Paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes … asymptomatique chez les femmes enceintes à Ouagadougou : anémie carentielle, diagnostic moléculaire et transmission verticale

N°d’ordre-------

Thèse Présentée

Par Zoénabo DOUAMBA

Pour obtenir le grade de

Docteur de l’Université de Ouagadougou

Option : Sciences Biologiques Appliquées

Spécialité : Biologie moléculaire

Paludisme asymptomatique chez les femmes

enceintes à Ouagadougou : anémie carentielle,

diagnostic moléculaire et transmission verticale du

plasmodium

Soutenue le ……………201 devant le jury composé de :

Président :

Membres :

Jacques SIMPORE, Professeur titulaire, Ouaga I Pr Joseph KI-ZERBO (Directeur de thèse).

-

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-

UNIVERSITE OUAGA I Pr Joseph Ki-ZERBO ---------------

École Doctorale

Sciences et Technologies

---------------

Laboratoire de Biologie Moléculaire et

de Génétique (LABIOGENE)

Moléculaires (LABIOGENE)

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page i

DEDICACE

A mon fils Mohamed Bachir Farid

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page ii

REMERCIEMENTS

Ce travail a été réalisé au Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro ANNIGONI /

Laboratoire de Biologie moléculaire et de Génétique, université Ouaga I Pr Joseph KI-

ZERBO (CERBA/LABIOGENE) et au Centre Médical Saint Camille de Ouagadougou. Mes

remerciements les plus sincères vont à tous ceux qui m’ont permis d’entreprendre le présent

travail et m’ont aidée à le mener à bien en me prodiguant soutien et conseils.

Je tiens à exprimer ma profonde gratitude au Professeur Jacques SIMPORE, Professeur

titulaire de Génétique et de Biologie Moléculaire de l’Université Ouaga I Pr Joseph KI-

ZERBO ; Directeur du Laboratoire de Biologie Moléculaire et de Génétique (LABIOGENE)

de l’UFR/SVT de l’Université Ouaga I Pr Joseph Ki-ZERBO; Directeur du Centre de

Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA) ; Recteur de l’Université Saint Thomas

d’Aquin (USTA), Directeur de cette thèse. Le Professeur SIMPORE est le principal

promoteur de la présente thèse. Merci pour votre soutien moral et financier, pour la qualité

de l’encadrement scientifique, pour vos précieux conseils et votre disponibilité en dépit de

vos multiples occupations.

Au Docteur Virginio PIETRA, Médecin épidémiologiste, chargé de recherches (Université

de Brescia, Italie), responsable de la prise en charge des Personnes vivant avec le VIH à

l’Hôpital Saint Camille de Ouagadougou (HOSCO), au CERBA et à Nanoro ; je vous

remercie pour tous vos conseils et vos apports pédagogiques.

Mes sincères remerciements vont également :

Au Docteur Paul OUEDRAOGO, pour avoir accepté que l’Hopital Saint Camille (HOSCO)

soit le cadre de notre étude.

Au Père Albert YONLI, Vice-Directeur du CERBA pour votre disponibilité et vos

encouragements.

Aux Docteurs Cyrille BISSEYE, Florencia DJIGMA, Djénéba OUERMI, Abdoul Moctar

ZEBA, Tani SAGNA et Dénise ILBOUDO pour leur disponibilité, leur assistance et leurs

précieux conseils. Ce fut pour moi un plaisir de travailler à vos cotés .

A toute l’équipe du CERBA et du LABIOGENE et en particulier aux Dr Théodora

ZOHONCON, Issoufou TAO, Rebecca COMPAORE à M. Valérie BAZIE, à, M. Serge

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page iii

SOUBEIGA, à M. Abdoul Karim OUATTARA, à M. Birama DIARRA, à M. Désiré

ILBOUDO pour leur disponibilité, leur amitié et leur assistance technique.

A toute l’équipe du Laboratoire d’analyses médicales de l’HOSCO, et en particulier à Feu

Robert BAKAMBA (Que son âme repose en paix), à Mme Angèle SANFO et M. Barthélémy

NANA pour leur assistance technique.

A toute l’équipe du service de la Santé Maternelle et Infantile et de la maternité de l’HOSCO

pour m’ avoir facilité le contact avec les femmes, la collecte des échantillons et la prise en

charge des femmes infectées par le plasmodium.

A la Conférence Episcopale Italienne (CEI), pour son appui financier dans la réalisation de

nos travaux de recherches.

A l’Union Economique et Monétaire Ouest Africaine (UEMOA) pour le soutien financier à

travers le PACER2.

A M. K. Paul KABORE et son épouse pour leurs soutien et encouragements.

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page iv

SOMMAIRE

DEDICACE ................................................................................................................................. i

REMERCIEMENTS .................................................................................................................. ii

SOMMAIRE ............................................................................................................................. iv

LISTE DES FIGURES ............................................................................................................ viii

LISTE DES TABLEAUX ......................................................................................................... ix

SIGLES ET ABREVIATIONS .................................................................................................. x

RESUME .................................................................................................................................. xii

ABSTRACT ............................................................................................................................ xiv

INTRODUCTION GENERALE ................................................................................................ 1

OBJECTIF DE LA THESE........................................................................................................ 3

I. GENERALITES ..................................................................................................................... 4

I.1. Historique du paludisme ................................................................................................... 4

I.2. Situation du paludisme dans le monde ............................................................................. 4

I.3. L’agent vecteur et son écologie ........................................................................................ 5

I.4. Le parasite ........................................................................................................................ 6

I.5. Cycle de vie du parasite ................................................................................................... 7

I.5.1. Cycle chez l'homme ................................................................................................... 7

I.5.2. Cycle chez l’anophèle ................................................................................................ 8

I.6. Pathogenèse du paludisme ............................................................................................... 9

I.6.1. Invasion des hématies ................................................................................................ 9

I.6.2. La cytoadhérence ....................................................................................................... 9

I.7. Variabilité antigénique du Plasmodium ......................................................................... 10

I.8. Manifestations cliniques ................................................................................................. 10

I.9. Paludisme et grossesse ................................................................................................... 11

I.9.1. Cytoadhérence placentaire ....................................................................................... 12

1.9.2. Effets chez la mère .................................................................................................. 13

1.9.3. Effets sur la santé de l’enfant .................................................................................. 13

I.9.4 Transmission verticale du paludisme ....................................................................... 14

I.9.5. Paludisme asymptomatique de la femme enceinte .................................................. 15

I.10. Diagnostics du paludisme............................................................................................. 15

I.10.1. Diagnostic microscopique direct par frottis sanguin et goutte épaisse .................. 16

I.10.2. Détection d’antigènes plasmodiaux par les tests de diagnostic rapide .................. 16

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page v

I.10.3. Le QBC Malaria test ou Quantitative Buffy Coat ................................................. 17

I.10.4. Diagnostic moléculaire par PCR ........................................................................... 18

I.10.5. Détection des anticorps antiplasmodiaux .............................................................. 18

I.11. Traitement du paludisme et prophylaxie ...................................................................... 20

I.11.1. Traitement du paludisme ....................................................................................... 20

I.11.2. Prophylaxie ............................................................................................................ 21

I.11.3. Résistances de Plasmodium falciparum aux antipaludiques et résistance des

vecteurs aux insecticides ................................................................................................... 23

I.12. Interventions recommandées chez la femme enceinte ................................................. 25

I.12.1. Traitement préventif intermittent ........................................................................... 25

I.12.2. Moustiquaires imprégnées d’insecticide ............................................................... 25

I.13. La recherche de vaccins contre le paludisme ............................................................... 25

I.14. Quelques caractéristiques épidémiologiques du paludisme : le polymorphisme de

l’hémoglobine S et C et les groupes sanguins ABO ............................................................. 27

I.14.1. Hémoglobines S et C (HbS et HbC) ...................................................................... 27

I.14.2. Groupes sanguins ABO ......................................................................................... 28

I.15. Homocystéine, Folates, Anémie et paludisme ............................................................. 28

I.15.1. L’homocystéine ..................................................................................................... 28

I.15.2. Les folates ou vitamine B9 .................................................................................... 29

I.15.3. L’anémie ................................................................................................................ 30

II. MATERIEL ET METHODES ............................................................................................ 31

II.1. Cadre et type d’étude .................................................................................................... 31

II.2. Population d’étude et échantillonnage .......................................................................... 32

II.3. Test de diagnostic rapide du paludisme (TDR) ............................................................ 33

II.4. Goutte épaisse et frottis sanguins .................................................................................. 34

II.5. Conaractérisation des espèces plasmodiales par PCR en temps réel ............................ 34

II.5.1. Extraction de l’ADN .............................................................................................. 34

II.5.2. Confirmation de la présence de P. falciparum par la PCR en temps réel .............. 36

II.6. Electrophorèse de l’hémoglobine ................................................................................. 37

II.7. Dosage colorimétrique du taux d’hémoglobine ............................................................ 37

II.8. Dosage du fer sérique .................................................................................................... 37

II.9. Dosage des folates et de l’homocystéine ...................................................................... 38

II.9.1. Dosage immunologique par polarisation de fluorescence (FPIA) de l’homocystéine

........................................................................................................................................... 38

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page vi

II.9.2. Dosage des folates .................................................................................................. 39

II.10. Dosage de l’Aspartate Aminotransférase (ASAT), de l’Alanine Aminotransférase

(ALAT) et de la créatinine .................................................................................................... 40

II.10.1. Dosage de l’Aspartate Aminotransférase ............................................................. 40

II.10.2. Dosage de l’Alanine Aminotransferase ................................................................ 41

II.10.3. Dosage de la créatinine ........................................................................................ 41

II.11. Considérations éthiques .............................................................................................. 41

II.12. Analyses statistiques ................................................................................................... 41

III. RESULTATS ..................................................................................................................... 56

III.1. Article 1 – Le paludisme asymptomatique est associé à l’anémie chez les femmes

enceintes à Ouagadougou ..................................................................................................... 56

III.1.1. But et contexte ...................................................................................................... 56

III.1.2. Résultats ................................................................................................................ 56

III.1.3. Conclusion partielle .............................................................................................. 61

III.2. Article 2 – Paludisme asymptomatique chez les parturientes et transmission verticale

du Plasmodium falciparum à Ouagadougou (Burkina Faso) ................................................ 62

III.2.1. But et contexte de l’étude ..................................................................................... 62

III.2.2. Résultats ................................................................................................................ 62


III.3. article 3 - Diagnostic moléculaire du Plasmodium par PCR en temps réel chez les

parturientes et chez leurs nouveaux nés à l’Hôpital saint Camille de Ouagadougou. .......... 69

III.3.1. But et contexte de l’étude ..................................................................................... 69

III.3.2. Résultats de la RT-PCR ........................................................................................ 69


IV. DISCUSSION GENERALE .............................................................................................. 71

IV.1. Article 1 : le paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes à Ouagadougou

.............................................................................................................................................. 71

IV.1.1. Prévalence du paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes et

l’utilisation des mesures préventives ................................................................................ 71

IV.1.2. Paramètres biochimiques et hématologiques chez les femmes enceintes ............ 72

IV.1.3. Mesures préventives, paramètres biochimiques, hématologiques et paludisme

asymptomatique chez les femmes enceintes ..................................................................... 73

IV.2. Article 2 : Paludisme asymptomatique chez les parturientes et transmission verticale

du Plasmodium falciparum à Ouagadougou ......................................................................... 75

IV.2.1. Couverture de la prophylaxie antipaludique par le TPI/SP et l’utilisation des MII

........................................................................................................................................... 75

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page vii

IV.2.2. Caractéristiques sociodémographique et biologique des parturientes et de leurs

nouveaux nés ..................................................................................................................... 76

IV.2.3. Prévalence du paludisme chez les parturientes (infection périphérique) .............. 76

IV.2.4. Prévalence du paludisme placentaire chez les parturientes .................................. 77

IV.2.5. Incidence du paludisme congénital chez les nouveau-nés. ................................... 77

IV.3. Confirmation de la présence de P. falciparum par la PCR en temps réel .................... 78

CONCLUSION ........................................................................................................................ 79

PERSPECTIVES ...................................................................................................................... 80

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ................................................................................. 81

ANNEXES .................................................................................................................................. I

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page viii

LISTE DES FIGURES

Figure 1 : Situation du paludisme dans le monde en 2013 ........................................................ 5

Figure 2 : Cycle de vie de Plasmodium falciparum .................................................................. 8

Figure 3 : Cytoadhérence et rosetting ...................................................................................... 10

Figure 4 : Cartographie du nombre de femmes enceintes vivant dans des zones à risques du

paludisme à P. falciparum en 2007 .......................................................................................... 12

Figure 5 : Conséquences du paludisme gestationnel sur le fœtus ........................................... 13

Figure 6 : Conséquences du paludisme pendant la grossesse : zone de transmission forte ou

modérée .................................................................................................................................... 15

Figure 7 : Introduction des antipaludiques et apparition des résistances de P. falciparum ..... 24

Figure 8 : Schéma simplifié des voies de polyamines et de l’homocystéine .......................... 29

Figure 9 : Représentation des résultats de test rapide du paludisme ....................................... 33

Figure 10 : Une goutte épaisse ................................................................................................ 34

Figure 11 : Thermocycler 7500 Fast Real-Time PCR ............................................................. 36

Figure 12 : Compétition entre la substance à doser et le traceur ............................................. 39

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page ix

LISTE DES TABLEAUX

Tableau I : Part du paludisme dans l’anémie, le petit poids de naissance et la mortalité

néonatale ................................................................................................................................... 14

Tableau II : Méthodes de diagnostic des infections plasmodiales .......................................... 19

Tableau III : Protocole de dosage du fer sérique .................................................................... 38

Tableau IV : Caractéristiques professionnelles et socio-économiques des femmes ............... 57

Tableau V : Paramètres biochimiques et hématologiques des femmes enceintes .................. 59

Tableau VI : Corrélation entre paramètres hématologiques, parité, stade de la grossesse,

mesures préventives et paludisme asymptomatique ................................................................. 60

Tableau VII : Caractéristiques des parturientes ...................................................................... 63

Tableau VIII : Caractéristiques des nouveau-nés ................................................................... 64

Tableau IX : Résultats de la goutte épaisse ............................................................................ 65

Tableau X : Association entre l’utilisation de mesures préventives et l’infection palustre

maternelle ................................................................................................................................. 66

Tableau XI : Association entre l’infection palustre maternelle, le TPI/SP et l’infection

palustre placentaire et néonatale .............................................................................................. 67

Tableau XII : Comparaison des résultats de la PCR en temps réel et de la goutte épaisse .... 69

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page x

SIGLES ET ABREVIATIONS

Ac : Anticorps

ACT : Artemisinin-based combination therapy (combinaison thérapeutique à base

d’artémisinine)

ADN : Acide désoxyribonucléique

ARN : Acide ribonucléique

CERBA : Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni

CMSCO : Centre Médical Saint Camille de Ouagadougou

EDTA : Ethylene diamine tetra-acetic acid

ERi : Erythrocyte infecté

FAM : 6-carboxyfluorocéine

FPIA : fluorescence polarisation immunologic assay

FS : Frottis sanguin

GE : Goutte épaisse

Hcy : Homocystéine

HOSCO : Hopital Saint Camille de Ouagadougou

HRP2 : Histidin rich protein 2

LABIOGENE : Laboratoire de Biologie moléculaire et de Génétique

LDH : Lactate déshydrogenase

MII : moustiquaire imprégnée d’insecticide

MILDA : moustiquaire imprégnée d’insecticide à longue durée d’action

OMS : Organisation Mondiale de la Santé

PCR : Polymerase Chain Reaction

PfEMP-1 : Plasmodium falciparum erythocyte membrane protein-1

RT-PCR : Polymerase Chain Reaction- Real Time

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page xi

SAH : S-adénosyl-L-homocystéine

SP : Sulfadoxine - pyriméthamine

TDR : Test de diagnostic rapide

TPI : Traitement préventif intermittent

TPI/SP : traitement préventif intermittent à base de sulfadoxine-pyriméthamine

VIH : Virus de l’Immunodéficience Humaine

WHO : World Health Organization

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page xii

RESUME

Objectif – Le paludisme chez les femmes enceintes constitue un problème de santé publique

en Afrique subsaharienne et en l’occurrence le Burkina Faso. Les objectifs de cette thèse

étaient : i) d’évaluer le taux de couverture des mesures préventives (moustiquaire imprégnée

d’insecticide et traitement préventif intermittent) ; ii) d’estimer la prévalence du paludisme

asymptomatique et l’anémie carentielle chez les femmes enceintes ; iii) de déterminer le taux

de transmission verticale du paludisme asymptomatique et iv) de confirmer l’infection de P.

falciparum chez les parturientes et leurs nouveau-nés par PCR en temps réel (RT-PCR).

Méthode – Notre étude comporte deux parties : la 1re

partie a concerné 201 femmes enceintes

et la 2e partie a porté sur 238 couples mère-nouveau-né. Un questionnaire a été élaboré dans le

but de recueillir les données sociodémographiques de ces femmes. Afin d’estimer la

prévalence du paludisme asymptomatique, nous avons réalisé des tests de diagnostic rapide

(TDR) de Plasmodium spp., suivis de gouttes épaisses. Parmi les échantillons collectés, 48

échantillons ont été choisis par rapport à leur parasitémie pour la PCR en temps réel. Des

paramètres biochimiques et hématologiques ont également été analysés ; ce sont : les taux

d’hémoglobine, d’homocystéine, de folates et de fer sérique, ainsi que les groupes sanguins et

les types d’hémoglobine par électrophorèse. L’analyse des transaminases, de la créatinine et

du taux d’hémoglobine a été réalisée chez les nouveaux nés.

Résultats – Dans la première partie des travaux de notre thèse, le taux d’utilisation des

moustiquaires imprégnées d’insecticide (MII) était de 42,0% et la couverture du traitement

préventif intermittent à la sulfadoxine pyriméthmine (TPI/SP) était de 27,0%. La prévalence

de l'infection asymptomatique par Plasmodium falciparum chez les femmes enceintes était de

24,0%. Cette prévalence a été significativement réduite chez les femmes enceintes ayant pris

un TPI/SP. Les femmes anémiées représentaient 61,0% et l’anémie était significativement

plus fréquente chez les femmes infectées par P. falciparum par rapport aux femmes enceintes

non infectées. La plupart des femmes avaient des taux normaux de fer sérique,

d'homocystéine et de faibles taux de folates. Nous n’avons pas trouvé d’association entre le

paludisme asymptomatique et les électrophorèses de l’hémoglobine et les groupes sanguins

des femmes.

Dans la deuxième partie des travaux de notre thèse, nous avons obtenu chez les parturientes,

un taux d’utilisation des MII de 86,6% et un taux de couverture au TPI/SP de 84,5%. Le taux

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page xiii

d’infection palustre maternelle était de 11,34% dont 8,8% d’infection périphérique, 7,1%

d’infection placentaire. L’incidence du paludisme chez le nouveau-né était de 2,1%.

L’infection placentaire était fortement associée à l’infection maternelle périphérique et à la

densité parasitaire maternelle ˃1000 parasites /µl. La prévalence du paludisme congénital

chez la femme enceinte en travail d’accouchement est faible mais se traduit par un taux de

transmission verticale assez important (18,5%).

Sur les 44 échantillons de goutte épaisse positive réexaminés par PCR en temps réel, 43 ont

été confirmés positifs ; tandis que les 4 échantillons de goutte épaisse négative ont été tous

confirmés négatifs par la technique de la PCR en temps réel. Nos résultats ont démontré que

la sensibilité de la PCR en temps réel était de 97,73% avec une spécificité de 100%.

