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LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 1/29
Agence fédérale
pour la sécurité de
la chaîne alimentaire
Laboratoire de Liège
MET-LFSAL-404
I-MET
DETECTION DE RESIDUS DE 13 PESTICIDES ORGANOPHOSPHORES PAR GC-MS DANS LES MATRICES D’ORIGINE ANIMALE SUIVANTES :
FOIE, TISSU MUSCULAIRE, POISSON, LAIT, FROMAGE, BEURRE, ŒUF ET MIEL.
- METHODE DE SCREENING A 10 µg/kg
Version 09
Date d’application 2014-08-14
Rédaction par : Thierry De Tandt (Expert technique) (2014-08-14)
Vérification par : Luc Bollen (Quality Manager) (2014-08-18)
Autorisation de publication par : Fabian Etienne-Thewissen (Chef de section) (2014-08-14)
Gestion et localisation de la
version valide :
LFSAL : disque local M:\Qualité\ Méthode\
Destinataires : Membres du personnel de la section Phyto-Résidus.
Mots clefs : Pesticide – Organophosphoré - animale - GC - MS - Screening
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 2/29
Aperçu des modifications
Révision par/date* Motif de la révision Partie de texte / portée de la
révision
De Tandt Thierry
2010/03/03 Première version
De Tandt Thierry
2010/07/27 Remarques audit Belac mars
2010
Titre, séquence
De Tandt Thierry
2011/02/23 Ajout de la détection par MS-MS.
Ajout de la liste des 13 pesticides
dans l’objectif.
Principe, définition, séquence,
conditions instrumentales,
annexes
De Tandt Thierry
2011/08/05 Indication de la réalisation des
contrôles 2ème
et 3ème
ligne. +
adaptations nouveau template +
Tableau caractéristiques de
performance.
6. Caractéristiques de
performance
11. Contrôle de la qualité
Les adaptations au nouveau
template (première page et titres)
ne seront pas marquées.
De Tandt Thierry
2012/11/20 Précision sur la préparation +
suppression des tableaux de
critères de performances et renvoi
au rapport de validation.
6. Caractéristiques de
performance
10.1 Préparation des échantillons
inconnus
De Tandt Thierry
2013/02/19 Suppression de la référence à la
P012
13.1 Procédures
De Tandt Thierry
2013/09/30
Correction / ajout suite à l’audit
interne n°2013/08 (16/09/2013).
Paramètres système multi-
évaporateur Buchi Syncore ajoutés.
3. Documents légaux et normatifs
8. Réactifs et solutions
10.1 préparation des échantillons
inconnus
De Tandt Thierry
2014/01/15
Préparations des matrices dopées
en simple et plus en double.
10.2 Préparation des échantillons
dopés
10.3 Séquence d’injection
11.1.1 Contrôle des échantillons
dopés
De Tandt Thierry
2014/08/14
Précisions sur les réactifs et
solutions.
Ajout de l’en-tête. Mise en page.
8. Réactifs et solutions
* L'écart entre la date de mise en application et la date actuelle ne peut pas dépasser 5 ans.
