PLATELIA™ H. PYLORI IgG 7277896 TESTS

DETECTION DES IgG ANTI-HELICOBACTER PYLORIDANS LE SERUM HUMAIN PAR METHODE IMMUNO-ENZYMATIQUE

1- INTERET CLINIQUEIdentifié en 1983 par Warren et Marshall, Helicobacter pylori est unebactérie spiralée à coloration de Gram négative dont le rôle dansl'étiologie de certaines maladies inflammatoires gastro-duodénales estaujourd'hui bien établi (1).La prévalence des infections à H. pylori est particulièrement élevée. Dansles pays industrialisés 50% de la population serait infectée à partir del'âge de 50 ans. Ce taux d'infection peut même atteindre 90% de lapopulation générale dans les pays en voie de développement (2).La colonisation du mucus gastrique par cette bactérie peut demeurer toutà fait asymptomatique ou, à l'inverse, donner lieu à des manifestationscliniques sévères comme la gastrite chronique, l'ulcère duodénal ougastrique, le lymphome gastrique du MALT ou le cancer gastrique (3).La recherche de Helicobacter pylori constitue un élément diagnostiqueimportant chez tout sujet présentant des symptômes d’inflammationgastro-duodénale. La nécessité d'éradiquer cette bactérie afin d'assurerune cicatrisation efficace et durable des ulcères duodénaux a étéclairement démontrée (4).La recherche de la bactérie peut se faire : • directement à partir de biopsies (histologie, culture bactérienne). Ces

techniques sont invasives, inconfortables et traumatisantes pour lepatient. Elles ne sont pas dénuées de risques et peuvent aboutir aussi àdes résultats faussement négatifs dus aux aléas de l'échantillonnage.

• indirectement, par la sérologie. Cette technique non invasive offre lasensibilité d'une méthode globale, tout en étant facile de mise en œuvreet moins coûteuse.

2- PRINCIPEPlatelia™ H. pylori IgG est un test immunoenzymatique qui permet la détectiond'anticorps spécifiques de H. pylori dans le sérum humain. Les microplaquessont sensibilisées avec un extrait antigénique semi-purifié, ne contenantpas de protéines flagellaires susceptibles d'entraîner des réactions croisées (6).Les sérums à étudier ainsi que les contrôles sont dilués et distribués dansles cupules de la microplaque sensibilisée par l’antigène H. pylori. Durantla première incubation, les anticorps anti-H. pylori présents dans leséchantillons se lient à l’antigène. Les anticorps non spécifiques et autresprotéines sériques sont éliminés par les lavages pratiqués à la fin del’incubation. Le conjugué, anticorps monoclonal spécifique des chaînesgamma humaines marqué à la peroxydase, est alors ajouté dans toutesles cupules de la microplaque.

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Durant la deuxième incubation, l’anticorps marqué vient se lier aux IgGsériques ayant réagi avec l’antigène H. pylori. Le conjugué non lié estéliminé par les lavages pratiqués à la fin de l’incubation. La présence ducomplexe immun est révélée par l’addition dans chaque cupule d’unesolution de révélation enzymatique. La réaction enzymatique est arrêtéepar l’addition d’une solution d’acide. La densité optique obtenue à450/620 nm est proportionnelle à la quantité d’IgG anti-H. pylori présentedans l’échantillon testé.

3- COMPOSITION DE LA TROUSSESe reporter aux indications données sur l’étiquette-boîte concernant lesconditions de stockage et la date d’expiration de la trousse.

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Etiquetage Nature des réactifs Présentation

R1 MicroplateMicroplaque : 12 barrettes de 8 cupulessensibilisées avec l'antigène H. pylori sous sachet fermé.

1

R2Concentrated

WashingSolution

Solution de lavage concentrée (10 x) : TamponTris NaCl, pH 7,4, 1% Tween® 20. Conservateur : 0,01% Thimerosal.