Conclusion – Nous avons observé un faible taux d’utilisation des mesures préventives dans la

1re partie qui s’est traduit par une prévalence élevée du paludisme asymptomatique chez les

femmes enceintes. L’anémie était associée à cette infection asymptomatique. L’amélioration

de l’utilisation des MILDA et la prise des TPI/SP a été constatée dans la seconde partie avec

comme conséquence la réduction de la prévalence du paludisme asymptomatique chez les

parturientes. Cependant, cette infection avait une forte association avec le paludisme

placentaire.

Aussi, le paludisme chez la femme enceinte est sous-évalué puisque 35,3% des infections

placentaires provenaient de mère sans une infection périphérique détectée par goutte épaisse.

De ce fait, le paludisme asymptomatique demeure une préoccupation chez la femme enceinte

compte tenu du risque pour sa santé et celle de son bébé.

Mots clés : Paludisme asymptomatique, femmes enceintes, RT-PCR, anémie, nouveau-nés,

transmission verticale, SP et MII.

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page xiv

ABSTRACT

Background – Malaria in pregnancy is a public health problem in sub-Saharan Africa and

Burkina Faso. The objectives of this thesis were to identify pregnant women and new mothers

practicing malaria prophylaxis; to assess the prevalence of asymptomatic malaria and its

impact among pregnant women; to study the vertical transmission of malaria and to confirm

the presence of P. falciparum in the parturients and their newborns by real time PCR.

Methods – Our study has two parts; the first part concerned 201 pregnant women and the

second looked at 238 mothers-newborn pairs. We performed rapid diagnostic test (RDT) of

Plasmodium spp. followed by thick films. Of the samples collected, 48 samples were selected

for their parasitaemia and were analyzed by real-time PCR. Biochemical and hematological

parameters were also analyzed; these are: hemoglobin, homocysteine, folate and serum iron

rate, as well as blood groups and types of hemoglobin by electrophoresis. Analysis of

transaminases, creatinine and hemoglobin was performed in newborns.

Results – In the first part of the work of our thesis, the rate of use of insecticide-treated nets

(ITNs) was 42% and the coverage of intermittent preventive treatment with sulfadoxine

pyriméthmine (IPT / SP) was 27%. The prevalence of asymptomatic Plasmodium falciparum

infection in pregnant women was 24%. This prevalence was significantly reduced in pregnant

women taking IPT / SP. Anemic women represented 61% and anemia was significantly more

common in P. falciparum-infected women compared to non-infected pregnant women. Most

women had normal serum iron, homocysteine levels, and low folate levels. We did not find

any association between asymptomatic malaria and electrophoresis of hemoglobin and blood

groups of women.

In the second part of the work of our thesis, we obtained in the parturients, a rate of use of the

ITNs of 86,6% and a rate of coverage to the TPI / SP of 84,5%. Maternal malaria infection

rate was 11.34%, of which 8.8% of peripheral infection, 7.1% of placental infection. The

incidence of malaria in the newborn was 2.1%. Placental infection was strongly associated

with the presence of parasites in the maternal peripheral blood and a parasite density >1000

parasites/ L. The prevalence of congenital malaria was reduced but was associated with a

high rate of mother-to-child malaria transmission (18.5%).

Of the 44 positive thick drop samples reexamined by real-time PCR, 43 were confirmed

positive; while the 4 negative thick drop samples all confirmed negative by the real-time PCR

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page xv

technique. Our results showed that the sensitivity of real-time PCR was 97.73% with a

specificity of 100%.

Conclusion – We observed a low use of preventive measures in the first part, which is

reflected in a high prevalence of asymptomatic malaria in pregnant women. Anemia has been

associated with this asymptomatic infection. Improving the use of LLINs and the taking IPT /

SP was found in the second part with a consequent reduction in the prevalence of

asymptomatic malaria in women in work but has a strong association with placental malaria.

In addition, malaria among pregnant women is undervalued, because 35.3% of placental

infections were parents without a peripheral blood smear detected infection. Therefore

asymptomatic malaria remains a concern for pregnant women because of the risk to her health

and that of their baby.

Keywords : asymptomatic malaria, pregnant women, RT-PCR, anemia, newborn, vertical

transmission, ITP/SP and ITNs

INTRODUCTION GENERALE

Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page 1

INTRODUCTION GENERALE

Le paludisme est une maladie parasitaire causée par un protozoaire du genre Plasmodium qui

infecte alternativement les hôtes humains et les moustiques. Plasmodium falciparum, l’espèce

qui provoque la forme la plus mortelle du paludisme est répandue par Anopheles gambiae et

Anopheles funestus (Crompton et al., 2010). Le paludisme est une cause majeure de morbidité

et de mortalité dans les régions tropicales. L’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) a

estimé à 198 millions le nombre de personnes malades et 584 000 le nombre de décès

imputables au paludisme en 2013 dans le monde, avec environ 90 % des décès en Afrique

(WHO, 2014). Les enfants de moins de cinq ans et les femmes enceintes constituent la

population la plus vulnérable. Au Burkina-Faso, le paludisme reste une endémie stable dans

tout le pays, avec un pic saisonnier de Mai à Octobre. Il constitue la première cause de

consultation (46,50%), d’hospitalisation (61,50%) et de décès (30,50%) en 2013 selon les

données statistiques du Programme National de Lutte contre le Paludisme (PNLP, 2014). En

effet, le pays a enregistré plus de sept millions de cas de paludisme simple dans l’ensemble

des formations sanitaires, avec 414 234 cas de paludisme grave et plus de six mille décès

(MS, 2014) (Ministère de la Santé/Direction Générale de l’Information et des Statistiques

Sanitaires du Burkina-Faso).

En Afrique subsaharienne environ trente-deux millions de femmes enceintes vivent dans les

zones à risque de transmission du paludisme à Plasmodium falciparum (Dellicour et al.,

2010). La prévalence du paludisme gestationnel est très variable en Afrique. En effet, des

prévalences de 5%, 28% et de 68,3% ont été rapportées respectivement au Ghana (Stephens et

al., 2014), en Uganda (De Beaudrap et al., 2013) et au Nigéria (Amuta et al., 2014). Deux

études antérieures faites au Burkina Faso, ont montré que la prévalence du paludisme chez les

femmes enceintes variait entre 28,2% (Ouedraogo et al., 2012) et 42,7% (Tahita et al., 2013).

L’infection palustre au cours de la grossesse est potentiellement dangereuse à cause des

risques sur la santé maternelle et infantile. En effet, même asymptomatique, le paludisme à

Plasmodium falciparum est responsable chez la femme enceinte d’anémie maternelle (Uneke,

2007). La sévérité du paludisme chez les femmes enceintes est due à la séquestration

placentaire des globules rouges infectés (Rogerson et al., 2007a ; Barfod et al., 2010). Cette

séquestration altère la fonction placentaire (Chaikitgosiyakul et al., 2014) et les carences

http://fr.wikipedia.org/wiki/Afrique_subsaharienne


nutritives qui en résultent pour le fœtus sont parfois source d’avortements, de retard de

croissance intra utérine, de mort-nés et de naissance prématurée (Guyatt et Snow, 2004 ;

Desai et al., 2007). Le paludisme gestationnel est responsable d’une morbidité maternelle et

infantile élevée, causant près de 75 000 à 200 000 décès de nourrissons chaque année

(Steketee et al., 2001 ; Desai et al., 2007). La transmission verticale du paludisme peut avoir

de graves conséquences pour le nouveau-né telles que le risque plus élevé d’infection palustre

au cours des premiers mois de la vie (Schwarz et al., 2008 ; Borgella et al., 2013) et une

susceptibilité précoce à d’autres infections (Malhotra et al., 2009 ; Rachas et al., 2012).

L’infection palustre placentaire est élevée au Burkina Faso et elle est caractérisée par un

faible taux d’infection palustre néonatale (Ouedraogo et al., 2012). Cependant, la

transmission verticale du paludisme et son impact sur la santé du nouveau-né a été peu

investiguée. Le but de ce travail était d’étudier l’impact du paludisme asymptomatique chez

les femmes enceintes et chez leurs nouveau-nés.


OBJECTIF DE LA THESE

Objectif principal

Contribuer à la prise en charge clinique et biologique du paludisme chez les femmes enceintes

au Burkina Faso.

Objectifs spécifiques

Evaluer le taux de couverture des mesures préventives contre le paludisme :

moustiquaire imprégnée d’insecticide et traitement préventif intermittent ;

Estimer la prévalence du paludisme asymptomatique et l’anémie carentielle chez les

femmes enceintes ;

Déterminer le taux de transmission verticale du paludisme asymptomatique ;

Confirmer la présence de P. falciparum chez les parturientes et leurs nouveaux-nés par

PCR en temps réel.

GENERALITES


I. GENERALITES

I.1. Historique du paludisme

Le paludisme, du latin « paludis » ou de l’italien « mal’aria, mauvais air » est une maladie

très ancienne connue depuis l’antiquité. La présence de P. falciparum a été mise en évidence

dans des momies égyptiennes vieilles de 3000 ans av JC (Chastel, 2004). Les chinois, dès le

IVe siècle, utilisaient l’arbre Qinghaosu ou Artemisia annua pour ses vertus fébrifuges. En

1620, Don Francisco Lopez, père jésuite, reconnut les vertus curatives de la poudre d’écorce

du quinquina et distingua les fièvres qui réagissaient favorablement et celles qui lui

résistaient. La « poudre des Jésuites » a connu un énorme succès car le paludisme était alors

largement répandu en Europe. En 1820, Pelletier et Caventou isolèrent deux des alcaloïdes

actifs du quinquina, la quinine et la cinchonine. C’est en 1880 qu’Alphonse Laveran, un

médecin militaire français, a mis en évidence l’agent étiologique du paludisme dans le sang

des patients qui souffraient d’accès fébriles. En 1897, le britannique Sir Ronald Ross,

médecin de l’armée des Indes, reconnut l’implication des moustiques dans la transmission du

paludisme aviaire, et Giovanni-Battista Grassi, en 1898 en Italie, démontra que l’anophèle est

le vecteur du paludisme humain. La phase de division dans le foie ne sera identifiée que bien

plus tard en 1948 par Short et Garnham qui permirent ainsi de compléter la connaissance du

cycle du parasite et d’expliquer les rechutes de la maladie observées dans certains cas. La

seconde guerre mondiale, empêchant l’accès aux plantations indonésiennes de quinquina,

ouvrait la voie du développement et de l’utilisation des premiers antimalariques de synthèse.

La lutte contre le vecteur devenait possible grâce à la découverte des insecticides à action

rémanente qui permirent l’éradication de l’affection dans des régions d’Europe encore

atteintes, et dans certaines îles. Les résistances devaient apparaître rapidement, ruinant les

espérances d’éradication du paludisme (Malvy et al., 2000).

I.2. Situation du paludisme dans le monde

Le paludisme sévit dans 97 pays tropicaux et subtropicaux notamment en Afrique

subsaharienne, en Asie, dans le Pacifique, en Amérique latine (Figure 1). Les années écoulées

depuis 2000 ont été marquées par une augmentation considérable du financement et de la

couverture des programmes de lutte contre le paludisme. Cette situation a conduit à une

réduction à grande échelle de l’incidence du paludisme et de la mortalité. Le nombre de pays

où sévit le paludisme est passé de 103 à 97 en 2013. Dans le monde, entre 2000 et 2012, les

taux de mortalité estimés dus au paludisme ont chuté de 42 % dans toutes les tranches d’âge


et de 48 % chez les enfants de moins de cinq ans (WHO, 2013). Cependant, en 2013, 3,2

milliards de personnes étaient exposées au paludisme avec environ 198 millions (intervalle

d’incertitude : 124 - 283 millions) de personnes malades provoquant 584 000 (intervalle

d’incertitude : 367 000 - 755 000) décès dont 78% chez les enfants de moins de cinq ans. Le

fardeau a été plus lourd en Afrique avec 90% des cas de décès. La réduction de l’incidence du

paludisme dans le monde ne doit pas faire oublier la fragilité des acquis de la lutte

antipaludique et la nécessité de maintenir les programmes de lutte même si le nombre de cas a

sensiblement reculé.

Figure 1 : Situation du paludisme dans le monde en 2013 Source : (WHO, 2014)

I.3. L’agent vecteur et son écologie

L’anophèle est un insecte de la sous-classe des Pterygota et de la famille des Culicidae. Le

genre Anopheles comprend environ 484 espèces, une soixantaine d’espèces sont des vecteurs,

dont une trentaine sont de bons vecteurs ; leur distribution et leur efficience varient selon les

régions géographiques. En Afrique sub-saharienne, on considère qu’il existe quelque 150

espèces d’anophèles, dont une douzaine sont d’excellents vecteurs tels que A. gambiae, A.

arabiensis, A. funestus, A. nili, A. Moucheti. Dans les régions d’endémie palustre stable

comme les zones de savanes comme celles du Burkina, la transmission du parasite est surtout

le fait d’A. gambiae et A. arabiensis pendant les saisons pluvieuses et A. funestus au début de

la saison sèche (Carnevale et Robert, 2009).


I.4. Le parasite

Les parasites responsables du paludisme humain appartiennent à la classe des Aconoidasida, à

l’ordre des Haemosporida, à la famille des Plasmodiidae, au genre Plasmodium. Cinq espèces

de Plasmodium infectent l’homme ; ce sont : P. falciparum, P. vivax, P. ovale, P. malariae et

P. knowlesi.

Le paludisme à P. falciparum ou fièvre tierce maligne (car ayant une périodicité des

recrudescences fébriles tous les deux jours), est la forme la plus mortelle et prédominante en

Afrique Subsaharienne. Il est également rencontré dans les régions tropicales d’Asie du Sud-

Est, d’Amérique du Sud et d’Océanie.

Plasmodium vivax est responsable de la fièvre tierce bénigne en Asie, en Amérique du Sud et

Centrale. Il a une distribution plus large que P. falciparum car il est capable de se développer

dans le vecteur à des températures plus basses, et de survivre à des altitudes plus élevées et au

climat froid. Il a également un stade hépatique dormant appelé hypnozoïte. Le risque

d’infection à P. vivax est considérablement réduit en Afrique Subsaharienne, la majorité de la

population ne portant pas le facteur Duffy qu’utilise le parasite pour pénétrer dans les

globules rouges de l’hôte. Longtemps considéré comme responsable d’infection bénigne, P.

vivax est maintenant reconnu comme une cause de paludisme grave (Karyana et al., 2008).

Présent en Afrique, en Asie du Sud-Est, en Amérique du Sud et en Océanie, le paludisme à P.

malariae (fièvre quarte bénigne) n’est pas mortel mais peut être responsable des cas de

rechute de la maladie une vingtaine d’années après la première infection.

Plasmodium ovale est surtout présent en Afrique intertropicale et de façon sporadique en

Amazonie, en Océanie et en Asie. Il n’est pas mortel mais peut resurgir 4 à 5 ans après la

première infection.

Dans les zones forestières de l’Asie du Sud-est, P. knowlesi, responsable du paludisme du

singe, a été retrouvé chez l’homme et est responsable de la fièvre quarte dans cette région

(Singh et al., 2004). Cette infection souvent attribuée à P. malariae, est due en fait à P.

knowlesi, son évolution est potentiellement grave et doit être traitée comme P. falciparum

(Figtree et al., 2010).


I.5. Cycle de vie du parasite

I.5.1. Cycle chez l'homme

I.5.1.1. Cycle exo-érythrocytaire

Au cours de la piqûre, l’anophèle femelle infectée injecte dans un capillaire sanguin des

sporozoïtes. Ceux-ci transitent dans la circulation générale et, en quelques minutes, ils

envahissent les hépatocytes grâce à une interaction spécifique entre la protéine majeure de

surface du sporozoïte et un récepteur spécifique situé sur la membrane plasmique de

l'hépatocyte du côté de l'espace de Disse, espace directement en contact avec le sang circulant.

Le sporozoïte entre alors dans une phase de réplication et de prolifération intracellulaire qui

repousse en périphérie le noyau de la cellule et finit par constituer une masse multi-nucléée

appelée schizonte qui conduit à la libération de plusieurs dizaines de milliers de mérozoïtes

dans la circulation (Figure 2). Cette phase de multiplication est asymptomatique et dure de 8 à

15 jours, selon les espèces. Contrairement à P. vivax, P. falciparum ne possède pas de formes

de persistance hépatique ou hypnozoïtes.

I.5.1.2. Cycle intra-érythrocytaire

Seule cette phase sanguine est responsable des symptômes qui peuvent être d'intensité

variable. Les mérozoïtes libérés lors de la rupture des hépatocytes vont débuter le cycle

sanguin asexué de prolifération de P. falciparum en infectant les érythrocytes. Le mérozoïte

pénètre dans l’érythrocyte grâce à un processus parasitaire actif et se différencie en

trophozoïte, stade à partir duquel une intense phase réplicative commence. Il donne alors

naissance au schizonte, celui-ci après segmentation montre une forme caractéristique de

rosace, puis libère 8 à 32 mérozoïtes qui rapidement réinfectent des érythrocytes sains.

L’éclatement ou la destruction des globules rouges parasités s’accompagne du relâchement du

pigment malarique appelé hémozoïne ; Tout cela conduit au déclenchement de l’inflammation

par la libération de cytokines pro-inflammatoires comme l’interleukine 1 (IL-1), le Tumor

Necrosis Factor (TNF). La montée de la fièvre est caractéristique de cette phase (Laurent et

al., 2012). Cette destruction massive des RBC conduit également à une anémie. L'ensemble

de ce cycle dure 48 heures chez P. falciparum. L'apparition des gamétocytes a lieu en général

la deuxième semaine qui suit l'infection et ces formes peuvent persister plusieurs semaines

après la guérison. A la suite d'une nouvelle piqûre par un anophèle, les gamétocytes mâles et

femelles sont ingérés avec le repas sanguin.


I.5.2. Cycle chez l’anophèle

Lors d’un repas sanguin sur un individu infecté, l’anophèle femelle ingère des gamétocytes, à

potentiel sexuel mâle ou femelle. Ceux-ci parviennent dans l'estomac du moustique et se

transforment en gamètes. Le gamète mâle subit un processus d'exflagellation à la suite duquel

les gamètes femelles sont fécondés. Il en résulte un zygote appelé ookinète ; celui-ci

s'implante sous la paroi stomacale en formant l'oocyste. Cette brève phase diploïde s’achève

par une division méiotique et est suivi par plusieurs milliers de mitoses qui conduisent au

développement de sporozoïtes. Les sporozoïtes gagnent préférentiellement les glandes

salivaires du moustique d'où ils pourront être injectés avec la salive lors d'une piqûre. Chez le

moustique, l'ensemble de ce cycle se déroule en 10 à 40 jours, suivant la température

extérieure et les espèces en cause (Bannister et Sherman, 2009).

Figure 2 : Cycle de vie de Plasmodium falciparum

Source: (Bannister et Sherman, 2009)

Legende: Stomach wall, muqueuse gastrique. Salivary gland, glande salivaire. Liver, foie. Gametocytes taken up

by mosquito, gamétocytes absorbés par le moustique. Fertilization, fertilisation. Growth stages of oocyst, stades

de croissance des oocystes. Ruptured oocyst, rupture des oocystes.


