5
BIOCHIMIE, 1971, 53, 1213-1217. Rdtroinhibition ultra courte de la sderdtion de TSH par action de masse. Alain LEONI, Bernard HAYE et Claude JACQUEMIN. Laboratoire de Biochimie et Centre de Biologic et de Biochimie du Ddveloppement, Facultd des Sciences, B.P. n ° 347, 51- Reims (France). (22-7-1971). Summary. -- We report evidence obtained' in vitro for a new type of control of TSH secretion by an ultra-short feedback mechanism in which the concentration of hormone bathing the pituitary affects further release of the hormone by a mass action effect. This effect is specific and eventually the TSH synthesis is affected. The physiological significance is discussed. INTRO,DUCTION. Au eours d'un travail ant6rieur [11 dans lequel nous avons d6erit la biosynth6se in vitro de la thyr6ostilnuline triti6e de mouton (TSH) et sa purification nous avons retrouv6 un r6sultat de SOLOMON et MACKENZIE [2] tendant h montrer l'existence d'un contr61e par r6troinhibition de la lib6ration de cette hormone dans le milieu d'in- cubation. La lib6ration de prot6ines marqu6es, rapide au d6but de l'incubation de tissu ant6- hypophysaire en pr6sence de 3H-tyrosine, diminue progressivement pour s'annuler apr6s 15 minutes. Le changement du milieu d'incubation permet une reprise de la lib6ration de prot6ines triti6es et son arr~t dans des conditions analogues. Nous avons 1 m obtenir la lib6ration de prot6ines triti6es avec une vitesse constante en renouvelant le milieu continuellement h l'aide d'une poinpe doseuse. Ces exp@iences nous avaient conduits h consid6rer que le eontr61e de la << s6er6tion >> des prot6ines hypophysaires in vitro 6tait dfi "~ l'accumulation de celles-ei dans le milieu d'incubation. Nous ne pouvons cependant pas '5 l'aide de ees r6sultats, 6carter l'6ventnalit6 d'un 6puisenaent du milieu perturbant la biosynth6se et par vote de cons6- quence la libbration des prot6ines dans le milieu. Nous avons donc repris l'6tude de ee ph6nom6ne de mani6re h isoler la TSH parrot l'ensemble des prot6ines exportables hypophysaires pour en 6va- luer la sp6cificit6. MAT]~RIEL ET MI~THODES. L'activit6 biologique de TSH a 6t6 d6termin6e par la mesure de la stimulation de l'incorporation de 32p (CEA Saclay France) dans les phospho- lipides thyroidiens [,3-5]. Une gamme 6talon est faite avec de la TSH porcine (0,5 mU/mg) (*). Les glandes de porcs sont obtenues aux abattoirs (**) et utilis6es dans l'heure qui suit le sacrifice des animaux. Les thyroides sont d6coup6es avec un rasoir de Stadie Riggs. Dans le cas de l'incubation des ant6hypophyses, les glandes sont coup6es sagittalement de faqon h pr6parer deux lots aussi semblables que possible. L'ineubation des lots (400 mg/ml) est poursuivie h 37 ° dans un milieu d6crit par CAMPAGNE et GnUBEn [6]. Pour les 6tudes d'incorporation, la tyrosine est remplac6e par H3-tyrosine (12,8 Ci/mM) h raison de 0,4 mCi/ nil de milieu. A la fin de l'incubation les tissns sont retir6s du milieu, rinc6s et d6shydrat6s h l'ac6tone. Les glycoprot6ines sont extraites de la poudre ac6tonique par percolation alcoolique [7]. Les milieux d'incubation sont percol6s sur S6pha- dex G~0 (tampon (NH 4) HCO 3 10 -2 M, pH 9,1) pour 61trainer 3H-tyrosine. Des parties aliquotes des extraits glycopro- t6iques ou des milieux d'incubations sont analy- s6es par 61ectrofocalisation sur colonne d'Ampho- lines (LKB 8101 - LKB-Produkter AB - Bromma 1 - Su6de). Le gradient de pH s'6tend de 7 h 10 et est stabilis6 par un gradient de densit6 de saccharose de 0 h 46 p. cent (P/P). Dans ces conditions exp6- rimentales, on distingue essentiellement trois frac- tions prot6iques (fig. 2 a). Pour rep6rer la posi- tion des hormones ant6hypophysaires, nous avons effectu6 des analyses par 61ectrofocalisation h dif- f6rents stades de la purification de TSH par les m6thodes classiques [7, 8], dont nous allons rap- peler les 6tapes principales : (*) Nous remercions les laboratoires Endopancrinc qui nous ont donn6 cette prdparation. (**) Nous remercions les abattoirs de Reims qui nous ont fourni les glandes.

Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

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Page 1: Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

BIOCHIMIE, 1971, 53, 1213-1217.

Rdtroinhibition ultra courte de la sderdtion de TSH par action de masse.

Alain LEONI, Bernard HAYE et Claude JACQUEMIN. L a b o r a t o i r e de B i o c h i m i e e t C e n t r e de B io log ic et de B i o c h i m i e du D d v e l o p p e m e n t ,

F acu l t d des S c i e n c e s , B.P. n ° 347, 5 1 - R e i m s (France) . (22-7-1971).

S u m m a r y . - - We report evidence obtained' in vitro for a new type of control of TSH secretion by an ultra-short feedback mechanism in which the concentration of hormone bathing the pituitary affects further release of the hormone by a mass action effect.

This effect is specific and eventually the TSH synthesis is affected. The physiological significance is discussed.

INTRO,DUCTION.

Au eours d 'un t ravai l ant6rieur [11 dans lequel nous avons d6eri t la biosynth6se in v i t ro de la thyr6ost i lnul ine tri t i6e de mouton (TSH) et sa purif icat ion nous avons retrouv6 un r6sultat de SOLOMON et MACKENZIE [2] tendant h mon t r e r l ' exis tence d 'un contr61e par r6 t ro inhib i t ion de la l ib6rat ion de cette hormone dans le mi l ieu d ' in- cubation. La l ib6rat ion de prot6ines marqu6es, rap ide au d6but de l ' incubat ion de tissu ant6- hypophysa i re en pr6sence de 3H-tyrosine, d iminue progress ivement pour s 'annuler apr6s 15 minutes. Le changement du mi l ieu d ' incubat ion pe rme t une repr ise de la l ib6rat ion de prot6ines trit i6es et son arr~t dans des condi t ions analogues. Nous avons 1 m obtenir la l ib6rat ion de prot6ines tri t i6es avec une vitesse constante en renouvelant le mil ieu cont inuel lement h l ' a ide d 'une poinpe doseuse. Ces exp@iences nous avaient conduits h consid6rer que le eontr61e de la << s6er6tion >> des prot6ines hypophysa i res in v i t ro 6tait dfi "~ l ' accumula t ion de celles-ei dans le mil ieu d ' incubat ion. Nous ne pouvons cependant pas '5 l ' a ide de ees r6sultats, 6carter l '6ventnalit6 d 'un 6puisenaent du mil ieu per turbant la biosynth6se et par vote de cons6- quence la l ibbrat ion des prot6ines dans le milieu. Nous avons donc repr is l '6tude de ee ph6nom6ne de mani6re h isoler la TSH parrot l ' ensemble des prot6ines exportables hypophysa i res pour en 6va- luer la sp6cificit6.

MAT]~RIEL ET MI~THODES.