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LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 3/29
TABLE DES MATIÈRE
1 OBJECTIF .......................................................................................................................... 4
2 CHAMP D’APPLICATION ................................................................................................. 4
3 DOCUMENTS LÉGAUX ET NORMATIFS ........................................................................ 4
4 DÉFINITION ET ABRÉVIATION ........................................................................................ 4
5 PRINCIPE ........................................................................................................................... 5
6 CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE ................................................................... 5
7 CONSIGNES DE SÉCURITÉ ET MESURES SPÉCIFIQUES ........................................... 5
8 RÉACTIFS ET SOLUTIONS .............................................................................................. 5
8.1 RÉACTIFS ........................................................................................................................... 5 8.2 SOLUTIONS ........................................................................................................................ 6
8.2.1 Solution de standard interne ............................................................................................. 6 8.2.2 Solution de dopage ........................................................................................................... 6
9 APPAREILS ....................................................................................................................... 6
10 MÉTHODE .......................................................................................................................... 7
10.1 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS INCONNUS .................................................................... 7 10.2 PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS DOPÉS ......................................................................... 7 10.3 SÉQUENCE D’INJECTION .................................................................................................... 7 10.4 CONDITIONS INSTRUMENTALES .......................................................................................... 8
11 CONTRÔLE DE LA QUALITÉ ........................................................................................... 8
11.1 CONTRÔLES DE PREMIÈRE LIGNE ....................................................................................... 8 11.1.1 CONTRÔLE DES ÉCHANTILLONS DOPÉS ........................................................................... 8 11.1.2 CONTRÔLE DES TEMPS DE RÉTENTION ............................................................................ 9 11.1.3 CONTRÔLE DES SPECTRES ............................................................................................. 9 11.2 CONTRÔLES DE DEUXIÈME ET TROISIÈME LIGNE ................................................................. 9
12 CALCUL ET RAPPORTAGE ............................................................................................. 9
13 RÉFÉRENCE AUX PROCÉDURES, INSTRUCTIONS, DOCUMENTS, FORMULAIRES OU LISTES Y AFFÉRENTS .................................................................................................... 10
13.1 PROCÉDURES ................................................................................................................. 10 13.2 FORMULAIRES ................................................................................................................ 10 13.3 LISTES ........................................................................................................................... 10
14 ANNEXES .......................................................................................................................... 10
14.1 ANNEXE 1 ...................................................................................................................... 10 14.2 ANNEXE 2 ...................................................................................................................... 10 14.3 ANNEXE 3 ...................................................................................................................... 10
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1 Objectif
Détecter la présence de résidus de 13 pesticides organophosphorés dans les matrices d’origine
animale suivantes : foie, tissu musculaire, poisson, lait, fromage, beurre, œuf et miel.
Les 13 pesticides organophosphorés recherchés sont : sulfotep, fonofos, diazinon, étrimfos,
dichlofenthion, chlorpyrifos-méthyl, chlorpyrifos-éthyl, fenchlorfos, pirimiphos-méthyl, pirimiphos-
éthyl, bromophos-méthyl, bromophos-éthyl, chlorfenvinphos.
2 Champ d’application
Cette méthode de screening est applicable dans ces matrices avec une limite de détection de 10
µg/kg.
3 Documents légaux et normatifs
Base de données européenne des pesticides éditées par la DG SANCO (accessible sur
internet via le lien http://ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/index.cfm).
Règlement (CE) 396/2005 du 23/02/2005 concernant les limites maximales applicables aux
résidus de pesticides présents dans ou sur les denrées alimentaires et les aliments pour
animaux d'origine végétale et animale (accessible sur internet via le lien http://eur-
lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CELEX:32005R0396:FR:NOT)
Décision de la commission du 12 août 2002 portant modalités d’application de la directive
96/23/CE du Conseil en ce qui concerne les performances des méthodes d’analyse et
l’interprétation des résultats (2002/657/CE) (accessible sur internet via le lien http://eur-
lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2002:221:0008:0036:FR:PDF).
4 Définition et abréviation
SIM : Selected Ion Monitoring (enregistrement de certains fragments uniquement)
Full Scan : balayage complet (enregistrement de spectres de masses complets)
MS-MS : système de détection par spectrométrie de masse avec double sélectivité
(enregistrement d’une transition « ion parent > ion fils »).
DG SANCO : Direction Générale de la SANté et des COnsommateurs, appartenant à la
Commission européenne (http://ec.europa.eu/dgs/health_consumer/weare_fr.htm).
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5 Principe
L’échantillon est broyé pour homogénisation. Une aliquote est mise au contact d’acétonitrile et une
quantité connue de standard interne est ajoutée.
L’extraction se fait par sonication et agitation. La purification de l’extrait se fait en trois étapes :
centrifugation, congélation du surnageant (élimination des graisses), et passage sur cartouches
C18 et d’ Al-N.
Une phase de concentration par évaporation « sous-vide » termine la préparation de l’échantillon.
La solution est injectée sur un système chromatographique gazeux avec détection par
spectrométrie de masse. Les pics sont construit sur un des fragments (ou sur une transition ion
parent > ion fils dans le cas d’un détecteur permettant de faire du MS-MS) caractéristiques de
chaque molécule.
La détection des molécules se fait par comparaison des surfaces des pics obtenus avec des
matrices vierges dopées à 10 µg/kg et préparées de la même façon que les échantillons inconnus.
