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A74 © 2014. Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.

P193 Le répresseur transcriptionel ICER est essentiel au contrôle de l’homéostasie glucidique et du rythme circadien dans les îlots pancréatiques

A. Abderrahmani, R. Salvi, B. Raphael, J. Annicotte, P. FroguelUniversité de Lille 2, CNRS UMR8199, Lille.

Introduction : L’induction des gènes régulés par la voie AMPc/protéine kinaseA (PKA) est fondamentale pour le contrôle approprié de la production/sécré-tion de l’insuline et le métabolisme du glucose des tissus sensibles à l’insuline.Une induction persistante ou défectueuse de ces gènes entraine des dysfonction-nements de la cellule béta chez l’homme et la souris, ainsi qu’une insulino-résistance dans les adipocytes. Dans cette étude nous avons recherché le rôle durépresseur transcriptionel ICER (« Inducible cAMP early repressor »), un régu-lateur négatif majeur de l’expression des gènes régulés par la voie AMPc/PKA,dans le contrôle de l’homéostasie glucidique chez la souris.Matériels et méthodes : Des tests de tolérance au glucose et à l’insuline ont étéréalisés chez des souris invalidées spécifiquement pour l’expression d’ICER.L’expression et la sécrétion de l’insuline ont été mesurées par ELISA et effec-tuées dans les îlots isolés de souris invalidées et contrôles. L’expression des gènesa été mesurée par PCR quantitativeRésultats : Les souris invalidées pour ICER sont intolérantes au glucose, endépit d’une concentration plasmatique d’insuline plus élevée que chez les souriscontrôles. L’hyperglycémie corrèle avec une résistance systémique à l’insuline.ICER est un répresseur de l’expression de l’insuline. Le contenu et l’expressionde l’insuline est augmentée dans les îlots des souris invalidées. En revanche lasécrétion de l’insuline en réponse au glucose est altérée chez les animaux défi-cients pour ICER. Ce dysfonctionnement est associé avec une perte absolue del’expression des gènes de l’horloge circadienne importante pour le contrôle de lasécrétion de l’insuline en réponse au glucose (Per1, Bmal1 et RevErba).Conclusion : La régulation négative par ICER est essentielle pour le maintiende l’homéostasie glucidique et le rythme circadien dans les îlots pancréatiques

P194 La présence d’une stéatose s’accompagne d’une augmentation des concentrations plasmatiques de céramides chez les patients diabétiques de type 2

J. Petit1, V. Cottet2, B. Guiu1, L. Duvillard1, J. Pais de Barros2, A. Athias2, B. Bouillet1, M. Brindisi1, E. Crevisy1, J. Cercueil1, M. Habchi1, B. Verges1

1 CHU du Bocage, Dijon ;2 INSERM U866, Dijon.

Introduction : Les céramides, sphingolipides structurant les membranes, sontimpliqués dans la signalisation lipidique de la différenciation cellulaire, la proli-fération et l’apoptose. Ils inhibent la voie de signalisation de l’insuline et indui-sent stress oxydatif et inflammation. Récemment, il a été observé que lescéramides étaient impliqués dans la physiolopathologie de la stéatose etnotamment qu’une inhibition in vivo de leur synthèse diminuait l’accumula-tion intrahépatique de lipides chez le rat. Par ailleurs, il a été démontré quel’adiponectine provoquait une diminution des taux de céramides. L’objectif decette étude était de mesurer les taux plasmatiques de céramides chez despatients diabétiques et d’étudier le lien avec le contenu intra-hépatique en tri-glycérides.Patients et méthodes : 122 patients diabétiques de type 2 non traités par statineont été inclus dans l’étude. Les patients étaient considérés stéatosiques si lamesure du contenu hépatique en triglycérides (réalisée par IRM en séquencephase-opposition de phase) était supérieur à 5,56 %. Les céramides ont été doséspar chromatographie et spectrométrie de masse en tandem.Résultats : L’âge médian des patients étaient de 60,3 ans [29 à 82 ans]. Les tauxplasmatiques de céramides étaient positivement corrélés aux triglycérides, choles-térol total, LDL cholestérol. En tenant compte de l’âge, du sexe et de l’IMC, lespatients diabétiques avec stéatose présentaient des taux plasmatiques de céra-mides totaux (en particulier le 24 : 0) supérieurs aux patients diabétiques sans stéa-tose (p = 0,018). Ce lien entre stéatose et augmentation des céramides étaitindépendant des taux plasmatiques de triglycérides et d’adiponectine (p = 0,029).Conclusion : Chez les patients diabétiques, le taux plasmatique de céramides estlié aux anomalies lipidiques et à la stéatose indépendamment de l’obésité et de ladiminution de la sécrétion d’adiponectine. Cette augmentation des céramides,probablement par augmentation de leur synthèse hépatique, pourrait être une desexplications de l’insulinorésistance observée chez les patients stéatosiques.