L'activit6 biologique de TSH a 6t6 d6termin6e par la mesure de la s t imulat ion de l ' i nco rpora t ion de 32p (CEA Saclay France) dans les phospho- l ipides thyro id iens [,3-5]. Une gamme 6talon est

faite avec de la TSH porc ine (0,5 mU/mg) (*). Les glandes de porcs sont obtenues aux abattoirs (**) et utilis6es dans l 'heure qui suit le sacrifice des animaux. Les thyroides sont d6coup6es avec un rasoir de Stadie Riggs. Dans le cas de l ' incubat ion des ant6hypophyses , les glandes sont coup6es sagi t ta lement de faqon h p r6pare r deux lots aussi semblables que possible. L ' ineuba t ion des lots (400 mg/ml) est poursu iv ie h 37 ° dans un mil ieu d6crit pa r CAMPAGNE et GnUBEn [6]. Pour les 6tudes d ' incorpora t ion , la ty ros ine est remplac6e par H3-tyrosine (12,8 Ci/mM) h ra ison de 0,4 mCi / nil de mil ieu. A la fin de l ' i ncuba t ion les tissns sont ret ir6s du milieu, r inc6s et d6shydrat6s h l 'ac6tone. Les glycoprot6ines sont extrai tes de la poudre ac6tonique par percola t ion alcool ique [7]. Les mi l i eux d ' incubat ion sont percol6s sur S6pha- dex G~0 ( tampon (NH 4) HCO 3 10 -2 M, pH 9,1) pour 61trainer 3H-tyrosine.

Des par t ies aliquotes des extra i ts glycopro- t6iques ou des mi l ieux d ' incubat ions sont analy- s6es par 61ectrofocalisation sur colonne d 'Ampho- lines (LKB 8101 - LKB-Produkter AB - Bromma 1 - Su6de). Le gradient de pH s'6tend de 7 h 10 et est stabilis6 par un gradient de densit6 de saccharose de 0 h 46 p. cent (P/P). Dans ces condi t ions exp6- r imentales , on dist ingue essent ie l lement trois frac- tions prot6iques (fig. 2 a). Pour rep6re r la posi- t ion des hormones ant6hypophysaires , nous avons effectu6 des analyses par 61ectrofocalisation h dif- f6rents stades de la pur i f ica t ion de TSH par les m6thodes classiques [7, 8], dont nous allons rap- peler les 6tapes pr inc ipa les :

(*) Nous remercions les laboratoires Endopancrinc qui nous ont donn6 cette prdparation.

(**) Nous remercions les abattoirs de Reims qui nous ont fourni les glandes.

Page 2: Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

1 2 1 4 Alain Leoni, Bernard Huge et Claude Jacquemin .

1. L ' e x t r a i t g l y c o p r o t 6 i q u e , q u i r e n f e r m e TSH, LH, F S H et de pe t i t e s q u a n t i t 6 s de GH, est c h r o - m a t o g r a p h i 6 s u r c a r b o x y m 6 t h y l - c e l l u l o s e (CM-C) h p H 6,2. D a n s ces c o n d i t i o n s , la F S H n ' e s t p a s r e t e n u e [9!. LH et TSH, f ix6es s u r la c o l o n n e , s o n t

t i ons , L H en m a j e u r e p a r t i e , n ' e s t pus r e t e n u e [10]. La TSH est 61u6e p a r u n g r a d i e n t de f o r c e i o n i q u e . L ' 6 1 e c t r o f o c a l i s a t i o n de la f r a c t i o n r e t e n u e m o n t r e u n e i m p o r t a n t e d i m i n u t i o n d u d e u x i 6 m e p i c ( p o i n t i so61ec t r ique m o y e n = 7,5) ( t a b l e a u I).

TABLEAU ~[.

Contrdle de la purification de TSH par ~lectrofocalisation sur colonne d'Ampholines (pH 7-10).

Ext ra i t g lycoprot ( ! ique renfermant TSH. LH, FSH.

F r a c t i o n r e t e n u e sur CM-C renfermant LH et TSH.

F r a c t i o n r e t e n u e sur DEAE-C renfermant TSH.

R6partition des prot6ines eup . cent dabs les fractions

d'dlectrofocalisation

l ]I III

27 11 62

75 13 12

85 3 12

Activit6 TSII U/rag

0,5

2 ,4

11,0

61u6es p a r u n g r a d i e n t de f o r c e i o n i q u e . L '61ectro- f o c a l i s a t i o n de la f r a c t i o n r e t e n u e m o n t r e u n e t r6s f o r t e d i m i n u t i o n du t r o i s i b m e p i c ( p o i n t iso61ec- t r i q u e m o y e n = 4,5) ( t a b l e a u I).