I.6. Pathogenèse du paludisme

Chez l’homme le parasite a besoin de proliférer et de survivre sans être détruit. Pour réaliser

cela, P. falciparum utilise plusieurs techniques pour éviter le système immunitaire de l'hôte et

provoquer une maladie grave. Les mécanismes les mieux connus sont : l’invasion des

hématies, la cytoadhérence et la séquestration, la formation des rosettes et la variation

antigénique (Chen et al., 2000).

I.6.1. Invasion des hématies

P. falciparum peut envahir les globules rouges à différents stades de leur développement, des

réticulocytes aux stades matures. Des protéines comme Duffy‐Binding Like proteins (DBL) et

Reticulocytes‐Binding Like proteins (RBL) de P. falciparum reconnaissent des récepteurs à la

surface des érythrocytes, ce qui permet leur invasion.

I.6.2. La cytoadhérence

P. falciparum est responsable de la séquestration des hématies parasitées. La surface des

hématies infectées est recouverte de protubérances appelées knobs qui sont le point de contact

avec les cellules de l’hôte. L’adhésion protège les érythrocytes infectés (ERi) de la destruction

car les ERi circulants sont éliminés dans la rate. Plusieurs protéines parasitaires sont

localisées dans ces protubérances et participent directement ou indirectement à la

cytoadhérence. Ces protéines proviennent des ensembles multigéniques, dont les protéines

PfEMP1 (P. falciparum erythrocyte membrane protein-1) codés par la famille des gènes var

(60 gènes par génome haploïde), RIFIN codés par les gènes rif (repetitive interspersed

family), les protéines STEVOR (Niang et al., 2009) etc. Les études portent plus

particulièrement sur la famille PfEMP-1 impliquée dans l'adhérence des formes mûres du

parasite (trophozoïtes et des schizontes). Une seule sur soixante protéines variables est

exprimée. Les hématies parasitées adhèrent à l'endothélium des capillaires des organes

profonds (cerveau, poumon, rein, placenta). Cette séquestration joue un rôle majeur dans la

physiopathologie des accès palustres graves et est à ce titre l'objet de nombreuses études

(Ndam et Deloron, 2007 ; Baratin et al., 2007). Plusieurs récepteurs de l'hôte ont été identifiés

permettant l'adhésion des ERi. Ces récepteurs sont classés en plusieurs familles telles que la

famille des immunoglobulines comprenant ICAM-1, PECAM-1, VCAM-1 ; celle des

glycoprotéines avec CD36, les glycosaminoglycanes avec l'acide hyaluronique, la

chondroïtine sulfate A (CSA) etc. (Janes et al., 2011 ; Laurent et al., 2012). La formation des

rosettes ou rosetting qui est la capacité des hématies parasitées à se lier aux hématies non


parasitées et l'autoagglutination qui correspond à l'adhérence, entre elles, d'hématies

parasitées participent aussi à la séquestration érythrocytaire (Figure 3).

Figure 3 : Cytoadhérence et rosetting

Source : adapté de Chen et al., (2000)

I.7. Variabilité antigénique du Plasmodium

La protéine PfEMP-1 est impliquée dans la variation antigénique du paludisme à P.

falciparum. Avec environ 60 gènes variables var codant pour PfEMP-1 et un seul gène var

dominant exprimé au stade adulte du parasite, PfEMP-1 a atteint une forme de variabilité qui

permet au parasite de contourner le système immunitaire de l'hôte. De plus, les fréquentes

recombinaisons et remaniements génétiques au cours des processus de fusion et de division

dans le moustique et les érythrocytes humains peuvent entrainer une grande diversité

génétique et antigénique du parasite (Flick et Chen, 2004).

I.8. Manifestations cliniques

Les manifestations cliniques du paludisme sont très diverses. Elles dépendent de la relation

entre l'hôte et le parasite, de l'âge, de l'immunité et du taux de transmission. La manifestation


clinique la plus fréquente est l’accès palustre simple qui comprend généralement un syndrome

fébrile avec asthénie, céphalées et embarras gastrique. Des cycles typiques alternant fièvre,

tremblements avec sueurs froides et transpiration intense, peuvent alors survenir : c’est

l’accès palustre. La périodicité de ces cycles dépend de l’espèce de parasite en cause, et

coïncide avec la multiplication des parasites et l’éclatement des globules rouges.

Le paludisme sévère est complexe et touche plusieurs organes. Un paludisme grave se

manifeste habituellement par un ou plusieurs des signes suivants : coma (neuropaludisme),

acidose métabolique, anémie sévère, hypoglycémie, insuffisance rénale aigue ou œdème aigu

du poumon, hyperparasitémie, convulsions répétées, prostration, trouble de conscience,

syndrome de détresse respiratoire, etc. (WHO, 2000). A ce stade de la maladie, en l’absence

de traitement, un paludisme grave est presque toujours mortel.

I.9. Paludisme et grossesse

L’infection palustre chez les femmes enceintes constitue un très grave problème de santé

publique puisqu’elle comporte des risques graves pour la mère, le fœtus et le nouveau-né. Les

femmes enceintes sont trois fois plus susceptibles de souffrir d'une infection palustre grave

par rapport aux femmes non enceintes (Schantz-Dunn et Nour, 2009). Dans les zones

d'endémie palustre, il est estimé qu’au moins 25% des femmes enceintes sont infectées par le

paludisme, avec le plus grand risque d'infection et de morbidité chez les primipares, les

adolescentes, et celles co-infectées par le VIH (Schantz-Dunn et Nour, 2009). Cette fragilité

des femmes enceintes serait due à la baisse de l’immunité pendant la grossesse et à la

séquestration des érythrocytes infectés dans le placenta (Desai et al., 2007). Dans les zones de

faible transmission de P. falciparum, où les taux d’immunité acquise sont faibles, les femmes

sont exposées à des accès palustres graves. Dans les zones de forte transmission de P.

falciparum, où les taux d’immunité acquise sont généralement élevés, les femmes sont

exposées à une infection asymptomatique, qui peut entraîner une anémie maternelle et une

parasitémie placentaire. La figure 4 représente le nombre de femmes enceintes vivant dans les

régions à risque d’infection à P. falciparum.


Figure 4 : Cartographie du nombre de femmes enceintes vivant dans des zones à risques du

paludisme à P. falciparum en 2007 Source : (Dellicour et al., 2010)

I.9.1. Cytoadhérence placentaire

En plus de la séquestration érythrocytaire, de la formation des rosettes et de la destruction des

hématies induisant une anémie maternelle, la sévérité du paludisme gestationnel est associée à

la séquestration des érythrocytes parasités par P. falciparum dans les espaces intervilleux du

placenta (syncytiotrophoblastes). En effet, une des protéines de la famille des PfEMP-1,

appelée var2CSA exprimée à la surface des hématies parasitées est responsable de l’adhésion

de ces hématies (Figure 5). Celles-ci se fixent à un sucre, la chondroïtine sulfate A (CSA) et à

l’acide hyaluronique (HA) présents dans le placenta (Rogerson et al., 2007b). Les parasites

fixant la chondroïtine sulfate A seraient des variants seulement trouvés chez les femmes

enceintes. Une des stratégies vaccinales envisagées pour lutter contre le paludisme

gestationnel est de recréer une immunité protectrice, en bloquant l'adhésion des hématies

parasitées au placenta (Duffy et Fried, 2011).


Figure 5 : Conséquences du paludisme gestationnel sur le fœtus Source : adaptée de Rogerson et al., (2007a)

1.9.2. Effets chez la mère

Pour diverses raisons, l’anémie est plus fréquente chez la femme enceinte que chez celle qui

ne l’est pas : hémodilution due à l’augmentation du volume intravasculaire au cours du

deuxième trimestre de la grossesse, sollicitation accrue des réserves de fer et d’acide folique.

La destruction directe d'un nombre important d'érythrocytes infectés est une cause importante

d'anémie palustre. Lorsqu’elle est sévère, elle augmente le risque de décès pour la mère et

l’on estime que les anémies imputables au paludisme pourraient être responsables de 10.000

décès maternels par an en Afrique (Guyatt et Snow, 2001).

1.9.3. Effets sur la santé de l’enfant

L’infection palustre chez la mère peut provoquer l’avortement, l’accouchement d’un mort-né

ou une infection congénitale. Au cours de la seconde moitié de la grossesse, elle peut, en


s’associant à une anémie maternelle, interférer avec le gain pondéral du fœtus et contribuer à

un retard de la croissance intra-utérine, ou à une prématurité avec comme résultat un faible

poids à la naissance. L’insuffisance pondérale à la naissance est l’une des causes majeures

d’un taux de survie et de développement très faible chez le nourrisson. D’après les

estimations de l’OMS, le paludisme chez la femme enceinte est responsable de 8 à 14 % de

tous les cas d’insuffisance pondérale à la naissance (Tableau I) et est à l’origine de 75.000 à

200.000 décès de nourrissons chaque année (Steketee et al., 2001).

Tableau I : Part du paludisme dans l’anémie, le petit poids de naissance et la mortalité

néonatale

Effet néfaste sur la santé % du total

Anémie maternelle 2 – 15

Petit poids de naissance 8 – 14

Naissance prématurée 8 – 36

Retard de croissance intra-utérine 13 – 70

Mort du nouveau-né 2 – 8

Source : (OMS, 2005)

I.9.4 Transmission verticale du paludisme

Le paludisme congénital est la mise en évidence d’hématies parasitées chez le nouveau-né

avant le septième jour de la vie. Les sept premiers jours de la vie correspondent au délai

minimal d'incubation de P. falciparum après inoculation anophélienne, incubation la plus

courte des 4 espèces plasmodiales. Il résulte du passage trans-placentaire de plasmodium ou

de globules rouges maternels parasités qui contaminent le fœtus. Le diagnostic est établi sur la

présence d'hématozoaires dans le sang de l'enfant et/ou du cordon. La transmission verticale

du paludisme peut avoir de graves conséquences pour le nouveau-né telles que le risque plus

élevé d’infection palustre au cours des premiers mois de la vie (Schwarz et al., 2008 ;

Borgella et al., 2013) et une susceptibilité précoce à d’autres infections (Malhotra et al.,

2009 ; Rachas et al., 2012). Cette susceptibilité aux infections serait due à un déséquilibre des

réponses immunitaires pro-inflammatoire et anti-inflammatoire des cellules T néonatales suite

à leur sensibilisation par Plasmodium falciparum in utero (Ismaili et al., 2003 ; Bisseye et al.,

2009 ; Malhotra et al., 2009). Il n’y a pas assez de données sur les conséquences à long terme

du paludisme pendant la grossesse pour l'enfant. Des études essentiellement nutritionnelles

indiquent que l'exposition à un environnement intra-utérin anormal affecte le développement


mental, métabolique et anthropométrique pouvant conduire à un risque accru de maladie plus

tard dans la vie (Desai et al., 2007).

I.9.5. Paludisme asymptomatique de la femme enceinte

Les symptômes et les complications du paludisme au cours de la grossesse diffèrent selon

l’intensité de la transmission et le taux d’immunité acquise par la femme enceinte. Dans des

zones de transmission épidémique faible (instable) du paludisme, les femmes enceintes n’ont

pas acquis un taux d’immunité élevé et tombent généralement malades lorsqu’elles sont

infectées par P. falciparum. Dans des zones de transmission stable du paludisme, la plupart

des femmes adultes ont développé une immunité suffisante pour que, même pendant la

grossesse, l’infection à P. falciparum n’entraîne généralement ni fièvre ni autre symptôme

clinique (Figure 6). Dans ces zones, l’infection palustre se caractérise principalement par le

déclenchement d’une anémie secondaire et par la présence de parasites dans le placenta. Les

carences nutritives qui en résultent pour le fœtus contribuent à un faible poids à la naissance.

Figure 6 : Conséquences du paludisme pendant la grossesse : zone de transmission forte ou

modérée Source : (OMS, 2005)

I.10. Diagnostics du paludisme

Une prise en charge efficace de la maladie requiert un diagnostic posé sans délai. Le

diagnostic repose sur la suspicion clinique d’un paludisme et, la recherche des hématozoaires

par l’examen microscopique certifie ce diagnostic en mettant en évidence le parasite dans le

sang circulant. Le tableau II résume les différentes méthodes de diagnostic.

Forte immunité acquise

Séquestration placentaire,

Altération du placenta

Transport de nutriments

moins actif

Mortalité infantile

élevée

Petit poids de naissance Mortalité

maternelle

Infection asymptomatique

Anémie


I.10.1. Diagnostic microscopique direct par frottis sanguin et goutte épaisse

L’examen microscopique du frottis sanguin (FS) et la goutte épaisse (GE) est la technique de

référence préconisée par l’OMS. Il permet un diagnostic rapide et un contrôle de l’efficacité

du traitement antipaludique par le suivi de la parasitémie. C’est un examen peu coûteux et

demeure la technique la plus utilisée. Cependant, ses performances en termes de sensibilité et

de fiabilité dépendent directement de l’expérience du microscopiste et du niveau de la

parasitémie du sujet infecté. Le frottis sanguin permet un meilleur examen de la morphologie

des parasites et des hématies et donc un diagnostic d’espèce plasmodiale plus aisé. Il permet

en outre, de calculer la parasitémie. Le seuil de détection du FS est de 100 parasites/μL.

Cependant sa sensibilité est beaucoup plus faible que la GE qui permet de détecter de faible

parasitémie (50 parasites/ μL). Le diagnostic microscopique peut également se heurter à des

difficultés d’identification d’espèce particulièrement en présence de parasites altérés par un

traitement présomptif ou en cas de très faibles parasitémies (Moody, 2002 ; Rogier et al.,

2009 ; Siala et al., 2010).

I.10.2. Détection d’antigènes plasmodiaux par les tests de diagnostic rapide

Les tests de diagnostic rapide (TDR) ou tests rapides d’orientation diagnostique (TROD)

reposent sur le principe de l’immunochromatographie en utilisant des bandelettes sensibilisées

par des anticorps monoclonaux spécifiques détectant des antigènes plasmodiaux. Ils sont

réalisés avec une goutte de sang déposée sur une bandelette et ne nécessitent aucun

appareillage.

- Détection de l’antigène Histidin Rich Protein 2 (HRP2) : cette glycoprotéine spécifique de

l’espèce P. falciparum est produite par tous les stades érythrocytaires asexués du parasite et

peut persister dans le sang périphérique plus de 15 jours après la disparition des parasites. Ces

tests sont crédités d’une sensibilité supérieure à 96% par rapport aux techniques

microscopiques classiques, lorsque la parasitémie évaluée sur la GE est supérieure à 100

parasites/μL. Leur seuil de détection varie de 100 à 300 parasites/μL. La persistance de

l’antigénémie après guérison et la monospécificité vis-à-vis de P. falciparum constituent les

inconvénients majeurs de ces tests. Des faux positifs ont été également associés à des

réactions croisées avec les facteurs rhumatoïdes. Les faux négatifs sont possibles et seraient

dus à des mutations sur le gène codant pour l’HRP2 ou en présence d’anticorps anti HRP2

(Rogier et al., 2009 ; Siala et al., 2010).


- Détection des lactates déshydrogénases parasitaires (LDH) : ce sont des enzymes

glycolytiques qui présentent l’avantage d’être communes aux 4 espèces plasmodiales,

détectées à tous les stades sexués et asexués du parasite. Les LDH ont un seuil de détection

identique à celui de l’HRP2, leur clairance est par contre plus rapide faisant qu’ils ne

persistent pas dans le sang après la disparition du Plasmodium, d’où leur intérêt dans la

surveillance des patients traités (Siala et al., 2010).

- L’aldolase : des anticorps capables de reconnaître les aldolases de tous les plasmodiums

humains peuvent être utilisés. La sensibilité de détection de ces antigènes est cependant

encore moindre que celle des tests détectant l’HRP2 et la LDH (Rogier et al., 2009).

Les TDR sont d’exécution rapide et de lecture facile pouvant être réalisés par un personnel

moyennement formé. Ils sont indiqués particulièrement dans les structures non spécialisées

lorsque l’examen microscopique n’est pas disponible. Leurs performances dépendent

essentiellement de la parasitémie. Ils sont également moins performants avec les espèces

autres que P. falciparum, particulièrement P. ovale. Les TDR doivent être considérés comme

un complément des autres méthodes de diagnostic. Leurs résultats doivent être vérifiés et

complétés si possible par l’examen microscopique. Leur positivité permet une prise en charge

adéquate et rapide des patients. En revanche, leur négativité ne doit pas écarter le diagnostic

(Rogier et al., 2009).

I.10.3. Le QBC Malaria test ou Quantitative Buffy Coat

Le principe de cette technique de microscopie à fluorescence repose sur l’utilisation d’un

fluorochrome (l’acridine orange) capable de se fixer sur le noyau du parasite. La recherche du

plasmodium se fait dans 50μL de sang recueillis dans un tube à hématocrite, après

concentration par centrifugation et lecture au microscope à fluorescence. La sensibilité de

cette technique serait comparable à celle de la GE pour des infections supérieures à 100

parasites/μL. Elle varie de 41% à 93% pour des parasitémies inférieures à 100 parasites/μL.

La spécificité pour P. falciparum est élevée (93-98%) mais chute à environ 50% pour les

infections causées par les autres espèces. Le QBC Malaria test est d’usage facile et de

réalisation rapide ; il constitue actuellement le meilleur test de dépistage pour des biologistes

non spécialisés et pour les structures traitant un grand nombre de tests de plasmodium.

Malheureusement, son emploi nécessite un matériel et des réactifs coûteux ce qui limite son

utilisation. Il ne permet pas non plus le diagnostic d’espèce et le calcul de la parasitémie.


I.10.4. Diagnostic moléculaire par PCR

L’amplification génique par PCR est la technique la plus utilisée. C’est la technique la plus

sensible qui permet de détecter de très faibles parasitémies de l’ordre de 0,3 parasite/μL de

sang avec une possibilité de quantification de l’ADN plasmodial en utilisant la PCR en temps

réel. L’amplification du gène codant pour la petite sous unité 18S de l’ARN ribosomal du

plasmodium permet aussi l’identification des espèces en cause en utilisant une PCR niché. En

dépit de ses avantages, la biologie moléculaire ne peut remplacer en pratique courante les

méthodes classiques de diagnostic du paludisme en raison du temps de réalisation

relativement long, non compatible avec l’urgence du diagnostic du paludisme. La PCR est

essentiellement indiquée pour la détection des faibles parasitémies en cas de forte suspicion et

de difficulté de confirmation microscopique notamment chez les voyageurs sous

chimioprophylaxie. Elle est également d’un apport appréciable dans l’identification des

espèces plasmodiales, le suivi post-thérapeutique et l’étude des gènes impliqués dans la

résistance aux antipaludiques. Ses exigences en matériel et son coût font qu’elle est encore

réservée aux laboratoires spécialisés (Siala et al., 2010).

I.10.5. Détection des anticorps antiplasmodiaux

La sérologie n’a pas de place dans le diagnostic des accès palustres aigus en raison de

l’apparition tardive des anticorps (Ac) antipalustres par rapport à l’émergence des parasites

dans le sang. Le diagnostic sérologique se heurte également à des difficultés d’interprétation.