Il s’agit donc d’une méthode de screening avec calibration interne à un seul niveau de calibration.
6 Caractéristiques de performance
Se référer au rapport de validation.
7 Consignes de sécurité et mesures spécifiques
Suivre les instructions de sécurité spécifiées sur les fiches de sécurité des réacitfs.
Toutes les manipulations de solvants se font sous hotte.
8 Réactifs et solutions
Les standards de référence des pesticides recherchés et leurs solutions sont conservés dans un
frigo entre 0 et 10°C ou, si mentionné par le fabricant, dans un congélateur à une température < -
18°C. Si une solution contient plusieurs standards de référence dont au moins un qui doit être
conservé à une température < -18°C, alors cette solution sera aussi conservée dans ces
conditions. Les standards de référence Ils ne peuvent être utilisés au-delà de leur date de
péremption (à défaut, compter 5 ans après la date de réception).
Les solutions de ces standards de référence préparées au laboratoire sont stockées au
congélateur à une température < -18°C et peuvent être utilisées conservées tant que la date de
péremption du standard n’est pas dépassée pendant 1 an.
Sauf contre-indication par le fabriquant, la solution de standard interne (dont la concentration
exacte est sans importance) est conservée au frigo (entre 0 et 10 °C) et peut être utilisée tant que
la date de péremption du standard interne n’est pas dépassée.
8.1 Réactifs
8.1.1. Acétonitrile de qualité HPLC.
8.1.2. Ethyl-acétate de qualité HPLC.
8.1.3. Purs ou solutions certifiées des molécules recherchées.
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8.1.4. Pur ou solution certifiée d’un standard interne (par exemple, un isotope d’un des pesticides
recherchés, comme le chlorfenvinphos-D10 ou encore l’éthion-D20 ).
8.2 Solutions
8.2.1 Solution de standard interne
A partir du pur ou de la solution certifiée, préparer une solution à 1 µg/ml dans l’éthyl-acétate en
diluant avec un solvant miscible à l’acétonitrile et dans lequel le standard interne est soluble.
8.2.2 Solution de dopage
A partir des purs ou des solutions certifiées, préparer une solution mix (mélange de tous les
pesticides rechercher) à 1 µg/ml dans l’éthyl-acétate en diluant avec un solvant miscible à
l’acétonitrile et dans lequel les pesticides recherchés sont solubles.
9 Appareils
9.1. Chaîne Chromatographique gazeuse équipée au minimum d’un détecteur type « simple
quadrupole » et d’une colonne adaptée à la recherche des pesticides visés (exemple : DB-
5MS de 30 m x 0.25 mm - film de 0.25 µm).
9.2. Bain à ultrasons.
9.3. Balance analytique précise à 0,1 mg (seulement si préparation des solutions à partir de
purs et non de solutions certifiées).
9.4. Balance analytique Trébuchet (précision minimale : 0,1 g) pour la prise d’essai.
9.5. Surgélateur (température à atteindre : -20°C).
9.6. Tube à centrifuger de 50 ml (type Falcon).
9.7. Agitateur mécanique pouvant accepter les tubes à centrifuger.
9.8. Système d’évaporation « sous vide » (température : 60°C, dépression : 200 mbar).
9.9. Mixer permettant de broyer et homogénéiser les échantillons solides.
9.10. Bain d’eau (si échantillon à faire fondre pour homogénisation, comme le beurre).
9.11. Micropipette de 100 µl.
9.12. Centrifugeuse permettant de centrifuger à minimum 3500 t/min.
9.13. Ampoules piriformes de 50 ou 100 ml.
9.14. Système de filtration « sous vide » pouvant accepter des tubes en verre d’au moins 12 ml.
9.15. Tubes en verre d’au moins 12 ml.
9.16. Cartouche SPE de type C18 - 1000 mg (exemple : Macherey-Nagel Chormabond C18 ec 6
ml / 1000 mg, 30/PK).
9.17. Cartouche SPE de type Al-N - 1000 mg (exemple : Varian Bond Elut JR-AL-N , 1000mg,
100/PK).
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10 Méthode
10.1 Préparation des échantillons inconnus
Peser environ 10 g, avec une précision minimale de 0,1 g, d'échantillon (broyé ou fondu si matrice
solide) dans un tube de type Falcon de 50 ml. Ajouter 100 µl de la solution de standard interne.
