Gène de susceptibilité HLA et Rétinopathie diabétique

Dr. RAACHE R

IPA-USTHB

La rétinopathie représente une des complications les plus fréquentes et

les plus précoces de la micro-angiopathie diabétique. Elle est

caractérisée par deux processus physiopathologiques souvent associés,

ischémie et œdème, secondaires à des altérations de la paroi des

capillaires rétiniens.

Les anomalies histologiques initiales consistent

Epaississement de la membrane basale,

Disparition des péricytes

Modifications des cellules endothéliales.

A B C

FIGURE : Les différentes phases cliniques de la rétinopathie diabétique

R D N P. Rares microanévrymes et

hémorragies rétiniennes ponctuées

R D pré-p. Hémorragies , microanévrysmes , anomalies microvasculaires intrarétiniennes,: ischémie.

R D P . Hémorragies à partir d’un foyer

de néo vascularisation

Mécanisme Physiopathologique de la RD(Lorenzi, 2007)

La rétine normale , cellules endothéliales vasculaires stable, peu d’activité mitotique

Hypoxie ,occlusions capillaires , cellules rétiniennes

secrètent des facteurs biochimiques qui diffusent et induisent la formation de néovaisseaux .

Le développement de la rétinopathie dépend de plusieurs facteurs,

•déséquilibre glycémique et

•la durée du diabète.

Cependant, RD est une affection multifactorielle son développement et

son extension sont influencés par de nombreux facteurs de risque, à

savoir le facteur génétique lié au système HLA (Human Leucocyt

antigen).

Figure: Organisation génomique du système HLA ( Klein et al, 2000)

Le complexe majeur d’histocompatibilité (CMH)

But du travail

Recherche d’une association entre les marqueurs HLA classe I et II

et la rétinopathie diabétique chez la population Algérienne

Matériels et Méthode Population étudiée L’étude a porté sur 52 sujets présentant un diabète auto- immun diagnostiqués selon les critères d’ADA et de l’OMS et recrutés au niveau du service de diabétologie du CHU Mustapha, Alger. Comprenant 27 sujets DT1 avec RD (moyenne d’âge de 24,9±3,9) de sexe (16 hommes 50 et 11 femmes) 25 sujets DT1 sans RD (moyenne d’âge 51 de 44,6±12,8) de sexe (18 hommes et 7 52 femmes). 140 sujets sains non apparentés (moyenne d’âge de 30 ±14 ans) de sexe (87 femmes et 53 hommes) ne présentant aucun antécédent personnel et familial de maladies chroniques ou auto immunes.

Caractéristiques Sujets DT1 avec RD

N= 27

Sujets DT1 sans RD

N= 25

Témoin N= 140

Age (ans) 24,9 ± 3,9 44,6 ± 12,8 30 ±14 ans

Début du diabète (ans) 22 ± 12 23 ± 11 -

Durée du diabète (ans) 17,0 ± 5,1 30,1 ± 9,1 -

l’insuline UI/kg 0,85 ± 0,30 0,7 ± 0.29 m = 7,78

HbA1c (%)

9,9 ± 2,2 8,0 ± 1,6 6 ± 1,006

BMI (kg/m2) 3,2 ± 3,1 23,2 ± 3,1 23,44 ± 9,3

TABLEAU : Les caractéristiques générales des patients DT1 avec et sans rétinopathie

Étude statistique Fréquences phénotypiques des antigènes HLA des témoins et des malades p≤0,05 IC 95 %. L’évaluation du l’odds ratio (OR), Logiciel COMPARE 2.

Plasma CMN MSL GR

Méthode Le typage HLA de classe I et II à été réalisé par la technique sérologique après séparation des cellules mononuclées.

CELLULE

B

Fluorobeads

Billes Immunomagnétiques recouvertes d’anticorps monoclonaux LB

Séparation des cellules mononuclées. Gradient Ficoll LT+LB

2 x 106/ml lymphocytes

1 l de lymphocytes T ou B

10 l de Stain-Fix™ ou 5 l de Fluoroquench™

lecture

Typage HLA classe I et II par la technique

de microlymphocytotoxicité

1 heure incubation

30 minutes incubation

5 l de complément de lapin Classe I ou II

Complément de lapin

Résultats

0,00%

20,00%

40,00%

60,00%

80,00%

A1 A2 A3 A9 A10 A23 A24 A29 A30 A31 A32 A33 A28 A68

0,1887 0,1698

0,1038

0,1792

0,0566

0,1698

0,0472 0,0755

0,0377

0,2264

0,1415 0,12

0,16

0 0,04

0

0,2

0 0 0

0,16 0,2

0,0741 0,0741 0,037

0

0,2963

0,037

59,26

0,0741 0,037 0,0241

0

Fré

qu

en

ces

%

Antigènes classe I A

Témoins (N=106) DT1 sans RD (N=25) DT1 avec RD(N=27)

PC = 7.610-10

Fréquences des antigènes HLA-A (classe I) chez les DT1 avec et sans rétinopathie par rapport aux témoins

HLA-A29:(59,26%, 0% vs 5,66%) ( D1 RD, D1 sans RD /Témoins)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

DR1 DR2 DR3 DR4 DR5 DR8 DR9DR11 DR13 DR14 DR15

DQ1 DQ2 DQ4 DQ6 DQ7 DQ8

79,17

70,83

37,5

73,08

Pc= 5.210-5

76,92

57,69

Fré

qu

en

ce (

%)

