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Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Les vascularites à ANCA… en quelques mots Les vascularites à ANCA… en quelques mots
Inflammation de la paroi vasculaire Inflammation de la paroi vasculaire des vaisseaux de petits calibresdes vaisseaux de petits calibres
Touche : adultes (après 45 ans)Touche : adultes (après 45 ans)Association clinique : syndrome pneumo rénal
DiagnosticDiagnostic : Suspicion clinique Biologie :
Syndrome inflammatoire +++NFS : hyperleucocytose / éosinophilie Sérologie : recherche d’ANCA
Histologie +++Complications +++
TraitementTraitement : agressif (immunosuppresseurs, corticoïdes)
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
• ANCA : Anti-neutrophil cytoplasmic antibodies– P-ANCA : perinuclear ANCA (distribution périnucléaire de la
fluorescence) – C-ANCA : cytoplasmic ANCA (distribution cytoplasmique de la
fluorescence)– aANCA : « atypical » ANCA (distribution périnucléaire atypique de la
fluorescence)• Problème : différents degrés d’« atypie »
– « atypique » conventionnel = xANCA ou NANA ou NSA ou GS ANA– « atypique » « moins » conventionnel… aANCA « vrai »
– atypical cANCA – …
ANCA Terminologie, nomenclature
ANCA Terminologie, nomenclature
…Rien de si évident !
• L’aspect de fluorescence ne permet pas toujours de préjuger de la spécificité (anti-MPO ou anti-PR3) qui sera identifiée par immunodosage.
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
ANCA Mise en évidence
ANCA Mise en évidence
En premier : immunofluorescence indirecte sur polynucléaires neutrophiles humains fixés par l’éthanol
Seuil de positivité : 20ème (/ 40ème ?)
Quel que soit l ’aspect de fluorescence objectivé : Rechercher les ANCA-MPO et PR3 par immunodosage
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Images : Nils OLSSON, CHU de Dijon
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de LilleImages : Nils OLSSON, CHU de Dijon et Alain Chevailler, CHU d’Angers
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Anticorps dirigés contre les neutrophilesQue peuvent-ils bien reconnaître ?
Anticorps dirigés contre les neutrophilesQue peuvent-ils bien reconnaître ?
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Pour notre activité – ~ 50% des ANCA sont prescrits par des services « concernés » par les
syndromes pneumo-rénaux– 5 à 8 % (seulement) des prescriptions s’associent à l’identification
d’ANCA MPO ou PR3– Quel que soit le service prescripteur : 20 % de résultats positifs en IFI
/ négatifs en ELISA (difficulté d’interprétation !)
ANCAQui prescrit ?
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Avantages et inconvénients ?
Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Avantages et inconvénients ?
• ANCA MPO / PR3 : Quelles méthodes de dosages ?– Avantages et inconvénients
• ELISA microplaque : Recrutement, séries (calibration), Recrutement, séries (calibration), coûtcoût• Dots : Faible recrutement, urgence,Faible recrutement, urgence, qualité de l’antigène (?)qualité de l’antigène (?), , couplé couplé
aux anti-MBG , aux anti-MBG , coûtcoût• EIA : Automate, urgence, coup par coup,Automate, urgence, coup par coup, coût coût • Luminex : : Automate, urgence, coup par coup, Automate, urgence, coup par coup, couplé aux anti-couplé aux anti-
MBG, MBG, coûtcoût– Quelle corrélation entre les coffrets ?– Les CQE
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Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Corrélation entre les trousses ?
Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Corrélation entre les trousses ?
y = 0,42 x + 1,2R² = 0,85y = 0,42 x + 1,2R² = 0,85
05
101520253035404550556065707580859095
100
105 U/ml
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 U/ml
Fournisseur 1
PR3
y = 0,55 x -0,75R² = 0,85y = 0,55 x -0,75R² = 0,85
05
101520253035404550556065707580859095
100105 U/ml
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180U/mlFournisseur 1
MPO
Mauvaise Mauvaise (pas de….)(pas de….) corrélation corrélation
entre les différents coffretsentre les différents coffrets
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Trousses de dosages des ANCA IFIQue disent les CQE ?