Ajouter environ 20 ml d'acétonitrile et fermer le tube à l'aide du bonchon à visser. Agiter
manuellement quelques secondes et vérifier que la prise d'essai est bien dispersée (et non
agglomérée) dans le solvant d'extraction, puis mettre au bain à ultra-sons pendant 15 minutes.
Mettre à l'agitateur mécanique pendant 15 minutes.
Centrifuger à minimum 3500 t/min pendant 2 minutes. Récupérer la phase supérieure (liquide)
dans une ampoule piriforme en verre de 50 ou 100 ml. Placer l'ampoule une nuit dans un
surgélateur à une température < -20°C (la phase aqueuse et les graisses seront congelées).
Sortir les ampoules du congélateur et récupérer rapidement la phase non congelée dans des tubes
en verre (si nécessaire, laisser légèrement décongeler à température ambiante jusqu'à récupérer
entre 10 et 15 ml).
Assembler la cartouche C18 sur la cartouche Al-N. Conditionner les cartouches SPE avec de
l'acétonitrile. Passer, au goutte à goutte rapide, le volume récupéré sur les cartouches SPE à
l’aide d’un léger vide.
Concentrer l'extrait ainsi purifié avec un système* d’évaporation « sous vide » jusqu’à obtenir un
volume final d’environ 500 µl (si évaporation à sec, reprendre avec 500 µl d’éthyl-acétate du
solvant utilisé pour préparer la solution de dopage). Transférer ce volume dans un vial d’injection
(si nécessaire, utiliser des vials avec filtration incorporée tel le système Mini-Uniprep de Whatman).
* exemple : système multi-évaporateur Buchi Syncore avec volume final réfrigéré de 300 µl (T°
réfrigérant : 5°C ; T° bloc chauffant : 60°C ; T° prise d’air : 60°C, vitesse d’agitation : 200 rpm ;
dépression : 150 mbar ; T° reflux : 20°C).
10.2 Préparation des échantillons dopés
Pour chaque type d’échantillon, il faut disposer d’une matrice vierge des pesticides recherchés.
Pour ce faire, se procurer des produits d’origine Bio de préférence. L’absence des pesticides
recherchés dans ces matrices sera contrôlée en les préparant comme des échantillons inconnus et
en vérifiant par rapport à la solution mix qu’aucun pic n’est présent aux temps de rétention des
molécules recherchées. Une fois contrôlées, les matrices vierges sont aliquotées par portion de 10
g dans des tubes à centrifuger de 50 ml et conservées dans un surgélateur à une température
inférieure à -18°C.
Pour chaque type de matrice, il faut préparer un échantillon dopé à 10 µg/kg. Pour ce faire,
prendre un tube contenant 10 g de matrice vierge et suivre le mode opératoire des échantillons
inconnus mais ajouter en plus 100 µl de la solution de dopage avant de verser les 20 ml
d’acétonitrile.
10.3 Séquence d’injection
Si la colonne a été recoupée ou remplacée, commencer par une injection de la solution de dopage
en mode Full Scan afin de repérer les temps de rétention des pesticides recherchés et adapter les
fenêtres de la méthode de détection en mode SIM (ou MS-MS).
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Ensuite, une injection de la solution de dopage en mode SIM (ou MS-MS) permet de vérifier le bon
état du système chromatographique de part l’intensité du signal obtenu et la symétrie des pics.
Enfin, la séquence des échantillons préparés peut commencer. Il faut toujours encadrer les
inconnus par le dopé de la matrice correspondante. Le nombre (x) d’échantillons que l’on peut
passer entre le dopé ne pourra être supérieur à 10 et sera adapté en fonction du nombre
d’échantillons dans la série (par exemple : pour une série de 14 échantillons inconnus, x sera égal
à 7 ).
Terminer par une nouvelle injection de la solution de dopage en mode SIM (ou MS-MS) permet
d’avoir une idée précise de l’évolution de la réponse du système chromatographique après les
injections d’échantillons.