Antigènes Témoins (N= 140) DT1 sans RD ( N=24) DT1 avec RD (N=26)

TABLEAU : Comparaison des marqueurs HLA de classe II chez les DT1 avec rétinopathie par rapport aux DT1 sans RD

0,00%

5,00%

10,00%

15,00%

20,00%

25,00%

30,00%

35,00%

B7 B8 B14 B12 B17 B18 B21 B27 B35 B51 B58 B65 B40 B49

0,1604

0,2641

0,1698 0,1698

0,066

0,1226

0,2624

0,0566

0,1038 0,1038

0,0283

0,1132

0,0094

22,64

0,04 0,04 0 0 0

0,16

0 0,04

0,08 0,08 0,08 0,12

0,04

28

0,037 fré

qu

en

ces

%

Antigènes

Témoins (N=106) DT1 sans RD(N=25) DT1 avec RD (N=27)

Fréquences des antigènes HLA- B (classe I) chez les DT1 avec et sans rétinopathie par rapport aux témoins

P c= 0.257

HLA-DR9 : (29,63%, 0% vs 4,29%)

0

5

10

15

20

25

30

A1 A2 A3 A9 A10 A23 A24 A29 A30 A31 A32 A33 A28 A68

0,59 0,53 0,48 0 0,2 0 1,14

0 1,54

0 1,07

0 0,65 1,52 2,15 0,22 0,2 0,1 0

3,64

0,18

24,24

0,39 0,78 0,98 0,98 0,27 0

Od

d R

atio

(O

R)

Antigènes

DT1 sans RD (N=25) DT1 avec RD (N=27)

OR des différents antigènes HLA A de classe I chez les sujets DT1 avec et sans rétinopathie

Pc = 4.6 10-7

0

2

4

6

8

10

DR1 DR2 DR3 DR4 DR5 DR8 DR9 DR11 DR13 DR14 DR15 DQ1 DQ2 DQ4 DQ6 DQ7 DQ8

0,38 0,15

8,29

3,29

0,24 0,57 0 0,29 0,57

6,27

0,25 0,04

3,75

0 0,41 0

2,51

0,35 0

5,92

1,74

0 0,52

9,93

0 0,52

0

1,7

0

5,15

0,33 1,5

0,38

5,71

Od

d R

atio

(O

R)

Antigènes

DT1sans RD (N=24) DT1 avec RD (N=26)

Risques Relatifs des différents antigènes HLA de classe II chez les sujets DT1 avec et sans rétinopathie

0

1

2

3

4

5

B7 B8 B14 B12 B17 B18 B21 B27 B35 B51 B58 B65 B40 B49

0,22 0,12 0 0 0

1,36

0

0,69 0,75 0,75

2,99

1,07

4,38

1,33

0 0 0,19 0,19 0,54

0 0,11 0,64

1,96

0 0 0

4,04

0,13 Od

d r

atio

(O

R)

Antigénes

DT1 sans RD (N=25) DT1 avec RD (N=27)

FIGURE : OR des différents antigènes HLA de classe I chez les sujets DT1 avec et sans rétinopathie

Les résultats de notre étude montrent que l’antigène HLA-A29 a un risque 2,56 fois

plus important par rapport au HLA-DR9, ceci suggère que ces marqueurs sont probablement des marqueurs de susceptibilité à la RD et que le marqueur HLA -B49 (21) a probablement un effet protecteur dans la population algérienne.

Plusieurs études ont rapporté des associations HLA de classes I et II avec la RD dans

différentes populations :

• Gray et al, 1982 susceptibilité HLA-DR4 et protecteur HLA-B7 chez la population

britannique.

• Ioannis et al, 1983 susceptibilité HLA-A1 et HLA-B8 chez la population grecque.

• Cisse et al, 1998 susceptibilité HLA-DR9 chez la population sénégalaise

Nos résultats ne montrent aucune différence significative entre les DT1 avec RD et

sans RD pour les marqueurs DR3, DR4, DQ2 et DQ8, ceci confirme que ces

antigènes ne sont pas liés à la RD dans notre population. La fréquence élevée de ces

marqueurs est liée au risque de l’apparition du DT1 dans la population algérienne

(Raache et al, 2010) .

Cependant le système HLA est le plus fort facteur génétique de risque

qui contribue au développe ment de la RD indépendamment des niveaux

de glycémie . Malgré l’identification d’une association, le mécanisme

exact du rôle du système HLA dans la RD est toujours mal connu.

Cependant, des études ont montré que chez les DT1, le nombre de

cellules des îlots résiduels influence sur la qualité du contrôle glycémique

et la destruction complète des îlots de Langerhans est liée à la présence

des marqueurs génétiques du système HLA . Plusieurs travaux ont

rapporté une association du DT1 avec les marqueurs HLA de classe I

(A1, B8) et de classe II (DQ2 et DQ8).

Conclusion

l’antigène HLA-A29 e HLA-DR9 son des marqueurs de susceptibilité à la RD et que

le marqueur HLA -B49 a probablement un effet protecteur chez la population algérienne.

Les complications micro-vasculaires débutent chez le patient diabétique dès le début

de l’exposition à l’hyperglycémie chronique mais ne sont diagnostiquées cliniquement

qu’après une dizaine d’année d’évolution de la pathologie ; ces complications peuvent

être prévenues par la recherche de marqueur génétique de prédisposition.

Perspectives rechercher l’association

• Néphropathie