En effet, la présence d’Ac spécifiques peut témoigner soit d’une infection palustre évolutive

soit d’un paludisme antérieur dans la mesure où les Ac peuvent persister 2 à 3 ans après

l’infection. Le diagnostic immunologique est indiqué dans certaines formes cliniques

chroniques telles le paludisme viscéral évolutif et la splénomégalie palustre hyper-immune au

cours desquelles les Ac sont à des taux élevés alors que les recherches parasitologiques sont le

plus souvent négatives. La sérologie est aussi utile en rétrospectif en cas de traitement

présomptif ou d’automédication. Elle reste par ailleurs, très utilisée dans le dépistage des

donneurs de sang dans le cadre de la prévention du paludisme post-transfusionnel et dans les

enquêtes épidémiologiques (Siala et al., 2010).

19

Tableau II : Méthodes de diagnostic des infections plasmodiales

Goutte épaisse

Frottis mince

QBCTM

Malaria test

TDR HRP2

TDR LDH

PCR

Volume de sang

examiné

3 – 4µL 1 – 1,5µL 55 – 65µL 5 – 15µL 5 – 15µL 10 – 100µL

Sensibilité pour P.

falciparum (95% de

chance de détection)

24/µL pour 100 champs 300/µL pour 100 champs

12/µL pour 200 champs 150/µL pour 200 champs 1 – 5/µL 100 – 300µL 100 – 300µL 0,001 – 0,3/µL

6/µL pour 400 champs

Temps de réalisation

en minutes

30 – 60 30 – 60 < 10 5 – 20 5 – 20 40 – 60 (PCR

temps réel)

Coût (en euros) 0,03 – 0,7 0,03 – 0,7 1,5 0,4 – 3 0,4 – 3 Environ 15

Diagnostic de P.

falcipaum

Oui Oui Evoqué par le mono-

morphisme des formes Oui Oui Oui

Diagnostic de P.

vivax

Oui

Oui

Non Non Oui

Oui

Diagnostic de P.

ovale et P. malaria

Oui Oui Non Non Oui mais sensibilité

médiocre Oui

Estimation de la

densité parasitaire

Oui Oui Non Non Non Non

Avantages

Méthode de référence

Morphologie des hématies

parasitées conservée

Facilité d’emploi

sans besoin

d’électricité

Facilité d’emploi

sans besoin

d’électricité

négativité rapide

après guérison

Inconvénients

Dépend de l’expérience

technique et d’une source

d’électricité

Dépend de l’expérience

technique et d’une source

d’électricité

Coût initial

d’investissements

élevé. Dépend de

l’expérience technique

et d’une source

d’électricité

Positivité

persistant 15 jours

après guérison

Technicité

réservée à des

centres

spécialisés.

Coût des

investissements

Source : (Rogier et al., 2009)


I.11. Traitement du paludisme et prophylaxie

I.11.1. Traitement du paludisme

Un traitement antipaludique doit être efficace, accessible, bien toléré et peu onéreux car les

populations majoritairement concernées ont des faibles revenus avec un accès aux soins

limité. La prise en charge thérapeutique du paludisme dépend de plusieurs facteurs

notamment de l’espèce de parasite en cause, de la gravité de l’infection, de l’âge de la

personne atteinte et du profil de résistance aux médicaments antipaludéens dans la région du

monde où la personne a contracté la maladie.

I.11.1.1. Cibles plasmodiales

Le parasite dispose pour son développement intra érythrocytaire d’un métabolisme et de

moyens de défenses spécifiques qui constituent autant de cibles aux antipaludiques. Nous

distinguerons :

- la vacuole digestive du parasite qui est le siège de la digestion de l’hémoglobine, de la

cristallisation de l’hème et où des moyens de défense spécifiques contre le stress oxydatif sont

retrouvés.

- un cytoplasme comportant le cytosol et deux organites essentiels, les mitochondries et

l’apicoplaste. Ils sont nécessaires à la biosynthèse des acides nucléiques.

- une membrane plasmique, constituée de phospholipides, des canaux calciques et

parasitophores, siège du trafic nutritionnel (Touze et al., 2002).

Les antipaludiques peuvent être classés selon leur mode d’action en schizonticides actifs sur

la phase asexuée érythrocytaire, et gamétocyticides actifs sur la phase sexuée érythrocytaire.

Les amino-8-quinoléines (tafénoquine et primaquine) sont des molécules actives sur la phase

hépatique du parasite. Du fait de leur index thérapeutique faible, leur usage exige une

surveillance clinique rapprochée.

I.11.1.2. Molécules antipaludiques

- Les schizonticides

Ce groupe comprend les dérivés quinoléiques et les dérivés de l’artémisinine. Les dérivés

quinoléiques comprennent les amino-4-quinoléines (chloroquine, amodiaquine) et les amino-

alcools (méfloquine, halofantrine, luméfantrine). Ces molécules interfèrent avec la digestion


de l’hémoglobine dans la vacuole nutritive en inhibant la formation de l’hémozoïne. Les

dérivés de l’artémisinine (artésunate, artéméther) de type peroxyde interfère aussi dans la

digestion de l’hémoglobine, par libération de radicaux libres, toxiques pour le parasite. Les

dérivés de l’artémisinine ont une action gamétocytocide, qui réduit la transmission et limite

les risques de voir émerger des résistances.

- Les inhibiteurs des acides nucléiques ou antimétaboliques

Ils bloquent la division du noyau de l’hématozoaire. Ce groupe comprend les anti-folates, les

naphtoquinones et les antibiotiques.

Les anti-folates sont répartis en deux familles, les anti-foliques (sulfamides, dont la

sulfadoxine et sulfone) et les anti-foliniques (proguanil et pyriméthamine). Ils agissent au

niveau de la voie de synthèse des folates, qui sont essentiels à la biosynthèse des acides

nucléiques du parasite. Les anti-foliques inhibent la dihydroptéroate synthétase (DHPS) qui

produit l’acide folique et les anti-foliniques inhibent la dihydrofolate réductase (DHFR), qui

produit l’acide folinique.

Les naphtoquinones : l’atovaquone est un inhibiteur puissant des fonctions mitochondriales en

bloquant la chaîne de transfert d’électrons au niveau de son enzyme-clé, la dihydroorotate

déshydrogénase. Elle a peu d’impact thérapeutique lorsqu’elle est utilisée seule.

Les antibiotiques : les tétracyclines (doxycycline), les macrolides (érythromycine,

azythromycine, clindamycine) peuvent inhiber la synthèse protéique par inhibition de

certaines fonctions de l’apicoplaste.

- Les associations d’antipaludiques

Les nouveaux antipaludiques qui ont fait l’objet de développements récents sont tous associés,

au moins en bithérapie. Certaines associations sont fixes : l’atovaquone-proguanil,

l’arthéméther-luméfantrine et la chlorproguanil-dapsone. D’autres associations sont libres,

associant toujours un dérivé de l’artémisinine : artésunate-méfloquine, artésunate-

amodiaquine, artéméther-proguanil et artésunate-sulfadoxine-pyriméthamine.

I.11.2. Prophylaxie

La lutte contre le paludisme repose en partie sur le contrôle des vecteurs qui vise à supprimer

ou limiter le contact homme-vecteur pour prévenir l’infection par des plasmodiums. Elle est


complémentaire de la lutte contre le parasite lui-même par la chimioprophylaxie, les

traitements préventifs intermittents ou les traitements curatifs.

I.11.2.1. La lutte anti-vectorielle

La lutte anti-vectorielle repose sur l’utilisation des moustiquaires imprégnées d’insecticides et

la pulvérisation d’insecticides (Djogbenou, 2009).

La lutte contre les anophèles au stade adulte

- Moustiquaires imprégnées d’insecticide (MII)

Dans l’attente d’un vaccin et face au phénomène de la chimiorésistance de Plasmodium

falciparum aux médicaments antipaludiques, la lutte anti-vectorielle demeure de nos jours une

des composantes majeures de la lutte contre le paludisme en prévenant ou en réduisant la

transmission de l’infection plasmodiale. Les moustiquaires imprégnées d’insecticide offrent

une bonne protection mécanique pour limiter le contact entre les vecteurs et les humains.

Lorsqu’une proportion importante d’une population humaine dort sous des MII, les anophèles

cherchant à les piquer sont fortement exposés à l’insecticide et ont une durée de vie diminuée.

La transmission des plasmodiums peut alors être diminuée pour l’ensemble de la communauté

humaine; il s’agit de l’effet de masse.

- Pulvérisations intra domiciliaires d’insecticides à effet rémanent

Les pulvérisations intra-domiciliaires à l’aide d’insecticides à effet rémanent agréés par

l’OMS constituent encore l’une des principales interventions de lutte anti-vectorielle destinées

à réduire ou interrompre la transmission du paludisme dans tous les contextes

épidémiologiques (OMS, 2006).

La lutte contre les anophèles au stade larvaire

Les moyens de lutte contre les larves permettent d’empêcher la prolifération des moustiques.

La lutte contre les larves peut prendre plusieurs formes : éliminer les lieux de ponte, modifier

les larves pour qu’elles ne puissent plus s’y développer, rendre les lieux de ponte

inaccessibles aux moustiques adultes, introduire dans les lieux de ponte des poissons

larvivores ou d’autres prédateurs, épandre des larvicides et des inhibiteurs de croissance des

insectes.


I.11.2.2. Traitement préventif

Un traitement préventif intermittent est recommandé pour les groupes de population vivant

dans des zones où le taux de transmission reste élevé et qui sont particulièrement exposés au

risque d’une infection à Plasmodium ou à ses conséquences, notamment les femmes enceintes

et les enfants de 3 à 59 mois. La plupart des pays en Afrique subsaharienne ont adopté le

traitement préventif intermittent (TPI) pour les femmes enceintes comme politique nationale.

I.11.3. Résistances de Plasmodium falciparum aux antipaludiques et résistance des

vecteurs aux insecticides

I.11.3.1. Résistances aux antipaludiques

Au cours de leur évolution, les micro-organismes ont su déjouer les pièges qui leur sont

tendus par l’environnement et notamment leur hôte (immunité et utilisation de molécules anti-

infectieuses). La résistance est souvent associée à une altération d’enzymes (mutations) clés

qui sont des cibles d’antipaludiques à l’altération de l’accumulation de l’antipaludique dans le

parasite résultant d’une diminution d’entrée ou d’une augmentation de sortie (efflux) de la

molécule, voire aux deux (Pradines et al., 2010). L’émergence et la diffusion de la résistance

de P. falciparum aux antipaludiques posent un sérieux problème de santé publique. Les

échecs prophylactiques ou thérapeutiques entrainent une réémergence du paludisme

s’accompagnant d’une augmentation de la transmission, de la morbidité et de la mortalité. Les

premiers cas de résistance à la chloroquine ont été rapportés en plusieurs points du monde

entre 1957 et 1960 (Colombie et Venezuela, Cambodge et Thaïlande, Papouasie Nouvelle

Guinée, Philippines). La résistance s’est peu à peu propagée à toutes les zones d’endémie

palustre (Wongsrichanalai et al., 2002). La marche infernale de la sélection médicamenteuse

s’est poursuivie après le déploiement des médicaments qui ont remplacé la chloroquine :

résistance à l’amodiaquine, aux antifolates, à la méfloquine. La montée des multirésistances a

amené l’OMS à préconiser, l’utilisation de combinaisons comprenant un dérivé de

l’artémisinine ou ACT (arteminisin combination therapy). Aujourd’hui, une des

préoccupations majeures est que l’on assiste en Asie du Sud-Est à une propagation de

parasites résistants aux dérivés des artémisinines menaçant les grands progrès réalisés dans le

contrôle du paludisme (Dondorp et al., 2009 ; Ashley et al., 2014). Dans cette région du

Grand Mékong, des foyers de résistances persistent au Cambodge (Amaratunga et al., 2012) ;

à Myaanmar (Tun et al., 2015) ; Thaïlande (Talundzic et al., 2015).


Le cas de la sulfadoxine/pyrimethamine (SP)

Suite à la chloroquino-résistance, le Burkina Faso a introduit depuis 2005 la SP comme

traitement préventif intermittent chez les femmes enceintes. Son utilisation a permis de

réduire les effets néfastes du paludisme au cours de la grossesse (Gies et al., 2009 ; Eisele et

al., 2012). Cependant des études menées au Ghana (Duah et al., 2012) ; au Kenya (Juma et

al., 2014) et en Tanzanie (Matondo et al., 2014) montrent une augmentation de la prévalence

des mutations ponctuelles associées à la résistance à la sulfadoxine et à la pyriméthamine. Ces

mutations sont largement distribuées à travers l’Afrique sub-saharienne (Sridaran et al.,

2010). Au Burkina Faso, la SP reste efficace pour le traitement préventif chez les femmes

enceintes (Coulibaly et al., 2014). Cependant, une étude conduite dans le nord-ouest du pays

dans la province de la Kossi a montré une augmentation des marqueurs moléculaires liés à la

résistance à la SP pouvant mettre en péril son efficacité (Geiger et al., 2014). Un suivi attentif

de ces marqueurs génotypiques de résistance et à l’évaluation in vivo de l'efficacité de la SP

est donc nécessaire.

Figure 7 : Introduction des antipaludiques et apparition des résistances (R) de P. falciparum Source : (Pradines et al., 2010)

I.11.3.2. La résistance des vecteurs aux insecticides

L’efficacité de la lutte anti-vectorielle est menacée par la résistance que les moustiques

développent par rapport aux insecticides utilisés dans l’imprégnation des moustiquaires


imprégnées d’insecticide, notamment les pyréthrinoïdes. Ces dernières années, une résistance

aux pyréthrinoïdes a été observée dans de nombreux pays du monde (WHO, 2014). Dans

certaines zones, on a détecté une résistance aux insecticides utilisés en santé publique (Edi et

al., 2012 ; Namountougou et al., 2012). Afin de garantir une riposte mondiale rapide et

coordonnée face à la menace de résistance aux insecticides, l’OMS a collaboré avec un large

éventail de partenaires et élaboré un plan mondial de gestion de la résistance des vecteurs du

paludisme aux insecticides en 2012 (WHO, 2012).

I.12. Interventions recommandées chez la femme enceinte

Les directives pour la lutte contre le paludisme pendant la grossesse dans les zones de

transmission stable doivent insister sur l’association du traitement préventif intermittent (TPI)

et des moustiquaires imprégnées d’insecticide (MII) et veiller à une prise en charge efficace

des accès palustres et de l’anémie.

I.12.1. Traitement préventif intermittent

Il faut administrer à toutes les femmes enceintes vivant dans des zones de transmission du

paludisme la sulfadoxine-pyriméthamine (SP) à partir du moment où elles commencent à

percevoir les mouvements du fœtus. Depuis octobre 2012, l’OMS recommande d’administrer

au moins trois doses de TPI à base de SP aux femmes pendant la grossesse (WHO, 2013).

Cette recommandation a été prise en compte au Burkina lors de la révision en mars 2014 des

directives nationales de prise en charge du paludisme par le programme nationale de lutte

contre le paludisme (PNLP, 2014).

I.12.2. Moustiquaires imprégnées d’insecticide

Il faut les fournir aux femmes le plus tôt possible après le début de leur grossesse. On les

incitera à les utiliser pendant toute la période de grossesse et le post-partum. Elles seront

mises à la disposition des femmes soit dans les services de soins prénatals, soit par d’autres

acteurs du secteur public ou privé.

I.13. La recherche de vaccins contre le paludisme

Des succès considérables ont été obtenus dans la lutte contre le paludisme au cours des deux

dernières décennies (O’Meara et al., 2010 ; Eisele et al., 2010). Ces résultats sont le fruit des

différentes interventions pour le contrôle du paludisme à savoir la lutte anti-vectorielle, la

chimio-prévention et la prise en charge des cas de paludisme.


Ces interventions se sont traduites par une baisse du taux de mortalité due au paludisme

depuis 2000. Cependant, le paludisme continu toujours de faire des ravages et les enfants de

moins de cinq ans payent le plus lourd tribut. En outre, la résistance des vecteurs et du

plasmodium aux insecticides et aux antipaludiques compliquent l’effort mondial de lutte

contre le paludisme. Aujourd’hui, un vaccin antipaludique compléterait les moyens qui

permettront de contrôler cette maladie. Depuis longtemps, des chercheurs du monde entier

tentent de mettre au point un vaccin pour prévenir le paludisme mais le plasmodium est d’une

extrême complexité car il change de forme et d’expression génétique à chaque étape de son

cycle de vie. La recherche d’un vaccin contre le paludisme a été une longue succession

d’essais cliniques avortés, d’espoirs et de déception à répétition (Graves et Gelband, 2003).

Toutefois, le développement d'un vaccin est possible parce que l'infection palustre induit une

immunité clinique. En effet, une immunité naturelle est acquise avec l’âge par les populations

vivant en zone d’endémie élevée. Cette immunité protège d’abord contre la mortalité et les

formes graves du paludisme, puis contre les accès palustres simples en diminuant leur

incidence plutôt que leur gravité et enfin en réduisant la durée et le niveau des infections par

les stades sanguins (Rogier, 2003).

La première démonstration d’une protection vaccinale contre des infections par des

sporozoïtes irradiés de P. falciparum date des années 1980 et depuis de nombreux essais

cliniques ont été effectués (Schwartz et al., 2012).

Les candidats vaccins se distinguent d’abord par les stades parasitaires auxquels les antigènes

sont exprimés. De ces stades dépendent l’effet attendu du vaccin et le type de réponse

immune susceptible d’être protectrice. Trois stratégies vaccinales sont en développement

(Rogier et al., 2006 ; Crompton et al., 2010).

Les vaccins contre les stades pré-érythrocytaires qui doivent induire des réponses

immunes visant les sporozoïtes ou les schizontes hépatiques. Le but est d’empêcher

toute libération de mérozoïtes dans le sang.

Les vaccins contre les stades érythrocytaires asexués qui vise soit à empêcher

l’invasion des hématies et donc à contrôler les densités plasmodiales circulantes, soit à

empêcher l’évolution des infections vers les formes cliniques et potentiellement graves

de la maladie.

Des anticorps dirigés contre des antigènes des stades sexués du parasite peuvent

empêcher la fécondation dans l’estomac de l’anophèle et bloquer le développement du

parasite. Elle ne viserait pas à protéger l’individu vacciné mais à limiter la transmission

des parasites de l’homme au vecteur, et secondairement du vecteur à l’homme.


Actuellement quatre vaccins paludiques subissent des essais sur le terrain et une a terminé les

essais cliniques de la phase 3, avec un total de 25 projets en cours (WHO, 2014). Le premier

en tête de course est le RTS,S/AS01, un vaccin contre les stades pré-érythrocytaires, qui a été

évalué dans le cadre d’un vaste essai clinique sur 15.460 enfants sur 11 sites dans 7 pays

d’Afrique dont le Burkina Faso (RTS,S Clinical Trials Partnership, 2011 ; RTS,S Clinical

Trials Partnership, 2014). Le vaccin RTS,S/AS01A est composé de deux polypeptides (RTS

and S) provenant de la circumsporozoite protein (CSP) de P. falciparum, et fusionné à

l’HBsAg, (le vaccin contre l’hépatite B).

Les résultats de suivi après 18 mois d'essais cliniques en phase 3 ont montré une réduction de

l'incidence du paludisme grave chez les sujets vaccinés de 46% chez les enfants et de 27%

chez les nourrissons qui ont reçu les doses de RTS,S/AS01, par rapport à leurs homologues du

groupe de contrôle.

I.14. Quelques caractéristiques épidémiologiques du paludisme : le polymorphisme de

l’hémoglobine S et C et les groupes sanguins ABO

Les facteurs environnementaux, l’intensité de la transmission, les traits génétiques de l’hôte

affectent aussi l’évolution de la maladie. Parmi les facteurs génétiques, les polymorphismes

de l’hémoglobine et le groupe sanguin jouent un rôle essentiel.

