PLATELIA™ DENGUE IgG CAPTURE 1 plaque - 96 72832 Test immuno-enzymatique par immunocapture pour la détection qualitative des taux élevés des anticorps IgG spécifiques de la dengue dans le sérum ou le plasma humain, pour une aide au diagnostic d’une infection secondaire de la dengue.

881100 – 2013/11

1. UTILISATION PREVUE

Platelia™ Dengue IgG Capture est un test sur microplaque de type immuno-capture pour la détection qualitative des taux élevés des IgG spécifiques du virus de la dengue dans le sérum ou le plasma humain. Le test est prévu pour aider au diagnostic des patients présentant des symptômes cliniques compatibles avec une infection secondaire de la dengue.

2. RESUME ET EXPLICATION DU TEST

L’infection par le virus de la dengue peut se présenter sous différents tableaux cliniques, allant d’une infection asymptomatique ou une fièvre indifférenciée, à la dengue fébrile (DF), ou aux formes plus sévères et potentiellement mortelles que sont la dengue hémorragique (DHF) et la dengue avec syndrome de choc (DSS) potentiellement fatale. La différenciation entre des épisodes d'infection primaire et secondaire est importante pour un accompagnement optimal des patients, étant donné qu'il est maintenant bien connu1, 2 que l'infection secondaire par un nouveau sérotype peut induire des conséquences plus sévères (notamment une DHF ou un SSD)3 en comparaison d'une infection primaire. Lors d’une infection secondaire, le taux d’anticorps augmente rapidement et réagissent contre plusieurs flavivirus de la dengue. L’isotope dominant d’immunoglobuline IgG est détecté à des taux élevés, même en phase aigüe, et persiste pendant des périodes allant de 10 mois à toute la vie.1

La détection des taux élevés d’anticorps IgG spécifiques du virus de la dengue par dosage immunologique est un outil utile de diagnostic pour l'identification des cas de dengue secondaire le plus souvent associée à des complications sévères5. Platelia ™ Dengue IgG Capture est un test immuno-capture conçu pour détecter les taux élevés d’IgG spécifiques de la Dengue. Ce test ne détecte pas de faible taux d’IgG anti-dengue résiduel lié à 'une infection passée. Platelia ™ Dengue IgG Capture est conçue pour détecter les IgG anti- NS1 utiles pour différencier les infections primaires des infections secondaires6

par le virus de la dengue,7. L'association des trousses Bio-Rad Platelia™ Dengue IgG Capture, Platelia™ Dengue NS1 Ag et Platelia™ Dengue IgA Capture apporte des informations complémentaires pouvant aider dans le cas d'un taux élevé d’IgG spécifiques de la dengue à orienter le diagnostic vers une infection secondaire.

3. PRINCIPE DU TEST

Platelia™ Dengue IgG Capture est un dosage qualitatif immuno-enzymatique réalisé en deux étapes. Durant la première étape, les anticorps IgG présents dans le sérum ou le plasma du patient sont capturés par un anticorps anti-IgG humain fixé sur la microplaque. Après une première série de lavage destinée à éliminer l'excès d'anticorps non fixés, un conjugué composé d’antigène NS1 et d’anticorps monoclonal anti-NS1 couplé à la peroxydase est ajouté Durant cette deuxième étape, un complexe immun anti-IgG / IgG - NS1 Ag - MAb anti-NS1/POD se forme et reste immobilisé au fond du puits. Après une seconde série de lavages, un réactif chromogène contenant le substrat de la peroxydase est ajouté et incubé à température ambiante, permettant ainsi de révéler la présence des complexes immuns. La réaction enzymatique est arrêtée par ajout d’une solution d’acide sulfurique 1N. La lecture de la densité optique se fait à l'aide d'un spectromètre à 450/620 nm.

4. REACTIFS

Les réactifs sont fournis en quantités suffisantes pour réaliser 96 déterminations. Tous les réactifs sont destinés à l’usage exclusif du diagnostic in vitro et doivent être conservés à +2-8°C.