1 x 100 ml

R3NegativeControl

Sérum de contrôle négatif (humain) :Conservateur : < 0,1% d’azoture de sodium

1 x 1 ml

R4Cut-offControl

Sérum de contrôle Valeur Seuil (humain) :Conservateur : < 0,1% d’azoture de sodium

1 x 1 ml

R5PositiveControl

Sérum de contrôle positif (humain) :Conservateur : < 0,1% d’azoture de sodium

1 x 1 ml

R6SampleDiluent

Diluant des échantillons :Conservateur : 0,01% Thimerosal

1 x 110 ml

R7aConjugate

(40x)

Conjugué concentré (40x) : Anticorpsmonoclonal d’origine murine anti-chaînes gamma humaines couplé à la peroxydase Conservateur : 0,01% Thimerosal

1 x 0,45 ml

R7bConjugate

DiluentDiluant du conjugué : Conservateur : 0,01%Thimerosal

1 x 12 ml

R8TMB

SubstrateBuffer

Tampon substrat TMB (prêt-à-l’emploi) :Solution d’acide citrique et d’acétate de sodium,pH 5,2 contenant 0,009% d’H2O2 et 4% deDMSO.

1 x 60 ml

4- PRECAUTIONS D’UTILISATIONLa qualité des résultats dépend du respect des bonnes pratiques delaboratoire suivantes :• Ne pas utiliser les réactifs après la date d'expiration.• Ne pas mélanger, ni associer au cours d’une même série, des réactifs

provenant de trousses portant des numéros de lots différents.• Il est possible d’utiliser d’autres lots de solution de lavage (R2) que celui

fourni dans la trousse, sous réserve d’utiliser un seul et même lot aucours d’un même essai.

• Reconstituer ou diluer soigneusement les réactifs en évitant toutecontamination.

• Ne pas réaliser le test en présence de vapeurs réactives (acides,alcalines, aldéhydes) ou de poussières qui pourraient altérer l’activitéenzymatique du conjugué.

• La réaction enzymatique est très sensible à tous métaux ou ionsmétalliques. Par conséquent, aucun élément métallique ne doit entreren contact avec les différentes solutions contenant le conjugué ou lasolution substrat.

• La solution de révélation (tampon substrat + chromogène) doit êtreincolore. L’apparition d’une coloration bleue dans les minutes suivant lareconstitution indique que le réactif est inutilisable et doit être remplacé.Pour cette préparation, utiliser de préférence des récipients et dumatériel de distribution en plastique à usage unique ou de la verreriepréalablement lavée à l’acide chlorhydrique 1N, rincée à l’eau distillée etséchée. Conserver cette solution à l’abri de la lumière.

• Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque sérum.• Le lavage des cupules est une étape essentielle de la manipulation:

respecter le nombre de cycles de lavage prescrits, et s’assurer quetoutes les cupules sont complètement remplies, puis, complètementvidées. Un mauvais lavage peut entraîner des résultats incorrects.

• Ne pas laisser la microplaque sécher entre la fin du lavage et ladistribution des réactifs.

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Label Reagents Quantity

R9Chromogen:

TMBSolution

Chromogène : Solution de TMB/DMSO 90 %,contenant 0,6% de tétraméthylbenzidine (TMB)

1 x 1 ml

R10StoppingSolution

Solution d’arrêt (prête-à-l’emploi) : Solutiond’acide sulfurique 1,5N

1 x 12 ml

Films adhésifs 4

• Ne jamais utiliser le même récipient pour distribuer le conjugué et lasolution de révélation.

• Vérifier l’exactitude des pipettes et le bon fonctionnement des appareilsutilisés.

CONSIGNES D’HYGIENE ET SECURITE• Porter des gants à usage unique lors de la manipulation des réactifs.• Ne pas pipeter à la bouche.• Le matériel d’origine humaine utilisé dans la préparation des réactifs,

ont été testés et trouvés non-réactifs en antigène de surface du virus del’hépatite B (Ag HBs), en anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C(anti-HCV), en anticorps dirigés contre le virus de l’immunodéficiencehumaine (anti-HIV1 et anti-HIV2). Du fait qu’aucune méthode ne peutgarantir de façon absolue l’absence d’agents infectieux, considérer lesréactifs d’origine humaine, ainsi que tous les échantillons de patients,comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les précautionsd’usage.

• Considérer le matériel directement en contact avec les échantillons etles réactifs d’origine humaine, ainsi que les solutions de lavage commedes produits contaminés.

• Eviter les éclaboussures d’échantillons ou de solution les contenant.• Les surfaces souillées seront nettoyées par de l’eau de javel diluée à

10%. Si le liquide contaminant est un acide, les surfaces souilléesseront neutralisées au préalable avec du bicarbonate de soude, puisnettoyées avec de l’eau de javel et séchées avec du papier absorbant.Le matériel utilisé pour le nettoyage devra être jeté dans un conteneurspécial pour déchets contaminés.