2. A p r 6 s c h a n g e m e n t de t a m p o n , la f r a c t i o n r e t e n u e s u r CM-C est p e r c o l 6 e h p H 9,5 s u r d i 6 t h y l - a m i n o 6 t h y 1 - c e l l u l o s e (DEAE-C) . DaBs ces c o n d i -

Les r6 su l t a t s de ce t r a v a i l p r 6 1 i m i n a i r e , n o u s o n t c o n d u i t s h c o n s i d 6 r e r que le p r e m i e r p i c r e n f e r m e TSH, le s e c o n d , L H et le t r o i s i 6 m e , FSH. L ' h 6 t 6 r o - g6n6i t6 de TSH s u r c o l o n n e d ' A m p h o l i n e s , d 6 c r i t e p a r FAWCE=TT et coll . a 6t6 r e t r o u v 6 e [11]. L o r s q u e l ' 6 1 e c t r o f o c a l i s a t i o n es t e f fec tu6e d i r e c t e m e n t s u r u n m i l i e u d ' i n c u b a t i o n , la t r o i s i 6 m e f r a c t i o n r e n - f e r m e en o u t r e L T H et GH.

TABLEAU I I .

Dosage de l'activit~. TSH par mesure de la stimulation << i n v i t r o >> de l'incorporation de 8zp

dans les phospholipides de coupes de thyroi'de de porc.

A - - Milieu d ' incuba t ion d 'h6mian t6hypophyses de pore apr6s 30, 60 et 90 minu tes duns le mdme mil ieu.

B - - Mil ieux d ' incuba t ions d 'h6mian t6hypophyses de porc apr6s. 30, 60 et 90 minutes , le mi l i eu est chang6 apr6s 30 et 60 minutes .

3up incorpor6 dans les phospholipides thyroidiens 3 h.

fi 37 o (cpm/mg de tissu)

T6moin . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . / 18,3 -+- 1,2 I

30 r a n . . . 24,9 ~___ 1,4 Expdrience A 60 m n . . . 24,0 -]- 0 ,6

90 r a n . . . 28,6 -4- 4 ,0

30 m n . . . 25,5 -~- 1,5 Experience B 60 r a n . . . 27,3 ___~ 4,1

90 r a n . . . 22,6 -~- 2 ,6

p. cent de stimulation par rapport au t~moit~

IO0

,

156

139 149 132

Une st , imulat ion moyenne de 140 p. cent correspond d'apr6s la courbe d 'dtalon- nage h une concent ra t ion de 137 _ 7 m U / m l mi l i eu /g antdhypophyse .

BIOCHIMIE, 1971, 53, n ° 11- 12.

Page 3: Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

Rdlroinhibi t ion ultra courte de la sdcrdtion de TSH par action de masse. 1215

RI~SULTATS.

P o u r v6r i f ie r que la c o n c e n t r a t i o n de la T S H l ib~r6e dans un m i l i e u d ' i n c u b a t i o n de t i ssu ant6- h y p o p h y s a i r e a t t e in t r a p i d e m e n t une c o n c e n t r a - t ion l imi te , nous a v o n s effectu6 deux e x p 6 r i e n c e s parall61es. Dans la p r e m i 6 r e (A) un dosage de l ' a c t iv i t6 T SH p r 6 s e n t e dans le m i l i e u a 6t6 effee- tu6 sur des pa r t i e s a l iquo tes pr61ev6es apr6s 3,0, 60 et 90 m i n u t e s d ' i n c u b a t i o n . Dans la s e c o n d e (B) les t issus son t chang6s de m i l i e u apr6s 30 et 60 minu te s , l ' a c t iv i t6 TSH est dos6e su r des al i- quo tes de c h a q u e m i l i e u soi t apr6s 30, 60 et 90 mi - nutes d ' i n c u b a t i o n . Les r6sul ta ts son t r a p p o r t ~ s dans le t ab leau II.