I.14.1. Hémoglobines S et C (HbS et HbC)

Les polymorphismes génétiques de l’hémoglobine S et C assurent la protection contre les

formes simples et sévères du paludisme. Les individus du groupe AS ont un risque moindre

de souffrir de paludisme simple ou grave en Afrique de l’ouest (Modiano et al., 2001). Des

résultats contradictoires ont été rapportés quant à la protection par l’hémoglobine C contre le

paludisme. Deux études cliniques conduites au Mali (Guinet et al., 1997) et au Nigéria (Gilles

et al., 1967) n’ont pas montré de protection contre le paludisme conférée par l’hémoglobine

C. Cependant une autre étude du Mali menée chez les Dogons (Agarwal et al., 2000) et deux

études du Burkina ont montré une association entre l’hémoglobine C et la protection contre le

paludisme. Elle est de 93% chez les homozygotes HbCC et de 29% chez les hétérozygotes

HbAC au Burkina Faso (Modiano et al., 2001 ; Rihet et al., 2004). L’hémoglobine S est

présente dans les régions tropicales et équatoriales en Afrique, en Arabie Saoudite et en Inde

tandis que l’allèle C se rencontre dans une région restreinte en Afrique de l’ouest et du centre

(Modiano et al., 2008).


I.14.2. Groupes sanguins ABO

Le polymorphisme du complexe des groupes sanguins ABO joue un rôle dans l’évolution du

paludisme. Il a été montré que les individus du groupe sanguin O étaient plus protégés contre

le paludisme sévère que les individus des autres groupes sanguins. Une faible séquestration et

un taux réduit de rosettes par les érythrocytes du groupe sanguin O infectés par P. falciparum

assurent cette protection (Barragan et al., 2000 ; Vigan-Womas et al., 2012). Une étude

menée au Mali chez les enfants a montré une réduction de risque de développement du

paludisme sévère chez les enfants du groupe O que ceux des autres groupes sanguins (Rowe

et al., 2007).

I.15. Homocystéine, Folates, Anémie et paludisme

I.15.1. L’homocystéine

L’homocystéine (Hcy) est un acide aminé soufré synthétisé au niveau intracellulaire à partir

de la méthionine apportée par l’alimentation. L’Hcy n’est pas codée génétiquement et est

absente des protéines. Elle est synthétisée par toutes les cellules de l’organisme. Dans le cycle

de la méthionine, l’Hcy constitue l’intersection de deux voies métaboliques appelées

reméthylation et trans-sulfuration. Les taux élevés d’homocystéine jouent un rôle dans les

complications de grossesse (risque accru d’éclampsie, d’avortements spontanés, d’enfants de

faible poids à la naissance, de mort-nés et de prématurés) (Nelen et al., 2000 ; Vollset et al.,

2000 ; Mascarenhas et al., 2014). L’homocysteine est un facteur de risque de maladies

cardiovasculaires et neurologiques (Ganguly et Alam, 2015 ; Ansari et al., 2014). Elle est

éliminée suivant deux voies principales, qui pour un état physiologique normal, sont en

équilibre. Il s’agit de la trans-sulfuration et de la reméthylation en méthionine. La complexité

des voies métaboliques de l’Hcy et de la méthionine (Figure 8) et l’équilibre parfait nécessaire

au bon fonctionnement de ce cycle peuvent être largement influencés par le paludisme dû à P.

falciparum (Chillemi et al., 2004). Son développement intra érythrocytaire provoque un stress

oxydatif de la cellule hôte. Il utilise le métabolisme des polyamines, essentiel à sa croissance

et réduit le taux du glutathion, un puissant antioxydant naturel, dans la cellule hôte infectée

(Luersen et al., 2000 ; Patzewitz et al., 2012).


Figure 8 : Schéma simplifié des voies de polyamines et de l’homocystéine Soucre : (Chillemi et al., 2004)

I.15.2. Les folates ou vitamine B9

Les folates encore appelés vitamine B9 ou folacine sont présents dans les aliments sous forme

de polyglutamates. Le terme de folates qualifie l’ensemble des dérivés de l’acide folique

(dihydrofolate, tétrahydrofolate). Les folates facilitent le transfert des unités mono-carbonées

à partir de multiples biomolécules vers des nombreuses réactions biosynthétiques telles que la


synthèse de purine et de pyrimidine, la synthèse de la méthionine à partir de l’Hcy. Les folates

sont donc indispensables à la division des cellules, et par conséquent, à la croissance et au

développement de l’organisme. Du fait notamment de leur rôle dans la synthèse de l’ADN,

leur carence provoque un ralentissement de la division cellulaire surtout dans les systèmes à

multiplication rapide dont les cellules de la muqueuse intestinale et de l’embryon. La

perturbation de la division cellulaire peut se traduire chez la femme enceinte par des

anomalies fœtales invalidantes et létales au cours de l’embryogenèse telles que les anomalies

de fermeture du tube neural, l’apparition de fentes orofaciales (Shaw et al., 2003). La

dérégulation du métabolisme de transfert des monocarbones suite à une carence en folates

peut également se traduire par une accumulation de l’homocystéine (Chango, 2008), aux

risques de cancer, de troubles cardio-vasculaires et neurologiques.

I.15.3. L’anémie

L’anémie est définie lorsque la concentration d’hémoglobine est inférieure au seuil limite

établi, tel qu’il est défini par l’OMS en 2001. Ce seuil se situe dans une fourchette allant de 11

g/dL pour les femmes enceintes et pour les enfants de 6 mois à 5 ans, à 12 g/dL pour les

femmes non enceintes et à 13 g/dL pour les hommes. L’anémie peut être diagnostiquée en

analysant le taux d’hémoglobine dans le sang ou en mesurant la proportion de globules rouges

dans le sang entier (hématocrite). Des carences en nutriments ont été corrélées à l’anémie,

dont les carences en fer, en vitamines A, B-6 et B-12, en riboflavine, en acide folique etc.

Outre les carences imputables à des nutriments spécifiques, les infections générales et les

maladies chroniques figurent également dans les causes de l’anémie. Par exemple, le risque

d’anémie augmente quand les personnes sont exposées au paludisme et aux helminthiases. Il

existe de nombreuses autres causes d’anémie, notamment des anomalies héréditaires telles

que les thalassémies. Le paludisme est cause d’anémie suite à la destruction des érythrocytes

et à l’inhibition de la production de nouveaux globules rouges.

MATERIEL ET

METHODES


II. MATERIEL ET METHODES

II.1. Cadre et type d’étude

Cette étude a été menée à l’Hopital Saint Camille de Ouagadougou (HOSCO) ex- Centre

Médical Saint Camille de Ouagadougou (CMSCO), au Centre de Recherche Biomoléculaire

Pietro Annigoni de Ouagadougou (CERBA) et au Laboratoire de Biologie moléculaire et de

Génétique (LABIOGENE). Ouagadougou, la capitale du Burkina Faso compte environ

2 429 718 d’habitants (INSD, 2015). Le climat est caractéristique de la savane soudanaise

avec une saison pluvieuse de juin à octobre, une saison sèche et fraiche de novembre à janvier

et une saison sèche et chaude de février à mai. La transmission du paludisme est stable avec

un pic saisonnier de juin à novembre.

L’Hôpital Saint Camille de Ouagadougou (HOSCO) est une structure sanitaire dirigée par les

religieux Camilliens. C’est un établissement de santé, de soins , d’hospitalisation et

d’exploration paraclinique à but non lucratif dont la mission se situe dans la prise en charge

des malades d’une part et le souci d’offrir un service de qualité à coût social d’autre

part .Cette vocation caritative et la qualité des soins prodigués aux malades font de l’HOSCO

un des centres de santé les plus fréquentés de la ville de Ouagadougou. Situé au secteur 23 sur

l’Avenue Babanguida, il dépend administrativement de la Direction Régionale de la Santé du

Centre. L’HOSCO renferme 9 services de santé à savoir la maternité, la Santé Maternelle et

Infantile (SMI), le laboratoire, la pharmacie, la pédiatrie générale, la nouvelle pédiatrie, la

néonatologie, la médecine générale et la médecine spécialisée qui prend en compte 20

spécialités.

Le Centre de Recherche Biomoléculaire Pietro Annigoni (CERBA) est situé au secteur 51 de

la ville de Ouagadougou et dépend administrativement de la Direction Régionale de la Santé

du Centre tout comme l’HOSCO. Le CERBA regroupe trois structures à savoir le Traitement

Ambulatoire (CTA) ; la recherche clinique et la recherche fondamentale en biomoléculaire et

pharmacologie.

Le Laboratoire de Biologie Moléculaire et de Génétique est un laboratoire de recherche

rattaché à l’Ecole Doctorale Sciences et Technologies (ED/ST) de l’Université de Ouaga I, Pr

Joseph KI-ZERBO.

Dans le cadre d’un partenariat solide, ces trois structures œuvrent à la promotion de la santé

au Burkina Faso et en Afrique par la formation de jeunes médecins, pharmaciens et

biologistes. Elles possèdent un plateau technique bien équipé et moderne.


Il s’est agi d’une étude transversale comportant deux étapes. La première étape a été menée

chez les femmes enceintes venues pour leur première consultation prénatale à la SMI de

l’HOSCO et la seconde chez les femmes ayant accouché à la maternité du même centre et

leurs nouveaux-nés. Les analyses biologiques des échantillons ont été réalisées au

LABIOGENE et au CERBA.

II.2. Population d’étude et échantillonnage

La première étude a concerné 201 femmes enceintes âgées de 18 à 39 ans venues pour leur

première consultation prénatale à la SMI. La collecte des échantillons s’est déroulée du 23

septembre au 20 octobre 2010 (période de haute transmission) au laboratoire d’analyses

biomédicales de l’HOSCO. Chez les femmes sélectionnées, 6ml de sang veineux ont été

prélevés et répartis dans deux tubes EDTA et un tube sec. Le premier tube EDTA a servi à la

recherche de l’antigène Pf-HRP2, à la détermination de la parasitémie de P. falciparum sur

goutte épaisse, et au dosage du taux d’hémoglobine. Le second tube EDTA a été centrifugé et

le plasma a servi au dosage des folates et de de l’homocystéine. Le sérum du tube sec a servi

au dosage du fer sérique.

Pour la seconde étude 238 parturientes ayant accouché à la maternité de l’HOSCO et leur

nouveau-né ont été enrôlés. La collecte des échantillons s’est déroulée de Septembre 2013 à

Février 2014. Chez les femmes consentantes, du sang veineux a été prélevé dans un tube

EDTA. Après accouchement, le sang du cordon a été prélevé après ponction de la veine

ombilicale dans un tube EDTA pour les analyses hématologiques et un tube sec pour les

analyses biochimiques. Enfin le sang placentaire a été prélevé sur tube EDTA après la

délivrance.

Critères d’inclusion

- Les femmes enceintes ayant au moins 18 ans, suivant les visites prénatales au CMSCO

et ne présentant pas de suspicion clinique de paludisme. Les symptômes de suspicion

clinique du paludisme sont : fièvre, céphalées, vomissements, nausées, douleurs

abdominales, diarrhée, myalgie. Vu que les symptômes du paludisme peuvent être

confondues aux manifestations cliniques survenant chez la femme enceinte au cours

du travail, ont été considérées comme asymptomatiques les femmes enceintes en

travail non fébriles.

- Les femmes consentantes à l’étude.

- Les nouveaux-nés à terme et vivants de ces femmes.


Critères de non-inclusion

- Les femmes enceintes de moins de 18 ans.

- Les femmes enceintes malades du paludisme.

II.3. Test de diagnostic rapide du paludisme (TDR)

Des TDR en bandelette (Acon Malaria P.f., San Diego ; USA) et en cassette (Malaria Total

Quick Test, Cypress Diagnostics ; Belgique) ont été employés dans la présente étude. Les

tests rapides du paludisme sont des tests immunologiques qualitatifs basés sur la détection de

l'antigène HRP2 de Plasmodium falciparum (TDR en Bandelette et cassette) et de la

Lacticodéshydrogénase (LHD) (TDR en cassette) dans le sang total. Les TDR contiennent des

anticorps monoclonaux spécifiques à la HRP2 de P. falciparum (TDR en Bandelette et

cassette) et des Anticorps monoclonaux spécifiques à la LDH de P. falciparum, P. malariae,

P. ovale et P. vivax (TDR en cassette). Lorsqu’un échantillon est ajouté au puits d’échantillon,

les antigènes présents dans l’échantillon sont capturés par un complexe coloré, qui contient

les anticorps monoclonaux. Ce mélange migre par capillarité vers la zone de test et se fixe aux

anticorps HRP2 et/ou LDH au traves la membrane de test. Le complexe conjugué anticorps-

antigène-anticoprs formé fait apparaitre une ligne de test colorée. La ligne témoin est utilisée

pour contrôler la méthode (Figure 9).

Figure 9 : Représentation des résultats de test rapide du paludisme

Diluant

Contrôle

P. f. plus autre espèce

P. falciparum

Zone de dépôt

TDR en bandelette Deux TDR en cassette


II.4. Goutte épaisse et frottis sanguins

Goutte épaisse

On dépose une goutte de sang au milieu d'une lame de microscope et, à l'aide du coin d'une

autre lame, la goutte de sang est étalée jusqu'à obtenir un diamètre de 10 à 15 mm (Figure 10).

Figure 10 : Une goutte épaisse

Lorsque les étalements sont secs, colorer pendant environ 30 mn au Giemsa dilué au 1/10,

laver doucement et laisser sécher. Au microscope, examiner au grossissement 100 la goutte

épaisse en utilisant de l'huile à immersion. Pour estimer la densité parasitaire, compter les

parasites et leucocytes dans les mêmes champs jusqu'à 200 ou 500 leucocytes comptés. Le

taux de leucocytes est supposé à 8000 leucocytes / ul. Les densités parasitaires ont été

calculées selon la formule suivante : nombre de parasites comptés × 8000 / nombre de

leucocytes comptés (Moody, 2002).

Frottis sanguin

Nettoyer 2 lames à l’alcool (faces et tranches), les sécher avec du papier absorbant. Prélever,

une goutte de sang à l’aide du compte-goutte. Déposer la goutte de sang à l’extrémité d’une

lame. Appliquer une autre lame inclinée à 45° en avant de la goutte de sang de façon à ce que

le sang s’étale sous la lame par capillarité. Faire glisser la lame inclinée à 45° pour étaler

uniformément la goutte. Sécher le frottis avec le sèche-cheveux. Repérer au marqueur, avec

une lettre F, la face où se trouve le sang.

II.5. Conaractérisation des espèces plasmodiales par PCR en temps réel

II.5.1. Extraction de l’ADN

L'ADN a été extrait par la technique de salting-Out (Technique au chlorure de sodium saturé).

Cette technique est basée sur le relargage des protéines à force ionique élevée suivi de la

précipitation de l'ADN génomique dans une solution d'éthanol absolu à froid (-20 °C).


Protocole d’extraction de l’ADN

Pour l’extraction de l’ADN, 500µl du tampon de lyse ont été ajoutés à 200µl de culot de sang

préalablement mélangé avec 10 µl de contrôle interne. Le tout a été délicatement mélangé à

l’aide de la micropipette pendant 15 secondes, vortexé, puis centrifugé à 13000 rpm pendant

une minute. Le surnageant a été jeté.

Le culot a été lavé trois fois en ajoutant 1ml d’eau distillée. Ce mélange a été vortexé et

centrifugé à 13000 rpm pendant 1 minute puis le surnageant a été jété de nouveau.

Au culot, 370μl de Mix (80μl de protéinase K-5X tampon, 30μl de protéinase K, 20µl de SDS

20% et 240μl de H2O et cela par échantillon) ont été ajoutés puis vortexé. Après une

incubation à 55°C pendant 15 minutes, 200µl de NaCl 5M ont été ajoutés au mélange puis

vortexé pendant 15 secondes et centrifugé à 13000 rpm pendant 5 minutes.

Par la suite, 500μl du surnageant ont été introduits dans un tube de 1,5ml. Un ml d'éthanol

absolu (température ambiante) a été ensuite ajouté. Les tubes ont été agités délicatement à la

main pour laisser précipiter l'ADN. Pour isoler l'ADN précipité, les tubes ont été centrifugés à

13000 rpm pendant 1 minute puis le surnageant.a été jeté.

Pour laver l’ADN obtenu, 800µl d'éthanol frais à 70% (préalablement conservé à -20°C) ont

été ajoutés au culot et le mélange a été vortexé et centrifugé à 13000 rpm pendant 1 minute.

Le surnageant a ensuite été jeté. Cette opération a été répétée deux fois.

Le reste de l’éthanol a été éliminé en égouttant les tubes sur du papier absorbant puis en

chauffant les tubes sur un incubateur. La solution d’ADN a été obtenue en dissolvant l’ADN

dans 100µl de tampon d’élution.

Composition du tampon de lyse pour 1L :

0.32 M Sucrose 109.5g sucrose

5 mM MgCl2 10 mL 5M MgCl2

12 mM Tris-HCl 12 mL 1M Tris-HCl

1% Triton X-100 10 mL Triton X-100

5X Proteinase K tampon (0.375 M NaCl / 0.12 M EDTA).


II.5.2. Confirmation de la présence de P. falciparum par la PCR en temps réel

La PCR en temps réel est une technique basée sur la détection et la quantification d’un

reporter fluorescent dont l’émission est directement proportionnelle à la quantité d’amplicons

générés pendant la réaction de polymérisation en chaine. La séquence d’ADN cible est une

région spécifique du gène codant pour l’ARNr 18S de P. falciparum. Le reporter fluorescent

est le FAM (6-carboxyfluorocein).

Nous avons utilisé un kit GENESPARK Malaria panel 2 (Immunospark, Rome, Italie) pour

une détection qualitative de P. falciparum. Le kit est composé d’un mix spécifique constitué

d’un tampon de réaction, des amorces, des sondes, des désoxyribonucléotides et du MgCl2 ;

de l’ADN polymérase, d’un ROX Reference Dye, de contrôles positif et négatif.

Le mix réactionnel a été reconstitué en ajoutant au mix spécifique 10µl de l’ADN polymérase

et 8,5 µl de ROX Reference Dye. Ce mélange a été vortexé puis centrifugé 10 secondes à

1000 rpm.

Pour la réalisation de la PCR, 15µl du mix réactionnel ont été distibués dans les puits de la

plaque pour PCR en temps réel. 10µl de chaque échantillon ou de chaque contrôle positif ou

négatif ont été ajoutés dans les puits et la plaque a été centrifugée. La plaque a été introduite

dans le thermocycler 7500 Fast Real-Time PCR de Applied Biosystems (Abboott, USA)

(Figure 12). L’analyse a été effectuée selon le programme suivant : 60°C pendant une minute,

suivi de l’activation de l’ADN polymérase à 95°C pendant 10 minutes, puis 45 cycles

composés de 95°C pendant 15 secondes et de 60°C pendant 1minute ; ensuite une étape finale

d’élongation à 60°C pendant 1 minute.

Figure 11 : Thermocycler 7500 Fast Real-Time PCR Photo: DOUAMBA, CERBA


II.6. Electrophorèse de l’hémoglobine

Le principe consiste en la migration, dans un champ électrique, d'un hémolysat d'hématies

lavées, l'échantillon du patient étant analysé parallèlement à ceux de témoins normaux et

pathologiques.