4.1. Description

Etiquetage Description Presentation / preparation

72832

R1 Microplate Microplaque 12 barrettes de 8 puits sécables sensibilisés par des anticorps monoclonaux dirigés contre les IgG humaines

1 plaque Prête à l'emploi

R2 Concentrated

washing solution (20X)

Solution de lavage concentrée (20X) Tris NaCl Buffer, pH 7.4, 2%Tween® 20 Conservateur : Proclin™ 300 (0;04%)

1 flacon 70 ml

A diluer

R3 Negative control

Contrôle Négatif Sérum humain négatif en IgG spécifiques de la Dengue. Tris NaCl Buffer, pH 8, 0.1% Tween® 20 Conservateur : Proclin™ 300 (< 0,15%)

1 flacon 2,5 ml

Prêt à l'emploi

R4 Calibrator

Calibrateur Sérum humain positif en IgG spécifiques de la Dengue. Tris NaCl Buffer, pH 8, 0.1% Tween® 20 Conservateur : Proclin™ 300 (< 0,15%)

2 flacons 2 x 2,5 ml

Prêt à l'emploi

R5 Positive control

Contrôle PositifSérum humain positif en IgG spécifiques de la Dengue. Tris NaCl Buffer, pH 8, 0.1% Tween® 20 Conservateur : Proclin™ 300 (< 0,15%)

1 flacon 2,5 ml

Prêt à l'emploi

R6 Conjugate solution

(100X)

Solution de conjugué (100X)Antigène Dengue NS1 inactivé couplé à un anticorps monoclonal IgG anti-NS1 marqué à la peroxydase. Sérum albumine bovine, 0.1% Tween® 20 Conservateur : Proclin™ 300 (<0,15%)

1 flacon 0,30 ml A diluer

R7 Diluent

Diluant Tampon TRIS-NaCl (pH 8,0), 0,1% Tween® 20, Sérum albumine bovine, sérum humain. Conservateur : Proclin™ 300 (< 0,15%)

2 flacons 2 x 80 ml

Prêt à l'emploi

R9 Chromogen TMB Chromogène 3.3’.5.5’ tetramethylbenzidine (TMB)

1 flacon 28 ml

Prêt à l'emploi

R10 Stopping solution Solution d'Arrêt Solution d'acide sulfurique (H2SO4 1N)

1 flacon 28 ml

Prêt à l'emploi

4.2. Conservation et reconstitution des réactifs

Le coffret doit être conservé à +2-8°C. Les réactifs peuvent être utilisés jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette externe du coffret (sauf indication contraire).

Identification Conservation

R1 Dans le sachet correctement fermé, 8 semaines à +2-8°C (vérifier la présence du sachet dessicant).

R2 Avant dilution: jusqu'à la date de péremption figurant sur l'étiquette à +2-30°C et en l'absence de toute contamination. Après dilution : 2 semaines à +2-30°C.

R3, R4, R5, R7 Après ouverture, 8 semaines à +2-8°C et en l'absence de toute contamination.

R6 Après ouverture, 8 semaines à +2-8°C et en l'absence de toute contamination. Après dilution, 8 heures à température ambiante (+18-30°C) ou jusqu'à 24 heures à +2-8°C

R9, R10 Après ouverture : jusqu'à la date de péremption figurant sur l'étiquette à +2-8°C et en l'absence de toute contamination

5. AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS

Pour usage diagnostic in vitro uniquement. Pour utilisation professionnelle uniquement. 5.1. Précautions relatives à la santé et à la sécurité

Ce test ne doit être manipulé que par du personnel de laboratoire qualifié, formé aux procédures et averti de leurs dangers potentiels. Porter les vêtements, gants et lunettes de protection adéquates et manipuler selon les bonnes pratiques de laboratoire en place.

Ne pas pipeter à la bouche. Ne pas manger, boire ou fumer pendant la manipulation du test et des échantillons. Le coffret contient des produits dérivés de sang humain. Aucune méthode ne pouvant garantir de façon absolue

l’absence d’agents infectieux, considérer les dérivés de sang humain, les réactifs ainsi que tous les échantillons de patients comme potentiellement infectieux et les manipuler avec les précautions d’usage conformément aux précautions universelles relatives à la transmission des agents pathogènes telles que définies par les réglementations locales, régionales et nationales.