On cons ta te que dans l ' e x p 6 r i e n c e A la c o n c e n - t r a t i on de TSH qu i est de 137 __ 7 m U / m l / g apr6s 30 minu t e s ne v a r i e p lus s i g n i f i c a t i v e m e n t apr6s 60 ou 90 minu t e s d ' i n c u b a t i o n . Dans l ' e x p 6 r i e n c e B le c h a n g e m e n t de m i l i e u apr6s 3,0 et 60 m i n u t e s d ' i n c u b a t i o n p e r m e t la l i b6 ra t i on en 30 m i n u t e s d ' u n e nouve l l e quan t i t 6 de T S H qui est 6gale fi cel le s6cr6t6e apr6s les 30 p r e m i 6 r e s minu te s . P o u r

Absorption o 276 nm Cpmx10-31

] '' ! I !

o,3- 41 I I

,,,, .if \h + / " ' \ ,/7 7:.: h,l

°' l ,, \ ~'L,~Y "° l~i " K!

a p p o r t e r u n e d 6 m o n s t r a t i o n du r61e de TSH dans ce eontr61e et 6ca r t e r l ' 6ven tna l i t6 d ' u n ph6no- m6ne non sp6c i f ique se r 6 p e r c u t a n t su r la s6cr6- t ion de l ' e n s e i n b l e des p ro t6 ines nous avons 6t6 amen6s fi d 6 c r i r e une m 6 t h o d e a n a l y t i q u e p e r m e t - tan t la s 6 p a r a t i o n d i r ec t e et non 6 q u i v o q u e de TSH des au t res h o r m o n e s h y p o p h y s a i r e s .

L ' 61ee t ro foca l i s a t i on sur A m p h o l i n e s app l iqu6e fi un m a t 6 r i e l brfit , ne cons t i t ue pas , en toute r igueur , u n e m 6 t h o d e de pur i f i ica t ion des h o r - mones a n t 6 h y p o p h y s a i r e s . I1 ne fa i t pa s de dou te

~Absorphon ~ 276nm CpmJ xl0- '10

14 . . . . . . . . . . . . . . . . . I ' °

I I i o ~10

a //\'I i TSH

25 50 75 m[

Absorption ~ 2 7 6 nm Cpm to ~ x lO-3! ,#'----....

' ",- . . . . I 1

° ~> "/ i ' /".-.J I

I I I~0 t l ,, Y XLJ

, f:"\ /Go# '- \ 7

AbsorpHon 6 276nm Cprn-3

! ~0]pH x~0

T l i . . . . . . . . . . . ~

i 'I ~; ¢ "%

o 25 50 75 "too ml

Fro. 1. - - Analyse par 61eetrofoealisation sur ampho- lines (pH 7-10) des prot6ines contenues dans le mil ieu d ' ineubation d'ant6hypophyses de porc. a) - - mil ieu t6moin. b) - - mil ieu suppl6ment6 avee TSH 300 mU/ml .

Absorption h 276 nm - - ¢ - - o - - Radioaetivit6 - - 0 - - 0 •

FIG. 2. - - Analyse par 61ectrofocalisation sur ampho- lines (pH 7-10) des prot6ines contenues dans un extrai t d 'ant6hypoohyses de porc, incub6es. a) - - dans un mil ieu t6moin. b) - - dans un mil ieu suppl6ment6 avec TSH 300

mU/ml . Absorption h 276 nm- -O o - - R a d i o a c t i v i t 6 --O O--

que les t ro i s f r a c t i o n s que nous a p p e l o n s TSH, LH et FSH, ne son t pas cons t i tu6es e x c l u s i v e m e n t p a r des p r o t 6 i n e s dou6es d ' ac t iv i t6 h o r m o n a l e . N6an- moins , la r 6 p a r t i t i o n p r o p o s 6 e de TSH, L H et F S H en t re les t ro i s f r ac t i ons , est c o m p a t i b l e avec l '6vo- lu t ion de l e u r t e n e u r en p r o t 6 i n e s au cou r s de la p u r i f i c a t i o n de T S H ( tableau I).

