Contrôle de qualité externe pour l’analyse du sperme ... file1. Echantillons Les échantillons ont été envoyés le 23 octobre 2006. Les suspensions, les frottis et le DVD pour

Institut scientifique de Santé Publique

Section de Biologie Clinique

Contrôle de qualité externe pour l’analyse du sperme Enquête 2006-3: rapport global

Comité d’experts ad hoc : Dr. U. Punjabi (UZA); Dr. G. Verheyen (VUB); Dr. A. Mahmoud (UzG);); Dr. C. Spiessens (KUL); Dr. G. Depré (ULB); Dr. E. Bosmans (Genk); Dr. Ch Wyns ( UCL) Ce rapport ne peut être reproduit, publié ou distribué sans l’accord de l’ISP

Analyse de sperme. Rapport Global 2006/3 1/15 Date d’impression: 23/01/2007

Dr. J.C. Libeer (IPH) Scheme coordinator [email protected]

02 642 55 27 Dr. U. Punjabi (UZA) 03/821 33 65 [email protected] Dr. G. Verheyen (VUB) 02/477 50 50 [email protected] Prof. A. Mahmoud (UzG) 09/240 21 33 [email protected] Dr. C. Spiessens (KUL) 016/34 42 02 [email protected] Dr. G. Depré (ULB) 02/555 67 41 [email protected] Dr. E. Bosmans (ZOL, Genk) 0477 31.21.69

[email protected] Dr. Ch. Wyns (UCL) 02/764.11.01

[email protected]


mailto:[email protected]

mailto:[email protected]

1. Echantillons Les échantillons ont été envoyés le 23 octobre 2006. Les suspensions, les frottis et le DVD pour la motililité viennent de ESHRE. Un test d’homogénéité n’a pas été exécuté cette fois.

2. Participants Nous avons reçu les résultats de 129 participants. Les diagrammes en camembert suivants donnent la répartition des cellules de numération réutilisables utilisées pour le spermogramme (numération des spermatozoïdes), les critères et les colorations utilisées pour l’évaluation morphologique (spermocytogramme).

Reusable chambers

Bürker15%

Fuchs-Rosenthal5%

Improved Neubauer66%

Makler5%

Thoma9%


Morphology criteria

WHO 199934%

Tygerberg66%

Staining procedures

Diff-Quick12%

Giemsa4%

Pap modified13%

Pap/Wright50%

Shorr5%

Spermac16%


Comments on spermac Last October 2006, during the Basic Semen Analysis Course, the experts had the privilege of checking the pre-stained morphology slides brought in by some of the candidates during the morphology module. There were some observations made on the slides pre-stained with Spermac. This stain is supposed to be used in Coplin jars to stain the semen smears. On the contrary, some of the candidates use this stain by dropping it drop-wise directly on the smear. This creates sometimes an osmotic shock by which some of the spermatozoa become deformed due to the tremendous swelling and ultimate rupturing of the plasma membrane. As a consequence, during morphology scoring these spermatozoa are specifically rejected causing a bias which is introduced due to bad laboratory technique. (Usha Pujabi, UA) 3.1. Spermogramme (numération des spermatozoïdes) Pour l’échantillon 621count les résultats suivants ont été obtenus : Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Experts (N=8) 24,6 22,5 5,98 24,3 18,6 36,1 20,8 26,7 Participants (N= 132)

30,7 26,8 6,87 25,7 9,0 267,0 22,4 31,9

Groupe Neubauer/ positif displacement pipet (N= 50)

25,8 25,7 6,37 24,8 12,4 39,0 21,1 29,7

Résultats ESHRE: Les résultats des groupes experts et Neubauer sont comparables avec ceux du groupe ESHRE. A l’exception d’un résultat très haut, les résultats des participants sont aussi comparables. Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Participants (N= 27)

23 26 7 30.4 12 34 19 28

Pour l’échantillon 623D les résultats suivants ont été obtenus : Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Experts (N=8) 80,5 75,1 50,8 63,2 4,3* 190,0 71,9 78,9 Participants (N= 132)

71,3 73,9 14,3 19,4 2,1 231,5 64,8 83,9

Groupe Neubauer (N= 81)

71,8 73,7 8,52 11,6 3,9 117 68,0 81,3

* Un laboratoire expert a encore dilué l’échantillon 1/20.