Mettre 4 mL de solution hémolysante contenant 1% de fluorure de sodium, 12% de NaCl et

1,5% d’oxalate de potassium dans des tubes à essai. Ajouter 3 gouttes de sang et centrifuger

30 secondes à 1500 rpm. Verser le surnageant et ajouter au culot 3 gouttes de saponine à 1%

et porter au vortex pour hémolyser les hématies. Par des capillaires, déposer des spots sur le

cellogel, lancer la migration 45 minutes à 200V avec du tris-glycine comme tampon de

migration.

II.7. Dosage colorimétrique du taux d’hémoglobine

Le dosage a été effectué en utilisant un kit de dosage colorimétrique (Cypress

DIAGNOSTICS, Belgique) et un spectrophotomètre (MICROLAB 200).

Principe : l’hémoglobine est oxydée par le ferricyanure de potassium en méthémoglobine

laquelle est convertie en cyanométhémoglobine par le cyanure de potassium. L’intensité

d’absorption de la cyanométhémoglobine est proportionnelle à la concentration de

l’hémoglobine.

Mélanger 20 µL de sang dans 5 mL de solution de travail, vortexer et incuber 3 minutes à

température ambiante. Ce mélange est lu contre un blanc (solution de travail).

Concentration de l’hémoglobine = (Absorbane échantillon/ Absorbance standard) X 15 en

g/dL. Limite de détection 0,1 g/dL ; linéarité jusqu’à 20 g/dL.

II.8. Dosage du fer sérique

Nous avons utilisé un kit de dosage colorimétrique (Cypress DIAGNOSTICS, Belgique) et un

spectrophotomètre (HOSPITEX, Italie).

Principe du dosage : Dans le sérum, le fer est lié à la transferrine. En présence d’une faible

acidité, le fer se dissocie de son complexe alors que les protéines sériques restent en solution.

Après sa réduction par l’acide ascorbique, le fer est converti et se lie à la ferrozine pour

former un complexe coloré dont l’intensité est proportionnelle à la concentration du fer dans

l’échantillon.


La préparation des échantillons s’est faite suivant le tableau III suivie de la lecture au

spectrophtomètre.

Tableau III : Protocole de dosage du fer sérique

Réactifs Réactif blanc Standard Echantillon

blanc

Echantillon

Standard (Fer aqueux)

Echantillon

R1 : (tampon acétate) + R2

(réducteur : acide ascorbique)

R3 (couleur : ferrozine)

200 µL

------

1 mL

-------

200 µL

------

1 mL

1 goutte

------

200 µL

1 mL

------

------

200 µL

1 mL

1 goutte

Mixer et attendre 10 minutes à la température ambiante. Mesurer du standard et de l’échantillon

versus le blanc de standard /échantillon. La couleur est stable au moins 30 minutes.

II.9. Dosage des folates et de l’homocystéine

Ces dosages ont été effectués en utilisant un kit de dosage des folates et un kit de dosage de

l’homocystéine pour AxSYM (ABBOTT, USA).

II.9.1. Dosage immunologique par polarisation de fluorescence (FPIA) de l’homocystéine

Principe : l’homocystéine (Hcy) liée est réduite en homocystéine libre qui est à son tour

convertie en S-Adenosyl-L-Homocystéine (SAH) comme décrit ci-dessous. L’Hcy, ses

formes disulfures ainsi que les formes mixtes protéine-Hcy présentes dans l’échantillon sont

réduites en homocystéine libre sous l’action du dithiothréitol (DTT).

HCY-SS-Hcy (homocystéine)

R1-SS-Hcy (R1 = résidu thiol) Hcy

protéine-SS-Hcy

Ensuite l’Hcy libre est convertie en SAH utilisant la SAH hydrolase et de l’adénosine en

excès. Le SAH est ensuite dosé par FPIA.

Principe du FPIA : l’échantillon, le réactif de prétraitement et le diluant sont mis en contact

et incubés. Une première lecture est prise comme blanc par le système optique FPIA. Les

anticorps (anti-SAH) et les traceurs (substance identique à la substance à doser liée à un

traceur fluorescent) sont ajoutés au mélange réactionnel et incubés. La substance à doser entre

DTT


en compétition avec le traceur pour occuper les sites de liaison des anticorps (Figure 13). Le

système optique détecte et mesure dans un plan de polarisation bien précis, l’intensité de la

fluorescence émise. La variation de cette intensité détermine la concentration de la substance

à doser dans l’échantillon :

- si l’échantillon contient une forte concentration de la substance à doser, il restera un

grand nombre de molécules de traceurs non liées. La lumière polarisée provoque une

excitation de ces petites molécules qui tournent rapidement en émettant de la lumière dans de

nombreux plans et donc pas seulement dans le plan retenu pour la mesure; l’intensité

lumineuse mesurée sera donc faible ;

- si la concentration de la substance à doser est faible dans l’échantillon, un grand nombre

de molécules de traceurs se lieront aux anticorps formant de grosses molécules, plus lourdes;

ces molécules tournent plus lentement en émettant de la lumière polarisée dans le même plan.

L’intensité de la lumière mesurée dans ce plan de polarisation sera donc intense.

Protocole : mettre 150 µL de plasma ainsi qu’un contrôle bas, normal, et haut dans les

cartouches de réaction et lancer l’analyse.

Figure 12 : Compétition entre la substance à doser et le traceur Source : manuel de l’AxSYM

II.9.2. Dosage des folates

Principe : le dosage AxSYM Folate est basé sur une technologie par capture d’ions. La

solution de capture d’ions, ammonium quaternaire de poids moléculaire élevé, est distribuée

sur la matrice en fibres de verre. Une charge positive est ainsi transmise à la matrice, ce qui la

rend capable de capturer les complexes d’analytes chargés négativement. Au cours du dosage,

il y a formation de complexes polyanions-analytes chargés négativement qui sont capturés par

interaction électrostatique avec la matrice en fibres de verre chargée positivement. Le dosage

AxSYM Folate utilise un réactif soluble de liaison composé de protéines de liaison des folates


(FBP : Folate Binding Protein) couplées à des anticorps monoclonaux, couplés à leur tour de

manière covalente à la carboxyméthylamylase (polyanion). Au cours du dosage AxSYM

Folate, il y a formation de complexes d’analytes chargés négativement grâce à la réaction de

liaison entre les folates et le réactif soluble de liaison. Les complexes d’analytes chargés

négativement sont capturés par interaction électrostatique avec la matrice en fibres de verre

cationique. Les folates sont quantifiés par la mesure de la population des sites FBP non

occupés liés à la matrice, en utilisant un conjugué d’acide ptéroïque (un analogue des folates)

et de la phosphatase alcaline comme molécule génératrice de signal, ainsi qu’un substrat le

phosphate de méthyl-4-ombelliféryl. La vitesse de formation du méthyl-4-ombelliférone

(produit fluorescent) est mesurée. Cette vitesse est proportionnelle à la concentration des

folates dans l’échantillon.

Protocole : mettre 150 µL de plasma ainsi qu’un contrôle bas, normal, et haut dans les

cartouches de réaction et lancer l’analyse.

II.10. Dosage de l’Aspartate Aminotransférase (ASAT), de l’Alanine Aminotransférase

(ALAT) et de la créatinine

Ces dosages ont été effectués en utilisant un kit de dosage de l’ASAT, L’ALAT et de la

créatinine pour l’automate cobas c (Roche, Germany). Pour le mode opératoire, se conformer

aux instructions du fabricant.

II.10.1. Dosage de l’Aspartate Aminotransférase

Principe

L’ASAT de l’échantillon catalyse le transfert du groupement amine entre le L-aspartate et le

2-oxoglutarate pour former de l’oxaloacétate et du L-glutamate. L’oxaloacétate réagit ensuite

avec le NADH, en présence de malate-déshydrogénase (MDH), pour former du NAD+. La

vitesse de formation du NADH est directement proportionnelle à l’activité catalytique de

l’ASAT. Elle est déterminée par photométrie en mesurant la diminution de l’absorbance.

L-aspartate + 2-oxoglutarate oxaloacétate + L-glutamate

Oxaloacétate + NADH + H+ L-malate + NAD+

ASAT

MDH


II.10.2. Dosage de l’Alanine Aminotransferase

Principe

L’ALAT catalyse la réaction entre la L-alanine et le 2-oxoglutarate. Le pyruvate formé est

réduit par le NADH, dans une réaction catalysée par la lactate-déshydrogénase (LDH), pour

former du L-lactate et du NAD+. La vitesse initiale de formation du NADH est directement

proportionnelle à l’activité catalytique de l’ALT. Elle est déterminée par photométrie en

mesurant la diminution de l’absorbance.

L-Alanine + 2-oxoglutarate Pyruvate + L-glutamate

Pyruvate + NADH + H+ L-lactate + NAD+

II.10.3. Dosage de la créatinine

Principe

Ce test colorimétrique cinétique se fonde sur la méthode de Jaffé. En milieu alcalin, la

créatinine forme avec le picrate un complexe jaune orangé. La vitesse de formation de la

coloration est proportionnelle à la concentration en créatinine dans l’échantillon.

Créatinine + acide picrique Complexe jaune orangé

II.11. Considérations éthiques

Le comité national d’éthique en sciences, le Centre Médical Saint-Camille et le CERBA ont

approuvé cette étude et chaque femme a donné son consentement éclairé avant les

prélèvements sanguins. Tous les sujets infectés par le paludisme (mère et enfants) ont été

traités suivant le protocole national.

II.12. Analyses statistiques

Les données ont été saisies sur Excel 2010 puis analysées avec le logiciel standard Statistical

Package for Social Sciences (SPSS) version 20 pour windows et par le logiciel EpiInfo

version 6. Le seuil de signification statistique a été fixé à p < 0,050.

ALAT

LDH

pH alcalin

RESULTATS

III. RESULTATS

III.1. Article 1 – Le paludisme asymptomatique est associé à l’anémie chez les femmes

enceintes à Ouagadougou

DOUAMBA, Z., BISSEYE, C., DJIGMA, F.W., COMPAORÉ, T.R., BAZIE, V.J.T.,

PIETRA, V., NIKIEMA, J.-B., and SIMPORE, J., 2012. Asymptomatic malaria correlates

with anaemia in pregnant women at Ouagadougou, Burkina Faso. Journal of Biomedicine &

Biotechnology. 2012, p. 198317. PMID: 23226937 (Annexes).

III.1.1. But et contexte

Dans les régions à transmission du paludisme comme le Burkina Faso, l’infection à P.

falciparum chez les femmes enceintes peut être asymptomatique mais accompagnée d’une

anémie secondaire et d’une parasitémie placentaire. Le but de cette étude était : i) d’identifier

les femmes enceintes pratiquant une prophylaxie antipaludique ; ii) d’évaluer la prévalence du

paludisme asymptomatique chez ces femmes iii) de corréler les paramètres biochimiques et

hématologiques avec le paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes en vue de

comprendre d’avantage l’éthiopathogénie paludique de ce groupe vulnérable.

III.1.2. Résultats

III.1.2.1. Caractéristiques socio-économiques et professionnelles des femmes

Les femmes enceintes en visite prénatale à la SMI du CMSC de Ouagadougou ont consentis

librement à participer à notre étude. Leur âge variait de 18 à 39 ans, avec une moyenne d’âge

de 25,23 ± 5,20 ans et parmi elles, 77,61% avaient moins de 30 ans. Le tableau IV récapitule

les caractéristiques professionnelles et socio-économiques des femmes. Les ménagères

représentaient 61,19% ; les analphabètes 41,79% et 2,49% étaient salariées. Parmi les femmes

enceintes, 42,79% étaient des multipares ayant au moins 3 grossesses ; 34,82% étaient des

primipares et seules 42,29% des femmes enceintes dormaient sous une moustiquaire

imprégnée. La prise d’un supplément médicamenteux (fer acide folique) ne concernait que

40,30% des femmes et 27,36% d’entre elles ont pris un TPI/SP.


Tableau IV : Caractéristiques professionnelles et socio-économiques des femmes

Caractéristiques Nombre Pourcentage (%)

Profession

Ménagères 123 61,19

Secteur informel 60 29,85

Salariées 05 02,49

Elèves/étudiantes 13 06,47

Education

Illettrées 84 41,79

Primaire 59 29,35

Post-primaire 58 28,88

Age en années

≤ 20 50 24,88

21 à 25 59 29,35

26 à 30 59 29,35

31 à 39 33 14,42

Nombre de grossesse

1 70 34,82

2 45 22,39

≥ 3 86 42,79

Stade de la grossesse

1er trimestre 70 34,83

2ème

trimestre 96 47,76

3ème

trimestre 35 17,41

Moustiquaires

imprégnées

Oui 85 42,29

Non 116 57,71

Fer acide folique Oui 81 40,30

Non 120 59,70

Prise de SP Non 146 72,64

Oui 55 27,36

III.1.2.2. Prévalence du paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes

Le taux de positivité à P. falciparum était respectivement de 30,35% (61/201) et

24,38% (49/201) par TDR et goutte épaisse (P = NS). La densité parasitaire moyenne était de

4058 parasites/µL.


La sensibilité des TDR utilisée de 100% (92,75-100,00) avec une spécificité de 92,11%

(86,62 – 95,85) par rapport à la goutte épaisse.

III.1.2.3. Paramètres hématologiques, biochimiques des femmes enceintes avec le

paludisme asymptomatique

- Taux hémoglobine et fer sérique

Le tableau V résume les paramètres biochimiques et hématologiques des femmes. La

valeur moyenne du taux d’hémoglobine était de 10,49 ± 1,73 g/dL. Les femmes enceintes

ayant un taux d’hémoglobine < 11 g/dL représentaient 61,19% et celles ayant un taux

d’hémoglobine situé entre 7 g/dL et 10 g/dL représentaient 36,81%. La majorité des femmes

avait un taux normal de fer sérique (83,08%) sans relation statistiquement significative entre

taux de fer et anémie.

-Taux d’homocystéine et de folates

La majorité des femmes (90,05%) avait un taux normal d’homocystéine (≤ 12 µmol/L)

et 62,19% avaientt des taux faibles en folates (<7,7 ng/mL) ; la proportion des femmes ayant

une hyperhomocystéinémie modérée (entre 12 et 30 µmol/L) était de 8,95%. Nous avons

remarqué que 16/20 (80,00%) des femmes ayant des taux d’homocystéine élevés avaient leur

taux de folates bas. En outre, 77/123 (62,60%) des anémiées avaient aussi des taux faibles en

folates mais avec des différences non statistiquement significatives.


Tableau V : Paramètres biochimiques et hématologiques des femmes enceintes

Paramètres Valeurs Nombre %

Taux

d’hémoglobine (10,49 ±1,73g/dL)

Anémie sévère < 7 2 1,00

Anémie modérée [7 – 10[ 74 36,81

Anémie légère [10 -11[ 47 23,38

Absence d’anémie ≥ 11 78 38,81

Fer sérique

(14,64 ±1,96

µmol/L)

Bas < 7,16 21 10,45

Normal 7,16 à 26,85 167 83,08

Haut > 26,85 13 6,47

Homocystéine

(10,49 ±

1,73µmol/L)

Normal ≤ 12 181 90,05

Homocystéinemie modérée [12 – 30[ 18 08,95

Hyperhomocystéinémie ≥ 30 02 1,00

Folates

(7,01 ± 2,84

ng/mL)

Faible < 7,7 125 62,19

Normal ≥ 7,7 76 37,81

Sur un total de 201 femmes, cent vingt trois (61,19%) étaient anémiées (taux

d’hémoglobine < 11 g/dL). L’anémie était significativement plus fréquente chez les femmes

infectées par P. falciparum (33,33%) comparativement aux femmes enceintes non infectées

(10,26%) (P= 0,0002) (Tableau VI). Aucune différence statistiquement significative n’a été

observée d’une part, entre le stade de la grossesse, la parité et la présence du parasite et

d’autre part entre l’usage ou non de la moustiquaire imprégnée et la présence de P.

falciparum. Cependant, la présence de P. falciparum était significativement réduite chez les

femmes ayant pris un TPI à base de SP (12,73%) comparativement à celles n’ayant pas pris de

TPI (28,77%) (P= 0,0182).

La distribution des types d’hémoglobine chez les femmes enceintes était la suivante :

AA (74,62%) ; AS (7,96%) ; AC (15,92%) ; CC (0,50%) et SC (1,00%) (Tableau VI).

Le taux d’infection à P. falciparum respectivement de 26,00%, 25,00% et 18,75% chez les

femmes enceintes porteuses d’hémoglobine AA, AS et AC (P = NS).


Le tableau VI résume la distribution des groupes sanguins chez les femmes enceintes. Les

femmes du groupe sanguin O étaient moins infectées par P. falciparum que celles appartenant

aux autres groupes sanguins sans différence statistiquement significative.

Tableau VI : Corrélation entre paramètres hématologiques, parité, stade de la grossesse,

mesures préventives et paludisme asymptomatique

Paramètres Goutte épaisse P-value

Négative Positive

Taux

d’hémoglobine

Présence d’anémie

N= 123/201 (61,19%)

82/123 (66,67%) 41/123 (33,33%)

0,0002

Absence d’anémie

N= 78/201 (38,81%)

70/78 (89,74%) 8/78 (10,26%)

Stade de la

grossesse

1er trimestre

N= 70/201 (34,83%)

55/70

(78,57%)

15/70

(24,43%)

NS 2ème

trimestre

N= 96/201 (47,76%)

68/96

(70,83%)

28/96

(29,17%)

3ème

trimestre

N= 35/201 (17,41%)

29/35

(82,86%)

6/35

(17,14%)

Nombre de

grossesses

1

N= 70/201 (34,83%)

53/70

(75,71%)

17/70 (24,29%)

NS 2

N= 45/201 (22,39%)

34/45 (75,56%) 11/45 (24,44%)

≥ 3

N= 86/201 (42,78%)

65/86 (75,58%) 21/86 (24,42%)

Traitement

préventif (SP)

Non

N= 146/201 (72,64%)

104/146

(71,23%)

42/146

(28,77%)

0,0182 Oui

N= 55/201 (27,36%)

48/55

(87,37%)

7 /55

(12,73%)

Moustiquaire

imprégnée (MII)

Non

N= 116/201 (57,71%)

88/116

(75,86%)

28/116

(24,14%)

NS

Oui

N= 85/201 (42,29%)

64/85

(75,29%)

21/85

(24,71%)

Electrophorèse

de l’hémoglobine

AA=150/201 (74,62%) 111/150 (74,00%) 39/150 (26,00%)

NS

AC=32/201 (15,92%) 26/32 (81,25%) 6/32 (18,75%)

AS=16/201 (7,96%) 12/16 (75,00%) 4/16 (25,00%)

CC=1/201 (0,5%) 1/1 0/1

SC=2/201 (1,00%) 2/2 0/2

Groupe sanguin

A=50/201 (24,88%) 36/50 (72,00%) 14/50 (28,00%)

NS

B=63/201 (31,34%) 46/63 (73,02%) 17/63 (26,98%)

AB=17/201 (8,46%) 12/17 (70,59%) 5/17 (29,41%)

O=71/201 (35,32) 58/71 (81.69%) 13/71 (18,31%)

NS = Non significatif ; en gras P-value significative


III.1.3. Conclusion partielle

Dans cette première partie, nous avons pu réaliser quelques analyses biologiques, à

savoir, le TDR du paludisme, la goutte épaisse, les taux d’homocystéine, de folates et de fer

sérique, l’électrophorèse de l’hémoglobine et les groupes sanguins chez les femmes enceintes.