P195 La transcription régulée par l’insuline dans les myotubes L6 de rat est associée à des modifications de l’acétylation de l’histone H3 et à l’accumulation et l’acétylation de l’isoforme d’histone H2A. Z autour du site d’initiation de la transcription

L. Pirola, S. Chriett, O. Zerzaihi, H. VidalINSERM U1060, CARMEN Institute, Oullins.

Introduction : Au-delà de ses effets métaboliques, l’insuline a aussi une actionmodulatrice transcriptionnelle. Néanmoins, si l’insuline agit sur la chromatine

de ses gènes cibles, cela reste un champ d’investigation relativement inexploré.Nous avons ici étudié le lien entre l’action transcriptionnelle de l’insuline et lesmodifications épigénétiques sur une sélection de ses gènes cibles.Matériels et méthodes : Les niveaux d’ARNm de gènes régulés par l’insuline,l’hexokinase (Hk2), Irs2, et la sous-unité p85β de la PI3K (Pi3kr2), ont étémesurés après traitement à l’insuline (6 h, 100 nM), en comparaison à unecondition contrôle. Des Immuno-Précipitations de la Chromatine (ChIP) ontété réalisées à l’aide d’anticorps anti-histone H2A, H2A. Z, ainsi que les formesacétylées de H2A. Z, H3 (sur les lysines 9/14, H3K9/14) et H3 di-méthylée.Résultats : L’ARNm de Hk2 était induit par l’insuline, alors que les ARNm deIrs2 et Pi3kr2 étaient diminués. L’analyse par ChIP a démontré une accumula-tion de H2A. Z autour du site d’initiation de la transcription (Tss) de ces gènes.Les niveaux d’accumulation des formes acétylées d’H2A. Z et de H3K9/14étaient corrélés positivement pour le gène induit Hk2, et négativement pour lesgènes réprimés Irs2 et Pi3kr2, suite au traitement a l’insuline. De façon intéres-sante, l’inhibiteur des histones déacétylases trichostatine A (TSA), permettaitune réversion de la diminution de l’ARNm d’Irs2 induite par l’insuline.Conclusion : Les régions chromatiniennes entourant les gènes de réponse àl’insuline étudiés présentent une « signature épigénétique » avec une accumula-tion de H2A. Z autour du Tss. L’accumulation de H2A. Z contribuerait à facili-ter la réponse des gènes à l’insuline en favorisant la modulation de l’acétylationde H2A. Z et H3K9/14. L’acétylation étant une cible pharmacologique possible,nous avons démontré qu’un traitement à la TSA peut contraster les effets del’insuline sur la répression transcriptionnelle d’Irs2. Des études ultérieures per-mettront de confirmer la validité des inhibiteurs d’histones déacétylases commeagent thérapeutique.

P196 Deux transcrits alternatifs de TCF7L2 interagissent spécifiquement avec la protéine HNF4alpha dans les cellules HepG2

B. Neve1, O. Le Bacquer2, S. Caron3, M. Huyvaert1, A. Leloire1, O. Poulain-Godefroy1, C. Lecoeur1, F. Pattou2, B. Staels4, P. Froguel11 CNRS UMR8199, EGID-FR 3508, Université de Lille 2, Lille ;2 INSERM U859, EGID-FR 3508, Université de Lille 2, Lille ;3 INSERM UMR101, EGID-FR 3508, Université de Lille 2, Lille ;4 INSERM UMR1011, EGID-FR 3508, Université de Lille 2, Lille.