Résultats ESHRE: Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Participants (N= 27)

69 73 22 31,9 10 104 55 80

Les résultats belges sont comparables avec ceux du groupe ESHRE (la dispersion est même meilleure) La médiane du ratio des numérations (échantillon 621//623D) pour les laboratoires experts est 0,31; pour les participants: 0,36. Les diagrammes en « Box –Whisker » de tous les échantillons sont donnés en appendice. Chaque participant doit situer ses résultats dans les diagrammes. Les résultats en dehors du percentile 25 et 75 (résultats en dehors des boîtes) doivent être reconsidérés. Si les résultats tombent en dehors des percentiles 10 et 90, la méthode utilisée doit être revue. Eventuellement, vous pouvez consulter un des experts. On n’a pas observé d’erreurs systématiques. 11 Participants ont encore une fois dilué l’échantillon pré-dilué. 3.2. Morphologie (spermocytogramme) L’échantillon 621 était précoloré selon la méthode OMS recommandée. Il est considéré comme anormal par tous les experts; 99% des participants considèrent aussi cet échantillon anormal. Les diagrammes en « Box –Whisker » de tous les échantillons sont donnés en appendice. Les résultats suivants sont obtenus: De volgende resultaten werden verkregen: Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Experts (N=8) 2,8 1,5 2,53 90,1 0,5 7,0 1,0 4,5 Participants (N=115)

6,4 4,0 5,09 127,4 0,5 36,0 2,0 8,8

ESHRE resultaten: Les résultats des experts belges sont comparables à ceux du groupe ESHRE. Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Participants (N= 27)

2 1 2 100 0 7 0 2


L’échantillon 623 est considéré comme normal par 5/8 experts; 62% des participants considèrent cet échantillon comme normal également. Les diagrammes en « Box –Whisker » de tous les échantillons sont donnés en annexe. Les résultats suivants sont obtenus, basés sur les critères utilisés (strict, OMS): Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Experts (N=8) 11,3 11,5 4,74 42,2 4,0 19,0 9,0 14,0 Participants (N=116)

18,9 16,5 9,26 56,1 2,0 75,0 10,5 23,0

Résultats ESHRE: Moyenne Médiane ET CV Min Max P25 P75 Participants (N= 27)

10 9 6 60 2 30 6 12

Détails des anormalités observées (valeurs médianes): Echantillon 621 Echantillon 623 B EQA ESHRE B EQA ESHRE % normal 4 1 16 9 % anomalies tête 89 98 65,5 88 % anomalies pièce interm. 19 32 20 26 % anomalies flagelles 22 18 20 16 % inclusions cytoplasmiques 4 1 3 2 On constate une surestimation des têtes normales et une sous-estimation des anomalies de la tête et de la pièce interne chez les participants belges. Les critères OMS 99 et Strict devraient donner les mêmes résultats; cependant ce n’est pas le cas si l’on compare les résultats des deux groupes. L’application correcte des critères de Tygerberg et de l’OMS requiert une coloration permettant une bonne visualisation du flagelle et de la pièce intermédiaire. C’est pourquoi, la coloration de Giemsa n’est pas appropriée. Il est recommandé d’utiliser les colorations de Papanicolaou (modifié selon les recommandations OMS), Shorr, Spermac ou Diff-Quick. Chaque participant doit situer ses résultats dans les diagrammes. Les résultats en dehors du percentile 25 et 75 (résultats en dehors des boîtes) doivent être reconsidérés. Les résultats en dehors du percentile 10 et 90 (résultats en dehors des « whiskers ») sont inacceptables. Les participants rapportant ≥50% de formes normales doivent revoir leur critères car il est impossible d’obtenir un pourcentage aussi élevé en appliquant correctement les critères de Tygerberg ou de l’OMS 1999. La méthode utilisée doit être revue. Eventuellement, vous pouvez consulter un des experts.