• Les échantillons, les réactifs d’origine humaine ainsi que le matériel etles produits contaminés seront éliminés après décontamination.

• Ne pas introduire dans l’autoclave de solutions contenant del’hypochlorite de sodium.

• Eviter tout contact du tampon substrat, du chromogène et de lasolution d’arrêt avec la peau et les muqueuses (risques de toxicité,d'irritation et de brûlures).

ATTENTION :

Acide sulfurique (H2SO4) 1,5N et DMSO (dimethylsulfoxyde) 90 %R36/38 : Irritant pour les yeux et la peau.S26-30 : En cas de contact avec les yeux, laver immédiatementet abondamment avec de l'eau et consulter un spécialiste.Ne jamais verser de l’eau dans ce produit.

La fiche de données de sécurité est disponible sur demande.19

Xi - Irritant

5- ECHANTILLONS1. Les tests sont effectués sur des échantillons de sérum prélevé sur tube

sec uniquement2. Respecter les consignes suivantes pour le prélèvement, le traitement et

la conservation de ces échantillons :- Prélever un échantillon de sang selon les pratiques en usage.- Laisser le caillot se former complètement avant centrifugation.- Conserver les tubes fermés- Après centrifugation, extraire le sérum et le conserver en tube fermé.- Les échantillons seront conservés à +2-8°C si le test est effectué

dans les 24 heures.- Si le test n’est pas effectué dans les 24 heures, ou, pour tout envoi,

les échantillons seront congelés à -20°C (ou plus froid).- De préférence, congeler / décongeler les échantillons une fois

seulement. Les échantillons devront être soigneusementhomogénéisés (vortex) après décongélation avant le test.

3. Les résultats ne sont pas affectés par les échantillons contenant 90 g/ld’albumine ou 100 mg/l de bilirubine, les échantillons lipémiquescontenant l’équivalent de 30 g/l de trioleine (triglycéride) ou leséchantillons hémolysés contenant 10 g/l d’hémoglobine.

4. Ne pas chauffer les échantillons.

6- MODE OPERATOIRE6 .1 - MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI

• Agitateur type vortex.• Appareil de lecture* pour microplaques (équipés de filtres 450/620nm).• Bain-marie, ou incubateur sec*, pouvant être thermostaté à 37±1°C.• Système de lavage, automatique*, semi-automatique* ou manuel pour

microplaque.• Conteneur de déchets contaminés.• Hypochlorite de sodium (eau de javel) et bicarbonate de soude.• Eau distillée ou désionisée stérile.• Eprouvettes graduées de 25, 50, 100 et 1 000 ml.• Gants à usage unique.• Lunettes de protection.• Papier absorbant.• Pipettes, multipipettes, automatiques ou semi-automatiques, réglables

ou fixes pouvant distribuer de 10 à 1000µl et 1, 2 et 10 ml• Tubes à usage unique.

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(*) Nous consulter pour une information précise concernant les appareilsvalidés par nos services techniques.

6.2 - RECONSTITUTION DES RÉACTIFS

R1 : Couper le sachet à l’aide de ciseaux ou scalpel 0,5 à 1 cm au-dessusdu ZIP. Replacer immédiatement dans le sachet les barrettes non utilisées.Vérifier la présence du dispositif dessicant. Refermer soigneusement le sachetet le replacer à +2-8°C.

R2 : Diluer 10 fois la solution dans l’eau distillée. Prévoir environ 350 mlpour une plaque de 12 barrettes pour un lavage manuel.

R7 : Préparer extemporanément la quantité de conjugué nécessaire à laréalisation d’une série en diluant un volume de conjugué concentré 40x(R7a, de couleur bleue) dans 40 volumes de diluant pour conjugué (R7b,de couleur rouge). Le conjugué obtenu est de couleur violette (contient dumerthiolate de sodium à 0,01% maximum)

R9 : Diluer 50 fois la solution dans le tampon substrat R8 (ex : 200µl deréactif R9 + 10 ml de réactif R8). Préparer 4 ml de réactif par barrette.

6.3 - CONSERVATION DES REACTIFS OUVERTS ET/OU RECONSTITUES

R1 : après ouverture, les barrettes conservées dans le sachet bien refermésont stables pendant 6 semaines à +2-8°C (vérifier la présence du dessicant).