Introduction : Des variants génétiques du facteur de transcription TCF7L2sont fortement associés à la susceptibilité au diabète de type 2 (DT2) et suscitentbeaucoup d’intérêt. Récemment, TCF7L2 a été impliqué dans le métabolismehépatique du glucose. Notre objectif a été de déterminer si les transcrits alterna-tifs de TCF7L2 inhibent différemment la transcription de l’enzyme glucose-6-phosphatase (G6PC).Matériels et méthodes : Nous avons évalué l’expression hépatique de TCF7L2par PCR-quantitative exon-spécifique dans des échantillons humains(64 patients obèses normoglycémiques ou DT2 de la cohorte ABOS) et dans lescellules HepG2. L’impact de l’inhibition de TCF7L2 par ARNi sur l’expressionde G6PC a été évalué. Par la technique du gène rapporteur luciférase, nousavons analysé les interactions possibles entre la régulation transcriptionnelle deG6PC par TCF7L2, HNF4alpha et FOXO1. En réalisant des co-immunopré-cipitations, nous avons analysé les interactions protéiniques de TCF7L2 avecHNF4alpha dans les cellules HepG2.Résultats : Dans les cellules HepG2, tous les transcrits de TCF7L2 contenantl’exon 13 sont induits par le glucose de manière concentration dépendante.L’expression de ces transcrits est aussi augmentée dans le foie d’individus diabé-tiques, sauf ceux ayant un C-terminal-court (T3 et T5). La transfection d’ARNidans les cellules HepG2, a montré que l’expression de G6PC est réprimée parTCF7L2 indépendamment de la présence d’insuline et de l’activité de FOXO1.Nous avons pu montrer que l’inhibition de l’expression de HNF4alpha parTCF7L2 n’est pas indispensable pour la répression transcriptionelle de G6PC.Par contre, les transcrits T6 et T8, avec un C-terminal long mais sans exon 13,interagissent avec la protéine HNF4alpha dans les cellules HepG2.Conclusion : Les transcrits T3 et T5 de TCF7L2 pourraient jouer un rôle diffé-rent dans les anomalies du métabolisme hépatique lié au DT2 en comparaisonaux transcrits T6 et T8 qui interagissent spécifiquement avec la protéineHNF4alpha dans les cellules HepG2.

P197 Implication du système glucose-6-phosphatase dans l’absorption intestinale du glucose

F. Sinet1, J. Chilloux1, M. Soty1, B. Thorens2, G. Mithieux1, A. Gautier-Stein1

1 Faculté de médecine Laënnec INSERM U855 « Nutrition et Cerveau », Lyon ;2 Center for Integrative Genomics, University of Lausanne, Lausanne, Suisse.

Introduction : Le glucose est absorbé par les entérocytes par le co-transporteurSGLT1 à la membrane apicale et par le transporteur GLUT2 à la membranebasolatérale. En absence de GLUT2 le glucose pourrait être absorbé via unevoie impliquant l’activité de la glucose-6-phosphatase (G6Pase). Dans ce travail,nous avons étudié l’implication de GLUT2 et de la G6Pase dans l’absorptionintestinale de glucose.

Diabète – Paris 2014

A75Diabetes Metab 2014, 40, A31-A110

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Matériels et méthodes : L’absorption de glucose a été mesurée in vivo par destests oraux de tolérance au glucose réalisés après 16 heures de jeûne chez dessouris sauvages (WT) et des souris présentant une délétion de la G6Pase (I.G6pc-/-), du transporteur GLUT2 (I. Glut2-/-) ou des deux gènes (I. G6pc-/-.Glut2-/-) spécifiquement au niveau de l’intestin. L’utilisation de glucose tritiénous a permis de mesurer l’absorption de glucose in vitro dans des chambres deUssing.Résultats : Quelque-soit le génotype, l’absorption intestinale de glucose esttranscellulaire et met en jeu SGLT-1 car elle est supprimée par la phloridzine.L’invalidation de Glut2 dans l’intestin induit un retard d’absorption de glucosein vivo et une diminution de 50 % de la vitesse d’absorption in vitro. Les sourisI. Glut2-/- compensent leur malabsorption du glucose en augmentant leur prisealimentaire (32,9 ± 0,5 g/kg versus 30,6 ± 0,7 g/kg chez les WT). L’invalidationde la G6Pase dans l’intestin n’a pas d’effet sur l’absorption intestinale de glucosemesurée in vivo mais induit une diminution de 50 % de la vitesse d’absorptionin vitro. L’invalidation concomitante des deux gènes n’a pas d’effet additionnelsur l’absorption de glucose. L’expression génique des autres transporteurs deglucose n’est pas modifiée dans l’intestin des souris I. G6pc-/-. Glut2-/-. Cessouris ne compensent par leur malabsorption par une augmentation de leurprise alimentaire.Conclusion : Nos résultats montrent que GLUT2 et la G6Pase sont impliqués,mais pas essentiels, dans l’absorption de glucose par les entérocytes. D’autresmécanismes sont induits en absence des deux protéines pour assurer l’absorp-tion intestinale de glucose.