Influence possible après une meilleure formation ? Dans le courant de l’année 2006, nous avons donné la possibilité d’organiser une formation via le tutorial Strict 1-2-3 qui était mis à disposition. Nous avons comparé pour la morphologie les résultats de l’enquête 2005/3 (avant la formation) avec ceux de 2006/3 (après la formation). Dans les deux cas, il s’agissait des échantillons ESHRE (2005/521 et 523 ; 2006 : 621 et 623). Tant en 2005 qu’en 2006, il existe pour tous les échantillons une différence fortement significative entre les médianes du groupe des participants belges et des participants ESHRE. Valeur P pour le test Wilcoxon pour les différents échantillons : Echantillon 2005: 521 2005: 523 2006: 621 2006: 623 Valeur-P 6235.329e-15 <2.2e-16 <2.2e-16 2.2e-16 Les résultats des laboratoires belges sont-ils situés plus près des résultats ESHRE en 2006 qu’en 2005 ? Ici aussi, il n’y a aucune différence tangible entre 2005 et 2006. Conclusion : aucune influence n’a pu être observée même après une meilleure formation. 3.3 Motilité Le DVD ESHRE contient 4 échantillons. Chaque échantillon contient un nombre suffisant de spermatozoïdes pour que 200 puissent y être comptés. Aperçu des résultats : Voir annexe : Les résultats des participants belges sont bien comparables à ceux obtenus dans l’enquête ESHRE.


Proportion motile sperm

(a + b + c)

ESHRE participants N Mean SD CV M Min Max P25 P75

621 26 57 8 14,0 57 43 74 52 63 622 26 64 7 10,9 64 50 76 61 68 623 26 50 7 14,0 50 35 64 46 55 624 26 53 7 13,2 52 42 73 50 58

BE participants N Mean SD CV M Min Max P25 P75

621 119 51 10 17,5 56 30 80 47 61 622 119 56 9 13,7 62 45 82 55 66 623 119 43 8 16,9 46 30 80 42 52 624 119 48 10 18,5 52 35 90 45 58

Proportion progressive sperm (a + b)

ESHRE participants N Mean SD CV M Min Max P25 P75

621 26 53 9 17,0 51 33 74 48

59 622 26 59 7 11,9 58 46 75 55

63

623 26 38 11 28,9 39 4 57 33

45 624 26 46 7 15,2 45 33 67 40

49

BE participants

N Mean SD CV M Min Max P25

P75

621 121 45 9 17,8 50 19 71 40

54 622 121 50 9 16,2 55 27 80 47

60

623 121 33 7 21,2 35 17 55 30

40 624 121 39 8 19,4 42 20 85 47

58

Proportion rapid progressive sperm (a)

ESHRE participants


P75

621 26 35 13 37,1 37 7 56 29

43 622 26 45 12 26,7 48 13 63 38

51

623 26 5 11 220 1 0 48 1 3 624 26 28 9 32,1 28 12 44 21

35

BE participants


P75

621 122 32 17 48,7 35 6 62 20

43 622 122 39 13 29,3 43 2 75 33

50

623 122 5 4 123,5 3 1 44 1 6 624 122 24 9 35,6 25 6 70 18

30


Reminder According to the definitions given in the WHO manual: a. Rapid progressive motility (i.e., ≥ 25 μm/sec at 37°C and ≥ 20 μm /s at 20°C. Note that 25 μm is approximatively equal to five head lengths or half a tail length; b. Slow progressive motility c. Nonprogressive motility (<5 μm/s) d. Immotility