Toute éclaboussure de matériel d’origine humaine, doit être considérée comme potentiellement infectieuse. Les éclaboussures ne contenant pas d’acide doivent être immédiatement décontaminées (en incluant la zone souillée, le

matériel et toute surface ou tout équipement contaminé) avec un désinfectant chimique approprié efficace sur les risques biologiques potentiels liés aux échantillons impliqués (le plus souvent de l’eau de Javel diluée à 10%, de l’éthanol à 70% ou Wescodyne Plus™ 0,5%), puis séchées.

Les éclaboussures contenant un acide doivent être correctement absorbées (essuyées) ou neutralisées, la zone souillée rincée à l’eau et séchée. Le matériel utilisé pour le nettoyage doit être jeté dans un conteneur spécial pour déchets contaminés. La partie souillée doit ensuite être décontaminée avec un désinfectant chimique.

NOTE : Ne pas introduire dans l’autoclave de solutions contenant de l’hypochlorite de sodium. Eliminer tous les échantillons et le matériel utilisés pour la réalisation du test comme tout déchet potentiellement

infectieux. Les déchets de laboratoire chimiques ou potentiellement dangereux doivent être manipulés et éliminés en accord avec la législation locale, régionale ou nationale.

Concernant les risques et les conseils de sécurité relatifs à certains composants chimiques de cette trousse, se référer au pictogramme(s) mentionné(s) sur les étiquettes et aux informations fournies à la fin de la notice. La Fiche de Données de Sécurité est disponible sur www.bio-rad.com.

5.2. Précautions relatives au protocole

5.2.1. Préparation

Avant utilisation, attendre 30 minutes que les réactifs s’équilibrent à la température ambiante (+18-30°C). Ne pas utiliser de réactifs après la date de péremption. Reconstituer ou diluer soigneusement les réactifs en évitant toute contamination. Ne pas mélanger ou associer de réactifs de lots différents au cours d'une même série. Les Diluants (R7) des coffrets Platelia™ Dengue IgG Capture et Platelia™ Dengue IgA Capture (réf. 72831) peuvent

être indifféremment utilisés sans impact sur la qualité des résultats.

REMARQUE : Il est possible d’utiliser d’autres lots de Solution de Lavage (R2 identifié 20x en vert), de Chromogène (R9 identifié TMB en turquoise) et de Solution d’Arrêt (R10 identifié 1N en rouge) que ceux fournis avec la trousse, sous réserve d’utiliser des réactifs strictement équivalents d’un seul et même lot au cours d’une même série.

5.2.2. Manipulation

Ne pas modifier le protocole opératoire. Ne pas réaliser le test en présence de vapeurs réactives (acides, alcalines, aldéhydes) ou de poussières qui pourraient

altérer l’activité enzymatique du conjugué. Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque échantillon. Le lavage des cupules est une étape essentielle de la manipulation. Respecter le nombre de lavages prescrits et

s’assurer que toutes les cupules sont complètement remplies, puis complètement vidées. Un mauvais lavage peut entraîner des résultats incorrects.

Suivre attentivement les procédures de lavage afin d'obtenir des performances optimales. Selon les instruments utilisés, il pourrait être nécessaire d'optimiser la procédure de lavage (augmentation du nombre de cycles de lavage et/ou de la solution de lavage pour chaque cycle) pour avoir un "bruit de fond" acceptable lors de la mesure de la Densité Optique du contrôle négatif.

Conserver les réactifs dans les conditions recommandées. Ne pas congeler les réactifs. Tester les Contrôles et le Calibrateur dans chaque série. Utiliser de préférence du matériel à usage unique. A défaut, utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l’eau

distillée. Ne pas laisser la plaque s’assécher entre la fin des lavages et la distribution des réactifs. Ne jamais utiliser le même récipient pour distribuer le Conjugué et la solution Chromogène. La réaction enzymatique est très sensible à tous les métaux ou ions métalliques. Par conséquent, aucun élément

métallique ne doit entrer en contact avec les différentes solutions contenant le Conjugué ou la solution Chromogène. La solution Chromogène TMB (R9) doit être incolore ou légèrement jaune. L’apparition d’une coloration bleue indique

que le réactif est inutilisable et doit être remplacé. La solution Chromogène TMB doit être conservée et incubée à l’abri de toute lumière vive. Ne pas mettre la solution