P198 Low-grade inflammatory response to overfeeding is linked to the relative variations of sCD14 and LBP in healthy men

F. Laugerette1, M. Alligier2, J. Bastard3, H. Vidal4, M. Laville5, M. Michalski41 INSERM U 1060, Université Lyon 1, Villeurbanne ;2 CRNH Rhône-Alpes, Oullins ;3 Service de biochimie et hormonologie, Assistance publique-Hôpitaux de Paris, hôpitalTenon, Paris ;4 INRA, USC 1362, INSERM, U1060, CarMeN laboratory, Villeurbanne ;5 CENS, Oullins.

Introduction : Low-grade inflammation is now recognized as a hallmark ofobesity pathophysiology. Recent interest has focused on the role of endo-toxins absorbed during high fat meals. LBP and sCD14 have also been sug-gested as clinical markers of endotoxemia and in mice, the ratio LBP/sCD14has been associated with high-fat diet induced inflammation. We tested thehypothesis that healthy subjects develop inflammation differently duringoverfeeding-induced weight gain according to the changes of LBP/sCD14ratio in plasma.Patients et méthodes : Eighteen lean to overweight subjects were submitted tooverfeeding (OF) during 8 weeks (+ 760 kcal/day). Endotoxemia, sCD14, LBPand IL-6 were measured before and after OF at fasting (n = 18), and in thepostprandial phase after an 882-kcal test meal in a subcohort (n = 8).Résultats : In the cohort, no effect of OF was observed on fasting IL-6 but OFinduced an increase of LBP/sCD14 ratio (P = 0,017). Subjects were divided intotertiles regarding their variation of LBP/sCD14 ratio due to OF. Subjects in thehighest tertile (+ 90 % of LBP/sCD14 ratio) increased plasma IL-6 (+ 26 %)compared with the lowest tertile (no increase of LBP/sCD14 ratio ; – 31 % ofplasma IL-6 ; P < 0,05). This was due to a decrease of plasma sCD14 (P < 0,05),while in the middle tertile the increased ratio (+ 30 %) was due to increasedLBP (P < 0,05). OF induced an increased postprandial accumulation of endo-toxins regardless of tertile (P < 0,05). However, OF increased the fasting andpostprandial IL-6 concentrations only in subjects of the middle and highest ter-tiles (P < 0,01 vs baseline and vs lowest tertile).Conclusion : Overfeeding increases postprandial endotoxemia but the inflam-matory outcome appears to be modulated by the handling of endotoxins by dif-ferent transporters in plasma. This study supports a new concept whereby thesetup of low-grade inflammation during the initial phase of weight gain is lin-ked to the relative variations of LBP and sCD14.

P199 L’inactivation génique de Cdkn2a chez la souris protège de l’obésité et du diabète de type 2 en modulant le métabolisme oxydatif

E. Salas Ibáñez, N. Rabhi, C. De Bettignies, P. Froguel, J. AnnicotteEuropean Genomic Institute for Diabetes, CNRS UMR 8199, Lille 2 University, Lille.

Introduction : P16Ink4a et p19Arf, codés par le locus Cdkn2a, contrôle laprolifération cellulaire via les voies CDK4-CyclinD-pRb-E2F et p53, respec-tivement. Des études de « Genome-Wide Association » ont identifié uneassociation entre le locus Cdkn2a et le diabète de type 2 (DT2). Dans desconditions physiologiques, les niveaux de p16 dans le pancréas diminuentavec l’âge, inhibant la prolifération des cellules bêta pancréatiques, les ren-dant incapables de s’adapter aux besoins métaboliques. Cependant, le rôle deCdkn2a dans les tissus insulino-sensibles demeure inconnu. L’objectif princi-

pal de ce travail est d’étudier la fonction de Cdkn2a dans des conditions dia-bétogènes.Matériels et méthodes : Des souris contrôles et inactivées spécifiquementpourþCdkn2a (KO) ont été soumises à un régime riche en graisse pendant12þsemaines. Des tests de tolérance au glucose et à l’insuline ont été réalisés pourmesurer la résistance au glucose et la sensibilité à l’insuline, respectivement.Afin de mesurer le métabolisme énergétique in vivo, ces souris ont été misesdans des cages métaboliques.Résultats : Les souris Cdkn2a KO sont résistantes à une obésité induite par unrégime riche en graisse, bien que leur prise alimentaire soit augmentée. Cepen-dant, bien qu’intolérantes au glucose, les KO restent sensibles l’insuline, suggé-rant que, contrairement aux souris contrôles, les Cdkn2a KO ne développentpas de DT2. Les souris Cdkn2a KO démontrent une augmentation de leurdépense énergétique, secondaire à une augmentation de l’activité du tissu adi-peux brun.Conclusion : P16Ink4a et p19Arf contrôle la dépense énergétique et le métabo-lisme oxydatif. En conséquence, les souris invalidées pour Cdkn2a sont résis-tantes à l’obésité et ne développent pas de DT2. Les mécanismes moléculairessous-jacents (régulation via E2F1) sont en cours d’analyse.