4. Calendrier des enquêtes d’analyse du sperme 2007 2007/1: 5 mars 2007

5. Littérature

F. Comhaire and L. Vermeulen. Human semen analysis. Human reproduction Update 1995 (vol. 1) 4 343-362. British Andrology Society: Seminal fluid analysis & Anti-sperm antibody testing. Standard operating procedures laboratory manual: http://www.ReproMED.org.uk/bas/bas1.html

WHO laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. Fourth edition. Cambridge University Press. ISBN 0 521 64599 9 Nordic Association for Andrology: Manual for basis semen analysis 2000: http://www.ki.se/org/nafa/manual/manual.html ESHRE Monographs. Manual on Basic Semen Analysis. editors: U. Kvist and L. Björndahl. Oxford University Press ISSN 1477-741x.


6. Annexes Résultats globaux

Echantillon 621: Numération de cellules Echantillon 623D: Numération de cellules Echantillon 621: Morphologie Echantillon 623: Morphologie Echantillon 621 : Motilité Echantillon 622 : Motilité Echantillon 623 : Motilité Echantillon 624 : Motilité

Box-Whisker plots:

Echantillon 621: Numération de cellules Echantillon 621: Numération de cellules (cellules utilisée) Echantillon 623D: Numération de cellules Echantillon 623D: Numération de cellules (cellules utilisée) Ratio échantillon 621/623D Echantillon 621: Morphologie (coloration) Echantillon 621: Morphologie (critères) Echantillon 623: Morphologie (coloration) Echantillon 623: Morphologie (critères)