Trousses de dosages des ANCA IFIQue disent les CQE ?
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Trousses de dosages des ANCA MPO/PR3Que disent les CQE ?
Trousses de dosages des ANCA MPO/PR3Que disent les CQE ?
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Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Corrélation avec l’évolution de la maladie ?
Trousses de dosages des ANCA MPO PR3Corrélation avec l’évolution de la maladie ?
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
200
450
400
350
300
250
200
150
100
50
0
Fournisseur 2Fournisseur 1 Fournisseur 3 Fournisseur 4Fournisseur 3’//
ANCA-PR3U/mL
U/mL
ANCA-MPO180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
360
320
280
240
200
160
120
80
40
0
Fournisseur 2Fournisseur 1 Fournisseur 3 Fournisseur 4//
Maladie active Maladie inactive
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ANCA MPO PR3Corrélation avec l’évolution de la maladie ?
ANCA MPO PR3Corrélation avec l’évolution de la maladie ?
Selon notre expérience • ANCA MPO :
– Réponse polyclonale – Ac dirigés contre des épitopes indépendants du site actif de la MPO– Sous traitement : réduction (disparition) de certaines populations d’anticorps. Mais pas
toutes !– Pas de corrélation IFI et ANCA MPO (EIA)– Pas de corrélation IFI ou EIA avec l’activité de la maladie
• ANCA PR3 – Réponse oligoclonale– Ac dirigés contre des sites actifs de la molécule (inhibition du catabolisme…)– Sous traitement : réduction (disparition) des populations d’anticorps qui peuvent être
associés (impliqués) à la physiopathologie – Meilleure corrélation IFI et ANCA PR3 (EIA) – Meilleure corrélation IFI et EIA avec l’activité de la maladie (pas absolue)
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• De « vrais » ANCAs– Maladies infectieuses /inflammatoires (endocardites +++)– Cocaïne (inhalation / parfois anti-ELASTASE)– Antithyroïdiens (PTU) (parfois ANCA MPO et PR3 voire autres spécificités)– Connectivites (LES, PR) (taux faibles)
• Des faux positifs « EIA »– Liés aux FR (assez exceptionnels) (ANCA MPO et PR3)– Ac dirigés contre des protéines de la matrice (protéines de lait de vache…)– Dysglobulinémies (« sticky Ig »)– PR3 non suffisamment purifiée (?)
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
• C-ANCA sans anti- PR3 (/MPO)– Autre cible (non spécifique des neutrophiles)
• Ac anti-mitochondries ; cytosquelette (actine)…
– ANCA autres que ANCA MPO / PR3• Maladies infectieuses (mucoviscidose, BPCO, MITD) : anti-BPI, azurocidine, élastase…• cANCA « atypiques »
• P-ANCA sans anti- MPO (PR3)– ANA : IFI « homogène » sur polynucléaires neutrophiles (homogène ou mouchetée sur
HEp2)
– ANCA différents de MPO ou PR3 : IFI pANCA « classiques » ou « atypiques »(ANCA « vrais »)
– aANCA : ANCA atypiques (xANCA, NANA, NSA, gsANA…)
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Sylvain Dubucquoi Institut d’Immunologie du CHRU de Lille
Discordances entre IFI et ELISA
ImagesImages : Alain Chevailler, CHU d’Angers
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Images : Alain Chevailler, CHU d’Angers
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Images : Alain Chevailler, CHU d’Angers
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METHANOL ANA
Images : Alain Chevailler, CHU d’Angers
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Images : Alain Chevailler, CHU d’Angers
Interférence
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Seule l’identification des ANCA MPO ou PR3 compte en pratique clinique
En phase diagnostique, les titres des ANCA sont généralement > 80ème les taux d’ANCA MPO ou PR3 sont élevés
Les interférences sont nombreuses : savoir conduire une interprétation peut coûter cher
En suivi : l’intérêt du dosage des ANCA MPO et PR3 (IFI et ELISA)•N’a qu’un intérêt modeste : pas de décroissance systématique des titres avec l’amélioration clinique•En revanche, pour un individu particulier, la ré-ascension des titres (2 dilutions) peut s’associer à une rechute et doit être signalée (avec insistance)