On comprend donc l’importance de cette étude car d’une part, elle a permis d’identifier les

femmes ayant un paludisme asymptomatique qui pourrait induire une anémie et d’autre part

d’identifier les femmes ayant une hyper-homocystéinémie qui pourrait favoriser une

malformation congénitale au niveau de leur fœtus. L’usage du TPI a été associé à une

réduction du taux d’infection et le paludisme asymptomatique augmenterait le risque

d’anémie chez les femmes enceintes.


III.2. Article 2 – Paludisme asymptomatique chez les parturientes et transmission

verticale du Plasmodium falciparum à Ouagadougou (Burkina Faso)

DOUAMBA, Z., DAO, N.G.L., ZOHONCON, T.M., BISSEYE, C., COMPAORÉ, T.R.,

KAFANDO, J.G., SOMBIE, B.C., OUERMI, D., DJIGMA, F.W., OUEDRAOGO, P.,

GHILAT, N., PIETRA, V., COLIZZI, V., and SIMPORE, J., 2014. Mother-to-Children

Plasmodium falciparum Asymptomatic Malaria Transmission at Saint Camille Medical

Centre in Ouagadougou, Burkina Faso. Malaria Research and Treatment. 2014, p. 390513.

PMID: 25506464 (Annexes).

III.2.1. But et contexte de l’étude

Le paludisme à P. falciparum chez les femmes enceintes peut être asymptomatique mais

accompagné d’une anémie secondaire et une parasitémie placentaire. Au Burkina Faso

l’infection palustre placentaire est élevée, même si selon les études existantes elle serait

caractérisée par un faible taux d’infection palustre néonatale. Le but de cette étude était i)

d’évaluer la couverture de la prophylaxie antipaludique par le traitement préventif intermittent

(TPI) à base de la sulfadoxine-pyriméthamine (SP) chez les parturientes ; ii) de déterminer la

prévalence du paludisme asymptomatique chez les femmes en travail d’accouchement ; iii)

d’estimer la prévalence du paludisme placentaire chez les parturientes asymptomatiques et

l’incidence du paludisme congénital chez leurs nouveau-nés.

III.2.2. Résultats

III.2.2.1. Caractéristiques sociodémographiques et biologiques des mères et prophylaxie

antipaludique

Au total 238 parturientes âgées de 18 à 39 ans ont été incluses dans l’étude. L’âge moyen des

femmes était de 26,46 ± 4,96 ans. La tranche d’âge de 21 à 25 ans était la plus représentée. Le

taux d’utilisation de la moustiquaire imprégnée d’insecticide à longue durée d’action

(MILDA) comme moyen de lutte anti-vectorielle était de 86,6%. La majorité des femmes

avaient pris au moins une dose de sulfadoxine-pyriméthamine (SP) comme traitement

préventif intermittent antipalustre et 61,5% ont pris deux doses de SP. L’anémie a été

diagnostiquée chez 18,4% des femmes enceintes dont 3,4% (8/238) présentaient une anémie

sévère (Tableau VII).


Tableau VII : Caractéristiques des parturientes

Paramètres étudiés Effectif (%)

Age en année

≤ 20 15 (6,30)

21 à 25 101 (42,44)

26 à 30 76 (31,93)

31 à 39 46 (19,33)

Taux d’hémoglobine en g/dl

< 7 (anémie sévère) 8 (3,36)

7 à 9,9 (anémie modérée) 13 (5,46)

10 à 10, 9 (anémie légère) 25 (10,50)

≥ 11 (absence d’anémie) 192 (80,67)

Nombre de prise SP

0 37 (15,55)

1 55 (23,11)

2 145 (60,92)

3 1 (0,42)

Utilisation MILDA

Oui 206 (86,55)

Non 32 (13,45)

III.2.2.2. Caractéristiques cliniques des nouveau-nés

Deux cent trente-huit (238) couples mère-enfant ont été inclus dans notre étude. Les nouveau-

nés avaient un poids moyen de 3157 ± 394 grammes (2400-4430g). Quatre bébés (1,7%)

avaient un poids inférieur à 2500g à la naissance. Le taux moyen d’hémoglobine des enfants à

la naissance était de 14,9 g/dl. L’anémie était présente chez 10,1% des bébés. La majorité des

nouveau-nés (93,7%) avaient un taux normal de créatinine. Les transaminases ont été aussi

mesurées chez les nouveau-nés et 95% et 84,9% d’entre eux avaient respectivement des taux

normaux de GOT et de GPT (Tableau VIII). Aucune association n’a été trouvée entre

l’infection palustre maternelle, placentaire et du cordon et les paramètres cliniques ou

biologiques des nouveau-nés affectant leur santé.


Tableau VIII : Caractéristiques des nouveau-nés

Paramètres étudiés Effectif (%)

Poids en gramme

< 2500 (faible) 4 (1,68)

≥ 2500 (normal) 234 (98,32)

Taux d’hémoglobine (g/dl)

< 12,5 (anémie) 24 (10,06)

≥ 12,5 (absence d’anémie) 214 (89,92)

Créatinémie (µmol/l)

53 à 106 (normale) 223 (93,70)

> 106 (anormale) 13 (6,30)

Transaminases GOT (U/l)

< 15 (basse) 0

15 à 60 (normale) 226 (94,96)

˃ 60 (anormale) 12 (5,04)

Transaminases GPT (U/l)

< 5 (basse) 0

5 à 25 (normale) 202 (84,87)

˃ 25 (anormale) 36 (15,13)

III.2.2.3. Résultats du diagnostic du paludisme par la goutte épaisse

Les résultats du diagnostic du paludisme chez les parturientes et leurs nouveaux nés sont

inscrits dans le tableau ci-dessous.


Tableau IX : Résultats de la goutte épaisse

Code

échantillon

Goutte épaisse mère Goutte épaisse placenta Goutte épaisse cordon

Densité

parasitaire

(parasites/µl)

Type de

plasmodium

Densité

parasitaire

(parasites/µl)

Type de

plasmodium

Densité

parasitaire

(parasites/µl)

Type de

plasmodium

M4 143 P. f.

M6 8.157 P. f.

M16 390 P. f.

M38 14.811 P. f. 12.256 P. f.

M49 11.647 P. f. 12.317 P. f. 5.102 P. f.

M66 11.647 P. f. et P. m. 522 P. f. 231 P. f.

M90 175 P. f.

M92 1.534 P. f. 512 P. f.

M95 270 P. f. 509 P. f. et P. m.

M114 13.044 P. f.

M126 118 P. f. 716 P. f. 517 P. f.

M131 135 P. f.

M133 827 P. f.

M147 26.862 P. f. 16.196 P. f.

M155 1.450 P. f. et P.m. 588 P. f. et P.m.

M160 2.470 P. f.

M162 2.263 P. f.

M167 115.073 P. f. 112.396 P. f.

M169 18.600 P. f.

M173 16.985 P. f. 82.325 P. f.

M175 61.635 P. f. 99.445 P. f.

M177 4.610 P. f. et P. o. 1.064 P. f.

M186 2.370 P. f.

M195 2.857 P. f.

M196 2.105 P. f. 857 P. f.

M199 1.200 P. f.

M200 5720 P. f.

Légende : P. f. : Plasmodium falciparum ; P.m. : Plasmodium malariae ; P. o. : Plasmodium ovale. La densité

parasitaire est celle de P. falciparum

- Prévalence du paludisme asymptomatique chez les parturientes

La présence des parasites dans le sang périphérique des mères a été notée chez 8,8% (21/238)

des mères. La goutte épaisse a révélé la présence de P. malariae dans deux cas d’infections

mixtes et de P. ovale dans un cas d’infection mixte. La moyenne géométrique des parasites


chez les mères était de 14.477 parasites/µl (118 à 115.073 parasites/µl) (Tableau IX). Le taux

d’infection était plus élevé dans la période de septembre-décembre (12,4%) que celui de la

période de janvier-février (8,2%) mais la différence n’était pas significative.

- Prévalence du paludisme placentaire

La microscopie du sang placentaire a révélé la présence des parasites dans 7,1% (17/238) des

échantillons testés. La goutte épaisse a mis en évidence la présence de P. malariae dans deux

cas d’infection. La moyenne géométrique de la parasitémie observée était de 21.630

parasites/µl (143 à 112.396 parasites/ µl) (Tableau IX). Le taux d’infection placentaire était

également plus élevé dans la période de septembre-décembre (9,0%) que celui de la période

de janvier-février (1,6%) mais la différence n’était pas significative.

- Incidence du paludisme congénital

Nous avons diagnostiqué 27 cas d’infection maternelle et placentaire et 5/238 cas d’infection

du sang du cordon ombilical. L’incidence du paludisme congénital était de 2,1% avec une

prévalence de la transmission verticale du paludisme asymptomatique de 18,5%. Plasmodium

falciparum a été la seule espèce mise en évidence dans le sang du cordon ombilical. La

densité parasitaire était faible par rapport à celles observées dans le sang placentaire et

périphérique avec une moyenne de 1.444 parasites/µl (231 à 5.102 parasites/ µl) (Tableau IX).

III.2.2.4. Association entre l’infection palustre et l’utilisation des moustiquaires

(MILDA) et la prise de SP

Nous n’avons pas trouvé d’association entre l’utilisation des MILDA d’une part et la prise du

TPI/SP d’autre part avec l’infection palustre maternelle (Tableau X).

Tableau X : Association entre l’utilisation de mesures préventives et l’infection palustre

maternelle

Paramètres Goutte épaisse (mères)

Négative Positive

p-value

Traitement préventif

Intermittent par SP.

Non 34/37 (91, 9%) 3/37 (8,1%) NS

Oui 181/201 (90,1%) 20/201 (9,9%)

Utilisation MILDA Non 28/32 (87,5%) 4/32 (12,5%) NS

Oui 187/206 (90,8%) 19/206 (9,2%)


III.2.2.5. Association entre l’infection maternelle, placentaire et du cordon ombilical et

la prise de SP

Parmi les 17 échantillons de sang placentaire positifs à la goutte épaisse, 11/17 (64,71%)

provenaient de mères présentant une infection plasmodiale dans le sang périphérique

(p<0,001) (Tableau XI). Les cinq échantillons de sang du cordon ombilical infectés

provenaient de mères ayant une parasitémie dans le sang périphérique et les 3/5 présentaient à

la fois une parasitémie dans le sang périphérique et dans le sang placentaire. En outre, sur les

femmes ayant à la fois une infection périphérique et placentaire, les 9/11 cas d’infection

placentaire sont issus des mères avec une densité parasitaire supérieure à 1.000 parasites /µl

(p<0,001).

Tableau XI : Association entre l’infection palustre maternelle, le TPI/SP et l’infection

palustre placentaire et néonatale

Paramètres

Goutte épaisse

(placenta)

Negative Positive

p-value

Goutte épaisse

(cordon)

Negative Positive

p-value

Parasitémie

maternelle

Négative 209/217

96,3%

8/217

3,7%

<0,001

216/217

99,5%

1/217

0,5%

-

Positive 12/21

57,1%

9/21

42,9%

16/21

76,2%

5/21

23,8%

TPI/ SP

Non 34/37

91,9%

3/37

8,1%

NS

36/37

97,3%

1/37

2,7%

-

Oui 182/201

90,5%

19/201

9,5%

196/201

97,5%

5/201

2,5%

Densité

parasitaire

< 1000 3/11

27,27%

8/11

72,73%

NS

0/5

0%

1/5

20%

-

≥ 1000 7/16

43,8%

9/16

56,2%

0/5

0%

4/5

80%

NS : non significatif, - effectif faible

III.2.2.6. Impact de l’infection palustre sur les paramètres biologiques étudiés

Aucune association n’a été observée entre l’infection maternelle, placentaire et celle du

cordon avec les paramètres biologiques analysés qui sont : le taux d’hémoglobine chez les

femmes ; le taux d’anémie, les transaminases hépatiques, la créatinine dans le sang du cordon

ombilical.



La distribution gratuite des MILDA et les nombreuses campagnes de sensibilisation des

femmes enceintes contribuent à la lutte contre le paludisme dans la population. Dans la

présente étude, nous avons enregistré un taux élevé de l’utilisation des MILDA et de la prise

de la SP. Cela s’est traduit par un taux relativement bas du paludisme asymptomatique chez

les femmes en travail d’accouchement à l’hopital Saint Camille de Ouagadougou. Cependant,

cette infection a une forte association avec le paludisme placentaire se traduisant par un taux

de transmission verticale de 18,5%. Aussi, le paludisme chez la femme enceinte est sous

évalué puisque 35,3% des infections placentaires provenaient de mère sans infection

périphérique détectée par goutte épaisse. De ce fait le paludisme asymptomatique demeure

une préoccupation chez la femme enceinte en travail compte tenu du risque pour sa santé et

celle de son bébé.


III.3. article 3 - Diagnostic moléculaire du Plasmodium par PCR en temps réel chez

les parturientes et chez leurs nouveaux nés à l’Hôpital saint Camille de Ouagadougou.



GHILAT, N., PIETRA, V., COLIZZI, V., and SIMPORE, J., en rédaction.

III.3.1. But et contexte de l’étude

L’incidence du paludisme congénital est très variable en Afrique-Subsaharienne. Le but de

cette étude était de confirmer la présence de Plasmodium falciparum chez les parturientes et

leurs nouveaux nés par PCR en temps réel et de déterminer la sensibilité et la spécificité de la

PCR en temps réel par rapport à la goutte épaisse.

III.3.2. Résultats de la RT-PCR

Au total, 48 échantillons de sang périphérique, placentaire et du cordon ombilical ont été

analysés par PCR en temps réel. L’analyse des 44 échantillons de goutte épaisse positive a

confirmé la positivité de 43 échantillons. Les 4 gouttes épaisses négatives ont été également

confirmées par la RT-PCR (Tableau XII). Nos résultats ont démontré que la sensibilité de la

PCR en temps réel était de 97,73% avec une spécificité de 100%.

Tableau XII : Comparaison des résultats de la PCR en temps réel et de la goutte épaisse

GE positive GE négative Total

RT-PCR positive 43 (VP) 0 (FP) 43

RT-PCR négative 1 (FN) 4 (VN) 5

Total 44 4 48

La sensibilité de notre RT-PCR ou la probabilité que le test soit positif si la goutte

épaisse est positive se calcul par la formule suivante :

VP

Sensibilité = ----------------

VP+FN

Quant à la spécificité ou la probabilité d’obtenir un test négatif si la goutte épaisse est

positive, elle est donnée par la formule suivante :


VN

Spécificité = ----------------

VN+FP

VP (vrais positifs) représente le nombre de cas positifs à la goutte épaisse et à la RT-PCR.

VN (vrais négatifs) est le nombre de cas négatifs à la goutte épaisse et à la RT-PCR.

FP (faux positif) représente le nombre de cas négatifs à la goutte épaisse et positifs à la RT-

PCR.

FN (faux négatifs) est le nombre de cas positifs à la goutte épaisse et négatifs à la RT-PCR.


Cette étude nous a permis d’évaluer la sensibilité et la spécificité de la PCR en temps réel par

rapport à la goutte épaisse qui était 97,73% pour la sensibilité et 100% pour la spécificité.

DISCUSSION


IV. DISCUSSION GENERALE

IV.1. Article 1 : le paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes à Ouagadougou

IV.1.1. Prévalence du paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes et

l’utilisation des mesures préventives

Le but de ce travail était l’étude du paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes en

visite prénatale à l’HOSCO de Ouagadougou. Sur 201 femmes incluses dans notre étude,

l’usage du TDR et de la méthode microscopique classique ont mis respectivement en évidence

une infection plasmodiale de 30,35 et de 24,38%. La différence n’est pas statistiquement

significative mais pourrait s’expliquer par la persistance de l’antigène histidine rich protein 2

(HRP2) de P. falciparum après la guérison (Kattenberg et al., 2012). L’antigène HRP2 est une

glycoprotéine spécifique de l’espèce P. falciparum et produite par tous les stades

érythrocytaires asexués et les jeunes gamétocytes du parasite. Les TDR utilisés avaient une

sensibilité de 100% et une spécificité de 92% par rapport à la méthode de diagnostic standard

qu’est la microscopie. Nos résultats sont comparables à ceux d’études menées en Côte

d’Ivoire et au Sénégal avec des sensibilités de 100% et 96% et des spécificités de 88% et 87%

respectivement (Yavo et al., 2002 ; Munier et al., 2009).

Nous avons, grâce à un questionnaire, évalué l’usage des moustiquaires imprégnées

d’insecticides (MII) chez les femmes enceintes et seules 42,29% des femmes de notre étude

ont affirmé utiliser une moustiquaire imprégnée. Plusieurs raisons expliqueraient cette faible

utilisation des moustiquaires imprégnées notamment leur coût. En effet, le pourcentage des

femmes enceintes appartenant aux groupes ménagères et illettrées utilisant les moustiquaires

imprégnées d’insecticides était parmi le plus faible. Le faible usage de la moustiquaire chez

certaines femmes enceintes était lié à leur ignorance du risque de l’infection plasmodiale sur

leur santé et celle de l’enfant. De plus, le non usage de la moustiquaire était aussi lié à son

inconfort. En effet, parmi les femmes n’utilisant pas les moustiquaires imprégnées, plus de

25% affirmaient s’étouffer sous la moustiquaire. Le taux d’utilisation des MII est supérieur à

celui obtenu par des études antérieures menées à Boromo (Coulibaly et al., 2007) et à Boussé

(Tiono et al., 2009) (inférieure à 10%).

La lutte contre le paludisme chez les femmes enceintes associe l’usage de la moustiquaire

imprégnée et un traitement préventif intermittent (TPI) à base de sulfadoxine pyriméthamine

(SP). Ainsi, toutes les femmes enceintes vivant dans des zones de transmission stable du


paludisme devraient recevoir au moins deux doses de TPI à partir du moment où elles

commencent à percevoir les mouvements du fœtus (vers la fin du premier trimestre).

Seulement 27% des femmes de notre étude avaient pris la première dose de SP et moins de la

moitié des femmes prenaient un supplément de fer acide folique. Ce retard dans la prise de fer

acide folique et de SP s’expliquerait par le fait que la majorité des femmes avait débuté leur

consultation prénatale vers leur 5e mois de grossesse et ceci pour diverses raisons : soit par

ignorance des risques liés à une grossesse mal suivie, soit par manque de moyens financiers.

Par ailleurs, certaines femmes ont soulevé que pour des raisons financières, elles ont repoussé

leur première visite prénatale.

IV.1.2. Paramètres biochimiques et hématologiques chez les femmes enceintes

L’anémie chez la femme enceinte est un problème majeur de santé publique puisqu’elle

contribue directement ou indirectement à augmenter le taux de morbidité et de mortalité

maternelle et périnatale. L’OMS estimait en 2001 la prévalence de l’anémie selon le taux

d’hémoglobine chez les femmes enceintes à 52% dans les pays en développement et à 22,7%

dans les pays industrialisés (WHO, 2001).

Nous avons trouvé 61,19% (123/201) des femmes enceintes anémiées dont 1% présentait une

anémie sévère. Nos résultats sont comparables à ceux d’études antérieures ayant trouvé des

taux d’anémie de 66% à Bobo-Dioulasso, 59,6% au Nigéria et 64% au Bénin (Méda et al.,

1999 ; Agan et al., 2010 ; Bodeau-Livinec et al., 2011).

