème clone :

der8 t(8;12)(p12;q13)

= délétion 8p et trisomie 12q partielle

19

Hyperlymphocytose à 58 G/l,

Cytologie atypique

Lymphocyte B normal

20

Immunophénotypage :

Matutes < 3 (0/5)

Groupe CD5- / CD10-

Phase leucémique de quel LMNH-B ?

21

4747,XX,+12

22

D13S319D13S1020

D12Z1

4747,XX,i(8)(q10),+12.nuc ish(D12Z1x3,D13s319x2,D13S1020x2

i(8)(q10)

= délétion 8p et trisomie 8q

23

Hyperlymphocytose à 33G/l

Cytologie très évocatrice : Lymphocytes villeux

Lymphocyte B normal

24

Matutes < 3

Groupe CD5- / CD10-

LZM splénique à lymphocytes villeux

25

5’IGH

3’IGHIGH

LSI IGH Dual Color, Break Apart Rearrangement

46,XX,t(6;14)(p21;q32).nuc ish(IGHx2)(5’IGH sep 3’IGHx1)

26www.biomnis.com

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM

AU LABORATOIRE BIOMNIS 2009 2011

27www.biomnis.com

17 cas identifiés :

7 hommes, 10 femmes Age moyen : 74 ans

28www.biomnis.com

29

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011

Au point de vue cytologique :

Très grand polymorphisme de la cellule lymphomateuse,

Hétérogénéité des données cytologiques dans 94 % des cas (sauf L.Villeux)

Taille moyenne, Chromatine mature, parfois nucléolée, Noyau +/- régulier, Cytoplasme au contour +/- régulier et +/- abondant, Nucléole +/- visible,

= MANQUE FREQUENT DE SIGNATURE CYTOLOGIQUE

www.biomnis.com

30

ETUDE RETROSPECTIVE DES PHASES LEUCEMIQUES DE LZM 2009 2011

Au point de vue immunophénotypique:

www.biomnis.com

Score de Matutes Fréquence

0 35 %

1 35 %

2 30 %

3 0 %

CD5 - / CD10 - dans 94% des cas( 1 cas CD5+ = LZM/CD5+ ?)

31www.biomnis.com

32

Au point de vue cytogénétique :

www.biomnis.com

Anomalies cytogénétiques en association ou non

Fréquence

+3,+18 24 %

del (7)(q32q35) 21 %

+3, del (7q) 18 %

+3, ou +3q 12 %

+3, +12 5 %

3+, iso8q ( = del (8p)),+18 5 %

+12, i(8)q (del (8p)) 5 %

del 7,del(8p) 5 %

+3, +18, del(14q) 1cas

t (6;14) 1 cas

33

Chromosomes impliqués Fréquence

3 65 %

7 41%

18 29 %

8 23 %

12 11 %

34www.biomnis.com

Associations d’anomalies chromosomiques dans 76 % des cas.

Anomalies cytogénétiques en association ou non

Fréquence

+3,+18

association isolée ou avec caryotype complexe

iso8q, del6q, del14q,+18

38 %

+3 ,del 7qassociation isolée ou avec caryotype

complexe+3q, del6q,

23 %

del 6q, del 7q, 15%

+3, +12 8 %

+12, i(8)q (del 8p) 8%

del 7,del 8p 8%

35www.biomnis.com

Anomalies cytogénétiques isolées

Nombre de cas

+3, ou +3q 2 cas

del (7)(q32q35) 1 cas

t(6;14) 1 cas

Anomalies isolées dans 24% seulement des cas

36www.biomnis.com

Nombre d’anomalies dans le LZM

Fréquence

1 18 %

2 24 %

3 et > 3 58%

37www.biomnis.com

Pas de délétion ATM (caryotype et FISH)

Pas de délétion 13q14 (caryotype et FISH)

2 délétions p53 dans notre série (11 % des cas)

par iso (17q) =>

SEUL CRITERE PRONOSTIC PEJORATIF dans les LZM ?

38

Salido et al, Blood 2010

perte

gain

N = 330

N = 330Salido et al, Blood 2010

39

Chr 3

perte

gain

3q25 3q29 = région commune surreprésentée

40

Chr 7

perte

gain

7q32.1-32.2

= région commune délétée

Gènes candidats ???

41

Chr 1 Chr 6 Chr 8 Chr 14

perte

gain

dup(1q) ? del(6q) ? del(8p)/+8q?del(14q) ?

réarrangement 14q32 ?

IGH

42

Cytogénétique

Cytologie

Immuno-phénotypage

Diagnostic du LZM

43