En résumé :
Solution de dopage en mode Full Sca
Solution de dopage en mode SIM (ou MS-MS)
Solution de matrice dopée
Solution de l’échantillon 1
Solution de l’échantillon 2
…
Solution de l’échantillon x
Solution de matrice dopée
Solution de dopage en mode SIM (ou MS-MS)
10.4 Conditions instrumentales
L’ annexe 1 présente les conditions instrumentales pour une détection en SIM sur un GC-MS de
type simple quadrupole.
L’ annexe 2 présente les conditions instrumentales pour une détection en MS-MS sur un GC-MS
de type triple quadrupoles.
11 Contrôle de la qualité
11.1 Contrôles de première ligne
11.1.1 Contrôle des échantillons dopés
Pour chaque molécule, le critère d’acceptation est que la RSD calculée sur les deux injections de
l’échantillon dopé qui encadrent les inconnus soit inférieure à 30 %.
Si ce critère n’est pas respecté, le résultat à introduire pour cette molécule sera « inexploitable »,
et ce pour tous les échantillons encadrés par ces deux injections du dopé.
Si ce cas se présente pour un grand nombre de molécules parmis la liste recherchée, cela est
probablement du soit à un problème chromatographique (insert sale par exemple), soit à un
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problème lors de la préparation des échantillons dopés. Il faut donc soit réinjecter toutes les
solutions de la séquence après avoir remis l’appareil en bon état de marche, soit repréparer tous
les échantillons de la séquence (inconnus et dopé) et les injecter.
11.1.2 Contrôle des temps de rétention
Pour qu’un pic dans un échantillon inconnu soit identifié à celui d’un dopé, son temps de rétention
ne doit pas différer de plus de 0,1 min du temps de rétention moyen des dopés qui l’encadrent.
11.1.3 Contrôle des spectres
Si les deux critères précédents sont respectés et qu’aucun pic supérieur à 7 µg/kg n’est mesuré
dans l’échantillon inconnu, le résultat à introduire pour cette molécule sera « inférieur à 10 µg/kg ».
Si les deux critères précédents sont respectés et qu’un pic supérieur à 7 µg/kg est mesuré dans
l’échantillon, une confirmation a lieu par une injection supplémentaire en mode Full Scan pour
comparer le spectre obtenu à celui de la molécule recherchée, obtenu à partir d’une base de
données ou du spectre d’un dopé.
Si l’identification du pic est confirmée (4 fragments caractéristiques dans les mêmes proportions*) ,
on peut alors procéder à un dosage plus précis en dopant la matrice vierge à différents niveaux de
calibration qui encadrent la concentration trouvée pour l’échantillon inconnu, lequel sera également
repréparé (ou envoyer l’échantillon suspect vers un laboratoire agréé). Si la concentration ainsi
déterminée est supérieure à 10 µg/kg additionnée de l’incertitude de mesure, cette teneur sera le
résultat à introduire. Sinon, le résultat à introduire pour cette molécule sera « inférieur à 10
µg/kg ».
* Tolérances maximales admissibles pour les intensités ioniques relatives pour un EI-GC-MS(1)
:
Intensité relative
(% du pic de base)
Tolérance
(relative)
> 50 % ± 10 %
> 20 % à 50 % ± 15 %
> 10 % à 20 % ± 20 %
≤ 10 % ± 50 %
(1) Décision 2002/657/CE portant modalités d’application de la directive 96/23/CE
11.2 Contrôles de deuxième et troisième ligne
Des contrôles deuxième et troisième ligne sont réalisés selon la procédure : « LAB 23 P 020
Gestion des contrôles qualité ».
12 Calcul et rapportage
Les teneurs à introduire dans le logiciel pour les dopés doivent tenir compte des concentrations
exactes des solutions mères de chaque pesticides ou du mix. Ces teneurs sont calculées sur base
d’une prise d’essai de 10 g et sont exprimées en µ/kg d’échantillon.
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Il faut également tenir compte de la pesée exacte de chaque échantillon inconnu. Cela se fait
généralement via l’introduction d’un facteur de correction dans le logiciel : il faut multiplier le
résultat par le facteur 10/prise d’essai (g).
Le rapport comportera les données brutes (surfaces et temps de rétention des pics) ainsi que le
RSD calculé sur les dopés.
Si une confirmation spectrale est nécessaire, joindre les spectres obtenus pour l’échantillon et celui
de référence (base de données ou spectre d’un dopé).