P200 Le diabète à tendance cétosique : est un sous type du diabète de type 2 dans sa grande majorité

Z. Nehar, A. Behidj, B. OudjitHôpital central de l’armée, Alger, Algérie.

Introduction : Le typage d’un diabète permet de mettre en route une thérapeu-tique adaptée et de préjuger de l’évolution de la maladie. Cependant, les clini-ciens rencontrent dans leur pratique, une forme clinique de diabète, difficile àclasser car tenant à la fois du DT1 et du DT2. Il s´agit du Diabète sucré à ten-dance cétosique, dont le mode d’installation est celui d’un DT1 avec une cétosespontanée mais le terrain de survenue et l’évolution vers une rémission, évo-quent plutôt un DT2. Le but du travail est de décrire le profil clinique et biolo-gique au diagnostic du diabète et de décrire le devenir à long terme de cespatients.Matériels et méthodes : Notre étude a concerné, 107 patients (recrutés de1991 à 2007) qui ont présenté une cétose diabétique inaugurale d’allurespontanée et qui sont « entrés en rémission » de l’insulinothérapie ; Chezces patients nous avons étudié les paramètres cliniques, biologiques et thé-rapeutiques au début du diabète et à leur inclusion dans l’étude (2011) etréalisé un dosage du peptide C de base et après glucagon et un dosage desanticorps anti GAD ;Résultats : L’âge moyen du groupe : 36,7 ± 7,8, l’IMC : 24,5 ± 4,5 kg/m², le TT :93,5 cm ± 11,87 et l’IMC antérieur : 28,7 ± 4,5 kg/m² ; le peptide C de base : 1,83± 1,13 et après stimulation au glucagon 3,38 ± 2,65 ng/ml. le diabète auto-immuns est retrouvé chez 10,3 % des patients. La durée de la rémission dansnotre série varie entre 1 et 20 ans avec une médiane de 6 ans, 41 % sont encoreen rémission après 8,5 ans d’évolutionConclusion : la combinaison du dosage hormonal et immunologique permet dedistinguer dès la résolution de la cétose, au minimum quatre sous-groupes dif-férents dans ce diabète. La méconnaissance du DSATC pourrait conduire à uneconfusion dans la thérapeutique avec maintien de l’insulinothérapie de façonabusive pendant plusieurs années ce qui génère une altération de la qualité devie du patient et un coût financier non négligeable.

P201 L’impact d’un cocktail de polluants alimentaires faiblement dosés dépend du sexe et du régime alimentaire : étude dans un modèle murin

E. Labaronne, C. Pinteur, N. Vega, H. Vidal, D. Naville, B. Le Magueresse-BattistoniINSERM U1060 CarMeN, Université de Lyon 1, INRA UMR 1235, Oullins cedex.

Introduction : Des travaux de la littérature suggèrent l’implication des contami-nants environnementaux dans l’épidémie d’obésité et l’incidence du diabète.Notre laboratoire a montré récemment que chez des souris rendues obèses parl’alimentation, une exposition chronique à un cocktail de polluants alimentairesfaiblement dosés induisait des altérations métaboliques dépendantes du sexe(Naville et al., Faseb Journal 2013). Dans l’étude présentée ici, nous analysonsles conséquences métaboliques du même cocktail de polluants sur des sourisnon-obèses.Matériels et méthodes : Des souris C57Bl6/J sont nourries toute leur vie(depuis la préconception chez les mères) avec une alimentation standard addi-tionnée (STP) ou non (ST0) du mélange des 4 polluants (2,3,7,8-tetrachloro-dibenzo-p-dioxine, PCB153, diethylhexyl-phthalate, BisphenolA). Le statutmétabolique et l’expression de gènes cibles précédemment identifiés dans lefoie de souris obèses (i.e., métabolisme du cholestérol chez les mâles et signali-sation estrogénique chez les femelles) sont étudiés sur les souris non-obèses de12 semaines.Résultats : Le phénotype (poids, statut métabolique) des souris STP estcomparable à celui des souris ST0, hors une élévation significative de la glycé-