R2 : après dilution, la solution de lavage se conserve 2 semaines à +2-8°C.Après ouverture, la solution de lavage concentrée conservée à +2-25°C,en absence de contamination microbienne est stable jusqu’à la date depéremption indiquée sur l’étiquette.

R3, R4, R5, R7a et R7b : après ouverture, les sérums de contrôle R3, R4,R5, le conjugué R7a et son diluant R7b conservés dans leur flacond’origine soigneusement rebouché sont stables pendant 6 semaines à +2-8°C.

R7 : après reprise, la solution de travail du conjugué se conserve 2 heures àtempérature ambiante (+18-30°C).

R9 : après dilution dans le R8, les réactifs conservés à l’obscurité sontstables pendant 6 heures à température ambiante (+18-30°C).

R6, R8, R9 et R10 : après ouverture, les réactifs conservés à +2-8°C enabsence de contamination microbienne, sont stables jusqu’à la date depéremption indiquée sur l’étiquette.

6.4 - PROCEDURESuivre strictement le protocole proposé.Utiliser les sérums de contrôle à chaque mise en œuvre du test pourvalider la qualité du test.

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Avant utilisation, laisser tous les réactifs atteindre la température ambiante(+18-30°C).1) Etablir soigneusement le plan de distribution des échantillons en

prévoyant un puits pour le sérum de contrôle négatif (R3), 3 puits pourle sérum seuil (R4) et un puits pour le sérum positif (R5).

2) Préparer la solution de lavage diluée (R2) (se référer au chapitre 6.2).3) Sortir le cadre support et les barrettes (R1) de l’emballage protecteur. 4) Diluer les échantillons à tester et les étalons au 1/101è dans la solution

R6 (10µl de sérum + 1 ml Diluant R6). Pour le sérum de contrôle seuilR4, 3 dilutions au 1/101ème doivent être réalisées dans 3 tubesdifférents (10µl dans 1 ml de R6), chaque tube correspondant à undépôt sur la plaque. Bien homogénéiser (vortex)

5) Pour une utilisation manuelle du test, distribuer 100µl des contrôlesdilués au 1/101 (R3, R4, R5) et des échantillons dilués au 1/101 (S1, S2,etc.) dans les cupules comme suggéré ci-dessous :

6) Couvrir la microplaque d’un film adhésif en appuyant bien sur toute lasurface pour assurer l’étanchéité. Puis, incuber la microplaque au bain-marie thermostaté ou dans un incubateur sec de microplaques pendant30 minutes à 37°C.

7) Avant la fin de la première incubation, préparer la solution de conjugué(R7) à diluer au 1/40 : diluer 25µl de R7a (de couleur bleue) dans 1 ml deR7b (de couleur rouge) (volume pour une barrette) (se référer auchapitre 6.2). Bien homogénéiser.

8) A la fin de la première incubation, retirer le film adhésif, aspirer le contenude toutes les cupules dans un conteneur pour déchets contaminés(contenant de l’hypochlorite de sodium) et procéder à 3 lavages. Sécherla plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant.

9) Distribuer 100µl de la solution de conjugué (R7) dans toutes lescupules. Cette solution doit être agitée avant emploi.

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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A R3 S4

B R4 S5

C R4 S6

D R4 S7

E R5 S8

F S1 S9

G S2 S10

H S3 S11

10) Couvrir la microplaque d’un film adhésif neuf en appuyant bien surtoute la surface pour assurer l’étanchéité. Puis, incuber la microplaqueau bain-marie thermostaté ou dans un incubateur sec de microplaques30 minutes à 37°C.

11) A la fin de la deuxième incubation, retirer le film adhésif, aspirer lecontenu de toutes les cupules dans un conteneur pour déchetscontaminés et procéder à 4 lavages. Sécher la plaque par retournementsur une feuille de papier absorbant.

12) Préparer la solution de révélation enzymatique (R9 dilué au 1/50émedans du R8) (se référer au chapitre 6.2). En distribuer rapidement 200µldans toutes les cupules. Laisser la réaction se dérouler à l’obscuritépendant 30 minutes à température ambiante (+18-30°C). Lors de cetteincubation, ne pas utiliser de film adhésif.

13) Ajouter 100µl de solution d’arrêt (R10) dans chaque cupule. Adopter lamême séquence et le même rythme de distribution que pour la solutionde révélation.