Chromogène TMB en contact avec tout agent oxydant. Ne pas mettre la Solution d’Arrêt en contact avec tout agent oxydant, métal ou ion métallique. Ne pas verser dans le contenant d'origine la solution conjuguée inutilisée Vérifier l’exactitude des pipettes et le bon fonctionnement des appareils utilisés. S’assurer de bien recouvrir la microplaque avec un film adhésif lors de chaque étape d’incubation à 37°C.

6. ECHANTILLONS

Les échantillons de sérum et de plasma (EDTA, héparine ou citrate) peuvent être testés. Suivre les recommandations de manipulation, traitement et conservation des échantillons de sang suivantes : Prélever les échantillons sanguins conformément aux pratiques en usage. Pour les prélèvements de sérum, laisser le caillot se former complètement avant centrifugation. Conserver les tubes fermés. Après centrifugation, séparer le sérum ou le plasma du caillot ou des globules rouges et le conserver en tube fermé. Les échantillons de sérum ou de plasma peuvent être conservés jusqu’à 7 jours à +2-8°C. Si les échantillons ne sont

pas utilisés dans les 7 jours ou en cas de transport, ils peuvent être congelés à -20°C ou plus froid. Ne pas utiliser d’échantillons ayant subi plus de 3 cycles de congélation/décongélation. Avant d’être testés,

homogénéiser soigneusement les échantillons après décongélation (vortex). Les échantillons contenant jusqu’à 2g/l d’hémoglobine, 300mg/ml de conjugué bilirubine, 200 mg/ml de non conjugué bilirubine, 5g/l de cholestérol, 60 g/l de sérum albumine, 30g/l de trioléine et 120g/l de protéines totale ne doivent pas affecter les résultats. Cependant, il n’est pas recommandé d’utiliser des échantillons hyperlipemic, hyperhémolysé et hypergamma-globulinemic contaminés. Ne pas chauffer les échantillons. Si les échantillons doivent être expédiés, ils doivent être empaquetés en accord avec les autorités en ce qui concerne le

transport des agents étiologiques et préférentiellement par transport réfrigéré.

7. PROCEDURE

7.1. Matériel nécessaire mais non fourni

Eau distillée ou désionisée. Hypochlorite de sodium (eau de Javel) et bicarbonate de soude. Papier absorbant. Gants à usage unique. Lunettes de protection. Tubes à usage unique. Pipettes ou multi-pipettes, automatiques ou semi-automatiques, réglables ou fixes, pouvant mesurer de 10 µl à 1000 µl,

et 1 ml, 2 ml et 10 ml. Eprouvettes graduées de 1 000 ml. Système de lavage automatique, semi-automatique ou manuel pour microplaque (*). Incubateur pour microplaques thermostaté à 37 ± 1°C (*). Conteneur pour déchets contaminés. Agitateur de type Vortex. Lecteur de microplaque équipé de filtres à 450 nm et 620 nm (*). (*) Consulter Bio-Rad pour une information précise concernant les appareils validés par nos services techniques.

7.2. Préparation des réactifs

7.2.1. Réactifs à reconstituer

Réactif 2 (R2) : Solution de lavage concentrée (20X) Diluer au 1/20 la Solution de Lavage (R2) avec de l’eau distillée : par exemple 50 ml de R2 dans 950 ml d’eau désionisée pour obtenir la solution de lavage prête à l’emploi.

Réactif 6 (R6) : Solution de conjugué (100X) Diluer au 1/100 la Solution Conjugué avec le Diluant (R7) : par exemple, 100 µl de R6 dans 9,9 ml de R7. La solution Conjugué de travail doit être reconstituée approximativement 1 heure avant utilisation à température ambiante.

7.3. Protocole opératoire

Suivre strictement le protocole proposé et se conformer aux bonnes pratiques de laboratoire. Utiliser tous les contrôles et Calibrateur à chaque série pour valider les résultats et calculer la valeur seuil.