Le rapport d’exécution final résumera les résultats obtenus pour chaque pesticides et ce pour tous
les échantillons de la série (laboratoire de Liège : LAB 23 F543 PR09 OP).
13 Référence aux procédures, instructions, documents, formulaires ou listes
y afférents
13.1 Procédures
LAB 23 P 020 Gestion des contrôles qualité
13.2 Formulaires
LAB23 F 543 PR09 OP : Rapport d’exécution – Détection pesticides organophosphorés – MET-
LFSAL-404
13.3 Listes
néant
14 Annexes
14.1 Annexe 1
Mode SIM : exemples de conditions chromatographiques, de programmation et de
chromatogrammes.
14.2 Annexe 2
Mode MS-MS : exemples de conditions chromatographiques, de programmation et de
chromatogrammes.
14.3 Annexe 3
Flowchart de la préparation des échantillons.
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Annexe 1
Conditions instrumentales en mode SIM
chromatographe : Interscience Finigan Trace MS
colonne : AT-5MS type (5% diphenyl/95% polysiloxane) 30mx0,25mmID 0,25µm film
colonne de guarde : 5 m colonne sans phase.
insert : splitless 105mmx8mm ; 3mm ID (ref : restek 20942) ou 5mm ID (ref : restek 20945).
solvant de rinçage : méthanol.
A. L'autosampler.
AUTOSAMPLER image 1/2
AUTOSAMPLER image 2/2
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B. Le four.
C. L'injecteur.
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D. L'hélium.
E. Le détecteur.
DETECTEUR image 1/5
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DETECTEUR image 2/5
DETECTEUR image 3/5
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DETECTEUR image 3/9
DETECTEUR image 4/5
DETECTEUR image 5/5
Exemple de programmation en mode SIM
PESTICIDE
FRAGMENT TR (min) fenêtre (min)
ORGANOPHOSPHORE début fin
1 SULFOTEP 322 5,29 4,29 5,56
2 FONOFOS 246 5,83
5,56 6,16 3 DIAZINON 304 5,84
4 ETRIMFOS 292 6,02
5 DICHLOFENTHION 279 6,29
6,16 6,49 6
CHLORPYRIFOS-METHYL
286 6,38
7 FENCHLORFOS 285 6,59 6,49 6,91
8 PIRIMIPHOS-METHYL 290 6,77
9 CHLORPYRIFOS-ETHYL 314 7,05 6,91 7,25
10 BROMOPHOS-METHYL 331 7,44 7,25 7,66
11 PIRIMIPHOS-ETHYL 318 7,45
CHLORFENVINPHOS D10
333 7,86 7,66 8,13
12 CHLORFENVINPHOS 323 7,95
13 BROMOPHOS-ETHYL 329+359 8,30 8,13 8,89
ETHION D20 241 9,68 8,89 10,47
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Exemples de chromatogrammes obtenus en mode SIM sur un lait dopé à 10 µg/kg
D:\OP\2010\Mars 2010\11-03-10\D1-lait-a 03/11/10 10:42:16 PM LAIT
RT: 4.60 - 5.10
4.6 4.8 5.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 4.89 NL: 1.12E6
m/z= 321.5-322.5 F:
{0,0} + c EI
det=500.00 SIM ms [
321.95-322.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.10 - 5.60
5.2 5.4
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.33 NL: 1.12E6
m/z= 245.5-246.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.10 - 5.60
5.2 5.4 5.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.35 NL: 5.24E5
m/z= 303.5-304.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.20 - 5.70
5.4 5.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.50
5.445.565.33
NL: 1.67E6
m/z= 291.5-292.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.50 - 6.00
5.6 5.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.72 NL: 1.10E6
m/z= 278.5-279.5 F: {0,2}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 278.95-279.05,
285.95-286.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.55 - 6.05
5.6 5.8 6.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.78 NL: 9.16E5
m/z= 285.5-286.5 F: {0,2}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 278.95-279.05,
285.95-286.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.75 - 6.25
5.8 6.0 6.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.96 NL: 1.11E6
m/z= 284.5-285.5 F: {0,3}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 284.95-285.05,
289.95-290.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.85 - 6.35
6.0 6.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.11 NL: 8.90E5
m/z= 289.5-290.5 F: {0,3}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 284.95-285.05,
289.95-290.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.05 - 6.55
6.2 6.4