14) Essuyer soigneusement le dessous des plaques. Lire la densité optiqueà 450/620 nm à l’aide d’un lecteur de plaques dans les 30 minutes quisuivent l’arrêt de la réaction (les barrettes doivent toujours êtreconservées à l’abri de la lumière avant la lecture).

15) S’assurer avant la transcription des résultats, de la concordance entrela lecture et le plan de distribution et d’identification des plaques et deséchantillons.

7- CALCUL ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

7.1 – CONTROLE DE QUALITE

Utiliser les contrôles sur chaque microplaque pour chaque essai. Pourvalider la manipulation, les critères suivants doivent être respectés :

• Valeurs des densités optiques :- DO R4 ≥ 0,500 - DO R4 ≤ 1,100

• Rapports :- DO R3 / moyenne des DO R4 ≤ 0,250- DO R5 / moyenne des DO R4 ≥ 1,500

Si ces spécifications ne sont pas respectées, recommencer la manipulation.

7.2 – CALCUL DE LA VALEUR SEUIL (VS)

VS = moyenne des DO R4.La valeur seuil (VS) est égale à la moyenne des absorbances (DO) descupules contenant le sérum seuil R4. Si un point est aberrant, à savoir :DO R4 ≤ 0,500 ou DO R4 ≥ 1,100, il faut l’éliminer pour ce calcul.

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7.3 – CALCUL DU RATIO DES ECHANTILLONS

Ratio de l’échantillon = DO de l’échantillon / VS (moyenne des DO R4)

7.4 – INTERPRETATION DES RESULTATS

Afin de se placer dans les meilleures conditions de sensibilité, il estconseillé d'adopter un seuil de positivité plus bas chez l'enfant.

7.5 – EXPERTISE DES CAUSES D’ERREURS

L’origine des réactions non validées ou non reproductibles est souvent enrelation avec les causes suivantes:• Lavage insuffisant des microplaques• Contamination des échantillons négatifs par un sérum contenant un titre

élevé d’anticorps.• Contamination ponctuelle de la solution de révélation par des agents

chimiques oxydants (eau de javel, ions métalliques...)• Contamination ponctuelle de la solution d’arrêt.

8- LIMITES DU TEST RESULTAT NEGATIF : cela indique une absence d'infection; cependant,à la phase précoce d’une infection, le titre en anticorps peut être inférieurà la valeur seuil du test et le résultat trouvé négatif. En cas de suspiciond'infection récente, il est recommandé de réaliser un second prélèvementà deux ou trois semaines plus tard et d’analyser les deux échantillonsdans la même série. Une augmentation du taux des IgG spécifiques peutalors signer l’infection.

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RatioAdultes

RatioEnfants

Résultat Interprétation

> 1,10 ≥ 0,90 PositifPrésence d'anticorps à taux significatifcompatible avec une infection à H. pylori

≤ 1,10≥ 0,90

< 0,90≥ 0,80

Douteux

Taux d'anticorps non significatif. En cas de présomption d'infection récente,il est préférable de réaliser un 2èmeprélèvement distant de 2 ou 3 semaines,les 2 sérums devant être testés dans unemême série.

< 0,90 < 0,80 Négatif

Absence d'argument immunologique enfaveur d'une infection à H. pylori. En cas deprésomption d'infection récente, il estpréférable de réaliser un 2ème prélèvementdistant de 2 ou 3 semaines, les 2 sérumsdevant être testés dans une même série.

Si le résultat sur sérums appariés n'est pas concluant, prélever unéchantillon supplémentaire et le tester à nouveau avec les échantillonsprécédents.

RESULTAT POSITIF : ce test ne permet pas de différencier une infectionancienne d'une infection active, le résultat doit être interprété en fonctiondu contexte clinique. Un ensemble de données cliniques et biologiquespermettant le diagnostic d'une infection récente, le résultat de ce seul testne constitue pas une épreuve suffisante pour le diagnostic d’une infectionrécente. A noter qu’il n'existe pas de corrélation entre le titre d'anticorpsexprimé en ratio et la sévérité des manifestations cliniques.