Des carences en nutriments ont été corrélées à l’anémie, notamment les carences en fer et

acide folique. Nous avons montré que 83% des femmes enceintes avaient un taux de fer

sérique normal mais que 62,19% d’entre elles avaient un taux de folates inférieur à la

normale. Ainsi, 62,60% des femmes anémiées avaient un faible taux de folates, ce qui diffère

des résultats d’une étude faite au Nigéria où les femmes présentaient un taux normal de

folates avec une moyenne de 17,9 nmol/L (Vanderjagt et al., 2007).

La plupart des femmes (90%) de notre étude avait un taux normal d’homocystéine (≤ 12

µmol/L) avec un taux moyen de 10,49 µmol/L, une valeur nettement supérieure à celle

trouvée par Simporé et collaborateurs (Simporé et al., 2000) (3,6 µmol/L) et Chillemi et

collaborateurs (Chillemi et al., 2005) (6,8 µmol/L) au Burkina chez les femmes en bonne

santé. Cette différence peut s’expliquer par les changements physiologiques intervenant au

cours de la grossesse. Le taux moyen d’homocystéine trouvé dans notre étude était inférieur à

celui de 14,1 µmol/L trouvé au Nigéria par VanderJagt et collaborateurs (VanderJagt et al.,


2000). Cette différence pourrait être due à la prévalence de l’hyperhomocystéinemie modérée

chez les adolescentes et les adultes des deux sexes dans la population nigériane. En effet

Simporé et collaborateurs (Simporé et al., 2002) ont montré que le taux plasmatique

d’homocystéine (Hcy) variait selon la race, le sexe, l’âge, les habitudes nutritionnelles etc.

Les proportions des hémoglobines AA (74,62%) et SC (1%) trouvés dans notre étude étaient

comparables à celles de Hercberg et Galan au Benin (Hercberg et al., 1987). Cependant, nous

avons obtenu un taux de 15,92% pour les AC et 7,96% pour les AS et l’étude du Bénin

trouvait 16% de AS et 8% de AC. Tout comme Hercberg et Galan, nous n’avons pas trouvé

d’association entre le type d’hémoglobine et l’anémie chez les femmes enceintes.

IV.1.3. Mesures préventives, paramètres biochimiques, hématologiques et paludisme

asymptomatique chez les femmes enceintes

La prise de TPI par les femmes enceintes a été associée à une réduction de la prévalence

d’infection asymptomatique par P. falciparum par rapport à celles qui n’ont pas reçu de TPI

(12,73% contre 28,77%, p = 0,0182). Nos résultats sont comparables à ceux obtenus au

Ghana par Wilson et collaborateurs (Wilson et al., 2011) où 15,30% des femmes enceintes

ayant reçu la SP étaient infectées par P. falciparum contre 44,70% en absence de traitement

préventif.

L’infection par le plasmodium peut entrainer une variation du taux d’hémoglobine pouvant

conduire à une anémie ou encore celui des folates et d’homocystéine pouvant entrainer des

complications au cours de la grossesse. Nous avons identifié une corrélation entre parasitémie

et anémie. En effet, 33,33% des femmes anémiées avaient une goutte épaisse positive contre

10,26% des femmes anémiées qui n’avaient pas une parasitémie détectable en microscopie.

Les résultats de notre étude sont comparables à ceux d’Erhabor et collaborateurs (Erhabor et

al., 2010) et de Jumbo et collaborateurs (Jombo et al., 2011) au Nigéria, qui ont montré la

présence de parasites chez 66 et 71,6% des femmes anémiées contre 48 et 10,3% chez les

femmes non anémiées. Nous n’avons pas trouvé de corrélation entre la parité et l’anémie.

Ceci est en accord avec l’étude d’Agan et collaborateurs (Agan et al., 2010) au Nigéria qui

ont aussi travaillé sur le paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes. Cependant,

d’autres études au Ghana et au Nigéria ont montré un taux plus élevé de femmes anémiées

chez les primipares que chez les multipares (Glover-Amengor et al., 2005 ; Ofori et al., 2009 ;


Erhabor et al., 2010). Dans une étude faite en Ouganda il a été montré que le risque d’anémie

était plus élevé chez les femmes enceintes âgées de moins de 20 ans (Ndyomugyenyia et al.,

2008).

Nous n’avons pas non plus trouvé d’association entre la parasitémie, le taux de fer sérique et

les différents types d’hémoglobine. Des études antérieures faites au Burkina ont prouvé que

l’hémoglobine S et C conférait une protection naturelle contre le paludisme d'environ 90%

chez les homozygotes HbCC et de 30% chez les hétérozygotes HbAC (Modiano et al., 2001).

Une étude faite au Kenya a montré l’acquisition accélérée de l'immunité contre le paludisme

simple chez les enfants âgés de moins de 10 ans porteurs de HbAS (Williams et al., 2005). La

différence entre ces résultats et ceux de notre étude s’expliquerait par la taille de notre

échantillon mais aussi par l’état de nos sujets qui ne présentaient pas de symptômes de

paludisme.


IV.2. Article 2 : Paludisme asymptomatique chez les parturientes et transmission

verticale du Plasmodium falciparum à Ouagadougou

IV.2.1. Couverture de la prophylaxie antipaludique par le TPI/SP et l’utilisation des MII

Dans les régions ayant un niveau d'endémicité palustre modéré à fort de Plasmodium

falciparum, l'OMS recommande l’utilisation de moustiquaires imprégnées d’insecticide à

longue durée d’action (MILDA) et l’administration d’un traitement préventif intermittent

(TPI) à base de sulfadoxine-pyrimétamine (SP) chez la femme enceinte afin de lutter contre le

paludisme et ses effets au cours de la grossesse. L’efficacité du TPI à la SP a été démontrée au

Burkina et en Afrique Subsaharienne (Gies et al., 2009 ; Eisele et al., 2010). Dans la présente

étude, le taux d’utilisation des mesures préventives à savoir les MILDA et la SP comme TPI

sont élevés, respectivement 86,6% et 84,5%. Nous avons remarqué une amélioration de

l’utilisation des MILDA par rapport au taux de 42% que nous avons obtenu en 2012 dans le

même site d’étude (Douamba et al., 2012). Cela pourrait s’expliquer par l’impact positif des

nombreuses campagnes de sensibilisation des femmes enceintes sur l’utilisation des

moustiquaires et par une plus grande disponibilité de moustiquaires par les ménages au fil du

temps notamment grâce aux campagnes nationales de distribution gratuite de moustiquaires

organisées par le gouvernement. Globalement le taux d’utilisation des MILDA est de 77,7%

au Burkina Faso (MS, 2012). La prise de la SP comme TPI est également plus élevée que

celle que nous avons observée en 2012 (27%) (Douamba et al., 2012). Nos résultats sont

similaires à ceux observés par Bamba et collaborateurs en 2013 dans les deux principales

villes du Burkina Faso que sont Ouagadougou et Bobo-Dioulasso (Bamba et al., 2013).

Cependant, ce taux est plus élevé que celui rapporté récemment au Ghana (Stephens et al.,

2014). Au vu de cette bonne proportion, nous pensons que la sensibilisation des femmes sur la

problématique du paludisme gestationnel initiée à travers les campagnes d’information,

d’éducation a un impact sur l’adhésion des femmes enceintes au TPI à base de SP au Burkina

Faso. Notons que depuis octobre 2012, l’OMS recommande l’administration d’une dose de

TPI à chaque visite prénatale programmée après le premier trimestre de grossesse de telle

sorte que la femme prenne au moins trois doses de TPI/SP au cours de la grossesse (WHO,

2013). Cette recommandation a été prise en compte dans notre pays dans les directives

nationales de prise en charge du paludisme révisées en mars 2014 par le programme national

de lutte contre le paludisme.


IV.2.2. Caractéristiques sociodémographique et biologique des parturientes et de leurs

nouveaux nés

Cette étude rapporte une faible prévalence de l’anémie chez les femmes enceintes par rapport

à celle obtenue en 2012 dans le même site (Douamba et al., 2012). La faible prévalence de

l’anémie maternelle pourrait s’expliquer par la bonne couverture du traitement préventif

intermittent (TPI) à base de SP.

Le poids moyen des nouveau-nés rapporté dans notre étude est comparable à celui rapporté

dans une étude antérieure au Burkina Faso (Ouedraogo et al., 2012). Nous avons trouvé une

prévalence de 1,7% de faible poids à la naissance chez les enfants. Cette prévalence est

inférieure à celle de 15,8% rapportée par l’équipe de Ouédraogo mais elle est comparable à la

prévalence de 3,3% rapportée récemment au Ghana (Stephens et al., 2014).

La prévalence de l’anémie observée chez les nouveau-nés était de 10,1%. Ce taux est inférieur

à ceux enregistrés par deux études antérieures conduites au Malawi (23,4%) en 2004 et au

Ghana (40%) en 2013 (Brabin et al., 2004 ; Laar et al., 2013). Cette différence s’expliquerait

par la forte prévalence de l’anémie chez les parturientes et la prévalence plus élevée du

paludisme placentaire et néonatal dans leurs populations d’étude.

IV.2.3. Prévalence du paludisme chez les parturientes (infection périphérique)

Le taux d’infection plasmodiale dans le sang périphérique des femmes était de 8,8%. Il est

inférieur aux taux de 28% et 68,3% rapportés respectivement en Uganda en 2013 (De

Beaudrap et al., 2013) et au Nigéria en 2014 (Amuta et al., 2014). Cependant, une étude

menée au Ghana en 2014 a enregistré un taux d’infection périphérique de 2,5% inférieur à

celui de notre étude (Stephens et al., 2014). Cette différence pourrait s’expliquer par le taux

élevé de la prise de TPI/SP au Burkina Faso (Onyebuchi et al., 2014), par la localisation

urbaine de notre site d’étude et aussi par la forte prévalence du paludisme chez les femmes

enceintes dans certaines régions du Nigéria (Lesi et al., 2010 ; Omalu et al., 2012 ; Oraneli et

al., 2013). La saison de haute prévalence du paludisme dans notre pays est de juillet –

décembre ; ce qui explique le taux plus élevé d’infection palustre dans la période de

septembre – décembre.

En ce qui concerne les autres espèces plasmodiales, Plasmodium malariae a été identifié dans

11,1% des cas de paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes. Ce qui corrobore les

résultats de la prévalence de cette infection qui varie de 0,9 à 13,2% selon une étude menée en

2013 chez les enfants au Burkina Faso (Gneme et al., 2013). Par contre une prévalence de


3,6% chez les femmes enceintes a été enregistrée au Nigéria en 2013 (Agomo et Oyibo,

2013). Malgré la rareté du paludisme à Plasmodium ovale au Burkina Faso, dont la

prévalence varie de 0,5 à 1,8% (Gneme et al., 2013), nous avons constaté dans notre étude

que Plasmodium ovale a été identifié dans 3,7% des cas chez les femmes enceintes. Ceci est

en accord avec une étude récente qui montre que P. ovale et P. malariae représentent 5,9%

des infections palustres au Sénégal (Roucher et al., 2014).

IV.2.4. Prévalence du paludisme placentaire chez les parturientes

La prévalence du paludisme placentaire était de 7,1% chez les femmes dans cette étude. Cette

prévalence est inférieure aux prévalences de 19,5% et 55,2% rapportées respectivement au

Burkina Faso (Ouedraogo et al., 2012) et au Nigéria (Oraneli et al., 2013). Par ailleurs, cette

prévalence est supérieure à celle enregistrée lors d’une autre étude en 2014 au Ghana

(Stephens et al., 2014). Cette différence pourrait s’expliquer par une variation intra-régionale

de la prévalence du paludisme placentaire et néonatal (Ouedraogo et al., 2012 ; Omalu et al.,

2012).

IV.2.5. Incidence du paludisme congénital chez les nouveau-nés.

Nous avons obtenu dans cette étude un taux d’infection palustre du sang de cordon ombilical

de 2,1%. Ce taux est proche du taux de 1,4% rapporté dans une étude antérieure au Burkina

(Ouedraogo et al., 2012) et récemment en Inde (Singh et al., 2014).

Une forte association existe entre le paludisme maternel, la densité parasitaire et le paludisme

placentaire. Cette association a également été observée au Burkina (Ouedraogo et al., 2012 ;

Kalilani-Phiri et al., 2013). Cependant, aucune association n’a été trouvée entre l’infection

palustre maternelle et placentaire avec celle du sang de cordon. Ceci serait dû à la taille

réduite de notre échantillon.

Du fait du nombre de cas de paludisme congénital très faible dans notre échantillon, soit 5

cas, aucune association statistiquement significative n’a pu être mise en évidence entre le

paludisme congénital et ces différentes perturbations biologiques observées chez le nouveau-

né.


IV.3. Confirmation de la présence de P. falciparum par la PCR en temps réel

Par la PCR en temps réel, nous avons pu confirmer la présence de P. falciparum dans les

échantillons de sang périphérique, placentaire et du cordon ombilical. Les résultats des

gouttes épaisses et de la PCR en temps réel ont présenté une confirmation de positivité de la

goutte épaisse à 97,73% et 100% de concordance pour les gouttes épaisses négatives. La

sensibilité de la PCR en temps réel obtenue dans cette étude est légèrement inférieure aux

sensibilités de 100% et de 99,41% rapportées par Boonma et al., (2007) et Khairnar et al.,

(2009) respectivement. Cependant la sensibilité de notre test était supérieure à celles trouvées

par certains auteurs : 93,88% par Lima et al., (2011) ; 92% par Fransisca et al., (2015). Quant

à la spécificité de notre PCR en temps réel, elle était comparable à celle de 100% obtenue par

Lima et al., (2011). Cette spécificité par est par contre supérieure à celles de 96,6% ; 90,88%,

97% rapportées par Fransisca et al., (2015) ; Khairnar et al., (2009) ; par Boonma et al.,

(2007) respectivement. Ces différences pourraient être dues à la densité parasitaire et à

l’expérience du microscopiste lors de la lecture de la goutte épaisse (Coleman et al., 2006).


CONCLUSION ET

PERSPECTIVES


CONCLUSION

Dans cette étude, nous avons pu réaliser quelques analyses biologiques, à savoir, le

TDR du paludisme, la goutte épaisse, les taux d’homocystéine, de folates et de fer sérique,

l’électrophorèse de l’hémoglobine et les groupes sanguins chez les femmes enceintes. Cela

nous a permis d’une part, d’identifier les femmes ayant un paludisme asymptomatique qui

pourrait induire une anémie et d’autre part d’identifier les femmes ayant une hyper-

homocystéinémie qui pourrait favoriser une malformation congénitale au niveau de leur

fœtus. L’usage du TPI a été associé à une réduction du taux d’infection et le paludisme

asymptomatique augmentait le risque d’anémie chez les femmes enceintes déjà prédisposées à

l’anémie par l’hémodilution. Nous avons enregistré un taux relativement bas du paludisme

asymptomatique chez les femmes en travail d’accouchement et une faible incidence du

paludisme chez les nouveau-nés. Cependant, l’infection maternelle a une forte association

avec le paludisme placentaire avec un taux de transmission verticale de 18,5%. Aussi, le

paludisme chez la femme enceinte est sous-évalué puisque 35,3% des infections placentaires

provenaient de mères sans une infection périphérique détectable par la goutte épaisse. De ce

fait, le paludisme asymptomatique demeure une préoccupation chez la femme enceinte en

travail compte tenu du risque pour sa santé et celle de son bébé.

Il serait nécessaire que le ministère de la santé de notre pays promeuve d’avantage la

sensibilisation, l’information aux femmes enceintes ou en âge de procréer sur les méfaits du

paludisme pendant la grossesse. Le diagnostic systématique du paludisme devrait être

envisagé chez toutes les femmes enceintes en saison de haute transmission mais surtout vers

la fin de la grossesse. Le paludisme en général diminue le rendement économique et

intellectuel. Quand le paludisme ne tue pas le fœtus, le stress oxydatif induit par le parasite

chez le fœtus pourrait influencer son quotient intellectuel parce qu’il aurait à un moment

donné une hypoxie. Malheureusement cet état d’étude est difficile à démontrer.


PERSPECTIVES

Rechercher les marqueurs de résistance à la sulfadoxine pyriméthamine ;

Determiner la prévalence du paludisme congénital par les méthodes moléculaires ;

Déterminer la prévalence des autres espèces plasmodiales chez les femmes enceintes

par les méthodes moléculaires.

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ANNEXES

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ANNEXES

1. Publications de cette these

DOUAMBA, Z., BISSEYE, C., DJIGMA, F.W., COMPAORE, T.R., BAZIE, V.J., PIETRA,

V., NIKIEMA, J.B., and SIMPORE, J., 2012. Asymptomatic malaria correlates with

anaemia in pregnant women at Ouagadougou, Burkina Faso. J Biomed Biotechnol.

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GHILAT, N., PIETRA, V., COLIZZI, V., and SIMPORE, J., 2014. Mother-to-

Children Plasmodium falciparum Asymptomatic Malaria Transmission at Saint

Camille Medical Centre in Ouagadougou, Burkina Faso. Malaria Research and

Treatment. 2014, p. 390513. PMID: 25506464.

2. Autres publications

SAGNA, T., BISSEYE, C., COMPAORE, T.R., KAGONE, T.S., DJIGMA, F.W., OUERMI,

D., PIRKLE, C.M., ZEBA, M.T.A., BAZIE, V.J.T., DOUAMBA, Z., MORET, R.,

PIETRA, V., KOAMA, A., GNOULA, C., SIA, J.D., NIKIEMA, J.-B., and

SIMPORE, J., 2015. Prevention of mother-to-child HIV-1 transmission in Burkina

Faso: evaluation of vertical transmission by PCR, molecular characterization of

subtypes and determination of antiretroviral drugs resistance. Global Health Action. 8,

p. 26065. PMID: 25630709.

DOUAMBA, Z., MARTINETTO, M., PIETRA, V., PIGNATELLI, S., SCHUMACHER, F.,

NIKIEMA, J.-B., and SIMPORE, J., 2012. Effects of a cereal and soy dietary formula

on rehabilitation of undernourished children at ouagadougou, in burkina faso. Journal

of Nutrition and Metabolism. 2012, p. 764504. PMID: 22175011.

DENOOZ, R., DOUAMBA, Z., and CHARLIER, C., 2009. Fatal intoxications by

acenocoumarol, phenprocoumon and warfarin: method validation in blood using the

total error approach. Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the

Biomedical and Life Sciences. 877 (23), pp. 2344–2348. PMID: 19144578.

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3. Participations lors de rencontres scientifiques

Présentation de poster sur le paludisme asymptomatique chez la femme enceinte et

transmission verticale du Plasmodium falciparum à l’Hôpital Saint Camille de

Ouagadougou (Burkina Faso). Journées Portes Ouvertes du Centre National de Recherche

Scientifique et Technologique (CNRST) du 29 au 30 septembre à Ouagadougou.

Communication sur Le paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes à

Ouagadougou lors de la deuxième conférence scientifique du Réseau Ouest Africain de

Recherche pour la Santé, Abstracts Book, Co042, page 33, Ouagadougou 5-7 mars 2013.

Participation au 3ème

Congrès International de Phytothérapie de Ouagadougou du 09 au 12

Octobre 2012.

Participation aux 1ères

Journées de Biologie Clinique à Ouagadougou du 20 au 22 Juin

2012.

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Thèse de Doctorat Unique DOUAMBA Zoénabo Page XIV

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Documents

Paludisme asymptomatique chez les femmes enceintes … asymptomatique chez les femmes enceintes à Ouagadougou : anémie carentielle, diagnostic moléculaire et transmission verticale