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.33 NL: 4.00E5
m/z= 313.5-314.5 F:
{0,4} + c EI
det=500.00 SIM ms [
313.95-314.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.40 - 6.90
6.4 6.6 6.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.63 NL: 4.95E5
m/z= 330.5-331.5 F: {0,5}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 317.95-318.05,
330.95-331.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.40 - 6.90
6.6 6.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.67 NL: 5.82E5
m/z= 317.5-318.5 F: {0,5} +
c EI det=500.00 SIM ms [
317.95-318.05,
330.95-331.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.70 - 7.20
6.8 7.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.96 NL: 4.17E5
m/z= 332.5-333.5 F: {0,6}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 322.95-323.05,
332.95-333.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.80 - 7.30
6.8 7.0 7.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 7.03
6.85
6.967.16
NL: 3.45E5
m/z= 322.5-323.5 F: {0,6}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 322.95-323.05,
332.95-333.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 7.10 - 7.60
7.2 7.4 7.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 7.35
7.53
7.257.22
NL: 4.53E5
TIC F: {0,7} + c EI
det=500.00 SIM ms [
328.95-329.05,
358.95-359.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 8.60 - 9.10
8.6 8.8 9.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 8.84
8.92 8.988.778.71
NL: 1.30E6
m/z= 240.5-241.5 F:
{0,8} + c EI
det=500.00 SIM ms [
240.95-241.05] M S
Avalon D1-lait -a
sulfotep fonofos diazinon
chlorpyrifos-methyl fenchlorfos pirimiphos-methyl
pirimiphos-ethyl chlorfenvinphos D10 chlorfenvinphos
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 17/29
Exemples de chromatogrammes obtenus en mode SIM sur un lait dopé à 10 µg/kg (suite et fin)
D:\OP\2010\Mars 2010\11-03-10\D1-lait-a 03/11/10 10:42:16 PM LAIT
RT: 4.60 - 5.10
4.6 4.8 5.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 4.89 NL: 1.12E6
m/z= 321.5-322.5 F:
{0,0} + c EI
det=500.00 SIM ms [
321.95-322.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.10 - 5.60
5.2 5.4
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.33 NL: 1.12E6
m/z= 245.5-246.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.10 - 5.60
5.2 5.4 5.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.35 NL: 5.24E5
m/z= 303.5-304.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.20 - 5.70
5.4 5.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100R
ela
tive A
bundance
RT: 5.50
5.445.565.33
NL: 1.67E6
m/z= 291.5-292.5 F: {0,1} + c
EI det=500.00 SIM ms [
245.95-246.05,
291.95-292.05,
303.95-304.05] M S Avalon
D1-lait -a
RT: 5.50 - 6.00
5.6 5.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.72 NL: 1.10E6
m/z= 278.5-279.5 F: {0,2}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 278.95-279.05,
285.95-286.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.55 - 6.05
5.6 5.8 6.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.78 NL: 9.16E5
m/z= 285.5-286.5 F: {0,2}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 278.95-279.05,
285.95-286.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.75 - 6.25
5.8 6.0 6.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 5.96 NL: 1.11E6
m/z= 284.5-285.5 F: {0,3}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 284.95-285.05,
289.95-290.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 5.85 - 6.35
6.0 6.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.11 NL: 8.90E5
m/z= 289.5-290.5 F: {0,3}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 284.95-285.05,
289.95-290.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.05 - 6.55
6.2 6.4
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.33 NL: 4.00E5
m/z= 313.5-314.5 F:
{0,4} + c EI
det=500.00 SIM ms [
313.95-314.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.40 - 6.90
6.4 6.6 6.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.63 NL: 4.95E5
m/z= 330.5-331.5 F: {0,5}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 317.95-318.05,