9- PERFORMANCES

9.1 – SENSIBILITE - SPECIFICITE

Des essais cliniques du test Platelia™ H. pylori ont été réalisés sur2 populations de sérums provenant de patients dyspeptiques. Pour chaquepatient, une biopsie a été réalisée parallèlement au prélèvement sanguin. Lasensibillité et la spécificité du test ont été calculées en prenant commeréférence le résultat de l’analyse microbiologique et histologique de labiopsie : la présence du micro-organisme en culture et/ou enanatomopathologie et/ou le test à l’uréase positif indiquent que le patientest positif. Lorsque ces 3 analyses sont négatives, le patient est négatif.

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RésultatsPOPULATION ADULTE

(âge 44±15 ans)POPULATION ENFANT

(âge 9 ± 4,7ans)

Nombre de sérums 92 (31Hp-; 61 Hp+) 160 (106 Hp-; 54 Hp+)

Sensibilité 100,0 % (61/61) 98,1 % (51/52)

Spécificité 90,0 % (27/30) 89,3 % (92/103)

VPP 95,3 % (61/64) 82,2 % (51/62)

VPN 100,0 % (27/27) 98,9 % (92/93)

Sérologies intermédiaires 1,1 % (1/92) 3,1 % (5/160)

9.2 - PRECISION

Etude de répétabilité (intra-essai)8 sérums ont été testés en 10 répliques : 4 sérums positifs (P1, P2, P3 etle sérum de contrôle positif de la trousse R5) et 4 sérums négatifs (N1, N2,N3 et le sérum de contrôle négatif de la trousse R3).

Etude de reproductibilité (inter-essai)4 sérums positifs (P1, P2, P3 et le sérum de contrôle positif de la trousseR5) et 8 sérums négatifs (N1, N2, N3, N4, N5, N6, N7 et le sérum decontrôle négatif de la trousse R3) ont été testés en quintuplets dans5 séries distinctes réalisées à des jours différents.

26

Sérums Moyenne des ratios CV

P1P2P3R5

1,422,471,912,03

4,0 %4,4 %5,2 %3,9 %

N1N2N3R3

0,430,150,210,08

3,3 %3,8 %3,7 %9,7 %

SérumsMoyenne des

ratiosDS CV

P1P2P3R5

2,642,002,382,16

0,1610,0670,0740,097

6,1 %3,4 %3,1 %4,5 %

N1N2N3N4N5N6N7R3

0,100,210,390,100,050,130,120,08

0,0040,0040,0120,0050,0040,0080,0040,004

3,6 %1,8 %3,1 %5,2 %7,6 %6,3 %3,6 %5,2 %

9.3 – REACTIVITE CROISEE

L'antigène utilisé dans la trousse provient d'une souche dépourvue de toutestructure flagellaire (5) afin d'éviter les réactions croisées possibles avecd'autres micro-organismes flagellés (exemple : Campylobacter jejuni).

10-CONTROLE QUALITE DU FABRICANTTous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sontplacés sous un système d'assurance qualité de la réception des matièrespremières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot deproduit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé ques'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à laproduction et au contrôle de chaque lot est conservée par le fabricant.

11-REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES1. Blaser M.J., 1992. Hypothesis on the pathogenesis and natural history

of Helicobacter pylori-induced inflammation. Gastroenterology, 102 :720-727.

2. Vincent P., 1993. Epidémiologie de l’infection à Helicobacter pylori. LaLettre de l’infectiologue : VIII, 184-189.

3. De Korwin JD. Les pathologies associées à l'infection par Helicobacterpylori. Ann. Inst. Pasteur/actualités, 1995, 2 : 192-198

4. Patchett S., Beattle S., Leen C., Keane C., O’Morain C. , 1992.Helicobacter and duodenal ulcer recurrence. Am. J. Gastr., 87 :1-7.

5. Widmer M., de Korwin JD, Aucher P., Thiberge J.M., Labigne A.,Fauchère JL, 1996. Performances of native and recombinant antigensfor Helicobacter pylori serology. Gut, suppl.2, 39, A117.

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7. Newell D.G., 1987. Identification of the outer membrane proteins ofC. pyloridis and antigenic cross-reactivity between C. pyloridis andC. jejuni. J. Gen. Microbiol., 133 : 163-170.

8. Warren JR & Marshall BJ ,1983. Unidentified curved Bacilli on gastricepithelium in active gastritis. Lancet, i : 1273-1275

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7070

7171

Bio-Rad3, boulevard Raymond Poincaré92430 Marnes-la-Coquette FranceTel. : +33 (0) 1 47 95 60 00 04/2009Fax.: +33 (0) 1 47 41 91 33 code: 881049