1. Etablir soigneusement le plan de distribution et d’identification des Contrôles, Calibrateur et échantillons de patients. 2. Préparer la Solution de Lavage diluée (R2) [se référer à la Section 7.2] 3. Sortir le cadre support et les barrettes (R1) de l’emballage protecteur. 4. Tous les échantillons, Contrôles et Calibrateur doivent être vortexés avant utilisation.

Diluer tous les échantillons de patient au 1:101 dans le Diluant R7 (par exemple, en ajoutant 5 µl d’échantillon à 500 µl de Diluant (R7)). Ne pas diluer les Contrôles et le Calibrateur Homogénéiser soigneusement les échantillons dilués.

5. En suivant strictement la séquence suivante, distribuer : 200 μl du contrôle négatif (R3) dans le puits A1, 200 μl du calibrateur (R4) dans les puits B1, C1, 200 μl du contrôle positif (R5) dans le puits D1, 200 μl du premier échantillon dans le puits E1, 200 μl du second échantillon dans le puits F1, etc.

6. Reconstituer la Solution Conjugué de travail (R6) [se référer à la Section 7.2] 7. Couvrir la microplaque avec un couvercle ou un film de protection. Incuber immédiatement la microplaque dans un bain-

marie thermostaté ou un incubateur sec pendant 60 5 minutes à 37°C 2°C. 8. A la fin de l’incubation, retirer le couvercle ou le film protecteur. Aspirer le contenu de chaque puits dans un conteneur

pour déchets contaminés (contenant de l’hypochlorite de sodium). Eliminer tout liquide dans la plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant. Laver la microplaque 4 fois avec 350 µl de Solution de Lavage diluée (R2) en éliminant soigneusement tout liquide restant par retournement sur une feuille de papier absorbant après chaque lavage.

9. Distribuer immédiatement 200 µl de Solution Conjugué de travail (R6) dans chaque puits. Agiter doucement le réactif avant utilisation.

10. Couvrir la microplaque avec un couvercle ou un film de protection. Incuber immédiatement la microplaque dans un bain-marie thermostaté ou un incubateur sec pendant 60 5 minutes à 37°C 2°C.

11. A la fin de l’incubation, retirer le couvercle ou le film protecteur. Aspirer le contenu de chaque puits dans un conteneur pour déchets contaminés (contenant de l’hypochlorite de sodium). Eliminer tout liquide dans la plaque par retournement sur une feuille de papier absorbant. Laver la microplaque 4 fois avec 350 µl de solution de lavage diluée (R2) en éliminant soigneusement tout liquide restant par retournement sur une feuille de papier absorbant après chaque lavage.

12. Distribuer immédiatement et à l’abri de la lumière 200 µl de Chromogène TMB (R9) dans chaque puits. Laisser la réaction se développer à l’obscurité pendant 30 ± 5 minutes à température ambiante (+18-30°C). Ne pas utiliser de film adhésif au cours de cette incubation.

13. Arrêter la réaction enzymatique en ajoutant 100 µl de Solution d’Arrêt (R10) dans chaque puits. Adopter la même séquence et le même rythme de distribution que pour la solution de révélation.

14. Essuyer soigneusement le dessous de la plaque. Lire les densités optiques à 450/620 nm à l’aide d’un lecteur de microplaques dans les 30 minutes suivant l’arrêt de la réaction. La plaque doit être maintenue à l’abri de la lumière avant lecture.

15. Avant la transcription des résultats, s’assurer de la concordance entre la lecture et le plan de distribution des plaques et des échantillons.

7.4. Contrôle qualité

Inclure les Contrôles et Calibrateur sur chaque plaque et pour chaque série, et analyser les résultats obtenus selon les critères de validations définis [se référer à la Section 7.5]

7.5. Calcul et interprétation des résultats

7.5.1. Calcul de la Valeur Seuil (VS)

La valeur seuil (VS) correspond à la moyenne des densités optiques (DO) obtenue à partir des dupliquats du Calibrateur (R4).