0

50

100

150

200

250

300

Count 1 Experts 1

Results Sample 621: Cell counting


0

50

100

150

200

250

300

Impr

oved

Neu

baue

r

Impr

oved

Neu

baue

r + p

os d

ispl

Bürk

er

Fuch

s-R

osen

thal

Mak

ler

Dis

posa

ble

Thom

a


0

25

50

75

100

125

150

175

200

225

250

Count 2 Experts 2



0

25

50

75

100

125

150

175

200

225

250

Impr

oved

Neu

baue

r

Bürk

er

Fuch

s-R

osen

thal

Mak

ler

Dis

posa

ble

Thom

a


0

2

4

6

8

10

12

Overall ratio Experts ratio

Results Ratio sample 621/623


0

2

4

6

8

10

12

Impr

oved

Neu

baue

r

Bürk

er

Fuch

s-R

osen

thal

Mak

ler

Dis

posa

ble

Thom

a

Results Ratio sample 621/623

0

5

10

15

20

25

30

35

40

Tygerberg WHO 1999

Results Sample 621: Morphology criteria


0

5

10

15

20

25

30

35

40

Uni

ts

Papanicolaou modified

Results Sample 621: Morphology staining

0

10

20

30

40

50

60

70

80

Tygerberg WHO 1999

Results Sample 623: Morphology criteria

0

10

20

30

40

50

60

70

80

Diff

-Qui

ck

Gie

msa

Papa

nico

laou

Papa

nico

laou

mod

if

Shor

r

Sper

mac

Results Sample 623: Morphology staining


Page:19/01/2007Ministery of public Health

IPH Clinical Biology sectionExternal quality assessment for sperm tests

1

GLOBAL RAPPORT / SPERM 2006/3

Method Mean Median SD CV Minimum Maximum N

Sample 621 Count

9 267 13230,65 26,80 7,03 26,24Global results

17,9 41,31 526,84 23,60 3,42 14,52Disposable chamber

Reusable chambers

19,3 179 1837,84 27,25 8,30 30,46RC.Bürker

9 45,4 730,41 32,60 9,60 29,46RC.FUCHS-Rosenthal

18 33,15 3025,86 26,05 4,22 16,22RC.improved Neubauer

12,4 39 5025,80 25,50 6,37 25,00RC.improved Neubauer With Positive Displacement

34 267 680,27 38,06 24,09 63,29RC.Makler

17,6 40 1128,70 30,60 7,32 23,92RC.Thoma



2


Method Mean Median SD CV Minimum Maximum N

Sample 623D Count

2,1 231,5 13271,28 73,85 14,34 19,42Global results

32,5 231,5 593,20 58,50 36,69 62,72Disposable chamber

Reusable chambers

3,17 97 1871,35 77,80 13,34 17,15RC.Bürker

4,12 91,4 755,28 54,72 25,14 45,95RC.FUCHS-Rosenthal

3,9 117 8171,83 73,70 8,52 11,56RC.improved Neubauer

3,7 103 665,95 80,50 47,44 58,93RC.Makler

3,69 105,6 1163,80 75,30 24,73 32,84RC.Thoma

---------- End ----------



1


Sample 621 Morphology - Normal forms

Method Mean Median SD CV Minimum Maximum Normal Abnormal N

0,5 36 1 % 99 % 1186,30 4,00 5,00 125,09Global results for criteria

Criteria

0,5 12,5 100 % 784,00 3,00 3,33 111,19Tygerberg criteria

1 36 3 % 97 % 3910,87 8,00 8,52 106,56WHO criteria(1999)

0,5 36 1 % 99 % 1186,30 4,00 5,00 125,09Global results for staining procedure (Papanicolaou)



2


Sample 623 Morphology - Normal forms

Method Mean Median SD CV Minimum Maximum Normal Abnormal N

2 75 62 % 38 % 11918,84 16,00 9,08 56,75Global results for criteria

Criteria

2 75 67 % 33 % 7916,16 15,00 6,78 45,21Tygerberg criteria

3 68 54 % 46 % 3924,16 21,00 11,23 53,47WHO criteria(1999)

2 75 62 % 38 % 11918,84 16,00 9,08 56,75Global results for staining procedure

Staining procedure

9 36 64 % 36 % 1418,60 17,00 9,63 56,68Diff-Quick (test simplets)

10,5 25 50 % 50 % 419,87 22,00 6,85 31,16Giemsa + modifications

2,3 46 63 % 38 % 1618,64 16,00 11,11 69,49Papanicolaou/Modified

2 68 61 % 39 % 5816,87 15,00 8,52 56,83Papanicolaou/Wright

13 43 50 % 50 % 723,00 17,00 11,86 69,76Shorr

7 75 72 % 28 % 1824,12 18,00 13,56 75,36Spermac



1


Class Mean Median SD CV Minimum Maximum N

Sample 621 Motility

6 62 12531,97 35,00 16,30 46,591.Rapid progressive (a) %

2 52 12513,51 11,00 8,15 74,122.Slow progressive (b) %

1 51 1266,48 5,00 5,18 103,783.Non progressive (c) %

9 70 12738,82 42,00 10,37 24,704.Immotile (d) %

19 71 12444,92 50,00 8,89 17,795.% progressive (a+b) %

30 80 12251,19 55,80 10,00 17,936.% motile (a+b+c) %



2



Sample 622 Motility




18 55 12733,29 36,00 7,41 20,594.Immotile (d) %

27 80 12450,13 55,00 8,89 16,175.% progressive (a+b) %

45 82 12256,68 62,00 8,15 13,156.% motile (a+b+c) %



3



Sample 623 Motility




20 70 12746,76 52,00 8,15 15,684.Immotile (d) %

17 55 12432,72 35,00 7,41 21,175.% progressive (a+b) %

30 80 12243,54 46,50 7,41 15,946.% motile (a+b+c) %



4



Sample 624 Motility




10 65 12742,31 46,00 8,89 19,334.Immotile (d) %

20 85 12438,99 42,00 8,15 19,415.% progressive (a+b) %

35 90 12248,20 52,00 9,63 18,536.% motile (a+b+c) %

---------- End ----------

Documents

Contrôle de qualité externe pour l’analyse du sperme ... file1. Echantillons Les échantillons ont été envoyés le 23 octobre 2006. Les suspensions, les frottis et le DVD pour