L ' e x p 6 r i e n c e a 0 6 c o n d u i t e de la m a n i 6 r e sui- van te : deux lots i d e n t i q u e s de t i ssu a n t 6 h y p o p h y - sa i re sont i ncub6s avec ZH-tyros ine en p r 6 s e n c e

BIOCHIM1E, 1971, 53, n ° 11- 12. 82

Page 4: Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

1216 A lain Leoni, Bernard Hage et Claude Jacquemin .

ou non de TSH exog6ne h la concent ra t ion de 300 m U / m l . Apr6s 3 heures d ' incubat ion, les tissus sont s6par6s des mi l ieux ; ces derniers sont perco- 16s sur S6phadex G~0 pour les d6barrasser de 3H- tyros ine et de I 'ACTH. D'autre par t les g lycopro- t6ines sont extrai tes des tissus. Les prot6ines des deux extraits glycoprot6iques et des deux mi l i eux d ' incuba t ion sont analys6es sur colonne d 'Am- pholines.

la synth6se ; la radioact iv i t6 sp6cifique de TSH 6tant diminu6e par rappor t h celle du t6moin (tableau IIIb).

DIISCUSSION.

Les r6sultats que nous venons de r appor t e r mont ren t que la concent ra t ion de TSH dans le mil ieu d ' incuba t ion de coupes d ' an t6hypophyse de

TABLEAU III.

Concentration et activitd sp~cifique des hormones hgpophgsaires pr~- sentes dans les milieax d'incubation et les extraits glycoprotdiques d'antdhypophyses incub~es 3 heures en prdsence ou en absence de TSH exog~ne (300 mU/ml).

(a)

Milieux d'incubation

T&noin . . . . . Concentration mg/ml -~- TSH . . . . .

Radioactivit~ sp~cifique Tfimoin . . . . . cpm/mg -~ TSH . . . . .

I

(TSH)

4,48

8 200 0

II

(LH)

1,2 1,2

27 000 21 000

III~ (FSH et autres

prot6ines acides)

5.8 5,6

40 000 33 000

(b)

Extraits glycoproteiques

T~moin . . . . . Concentration mg/ml -~- TSH . . . . .

Radioactivitd sp6ciflque T6moin . . . . . cmp/mg -~- TSH . . . . .

I (TSH)

1,02 0,90

12 300 7 900

(LH)

0 ,34 0,34

39 000 42 000

III

(FSH)

1,97 2,20

66 000 61 000

La figure 1 repr6sente le profil d'61ution de la colonne aprbs 61ectrofocalisation des prot6ines des mi l ieux d ' incuba t ion : on constate que clans le mi l ieu qui contenai t de la TSH exog6ne ( lb) , le p remie r p ic ne r en fe rme pas de prot6ines tri- ti6es alors que celles-ci sont pr6sentes dans le mi- l ieu t6moin (la). Les p ropor t ions relat ives des autres prot6ines ne sont pas s ignif ica t ivement affect6es par l ' i n t roduc t ion de TSH exog6ne au d6but de l ' incubat ion (tableau IIIa). La figure 2 mont re les r6sultats de la m6me analyse effectu6e sur les extrai ts glycoprot6iques des coupes t6moins (2a) et incub6es en pr6sence de TSH exog6ne (2b).

On constate que TSH a 6t6 n6osynth6tis6e clans les deux cas mais que n6anmoins l ' inh ib i t ion de la s6cr6tion par la TSH exog6ne s'est r6percut6e sur

BIOCH1MIE, 1971, 53, n ° 11- 12.

porc ne d6passe jamais une valeur moyenne de 137 m U / m l / g soit 1,22. 10-7 M si l 'on assigne une masse mol6cula i re de 28 000 h cette ho rm one et une activit6 b io logique de 40 U/mg) . L 'ana lyse du mi l ieu d ' incuba t ion ou d 'un extrai t g lycoprot6 ique par 61ectrofocalisation sur amphol ines pe rmet la s6paration de TSH des autres prot6ines hypo- physaires .