7.5.2. Calcul du Ratio Echantillon

Ratio = DO Echantillon / VS

7.6. Interprétation des résultats

Ratio échantillon Résultat Interprétation

Ratio < 0.90 Négatif

Taux élevés d’IgG anti-Dengue non détectable. Pas de présomption d’infection secondaire par le virus de la Dengue. Des tests complémentaires d’infection aiguë de la Dengue (tel que le test Bio-Rad Platelia™ Dengue NS1 Ag et le test Platelia™ Dengue IgA Capture) peuvent être réalisés pour éliminer toute suspicion d’infection aiguë par le virus de la Dengue.

0.90 ≤ Ratio < 1,10 Douteux

Taux élevé d'IgG anti-Dengue ne peut être déterminé. Les échantillons doivent être retestés avec une méthode alternative afin de confirmer ou d’éliminer toute suspicion d’une infection secondaire de la Dengue ou le test peut être refait avec un autre échantillon collecté quelques jours plus tard.

Ratio ≥ 1,10 Positif

Détection de taux élevés d’anticorps IgG anti-Dengue. Suspicion d’infection secondaire. Présomption d’infection secondaire par le virus de la Dengue : récemment exposé ou en cours d’infection. Le Diagnostic doit inclure les symptômes cliniques et les données biologiques

7.7. Critères de validation du test

Les critères suivants doivent être respectés pour valider le test :

Critères de validation

R3 Ratio R3 = DO R3 / VS ≤ 0,15

R4 Moyenne DO ≥ 0.20

0,9 x VS< R4i < 1,1 x VS

R5 Ratio R5 = DO (R5) / VS 1,30

Si les critères de validation ci-dessus ne sont pas respectés, la série doit être répétée.

8. LIMITES DU TEST

Les échantillons obtenus très tôt lors de l'infection peuvent ne pas avoir un taux élevé d’anticorps IgG détectables. Il est recommandé d’utiliser le test Platelia™ Dengue IgA Capture et/ou Platelia™ Dengue NS1 Ag afin d’exclure toute suspicion d’infection aiguë par le virus de la Dengue.

Les échantillons tardifs provenant de patients présentant une infection primaire du virus de la Dengue peuvent avoir un taux élevé d’anticorps IgG détectables. Il est recommandé de tester les échantillons dans les 6 – 15 jours pour différencier une infection primaire d’une infection secondaire.

Le diagnostic définitif d’infection par le virus de la Dengue ne peut être fait sur un résultat isolé obtenu avec le test Platelia™ Dengue IgG Capture, mais doit prendre également en compte les symptômes et autres informations cliniques et biologiques.

Des réactions sérologiques croisées avec d’autres flavivirus (par ex : virus de la Fièvre Jaune, virus West Nile, virus de l’Encéphalite Japonaise) sont classiques. Une infection par ce type de virus doit être exclue avant confirmation du diagnostic de Dengue.

Les échantillons de sérum présentant des concentrations élevées de gamma-globulines peuvent entraîner des résultats faussement négatifs.

9. CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCES

9.1. Mesure de fidélité

Quatre échantillons ont été analysés 24 fois au cours de la même série pour l'étude de répétabilité, et deux fois par jour pendant 20 jours pour l'étude de reproductibilité. Pour chaque échantillon, la moyenne, l’écart-type (ET) et le coefficient de variation (CV) ont été calculés à partir des ratios correspondants.

9.1.1. Répétabilité

Ratio ET CV (%) S1 0,14 0,015 4,30 S2 0,31 0,006 4,90 S3 0,73 0,022 3,00 S4 1,19 0,043 3,60

9.1.2. Fidélité intermédiaire

Ratio ET CV (%) S1 0,155 0,030 19,6 S2 0,300 0,031 10,2 S3 0,718 0,045 7,5 S4 1,185 0,111 9,4

9.2. Performances cliniques

9.2.1. Spécificité diagnostique

La spécificité du test PLATELIA™ DENGUE IgG Capture a été déterminée en testant 201 échantillons : 49 sérums de donneurs de sang originaires de France, 50 sérums de donneurs sains originaires d’Inde, 51 sérums de donneurs sains originaires de Honduras et de 51 sérums provenant de patients fébriles avec symptomatologie évocatrice de la dengue mais pour lesquels un diagnostic de dengue a été exclu. 2 échantillons douteux ont été trouvés parmi les donneurs sains du Honduras. La spécificité est de 99% (199/201) avec un intervalle de confiance de 95% de [96,47-99,85%].

