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au laboratoire d’anatomie pathologiqueMoyens d’étude de la peau
Département de pathologie cellulaire et tissulaire
UE revêtement cutané - L2
Dr Anne Croué
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Anatomie pathologique
Etude des lésions provoquées par les maladies sur les organes, tissus ou cellules en utilisant des techniques fondées sur la morphologie macroscopique et microscopique
But diagnostique
Appréciation du pronostic
Indications thérapeutiques
Evaluation des résultats des traitements
Corrélation anatomo-clinique (renseignements cliniques indispensables, dialogue avec le clinicien)
Etude de la peau
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Prélèvements cutanés
1. Cytologiques
Cytodiagnostic
2. Tissulaires
Biopsie cutanée
Exérèse cutanée d’une tumeur
Toujours accompagnés d’un bon d’examen où doivent figurer l’identité du patient, ses antécédents, la nature du prélèvement, les raisons ayant motivé le prélèvement et éventuellement les hypothèses diagnostiques.
Etude de la peau
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1. Prélèvements cytologiques en dermatologie
Cytodiagnostic
Indication : dermatose vésiculo-bulleuse (herpès-zona-varicelle, pemphigus,…)
Au lit du patient
à l’aide d’une lame de bistouri, décoller le toit de la vésicule ou bulle et gratter le plancher de la lésion
étaler sur une lame de verre
sécher à l’air Au laboratoire coloration par le May Grünwald Giemsa
Etude de la peau
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1. Prélèvements cytologiques en dermatologie
1. A l’aide d’une lame de bistouri,décoller le toit de la bulle etgratter le plancher de la lésion.
Toit de la bulle
2. Etaler sur une lame de verre. 3. Coloration par le May Grünwald Giemsa
Etude de la peau
Copyright © 2009 Wolters Kluwer Health - Lippincott Williams & Wilkins
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2. Prélèvements tissulaires en dermatologie
Biopsie (partie d’une lésion)
Exérèse (totalité d’une lésion)
Immersion dans du formol pour fixation
+ dans quelques cas un fragment congelé dans l’azote liquide
Etude de la peau
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Devenir des prélèvements cutanés dans le laboratoire d’anatomie pathologique
Techniques de base d’étude des tissus
1. Fixation dans le formol
2. Macroscopie
3. Inclusion dans la paraffine
4. Confection des coupes
5. Coloration des coupes
Etude de la peau
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1. Fixation
Indispensable pour conserver la morphologie cellulaire
Doit être rapide après l’obtention du prélèvement
Immersion dans du formol tamponné à 10%
La durée dépend de la taille du fragment (quelques heures pour une biopsie de moins d’1 cm)
Etude de la peau
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2. Macroscopie
Mesure et description des biopsies, exérèses, lésions
Si exérèse volumineuse, choix de quelques prélèvements ou tranches de petite taille.
Etude de la peau
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3. Imprégnation et inclusion
Prélèvements déposés dans une cassette en plastique
Dans un automate à inclusion, déshydratation des tissus par passage dans des alcools, du xylène puis dans la paraffine liquide à 56°C, puis refroidie
Etape finale d’inclusion : le fragment est placé correctement orienté dans un petit moule rempli de paraffine
Etude de la peau
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4. Coupes
Bloc solide de paraffine
Coupé grâce à un microtome
Coupes de 3 à 5 µ
Etalées sur des lames de verre
Bloc de paraffine
Etude de la peau
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5. Colorations
Dissolution de la paraffine, puis réhydratation pour réaliser les colorations
Coloration usuelle : 3 colorants (HPS ou HES)
Colorant basique nucléaire (Hématéine ou Hématoxyline) bleu
Colorant acide cytoplamique (Éosine, Érythrosine ou Phloxine) rouge
Safran : collagène jaune
Coupes recouvertes d’une lamelle de verre collée (protection et conservation de la coupe, meilleure observation au microscope au fort grandissement)
Etude de la peau
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Observation des lames au microscope
Par le médecin pathologiste
Résultat sous forme d’un compte rendu écrit (description et interprétation des lésions, diagnostic)
Durée minimale de la technique : 2 à 3 jours
Etude de la peau
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Colorations spéciales
Ne sont jamais effectuées systématiquement et sont décidées par l’anatomopathologiste selon le diagnostic recherché et en fonction des renseignements cliniques communiqués.
Etude de la peau
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Colorations spéciales (1)
Recherche de dépôts
Amylose : rouge Congo
Fer : Perls
Mélanine
Fontana
Fibres élastiques
Orcéine
Etude de la peau
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Colorations spéciales (2)
Calcifications
Von Kossa
Mucines
bleu alcian
Etude de la peau
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Colorations spéciales (3)
Recherche de micro-organismes
Ziehl : mycobactéries
Grocott : champignons
PAS : champignons, bactéries
Giemsa : bactéries, corps de Leishman (leishmanioses)
Etude de la peau
PAS : Filaments mycéliens Giemsa : leishmaniose
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Immunofluorescence/Immunohistochimie
Permet l’identification in situ sur coupe histologique d’un antigène cellulaire ou tissulaire
Basée sur une réaction spécifique antigène-anticorps utilisant des anticorps conjugués à un système révélateur
Etude de la peau
Systèmerévélateur
Anticorpsprimaire
Antigène
Tissus
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Immunofluorescence directe (IFD)
Indications
Diagnostic et classification des dermatoses bulleuses
Mise en évidence de dépôts d’immunoglobulines et de complément
Biopsie cutanée congelée
Anticorps spécifiques conjugués à une substance fluorescente
Microscope à fluorescence
Etude de la peau
Substancefluorescente
Anticorps
Antigène
Tissus
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Immunofluorescence cutanée
Pemphigoïde bulleuse : anti-C3 le long de la membrane basale
Pemphigus vulgaire : anti-IgG en résille inter-kératinocytaire
Etude de la peau
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Immunofluorescence cutanée
Anticorps spécifique conjugué à une enzyme (enzyme + substrat = réaction colorée)
Etude de différents anticorps choisis par l’anatomopathologiste en fonction du problème diagnostique, pronostique ou thérapeutique
Etude de la peau
Enzyme
Anticorps
Antigène
Tissus
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Immunohistochimie
HPS : Tumeur indifférenciée Carcinome ? Lymphome ?
Diagnostic de carcinome
Etude de la peau
Traceur
Anticorpsanti-cytokératine
Antigène
Tissus
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Ex : Recherche d’un réarrangement génique montrant le caractère monoclonal et donc vraisemblablement malin
des cellules lymphoïdes (récepteur des lymphocytes T, gène des immunoglobulines en cas de prolifération lymphoïde B)
Prise en charge du fragment cutané au moment du geste biopsique
Etude de la peau
Prise en charge du fragment cutané au moment du geste biopsique
Fixation dans du formol pour inclusion en paraffine
(étude histologique, immunohistochimique)
Congélation dans l’azote liquide
(immunofluorescence directe)
biologie moléculaire
Techniques non morphologiques
Biopsie à l’état frais pour broyage permettant de mieux détecter une mycobactérie,
un champignon, …
Fixation dans le glutaraldéhyde
(microscopie électronique)
Microbiologie