Lorsque l ' incuba t ion a 6t6 effectu6e dans un mi- lieu renfe rmant de la tyros ine trit i6e et de la TSt t exog6ne ~ la concen t ra t ion de 300 m U / m l , on constate une absence complbte de s6cr6tion de 3H-TSH. Les autres prot6ines hypophysa i re s lib6- r6es dans le mi l ieu ne pr6sentent pas, des radio- activit6s sp6cifiques s ignif icat ivement diff6rentes

Page 5: Rétroinhibition ultra courte de la sécrétion de TSH par action de masse

R d l r o i n h i b i t i o n u l t r a c o u r t e de la s d c r d t i o n de T S H p a r a c t i o n de m a s s e . 1217

de ce l les qu ' e l l e s o n t d a n s u n e e x p 6 r i e n c e t 6 m o i n . On p e u t r e m a r q u e r "& ce t t e o c c a s i o n que tou te s

les p r o t 6 i n e s h y p o p h y s a i r e s ne p r 6 s e n t e n t p a s ]a m 6 m e r a d i o a c t i v i t 6 sp6c i f ique , ce q u i p e r m e t d ' e n - v i s a g e r que l e u r s v i t e s se s de s y n t h 6 s e s o n t diff6- r e n t e s , p o u r a u t a n t que l e u r t e n e u r e n t y r o s i n e so i t du m 6 m e o r d r e . De m S m e a p r 6 s u n e i n c u b a - t i o n longue , l o r s q u e la c o n c e n t r a t i o n des p r o t 6 i n e s l i b 6 r @ s d a n s le m i l i e u cesse d ' a u g m e n t e r , o n c o n s t a t e que la r a d i o a c t i v i t 6 sp6c i f ique de c h a c u n e des t r o i s f r a c t i o n s s 6 p a r 6 e s h p a r t i r de l ' e x t r a i t g l y c o p r o t 6 i q u e des i i s sus , est s u p 6 r i e u r e h cel le des f r a c t i o n s c o r r e s p o n d a n t e s i so l6es h p a r t i r du m i l i e u d ' i n c u b a t i o n . Le r a l e n t i s s e m e n t de la b io - s y n t h 6 s e p r o t 6 i q u e que l ' o n o b s e r v e l o r s d e F in - c u b a t i o n in v i tro de t i s su a n t 6 h y p o p h y s a i r e es t d o n c dO h u n e i n h i b i t i o n de la l i b 6 r a t i o n d a n s le m i l i e u des p r o t 6 i n e s n 6 o s y n t h 6 t i s 6 e s . Cet a r r 6 t de <~ s 6 c r 6 t i o n >~ t o u c h e l ' e n s e m b l e des p r o t 6 i n e s ] ib6- r6es p a r le t i s s u a n t 6 h y p o p h y s a i r e en effe t l e u r r a d i o a c t i v i t 6 g loba l e n ' 6 v o l u e p l u s au b o u t de 30 m i n u t e s [ l J . L a g6n6ra l i t6 de ce t ef fe t n ' e s t c e p e n d a n t p a s u n i n d i c e de n o n sp6c i f i c i t6 , c a r i l est p o s s i b l e d ' a g i r s 6 1 e c t i v e m e n t s u r la s 6 c r 6 t i o n d ' u n e seule e s p 6 c e p r o t 6 i q u e . Nous d 6 c r i v o n s i c i u n n o u v e a u m o d e de r 6 g u l a t i o n de la p r o d u c t i o n de la TSH p a r a c t i o n de m a s s e que n o u s p r o p o - s o n s d ' a p p e l e r r 6 t r o i n h i b i t i o n u l t r a - c o u r t e << u l t r a s h o r t f e e d - b a c k >>. D ' a p r 6 s les r 6 s u l t a t s p r61 imi - n a i r e s r 6 c e n t s de KASTIN et coll . [9~ i l s e m b l e q u ' u n p h 6 n o m b n e a n a l o g u e i n t e r v i e n n e d a n s la r 6 g u l a t i o n de la s 6 c r 6 t i o n de la MSH.