9.2.2. Comparaison des résultats du PLATELIA™ Dengue IgG Capture versus un test commercial Dengue IgG Capture pour la détection des infections secondaires

Une étude internationale sur 82 sérums provenant de patients Asiatiques avec un statut Dengue confirmé cliniquement a été menée et comparée à un test commercial Dengue IgG Capture pour la détection de l’infection secondaire.

Platelia™ Dengue IgG Capture

Statut Dengue Négatif Douteux Positif Total

Primaire 38 2 4 44

Secondaire 3 1 34 38

Total 41 3 38 82

Les résultats douteux ont été exclus du calcul car les échantillons n’ont pas été testés en double. Le pourcentage de concordance positive est de 91,89% (34/37) avec un intervalle de confiance de 95% de [78,09%-98,30%] et le pourcentage de concordance négative est de 90,48% (38/42) avec un intervalle de confiance de 95% de [77,38%-97,34%]. Une étude externe sur 130 échantillons de patients provenant de la Guyane Française avec un statut Dengue confirmé cliniquement a été menée et comparée au test commercial Dengue IgG Capture pour la détection de l’infection secondaire.

Platelia™ Dengue IgG Capture

Statut Dengue Négatif Douteux Positif Total

Primaire 17 3 5 25

Secondaire 0 3 102 105

Total 17 6 107 130

Les résultats douteux ont été exclus du calcul car les échantillons n’ont pas été testés en double. Le pourcentage de concordance positive est de 100% (102/102) avec un intervalle de confiance de 95% de [96,45%-100%] et le pourcentage de concordance négative est de 77,3% (17/22) avec un intervalle de confiance de 95% de [54,63%-92,18%]. En incluant l'étude interne combinée à l'étude externe de la Guyane française, le pourcentage de concordance global avec le test de référence est de 94,08% (191/203) avec un intervalle de confiance de 95% de [89,90% -96,91%]. Le pourcentage des échantillons douteux qui n’est pas inclus dans le calcul était de 4,24%.

9.3. Spécificité analytique / Réactions croisées

Un panel de 50 échantillons de patients avec des infections autres que la dengue a été analysé avec le test Platelia™ Dengue IgG Capture. 1 échantillon douteux a été trouvé sur un patient infecté par le virus du West Nile et n’a pas été inclus dans le calcul. 30 sérums contenant des anticorps hétérophiles HAMA (n=10), des anticorps anti-nucléaires ANA (n=10), ou du Facteur Rhumatoïde (n=10) ont été testés avec le dosage Platelia™ Dengue IgG Capture. Aucun échantillon testé n’a présenté de réaction positive non spécifique. La spécificité analytique est de 100% (79/79).

10. BIBLIOGRAPHIE

1. World Health Organization and the Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases (TDR) ; Dengue guidelines for diagnosis, treatment, prevention and control: new edition ; 2009

2. Centers for Disease Control and Prevention ; Dengue Laboratory Guidance and Diagnostic Testing ; http://www.cdc.gov/dengue/clinicallab/laboratory.html

3. Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity. Vaughn DW et al, J Infect Dis. 2000 Jan;181(1):2-9.

4. Kinetics of non-structural protein 1, IgM and IgG antibodies in dengue type 1 primary infection. Hu D et al. Virol J. 2011 Feb 2;8:47. doi: 10.1186/1743-422X-8-47.

5. Laboratory diagnosis of primary and secondary dengue infection. Schilling S et al. J Clin Virol. 2004 Nov;31(3):179-84.

6. Comparison of capture immunoglobulin M (IgM) and IgG enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nonstructural protein NS1 serotypespecific IgG ELISA for differentiation of primary and secondary dengue virus infections. Shu PY et al.Clin Diagn Lab Immunol. 2003 Jul;10(4):622-30.

7. Human Dengue antibodies against structural and nonstructural proteins. Valdés K et al. Clin Diagn Lab Immunol. 2000 Sep;7(5):856-7.

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