330.95-331.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.40 - 6.90
6.6 6.8
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.67 NL: 5.82E5
m/z= 317.5-318.5 F: {0,5} +
c EI det=500.00 SIM ms [
317.95-318.05,
330.95-331.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.70 - 7.20
6.8 7.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 6.96 NL: 4.17E5
m/z= 332.5-333.5 F: {0,6}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 322.95-323.05,
332.95-333.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 6.80 - 7.30
6.8 7.0 7.2
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 7.03
6.85
6.967.16
NL: 3.45E5
m/z= 322.5-323.5 F: {0,6}
+ c EI det=500.00 SIM ms
[ 322.95-323.05,
332.95-333.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 7.10 - 7.60
7.2 7.4 7.6
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 7.35
7.53
7.257.22
NL: 4.53E5
TIC F: {0,7} + c EI
det=500.00 SIM ms [
328.95-329.05,
358.95-359.05] M S
Avalon D1-lait -a
RT: 8.60 - 9.10
8.6 8.8 9.0
Time (min)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Rela
tive A
bundance
RT: 8.84
8.92 8.988.778.71
NL: 1.30E6
m/z= 240.5-241.5 F:
{0,8} + c EI
det=500.00 SIM ms [
240.95-241.05] M S
Avalon D1-lait -a
etrimfos dichlofenthion
chlorpyriphos-ethyl bromophos-methyl
bromophos-ethyl ethion D20
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 18/29
Annexe 2
Conditions instrumentales en mode MS-MS
Autosampler
Four
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 19/29
Débit gaz vecteur (He)
Injecteur
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 20/29
Paramètres de calculs
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 21/29
Détecteur Triple Quad (exemple fenêtre 1)
Compound table
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 22/29
Pesticide (exemple Sulfotep)
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 23/29
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 24/29
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 25/29
Standard interne (exemple du chlorfenvinphos D10)
Exemple de programmation en mode MS-MS
PESTICIDE CAS Q1 Q3 TR
(min) début
seg.(min) Segment
(n°)
1 SULFOTEP 3689-24-5 322 202 7,91 7,41 1
2 FONOFOS 944-22-9 246 137 10,33 9,12 2
3 DIAZINON 333-41-5 304 179 10,38 4 ETRIMFOS 38260-54-7 292 181 11,31 10,85 3
5 DICHLOFENTHION 97-17-6 279 223 12,84 12,08 4
6 CHLORPYRIFOS METHYL 5598-13-0 286 93 13,30 7 FENCHLORPHOS 299-84-3 285 270 14,57 13,94 5
8 PIRIMIPHOS METHYL 29232-93-7 305 180 15,54 15,06 6
9 CHLORPYRIPHOS-ETHYL 2921-88-2 314 258 16,69 16,12 7
10 BROMOPHOS METHYL 2104-96-3 331 316 17,98 17,34 8
11 PIRIMIPHOS ETHYL 23505-41-1 304 168 18,19 CLOFENVINFOS D10 333 269 19,15 18,67 9
12 CLOFENVINFOS 470-90-6 323 267 19,36
13 BROMOPHOS ETHYL 4824-78-6 359 303 20,32 19,84 10
ETHION D20 131 99 22,03 21,18 11
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 26/29
Exemples de chromatogrammes obtenus en mode MS-MS sur une viande dopée à 10 ug/kg
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 27/29
Exemples de chromatogrammes obtenus en mode MS-MS sur une viande dopée à 10 ug/kg
(suite et fin)
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 28/29
Annexe 3 : Flowchart de la préparation des échantillons (1/2)
ETAPE 1 : Préparation de l’échantillon en tube Falcon de 50 ml Peser 10 g d’échantillon + 100 µl Sol. SI + 20 ml acétonitrile homogénéisé en Falcon (+ 100 µl sol. de dopage) Brève agitation manuelle
ETAPE 2 : Extraction
15 min bain ultra-sons 15 min agitateur (300 rpm)
ETAPE 3 : Récupération 2 min centrifugation (min 3500 t/min)
Récupération du surnageant en ampoule
SCREENING DE RESIDUS DE PESTICIDES DANS DES MATRICES D’ORIGINE ANIMALES PAR GC-MS
LAB 23 I-MET 404 Pesticides organophosphorés GC-MS v.09 29/29
Annexe 3 : Flowchart de la préparation des échantillons (2/2)
ETAPE 4 : Purification Surgélation des ampoules 1 nuit Transfert phase liquide en tube Purification sur C18 et Al-N
ETAPE 5 : Concentration Evaporer sous-vide la phase liquide purifiée par SPE (60°C – 150 mbar)
ETAPE 6 : Chromatographie Transvaser dans vial filtrant Injecter en GC-MS(MS)