Le r61e p h y s i o l o g i q u e de ce m o d e de con t r61e r e s l e h d 6 m o n t r e r ; e n p a r t i c u l i e r i l c o n v i e n d r a i t d ' e n 6 t a b l i r la p r o g r e s s i v i t 6 en f o n c t i o n de la dose. Nous p o s s 6 d o n s c e p e n d a n t d ' o r e s et d6j~ u n a rgu- m e n t c o n t r e u n c a r a c t 6 r e de p h 6 n o m 6 n e ~ seui l d e v e n a n t e f f i cace s e u l e m e n t p o u r des doses e x t r a - p h y s i o l o g i q u e s , d a n s le fa i r que la v i t e s s e de l ib6- r a t i o n des p r o t 6 i n e s m a r q u 6 e s dar ts le m i l i e u es t d ' o r d r e 1 d6s le d 6 b u t de l ' i n c u b a t i o n [1]. On p e u t p e n s e r que ce m 6 c a n i s m e de r 6 g u l a t i o n es t i m p l i - qu6 chez des a n i m a u x t h y r o i d e e t o m i s 6 s . E n effet la r 6 t r o i n h i b i t i o n due ~ la t h y r o x i n e << l o n g feed- b a c k >> n ' e x i s t e p l u s et ne p e u t a n t a g o n i s e r la s t i - m u l a t i o n de l ' h y p o p h y s e p a r le T R F [13]. D a n s ces c o n d i t i o n s la r 6 t r o a c t i o n p o s i t i v e c o u r t e << s h o r t f e e d - b a c k >~, d 6 c r i t e p a r MOTTA et coll . [14], qu i p r o v o q u e u n e s t i m u l a t i o n de la s 6 c r 6 t i o n du T R F p a r la T SH d e v r a i t e n t r a i n e r u n e s6cr6- t i on t o u j o u r s p l u s a c c r u e de ce t t e d e r n i 6 r e .

D ' a p r 6 s ces m 6 m e s a u t e u r s la t e n e u r p l a s m a t i q u e en TSH d ' a n i m a u x t h y r o i d e c t o m i s 6 s t r a i t 6 s p a r de la TSH e x o g ~ n e est s u p 6 r i e u r e h ce l le d ' a n i m a u x t 6 m o i n s m a t s n e v a r i e p l u s e n t r e 2 h e t 24 h. Le c o n t r S l e d i r e c t de la s 6 c r 6 t i o n de T S H en f o n c t i o n de sa c o n c e n t r a t i o n p l a s m a t i q u e ¢ u l t r a s h o r t feed- b a c k >> est p e u t O r e r e s p o n s a b l e d e la l i m i t a t i o n de l ' e f fe t de la r 6 t r o a c t i o n p o s i t i v e c o u r t e <~ s h o r t f e e d - b a c k >> de TSH su r l ' h y p o t h a l a m u s .

Remerciements.

Nous remerc ions Monsieur LAMBERT Bernard qui nous a init id h la t e c h n i q u e d '61ectrofoca l i sa t ion sur Amphol ine .

P~SUME.

Ce t r ava i l d6montre l 'exis tence ¢ in vitro >> d 'un nou- veau disposi t i f de contr61e de la s6cr6tion de la thyr6o- s t imul ine en fonct ion de sa propre concen t ra t ion dans le m, ilieu. Cet effet est sp6cifique de 1 'hormone il se r6percute h long terme sur la b iosynth6se dont ]a vitesse d iminue . Son r61e physio logique est diseut6.

ZUSAMMENFASSUNG.

Diese Arbei t beweis t die Exis tenz ¢ in vitro >> eines neuen Kont ro l l sys tems der Thyreos t imul insekre t ion als F u n k t i o n seiner eigenen mi t t l e r en Konzentra t ion. Dieser Effekt ist hormonspezif isch, er wi rk t sich lang- fr is t ig auf die Biosynthese aus, deren Geschvcindigkeit abn immt . Seine physiologische Bedeu tung wird erSrtert .

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